JPS5859953A - 新規なペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、下記一般式ＣＩ］ Ｈ−Ｘ　−Ｇｌｕ　−０１，ｕ　−（）　ＨＣＩ　〕（
ただし式中、ＸはＳｅｒ　−Ｖａｌ−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ
　−Ｇｌｙの５位のＧｌｙを含む１〜５個のペプチド鎖
を表わす）で表・わされる新規ペプチドに−するもので
、本ペプチドはリポ蛋白リパーゼ活性増強作用を有する
高脂血症の予防薬または治療薬として有用なものである
。

従来より、生体内リボ蛋白リパーゼ活性を増強する因イ
としては、アミノ酸配列７８個からなるアポ蛋白Ｃ−■
が知られている［、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ　Ｏｏｍｍｕｎ　、旦、５７
　（１９７０）＋　ＰｒｏｃＮａｔｌ、　Ａｃａｄ、　
８ｃｉ、　Ｕ　Ｓ４　、７４．１９４２　（１９７７）
）。

またアポ蛋白ｃ−■を臭化シアンにて分解せしめて得ら
れたアポ蛋白Ｃ−Ｕフラグメント（以下単にｆｒｇと略
す）　（１−９）、ｆｒｇ、　（１０−５９）、ｆｒｇ
（６０−７８）やアポ蛋白ｃ−４のアミノ酸配列に基づ
いて合成されたｆｒｇ　（６０−７８）、ｆｒｇ（５５
−７８）、ｆｒｇ　（６６７８）、ｆｒｇ　（６０−７
５）が知られているが、これらの各７ラグメントにおい
て、ｆｒｇ（１９）、ｆｒｇ、　（１０−５９）、ｆｒ
ｇ（６６−７８）、ｆｒｇ　（６０−７５）はリポ蛋白
リパーゼ活性を増強する効果は認められず、アミノ酸１
９残基からなるｆｒｇ　（６０−７８）１．アミノ酸２
４残基からなるｆｒｇ　（５５−７８）のみにリポ蛋白
リパーゼ活性増強作用を認めたものであった［ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、５ｃｉｖＳ、Ａ、、　７４４８４
８　（１９７７）　’）。

この・ようにリポ蛋白リパーゼ活性増強作用を有するペ
プチドとしてはアポ蛋白ｃ−４のＣ末端フラグメントの
アミノ酸１９残基が最少活性単位とされていた。

本発明者らは、下記一般式［１〕 Ｈ−Ｘ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−ＯＨ［Ｉ］ （ただし式中、Ｘは前記と同じ意味である）で表わされ
る新規ペプチドを得、本ペプチドは、アミノ酸３残基な
いし７残基のペプチドであるにもかかわらず、全く意外
にも、リポ蛋白リパーゼ活性増強作用を有するものであ
ることを見い出した。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたもので、一般
式〔Ｉ〕で表わされるペプチド（以下、ペプチド［１〕
と称す）またはその塩に関するもので、そのリポ蛋白リ
パーゼ活性増強作用に基づく高脂血症の予防薬または治
療薬を提供することを目的とするものである。

本発明の目的化合物たるペプチド〔Ｉ〕としては、Ｈ−
Ｇｌｙ−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ−ＯＨで表わされるペプチド
［１−３］、Ｈ−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌ
ｕ　−０Ｉ（で表わされるペプチドＣＩ　　４　］　、
Ｈ−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　
−ＯＨで表わされるペプチド［１−５］　、’Ｈ−Ｖａ
ｌ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ
　−ＯＨで表わされるペプチド［１−６］、Ｈ−Ｓｅｒ
　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ　
−Ｇｌｕ−ＯＨで表わされるペプチドＣｌ−７：］また
はそれらの塩が挙げられる。

本発明のペプチド〔Ｉ〕を得るに当っては、目的とする
一般式〔■〕で表わされるアミノ酸順序に個々のアミノ
酸、または低級ペプチドを縮合して構成せしめ、縮合反
応の最終段階で側鎖の官能基の保護基を脱離することに
より得られる。

縮合反応自体はペプチド合成のための常法手段に従って
、保護基の着脱、縮合反応を繰り返すことにより行なわ
れる。即ち、本目的化合物の原料ならびにすべての中間
体の製造において使用される各種保護基はペプチド合成
で既知なもの、従って加水分解、酸分解、還元、アミツ
リシスまたはヒドラジツリシスのような既知手段によっ
て容易に脱離することのできる保護基が用いられる。

このような保護基はペプチド合成化学の分野の文献なら
びに参考書に記載されている。

例えばアミン基に使用する保護基としては、ホルミル基
、トリフルオロアセチル基、フタロイル基、Ｐ−トルエ
ンスルホニル基、０−ニトロフエ。

ニルスルフェニル基などのアシル基、ベンジルオキシカ
ルボニル基、０（またはＰ）−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル基、０（またはＰ）−クロロベンジルオキシカ
ルボニル基、Ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル基、
Ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル基などのベンジ
ルオキシカルボニル基、トリクロロエチルオキシカルボ
ニル基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、ｔ−アミルオ
キシカルボニル基、ジイソプロピルメチルオキシカルボ
ニル基などの脂肪族オキシカルボニル基、２−７　ｘ　
＝ルーイノグロポキシ力ルボニル基、２−Ｐ−ジフェニ
ル−イノプロポキシカルボニル基などのアラルキルオキ
シカルボニル基などがある。

またこれらアミノ基をベンゾイルアセトン、アセチルア
セトンなどの１．３−ジケトンと反応させることによっ
て得られるエナミンの形成により保護することができる
。

カルボキシル基は、アミド形成、ヒドラチド形成または
エステル化によって保護される。即ち、アミド基は３．
４−ジメトキシベンジル基、ビス−（ｐ−メトキシフェ
ニル）メチル基などによって置換される。ヒドラチド基
はベンジルオキシカルボニル基、トリクロロエチルオキ
シカルボニル基、トリフルオロアセチル基、ｔ−プチル
オキシカルボニル基、トリチル基、２−ｐ−ジフェニル
−インプロポキシカルボニル基などによって置換される
。エステル基はメタノール、エタノール、ｔ−ブタノー
ル、シアンメチルアルコールなどのアルカノール、ベン
ジルアルコール、ｐ−ブロモベンジルアルコール、ｐ−
クロロベンジルアルコール、２．６−シクロロベンジル
アルコール、ｐ−メトキシベンジルアルコール、ｐ−ニ
トロベンジルアルコール、ベンズヒドリルアルコール、
ベンソイ・ルメチルアルコール、ｐ−ブロモベンツイル
メチルアルコール、ｐ−クロロベンゾイルメチルアルコ
ール、などのアルカノール、２．４゜６−トリクロロフ
ェノール、２．４．５−トリクロロフェノール、ペンタ
クロロフェノール、ｐ−二トロフェノール、２　＋　４
−ジニトロフェノールなどのフェノール、チオフェノー
ル、ｐ−ニトロチオフェノールなどのチオフェノールな
どによって置換される。

またセリンの水酸基は、例えばエステル化またはエーテ
ル化によって保護することができる。このエステル什に
適する基としては、例えばアセプル基、ベンゾイル基、
ベンジルオキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル
基などである。またエーテル化１に適する基としては例
えばベンジル基、テトラヒドロピラニル基、ｔ−ブチル
基である。

この水酸基の保護には２．２．２−トリフルオロ−１−
ｔ−ブチルオ今ジカルボニルアミノエチル基、２，２．
２−）リフ゛ルオロー１−ベンジルオキシカルボニルア
ミノ基も適する。しかしながら、これらの水酸基を必ず
しも保護する必要はない。

本発明のベプチ・ド〔Ｉ〕の合成においては、個々のア
ミノ酸もしくは低級ペプチドの縮合は、例えば保護され
たα−アミン基および活性化末端カルボキシル基をもつ
アミノ酸またはペプチドと遊離α−アミン基および保護
された末端カルボキシル基をもつアミノ酸またはペプチ
ドとを反応させるか、あるいは活性化α−アミン基およ
び保護された末端カルボキシル基をもつアミノ酸または
ペプチドと遊離の末端カルボキシ基および保護されたα
−アミン基をもつアミノ酸またはペプチドを反応させる
ことにより実施することができる。

この場合カルボキシル基は、アジド、酸無水物、酸イミ
ダゾリドまたは活性エステル、例えばシアンメチルエス
テル、チオフェニルエステル、ｐ−ニトロチオフェニル
エステル、ｐ−メタンスルホニルフェニルエステル、ｐ
−ニトロフェニルエステル％　２　ｒ　４−ジニトロフ
ェニルエステル、２゜４．６−トリクロロフエニルエス
テル、ペンタクロロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシ
コハク酸イミドエステル、Ｎ−ヒドロキシフタル酸イミ
ドエステル、８−ヒドロキシキノリンエステルまたはＮ
−ヒドロキシピペリジンエステルなどに変換することに
よって、あるいはカルボジイミド、Ｎ　ＩＮ′−カルボ
ニル−ジイミダゾールまたはイノオキサシリウム塩、例
えばウッドワード反応剤などを使用して反一応させるこ
とによって活性化することができる。

本発明において好ましい縮合′方法は、カルボジイミド
法、アジド法、活性エステル法および無水物法である。

縮合の各段階では、ラセミ化が起らない方法またはラセ
ミ化が最小になる方法を用いるのが望ましく、好ましく
はアジド法、活性エステル法、Ｗｕｎｓｃｈ法［Ｚ　　
Ｎａｔｕｒｆｏｒｓｃｈ　＋　２１Ｇ＋　４２６　（１
９６６）　］またはＧｅｉｇｅｒ法［Ｃｈｅｍ、　Ｂｅ
ｒ　＋１０Ｌ７８８　（１９７０）　）とりわけ縮合剤
としてＮ−エチル−Ｎ’−３−ジメチルアミノプロピル
−カルボジイミド（ＷＳＣＤ）を用いる変法などを用い
る。

縮合順序は式［１１で示されるアミノ酸順序であれば如
何な４順序からも合成し得るが、Ｃ−末端側から合成す
るのが有利である。例えば保護されたペプチド［１−３
〕は、Ｃ末端保護ジペプチドであるジグルタミン酸のα
−アミノ基とα−アミノ基を保護したグリシンのカルボ
キシル基ヲＷＳＣＤを用いるＧｅｉ　ｇｅ　ｒ変法によ
る方法で縮合せしめて得られる。また保護されたペプチ
ドＣｌ−４’）は保護されたペプチド［１−３］とアミ
ン基を保護したＬ−リジンのカルボキシル基をＷＳＣＤ
を用いるＧｅｉｇｅｒ変法による方法で縮合せしめて得
られる。さらに保護されたペプチドＣｌ−５］は、保護
されたペプチド［１−４］とα−アミノ基を保護したＬ
−ロイシンとの縮合、保護されたペプチドＣＩ−６〕は
保護されたペプチド［１−５’）とα−アミン基を保護
したＬ−バリンとの縮合、保護されたペプチドＣｌ−７
’ｌは保護されたペプチドＣＩ−６’］とα−アミン基
と側鎖を保護したＬ−セリンとの縮合を各々ＷＳＣＤを
用いるＧｅ１ｇθｒ変法にて行なわせしめて得ればよい
。

上記のペプチド合成に際して用いるアミノ酸のカルボキ
シル基は、これを必ずしも保護しなければならないわけ
ではない。例えばアジド法、活性エステル法によって縮
合させる場合には、保護しなくてもよい。

しかしながら、これらの基を前記で述べたｊうなエステ
ル化によって、例えばメチルエステル、エチルエステル
、ベンジルエステルナトチ保ｔｉすることもできる。ま
た、これらのエステル基は、例えばメチルエステル基は
これを希薄な水酸化ナトリウム水溶液で分裂し、または
ヒドラチドに変え、捷だベンジルエステル基は無水弗化
水素または水素添加分解によって分裂することができる
。

これらペプチドのα−アミ７基は、これらを通常の保護
基、例えばベンジルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシ
カルボニル基、゛ｔ−アミルオキシカルホニル基で警護
されるが、ベンジルオキシカルボニル基は水素添加分解
によって脱離され、１−ブトキシカルボニル基、ｔ−ア
ミルオキシカルボニル基はトリフルオロ酢酸で脱離され
る。

セリンの水酸基はベンジル基で、リジンのε−アミン基
はＯ−クロロベンジルオキシカルボニル基で保護するの
が適する。これらの保護基は、アルカリ加水分解、水素
添加分解または無水弗化水素で脱離される。こうして保
護されたペプチド〔１−３３、保護されたペプチド［１
−４３、保護されたペプチド［Ｉ−５’］、保護された
ペプチドＣＩ−６］、保護されたペプチドＣＩ−７］が
得られる。これらの保護基は、アルカリ加水分解、水素
添加分解または酸分解、例えば無水弗化水素の処理によ
って脱離され、ペプチド〔１〕の目的化合物が得られる
。このようにして得られるペプチド〔１〕は、公知のペ
プチドを精製する手段により精製することができる。例
えばセファデックスＬＨ−２０、セファデックスＧ−２
５、セファデックスＧ−５０、ダウエックス１、カルボ
キシメチルセルロースなどの担体を用いるカラムクロマ
トグラフィーにより精製できる。

さらに本発明のペプチド〔１〕は両性化合物であるが弱
酸性を示、し、無毒性の塩、例えば塩酸塩、硫酸塩、リ
ン酸塩、酢酸塩、クエン、酸塩、ナトリウム塩、カリウ
ム塩、アンモニウム塩などの塩の形として利用できる。

＃ さらにこのようにして得られたペプチド［〕は、リポ蛋
白リパーゼ活性増増強用を有するもので、ペプチド〔Ｉ
〕の投与によりリボ蛋白リパーゼ活性を増強せしめ、そ
の結果血清中の脂質代謝を改善せしめるもので、高脂血
症の予防薬または治療薬として有用なものである。

さらに本発明におけるリボ蛋白リパーゼ活性増強作用測
定のための活性測定法としては、リボ蛋白リパーゼおよ
びその基質にペプチド〔ｉ〕を加えて反応せしめる。こ
のペプチド〔Ｉ〕によるリポ蛋白リパーゼ活性の増強に
基く基質からの遊離脂肪酸の増加を測定するもので、詳
しくは次の通りである。

まず、モルモットに１００　ｒ／＃のウハリ／を投与し
、投与後４分後に動脈血を採血する。これに３，８％チ
トラート溶液を添加（血液９部に対しチトラート溶液１
部）して血漿を分離する（以下モルモット血漿という）
０ また別に、０．１Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ７，４）９ｍ／
およびファトゲン（脂肪乳化剤、大日本製薬、社製）１
ｍ／を加えて基質溶液となす。モルモット血漿０．５ｍ
ｌ！　、牛血清アルブミン５０■および基質溶液０．５
−および適宜濃度に調整したペプチド〔ｌ〕を含有する
被検液０．２５−を加えて計１．２５ｍ／！となし、こ
れをインキュベートして脂肪酸を遊離せしめる。次いで
、この遊離脂肪酸を定量する。また遊離脂肪酸の定量に
当っては、血清遊離脂肪酸測定用ｒＮＥＦＡ試薬°′栄
研“　」の市販の遊離゛脂肪酸測定キット（製品コード
Ｅ−ＣＥＯＩ）を用いて行なった〔定量のための原理、
遊離脂肪酸含有液に抽出液および銅試薬を加えて攪拌し
て脂肪酸と銅イオンを結合せしめて抽出液中に移行せし
め、この抽出液に２−〔２−チアゾールアゾ）−Ｐ−ク
レゾールヲ加えて銅キレート（青緑色）を生成せしめ、
この色調を６１０ｎｍの波長で測定して遊離脂肪酸値（
ｍＢチ／りを求める。〕。

次いで、後述実施例で得られたペプチドＣｌ−３〕、ペ
プチド［１−４’］、ペプチド（１−５］、ペプチド〔
Ｉ−６〕、ペプチド〔ｌ−７〕、を各種濃度に調整（な
お、対照としての無添加の場合は、生理食塩水を用いた
）して、３７℃で３０分間、６０、分間インキュベート
してり、ポ蛋白リパーゼ活性の測定を行なって、波長６
１０ｎｍにおける吸光度（０Ｄ６１０　）を測定し、さ
らにリポ蛋白リパーゼ活性増強作用を求めた。

その結果は、第１表に示す通りであった。

以上の第１表に示す通り、本発明のペプチド〔２〕はい
ずれもリボ蛋白リパーゼ活性を増強せしめる作用を有す
るものであった。

また、これらのペプチド〔ｌ）をモルモットに１ｙ／ｋ
ｇ当り静脈投与した結果いずれも死亡例はなかった。

さらにこれらのペプチド〔Ｉ〕を含有する有用な製剤を
得るに当っては、非経口用製剤となしてもよく、また経
口用製剤となしてもよい。非経口用製剤となすに当って
は、例えば通常５００γ／−以上、好ましくは５■層以
上含有の筋注用または静注用などの注射用アンプル１〜
２　ｍｅ用または用時溶解用注射用製剤として加工でき
る。捷た注射用製剤化に当っては、通常用いられるピロ
亜硫酸ナトリウムやアスコルビン酸などの酸化肢止剤、
ＥＤＴＡやグオ乳酸などのキレート剤、クエン酸塩、酢
酸塩やリン酸塩などの緩衝剤、塩酸プロ力インや塩酸キ
シロカインなどの局所麻酔剤、ベンザルコニウムクロラ
イドやベンジルアルコールなどの防腐剤や非イオン系界
面活性剤、溶解補助剤が注射剤の用量、濃度などにより
適宜選択使用される。

また別の非経口用製剤としては、坐剤製剤として加工さ
れたものが好適であり、好捷しくけ５　ｍ９／ｙ以上の
坐剤として用いればよく、通常の製剤化技術により加工
すればよい。一般にポリエチレングリコールなどの水性
基剤または水素添加した植物油やカカオ脂、ロウ、ワッ
クスなどの油性基剤に必要に応じ非イオン系界面活性剤
や膜吸収促進剤などを加えて加温し成形加工して得るか
、ソフトカプセル充填して得る。

さらに経口用製剤を得るに当っては、好ましくは腸溶性
基剤にて被膜を施した腸溶性の顕粒や錠剤として加工す
ればよく、通常１ｏｗｕｉ／７以上の濃度として得れば
よい。このようにして得られた製剤は、例えば１回当り
ペプチド［ｌ１１０ｒｎ９以上を１回〜３回投与として
高脂血症予防薬または治療薬として用いられる。

なお、明細書中における略号は、次の意味を有す。

Ｇｌｕ　：　Ｌ−グルタミン酸 Ｇ１７　ニゲリシン Ｌｙｓ　：　Ｌ−リジン Ｌｅｕ　：　Ｌ−ロイシン Ｖａｌ　：　Ｌ−バリン Ｓθｒ：Ｌ−セリン Ｂｏｃ　：　ｔ−ブトキシカルボニル ０Ｂｚｌ　：ベンジルオキシ Ｚ−ＣＡ：Ｐ−クロロベンジルオキシカルボニルＷＳＣ
Ｄ　　：　Ｎ−工’ｆｋ−Ｎ’−３−ジメチルアミノプ
ロピル−カルボジイミド ＴＯＳニドシル ＴＦＡニトリフルオロ酢酸 ＤＭＦ　、ジメチルホルムアミド 次いで本発明の実施例を挙げて具体的に述べるが、本発
明は何んらこれによって限定されるものではない。

実施例　１ Ｈ−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇ１．ｕ　−０）１　（ペプ
チド［１−３’））（１）　　Ｂｏｃ　−Ｇｌｕ　　（
ＯＢｚｉ　−Ｇｌｕ　（ＯＢｚＡ）ＯＢｚＡ［Ｐ　−２
１の合成 Ｈ−Ｇｌｕ　（ＯＢｚＪ）　ＯＢｚＡ−Ｐ−）　ｋ　エ
ンスルホン酸塩２４．９８ｐをＤＭＦ　１６０−に加え
て攪拌し、０℃でトリエチルアミン６．９５ｒｎ１．を
加えた。次いでこれに、Ｂｏａ　−Ｇｌｕ　（ＯＢＺＩ
）　−０Ｈ１６，８７ｆおよびｌ−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（ＨＯＢｔ　）　６．７６　ｆを加え、冷却
下ＷＳＣＤ９゜１５コを適下した。さらに室温で一夜攪
拌した。次いでＤＭＦを留去した後、残渣ヲクロロホル
ム６００−に溶解し、飽和重曹水、水、ＩＮ’−ＨＯ２
、水の順で洗浄し、無水芒硝で乾燥後クロロホルムを留
去し、デシケータ−内で乾燥して結晶化してＣＰ　−２
’：］　３２．３６ｆを得た。

融点　６７〜６９℃ ＴＬＣ；　Ｒｆ＝０．７８　（クロロホルム：メタノー
ル：酢酸−９５：５：３） 〔α］”　＝　−１４，５４’　　（Ｃ二１　、　ＤＭ
Ｆ　）元素分析値　（０３６Ｈ４２０９Ｎ２として）計
算値　Ｃ＝　６６．８６％、Ｈ＝　６．５５％、Ｎ　＝
　４３３％実測値　Ｑ　＝　６６．６２％、Ｈ＝　６．
５７％、Ｎ　＝　４．５９％（２）　　Ｂｏｃ　−０１
７−Ｇｌｕ　（ＯＢｚＡ）　−Ｇ１１ｌ　（ＯＢｚｉ　
０ＢｚＪ［Ｐ−３］の合成 前記で得られた［Ｐ−２］３１．６ｆに、アニソール１
Ｏ−１ＴＦＡ　１００−を加えて室温で１時間攪拌した
。次いでＴＦＡを減圧留去した後、ｎ−へキサンで２度
洗浄し、乾燥した後得られた油状物をＤ　Ｍ　Ｆ　１５
０　ｍｌに溶解し、トリエチルアミンでＰＩ（約７に調
整した。これに、Ｂｏｃ　−Ｇｌｙ　−ＯＨ８，５７ｆ
　（４８，９ｍモル）およびＨＯＢｔ　６．６１１を加
え、冷却下Ｗ　Ｓ　ＯＤ、８．９５　ｍを滴下し、さら
に室温で一夜攪拌した。次いでＤＭＦを留去後残渣を酢
酸ニゲル３００−に溶解し、５％重曹水、水、ＩＮ−Ｈ
ｃＺ、水の順で洗浄し、さらに無水芒硝で乾燥した後、
酢酸エチルを留去して油状物を得、これをｎ−ヘキサン
で２度洗浄後乾燥して油状物σ）（Ｐ−３１３２，９８
ｆを得た。

ＴＬＣ！　；　Ｒｆ　＝０．５３　（クロロホルム、メ
タノール：酢酸−９ｓ＋ｓ：ａ　） 元素分析値　（０３８Ｈ４５０１ＯＮ３として）計算値
　Ｃ＝　６４４３５％、Ｈ＝　６．４６％、Ｎ　−５，
９７％の合成 前記で得られたＣＰ　−３］　４．７５　Ｆに、ＴＦＡ
２０−、メチレンクロライド１０ｍ！、を加えて室温で
攪拌した。反応後溶媒を減圧留去し、ｎ−ヘキサン、エ
ーテルで２度デカンテーション後デシケータ中で乾燥し
た。この油状物を水１００ｍ７！、酢酸エチル５０　ｍ
ｌに溶解し、重曹でＰＨ約８に調整した後酢酸エチルで
抽出した。次いでこれを食塩水で洗浄し、無水芒硝で乾
燥後酢酸エチルを留去して油状物を得た。この油状物を
メタノール−酢酸（９：１）８０−に溶解し、−１０％
ｐａ−ｅｌｆを加えて水素ガスを５，５時間通じた。

次いで反応後、Ｐ（１−ｃを濾過し、さらにこれをメタ
ノールで洗浄してｐ液を得た。またメタノール洗浄後の
ｐａ−ｃはさらｔ水で洗浄してｐ液を得、先のｐ液と合
せ、次いでメタノールを留去し、セファデックスＬＨ−
２０（１Ｍ酢酸）のカラム（３Ｘ　１１５ｃｒｎ）にて
ゲルｐ過し、８　ｍｅづつ分画し、主要溶出部分５８−
８２本を集め、さらに、凍結乾燥して、ペプチド［Ｉ−
３：］・酢酸塩１．７６４４１を得た。

融点：１３５〜１３７℃ 〔α〕ゎ、−３２，５２°（０＝　１．０、ＩＭ酢＃）
Ｔ、Ｌ、Ｃ！、　：　Ｒｆ　＝　０．２３　（ｎ−ブタ
ノール：ピリジン：酢酸：水＝１５：１０：３：１２　
） Ｒｆ　＝　０．１９　　（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝
３＋Ｉ：１） アミノ酸分析値：　Ｇｌｕ　２．０４（２）　、Ｇｌｙ
　１．００（１）実施例　２　・ Ｈ−Ｌｙｓ　−Ｇ１７−　Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　−ＯＨ（
ペプチド［１０）（１）　　　Ｂｏｃ　−Ｌｙｓ　　（
Ｚ−０））−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　　（０１３ｚ＃）−Ｇ
ｌｕ　（ＯＢｚｉ　ＯＢＪ　［Ｐ−４］の合成実施例１
で得られたＣ　Ｐ−３〕２８．１ｓｔに、メチレンクロ
ライド３０ゴ、アニソール１Ｏ−１ＴＦＡ１００−を加
え、室温で１時間攪拌した。次いでＴＦＡを減圧留去後
、エーテル、ｎ−ヘキサンを加えてデカンテーションし
、ざらにｎ−ヘキサンでデカンテーション後、デシケー
タ−中で乾燥した。

得られた油状物をＤＭＦ１５０ｍｌ！に溶解し、トリエ
チルアミンでＰＨ約７に調整した後、ＨＯＢｔ５．４１
２と、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｚ−（ＩＪ）−ＯＨ−ｔ−ブ
チルアミン塩１９．５２ｒの酢酸エチル懸濁液３００　
ｍｌをｌＮ−Ｈ（Ｊおよび水で洗浄した後、無水芒硝で
乾燥後酢酸エチルを留去して得られた油状物とを加え、
冷却下Ｗ８ＣＤ７．３２−を滴下し、さらに室温で一夜
攪拌した。反応後ＤＭＦを留去し残渣を酢酸エチル５０
０コに溶解し、５％重曹水、水の順で洗浄し、無水芒硝
で乾燥し、酢酸エチルを留去後ｎ−ヘキサンを加えて結
晶化し、さらに酢酸エチル−エーテルにて再結晶化して
［Ｐ−４］　３０．５１　ｔを得た。

融点：１３１〜１３２℃ 〔α’）Ｄ、−１４，３６°　（Ｃ＝　１　、ＤＭＦ　
）Ｔ、Ｌ、０　：　Ｒｆ二０．５３（クロロホルム：メ
タノール：酢酸＝９５．５．３　） Ｒｆ＝０．８６（クロロホルム：メタノール：酢酸−８
５：１５：１５） 元素分析値（０５２Ｚ（６２０＋２　Ｎ５０Ｊとして）
計算値　Ｃ＝　６２．４２％、Ｈ−６，２５％、Ｎ　＝
　７．００％実測値　０　＝　６２．４２％、Ｈ＝６４
７％、Ｎ　＝　６．９２％（２）　　Ｈ−Ｌｙｓ　−Ｇ
ｌｙ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ　−ＯＨ（ペプチド［１−４〕）
の合成 前記の［Ｐ−４］４．（ｌにＴ’ＦＡ　２０ｍ／、メチ
レンクロライドＩＯ−を加え、室温で１時間攪拌した。

次いで溶媒を減圧留去し、残渣を酢酸エチル５〇−１水
１００−に溶解し、重曹でＰＨ約８に調整し酢酸エチル
１００−を加えて抽出し、水洗後無水芒硝で乾嫉後、酢
酸エチルを留去して油状物を得た。

油状物をメタノール−酢酸（８：２）８０−に溶解し、
１０％ｌ’ａ−ｃ１ｔを加え、水素ガスを４時間通じた
。反応抜水、メタノールを加えて解媒をｐ去し、さらに
メタノールを留去して凍結乾燥し、さらにセファデック
スＬＨ２０（１Ｍ酢酸）のカラム（３Ｘ　１１５ｍ）で
ゲルｐ過し、８．５１１！／づつ分画し、主要溶出部５
１−６０本目を集心線結乾燥してペプチド（１−４］・
２酢酸塩１．０５４１９を得た。

融点、１６８〜１７０℃ 〔α’）　　、−８，９８°（Ｃ＝１．０．１Ｍ酢酸）
Ｔ、Ｌ、Ｏ：　Ｒｆ　＝　０．１８　（ｎ−ブタノール
：ピリジン：酢酸：水＝１５：１０：３：１２） アミノ酸分析値：　Ｇｌｕ　２．０５（２）　、Ｇｌｙ
　１．００（１）Ｌｙｓ　０．９７（１） 実施例　３ Ｈ−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ−−Ｇｌｕ
　−ＯＲ（ペプチド［１−５１）の合成 （１）　　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　（Ｚ　−（Ｊ　）
　−Ｇｌｙ　−、Ｇｌｕ（ＯＢｚＡ）　−Ｇｌｕ　（Ｏ
ＢｚＡ）　ＯＢｚＡ　ＣＰ−５１の合成実施例２で得ら
れた〔Ｐ−４］　２０．ＯｆにＴ　Ｆ　Ａ　８０ｍ１メ
チレンクロライド２０　ｔｘｌを加え、室温で１時間攪
拌した。次いで溶媒を留去後エーテルとｎ　−ヘキサン
混合液、エーテルでデカンテーションして油状物を得た
。この油状物をＤ　Ｍ　Ｆ　Ｚｏｏ　ｍ７！に溶解し、
トリエチルアミンでＰ　ＴＩ　７に調整し、これにＨＯ
Ｂｔ２．９７ｆとＢｏａ　−Ｌｅｕ　−ＯＦＩ　・Ｈ２
０５，４８ｆを加え、冷却下にＷ　Ｓ　ＣＤ　４．０３
　ｍｌを滴下し、さらに室温で一夜攪拌した。次いでＤ
ＭＦを留去後残渣を酢酸エチル３００−に溶解し、５％
重曹水１５０−で２回洗浄し、さらに水洗し、無水芒硝
で乾燥後酢酸エチルを留去し、ｎ−へキサンを加えてデ
カンテーションし、次にエーテルを加えて結晶化し、戸
数してＣＰ−５］　２０．３３９を得た。

融点：１２９〜１３１℃ 〔α〕も５：　−１４，９０°（Ｃ＝１、ＤＭＦ）Ｔ、
Ｌ、Ｃ，：　Ｒｆ　＝　０．７８　　（クロロホルム：
メタノール゛酢酸＝８５：１５：５　　） 元素分析値（Ｃ５８Ｈ７３０１４Ｎ６　ＣＡとして）計
算値Ｃ＝　６２．５５％、Ｈ＝　６．６１％、Ｎ　＝　
７．５５％実測値Ｃ＝　６２．２５％、Ｈ＝　６．８０
％、Ｎ　＝　７．４７％（２）　　Ｈ−Ｌｅｕ　−Ｌｙ
ｓ　−Ｇｘｙ−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ−ｏ　Ｈ（ペプチドＣ
ｌ−５１）の合成 前記で得られたＣＰ−５］４．４５９に、Ｔ’ＦＡ２５
−、メチレンクロライド１０−を加え、室温で１時間攪
拌した。次いで溶媒を減圧留去し、ｎ−ヘキサン、エー
テル（２回）でデカンテーションし、残渣を酢酸エチル
１００　ｍｌ　：水１００−に溶解し、重曹でＰＨ約８
に調整した。次いで酢酸エチル層を分取し、水洗後無水
芒硝で乾燥し、酢酸エチルを留去した。この残渣をメタ
ノール−酢酸−水（８：ｌ：１）１００ｍ７！に溶解し
、１０％１）ｄ−Ｃ１ｆを加えて水素ガスを４時間通じ
た。反応後触媒を戸去し、さらに溶媒を留去し、デシケ
ータ−内で乾燥し、これをセファデックスＬＨ−２０（
１Ｍ酢酸）のカラム（３Ｘ　１１５＞　）でゲル濾過し
、８ｍｅづつ分画し、主要溶出部分５３〜７３本目を集
めて凍結乾燥してペプチド［１−５］・２酢酸塩２．４
８０５９を得た。

融点＝１５５〜１５８℃ 〔αＩＴ）５．１５．７０°　（Ｃ＝１．１Ｍ酢酸）Ｔ
　Ｌ、Ｃ，：　Ｒｆ　＝　０．３９　　（ｎ−ブタノー
ル：ピリジン：酢酸：水＝１５．１０：３：１２） Ｒｆ　＝　０．２１　　（ｎ−ブタノール：酢酸：水二
３：１：１　　） アミノ酸分析値：　Ｇｌｕ　２．１０（２）　、（３１
ｙ　１．０１　（１）、Ｌｅｕ　１．００（１）　、Ｌ
ｙｓ　１．０１（１）、実施例　４ Ｈ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ
　−Ｇｌｕ　−ＯＲ（ペプチド［１−６）） （１）　　　Ｂｏｃ−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　　
（Ｚ−ｃｌ　）−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　（ＯＲ３））　−
Ｇｌｕ　’（ＯＢｚＪ）　ＯＨ２ノ［Ｐ−６］の合成実
施例３で得られたＣＰ−５）１５．（ｌに、Ｔ’ＦＡ６
０−メチレンクロライド１５−を加え、室温で１時間攪
拌した。次いで溶媒を留去後エーテルで２度デカンテー
ションし、乾燥した。得られた油状物をＤＭＦ　８０ｆ
ｆｉ７！に溶解し、トリエチルアミンでＰＴ（約７に調
整した。これにＨＯＢｔ２．０１ｆ、Ｂｏｃ−ＶａＡ　
−ＯＨ８，２４ｔを加えて冷却下ＷＳＣＤ２．７３−を
滴下し、さらに室温で一夜攪拌した。次いでＤＭＦを減
圧留去抜水を加えて結晶化せしめ、これを５％重曹水で
２回、水で２回洗浄後さらにエーテルで洗浄し、乾燥し
てＣＰ＝６　］　１５．６８９を得た。

融点＝１７９〜１８１℃ 〔α〕。、−１７，０６°（Ｃ＝　１、ＤＭＦ’　）Ｔ
、Ｌ、Ｃ，：　Ｒｆ　＝　０．３９　　（クロロホルム
：メタノール。

酢酸＝　　９５：５：３ Ｒｆ　＝　０．８２　　（クロロホルムτメタノール：
酢酸二　８５：１５：５） 元素分析値（Ｃ６３Ｈ８２０１５Ｎ？　（Ｊとして）計
算値　Ｃ＝　６２．３９％、Ｔ（＝　６．８２％、Ｎ　
＝　８．０８％実測値　Ｃ＝　６２．０７％、Ｈ＝　７
．０６％、Ｎ　＝　８．２１％（２）　Ｈ−ＶａＡ　−
Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇ１．ｕ　
−０Ｈ（ペプチドＣＩ＝６１）の合成 前記で得られたＣＰ−６１＆（ｌに、ＴＦＡ２５ｍｅ。

メチレンクロライド１０ｔｎＩ！を加え、室温で１時間
攪拌した。次いで溶媒を減圧留去し、残渣にエーテルヲ
カロえて結晶をＥ取した。これをメタノール−酢酸−水
（８：１：１）１００Ｗｄ！に溶解し、１０％Ｐａ−ｃ
ｌｖを加えて水素ガスを４時間通じた。

反応後、触媒を瀝去し、さらに溶媒を留去し、水を加え
て凍結乾燥し、これをセファデックスＬＨ−２０（１Ｍ
酢酸）のカラム（３Ｘ　１１５ｃｒ１りでゲル濾過し、
８ｄづつ分画し、主要溶出部分５３〜６８本目を集め、
さらにカルボキシメチル−セルロースのカラム（４Ｘ　
１５　ｃｍ　）にチャージし、水７５０　ｍｙ、　−５
％酢酸７５０ｍｇの直線濃度勾配で溶出し、５Ｆｎｌづ
つ分画し３８〜５３本目を集め凍結乾燥してペプチド［
１−６］、２酢酸塩９０１．８１ｎ９を得た。

融点：１７８〜１８０℃ 〔α］、　　、　−３４，８４°　（Ｃ＝１．１Ｍ酢酸
）Ｔ、Ｌ、Ｃ１：　Ｒｆ　＝　　０．５０　　（ｎ−ブ
タノール：ピリジン：酢酸：水＝１５：１０：３：１２
） Ｒｆ　＝　０．３８　　（ｎ−ブタノール：酢酸：水−
３：１：１） アミノ酸分析値：　Ｇｌｕ　２．．１７（２）　、Ｇｌ
ｙ　１，０５（１）、ＶａＪ　Ｏ，９８（１）　、Ｌｅ
ｕ　１．００（１）、Ｌｙｓ　１．１２（１） 実施例　５ Ｈ’　−Ｓｅｒ　−ＶａノーＬｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌ
ｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ−〇Ｈ（ペプチドＣｌ−７）） （１）　　Ｂｏｃ　−Ｓｅｒ　（ＢｚＪ）　−、ＶａＡ
　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　（Ｚ　−ＣＩ）−Ｇｌｙ　−Ｇ
ｌｕ　（ＯＢｚｌ　−Ｇｌｕ　（ＯＢｚＡ）　ＯＢＪ　
（Ｐ　−７）の合成 実施例４で得られた（　Ｐ−６）　１２．１７　ｆに、
ＴＦＡ８０−、メチレンクロライド２０−を加え、室温
で１時間攪拌した。次いで溶媒を留去後、残渣にエーテ
ルを加えて結晶を戸取した。これをＤＭＦ８０ｆｆｉ７
！に溶解し、トリエチルアミンでＰＨ約７に調整し、Ｈ
ＯＢｔ　１．４９Ｓ’およびＢｏｃ　−Ｓｅｒ　（Ｂｚ
Ｊ）　−ＯＴ−１３，２５？を加え、冷却下にＷ　Ｓ　
ＣＤ　２．０１＋＋＋ｌ！、を滴下し、さらに室温で一
夜攪拌した。反応は、ＤＭＦを減圧留去し、水を加えて
結晶化せしめ、これを５％重曹水で２回、水で２回、メ
タノール−エーテルで洗浄し、乾燥して［Ｐ−７］　１
３．５１９を得た。

融点：２３１〜２３３℃ 〔α’：１Ｄ−１３．８２°　（Ｃ＝１、ＤＭＦ　）Ｔ
　ＬＣ：　Ｒｆ　＝０．４６　　（クロロホルム：メタ
ノール：酢酸−９５：５：３ Ｒ，ｆ　＝　０．８３　（クロロホルム：メタノール：
酢酸−８５：１５　：５ 元素分析値（０７４Ｈ９３０１８Ｎｓ　ＣＬとして）計
算値　Ｃ＝　６２．６７％、Ｈ、−６，６１％、Ｎニア
、９０％実測値　Ｃ＝　６２．７９％、Ｈ＝　６．７９
％、Ｎ＝７．１５％アミノ酸分析値、　Ｓｅｒ　０．８
４（１）　、Ｇｌｕ　１．９８（２）、Ｇｌｙ　Ｏ，９
９（１）　、ＶａＡ　］、、０２（１）、Ｌｅｕ　１．
００（１）、Ｌｙｓ　１．００（１）（２）　Ｈ−８ｅ
ｒ−ＶａＡ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ　−Ｇ
ｌｕ−０ｆ（（ペプチド［１−７］）の合成前記で得ら
れた（Ｐ−７）＆Ｏｆに、ＴＦＡ２５ｍｌ。

メチレンクロライド１０−を加え、室温で１時間攪拌し
た。反応後溶媒を減圧留去し、残渣にエーテルを加えて
結晶を戸数した。これをメタノール−酢酸−水（８：１
：１）Ｚｏｏｍｅに溶解し、ｌＯ％ｐａ−ｃｌｙを加え
て水素ガスを４時間通じた、次いで触諜を戸去し、溶媒
を留去し、水を加えて凍結乾燥し、さらにセファデック
スＬＨ−２０（１Ｍ酢酸）のカラム（３×１１５α）で
ゲルｐ過し、８ｍ／づつ分画し主要溶出部分３２〜４６
本目を集め、凍、結乾燥してペプチドＣＩ−７’］・２
酢酸塩１．５９５Ｅｌを得た。

融点＝１７０〜１７５℃ 〔α］Ｄ、−５８，７２°（Ｃ＝１、酢酸）ＴＩ、Ｃ：
　　Ｒｆ　＝０．４５　（ｎ−）゛タノールニビリジン
。

酢酸：水＝１５：１０：３：１２ Ｒｆ　−０，２８（ｎ−プタノールニ酢酸：水＝３　１
：１） アミノ酸分析値：　Ｓｅｔ　０．８１（１）、Ｇｌｕ　
１．９６（２）、Ｇｌｙ　１．００（１）、ＶａＪ　１
．０１　（１）、Ｌｅｕ　１．００（］）　、Ｌｙｓ　
　１．０１（１）、特許出願人　東洋醸造株式会社 代表者伊東富士馬 手続補正書 昭和５７年７０月２θ日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 ／翫事件の表示 昭和５６年特許願′第１！；７１．ｇ４号２−％発明の
名称 新規なペプチド ３１補正をする者 事件との関係　特許出願人 住所　静岡県田方郡大仁町三福６３２の／自　　発 第３頁第１行、／３行の「アポ蛋白Ｃ−エエ」を「アポ
リボ蛋白Ｃ−エエ」と訂正する。

明細書第１Ｉ貞第１／行のｒ（／−３３」を１〔ニー３
〕」と訂正する。

明細書記１り頁第１１１行の「ＴＯ８」を「ＴｏｓＪと
訂正する。

明細書第１Ｉ貞第１／行の［／Ｎ−ＨｃｌＪを「／Ｈ−
ＨＣｌｊと訂正する。

明細書第２’１頁第ユＯ行の［（Ｃ５ユＨ６ユＯ／、２
Ｎ５Ｃ１として）」を「（ＣＨＯＮＣ１として）」５ｕ
　　４．２　　／３Ｓ と訂正する。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　一般式 ％式％ （ただし式中、ＸはＳｅｒ　−Ｖａｌ−Ｌｅｕ　−Ｌｙ
   ｓ　−Ｇｌｙの５位のＧｌｙを含む１〜５個のペプチド
   鎖を表わす。）で表わされるペプチドまたはその塩。
2. （２）　Ｈ−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　−ＯＨで表
   わされる特許請求の範囲第１項記載のペプチドまたはそ
   の塩。
3. （３）　Ｈ−Ｌｙｅ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　
   −ＯＨで表わされる特許請求の範囲第１項記載のペプチ
   ドまたはその塩。
4. （４）　Ｈ−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｕ　
   −Ｇｌｕ　−ＯＨで表わされる特許請求の範囲第１項記
   載のペプチドまたはその塩。
5. （５）　Ｈ−Ｖａｌ　−Ｌａｕ　−Ｌｙｅ−Ｇｌｙ　−
   Ｇｌｕ　−Ｇｌｕ　−ＯＨで表わされる特許請求の範囲
   第１項記載のペプチドまたはその塩。
6. （６）Ｈ−Ｓｅｒ　＝　Ｖａｌ−Ｌｅｕ　−Ｌｙｅ　　
   −Ｇｌｙ−Ｇｉｕ　−Ｇｌｕ　−ＯＨで表わされる特許
   請求の範囲第１項記載のペプチドまたはその塩。