JPS5852257A - 光学的に純粋なα−アミノフエニル酢酸誘導体、その製造法及び薬剤調製のための使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明（７Ｊ′光学０・ＩｒＣ紳、粋な成る檜の新規な
α−フェニル壌上Ｖ（餉換基會令するα−アばノフェニ
ル酢酸、１アξ〕飴σ・適当なラセミｎ導体の立体選択
的分割及び紗くＤ−及びＬ−ア足ノ緻への１俟によるそ
むらの製造法、及びそれらの医薬製造用中間体としての
使用に関する。

本発明は新規が光学的に純粋な化合物として、一般式 式中、托鳳はヒドロキ７に基１表わし１１ｍは水素原子
、炭菓ル子１〜４のアルキＡＭ、トリフルオロメチル、
Ｌ：、〜Ｃ６アルキルメルカブト、シ、〜（゛６アルキ
ルスルフイニルもしくハ″Ｌ：、−ｙＣ４アルキルスル
示ニル１霞にハロゲン原子全表わ（７、 Ｂｓ及び凡４は同一もしくは相異かりそれぞれ水素原子
、または各々炭票磨子４１で、好１しくに炭素原子１〜
２のアルキｈもしくはアルケニルを表わし、このアルキ
に基に随賄ヒドロキンル、アｉ　／、ンアノまたは埃素
Ｉｌｌ子１もし、くは２のアルコキンに工りｌｉ換きれ
ていることができ、１ｋに ）ＬＭ及びに４に音素原子と一緒になって脂肪かＱ′・
５μ〜７Ｐ５＋ｋｌ勿形敗［、但しこのＩＪね飽和また
に不飽和であることができそして＃素原子、恢ｉ１ｒ鰺
子、８０基、８ｔ）を基１ｆｃｔｆｆへ−Ｒ”基ｔ　ｆ
（、／Ｉ　ｉｊ水隼原子１六に炭素原子１もし７〈に２
のアルキル基ヲ表わす）を含むことができ、そしてこの
脂肪族の壊に随時２個の音素原子（即ち、例えはトリア
シーＡ１１）”！たは３個の窒素原子（即ち、例えげテ
トラゾール１ｌｌｔ−含むこともでき； 凡Ｉは脂肪族１ましくは（，〜【：４脂肪族）もしくに
アルアリファティック １ｆｌＬ＜Ｕベンジル）Ｑカルがン酸の基または天然も
し、くに台底のアばノカルボン除の基を表わし、 Ｒ’［水素原子１だは駁素原子１もしくは２σ〕アルキ
ル基會表わし、そして １に０１六に１Ｔトリ、俳し、に電がＨでであるときｎ
は０７にない吃のとする、のα−アずノフェニル酢酸Ｉ
導体′ｌｒ提伊する。

上記の光年かノに純粋なアミノ酸にベニゾリン１′ｆｃ
ｔｘセハロスホリン系列の半合成抗生物質製造用の出発
材料として、１ｆｃに灸症の処診用の渉炎剤としての遊
離アεノ版１大にアミノ款訪導体例えばドイン特ｌ公−
公報給２ｊｓ　３　ｈ、６１３号による梢曵剤、として
用いられる。

更に本発明に工れげ、水及び水不混和性溶剤よりｆｆふ
２相媒体中で、担体に結合された蛋白質分解性酵素ケ、
一般式 式中、Ｒ１は炭素原子１〜４のアルコキシ基、またに随
時し、〜【、：、アルキルでモノ−も（７くはジｆ１Ｎ
換されたアば）基またに天然もし７〈に合底アイノ蒙の
基を表わし、そし、で Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，、Ｒ，及びｎｖ上記の倉味會膚
する、 の化合物のラセイ混合物に対して作用せしめＬ−誘導体
Ｙ力にメン酸へ加水分解し７、そして式ｆｉｌのＤ−誘
導体を式（ＩＩ）のＬ−際から分離し、そしてその９Ｄ
−霞導性も酸の形態に転化することを特像とする、本発
明の化合物の製造法が扮供される。

かくして本発明方ｆＰ：ｔ−ｆｆＬ−化合物中のエステ
ルまたはアミド基ｔ゛ｕ−Ｒ，がカルｌキクル基へ転換
され、一方り一化合物はこの方１・水分解紮受けないこ
とに基ずくものである、これは転換が我々の水不混和性
溶剤中で行なわれる場合に特殊なものである。もし光学
的に純粋なり一型の製造が最も１蚤であるならげＬ−訪
篤体の加水分解が児全である工うに注意しかけれ＃−ｊ
力ら寸、−万吃し光学的に純粋−ＩＬ−＠を主として得
ようとするからはＬ−エステル及び−アばドの加水分解
ｒ完全ＩＱｆｆ行なわす、副反応の結果ＫＬるＤ−肪導
体σ加水分解を避けるようにすべきである。これにもし
反応を水性アルカリ溶液中で行なうならば特に起る。

式（１１の光学的に純粋η艶に、これまでに殆どエビ！
−１ｘ台物とし、て人手１゛きたペニシリン及びセファ
ロスポリンを光学的に純粋彦形Ｔ゛製造するのに用いら
れる。

その上、本発明の什１合物はこれ１でに知られていかか
ったペニシリン及びセファロスポリン【製造するのにも
また用いることができる。更に、一般式＋１１のα−ア
ンノフェニル酢酸詐導体の成る本のはφ症の処置剤に直
接用いることができる。

アば）酸σノラセミ体の化学約分＊、ｌ＠ｆＥ−１１フ
イノ酸の塩をＤＬ−樟脳スルオン酸の如き酸に工って分
画結晶プせることに基ずいているｔＪ、Ｐ。

Ｇｒｅｅｎｓｔｅｉｎ及びＭ、　Ｗｉｎｉｔｚ　、　　
（：ｈｅｍｉｌｔｒＦｏｆ　　　Ａｍ１ｎｏｓ＋ｃｉｄ
ｓ　　、　　　Ｖｏ夏　、　　１１１９６１）６ｆｉ８
３Ｎ以降参ｆｉ＠ｌ。

しかしながら、非常に異欧った構造の各種α−アイノフ
ェニル酢酸銹導体を用いるとき、すべてのアばノ除が唯
一つの酸によって光学的対掌体へ分離しうることは予期
することができ力い、そむ故それぞれの場合に最も適す
る酸は骨の折れる多くの′ｖ、験に裏って見比されなけ
れけがらがい。

しかしながら、もし本発明による相体に結合された蛋白
質分解性酵素音用いるからげ、すべての式＋ｆｌ＋の誘
導体に一処理工程によって光学的に純粋な対掌体へと分
離することができる。

このことに式１ｉｔ）の各種アばノフェニル酢酸向導体
の集造的差Ｓの故に、驚くべきことである。

しかし、上記アイノ晒のために誰一つの酵素系及び処理
系を用−すことね工業的に非常に重畳な仁と↑ｌる。

覧：ｈｖｕｉｅａｌ　　Ｒｅｖｉｅｗｓ　　４６１１９
５０　）、６９〜１５３Ｗ％特に１１９〜１２２頁に工
ねば１本発明ＶＣよって得られる結果に予期し得ないも
のＴｏありた。

可能か酸素に特に、蛋白質分解性酵素Ｃｐｒｏｔｅｏｌ
ｙｔｉｃ　　ｅｎｚｙｍｅ＋ｓ　）　、殊にセリーンプ
ロテアーセｌ５ｅｒｔｎｅ　　ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ｒ
及びスルフヒドリルプロテアーセｔ　５ｕｌｐｈ　−ｈ
ｙｄｒｙｌｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ｌ、好１しくにサブチ
リジンＣ５ｕｂｔｉＮｓｉｎ　、　Ｅｔ：３．４．４．
　］　６１、α−キモトリプシン１α−ｃｈｙｍｏｔｒ
ｙｐｓｉｎ　、　Ｅ　ｅ３．４．４．　Ｓｌ、パパイン
１　ｐａｐａｉｎ　、　Ｅ　ｔ：３．４．４．１０）、
フィチン＋　ｆｉｃｉｎ　）　またはプロメリン＋　ｂ
ｒｏｍｅｌａｉｎ　）が包含され、最初の二つσ・プロ
テアーゼにアミノドの鎖中に活性中心をもつセリーン基
を有（、一方それより後者にアミノドの鎖中に活性中心
とし−（ンスティン會有する。サブチリジンが好４しい
。

バチ３７　　ザブ＋　ＩＪ　スｌ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
　５ｕｂｌ目ｔｓ　）及ヒハチルスリケニホルｉス＋　
Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｌｃｈｅｎｉｆｏｒｍｌｓ　ｌから
単１１１１−Ｊねそして蛋白質の基を除くため洗幇剤が
ｔ加ζねた蛋白質分解性酵素が特に適当″′ｒ：ある。

こねらの工業的酵素は主と（て商ｌｌ＠Ｎａｘａｔａｓ
ｅ″１ｆｈ造者：　Ｇ１５ｔＢｒｏｃａｄｅｓ　　Ｎ、
Ｖ、Ｄｅｌｆｔ　／オ、ラン〆）、１υｐｔｔｍａｓｅ
”　（製造者：　ＮＮｅ５−　Ｋａｌｉ（：ｈｅｍｉｅ
　、　ハノーバー）及び”Ａｌｃ、ａｌａｓｅ　”（製
造者：　Ｎｏｖｏ　　Ｉｎｄｕｓｔｒｉ　　Ａ　８、コ
ペンハーゲン／デンマーク）の名１゛知られている。

蛋白質分解性酵素の性質、特に生化学的作片６次σ゛参
考文献中にｒ船゛壊ｔている：Ｇ、Ｅ。

Ｐｅｒｌｍａｎｎ及びＬｒ、　Ｌｏｒａｎｄ　、　ｊｌ
ｉｌｅｔｈｏｄｓ　　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、　　
１９０９７９１１９９〜２１５；　Ｐ、　１）ｅｓｎｕ
ｅ目ｅ　、　Ｔｈｅ　　Ｅｎｚｙｍｅｓ　。

−ｊ＋　１９６０１９３及びＧ、　Ｍ、　ｉ’ｅｒ１ｍ
ａｎｎ及びり、　Ｌｏｒａｎｄ　、　Ｍｅｔｈｏｄｓ　
　ｉｎ　　ｋｎｘｙｍｏｌｏｇ）１９１１９７０１２２
６〜２４４゜ 蛋白質分解性１＃素に、触媒作用に心頭ではかいりジン
基會介［７共有結合によって、重合体担体に結合される
ことができる。酵素Ｃ・担体へＱ共有結付によってｔ！
Ｆ成された担体結合酵素に反復作用に工りその活性が非
常に徐々に失なわれるに過ぎない。史シ（別の可能＋！
ｆ広偵タ：町ひの孔（Ｃ酵素ケ吸着され、次いでダルタ
ルアルテヒドで架機結台すること′ｃ）る。

可能な酸素の担体として汀、セルロース例えばＤＥＡＤ
４たに（二Ｍ−セルロース、アミノ基もしく　ｒＪヒド
ロキシル基會弔する電性ホリアクリルアイドゲル、また
にドイツ特訃公開公報第２．２１５，５３９号及び第ス
２１５，６８７号によるアクリルアばド、メタクリレー
トもしくａメタアクリルアミドと無水！レモン除との令
機共Ｉｉｒ台体、の如き孔ＩＭ夏合体和俸が包含される
。

ｌ合体相体へ結付させるため、酵素は酵素の安斤性に最
も好都合な条件下に反応せしめられる。

蛋白質分解性酵素會結合でせる好ましい条件打ｐｌ（６
〜８、ｉｓ皺２０〜４０℃であ、る、結合の有効層ね１
合体上及び洗滌水中の酵素活性會創足することによって
快定することができる０回分江ヲ用いる場合にね、ポリ
マー状酸Ｓに沈降またに濾過に工つて反応温液から容易
番で分離し、そして数回使用することができる。ｔ＊に
累相体會カラム中に充填し、そｎ１通じて基質溶液をパ
ンファー系の存在下にＲ−ｔこともできる、 ａ′１発物質及び目的生ＭＩＩｌ！＋の吸着會予ｔ〕試
験−Ｃることね、本発明方法に対する酵素の遥曾性のた
めの先豐条件である。過歯か担体に出発−質及び目的午
欣物會少ししか吸−しかいかまたに全く吸着しないもｑ
）であるべきである、過指な試験法に酵素１ｆｉ′１な
い担体による基質の吸着試験であυそ（て液中における
：ｊ！ｋｗの回収を検定することである。もし担体が基
５ｉｉケ約５〜１０１１工υ多く吸着するからは、そわ
けこの反応用に゛適当が担体ではない。

種々のセルロース、セルロース銹導体、アｉ）基もし、
くりヒドロキシル基【含肩するボリアクリルアばドゲル
及びアミノ基もしくにヒドロキシル基で変性は才また酸
無水物樹脂６Ｉ！５に良好な蛋白質分解性酵素用σ１相
体であることが証明された。一般に、アばノ基またにヒ
ドロキシル基【有し且つ本発明方法σ・（１）発材刺及
び第終生飲物會吸収（、ない１ぺての１１曾０−担体ね
担体として使用することができる。ｍ合体相体は増化シ
アヌール【用いそれ自体公知のカニにより活性化され１
英ｆｆ１１％軒第１３　（１２７１１ｆｔ　％、へ、Ｌ
、Ｓｍ１ｔｈ及びＨ，Ｎ。

ｈｅｈｎｈｏｆｆ、　Ａｒｃｈ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、ｒ
＊　−６１１１！Ｊ７４　）３９２〜４１ｆｉ及びＴ−
Ｈ＊　ｋ’　Ｉｎ　ｌ　Ｂｙら、Ａｒｃｈ。

Ｂｌｏｃｈｅｍ、、　　８７　１１９７８）７７〜９０
１、またはドイツ特許公開公報第’２．ｆｉ　１９，５
２１号もしくけ（ロ）第２．６１９，４５１号に従い各
種ＩＩＩ’ロゲノビリばジンを用いて活性化畜れる。

本発明方ａ−において用いられるアイノ＠Ｎ−アクルエ
ステル及びアｔＦ’ｕ、相応するアはノ酸工メチル″ｔ
ｔにアばトンーイドロクロライド【イヒ学倉論重σご酸
無水物例えば無水酢酸でアクルイ目−次いでさ一アシル
防導体會７Ｆ＃徐ｔ９剤例大、けクロロホルム１食に堝
仕メチレンで水性相から分離することによって得られる
。

ｗＳ法分割に好１　ｔ、（ｔｆｆｉｉＦ２０〜４０℃に
おいて、トーしくにｐｌ−１６〜８の節回で行なわれ、
ｐｔ−を懐に強塩基の泳方１下エリ好″ｆＬ＜はｐＨ７
，０に一足に保持される。ｊ！質に約１０〜２０憾Ｉｌ
ｋ度の有機溶液として水中懸濁酵素−担体へ詮加され、
添剤ち有量に全容會基準で最大７５〜８０容を嚢である
ことができる。反応媒体は酵素性反応の間激し、く攪拌
される。酵素性反応の進行及び終点に生成されるＨ４イ
オンの中和によって検出することができる、中和は有機
またに無機の塩基によって行かうことができる。□ラセ
ｉ体の酵素性分割の過程に、有機相及び水性相の光学的
旋回？−１定すること及び有機相及び水性相中の反応生
成物を高圧液体クロマトグラフィーにＬｐ測測定ること
によってＩ［接菌に検定することができる。本発明方法
に用いる適当が本機溶剤に水不混和性添剤、例、ｔげｍ
（ヒメチレン、クロロホルム、トルエン、ベンゼン、酢
酸エチル、石油エーテル、メチルイソブチルケトンまた
にインブタノールである。

多くの基質及び酵素反応生成物に水またにバッファー溶
液中に限られた８′展に浩解するだけである。しかしな
がら、経済的理由によシ、担体に結付された酵素との反
応會工業的に！１１！施する揚台には基質温液に出来る
限り濃厚にして使用される。

−素Ｃ）活性が阻害されないように注意すべきである、 酵素性反応が終了（、そして酵素樹脂が沈降されたとき
、有機相１除き反応水性溶液をもう一度２倍容會の有機
溶剤の小分は分で抽出する。抽出液會−＃ｉＩＫするや
酵素樹脂會枦云し、残った水性和音例えば硫骸で酸性に
しそして酢賑エチｋＴ抽出する６次いで得られた化合−
の光学的純＃會チェックする。

Ｄ−１ｆＣはＬ−アイノ酸を製造するには、保静基Ｒ１
及びＨ１會専門家によく知られた方法で脱離させる。脱
離に適当彦反応条伯ね例えげ約８０’Ｄｒおける２Ｎ　
Ｈ（：ｌによる処理であるｌ　％えｄ米国特許ｙ、　４
．２　ｆｌ　Ｏ，６８４号実施例８）。

冥施例１ ２００ｆのセルロース　アビセｋ　（Ａｖｉｃｅｌ　）
（メルク）會水Ｆｌ（１０１ｍ／及びジオキサン５００
ｍ１＋／の溶液中に懸濁づせ、そし２て塩化シアヌール
２０ｆ％を添加する。

１）？ｌｌ［ｉ２Ｎ　Ｎａ（ＪＨで７　、ｔ＋　〜９．
０に保つ。混合物音４５分間攪拌した徒、活性化プれた
セルロースを７リフト上で吸収濾過し、そし、て水８０
０―中に懸濁させる。２５Ｆのマツクサターゼ１Ｍａｘ
ａｔａｓｅ　）　＋　Ｇ１５ｔ　−Ｂｒｏｃａｄｅｓ　
Ｎ、　ｖ、＠デ＾フト／オランダ）會添加し、混合物會
室協でｐｌ−１７〜８において２０時間攪拌する。次い
で酵素担体會ツリット上で濾過し、小分けにした蒸留水
で洗移し、最伊に吸引乾燥する。

潜ったサラチリジン−セルロース６００Ｆが得らｆした
。活性：２８４ＡＴＩｉＥＩＮ−アセチル−Ｌ−チロク
ンエチルエステル）単位／ｆ酵素担体。

会計活性：　１７０，４０　ｏＡＴｊ３ｇ単位、これね
用いられた活性の２７．２−に和尚する。

実施例２ １００ｆのＤＥＡＢ−セル１０−ヌ（ｐｇ−５２−（：
ｅｌｌｕｌｏｓｅ　、　Ｍｅｓｓｒｓ、　Ｗｈａｔｍａ
ｎｎ　Ｌｔｄ、　。

スプリングフィールド、英国）を王妃と同様の方法によ
り塩化７アヌールで活性化する。水に対する透析後、５
ｆの凍結乾燥した７クサターゼまた６丁ルヵラーセ（Ａ
ｌｃａｌａｓｅ　）　（６５９Ａｎｓｏｎ単位／１．製
造者：Ｎｏｖｏ　　Ａ８．　コペンノ・−ゲン／デンマ
ーク）ケその上に共有結伸させる。７４０ＡＴＥ８単位
／ｆ酵索和体會有する湿りたＤＥ・Ｆｉ２−−にルロー
スーサプチリジン１４０１がｐ過稜に得ら７する。

得られた合計活性は１０３．６００ＡＴＥＥ単位て゛あ
ｐ、用いた活性の１６．５−に和尚する。

決、−１二」唯−Ｊ− アセトンでｆｋ醋した酸無水物樹月盲（テトラエチレン
グリフールジメチルアクリレート８０重１ｌｉ−、メタ
クリル酸１０重を憾及び無水マレイン′＃に１０Ｘｔ嗟
）の２０ｆｔ水５０ｄ中に懸濁させる。

１ｎｉｒｉｌ１％渉度Ｑ、ヘキサメチレン溶液またにエ
タノールアミン溶液の４０　ｍ／Ｖｒｐ８７．０におい
て加えセし、て懸濁液ケ障定により一夜ｐＨ６，２に一
足に保つ、こｑ）アミン樹脂會吸引沖過する。過剰のヘ
キサメチレンシアばン溶Ｑｔ１Ｍ　　Ｎｍ（：１溶液で
洗い去る。次いで樹脂を脱イオン水で洗滌する。

アば）基會有する酸無水物樹脂會水５０−及びジオキサ
ン５（）ｄ中に懸濁プせそして塩化ンアヌール會片いｐ
ｉ−ＩＦｉ、０で室温においてＩｆＲｆ間活性化する。

、樹脂ケシオキサン及び水で洗いそして２ｔのマクサタ
ーゼと、ｐｔｉｓ、ｏ、室ｍにおいて２０時間尺に、さ
ぜる。

１２６ＡＴＨｋＪ単位／１＠素担体の活性？ｒ壱ｆる湿
つｆＣ樹脂４８．２　ｆ　ｋ得る。

得られた合計活性は６．（１７３ＡＴＥＥであり、費用
活性の１２．１嗟に相白した。

九〜と一例−１− ジエチレントリアばンと反応ζｔ′Ｉたポリアクリロニ
トリル樹脂３００ｆを、上！こと同様にして、担体：塩
イビンアヌールの１を比１０：１において活性化し、そ
して３０９のマクサターゼと２５℃、ｐ）１８．０にお
いて１６時Ｉｌ＆ｉ１ル応させる。

湿りた酵謝樹脂２８８．５　ｆが得られた。

担体上の蛋白質分解活性ねｓｚ、ｏＡ’ｒｇｇｓ位／ｆ
酵素樹脂、合計して２３．：’（ｆｉ８ＡＴＥＥ単位で
あり、使用した全活性の３．１−に相邑した。

＊＃　　艷−」− ！フサター４ｆ　（Ｑｉｓｔ　−Ｂｒｏｃａｄｅｓ　　
Ｎ、　ｖ、　。

デルフト／オランダ）を、セファデックス１８ｅｐｈａ
ｄｅｘ　）　（ｊ　５０粗粒を充填シ、たカラム＋１１
ａｇ＋Ｘ９７５．９．２　ｔ　ｔ　ｒ　ｗｍじて予めｎ
製する。

マクサターゼｆｉｏｆ１ｒ：ｐＨ７，０の０．０１　！
Ｖ燐燐酸ナトリウムバッファー２００中中懸濁させ、懸
ｆｋＪ液を遠心分離し２、沈殿に捨てる。溶液紮、セフ
ァデックスＧ充填相粒ケ光填（、たカラム中音ポンプで
通過させ、自分２５０ｍ１−捕集する。

画分７〜１８會付わせ、水に対し透析し、次いで凍結齢
燥する。収量−１４．１２ｆ、即ち最初のＸｔの２８．
２−である。

Ｉ）ｔ［ニー５０＠脂１００　ｆ　ｋ２０　ｍＭ　Ｃａ
［？１゜ｆｌ液２５０１中に懸濁さゼ、懸淘液會−夜漬
定器中でｐＨ６，０に凝定促持する。

攪拌しながら、鞘製婆れたマクサターゼ１０ｆｔ−７Ｊ
ｏλ、そしてト液會酵素秒着のた約１８時間Ｉ　Ｎ　Ｎ
ａＵＨでｐＨ６，０に逼定伊持する。樹脂會吸引Ｐ遇し
１、ダルタルアルデヒド２．５１ｖｔ有するυｍｌ’１
ｇ＃液３０Ｏｄ中へ攪拌絵加し、そして混合物ｖｒ６時
間ｐＨｆｉ、（１に保つ。次いで樹脂を再び吸引濾過し
、フィルター上でｐ）１７．０の０．１Ｍ燐酸塩バッフ
ァー約Ｆ＋ｎ０ｗ１’ｒ小分けに（７て渋い、そし７て
同じバッファーにトルエン１１，０５％’ｔ−加えた中
で＋４℃で貯菅する。

得られた活性啄ヘーアセチルーＤＬ−フェニルダリンン
メチルエステル、＝ＡＰＮＥで試験）グルタルアルデヒ
ド２．５−でパンチ架＊：樹脂上の活性−６４５ＡＰＭ
Ｅ単位；使用活性の１７．２畳。

沖＃−４８８，６ＡＰＭｇ単位＝使用活性の１３．０憾
。

更に安定性を良くするためｆ、サブチリジン−Ｉａ＃ｌ
ｌ旨１次いでグルタルアルデヒド７．５１６で架橋ささ
せた： ４．７俤。

Ｆｇ−９６４，８ＡＰＭｇ単位置使用活性の１３．４係
。

夫−一施一件−ｊ− 塩什メチレンの存在下における〜−ホルイルーＤＩ、−
７−クロ０フェニルグリシ／メチルエステ〜−才Ａ、ば
ルー］）ｌ、−２−クロロフェニルグリシンメチルエス
テル５ｆｔ水１，０００ｗｄと塩化メチレン１，０００
ＩＩＫ／との乳化液中に溶か【７、セして実施例４に従
って―製さｊたサブチリジン−樹脂２１０．８　を會希
刀１１する。混付呻！會、濃へＨｌでｐｉ會一定に４！
ＩＡちりつ、３７℃、ｐＨ７，０で１０分間攪拌した後
、攪拌器をとめ廟機相ケ分離する。次いで水性相’Ｉ５
ｏｏｗｄの塩化メチレンで２回抽出する。有機相ケ合わ
せて回転蒸発器上で蒸発乾燥する。

へ−ホにゼルーＤ−２−クロロフェニルダリクンメチル
エ、ステルの収ｊｔ＊　２．３８　ｔ　＋　Ｈａの９５
．２嘔）である、 １ｉｅ−１） Ｎ−ホｈｄルーＤ−２−クロロフェニルグリＶンメチル
エステＡ−２，３８ｆ７？５チ語度ｔ−ｕ゛１１００−
中に溶かし７そして８５℃で３０時間カロ水分解する。

次いＴ塩酸紮［１鼾声発昏中１゛ストリップし、ｌ！Ｉ
Ｎ物を１５嗟濃屓水酢化す）　Ｉ）ラム浴液でｐＨ４，
５１調節する。生じた沈殿を吸引濾過し、蒸留水及びア
セトンで洗滌し７、乾燥する、Ｉ’）−２−クロローフ
ェニルグリジンの収？＝１．７８ｆ１〜−ホノＬばルー
１）−２−クロロフェニルグリシンメチルエステルに基
つい理論の８２チ）。

ｔニー１３ 酵ｌＬ法分割溶液からの水性相ｉ１８憾渉１Ｈ口ＴｐＨ
１，ｆｉにし腎し、この浴沿管各回３ｆｌＯゴのメチル
イソブチルケトンと共に据膳して３回抽出する。−緒に
合わ＋ｒた有機相を回転蒸発器上で乾燥１で蒸発する。

Ｎ−アセチル−Ｌ−２−りｏ。

フェニルグリシンの収ｉ１７．２ｆ（理論の１１．９．
３嚢） （゛口１　） 実施例７ メチルイソブチルケトンの存在下におけるへ一アセチル
ーＤＬ−３−クロロフェニルグリシンメチルエヌテルの
酵素法分割及びこねに続（ＩＪ−３りａロフェニルグリ
ンンへのＭ化水分ＭヘーアセチルーＤＬ−３−クロロフ
ェニルグリシンメチルエステル１３ｆ￥フ水５°００ｍ
とメチルイソグチルケトン５００−との乳化液中ＶＣ＃
かじ、セして実施≠１２に′従い訓製略才゛シたサブチ
リジン／担体３８４ｆｔ％鶴拌しなから、添加する。メ
トロムＩ　Ｍｃｔｈｒｏｎｎ　）　＄定１ｔ（ｐＨメー
ターＥ３００　Ｂ、　　Ｉｍｐｕｌｓｏｍａｔ　Ｅ　４
７３及びＤｏｓｉｍａｔ４１２、　ｙＵｅｔｈｒｏｍ％
ｔ（ｅｒｔｉａｕ／スイスｌ　ｋｍ、、２ｆｉｌＧ１１
度アンモニアの泳方ｕｔでエリｐＨ１ｆｒ７．０の一足
に仰り、３７℃でｌＯ時阪・の反応時間（／＋９゜サブ
チリジン／押体をフリント上１°吸引Ｐａし、更しζ殻
に使用するＩで４℃ｒ（仙；つ、分割溶液？各１２００
−σ・メチルイソグチルケトンで３（ロ）抽出１゛る。

−ＲｅＣ分オノゼに壱様相を回転蒸発器ｒ：ｆＪで乾銖
すなｌで蒸発する。

Ｎ−７−ｋｆｈ−Ｄ−３−クロロフェニルグリツメチル
エステルのＵ　ｉｌｔｒｗ　６．３６　ｔ　＋理論の９
７．８鴫１である。

（？−１３ Ｎ−アセチル−Ｄ−クロロフェニルクリ／ンメチルエメ
チル５ｖゲ５優ｆ＃度ｔｔｔ’ｉ　　ｌｏ　Ｏｓｇ中に
浴かし１．８５℃で１８時間加水分解する。塩瞼？回鼾
声発器上〒殆ど完全にストリップＬ−１濃縮物ｔ−１５
％Ｓμ水酸化ナトリウム溶液ＴｐＨ５，０に調節する。

＾′殿會吸引濾過し、藍憾イ”る。

Ｄ−３−クロロフェニルグリシンの収ｌ＝２．８１ｆｌ
理論の７３．２１％］ ２５℃ ［α］＝−１１２°【ｌへ［４（’ｌ中５７　ｆ３　　
ｎｍ （：＝ｌｌ 酵素法分割からＱ、水性和音１８嘔澁ｉ　ｔｉＬ：　ｌ
でｐ）ｌ　１．Ｆｔに一節【１、この溶液？各回３００
ｓ／のメチルイソプ４にケトンで３　抽出する。−緒に
曾わせた有機相を回転蒸発器上１１燥する１で蒸発−す
る。

ヘーアセチル・Ｌ−３−クロロフェニルグリクンの収Ｉ
Ｍ６．２１　ｆ　を理論の８８．０嗟）中（：ｇ＝ＩＩ 寮　施　ｆｌＪ　　９ 地什メチレン存在下における４−８−メチル−Ｉ）Ｌ−
Ｎ−アセチル−フェニルグリシンメチルエステルのｗ！
輩法分劃側び−これＶ（絖（＜−８−ｙｌチル−Ｄ−フ
ェニルグリクンへの酸加水分解４−８−メチル−１）Ｌ
−Ｎ−アセチル−フェニルグリシンエステル１４ｆ會蒸
幀水５００策ｌと塩イヒメチレン５００−とｆ）乳化液
中［６かし、そして３７℃で一足のｐＨ偵７．０１２５
慢濃１アンモニア疾加に工ｐ調節）におい１、夾施例３
に従って調製されたサブチリジン／担体３１４２の添加
に工す分割ケ行力う。攪拌器會とｔた徒、水性相及び不
様和音−単樹脂から＠Ｉ３１濾過により分離する。水性
相紮更１（各１Ｆ・１５００ｍ／（’！坦什メチレンに
１９２回抽出する。−緒に合わせた奉様相を回転蒸発器
上で軒＊する１で蒸発する。

４−５−メチル−ＩＬＬ−へ−アセチｈ−フェニルグリ
７ンメチルエステルＣ〕収倉：　６，１２　ｆ　を理論
の８７６４チ） Ｌニー１１ ４−ｆＭ−メチル・ＤＬ−へ−アセチルーフエニＡ　ｆ
　ＩＪ　’／　ン）　ｆ　Ａ　Ｚ　７　ｆ　ル５　ｆ／
　ｆ　５ｆｋ　＃！に＃、　ｔｉ（’　１１１８−中で
８５℃で１８時間加水分鱗する。この溶液ケ回鼾声発上
で光分に濃縮し、濃縮物音Ｉ　Ｆｉ　％ｆｌｋＷｈａＵ
Ｈ″ｒｐＨ５，０に調節【１、分離し。

九沈殿紮吸引炉遇し、少量の水で洗いそして乾燥する。

４−８−メチル−Ｄ−フェニルグリンンの収量：３．８
０ｆ−理論の９７．Ｆｉ　％ Ｌニー１） 酵素法分割の溶液からの水性相′９ｒ１８１ｔ一度出′
！でｐＨ１，５に調節し、各回３００１の酢酸エチルで
３回抽出する。合わせた有機相、上回転蒸発器上で乾燥
する萱で蒸発する。

４４１−メチル−１，−Ｎ−丁セチルーフェニルグリク
ング、収量：ｆｉ、３５１Ｆ−理論の８０．８悌（ニー
１１ 実施例１０ メチルイソブチルケトンの々在下における４−ベーアば
ノアセチル−Ｄｌ、％−アセチルーフェニルグリシンメ
チルエメテル（７−］酵酵素分分割−へ一アミノアセチ
ルーＤＬ−ヘーアセチルーフェニルグリシンメチルエス
テｈ１３．９ｆｋｌｋ留水５０　（１ｍｌとメチルイソ
ブチルケトン２５ｏ―との唄化液中１（溶か【、そして
実施例６に記載の如く、実施例４に従い一１１ｋｌ＃ｒ
ｔたサブチリジン／相体３Ｂ４１會用い分割素行なう。

後ｌＪ３埋りζ旅例６中に記載の如く行なわれた、４−
〜−アｉノアセチルーＤ−〜〜アセチル・フェニルグリ
シンメチルエステル（７）収１１　＝３．１９ｆに理論
の９．１２ｃｍ Ｃ；１　） ｗ素性分割からの水性相をｐＨ１，ｆｉにト・性化し、
寮施ｆ１′６中に記載の如く後処理する。

４−Ｎ−アぐノアセチル−Ｌ−Ｎ−アセチルーフェニル
ダリシンの収量−５，２４を 特許田顧人　　バイエル・アクテエンゲゼルシャフト第
１頁の続き ＠発明者クンター・シュミット ドイツ連邦共和国デー５６ｏＯブツ ペルタール１パールケーシユト ラーセ６３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 式中、）ＬｔＨヒドロキシル基ｔＩ！わし；Ｒ１は水素
   原子、炭素原子１〜４（？’ｌアルキル基、）　１）、
   フルオロメチル、Ｃ１〜【：４のアル中ルメルカブト、
   【八〜【二、アルキルスルフィニル４ｔ、＜ｔｚｔ二ｌ
   〜（：４のアルキルスルフニル基またにハロゲン原子１
   表わし； ｋＬａ及びｋＬＩに同一もしくは相）カシそれぞれ水素
   原子、ｆたけ各々炭素原子４１′Ｔ゛のアルキルもしく
   はアへケニへ基會表わし、このアルキル基に１ＩＩｉ時
   ヒドロキクル、アばノ、シアノまたね脚素原子ｌもしく
   ｉ！２のアルコキンに工つてｔ換されていることができ
   、またに Ｂｓ及び）ｔ４は窒素原子と一緒になって脂肪族の５ｊ
   〜７ｊ寝を形成し、但しこの餐軒１飽和１霞ね不飽和で
   あることができそ［、て酸累豫子、做黄原子、８０基及
   び８０．基またはさ−ｋＬ１基目げに水素または炭素原
   子１もしくに２のアルギル基會表わす）會含むことがで
   き、そしてこの脂肪族のＭ＆にまた随時２個の室穿原子
   または３＠の窃素原子會含むことができ； Ｒ１に脂肪族もしくはアルアリ７アテインクの力ｋがン
   酸の基ｌたけ天然もしくに合体のα−アばノ刀Ａ−がン
   酸の１！會表わし； Ｒ１に水票原子筐たに縦累原子１もしくに２のアルキに
   基１表わし、そして ｎは０１酎ゴ１であり、俳しががＨの ときｎ　ｔ’ｚ　ｏ　”ｃ”にないもＣ゛とする、の光
   学的に純粋立α−アばノフェニル酢酸誘導体。 ２、に塾が（，〜【：、脂肪族カルメン酸σ）斧筐霞ｌ
   安倉香酸の基を表わす、特許請求の費囲纂１項記載の光
   学的に純粋がイヒ曾物。 ３、本明細査中に特記され食いずれかの特計ｎ京の静囲
   鯖ｌ瑣ｌｌ１ｌｉ載の光学的に純粋な化合物。 ４、水及び水不混和性浴剤エリ取る二相媒体中で、」０
   ．１結合された蛋白質加水分解性貴素を、一般式 式中、に！６級索廊子１〜４のアルコキシ基、またｔａ
   Ｗｆｉ時（：１〜ｔ′６アルキルでモノ−もし７くにジ
   ａｍさｉｔたアゼノ基、−ｆ＊ｔ’ｘ大然もしくに＠取
   のアｉ）醗の基を表わし７、そして ）ｔ、　、ｈ、、Ｒ，、ｈ、、Ｈ６及びｎは特許請求の
   範囲第１項中におけるとＩｔｆｆｌじ意味ｒ肩する、 の化に物のラセば混合物に７フし作用ゼ（ｔてＬ−四導
   体會カルポン酪へ加水分解【１、そ【、１式１１１のＤ
   −銹導体Ｙ式１ｕｌｌのＬ−酸から分離【７、次いＴＤ
   −ド導体も酸の形態に転イヒすることをＩＰｇｌｌとす
   る、特許請求の範囲第１〜３項のいずれかに計１の光学
   的に純粋欧化合物を製造する方法。 ５、用いられる酵素がサブチリジン、α−キモトリプシ
   ン、パパイン、ブイチンまたねプロメリンである、弊ｌ
   ＦＦ−訪求の範囲第４功配叡の方法、６、用いられる酬
   隼がサブチリジンである、特許請求の範囲第５歩記載の
   方法。 ７、醇累的ド裂が冬１２０〜４０て−７行なわれる、特
   ＩＦｌ論求の範囲第４〜６功のいすｔ［かに記−σ・方
   法、 ８、ＩＩＩＩ的ト修がｐ　Ｈ６〜８　Ｋ”　オｖｒ　ｉ
   　行Ｗ　ｔ＞ねる　特許請求の範囲＃４〜７項Ｃ：いず
   れかに記１の方法。 ９、実施？ｌ１６〜１０゛のいずｊ力・に笑質的に記載
   され＊、、＄訃−求Ｑ・静囲１ｐ、　を項ｒ載の光学的
   に純粋な仕分−ケ製造する方ｆｉ：。 １０、特ｔ’ＦＴｈ末のＷ囲ト４〜９項のいずれかにｒ
   載の方法ＶＣ工って製造場ｔた、特許請求の範囲第１項
   Ｆｔｅ　＊　（／・光学的に純粋か仕付”物。 １１、特軒！Ｉｊｉｌ求の範囲第１〜３功及び第１０項
   のい１“れかＫｋ撃の化合％ｌ使用するベニンリン１に
   ６セフアロス示リンの製造法。 １２、炎症処修用としての％詐請求σ゛節囲第１〜３項
   及び泥１（）項のいずれかｒ記載の化合物。