JPS6023354A - 純粋なｌ−ロイシンの製法 - Google Patents
純粋なｌ−ロイシンの製法Info
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- JPS6023354A JPS6023354A JP59101881A JP10188184A JPS6023354A JP S6023354 A JPS6023354 A JP S6023354A JP 59101881 A JP59101881 A JP 59101881A JP 10188184 A JP10188184 A JP 10188184A JP S6023354 A JPS6023354 A JP S6023354A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C227/00—Preparation of compounds containing amino and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C227/38—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
- C07C227/40—Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C231/00—Preparation of carboxylic acid amides
- C07C231/02—Preparation of carboxylic acid amides from carboxylic acids or from esters, anhydrides, or halides thereof by reaction with ammonia or amines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、それぞれ乾燥物質に対して、Ｌ−ロイシン最
低４５重量 、Ｌ−イソロイシン最高４０重量％、他の
アミノ酸最高２５重量％を含有するアミノ酸混合物から
純粋なＬ−ロイシンを得る方法に関する。
低４５重量 、Ｌ−イソロイシン最高４０重量％、他の
アミノ酸最高２５重量％を含有するアミノ酸混合物から
純粋なＬ−ロイシンを得る方法に関する。
従来の技術
り一ロイシンは、薬学作用物質、たとえばアミノ酸を主
体とする注入液の成分である。今日までは、Ｌ−ロイシ
ンの工業的製造はいわゆる抽出法により行なわれる。こ
のために、蛋白質をアミノ酸混合物に加水分解し、これ
から分別結晶化および／または分取りロマトグラフィ一
方法（イオン交換、イオン排除および／またはモレキュ
ラーン−ブ効果）により工業用り一ロイシンが得られる
。
体とする注入液の成分である。今日までは、Ｌ−ロイシ
ンの工業的製造はいわゆる抽出法により行なわれる。こ
のために、蛋白質をアミノ酸混合物に加水分解し、これ
から分別結晶化および／または分取りロマトグラフィ一
方法（イオン交換、イオン排除および／またはモレキュ
ラーン−ブ効果）により工業用り一ロイシンが得られる
。
このようにして得られた工業用り一ロイシンは、塩化ナ
トリウム、硫酸ナトリウム、塩化アンモニウムまたは硫
酸アンモニウムのような無機塩のほかに、なお他のアミ
ノ酸、殊にＬ−イソロイシンをも含有する。薬品質のＬ
−イソ口゛ イシンの製造のためにはこれらの不純物を
除去しなげればならず、その場合殊にＬ−インロイシン
の分離は困難であるが、その理由はイソロイシンはロイ
シンと同じ分子式ｃ６Ｈ０３Ｎｏ２を有し、この双方の
アミノ酸は脂肪族側鎖Ｒの構造によって異なるからであ
る： ロイシン （６） この非常に類似する構造特徴によって、これらのアミノ
酸は物理的および化学的挙動において非常に類似の性質
を示す。これは、市販のＬ−ロイシンがしばしばかなり
の量のＬ−イソロイシンを他のアミノ酸（たとえばＬ−
バリン、しばしばＬ−メチオニンも）とともに含有する
ことの根拠である。この事情をリチャード Ｊ。
トリウム、硫酸ナトリウム、塩化アンモニウムまたは硫
酸アンモニウムのような無機塩のほかに、なお他のアミ
ノ酸、殊にＬ−イソロイシンをも含有する。薬品質のＬ
−イソ口゛ イシンの製造のためにはこれらの不純物を
除去しなげればならず、その場合殊にＬ−インロイシン
の分離は困難であるが、その理由はイソロイシンはロイ
シンと同じ分子式ｃ６Ｈ０３Ｎｏ２を有し、この双方の
アミノ酸は脂肪族側鎖Ｒの構造によって異なるからであ
る： ロイシン （６） この非常に類似する構造特徴によって、これらのアミノ
酸は物理的および化学的挙動において非常に類似の性質
を示す。これは、市販のＬ−ロイシンがしばしばかなり
の量のＬ−イソロイシンを他のアミノ酸（たとえばＬ−
バリン、しばしばＬ−メチオニンも）とともに含有する
ことの根拠である。この事情をリチャード Ｊ。
ブロック（Ｒｉｃｈａｒｄ Ｊ、 Ｂｌｏｃｋ ） （
”Ａｒｃｈ、 Ｂｉ。
”Ａｒｃｈ、 Ｂｉ。
ｃｈｓｍ”、第１１巻５０１号（１９４６年）第５１２
ページ〕も指摘している。
ページ〕も指摘している。
工業用り一ロインンの困難な後精製は、既に銅錯体を経
て実施されている。類似の方法で、アミノ酸のコバルト
錯体もアルコールでの抽出により分離された。しかし、
これらの方法では金属の回収およびＬ−ロイシンをさら
に精製する問題が生じる。
て実施されている。類似の方法で、アミノ酸のコバルト
錯体もアルコールでの抽出により分離された。しかし、
これらの方法では金属の回収およびＬ−ロイシンをさら
に精製する問題が生じる。
他の研究者により、芳香族スルホン酸を用いてロイシン
を沈殿させる事が記載されている。
を沈殿させる事が記載されている。
（４）
それで、Ｌ−ロイシンを沈殿させるのに２−ブロムトル
オ−ルー５−スルホン酸マたはナフタリン−２−スルホ
ン酸を使用する事が提案された。ペンゾールスルホン酸
ならびにｐ−）ルオールスルホン酸も、工業用り一ロイ
シンから出発するＬ−ロイシンの製造に使用された。こ
れらの方法では沈殿物は数多くの再結晶により精製しな
ければならず、しばしば強毒性沈殿剤の分離が特別な問
題を生じる。さらに、酸性の蛋白質加水分解物からのＬ
−ロイシン富有画分は、特定のＰＨ価で水の添加により
約１．５％のＬ−イソロイシン濃度に調節し、メチオニ
ン含量の測定後、過酸化水素の添加によりメチオニンを
酸化する事により後精製された。これは、活性炭清澄化
、１．［３〜１．５にＰＨ価調節、冷却、粗製Ｌ−ロイ
シンの分離と続いた。この粗製り一ロイは シン廠新たにＰＨ［１，５で溶解し、ＰＩｉｌ、Ｏ〜２
．０で沈殿させる事によりさらに精製された。この方法
を、Ｌ−ロイシンの所望の純度に達するまで繰り返した
。ヨーロッパ特許第１４８６７号明細書に記載されてい
るこの方法では、非常に希釈して作業しなげればならず
、さらに方法は、工業的規模での適用がほとんど問題に
ならないような多工程法である。
オ−ルー５−スルホン酸マたはナフタリン−２−スルホ
ン酸を使用する事が提案された。ペンゾールスルホン酸
ならびにｐ−）ルオールスルホン酸も、工業用り一ロイ
シンから出発するＬ−ロイシンの製造に使用された。こ
れらの方法では沈殿物は数多くの再結晶により精製しな
ければならず、しばしば強毒性沈殿剤の分離が特別な問
題を生じる。さらに、酸性の蛋白質加水分解物からのＬ
−ロイシン富有画分は、特定のＰＨ価で水の添加により
約１．５％のＬ−イソロイシン濃度に調節し、メチオニ
ン含量の測定後、過酸化水素の添加によりメチオニンを
酸化する事により後精製された。これは、活性炭清澄化
、１．［３〜１．５にＰＨ価調節、冷却、粗製Ｌ−ロイ
シンの分離と続いた。この粗製り一ロイは シン廠新たにＰＨ［１，５で溶解し、ＰＩｉｌ、Ｏ〜２
．０で沈殿させる事によりさらに精製された。この方法
を、Ｌ−ロイシンの所望の純度に達するまで繰り返した
。ヨーロッパ特許第１４８６７号明細書に記載されてい
るこの方法では、非常に希釈して作業しなげればならず
、さらに方法は、工業的規模での適用がほとんど問題に
ならないような多工程法である。
さらに、薬品質の純粋なＬ−ロイシンを得るための工業
用り一ロイシンの公知後精製方法は決定的な欠点を有す
る：Ｌ−ロイシンの鏡像異性体の純度については何も述
べられていない。
用り一ロイシンの公知後精製方法は決定的な欠点を有す
る：Ｌ−ロイシンの鏡像異性体の純度については何も述
べられていない。
しかしロイシンは、通常の酸性蛋白質加水分解条件下で
最も早くラセミ化するアミノ酸に属する（ ” Ｌｉｅ
ｂｉｇｓ Ａｎｎ、 Ｃｈｅｍ”、１９８１巻、第６５
４〜６６５ページ〕。
最も早くラセミ化するアミノ酸に属する（ ” Ｌｉｅ
ｂｉｇｓ Ａｎｎ、 Ｃｈｅｍ”、１９８１巻、第６５
４〜６６５ページ〕。
発明が解決しようとする問題点
り一ロイシンおよびＬ−ロイシンの異なる生物学的作用
は公知であり、従って工業用り一ロイシンからＤ−ロイ
シンおよび他の不純物を同時に分離できる方法が非常に
望ましい。
は公知であり、従って工業用り一ロイシンからＤ−ロイ
シンおよび他の不純物を同時に分離できる方法が非常に
望ましい。
本発明の課題は、工業用り一ロイシンから、公知方法の
欠点をさけて、Ｄ−ロイシンおよび他の不純物を同時に
分離して、純粋なＬ−ロイシンを得る事のできる方法を
提供する事である。
欠点をさけて、Ｄ−ロイシンおよび他の不純物を同時に
分離して、純粋なＬ−ロイシンを得る事のできる方法を
提供する事である。
問題点を解決するための手段
ところで本発明による方法は、
ａ）アミノ酸混合物を自体公知の方法でアセチル化し、
ｂ）アセチル化生成物の粗製混合物から、鉱酸で酸性に
する事によってＮ−アセチル−Ｌ −ロイシンに富むＮ
−アセチルアミノ酸混合物を沈殿させ、 Ｃ）とのＮ−アセチル−し−ロイシンに富む混合物をＮ
−アセチル−Ｌ−ロイシン０．１〜１．５モル／ｌの濃
度を有する水溶液で６〜８のｐＨ，１０〜４０°Ｃの温
度でエフェクターの存在においてＬ−アミノ酸アシラー
ゼによるケン化を、使用されたＮ−アセチル−し−ロイ
シンの６０〜９５％が遊離アミノ酸にケン化されるまで
実施し、 ｄ）粗製ケン化混合物からＬ−ロイシンを単離する事を
特徴とする。
する事によってＮ−アセチル−Ｌ −ロイシンに富むＮ
−アセチルアミノ酸混合物を沈殿させ、 Ｃ）とのＮ−アセチル−し−ロイシンに富む混合物をＮ
−アセチル−Ｌ−ロイシン０．１〜１．５モル／ｌの濃
度を有する水溶液で６〜８のｐＨ，１０〜４０°Ｃの温
度でエフェクターの存在においてＬ−アミノ酸アシラー
ゼによるケン化を、使用されたＮ−アセチル−し−ロイ
シンの６０〜９５％が遊離アミノ酸にケン化されるまで
実施し、 ｄ）粗製ケン化混合物からＬ−ロイシンを単離する事を
特徴とする。
本発明による方法において使用すべきアミノ（７）
酸混合物は一般に、蛋白質加水分解物からの既にＬ−ロ
イシンに富む両分の形の工業用り一ロインンである。乾
燥物質に対してＬ−ロイシン４５〜９０重量％を含有す
るアミノ酸混合物が特に適当である。特に適当な工業用
■、−ロイシンは乾固加水分解物の分別からのもので、
Ｌ−ロイシン７０〜８０重量％、Ｌ−インロイシン５〜
１５重量％、他のアミノ酸最高２５重量％を含有する。
イシンに富む両分の形の工業用り一ロインンである。乾
燥物質に対してＬ−ロイシン４５〜９０重量％を含有す
るアミノ酸混合物が特に適当である。特に適当な工業用
■、−ロイシンは乾固加水分解物の分別からのもので、
Ｌ−ロイシン７０〜８０重量％、Ｌ−インロイシン５〜
１５重量％、他のアミノ酸最高２５重量％を含有する。
アミノ酸混合物をまず自体公知の方法でアセチル化する
。アセチル化は塩化アセチルまたは無水酢酸を用いるか
または西ドイツ国特許出願公開第２７４１０８１号明細
書から公知の方法によりケテンを用いて実施する事もで
きる。
。アセチル化は塩化アセチルまたは無水酢酸を用いるか
または西ドイツ国特許出願公開第２７４１０８１号明細
書から公知の方法によりケテンを用いて実施する事もで
きる。
引続き、アセチル化生成物の粗製混合物から鉱酸、たと
えば塩酸または硫酸で酸性にする事によりＮ−アセチル
アミノ酸の混合物を沈殿させる。この場合望ましくは０
．５〜２のＰＨに酸性にする。この場合、既にＮ−アセ
チル−Ｌ−ロイシンの富化が生じる。生じうろ、Ｎ−ア
セチ（８） ／１／ −Ｌ−ロイシンおよびＮ−アセチル−Ｌ−（ン
ロイシン以外のＮ−アセチルアミノ酸の含量は減少する
。引続き、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパツ
ール、インプロピルアルコール、ｎ−ブタノール、イン
ブチルアルコールまたはｔｅｆｆｔ、ブチルアルコール
のような１〜４の炭素原子を有する水と混合可能な脂肪
族アルコール、または水とこのようなアルコールとの混
合物からの再結晶により、他のＮ−アセチルアミノ酸の
含量は通常乾燥物質に対して４重量％よりも少なく、多
くの場合１重量％より少ない値に減少させる事ができる
。
えば塩酸または硫酸で酸性にする事によりＮ−アセチル
アミノ酸の混合物を沈殿させる。この場合望ましくは０
．５〜２のＰＨに酸性にする。この場合、既にＮ−アセ
チル−Ｌ−ロイシンの富化が生じる。生じうろ、Ｎ−ア
セチ（８） ／１／ −Ｌ−ロイシンおよびＮ−アセチル−Ｌ−（ン
ロイシン以外のＮ−アセチルアミノ酸の含量は減少する
。引続き、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパツ
ール、インプロピルアルコール、ｎ−ブタノール、イン
ブチルアルコールまたはｔｅｆｆｔ、ブチルアルコール
のような１〜４の炭素原子を有する水と混合可能な脂肪
族アルコール、または水とこのようなアルコールとの混
合物からの再結晶により、他のＮ−アセチルアミノ酸の
含量は通常乾燥物質に対して４重量％よりも少なく、多
くの場合１重量％より少ない値に減少させる事ができる
。
Ｎ−アセチル−Ｌ−ロイシンに富む混合物（場合による
再結晶後わずかにＮ−アセチル−Ｌ−インロイシンで不
純化にされているにすぎない）に、Ｌ−アミノ酸アシラ
ーゼによるケン化を行なう。６〜８の範囲へのＰＨの調
節は、たとえばアンモニア、しかし有利にはカ性ソーダ
溶液により行なう事が出来る。エフェクターとしては通
常Ｌ−アミノ酸アシラーゼを用いるＮ−アセチル−ＤＬ
−α−アミノカルボン酸のラセミ体分割の際に添加され
るもの、たとえばイオン・Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｍｎ２
”、Ｍｇ２＋、Ｚｎ”＋および特にＣｏ２＋が使用され
る。これらは望ましくは、Ｉ Ｘ １０−５〜Ｉ Ｘ
１０−１モル／ｌの濃度で、およびたとえば相当する塩
化物の形で添加される。多くの場合、反応混合物に付加
的に少量の殺菌剤、たとえばｐ−ヒドロキシ安息香酸−
ｎ−プロピルエステルを添加するのが有利である。
再結晶後わずかにＮ−アセチル−Ｌ−インロイシンで不
純化にされているにすぎない）に、Ｌ−アミノ酸アシラ
ーゼによるケン化を行なう。６〜８の範囲へのＰＨの調
節は、たとえばアンモニア、しかし有利にはカ性ソーダ
溶液により行なう事が出来る。エフェクターとしては通
常Ｌ−アミノ酸アシラーゼを用いるＮ−アセチル−ＤＬ
−α−アミノカルボン酸のラセミ体分割の際に添加され
るもの、たとえばイオン・Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｍｎ２
”、Ｍｇ２＋、Ｚｎ”＋および特にＣｏ２＋が使用され
る。これらは望ましくは、Ｉ Ｘ １０−５〜Ｉ Ｘ
１０−１モル／ｌの濃度で、およびたとえば相当する塩
化物の形で添加される。多くの場合、反応混合物に付加
的に少量の殺菌剤、たとえばｐ−ヒドロキシ安息香酸−
ｎ−プロピルエステルを添加するのが有利である。
Ｌ−アミノ酸アシラーゼとしては有利には腎アシラーゼ
が使用される。これは市販の天然の形で適用するかまた
は、橋かけされたアガロース、テキストランゲル、セル
ロース、ヒドロキシエチルセルロースまたはアクリルア
ミドと橋かけコモノマーとの共重合体のような有機担持
物質上かまたは種々の多孔性の酸化物型材料または殊に
ガラス小球のような無機担持物質上の固定層として適用
する事ができる。
が使用される。これは市販の天然の形で適用するかまた
は、橋かけされたアガロース、テキストランゲル、セル
ロース、ヒドロキシエチルセルロースまたはアクリルア
ミドと橋かけコモノマーとの共重合体のような有機担持
物質上かまたは種々の多孔性の酸化物型材料または殊に
ガラス小球のような無機担持物質上の固定層として適用
する事ができる。
Ｌ−アミノ酸アシラーゼを比較的大量に使用する場合、
ケン化に必要な反応時間を短縮できる。より長い反応時
間を甘受すれば、Ｌ−アミノ酸アシラーゼの使用量を著
しく減少させる事ができる。従って、反応時間とＬ−ア
ミノ酸アシラーゼの使用量との間には、顕著な相互従属
関係が生じる。
ケン化に必要な反応時間を短縮できる。より長い反応時
間を甘受すれば、Ｌ−アミノ酸アシラーゼの使用量を著
しく減少させる事ができる。従って、反応時間とＬ−ア
ミノ酸アシラーゼの使用量との間には、顕著な相互従属
関係が生じる。
ケン化、つまり反応工程（Ｃ１は、始めに存在していた
Ｎ−アセチル−Ｌ−ロイシンの６０〜９５％、特に４５
〜８５％、殊に５０〜８０％が遊離■、−ロイシンにケ
ン化されたときに中断する。ケン化反応は、たとえば高
圧液体クロマトグラフィーを用いるかまたはアミノ酸分
析器を用いて分析により追跡する。
Ｎ−アセチル−Ｌ−ロイシンの６０〜９５％、特に４５
〜８５％、殊に５０〜８０％が遊離■、−ロイシンにケ
ン化されたときに中断する。ケン化反応は、たとえば高
圧液体クロマトグラフィーを用いるかまたはアミノ酸分
析器を用いて分析により追跡する。
ケン化反応は非連続的かまたは連続的に実施する事がで
きる。非連続的反応実施のために、かくはん釜または循
環系を有するタンク中、で作業する。連続的な反応実施
はたとえば酵素−膜反応器を用いて実施する事ができる
。
きる。非連続的反応実施のために、かくはん釜または循
環系を有するタンク中、で作業する。連続的な反応実施
はたとえば酵素−膜反応器を用いて実施する事ができる
。
ケン化反応に使用される混合物がたとえば１゜０〜１．
５モル／ｌの比較的高いＮ−アセチル（１１） −Ｌ−ロイシン濃度を有する場合には、既に短時間後、
純粋なＬ−ロイシンから成る無色の沈殿物が晶出しはじ
める。混合物をより低い濃度で使用する場合には、粗製
ケン化混合物を穏和な条件下で濃縮するのが有利であり
、この場合にも同様に純粋なＬ−ロイシンが晶出する。
５モル／ｌの比較的高いＮ−アセチル（１１） −Ｌ−ロイシン濃度を有する場合には、既に短時間後、
純粋なＬ−ロイシンから成る無色の沈殿物が晶出しはじ
める。混合物をより低い濃度で使用する場合には、粗製
ケン化混合物を穏和な条件下で濃縮するのが有利であり
、この場合にも同様に純粋なＬ−ロイシンが晶出する。
いずれの場合にも、純粋なＬ−ロイシンを、場合により
あらかじめたまたま使用され、固定されたＬ−アミノ酸
アシラーゼを分離するために分別した後、濾過または遠
心分離により単離する。
あらかじめたまたま使用され、固定されたＬ−アミノ酸
アシラーゼを分離するために分別した後、濾過または遠
心分離により単離する。
天然のＬ−アミノ酸アシラーゼによるケン化を行なう場
合には、該アミノ酸アシラーゼを、Ｌ−ロイシンの分離
後、たとえば中空繊維膜での限外濾過によって回収し、
新たに使用する事ができる。
合には、該アミノ酸アシラーゼを、Ｌ−ロイシンの分離
後、たとえば中空繊維膜での限外濾過によって回収し、
新たに使用する事ができる。
場合によっては、Ｌ−ロイシンを多くの画分で単離する
、即ち最初の両分の分離後ケン化を続け、Ｌ−ロイシン
の他の両分を得るのが有利である。場合により望ましい
、分離されたＬ−ロイシンの個々の両分または全量をさ
らに精製（１２） するのは、水からの再結晶により行なう事ができる。
、即ち最初の両分の分離後ケン化を続け、Ｌ−ロイシン
の他の両分を得るのが有利である。場合により望ましい
、分離されたＬ−ロイシンの個々の両分または全量をさ
らに精製（１２） するのは、水からの再結晶により行なう事ができる。
Ｌ−ロイシンおよび場合によりＬ−アミノ酸アシラーゼ
の分離後に残留する溶液中では、Ｎ−アセチル−Ｌ−イ
ンロイシンはかなり富化されている。この溶液は、望ま
しくは高圧液体クロマトグラフィーによるかまたはアミ
ノ酸分析器を用いてその組成を測定した後、アセチル化
工程に戻すかまたはＬ−インロイシンに後処理する事が
できる。
の分離後に残留する溶液中では、Ｎ−アセチル−Ｌ−イ
ンロイシンはかなり富化されている。この溶液は、望ま
しくは高圧液体クロマトグラフィーによるかまたはアミ
ノ酸分析器を用いてその組成を測定した後、アセチル化
工程に戻すかまたはＬ−インロイシンに後処理する事が
できる。
実施例
本発明を次側により詳述する。これらの例には次の事が
いえる： Ｌ−アミノ酸アシラーゼの活性は単位（Ｕ）で記載する
。１Ｕは、ｐＨ７，０および２５°Ｃで毎時Ｎ−アセチ
ル−Ｌ−メチオニン１μＭｏ１ヲケン化する。
いえる： Ｌ−アミノ酸アシラーゼの活性は単位（Ｕ）で記載する
。１Ｕは、ｐＨ７，０および２５°Ｃで毎時Ｎ−アセチ
ル−Ｌ−メチオニン１μＭｏ１ヲケン化する。
Ｌ−ロイシンにつき記載された旋光度〔α〕Ｄは６Ｎ塩
酸中ｃ＝４で測定する。薬品質の純粋なＬ−ロイシンの
旋光度は、この条件下で米国薬局方ＸＸによれば 〔α）、 −−１−１４，９°〜−１−１７，３０であ
る。
酸中ｃ＝４で測定する。薬品質の純粋なＬ−ロイシンの
旋光度は、この条件下で米国薬局方ＸＸによれば 〔α）、 −−１−１４，９°〜−１−１７，３０であ
る。
使用されたアミノ酸混合物の組成の測定は、アミノ酸分
析器を用いて行なわれる。
析器を用いて行なわれる。
酵素によるケン化のために使用された、Ｎ−アセチルア
ミノ酸混合物の組成の測定は、旋光度により行なわれる
。
ミノ酸混合物の組成の測定は、旋光度により行なわれる
。
パーセント表示は別記しないかぎり、重量％を表わす。
例 １
大豆加水分解の副生成物として生じる、次の相対的なア
ミノ酸組成の工業用ロイシンをアセチル化した： １１ｅ １２．４％ Ｌｅｕ ８３．２％ ＶａｌＯ，９％ Ｍｅｔ ２．４％ Ａｌａ ０．５％ Ｓｅｒ Ｏ−２％ 他のアミノ酸 全部で０．４％ そのためにこの混合物５２５Ｉを２ Ｎ力性ソーダ溶液
２１に溶解し、０°Ｃで１時間内に同時に無水酢酸４５
０ ｒｎｌおよび５Ｎ力性ン−ダ溶液８５０ｍ１を満願
１〜、その場合ＰＨ価がＰＨ１０〜１２の範囲にあるよ
うに注意した。添加終了後、さらに１時間＋５°Ｃでが
くはんした。褐色の溶液をｐＨ１に達するまで濃塩酸と
かくはんした。
ミノ酸組成の工業用ロイシンをアセチル化した： １１ｅ １２．４％ Ｌｅｕ ８３．２％ ＶａｌＯ，９％ Ｍｅｔ ２．４％ Ａｌａ ０．５％ Ｓｅｒ Ｏ−２％ 他のアミノ酸 全部で０．４％ そのためにこの混合物５２５Ｉを２ Ｎ力性ソーダ溶液
２１に溶解し、０°Ｃで１時間内に同時に無水酢酸４５
０ ｒｎｌおよび５Ｎ力性ン−ダ溶液８５０ｍ１を満願
１〜、その場合ＰＨ価がＰＨ１０〜１２の範囲にあるよ
うに注意した。添加終了後、さらに１時間＋５°Ｃでが
くはんした。褐色の溶液をｐＨ１に達するまで濃塩酸と
かくはんした。
吸引濾過し、水で洗浄し、乾燥する事によって、固形物
５８０ｇを得た。この粗生成物を含水メタノールから再
結晶し、その際Ｎ−アセチルーＬ−ロイシン９０％およ
びＮ−アセチル−Ｌ−インロイシン１０％から成る無色
の混合物４３５Ｉが生じた。この混合物８６．６ｇを０
．５ Ｎ力性ソーダ溶液１１に溶解し、ＰＩ３価を７．
４に調節した。触媒として豚腎臓からの腎アシラーゼ（
１２００Ｕ／ｍ！？）４０７’９およびＣｏＣｌ２ Ｘ
６Ｈ２０６θｍ？を添加した。澄明な溶液を３９℃に
加熱した。２７時間後に、最初の結晶が形成した。
５８０ｇを得た。この粗生成物を含水メタノールから再
結晶し、その際Ｎ−アセチルーＬ−ロイシン９０％およ
びＮ−アセチル−Ｌ−インロイシン１０％から成る無色
の混合物４３５Ｉが生じた。この混合物８６．６ｇを０
．５ Ｎ力性ソーダ溶液１１に溶解し、ＰＩ３価を７．
４に調節した。触媒として豚腎臓からの腎アシラーゼ（
１２００Ｕ／ｍ！？）４０７’９およびＣｏＣｌ２ Ｘ
６Ｈ２０６θｍ？を添加した。澄明な溶液を３９℃に
加熱した。２７時間後に、最初の結晶が形成した。
（１５）
１０時間後２０°Ｃに冷却し、かさ張った沈殿物を吸引
濾過し、水で洗浄した。
濾過し、水で洗浄した。
乾燥した後、純粋なＬ−ロイシン３５．６．９が生じた
。旋光度〔α〕つば＋１５．６°であった。
。旋光度〔α〕つば＋１５．６°であった。
濾液を２０°Ｃで２４時間放置し、その際新たに結晶が
沈殿した。吸引濾過し、水で洗浄しかつ乾燥した後、旋
光度〔α〕っ−＋１６゜２°を有する純粋なＬ−ロイシ
ンさらに９．６ｇが生じた。
沈殿した。吸引濾過し、水で洗浄しかつ乾燥した後、旋
光度〔α〕っ−＋１６゜２°を有する純粋なＬ−ロイシ
ンさらに９．６ｇが生じた。
例 ２
蛋白質加水分解物のクロマトグラフィー分離から得られ
た、中性アミノ酸の両分は次の組成を有していた； Ｌｅｕ ４９．８％ ｌ１ｅ３６−１％ Ｖａｄ ３．５％ Ｍｅｔ ３．５％ Ｔｙｒ ２．５％ Ａｄａ ２−１％ Ｐｈｅ １．６％ Ｇｌｙ Ｏ，９％ （１６） この混合物５２５ｇを２Ｎ力性ソーダ溶液２１に溶解し
、０°Ｃに冷却した。１時間内に、無水酢酸４１０ｍ１
および同時に５Ｎ力性ン−ダ溶液８５０ｍ１をかくはん
混入し、その際ＰＨ価がＰＨ１０〜１２の範囲内にあり
、温度が＋５°Ｃを越えないように注意した。添加終了
後、５°Ｃでさらに１時間かくはんした。褐色溶液を、
ＰＨが１．５に達するまで濃塩酸とかくはんした。吸引
濃過し、水で洗浄し、乾燥する事によって、弱褐色の粉
末としてアセチル化合物５６０ｇを得た。この粗生成物
をｎ−ブタノールから再結晶し、その際Ｎ−アセチルー
Ｌ−ロイシン６５％およびＮ−アセチル−Ｌ−インロイ
シン６５％から成る無色の混合物６３５Ｉが生じた。
た、中性アミノ酸の両分は次の組成を有していた； Ｌｅｕ ４９．８％ ｌ１ｅ３６−１％ Ｖａｄ ３．５％ Ｍｅｔ ３．５％ Ｔｙｒ ２．５％ Ａｄａ ２−１％ Ｐｈｅ １．６％ Ｇｌｙ Ｏ，９％ （１６） この混合物５２５ｇを２Ｎ力性ソーダ溶液２１に溶解し
、０°Ｃに冷却した。１時間内に、無水酢酸４１０ｍ１
および同時に５Ｎ力性ン−ダ溶液８５０ｍ１をかくはん
混入し、その際ＰＨ価がＰＨ１０〜１２の範囲内にあり
、温度が＋５°Ｃを越えないように注意した。添加終了
後、５°Ｃでさらに１時間かくはんした。褐色溶液を、
ＰＨが１．５に達するまで濃塩酸とかくはんした。吸引
濃過し、水で洗浄し、乾燥する事によって、弱褐色の粉
末としてアセチル化合物５６０ｇを得た。この粗生成物
をｎ−ブタノールから再結晶し、その際Ｎ−アセチルー
Ｌ−ロイシン６５％およびＮ−アセチル−Ｌ−インロイ
シン６５％から成る無色の混合物６３５Ｉが生じた。
この混合物８６．６ｇを水５００ｍＪに懸濁させ、５０
％の力性ソーダ溶液と共に、ｐＨ７，６の澄明溶液が生
じるまでかくはんした。これに、ｃＯｃ１２ｘ ６ Ｈ
２Ｏ５０ｍ９および２００ｏＵ／ｍ９の活性を有する豚
腎臓からのアミノアシラーゼ５■ヲ加えた。溶液は６８
°Ｃで６０分間放置した。その後、生じた懸濁液を２０
００に冷却し、濾過した。
％の力性ソーダ溶液と共に、ｐＨ７，６の澄明溶液が生
じるまでかくはんした。これに、ｃＯｃ１２ｘ ６ Ｈ
２Ｏ５０ｍ９および２００ｏＵ／ｍ９の活性を有する豚
腎臓からのアミノアシラーゼ５■ヲ加えた。溶液は６８
°Ｃで６０分間放置した。その後、生じた懸濁液を２０
００に冷却し、濾過した。
５
〔α〕０−→−１５．７°Ｃの旋光度を有する純粋なＬ
−ロイシン２４．６ ｇが生じた。
−ロイシン２４．６ ｇが生じた。
発明の効果
本発明によれば、工業用り一ロイシンがらＤ−ロイシン
および他の不純物を同時に分離して、純粋なＬ−ロイシ
ンを得る事ができる。
および他の不純物を同時に分離して、純粋なＬ−ロイシ
ンを得る事ができる。
（１８）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、 それぞれ乾燥物質に対して、Ｌ−ロイシン最低４
５重量％、Ｌ−イソロイシン最高４０重量％および他の
アミノ酸最高２５重量％を含有するアミノ酸混合物から
純粋なＬ−ロイシンを得る方法において、 ａ）アミノ酸混合物を自体公知の方法でアセチル化し、 ｂ）アセチル化生成物の粗製混合物から、鉱酸で酸性に
する事によってＮ−アセチル−Ｌ−ロイシンで富化され
たＮ−アセチルアミノ酸の混合物を沈殿させ、 Ｃ）このＮ−アセチル−Ｌ−ロイシンで富化された混合
物をＮ−アセチル−Ｌ−ロイシン０．１〜１．５モル／
ｌの濃度を有する水溶液で６〜８のＰＨ％１０〜４０°
Ｃの温度で、エフェクターの存在においてＬ−アミノ酸
アシラーゼによるケン化を、使用された１ｑ−アセチル
ーＬ−ロイシンの３０〜９５％が遊離アミノ酸にケン化
されるまで実施し、ｄ）粗製ケン化混合物からＬ−ロイ
シンを単離する事を特徴とする純粋なＬ−ロイシンの製
造法。 ２ 工程（ｂ）において沈殿したＮ−アセチルアミノ酸
の混合物を、工程（Ｃ）の実施前に、水、１〜４の炭素
原子を有する水と混合可能な脂肪族アルコールまたは水
とこのようなアルコールの混合物から再結晶する、特許
請求の範囲第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3318932A DE3318932C1 (de) | 1983-05-25 | 1983-05-25 | Verfahren zur Gewinnung von reinem L-Leucin |
| DE3318932.3 | 1983-05-25 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6023354A true JPS6023354A (ja) | 1985-02-05 |
| JPS6231915B2 JPS6231915B2 (ja) | 1987-07-10 |
Family
ID=6199825
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59101881A Granted JPS6023354A (ja) | 1983-05-25 | 1984-05-22 | 純粋なｌ−ロイシンの製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4562152A (ja) |
| EP (1) | EP0126887B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6023354A (ja) |
| AT (1) | ATE20231T1 (ja) |
| DE (1) | DE3318932C1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07110691A (ja) * | 1993-10-13 | 1995-04-25 | Yamaha Corp | 楽音合成装置 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63170343A (ja) * | 1987-01-07 | 1988-07-14 | Ajinomoto Co Inc | ロイシンの分離方法 |
| US4800162A (en) * | 1987-04-01 | 1989-01-24 | Sepracor, Inc. | Method for resolution of steroisomers in multiphase and extractive membrane reactors |
| DE19634147A1 (de) * | 1996-08-23 | 1998-02-26 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von 1-Acetyl-4-piperidonen |
| CN104211609B (zh) * | 2014-07-31 | 2016-08-17 | 新疆阜丰生物科技有限公司 | 一种高纯度亮氨酸的提取方法 |
| CN106831465A (zh) * | 2016-12-28 | 2017-06-13 | 安徽省虹升生物股份有限公司 | 一种由骨胶中水解提炼β‑丙氨酸的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2511867A (en) * | 1949-12-19 | 1950-06-20 | Method fob separating enantiomers | |
| JPS5037277B2 (ja) * | 1972-08-31 | 1975-12-01 | ||
| DE2962558D1 (en) * | 1979-07-19 | 1982-06-03 | Maggi Ag | Process for the separation of leucine, isoleucine and valine |
| US4259441A (en) * | 1979-09-17 | 1981-03-31 | Ethyl Corporation | Process for resolving D, L-leucine |
| CH641149A5 (fr) * | 1979-10-04 | 1984-02-15 | Maggi Ag | Procede de purification de l'isoleucine. |
-
1983
- 1983-05-25 DE DE3318932A patent/DE3318932C1/de not_active Expired
-
1984
- 1984-03-27 EP EP84103330A patent/EP0126887B1/de not_active Expired
- 1984-03-27 AT AT84103330T patent/ATE20231T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-05-22 US US06/612,802 patent/US4562152A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-05-22 JP JP59101881A patent/JPS6023354A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH07110691A (ja) * | 1993-10-13 | 1995-04-25 | Yamaha Corp | 楽音合成装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3318932C1 (de) | 1984-06-07 |
| EP0126887A3 (en) | 1985-05-15 |
| EP0126887A2 (de) | 1984-12-05 |
| ATE20231T1 (de) | 1986-06-15 |
| EP0126887B1 (de) | 1986-06-04 |
| US4562152A (en) | 1985-12-31 |
| JPS6231915B2 (ja) | 1987-07-10 |
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