JPS5840478B2 - 多糖類およびその製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な多糖類に関するものである。

多糖類はその起源により、植物起源のもの、動物起源の
ものおよび微生物起源のものとに分類される。

植物起源の多糖類としては、セルロース、ペクチン、ア
ミロース、カラゲナン、寒天などが、動物起源の多糖類
としては、ヘパリン、コンドロイチン硫酸などが挙げら
れる。

ある種の微生物が多糖類を産生ずることはよく知られて
いることである。

これらの多糖類のうち、デキストラン、ザンサンガム、
プルラン、カードラン等はすでに産業上利用され、ある
いはされつつある。

産業上利用され、あるいはされつつあるこれらの微生物
起源の多糖類の主たる構成糖はいずれもグルコースであ
る。

一方、古くからオＵ用されてきた、より高等な植物を起
源とするアラビアゴム、タラガントガム、ガラティガム
、アラビアガラクタンなどは主たる構成糖としてガラク
トースを含んでいる。

これらの多糖類には上述した微生物起源の多糖類で置き
換えることのできない用途もある。

本発明は構成糖としてアロースを含む新規な多糖類を提
供するものである。

アロースはアルドヘキソースの一種であるが、これまで
天然には存在しないとされてきたものである。

本発明の多糖類は、また構成糖の最多成分としてガラク
トースを含むものである。

アロースとガラクトースの含有量の合計はモル・パーセ
ントで少なくとも５０％である。

本発明は、更にシュードモナス属に属し、構成糖として
アロースを含む多糖類を産生ずることのできる細菌を栄
養培地に培養して、培地中にこの多糖類を蓄積させ、こ
れを分離採取することを特徴とする多糖類の製造法を提
供するものである。

本発明の多糖類の構造および理化学的性質を示すと以下
の通りである。

（１）構成糖およびその構成比 ただしマンノースとグルクロン酸との結合が比較的加水
分解され難いので、分析方法によってはマンノースの値
がより低値となることがある。

（２）元素分析 一般式Ｃｎ Ｈ２ｎ Ｏｎから計算される値に近い値を
与える。

（３）融点 明確な融点を示さない。

約２１０〜２２０°Ｃ以上で分解する。

（４）赤外吸収スペクトル 以下の様な吸収を示す。

３４００ｃｒＩｌ ’付近二〇−Ｈ伸縮 ２８９０ｃｍ−１付近：Ｃ−Ｈ伸縮 １６２０ｃｒｒＬ−１付近：カルボン酸陰イオン伸縮８
８０ｃｍ ’付近：β−グルコシド結合配向に起因 （５）紫外吸収スペクトル 明確な特徴的吸収を示さない。

（６） １３Ｃ核磁気共鳴吸収スペクトルアセチル基
のメチルシグナルおよびカルボニル吸収領域でのカルボ
キシルシグナルが観測された。

しかし同領域でのアセチル基のカルボニルシグナルは確
認されなかった。

従って水酸基の＝部はアセチル化されているがその割合
は非常に小さいことが推定される。

（７）溶剤に対する溶解度 水に可溶で、メタノール、エタノール、エーテル、アセ
トン等に不溶である。

α２）比旋光度 〔α〕２Ｄｉ：約２Ｄｉ：約いし約＋３５°（ｃ＝１、
水） ０３）水溶液の性状 無色透明で粘性を有する。

０４）カルシウムイオンに対する挙動 水溶液中、アルカリ性で、カルシウムイオンの存在によ
り、凝集しゲル化する。

本発明の多糖類は、デキストラン、ザンサンプム、植物
性ガム質などと同様、例えば増粘剤、惑定剤、乳化剤、
品質改良剤等として、広く食品、医薬品、化粧品などの
製造に用いることができるまたフィルム形成能があるの
で、生分解性のフィルム成形品その他の成形品原料とし
て使用できる更にまた、水溶液中カルシウムイオンの存
在て凝集、ゲル化することから凝集助剤としても用りる
ことかできる。

本発明の多糖類は、シュードモナス属に属し、構成糖と
してアロースを含む多糖類を産生ずることのできる微生
物を栄養培地に培養して、培地ヰにこの多糖類を蓄積さ
せ、これを分離採取することにより製造することができ
る。

本発明の方法で用いることのできる微生物の一つは、本
発明者らによって土壌中より分離されたシュードモナス
°ビスコゲナ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｖｉ ｓｃｏｇ
ｅｎａ １微工研菌寄第３８１１号）であッテその菌学
的性質は特開昭５３−１１８５８５号公報に記載されて
いる様に、下記の通りである。

囚 顕微鏡的形態 肉汁寒天培地で３０℃、６〜２４時間生育させた場合 １、細胞形態 桿菌 ２、細胞の大きさ １．０Ｘ０．７（パ程度３、多形性
単画または双菌 ４、運動性 極鞭毛 ５、胞子 なし ６ グラム染色性 陰性 ７、抗酸性 なし く均 培養的性質 ■、肉汁寒天平板培養（３０℃、２日間培養）（イ）コ
ロニー形成の遅速 普通 （ｏ）コロニーの形 円形、直径約３．５ｍｍ←ラ コ
ロニー表面の形状 平滑 に）コロニーの隆起状態 半レンズ状 コロニーの周縁 金縁 コロニーの内容 均等 コロニニの色調 淡黄色 コロニーの透明度 不透明 コロニーの光沢 混光 可溶性色素生成 なし ２、肉汁寒天針面培養（３０℃、 生育の良否 生育良好 コロニーの形 拡幅状 コロニーの断面の隆起状態 コロニーの光沢 混光 コロニー表面の形状 平滑 コロニーの透明度 不透明 コロニーの色 淡黄色 コロニーの質 粘稠 ３、肉汁液体培養（３０℃、 表面の生育 膜状 濁度 やや濁る 沈殿 有り、粉末状 ガス発生 なし 培地の着色 なし 肉汁寒天穿刺培養（３０℃、２日間培養）生育の場所
上部は下部より良い コロニーの形 乳頭状 肉汁ゼラチン穿刺培養（２０℃、 養） （イ）ゼラチン液化 むし ６、 ミルクにおける生育 （イ）反応 脱色 （ロ） ガス なし く′う 凝固、液化 凝固 （ｑ 生理的性質 １、硝酸塩の還元 ２、脱窒反応 ３、ＭＲテスト ＋ ４、ＶＰテスト ＋ ５、インドールの生成 十 ６、硫化水素の生成 十 ７、デンプンの加水分解 ８ クエン酸の利用 ９、無機窒素源の利用 用する １０、色素の生成 １１ ウレアーゼ ２週間培 平滑 ２日間培養） ＮＨ３両態を利 ２日間培養） ＮＯ３、 Ｎ２まで還元 緑色螢光色素を生成する ＋ シュードモナス・ビスコゲナは、種々の有機物、例エバ
、メタノール、エタノール、インプロパツール、エチレ
ンクリコール、グロピレンクリコール、グリセリン、グ
ルコースなどを炭素源として生育することができるが、
特にメタノールを炭素源として培養したときは、本発明
の多糖類を培地中に蓄量蓄積させることができる。

培養液中のメタノール濃度は、５重量％以下が適当であ
り、菌の生育および増殖の良好さから０．５ないし３重
量％が特に好ましい。

培地の窒素源としては、通常の発酵に用いられル硫酸ア
ンモニウム、塩化アンモニウム、アンモニア、リン酸の
アンモニウム塩、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム等
の無機窒素化合物および／または尿素、コーン・ステイ
ープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス、肉エ
キスなどの有機窒素含有物を用いることができる。

その他無機塩として、例えばカルシウム塩、マグネシウ
ム塩、カリウム塩、リン酸塩、鉄塩、マンガン塩、亜鉛
塩、銅塩などが用いられる。

菌の増殖促進の点から大豆蛋白加水分解液、酵母エキス
、ビタミン類、アミノ酸等の有機物の培地への添加が有
効である。

培養は通常温度２０〜４２℃、好ましくは２５〜３８℃
で、ｐＨ５〜９、好ましくは５．５〜７．５の間で振盪
、通気攪拌などの手段により好気的に行われる。

その他の培養条件は、通常の微生物の場合と大きく変わ
るところはない。

第１表に本発明の方法で用いることのできるメタノール
合成培地の一例を示す。

用いる培地によっては、培養期間中に培養液のｐＨが低
下することがあるが、培養液のｐＨを所定の範囲に保つ
ために、アンモニア、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム等のアルカリを添加してよい。

本発明の多糖類はすでに述べた様に、約１×１０４ない
し約１×１０７の範囲に分布する分子量を示す。

分子量の値は培養条件、例えば培地成分中の炭素源濃度
と窒素源濃度との比、リン酸塩濃度等の変化により多少
変化する。

また培養中に中相液としてメタノールとアンモニアの混
合液を添加するときは、両者の混合割合によっても多少
変化する。

培養液から本発明の構成糖としてアロースを含む多糖類
を分離するには、例えば以下の様にして行う。

即ち、培養終了後、培養液を遠心分離、助剤を用いるｅ
過、その他の方法により菌体を除去する。

この場合、培養液の粘性が高いときには、培養液を適当
に希釈し、上記の方法により菌体を除去する。

この上清に、アセトン、メタノール、エタノールなどの
水溶性有機溶媒を加えることにより、白色繊維状の粗多
糖類を得る。

粗多糖類をエーテルとエタノールで洗浄後、再び水に溶
解して、８０℃、１５分間程度の熱処理、トリクロル酢
酸処理等の除蛋白操作を行い、遠心分離、を過等により
沈殿物を除去する。

この上清を水で透析した後、凍結乾燥を行い、白色繊維
状の精製多糖類を得る。

水溶液の形で使用してよいときは、必ずしも乾燥して固
体とする必要のないこと勿論である。

シュードモナス・ビスコゲナは、本発明の構成糖として
アロースを含む多糖類を高濃度に、かつ非常に高い炭素
源利用率で生産することができる。

例えば、メタノールを炭素源とする通気攪拌培養で、こ
の多糖類の生産量を３０Ｐ／Ｊ培地程度にすることがで
き、その際メタノールの多糖類への利用率を約３０％に
することもできる。

以下本発明を実施例について更に詳細に説明する。

実施例 １ 第１表に示した培地からメタノールを除いた組成の溶液
１．０７を２１容ミニジヤ一型発酵構に入れ、１２０℃
、１５分間滅菌した後、メタノール２０ｍ１を無菌的に
添加し、培地を調製した。

これに、これと同一組成の培地にシュードモナス・ビス
コゲナＴＳ−１００４株を３０℃で２４時間培養して得
た前培養液５０ｍ１．を接種し、培養期間中ｐＨ７，０
を維持するよう、メタノール含有アンモニア水（メタノ
ールとアンモニアの比率はモル比で１０：１）を添加し
ながら培養温度３０°Ｃ１攪拌器回転数８０ Ｏｒｐｍ
、通気量１１空気／分の条件で４８時間通気攪拌培養を
行った。

培養中に加えたメタノールの量は７３ｙ′であった。

培養後培養液に水２１を加え、５℃、１１００００ｒｐ
で３０分間遠心分離して菌体および固形物を除去し、得
られた上清液を９１のアセトン中に攪拌しながら加えた
。

析出物を戸取し、エタノールおよびエーテルで十分洗浄
し、凍結乾燥を行い、粗製多糖類を１５．３１を得た。

この様にして得た粗製多糖類１０ｆ？を水１１に溶解し
て、トリクロル酢酸を３重量％濃度になる様に加え、−
夜間静置後、５℃、１１００００ｒｐで２０分間遠心分
離して固形物を除去した。

上清液を再び３倍量のアセトン中に添加して多糖類を再
沈殿させた。

得られた多糖類の沈殿を分離後、再び水に溶解して、こ
れに臭化セチルトリメチルアンモニウム水溶液を加え、
多糖類を臭化セチルトリメチルアンモニウムとの複合体
として沈殿させた。

複合体を、水およびエタノールで十分洗浄して過剰の臭
化セチルトリメチルアンモニウムを除いたのち、飽和塩
化す） ＩＪウム水溶液を加えて複合体を溶解した。

多糖類を溶解させたこの溶液に３倍量のエタノールを加
えて多糖類を沈殿させた。

沈殿を分離し、凍結乾燥後、再び水に溶解した。

得た溶液を透析用セロハンチューブに入れて５日間流水
中で透析を行ったのち、３倍量のアセトンを加えて多糖
類を沈殿させ、沈殿物をｔ取、凍結乾燥を行い、精製多
糖類を得た。

得量８′ｉ？。こうして得た精製多糖類の理化学的緒特
性は以下の通りであった。

ＫＢｒ錠剤法で測定したスペクトルを第１図に示す。

この図から明らかな様に、すでに述べた通りの特徴的吸
収を示した。

紫外吸収スペクトル： 水溶液（０，０９７重量％）中での紫外吸収スペクトル
を第２図に示す。

図から明らかな様に明確な特徴的吸収を示さず、短波長
側で次第に吸収が大きくなる。

３１０１１ｍ以下および２５０ｎｍ以下で多少吸収が大
きくなる。

１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル： 重水中δ値で２７．１５ｐｐｍおよび１７６．９７ｐｐ
ｍに化学シフトのシグナルが観測された。

これらはそれぞれアセチル基のメチル基およびカルボキ
シル基のカルボニル基の１３Ｃに帰属させることができ
る。

しかしδ値で１６９． Ｏｐｐｍ付近に期待されるアセ
チル基のカルボニルシグナルは観測されなかった。

従って水酸基の一部はアセチル化されているがその割合
は小さいことが推定される。

性状および色ならびに溶剤に対する溶解度および呈色反
応： すでに述べた通りの特性および反応を示した。

分子量： １．０Ｘ１０５ないし５Ｘ１０６の間に分布し、ピーク
は２Ｘ１０６であった。

測定は水溶液のゲル・パーミュエーション・クロマトグ
ラフィーによった（サンプル量１００μｌ、カラム０．
９６ｃｍ×６０ｃｍ、充填剤親水性ゲル、溶離液Ｍ／１
５ＫＨ２ＰＯ４、Ｍ／１５Ｎａ２ＨＰＯ４およびＭ／ｌ
０ＫＣＩ混合溶液１．検出器示差屈折計、標準物質デキ
ストラン）。

比旋光度 ＋３２２°（Ｃ−１、水） 水溶液の性状；塩基性、酸性または中性の別；およびカ
ルシウム塩に対する挙動： 精製多糖類を水に溶したところ無色透明の溶液となった
。

この水溶液（１重量％）は室温で１８０センチポイズ（
回転粘度計で測定）の粘度を示した。

この水溶液に臭化セチル） ＩＪメチルアンモニウムの
水溶液を添加すると白色沈殿が生じた。

塩化セチルピリジニウム水溶液でも同様であった。

従ってこの多糖類は酸性である。またこの水溶液に水酸
化ナトリウム水溶液を加えてｐＨ１０に調整し、塩化カ
ルシウム水溶液を添加したところ、凝集が起り、ゲル化
した。

水酸化す） ＩＪウム水溶液および塩化カルシウム水溶
液に代えて水酸化カルシウム水溶液を添加したところ同
様に凝集ゲル化した。

構成糖およびその組成ならびに化学構造：精製多糖類１
０ｒｒＩ９を硫酸（２Ｎ）０．５ｍｌに溶解して、封管
中、１００℃で８時間加熱して加水分解し、分解液を炭
酸バリウムで中和、濾過した。

このｅ液について薄層クロマトグラフィ分析を行なった
。

を液をシリカゲルプレートにスポットし、展開溶媒ｎ−
ブタノール、ピリジン、水（容量比６：４：３）で展開
した。

展開後、３％のｐ−アニシジン塩酸塩を含む水飽和ｎ−
ブタノールを噴霧し、１１０〜１２０℃に加熱した。

その結果、アロース、カラクトース、クルコース、マン
ノースおよびウロン酸の存在が認められた。

ｐ液中の中性糖の定量を行うためにＰ液を強酸性陽イオ
ン交換樹脂（Ｈ＋型）のカラムに通し、更にカラムは水
洗した。

得られた通過液を濃縮し、この濃縮液について、原田、
小泉編「総合多糖類化学」（講談社版、１９７４年）の
６８頁に記載されている方法に準拠してアルジトール・
アセテート化を行い、ガスクロマトグラフィ分析を行っ
た。

即ち、濃縮液（１ｍのに水素化ホウ素ナトリウム１０■
を加えて室温で一夜間装置した。

これに過剰の強酸性陽イオン交換樹脂（Ｈ＋型）を加え
て数分間はげしく振盪して過剰の水素化ホウ素ナトリウ
ムを分解した。

を過後、を液を減圧下に乾固させ、乾固物にメタノール
を添加して減圧下室温で再び乾固させ、引続きメタノー
ル添加および減圧乾固を１０回くり返した。

次いでピリジンと無水酢酸の混合液（容量比１：１）０
．２ｍｌを加え、１００’Ｃ１２時間加熱してアセチル
化を行った。

冷却後、少量の水を加え、減圧下室温で乾固させ、引続
き水添加、減圧乾固を４回くり返した。

残留物を少量のクロロホルムに溶解し、これを試料とし
てガスクロマトグラフィ分析を行った。

分析条件は カラム； ０．４ｃＩｒＬＸ ２００ｃｍガラスカラム
充填剤３％ＥＣＮ５５−Ｍ、ＤＭＣ８処理硅ソウ土系担
体（１００〜１２０メツシユ） カラム温度；１９０℃ 入口温度：２４０℃ キャリヤー：窒素４０ｍ１１分 検出器；水素イオン炎型検出器 であった。

ウロン酸の同定は以下に示す方法で行った。

精製多糖類７．０１を硫酸（２Ｎ）９００ｍｌに溶解し
て、沸騰水中、８時間加熱して加水分解し、分解液を炭
酸バリウムで中和、濾過した。

沢液を強酸性陽イオン交換樹脂（Ｈ生型）を充填した２
、０ＣＩｒＬＸ１３ｃｒｒＬのカラムに通し、更にカラ
ムは水洗した。

得られた通過液を減圧下でシラツブ状になるまで濃縮し
、その５１をセルロースカラム（Ｗｈａ ｔｍ ａＨ社
製、ＣＦ−１１，４，１ｃＩｒＬ×５４ＣｒｒＬ）を用
い、第１溶離液ｎ−ブタノール、ピリジン、水混合液（
容量比１０：３：３）、第２溶離液、エタノール、水混
合液（容量比１：２）でカラムクロマトグラフィを行っ
た。

溶出条件は、２７ｍ１／時間、１７ｍ１／チユーブであ
り、各両分を濃縮後、Ｐ紙（ｗｈａｔｍｅｎ社製３ＭＭ
）で、展開液ｎ−ブタノール、ピリジン、水混合液（容
量比１０： ３： ３）を用い、下向法によるペーパー
クロマトグラフィな行ない、マンノース、グルコース、
ガラクトースおよびウロン酸の各画分に分画単離した。

分画されたウロン酸画分を少量の水に溶解し、得られた
溶液に過剰量の水素化ホウ素す） ＩＪウムを加え室温
で一夜間放置した。

これに過剰量の強酸性陽イオン交換樹脂（Ｈ生型）を加
え、はげしく振盪して過剰の水素化ホウ素ナトリウムを
分解した。

を通抜、沢液を減圧下で乾固させ、メタノール添加およ
び減圧下室温での乾固を１０回くり返した。

次いで乾燥した強酸性陽イオン交換樹脂（Ｈ生型）およ
び無水メタノールを加え、１００℃で２時間加熱した。

冷却およびｔ通抜、水と水素化ホウ素す） ＩＪウムを
加え、室温で一夜間放置した。

以下中性糖のアルジトール・アセテート化およびカスク
ロマトグラフィ分析で述べた方法でアルジトール・アセ
テート化およびガスクロマトグラフィ分析を行った。

その結果グルコースのアルジトール・アセテート化物に
対応するピークのみが得られ、ウロン酸はグルクロン酸
一種類であることがわかった。

グルクロン酸の定量はカルバゾール硫酸法で行った。

精製多糖類１．６０■を０．５０ｍｇの水に溶解して、
氷冷した。

氷で冷しながら濃硫酸３．０ｍｌをよく混合しながら加
えた。

沸騰水で２０分間加熱して、ただちに冷水で室温まで冷
却した。

０．１％カルバゾール溶液（１０■のカルノくゾールを
９５％エタノール１ＯｒｒＬｌに溶解した溶液）０、１
ｍｌを加え、２時間後５３５１ｍの吸光度を測定する
ことによってグルクロン酸量を測定した。

その結果グルクロン酸は精製多糖類中に１１０モル％含
まれていることがわかった。

前述の中性糖のガスクロマトグラフィ分析の結果とこの
値から、精製多糖中には各構成糖がアロース
９．８モル％ガラクトース ５５
．４ ／／グルコース １０．７／／ マンノース １３．１／／ グルクロン酸 １１．０ 〃の割合で含
まれていることがわかった。

なおアロースに関してはガスクロマトグラフィ分析によ
る標準物質との保持時間の一致たけでなく、以下の方法
によっても同定確認した。

前述のカラムクロマトグラフィ、ペーパークロマトグラ
フィで得られたグルコース画分について、を紙（■他ａ
ｔｍｅｎ社製３ＭＭ）を用いてホウ酸ナトリウム水溶液
（０，１Ｍ、 ｐＨ９，２）、電位勾配置５■／Ｃｒｒ
ｔの条件下で電気泳動を行なったところ、二つのスホッ
トが得られた。

これらはそれぞれグルコースおよびアロースの標準物質
と同一移動度を示すことを確認した。

更にグルコース画分４０■をリン酸塩緩衝液（０，０５
Ｍ、 ｐＨ６，８） １９．５ｍｌに溶解して、グル
コースオキシダーゼ水溶液（シグマ社製、タイプ■、ア
スペルギルス・ニガーより分離されたもの、蛋白含量５
．７１ｒＩｆ？／ｍｌ ） １．５ ｍｚを加え、３７
℃で１０時間反応させた。

加熱して酵素を失活させ、遠心分離で不溶分を除去した
後、強酸性陽イオン交換樹脂および強塩基性陰イオン交
換樹脂の混合物（Ｈ生型およびＯＨ−型）で脱塩して前
述の条件でペーパークロマトグラフィを行ない、アロー
スを単離しＴこ。

単離したアロースの物性および化学的性質は標準品とほ
ぼ完全に一致した。

単離された各構成糖の旋光度測定により、各構成糖がＤ
−型であることがわかった。

また箱守法によるメチル化、スミス分解、緩和加水分解
を含むスミス分解および前述した赤外吸収スペクトル等
から本多糖類の主鎖はβ−１・３結合のガラクトースで
、４・６−位から側鎖が出ており、側鎖の末端にガラク
トース、マンノースおよびグルコースが存在しており、
グルクロン酸も側鎖に存在することがわかった。

細菌を用いたリジン発酵で得た菌体分離前の発酵液（ｐ
Ｈ８，０）１７３に精製多糖類の水溶液（２重量％）１
０ｍｌおよび塩化カルシウム水溶液（１０重量％）１０
７７Ｉｌを加えｐＨを１０に調整したところ、菌体は凝
集沈降し、上清は澄明となった。

この液は極めて容易に沢過することができ、Ｐ液からは
Ｌ−リジンを回収することができた。

一方同一の発酵液に塩化カルシウム水溶液のみを同様に
加えてｐＨを同様に調整したものは顕著な変化を示さず
、無処理の発酵液と同様に「過も容易ではなかった。

また精製多糖類に代えて、組成の多糖類を用いてもほと
んど同様の結果が得られた。

実施例 ２ 第１表に示したリン酸１水素２アンモニウム０．４０重
量％の代りに硫酸アンモニウム０．０５重量％、塩化ア
ンモニウム０．０５重量％、リン酸１水素２アンモニウ
ム０．０５重量％を加え、酵母エキス０．０２重量％を
除いた組成の培地を用いて実施例１と同様にして培養を
行った。

培養時間は４５時間であった。

ｐＨをコントロールするために添加したメタノール含有
アンモニア水中のメタノールとアンモニアの割合はモル
比で１５：１であり、消費されたメタノール含有アンモ
ニア水の量は、１２５ｍ１であった。

この培養で得られた粗製多糖類は３０．Ｏｆであった。

こうして得られた粗製多糖類を実施例１と同様にして精
製して精製多糖類を得た。

こうして得た精製多糖類を実施例１と同様にして測定し
、かつ分析した。

結果を以下に示す。

元素分析： ２０Ｘ１０”にピークを有し、ｌ０ＸＩＯ’から１．０
Ｘ１０４の範囲に分布していた。

その他の緒特性は実施例１の場合と実質上同一であった
。

実施例 ３ 第１表に示した培地からメタノールを除いた組成の溶液
１．Ｏｌを２１容ミニジヤ一型発酵槽に入れ、１２０℃
で１５分間滅菌したのち、メタノール２０ｍ１を無菌的
に添加し培地を調製した。

これに、これと同組成の培地にシュードモナス・ビスコ
ゲナＴＳ−１００４株を３０℃で２４時間培養して得た
前培養液５０１ｒＬｌを接種し、培養期間中ｐＨ７，０
を維持する様に水酸化ナトリウム（２Ｎ）を添加しなが
ら、培養温度３０℃、攪拌器回転数８００ ｒｐｍ、通
気量１１空気／分の条件で１６時間通気攪拌培養を行っ
た。

その後、発酵槽内の液量を７８０ｍ１となる様に一部抜
き出し、液性をｐＨ５、メタノール濃度を０．８重量％
とした他は上述の培地と同一組成の新鮮な滅菌済溶液を
１３５ｍ１／時間の速度で発酵槽内に連続的供給を行な
い、同時に供給量と同一量を連続的に抜き出して、一槽
攪拌式の連続培養を行った。

連続培養を行って４５時間後の抜き出し液中には、菌体
１１７グ／ｌ、多糖類１７．１グ／ｌが含まれていた。

抜き出されたこの培養液２００ｍ１に水４００ｍ１！を
加え、５℃、１１００００ｒｐで３０分間遠心分離して
菌体および固形物を除去し、得られた上清液を１．８１
のアセトン中に攪拌しながら加えた。

以下実施例１と同様に処理して粗製多糖類３．４ｙ′を
得た。

更に実施例１に準じて精製を行ない、精製多糖類を得た
。

得られた多糖類を実施例１と同様にして測定し、かつ分
析した。

結果を以下に示す。２．０Ｘ１０’から１．０Ｘ１０６
の範囲で分布し、ピークは２．０Ｘ１０５にあった。

その他の諸特性は実施例１の場合と実質上同一であった
。

実施例 ４ 第１表に示した組成の培地のうち、リン酸１水素２アン
モニウム０．４０重量％の代りに、硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウムおよびリン酸１水素２アンモニウムを
各々０．２０重量％加えた組成の培地を用いて実施例１
と同様にして培養を行なった。

培養時間は４８時間であった。

ｐＨを制御するために添加したメタノール含有アンモニ
ア水中のメタノールとアンモニアの割合はモル比で１０
：１であり、消費されたメタノール含有アンモニア水の
量は１０３ｍ１であった。

得られた培養液を実施例１と同様に処理して粗製多糖類
１９．８Ｐを得た。

こうして得られた粗製多糖類の精製、および得られた精
製多糖類の測定、分析を実施例１と同様にして行った。

結果を以下に示す。

その他の諸特性は実施例１の場合と実質上同一であった
。

実施例 ５ 培養温度を２７℃、培養時間を４０時間とした他は実施
例４と同様にして培養および粗製多糖類分離を行った。

得られた粗製多糖類は１２．５５’であった。

こうして得られた粗製多糖類の精製、および得られた精
製多糖類の測定、分析を実施例１と同様にして行った。

結果を以下に示す。１．０Ｘ１０’から５．０Ｘ１０５
の範囲の分布を有し、ピークは１．０Ｘ１０５であった
。

その他の緒特性は実施例１の場合と実質上同一であった
。

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図はそれぞれ本発明の多糖類の赤外吸
収スペクトルおよび紫外吸収スペクトルを示す図である
。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 構成糖としてアロースを含む多糖類。 ２ 構成糖として更にガラクトースを含み、アロースと
   ガラクトースの含有量の合計がモル・パーセントで少な
   くとも５０％である特許請求の範囲第１項記載の多糖類
   。 ３ 構成糖として更にガラクトース、グルコース、マン
   ノースおよびグルクロン酸を含む特許請求の範囲第１項
   記載の多糖類。 ４ 構成糖としてのアロース、ガラクトース、グルコー
   ス、マンノースおよびグルクロン酸の含有量が、それぞ
   れこの順序で、約６ないし約１２、約５０ないし約６０
   、約１０ないし約２０、約７ないし約１４および約１０
   ないし約１２各モル、パーセントである特許請求の範囲
   第３項記載の多糖類。 ５ 分子量約Ｉ Ｘ １０’ないし約１×１０７で、明
   確な融点を示さず、水に可溶でメタノール、エタノール
   、エーテルおよびアセトンに不溶である特許請求の範囲
   第１項ないし第４項のいずれかの項記載の多糖類。 ６ シュードモナス・ビスコゲナ（Ｐ ５ｅｕｄｏ ｍ
   ｏｎａｓＶｉＳｃｏｇｅｆｉａ、微工研菌寄第３８１
   １号）の菌体外産生物である特許請求の範囲第１項ない
   し第５項のいずれかの項記載の多糖類。 ７ シュードモナス属に属し、菌体外に構成糖としてア
   ロースを含む多糖類を産生ずることのできる細菌を培養
   して、培地中にこの多糖類を蓄積させ、これを分離採取
   することを特徴とする多糖類の製造法。 ８ 構成糖としてアロースを含む多糖類が、更に構成糖
   としてガラクトースを含み、アローストカラクトースの
   含有量の合計がモル・パーセントで少なくとも５０％で
   ある特許請求の範囲第７項記載の製造法。 ９ 構成糖としてアロースを含む多糖類が、更に構成糖
   としてガラクトース、グルコース、マンノースおよびグ
   ルクロン酸を含む多糖類である特許請求の範囲第１項記
   載の製造法。 １０ 構成糖としてのアロース、ガラクトース、グル
   コース、マンノースおよびグルクロン酸ノ含有量が、そ
   れぞれこの順序で、約６ないし約１２、約５０ないし約
   ６０、約１０ないし約２０１約７ないし約１４および約
   １０ないし約１２各モル・パーセントである特許請求の
   範囲第９項記載の製造法。 １１ 多糖類が分子量約１×１０４ないし約１×１０
   ７で、明確な融点を示さず、水に可溶で、メタノール、
   エタノール、エーテルおよびアセトンに不溶な酸性多糖
   類である特許請求の範囲第７項ないし第１０項のいずれ
   かの項記載の製造法。 １２ 主たる炭素源としてメタノールを含む培地を用
   いる特許請求の範囲第７項ないし第１１項のいずれかの
   項記載の製造法。 １３ 培地中のメタノール濃度を５％以下とする、特
   許請求の範囲第１２項記載の製造法。