JPS5831990A - 生理活性物質固定化用担体及びその固定化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生理活性物質固定化用担体および化１１１活
性物質の固定化方法に関する。

近イ１．酵素、閑体、細胞などの蛋白質から構成された
生ｌｌ１ｌ活性物質を担体に固定化したものは。

食品、医薬＋ｒ＋’葭１：業における化学反応触媒、生
理活性物質の分離、　１￥Ｉ製川の吸着体などとして使
用づ７１ている。生即活性物質固定化用担体および固定
化ツノ法に・要求される性能として。

（１）　　単位重量あたり多量の生理活性物質が活性を
卸持した状態で固定化しうろこと。

（２）　　生理活性の安定性が良好で、たとえば化学反
応触媒としての触媒活性や吸着体とじて吸着春情を高い
水準に長時間維持しうろこと。

（３）　反応１分離精製などの操作を行なう際。

十分な機械的強度と安定性ならひに耐微生Ｉ吻汚染を有
すること。

などがあげられる。

（１）の要件はイ」ン交１５″１セル「１−ス、ｆオン
交換セファデックスなとの多糖類からなる担体に生理活
性物賃金吸着させる固定化／、”／ｉ、に」、つて比較
的容易に達成さＩ′Ｌるが、（３）の’ＢＪ　（／ｌに
欠点がある３、」−だ合成イオン交換も°１」脂からな
る担体でＶｌ、に３）の９１ｊ　ｊ／１を満足するが（
１）の堤（／Ｉに関してし１、」たト分なイ、のとは言
えない。そこで本発明各らに、すでに（１璽１．・よび
（３）の要件を１−分６１１４ハＬするものとし７て合
成−イオン交換繊維からなる担体を提案し／こ。１．か
（〜、（２）の要件に関してはいずれの場合イ、十だ十
分満足なものとは言いがたい。しかるに（２）の要件Ｃ
１−生１１１１活性物質の固定化において非常に重・皮
である。

本発明者らは、特にこの点に鑑み、生ｌ１ｌｌ／ｌＩ′
ｉ性物質を固定化した場合、（１）および（；３）の要
件をｔ：）、Ｊ−んど損なうこと々く、かつ（２）の生
」（１１活件の安定性に優れた生理活性物質固定化月１
担体；ｌ’、・、Ｊ：び固定化ツノ。

法を見い出すべく鋭意検ｉｊ’　Ｌ　７’こ結果、不発
１す１に到達したものである。

すなわち１本発明は不溶性ポリモノビニルウ）香族化合
物に第１級アミノ基を含む陰イオン交１免ノ、（（Ａ）
と第２級以−にのアミン基からなる陰イオン交換ｊ＋（
（ＩＩ　＋とが結合してなる不溶性陰イオン交換ポリモ
ノビニル芳香族化合物（Ｃ）で構成されている担体であ
って、かかる担体を用いて生理活性物質を固定化する場
合、担体に該物質を接触させるエセｊ゛の前・同時・後
の適宜の時期に多官能性蛋白架橋剤を添加接触せしめる
ものである。

本発明の担体および固定化方法によって生理活性物質を
固定化した場合、生理活性物質が担体中の第２級以トの
アミン基によって多量にかつ活性をＸ、１１持した状態
で吸着されるため、単位重量当シの活性が高く、かつ生
理活性物質中の第１級アミツノ、（と担体中の第１級ア
ミン基が多官能性蛋白架橋剤によって共有結合されて強
固に固定化されているために生理活性の安定性に優れ、
また不溶性ポリモノビニル芳香族化合物成型品からなる
担体であるので優れた機械的強度と安定性ならびに耐微
生物汚染を同時ｙｃ有するという特徴がある。

本発明で言う不溶性ポリモノビニル芳香族化合物とは、
スチレン、α−メチルスチレン、ビニル５− トルエン、ビニルギンレン、ビニルプノタレン。

ｐ　　１口ルスヂレン、ビニルノルオレンｊｉ　と−ｒ
ゝ代表される芳香族核を有するモノビニル化合物ノホモ
重合体外らＯ・にこれらの２種以−にの共重合体もしく
は５０％未満の他の不活性モノマーとの共重合体および
クラフト重合体もしくはそれ〔っのブレンド体などの少
なくとも１種から構成さ）１だ架橋不溶化されたポリマ
であって９通常ポリマ分子鎖中の芳香核と他のポリマ分
子鎖中の芳香核が７７いに一般式＋ｃｒ＋Ｒ−１−ｎ（
式中Ｒは水素原子」゛たｃｌ”炭素数１〜４のアルキル
基を示し、ｎは１〜１２の整数を示す）で表わ烙れる架
橋、ｌ、１−または一般式−（−ＯＨ２０１ｎＣＨ２７
（式中ｎは１・〜４の４ｔ”　ＩＪを示す）で表わされ
る架橋基捷たはスルボニル基で結合されたポリマを意味
する。

かかる不溶性ポリモノビニル芳香１＆’化合物はそれ単
独もしくは実質的に不活性で１機械的強度保持作用を有
するポリマ（以）２゛浦強用ボリアと略称する）との混
合物もしくは複合物からなる成型品の形、たとえば直径
５００００ミフロンｌｃノ’ｌ・の粒子な　６− Ｙ化性成型品ならびにこれらの高次加二り成型品などの
形で相体とし−ご用いられる。

本発明で言う第１級アミン基、（を含む陰イオン交換）
、ｔ（Ａ　ｌとＬ７てし１、−ＮＩＩ（Ｃ１１２１ｎＮ
ＩＩ２（ｎ　＝　２〜１２）。

−Ｎ１１（ＣＩ−Ｔ、、ＣＩＪ２Ｎｌｌ）１．ｎＩＴ　
（ｍ　＝　１〜６）などの基をあげることができる。そ
の中でも−Ｎ■１（ＣＩｌ２）６ＮＩ（２は担体ど生１
１１１活性物質を共有結合させる場合、特に反応性がａ
′：＋　＜かつスベーザにもなるので好ましい。

第１級アミン基を含む陰イオン交換）ｊ（量は１通常０
、（１１〜１ｍθｑ／ｇ（０）であるが、多すぎると生
理活性物質の吸着量が減少したり、−また活性が低■・
し／こりし、逆に少なすぎると生理活性の安定性が不１
°分になるので、０．０５〜１　ｍｅｑ／ｇの範囲が１
１ｒ−１１，＜　、特に０．１−０．５　ｍｏｑ／ｇの
範囲が最も好４しい。

本発明で言う第２級１−″スー１−のアミノ基から溝成
さり、た陰イオン交換ｊ、（（Ｂ　ｌとは、脂肪族また
は芳？１゛族１項状式族などの第２級も（〜くは第２級
アミノＪ、Ｉ：　、第４級アンモニウｌ、　ｊ、Ｉ；、
を意味する。その中は生理活性物Ｂｔの吸着能が大きい
ので！ｌｒｇ＋　Ｌい３゜特に、生理活性物質がグルコ
ースイソノラーゼの場合ニはβ−アミノプロピオンア之
゛トメｆ゛ルＪ、（が吸着能が犬きく最イ）クイー牛し
い９．第ソ＃、＃Ｉ゛１１−のアミノ基から（イ／１成
され／こ陰イオン交換’；’−：　（ｒｓ　ｌの殴１１
、。

通常１．０　ｍａｑ／ｇ　（ＣＩ　Ｌ’］、１−である
が、少々・、）−きると生理活性物質の吸着量が低１・
−するので”）、　ＯｍＣ）ｑ／ｐ以上が好−ｖ　＋、
　＜　、　特にろｍｅ（、）／、＋；　ｌＪ：が最ら（
イー：ましい。

これらの第１級アミン１□（を含む１法、イオン交換１
．（（Ａｌと第２級以１・のアミノＪ１（から（１″１
′番成さ／ｉ、た陰−ｆオン交換基（Ｉ３）はイ・溶’
（１４ポリモノビニル′Ｊ′Ｊ香尭 メ化合物中に−、７ｃ：　、／１−ぞ扛＋＋ｉｌ記交１
ｑり一、量の範囲で自−に分布していることが効果上空
ｉ［ｉ　＜　、　１’４＋に該化合物成型品の表面近傍
では均一に分イｌｉ　Ｌ−Ｃいく）のが好捷しい。

本発明の生理活性物質固定化用１１　ｊ体を’ＪＩ＜　
、：’：’Ｉ　”Ｊ’る方法を一例をあげて説明する３
、 ′土ずポリモノビニル芳香族化合物１．・−１・１（記
−（−＋：＋＋日１゜などの架橋〕、（と該化合物の側
鎖の末端にアミン化合物と反応可能な）１（たとえばク
ロルメチル基やアクリルアミド基などを導入する。かか
る各基の導入方法は任意の方法でよく、たとえば特開昭
５２−１２０９８５　、同５ろ一’Ｉ　５４９９３　、
向５３−１３７２９６、す・公報などに開示された方法
に基づいて導入することができる。かかるＪｌ（が導入
された該不溶性化合物は次に第１級アミン基を２個ＩＪ
上有するアミン化合物（Ａ成分）と第１綴具にのアミン
基を有するモノアミン化合物（Ｂ成分）の混合液で処理
される。

ここで本発明の陰イオン交換基（Ａ＞を構成するものは
要するに末端に第１級アミン基を有する構造をとること
が必須であり、したがって第１級アミノ」１（を２個以
」ニイ］するアミン化合物は一方の末９Ｗアミノ７Ｉ（
は基体と反応して第２級アミノ基となるが他端の第１級
アミツノ１（は−Ｉ−記（Ａ）の構成を／ｉ：１４足す
る。

かかる化合物の例としては、　ＮＨ２（Ｃ１１２＞、Ｎ
Ｈ２（ｎ−２〜１２　）　、　Ｎｌｌ、、　（０１１２
０１１２間）ｍＩＩ（ｍ＝１〜６）９− などをあげることができるが、かか”：ｌ　ＣＩ”、　
１’ｒ　’ｌ勿のノドに限定されるものではなく、結果
的に＋Ａ）のｌ、、ｌ、＋７成をとるものであ−ｉ＋−
ばにい１゜ 本発明の；求イオン交換猥（１１）を１１Ｔ１１Ａ−、
Ｉｏ、・′、ものはＪｋ体に結合したＩイア構造として
；′Ｐ、２級１ノ、１のアミノ基−士たは（および）第
４級γン工・−ウノ・’；Ｉ：　６：　（＋することが
必ぼｌであり、この点（Δ）、Ｉ−明イｌ’ｌｌ：、　
ＩＩ（（’ｌ’ｌ　、ｉ＋’１す６　モノｆ　アル−、
、ｌ−、記第１１）ｋＩＪ、　ｌ　ノー７”　ｉ　／　
Ｉ、Ｌ’、　７Ｈ）　（１するモノアミン化合物はその
一１ｕｌｌであり、ぞの１］ｉシにたとえば第２級ＩＪ
、にのアミノ枯をイ１、トる多（曲アミン化合物（第４
級アンモｒウノ・１１（４・ｌ’ｊｌ　’７’、Ｉ・）
ナトをあげることができるＱ　ｌ’、−、、ＩｊＬｉ第
１級１ソ、１のノ′ミノ基を有するモノアミン化合物ｒ
、Ｉｆｊノ１１（とｌ、（体と反応して第２級以１のモ
ノアミン構造＾・と２）結甲。

（Ｂ）の要件を満足する。

かかる化合物の杖体例と１．てυｌ、：／ｉとぐ−（・
１゛ジノチルアミン、モル５Ｉ−リン、ピペリジン　、
／「、　、１１ノールアミン、ｌ！＋−ノアルアミノｊ
−ｌノノ−ル、　−’ｒ−、／−ルアミン、ｌ・リメチ
ルアミン／１・ど４・あける−１１ができるが、かかる
化合吻のみにｌＸ１昌１さ７するイ、ので１０− ｔよない、１要するに本発明においては（Ａ＋と（Ｂｌ
の要件を満足するものであれば、上記それぞれの具体例
に限定されることなく適用され得ることは一汀う捷でも
ない。

かかる化合物の反応において反応液中のアミン化合物の
混合比、濃度ならびに溶媒の種類１反応ｌ晶度１反応時
間は、アミン化合物と反応可能な基のｆ′ｉｌ’ｆ　Ｊ
＋’ｉおよび混合するアミノ化合物の種類に応じて適宜
選択される３、 かくして製造された本発明の担体は各種の生理活性物質
の固定化量が多く、かつその活性度をその一土捷安定に
維持し得るうえに１機械的強度ならびに１１１１Ｉ微生
物汚染性に優れた特徴を有する。

本発明の担体はこのような特徴のもとに多量の生」Ｊ１
１活性物質を固定化するものであるが、かかる固定化生
理活性物質は各種酵素触媒反応などに有効に適用される
。その場合、該担体に鉄イオンが存在するとその触媒活
性の寿命を大幅に増大するという効果を奏する。たとえ
ばブドウ糖などの還元性物質を基質（もしくは生成物）
とする酵素触する不純物に」：つて著しく生ｊ、ｌｌ活
性をＪ’ｉｉ′ｆｆわ扛。

失活することさえある。その場合、該Ｊｌｊ体中に鉄イ
オンが存在するとかかる不純物のＨ６−にイ）がかわら
ず、酵素の活性は失なわノ１．ず、かつノ、ｉ’　Ｑが
のびるという中実を発見１−／こ。、この効果＆：）　
ｌ＋ｌ＋にブトつ糖を果糖に変換するグルコースイソノ
ラーゼを酵素触媒反応に適用するときに徐めて優れた成
果をあげるものであり、異性化糖の生産１つが大きく増
大する。

−」―記鉄イオンは本発明の不溶１ａ：　ｌｒ、’、イ
オン交換ポリモノビニル芳香族化合物（Ｃ）のｌｌ；　
イオン交換基（第１級アミノ１１（あるいは第２級１・
Ｌｌの゛γミノ基）に配位結合の形で結合］〜て、１．
・す、ががる鉄イオンの配位結合量は少なずぎると酵素
ノ、ｊ″命の延長に十分効果を発揮できないので０．０
５　ｌ１ｌＦ川／Ｆ・、（Ｃ）以」二が好１しく、特に
０．２　ｍｏ（１／（ｒ、　（ｃＩ　１．：］、１が最
も好捷しい。壕だ、その製造法として１）１ｆ記化合物
（Ｃ１にハロゲン地、硫酸１’ｉ１２などの酸性塩から
なる通常０００１〜Ｉ　Ｍ／／の鉄塩Ｍ液をＪに触させ
て室７品で１分〜４０時間反応させればよい。

本発明の担体の補強材として補強用ポリマを通常２０〜
８ａ係のｉｌｌα囲で含有する成型品は機械的強度が高
く、好ましく用いられる。その中でも。

’Ｉコ＋に成型品として繊維は機械的強度が高くかつ生
理活性物質の吸着能が大きいので最も好ましく用いられ
る。

かかる補強用ポリマは本発明成型品の製造過程において
、物即的および化学的に不活性であり。

かつ２機械的強度を維持できるものならなんでも良く、
特に限定は々い。具体例としてポリエチレン、ポリプロ
ピレン、ポリ（６−メチルブテン−１）、ポリ（４−メ
チルペンテン−１）ガどで代表される結晶性ポリα−オ
レフィン、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデンなどの
ポリ（ハロゲン化オレフィン）、ポリエチレンテレフタ
レートなどで代表されるポリエステル、ポリｐ−フェニ
レンテレフタラミドなどのポリアミドがあげられる。

とりわけ、結晶性ポリα−オレフィンは、その高度の化
学的安定性の故に最も好ましい。

１３一 本発明成型品内部における補強用１ポリマの配置形式と
しては、成型品が繊組の場合１本発明の該不溶性化合物
（Ｍ体：化合物Ｃ）と補強用ポリマが無秩序に細かく分
散した単純混合紙ｔｉｌｌ形式のもの、および補強用ポ
リマを芯部とし該」１（体を外側に配置した芯鞘型複合
紙ｉ・１１形式のもの、および該基体を海成分とし補強
用ポリマをｎす成分中に多数分散した島成分とする多芯
ン１σ島型複合繊＆ｆｌ形式のもの、などをあげること
ができる。その中でも。

多芯海島型複合繊維形式のものｒｊ二、吸着能が大きく
、耐剥離性が大きいのでＩｆ斗しく用いられる３゜この
場合、海成分中に化学的に安定なぞ１１１強用ポリマを
１〜３０％混合したものは面１剥ＰＩＩＩ性がさらに向
」ニするので望捷しい。寸だ島の数は多いほど削剥離性
が太きいが、技術的な制約があり９通常５〜２００個、
とりわけ１０〜６０個かが−＋しく用いられる。寸だ、
繊維の含水度は通常１．０以１１が望ましいが、含水度
が小さすき゛ると吸着能が低下し、あ１り大きすぎると
膨截１性が過大となり取り扱いが困難となるので、好１
しくは１５〜１０゜１４− ’１１！ｊ　Ｖこ好壕しくは２〜５がよい。

本発明の生理活性物質固定化用担体は、該担体中の反応
性に富む第１級アミン基を各種の官能基に変換して生理
活性物質の固定化、除去９分離に使用することもできる
。

たとえば１本発明の生理活性物質固定化用担体を使用１
〜で、該担体中の第１級アミノ基を任意の方θ、（Ｒｏ
ｎｏａｒｃｈ／　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ、　２２．１
８　（１９７１）など）で生理活性物質と共有結合可能
な基に変換した後、生理活性物質含有液と接触きせて生
理活性物質を該担体に吸着かつ共有結合させることによ
って固定することもできるが、以下に述べる本発明のｌ
ｊ法で生Ｊ、ｌｉ活性物質を固定するのが容易でかつ経
済的である。

すなわち＋　ｉ’＋Ｉ前記本発明の生理活性物質固定化
用担体に、生理活性物質含有液と多官能性蛋白架橋剤含
有液を順次あるいは同時もしくは逆順に接触させて生理
活性物質を該」Ｕ体に吸着かつ共有結合させることによ
って固定化するのがよい。

その中でも、Ｊ−ず該担体に生理活性物質含有液を接触
させて生理活性物質を該４１体に吸ノ１″イさせた後、
さらに多官能性蛋白架（１イη剤含ｆ１°／ｆＶで処理
１〜で生理活性物質を該」！１体に共イ１結合さＩＪ−
て固定化する方法は、　ｑ！ｆに生理活性物質の固定化
Ｊ１′Ｌ＃）　’Ｊ／　＜かつ活性の低］でも少ないの
で最も好」°シい。

本発明において、」１１体に生理活性物質を吸着させる
方法としては、１−１的とする生理活性物質の性質に応
じて、　１部２体中の陰イオン交換Ｊ１（のＡｐ、’ａ
　’Ｊｔ’１＞；−Ｊ：び型（各種塩型、各種緩衝液で
緩衝化１．、、；／ｊ型、遊離型）、ならひに生Ｊ↓１
１活性物質含（１液の１用を選択し、５〜６０℃で５分
〜１（］時間、生理活性物質含有液を４１体にカラム法
も１〜りｒｌ：バッチρよなどで接触させればよい。多
官能性蛋白架橋剤とｊ〜ては、グルタルアルデヒド、ジ
アルデヒドでん粉などのポリグルクルアルデヒド類、ト
リレンジイソシアネート、ヘギザノチレン・ジイソシア
不−１・などのポリイソノアネート類などの第１級アミ
ノ基と共有結合可能な一般に多価性蛋白修飾試薬とｌ−
で用いられているものをあげることができる。これらの
多官能性蛋白架橋剤によって生”’ｌ！　／＋１に性物
質を該相体に共有結合させる方法としては、たとえは該
架橋剤としてポリアルデヒド類を用いる場合にｒｌｌ、
これらを００１〜１０チ含有する水溶液（ｐＨ６〜９）
、アセトン溶液もしくは水−アセトン混合液を作り、５
〜６０℃で５分〜２時間、生理活性物質を吸着した該担
体と接触させればよい。

生ＩＪＩ活性物質がグルコースイソメラーゼ、グルコア
ミラーゼなどのような酵素、特にグルコース・イソメラ
ーゼの場合には、前記基体成型品の陰イオン交換法に鉄
イオンが配位結合してなる担体を用いて本発明の方法で
固定化するのが、酵素の固の延長に」：り効果的である
。

以下に実施例を示すが、これに限定されるものでに１、
ない。

実施例１ ポリプロピレン（三片ノーブレンＪ５１４Ｇ）を島成分
とし、ポリスチレン（スタイロン６７９）５１７部、低
分子ポリスチレン（・・イマ５Ｔ−１２０）１７− １、５　部、　　ポリプロピレン（三片ノーブレン　ｗ
　ｔｒ７２７Ｄ１５．３部および低分子量ボリプｒ１ピ
レン（ビスコール５５　Ｕ　ｐ　）　０．６部の混合物
をがσ成分として、海島比がｄη：島−５９，１：／１
０．９になるように２５５℃で溶削１複合紡糸（島！＆
　１８１　した後、５倍に延伸することに」：って多芯
？ＩＱ島１１．１１．　ｉ’ｕ合繊維を得た（単糸繊度
１．９　（］、　、強度２．５　（ｙ、／イ１）３、編
組状に成型した上記繊翁１１０部ヶノチ［−１−ルアク
リルアミド１，０部、硫酸１０部、二１・「１ベンゼン
１０部、バラホル）、アルデに１・０．０３７τＩＸカ
ラする液に加え、室７品で４時間反応した後、メタノー
ル抽出して、ポリスチレン部に架橋と同１１．５にアク
リルアミトメデルにＩＪを導入しブこ３、次に、−１−
ルポリン５　容量部、　５　Ｍ−ヘキザメナレンジアミ
ン１容量部、メタノール２０容量部からなる２（Ｖ、Ｉ
ｌ＋還流１・゛で６時間アミン化処理することに、１：
つて本発明の生理活性物質固定化用担体を？１［た３、
−１・Ｉｌｌ　（ｒｌｌ、１６間。

基の量は０．１５　ｍｅｑ／ｇ　、モルホリノ早のｆｉ
ｔ’、　１．’ｌ、２ろｍθｑ／ｇであり、含水度はろ
ｌ）であった１、含水度とは、水中で膨潤しブζ担体（
Ｃ／’　ＪＸＩ＋　＋を取り出し、十１Ｂ− 分絞ってから、ろ紙で表面の水をぬぐって、ただちに重
量（Ｖ／　ｌを測定する操作を６回縁９返し。

次式より求めた平均値である。Ｗｏｌｄ絶乾重量を示す
、３ Ｖ／−Ｗ。

含水度−・□ Ｗ。

Ｔｌｌ＋　６．５に緩衝化］〜た担体２部に、長潮産業
社製のグルコースイソメラーゼ　ナガセ０Ｔ−８００（
凍結菌陣、固形分約４０％１３０部より酵素を抽出した
１′１′１体破片を含む懸濁液１２０部（ｐＨ６，５）
を加え、５０℃で６時間振とうして酵素を吸着させた後
、担体を取り出し、０．１％グルタルアルデヒド水溶液
に／Ｉ１１え室温で３０分処理することによって固定化
した。次に、５０℃でｐＨ９，５の１Ｍ緩衝液で処理ｌ
〜で不純物を除去し、さらに　ｐＨ８０に緩衝化（〜だ
後、６０℃で１時間熱風乾燥することによってグルコー
ス異性化繊維をイｉ）だ。

この繊＃、ｌ１２０ｇを切断（〜て恒ン晶槽に浸した内
径１、６　（１ｎφのツノラムに充填し、５ｍｙｖｔの
硫酸マグ不ンウム、３Ｍ／／？の　グルコースを含む結
晶ブドウ糖水浴液からなる　シ、（性液（ｐＴＴ　８ソ
）　７，６６１℃で連成したところ、　１１　ｍ（’／
已・ｈｒの流速でｙ＋ｊ件化率化率５％になった１、こ
の１ＩＩＬ速で連Ｉ・）°１−通ｎｖ、　Ｌ　ノことこ
ろ２　Ｃ１ｌ’ｌ後の異性化率に、Ｊろ９係であった３
、比較実施例１ ヘギ勺メチ１／ンジアミンを用い々い１ゾ外Ｑ１．実施
例１の方法で１１１体をイ１）た＋１　”’ルホリノ」
１（の耽は２、４５　ｍｅｑ／ｐ；であり、含水ルーは
７＋７で・１うった１、実施例１の方θユで、この担体
に酵、Ａ−：を固定化１２．異性化反応を１１なったと
ころ、　１０．５　ｍｅ、／（・・ｍ〜の流速で異性化
率が４５係になつ／こ３．７０１１後の異性化率は２５
チであり、実施例１０木尤明に比べて酵素活性の安定性
がよくなかつ／こ４、実施例２ アミドメチル基を導入し、ピペリジン４容」１を部。

５Ｍヘキザノチレンジアミン２容ＪＪ１部、メタノール
２０容量都からなる液でアミン化する以夕１は実施例１
の方法で本発明の生理活性物質固定化用担体を得た。　
−Ｎ１．Ｉ　（Ｃ１１２１、↑４１１．．　」、（のｉ
ｊｔに４．０．１５冊＋ｑ／ｇ。

ピペリジノコ１（のｊ、ｔＥ　ｉ’；ｊ’、　２．１５
　ｎｕ＝ｒ）／（ｒ、　、含水ｇ２．８であった。実施
例１の方法で、この４１１体に酵素を固定化し、異性化
反応を行なったところ、　１０　ＩＩＩ／’／ｇ・ｂ　
ｒの流速で異性化率が４部％になった３、２０日後の異
性化率は５８％であった７、 比較実施例２ ヘギ勺メヂレンジアミン４−用いないＩ’ｊ　夕１．　
ｋｌ、実施例２の方法で４−１体を？１８た。　　ピペ
リジノＪ１（の量は２、３　ｍｅｑ／ｐ１．含水度ろ６
であつ／コ４．実ＭＩＬ例１の方法で、この」１−１体
に酵素を固定化し、異性化反応を行なったところ、　　
１１　ｍｒ／（７す）ｒの流速で異性化率が４５％に２
Ｈ，つた。２０１１後の異性化率に１，３６％であり、
実施例２の本発明に比べて酵素活性の安定性がよくなか
った。

実施例ろ 組紐状に成型した繊Ｋ、１１を用いるトノ、外（ｒＪ：
実ｈ（ｌｌＩｌ’ｌ　１の方法で本発明の生理活性物ｔ
’（固５Ｊｌ化用担体を？１Ｆだ。　−Ｎ　ｎ　（ａｎ
　２）　６間、Ｊｌ（のｈｆ、　＆：ｆ、０．　ｉ　ｎ
＋ｏｑ／７ｒ　、モルホリノ基の量は２２…Ｏｑ／＋シ
、含水炭Ｕ１−２・９であつｌｃ。

２１− この４Ｌ！体に０．１％グルタルアルデヒドアセトン−
水溶液（１：１）を使用する以外は実施例１の方法で酵
素を固定化した。そして、結晶ブドウ糖水溶液のかわり
に精製ブドウ糖を用いる以外は実施例１の方法で異性化
反応を行なったところ、１２５ｍｅ／ｇ・ｈｒで異性化
率が４０％に々つだ。また、２０１］後の異性化率は２
７％であった。

実施例４ 実施例６の方法で得た４１体をｐＴＴ　８に緩衝化し。

５　ｍ　Ｍ　／ｐの塩化第２鉄を含む６Ｍグルコース水
溶液（ｐＩＩ　８．　Ｏｌ　　１００容量部に加えて、
室温で２時間振とつすることに」：って本発明の陰イオ
ン交換）１（に鉄イオンが配位結合してなる生理活性物
質固定化用ｌ１体を得た。　鉄イオンの結合量は０．２
ｍ０ｑ／ｇであった。この担体に実施例乙の方法で酵素
を固定化し、異性化反応を行なったところ、１２ｒｎ／
’／泊−の流速で異性化率が４０係になった。壕だ。

２０１１後の異性化率は６３％であり、実施例６に比べ
て酵素寿命が一段と延長されたことがわかる。

実施例５ ２２− 間振とつすることに」−って不５Ｉ゛、明の１ガイ３ノ
交換基に鉄イオンがｆ’ｌ’、位結合Ｉ７て斤る生即／
ｌ＋１件物′１′１１・１・１足化用相体を？１トた３
、鉄イオンの結合ｉｉ、’　）’、１．０４７ｍ　ｏ　
ｑ　１０．であつ／ら、この１１１体２部（ｌ（、り／
Ｌ−１−Ｘイノメラーゼ　リーガ卆（Ｉ　Ｔ　−、−Ｉ
　Ｂ　［１［１（凍結１゛１白９１・、固形公約４０％
）３０部より酵λ・８を油出り、　Ａ丁ｌ′Ｉ°４体イ
１１に片を含む懸濁液１８ＯＮＩＩ　（ｐＨ６，り　ｌ
をＩＩＩいる＋−１夕（は実施例６の）Ｊ／、！、で酵
素を固定化１−．　／ｉ＝　、、この繊＆、ｌｌ０２８
ｇを１７Ｊ断して１（ｎ］φの゛ノノラｊ３に／ｊ’、
　ＪＦ　Ｌ、ノ、＋４貿散を６７℃で連成するトノ、り
目１実施１＋ｌｌ　３の／、法で異性化反応をイ「なっ
たところ３７　ｎ’　ｅ／ｌ−・旧のｆイｆｆ汁で異性
化率が４０％になった。−：１−ブｉ、　１　ｉｌ　１
１　ｉｌの５°１１性化率は２８％であった。

実施例６ ５Ｍへキザノチレンンつ′ミノ（１，（、￥　ｉ＋１部
に１．゛Ｃ繊維をアミン化処即する１シタ１．　ｋ＋、
実／Ｊｌｊｉ　１＋ｌＪ　３σ）ノ、法で本発明の生Ｊ
η（活性物質固定化用担体を１１、；／こ１゜）１（ −ＮＨ（ＣＨ２）　６Ｎｌ１２のＩＩｔは０．３　Ｉｎ
（−Ｍ−１／４＋１モル７リノノ１（の量は２．０　ｍ
ｏｑ／ｇ　、含水度は３２であった。さらに、実／ｊ（
！ｊ例５の方法で本発明の陰イオン交換基に鉄イオンが
配位結合１−てなる生理活性物質固定化用相体を？ｊＦ
だ。鉄イオンの結合量は０．５５　ｍｏｑ／ｇであった
。次に実施例５の方法で酵素を固定化し。

ｂ゛１冒〈１化反応をイーｔなったところ、　３２　ｍ
ｅ／ｇ−ｈｒの流速で異性化率が４０係になった。また
１０日後の異性化率ｉｆ　２９　ＤＩ）であった３、実
施例５に比べて。

−↑州（（７，１１２１６ＮＨ２〕１（の量が多くなり
　モルホリノ基の１１；が少なくなると、酵素吸着能が
小さくなり、酵素７占性が若干低下していることがわか
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）　　不溶性ポリモノビニル芳香族化合物に第１級
   アミノ基、（を含む陰イオン交換基（Ａ　）と第２級１
   ）Ｊ、上のアミツノｊ（からなる陰イオン交換基（Ｂ）
   とが結合してなる不溶性陰イオン交換ポリモノビニル芳
   香族化合物（Ｃ）で構成されていることを特徴とする生
   １■１１活性物質固定化川担体。 （２）第１級アミノ基を含む陰イオン交換基（Ａｌの１
   斤が０．０１−１．０　ｍｅｑ／ｇ（Ｃ）である特許請
   求の範囲第（］）項記載の生］ＩＩ活性物質固定化用担
   体。 （３＋ｍ２級以上のアミン基からなる陰イオン交換Ｊ、
   （（Ｂｌの量が１．０　ｍＯｑ／ｇ（ｃ　ｌ以」二であ
   る特許請求の範囲第（１）項記載の生理活性物質固定化
   用担体。 （４）　　不溶性陰イオン交換ポリモノビニル芳香族化
   合物（Ｃ）に鉄イオンを結合せしめてなる特許請求の範
   囲第（１）項記載の生理活性物質固定化月相１一 体。 （５）鉄イオンが０．０５　ｍｅｑ／ｇ（ＣＩ　Ｌ：）
   、−１−結合せしめられてなる特許請求の範囲第（４）
   項記載の生理活性物質固定化用担体、。 （６）　　不溶性ポリモノビニル芳香族化合物に第１級
   アミノ基を含む陰イオン交換基（Δ）と第２級以」二の
   アミノ」１（からなる陰イオン交換３．（（ｎ　）とが
   結合して々る不溶性陰イオン交換ポリモノビニル芳香族
   化合物（Ｃ１で構成されたＪｌｊ体に生理活性物質を接
   触させて固定化するに際し、多１゛１能性蛋白架橋剤を
   適宜の時期に添加接触させることを特徴とする生理活性
   物質の固定化方法。 （７）　　多官能性蛋白架橋剤の接触時期が、生理活性
   物質の接触の後である特＋ｙｌ’　Ｉｎ’ｉ求の範囲第
   （６）項記載の生理活性物質の固定化方法。 （８）担体が鉄イオンを含有し、かつ生理活性物質が酵
   素である特許請求の範囲第（６）　ｌＪ′ｊ記載の生理
   活性物質の固定化方法。 （９＋　　酵ｉがグルコースイソメラーゼである特１１
   ゛請求の範囲第（８）項記載の生理活性物質の固定化方