JPS5827784B2 - アミノ酸誘導体 - Google Patents
アミノ酸誘導体Info
- Publication number
- JPS5827784B2 JPS5827784B2 JP13339378A JP13339378A JPS5827784B2 JP S5827784 B2 JPS5827784 B2 JP S5827784B2 JP 13339378 A JP13339378 A JP 13339378A JP 13339378 A JP13339378 A JP 13339378A JP S5827784 B2 JPS5827784 B2 JP S5827784B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- arginine
- ester
- add
- yield
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
- C07K5/0823—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp and Pro-amino acid; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/30—Naphthol derivatives, e.g. alpha-naphthyl-esters, i.e. alpha-NE, beta-naphthyl-esters, i.e. beta-NE
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は式（Ｉ）で示されるアミノ酸誘導体及びその化
合物を基質として酵素活性を測定する方法に関する。
合物を基質として酵素活性を測定する方法に関する。
（式中、
Ｒ１
は水素、
又はベンゾイル基を表わし、＊
＊Ｒ２は、ナフチル基、又は６−ブロム−２−ナフチル
基を表わす。
基を表わす。
）本発明物質（丁）は新規な化合物であり、酵素活性を
測定するための試験薬として有用な化合物である。
測定するための試験薬として有用な化合物である。
本発明物質（Ｉ）は化合物（ｎ）とアルギニン誘導体（
Ｉｎ）との通常の脱水縮合反応により式（［Ｖ）で示さ
れる化合物とし、次いでアミノ基保護基を除去すること
により製造することができる。
Ｉｎ）との通常の脱水縮合反応により式（［Ｖ）で示さ
れる化合物とし、次いでアミノ基保護基を除去すること
により製造することができる。
式中、Ｒ２はナフチル、又は６−ブロ六＝２−ナフチル
基を表わし、Ｒ３はベンゾイル、又はアミノ基保護基を
表わし、Ｒ４はアミノ基保護基を表わす。
基を表わし、Ｒ３はベンゾイル、又はアミノ基保護基を
表わし、Ｒ４はアミノ基保護基を表わす。
尚、化合物（ｎ）は、Ｃｈｅｍ、 Ｐｈａｒｍ、 Ｂｕ
ｌｌ 、、※※２０巻５６６４〜６６８頁に記載された
化合物を用いるかまたは、（Ｖ）と（ＶＩ）を縮合しく
■）とし、次いで、エステルを水解することによって得
ることができる。
ｌｌ 、、※※２０巻５６６４〜６６８頁に記載された
化合物を用いるかまたは、（Ｖ）と（ＶＩ）を縮合しく
■）とし、次いで、エステルを水解することによって得
ることができる。
（Ｒ３は上記と同様、Ｒ５はアルキル基を表わす。
）アルギニン誘導体←■）は特願昭５３−７５５８１に
記載された化合物を用いるか、または、それに準じた方
法により製造できる。
記載された化合物を用いるか、または、それに準じた方
法により製造できる。
次に上記製造方法を更に詳細に説明する。
化合物（ＩＶ）を製造するにあたっては、化合物（ＩＩ
）及びアルギニン誘導体（ＩＩＩ）を適当な溶媒に溶解
し、ＤＣＣ（ジシクロへキシルカルボジイミド）、ＤＰ
ＰＡ（ジフェニルフォスフォリルアシト）、クロル炭酸
アルキル等、通常用いられるエステル活性化剤を加え、
必要に応じｌ・リエチルアミン等の塩基を加え、かくは
んすることにより製造することができる。
）及びアルギニン誘導体（ＩＩＩ）を適当な溶媒に溶解
し、ＤＣＣ（ジシクロへキシルカルボジイミド）、ＤＰ
ＰＡ（ジフェニルフォスフォリルアシト）、クロル炭酸
アルキル等、通常用いられるエステル活性化剤を加え、
必要に応じｌ・リエチルアミン等の塩基を加え、かくは
んすることにより製造することができる。
使用し得る溶媒は、クロロホルム、ジクロルメタン、ジ
メチルホルムアミド、デトラヒド冶フラン等通常使用さ
れるもので、原料物質を溶解するものであれば良い。
メチルホルムアミド、デトラヒド冶フラン等通常使用さ
れるもので、原料物質を溶解するものであれば良い。
反応温度は０°Ｃ〜４０℃で良い。
反応終了後、通常行われる処理方法により、反応液より
化合物（ＩＶ）を得ることができる。
化合物（ＩＶ）を得ることができる。
すなわち、例えば、ＤＣＣをエステル活性化剤として用
いた場合、析出してくるＤＣＵ （ジシクロヘキシル
尿素）を、ろ過して除き、ろ液に酢酸エチルエステル等
の適当な抽出溶媒を加え、クエン酸水溶液、飽和重そう
水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム等の乾
燥剤で乾燥後、溶媒を留去することにより化合物（■）
を得ることができる。
いた場合、析出してくるＤＣＵ （ジシクロヘキシル
尿素）を、ろ過して除き、ろ液に酢酸エチルエステル等
の適当な抽出溶媒を加え、クエン酸水溶液、飽和重そう
水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウム等の乾
燥剤で乾燥後、溶媒を留去することにより化合物（■）
を得ることができる。
化合物（ＩＶ）より目的化合物（Ｉ）を製造する場合の
アミノ基保護基を除去するには通常の反応でよい。
アミノ基保護基を除去するには通常の反応でよい。
すなわち、例えばアミノ基保護基がベンジルオキシカル
ボニル基の場合、化合物（■）を適当な溶媒に溶解しパ
ラジウム炭素等の触媒で還元的に除去するか、化合物（
ＩＶ）を臭化水素酸酢酸溶液に加え析出する目的化合物
の臭化水素酸塩を汗取することにより得ることができる
。
ボニル基の場合、化合物（■）を適当な溶媒に溶解しパ
ラジウム炭素等の触媒で還元的に除去するか、化合物（
ＩＶ）を臭化水素酸酢酸溶液に加え析出する目的化合物
の臭化水素酸塩を汗取することにより得ることができる
。
本発明の化合物（Ｉ）は、酵素と接触させることにより
基質として働き、一定時間抜酵素により水解されて遊離
したナフトール又は６−ブロム２−ナフト−ルを測定す
ることにより、酵素の活性を測定することが出来る。
基質として働き、一定時間抜酵素により水解されて遊離
したナフトール又は６−ブロム２−ナフト−ルを測定す
ることにより、酵素の活性を測定することが出来る。
酵素の活性を測定するということは酵素製剤の規格、定
量、血中酵素パターンの測定による診断、血中、又は尿
中酵素濃度の測定による診断等の為に非常に重要なこと
である。
量、血中酵素パターンの測定による診断、血中、又は尿
中酵素濃度の測定による診断等の為に非常に重要なこと
である。
従来、酵素活性を測定するためには種々の方法が知られ
ている。
ている。
その一つの方法として、アミノ酸のアルキルエステルを
基質として、酵素と接触させ、そのエステルの氷解の程
度により活性を測定するという方法がある。
基質として、酵素と接触させ、そのエステルの氷解の程
度により活性を測定するという方法がある。
例えば、ヘステリン法として良く知られている方法がそ
の一つである。
の一つである。
これは、酵素とアミノ酸のアルキルエステルを接触させ
、一定時間後に残存するエステル部分をヒドロキシルア
ミンによりヒｌ−’ ｏキサム酸とし、過りロル鉄と反
応させ発色させ、その発色を吸光度として測定し、その
結果より、酵素のエステル氷解能、すなわち、酵素の活
性を測定するという方法である。
、一定時間後に残存するエステル部分をヒドロキシルア
ミンによりヒｌ−’ ｏキサム酸とし、過りロル鉄と反
応させ発色させ、その発色を吸光度として測定し、その
結果より、酵素のエステル氷解能、すなわち、酵素の活
性を測定するという方法である。
その他、アミノ酸のパラニトロアニリドを基質として用
い、その氷解能を指標とする方法などがあるが、これら
の方法では、ある程度の酵素量を必要とし、酵素が低濃
度である場合、又は低活性の酵素の測定には難があった
。
い、その氷解能を指標とする方法などがあるが、これら
の方法では、ある程度の酵素量を必要とし、酵素が低濃
度である場合、又は低活性の酵素の測定には難があった
。
そこで、発明者は、酵素に対してアフイニテイを持ち、
更に定量法が簡便であり、かつ検出感度の良いという三
つの条件を兼ね備えた基質としての化合物を検索するこ
とにより、従来よりも、非常に優れた化合物、及びその
方法を見出すことができた。
更に定量法が簡便であり、かつ検出感度の良いという三
つの条件を兼ね備えた基質としての化合物を検索するこ
とにより、従来よりも、非常に優れた化合物、及びその
方法を見出すことができた。
本発明物質はトリプシン、プラスミン、カリクレイン、
ウロキナーゼ、Ｃ１エステラーゼ、スロンビン等種々の
酵素の優れた基質として作用する。
ウロキナーゼ、Ｃ１エステラーゼ、スロンビン等種々の
酵素の優れた基質として作用する。
本発明を実施するに当っては、酵素と一定量の化合物（
Ｉ）を、適当な緩衝液中で接触させ、一定温度で、一定
時間後に遊離したナフトール又は６ブロム〜２−ナフト
−ルを測定することにより、酵素の活性を測定すること
ができる。
Ｉ）を、適当な緩衝液中で接触させ、一定温度で、一定
時間後に遊離したナフトール又は６ブロム〜２−ナフト
−ルを測定することにより、酵素の活性を測定すること
ができる。
緩衝液はその酵素の至適ｐＨを有する適当な緩衝液でよ
い。
い。
又、反応温度、反応時間ともに適当な一定条件でよいが
、２５〜３７°Ｃで３０分後に測定するのが望ましい。
、２５〜３７°Ｃで３０分後に測定するのが望ましい。
ナフトール又は６−フロム−２−ナフトールを測定する
方法は従来、良く知られたガスクロマトグラフィーまた
は薄層クロマトグラフィー等の物理化学的方法、過りロ
ル鉄反応、ジアゾカップリング反応、ＦＶＢ （ファ
ーストバイオレツ）Ｂソルト）法等の化学的方法のいず
れの方法を使用してもよいが、反応液にＦＶＢ を加え
発色させ分光光度計により吸光度として測定する方法が
その簡便さおよび検出感度においてより好ましい方法で
ある。
方法は従来、良く知られたガスクロマトグラフィーまた
は薄層クロマトグラフィー等の物理化学的方法、過りロ
ル鉄反応、ジアゾカップリング反応、ＦＶＢ （ファ
ーストバイオレツ）Ｂソルト）法等の化学的方法のいず
れの方法を使用してもよいが、反応液にＦＶＢ を加え
発色させ分光光度計により吸光度として測定する方法が
その簡便さおよび検出感度においてより好ましい方法で
ある。
例えばこの方法によりプロリル−フェニルアラニル−ア
ルギニンナフチルエステルを基質として酵素活性を測定
した場合、従来、酵素基質として知うレタペンソイルア
ルギニンエチルエステル、トシルアルギニンメチルエス
テルヲ用い、ヘステリン法により測定した場合に比べ、
高い検出感度を有しており、特にカリクレインに対して
は約１６０倍の検出感度を有していた。
ルギニンナフチルエステルを基質として酵素活性を測定
した場合、従来、酵素基質として知うレタペンソイルア
ルギニンエチルエステル、トシルアルギニンメチルエス
テルヲ用い、ヘステリン法により測定した場合に比べ、
高い検出感度を有しており、特にカリクレインに対して
は約１６０倍の検出感度を有していた。
又、フロリルフェニルアラニルアルギニンパラニトロア
ニリドを基質として測定した場合にくらべ約１５倍の検
出感度を有していた。
ニリドを基質として測定した場合にくらべ約１５倍の検
出感度を有していた。
これらの方法によって測定したナフト−ル、又は６−ブ
ロム−２−ナフト−ルの量が酵素の活性度、又は酵素の
量に相当する。
ロム−２−ナフト−ルの量が酵素の活性度、又は酵素の
量に相当する。
この方法によれば、種々の病態に起因する血中、又は尿
中酵素濃度の変動を見ることができる。
中酵素濃度の変動を見ることができる。
例えば本態性高血圧症の患者と尿中カリクレインの濃度
の間には相関関係があり、その濃度を測定することは本
態性高面圧症の診断となり得るのではないかと言われて
いる。
の間には相関関係があり、その濃度を測定することは本
態性高面圧症の診断となり得るのではないかと言われて
いる。
従来尿中カリフレインの測定法としては
Ｉ ＴＡＭＥ 水解活性による方法
Ｔｏｈｏｋｕ Ｊ、Ｍｅｄ、、 １１６．（１９７５
）。
）。
Ｍａｓａｈｉｄｅ ５ｅｉｎ。
２ 生物学的検定法
Ｔ ｏｈｏｋＩＪ、 Ｊ 、 Ｅｘｐ １Ｍｅｄ 、、
８７（１９６５）。
８７（１９６５）。
Ｋｅｉｓｈｉ Ａｂｅ
３ ラジオイムノアッセイ法
等が一般に知られているが、それらは操作がはんざつ、
バラツキが大きい、高価である、など臨床検査には不都
合な向が多い。
バラツキが大きい、高価である、など臨床検査には不都
合な向が多い。
しかしながら、本発明物質を用いた場合には、少量の尿
で、しかも簡単な操作により尿中カリクレインを測定す
ることができる。
で、しかも簡単な操作により尿中カリクレインを測定す
ることができる。
軍法は単−酵素系における測定のみならず種々の酵素が
含まれた場合の測定にも使用できる。
含まれた場合の測定にも使用できる。
すなわち、尿中や血中の酵素パターンを測定することは
病態の診断の為に興味あることとされていたが従来の方
法によってはそのはんざつさから余り行われていなかっ
た。
病態の診断の為に興味あることとされていたが従来の方
法によってはそのはんざつさから余り行われていなかっ
た。
しかしながら本発明物質を用いることにより容易に行う
ことができる様になった。
ことができる様になった。
例えば尿中に含まれる酵素活性を測定する場合、尿を適
当なプレパラートに添加し、これを電気泳動等により酵
素を分離し、これを本発明物質の溶液に浸し適当な時間
後、更に上記発色試薬を加えることにより、従来見るこ
とができなかった尿中酵素パターンを見ることができる
。
当なプレパラートに添加し、これを電気泳動等により酵
素を分離し、これを本発明物質の溶液に浸し適当な時間
後、更に上記発色試薬を加えることにより、従来見るこ
とができなかった尿中酵素パターンを見ることができる
。
次に実施例を掲げ、更に詳細に説明する。
実施例 Ｉ
Ｌ−７”ロリルーＬ−フェニルアラニル−Ｌ−アルギニ
ン−１−ナフチルエステル塩酸塩の製法ベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−プロリル−Ｌフェニルアラニン３９６
ｍ９、ＮＧ−ｆ−シヘンジルオキシ力ルボニルーＬ−ア
ルギニン−１−ナフチルエステルｌ−１）フロロ酢酸塩
６８２ｒｖをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ ）５ ｍ
ｌに溶かし水冷ドジシクロへギシルカーボジイミド（Ｄ
ＣＣ）２６８ｍ９、ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾル（
ＨＯＢｔ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ） ０．１４ｍ
ｌ！を加え３時間攪拌した後、室温にもどしてさらに２
４時間攪拌する。
ン−１−ナフチルエステル塩酸塩の製法ベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−プロリル−Ｌフェニルアラニン３９６
ｍ９、ＮＧ−ｆ−シヘンジルオキシ力ルボニルーＬ−ア
ルギニン−１−ナフチルエステルｌ−１）フロロ酢酸塩
６８２ｒｖをジメチルホルムアミド（ＤＭＦ ）５ ｍ
ｌに溶かし水冷ドジシクロへギシルカーボジイミド（Ｄ
ＣＣ）２６８ｍ９、ｌ−ヒドロキシベンゾトリアゾル（
ＨＯＢｔ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ） ０．１４ｍ
ｌ！を加え３時間攪拌した後、室温にもどしてさらに２
４時間攪拌する。
反応後析出したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）をろ過
して除き、ろ液に酢酸エチルエステルを加え、１０％ク
エン酸溶液、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後、
無水硫酸マグネシウムで乾燥後溶媒を濃縮することによ
り析出する無色粉末を集める。
して除き、ろ液に酢酸エチルエステルを加え、１０％ク
エン酸溶液、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後、
無水硫酸マグネシウムで乾燥後溶媒を濃縮することによ
り析出する無色粉末を集める。
クロロホルム−エーテルより再結晶する。収量６００■
（収率６３％）融点１６４〜１６７℃。
（収率６３％）融点１６４〜１６７℃。
Ｂｒ
ＩＲν ３３００，２９２５．１７４５、ａＸ
１７１０ １６３０Ｃｒｎ−１
ＮＭＲδｐｐｍ （ＤＭＳＯ−ｄ６）１５〜２．２
（８Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、３．０ （２Ｈ，ｍ ）、４
．０〜４．４ （４Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、４゜７（２Ｈ
１ｂｒｏａｄ ）、４９ （２Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、５
．１（２Ｈ×２、Ｓ）、５．３ （２Ｈ，Ｓ ）、７．
０〜８．４（芳香族プロトン）。
（８Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、３．０ （２Ｈ，ｍ ）、４
．０〜４．４ （４Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、４゜７（２Ｈ
１ｂｒｏａｄ ）、４９ （２Ｈ，ｂｒｏａｄ ）、５
．１（２Ｈ×２、Ｓ）、５．３ （２Ｈ，Ｓ ）、７．
０〜８．４（芳香族プロトン）。
ここで得られたベンジルオキシカルボニル−Ｌプロリル
−Ｌ−フェニルアラニルＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−アルギニン−１ナフチルエステル５０
０■をＤＭＦ １ｏｍｌに溶カシ、１０％パラジウＡ
炭素（Ｐｄ−Ｃ） ２００ｍ？塩酸−ジオキサン溶液（
１１０■ＨＣ１、＃ ） １．０１を加え、水素ガスを
通じながら室温で２時間攪拌する。
−Ｌ−フェニルアラニルＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−アルギニン−１ナフチルエステル５０
０■をＤＭＦ １ｏｍｌに溶カシ、１０％パラジウＡ
炭素（Ｐｄ−Ｃ） ２００ｍ？塩酸−ジオキサン溶液（
１１０■ＨＣ１、＃ ） １．０１を加え、水素ガスを
通じながら室温で２時間攪拌する。
反応後ろ過してパラジウム炭素を除き、母液に無水エー
テル４０ｒｒＬｌを加えると油状物が折出する。
テル４０ｒｒＬｌを加えると油状物が折出する。
上澄液を傾斜して除き、再び無水エーテル４０ｍ１を加
えて攪拌することにより無色粉末を得る。
えて攪拌することにより無色粉末を得る。
２００７ｎ９゜融点８７〜９００収率６１％Ｂｒ
ＩＲν３３５０．１７５０．１６５０ｃＩＩＬ ’ａＸ
＊出発物質、ＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステルトリフロロ酢
酸塩は次のように製造する。
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステルトリフロロ酢
酸塩は次のように製造する。
ＮＧ−４−メトキシベンジルオキシ、ＮＧ−ＮＧジベン
ジルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン（Ｚ、Ｎａｔｕ
ｒｆ ２０ｂ、４２９（１９６５）Ｆ。
ジルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン（Ｚ、Ｎａｔｕ
ｒｆ ２０ｂ、４２９（１９６５）Ｆ。
Ｗｅｙｇａｎｄ 、 Ｅ 、 Ｎ １ｎｔｚ 、 ）
９．１９を無水ピリジン３０ｒＩｌｌに溶解し、１・１
′−ジナフチルフルフィッ）７．９Ｐを加え室温で一昼
夜攪拌する。
９．１９を無水ピリジン３０ｒＩｌｌに溶解し、１・１
′−ジナフチルフルフィッ）７．９Ｐを加え室温で一昼
夜攪拌する。
反応液に酢酸エチルエステルを加え１０％クエン酸溶液
、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥し、減圧乾固する。
、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後無水硫酸マグ
ネシウムで乾燥し、減圧乾固する。
残渣を無水エーテルを加えて洗浄し、淡黄色粘稠な油状
物を得る。
物を得る。
収量９．Ｏｒ収率８２％Ｂｒ
ＩＲν ３４００，１７６０，１７２０１ａＸ
１６９０ｃｒｒＬ−１゜
ＮＭＲδｐｐｍ、 （ＣＤＣ１３） ］、、９ （４
Ｈ，ｍ ）、３．７ （３Ｈ，ｓ ）、４．１ （２Ｈ
，ｍ）、４．８ （ＬＨ，ｍ）、５．１（２ＨＸ２、Ｓ
）、５．２ （２Ｈ，ｓ ）、６．７〜８．０（芳香族
プロトン）。
Ｈ，ｍ ）、３．７ （３Ｈ，ｓ ）、４．１ （２Ｈ
，ｍ）、４．８ （ＬＨ，ｍ）、５．１（２ＨＸ２、Ｓ
）、５．２ （２Ｈ，ｓ ）、６．７〜８．０（芳香族
プロトン）。
ここで得られたＮＧ−４−７トキシベンジルオキシ、Ｎ
Ｇ−ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニルＬ−アルキニン
−１−ナフチルエステル８．０Ｐにトリフロロ酢酸１５
ｍ１を加え水冷下３０分攪拌する。
Ｇ−ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニルＬ−アルキニン
−１−ナフチルエステル８．０Ｐにトリフロロ酢酸１５
ｍ１を加え水冷下３０分攪拌する。
反応後減圧でトリフロロ酢酸を除き残渣に無水エーテル
を加えて溶がし、放置した後析出する無色針高を集める
。
を加えて溶がし、放置した後析出する無色針高を集める
。
収量４．５１収率６１％ 融点１４９〜５１゜
Ｂｒ
ＩＲν ３４００１１７６０，１７２０ａＸ
１６６５Ｃｒ／ｌ Ｏ
ＮＭＲδｐｐｍ （ＣＤＣｌ３モＤＭＳＯ−ｄ６）２
．１ （４Ｈ，ｍ）、４．０ （２Ｈ，ｍ ）、４．５
（ＩＨ，ｍ）、５．１ （２Ｈ，ｓ ）、５．２ （
２Ｈ，Ｓ ）、７．１〜８．０（芳香族プロトン）。
．１ （４Ｈ，ｍ）、４．０ （２Ｈ，ｍ ）、４．５
（ＩＨ，ｍ）、５．１ （２Ｈ，ｓ ）、５．２ （
２Ｈ，Ｓ ）、７．１〜８．０（芳香族プロトン）。
実施例 ２
ヘンソイル−Ｉ、−７”ロリルーＬ−フェニルアラニル
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステル塩酸塩の製法 ペンソイル−Ｌ−７”ロリルーＬ−フェニルアラニン７
５２７ｎ９、ＮＧ、ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステルトリフロロ酢
酸塩１．３６４ＰをＤＭＦ １０ｒＩｌｌに溶かし氷
冷下ＤＣＣ５３５■ＨＯＢｔ２７０■ＴＥＡ、０、２８
ｍｌを加え３時間攪拌した後室温にもどしさらに２４
時間攪拌する。
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステル塩酸塩の製法 ペンソイル−Ｌ−７”ロリルーＬ−フェニルアラニン７
５２７ｎ９、ＮＧ、ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル
−Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステルトリフロロ酢
酸塩１．３６４ＰをＤＭＦ １０ｒＩｌｌに溶かし氷
冷下ＤＣＣ５３５■ＨＯＢｔ２７０■ＴＥＡ、０、２８
ｍｌを加え３時間攪拌した後室温にもどしさらに２４
時間攪拌する。
反応後析出したＤＣＵをろ過して除き、ろ液に酢酸エチ
ルエステルを加え、１０％クエン酸溶液、飽和重そう水
、飽和食塩水で洗浄した後無水硫酸マグネシウムで乾燥
する。
ルエステルを加え、１０％クエン酸溶液、飽和重そう水
、飽和食塩水で洗浄した後無水硫酸マグネシウムで乾燥
する。
溶媒を留去した後残渣を酢酸エチルエステル−エーテル
−ｎ−ヘキサンより再結晶し、無色粉末を得る。
−ｎ−ヘキサンより再結晶し、無色粉末を得る。
収量１．２１’、収率６２％、融点１４０〜１４３℃。
Ｂｒ
ＩＲν ３４００１３３００．１７５０゜ａＸ
１７２０．１６４０．１６１０Ｃｒ／′Ｌ ＯＮＭＲδ
ｐｐｍ （ＣＤＣｔ３）１．６〜２．２ （８Ｈ１ｂ
ｒｏａｄ ）、３．２ （２Ｈ，ｍ）、３．５ （２Ｈ
，ｍ）、４、．０ （２Ｈ，ｍ ）、４．４〜５．０
（３Ｈ，ｍ ）、５．２ （２Ｈ，ｓ、）、５．３ （
２Ｈ，ｓ、）、７．０〜８．０（芳香族プロトン）。
ｐｐｍ （ＣＤＣｔ３）１．６〜２．２ （８Ｈ１ｂ
ｒｏａｄ ）、３．２ （２Ｈ，ｍ）、３．５ （２Ｈ
，ｍ）、４、．０ （２Ｈ，ｍ ）、４．４〜５．０
（３Ｈ，ｍ ）、５．２ （２Ｈ，ｓ、）、５．３ （
２Ｈ，ｓ、）、７．０〜８．０（芳香族プロトン）。
ここで得られたベンゾイル−Ｌ−プロリル−Ｌフェニル
アラニル−ＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステル９６２ｍ９をＤ
ＭＦ １０ｍｌに溶かし、１０％Ｐｄ−Ｃ５００ｍσ
、塩酸−ジオキサン溶液（９８ｍ９ＨＣ１／グ） Ｑ、
５ ｍｌを加え、水素ガスを通じながら室温で３時間
攪拌する。
アラニル−ＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−１−ナフチルエステル９６２ｍ９をＤ
ＭＦ １０ｍｌに溶かし、１０％Ｐｄ−Ｃ５００ｍσ
、塩酸−ジオキサン溶液（９８ｍ９ＨＣ１／グ） Ｑ、
５ ｍｌを加え、水素ガスを通じながら室温で３時間
攪拌する。
反応後ろ過してＰ ｄ−Ｃを除き、母液に無水エーテル
１００ｍ１を加えると油状物が析出する。
１００ｍ１を加えると油状物が析出する。
上澄液を傾斜して除き、再びエーテルを加えて攪拌する
ことにより無色粉末を得る。
ことにより無色粉末を得る。
融点８６〜５０℃ 収量６００ｍ９、収率８７％
Ｂｒ
ＩＲｖ ３６００，１７５０．１６５０ｃｍ−１
ａＸ ＊出発物質、ペンソイル−Ｌ−７”ロリルーＬフェニル
アラニンは次のように製造する。
ａＸ ＊出発物質、ペンソイル−Ｌ−７”ロリルーＬフェニル
アラニンは次のように製造する。
ベンゾイル−Ｌ−プロリン１０．７Ｐ、Ｌ−フェニルア
ラニンエチルエステル塩酸塩１１．５Ｌ？ヲシクロルメ
タン１００ｍ１に溶かし、水冷下ＤＰＰＡ１５．３ ？
、 ＴＥＡ １５ｍｌを加えて一昼夜攪拌する。
ラニンエチルエステル塩酸塩１１．５Ｌ？ヲシクロルメ
タン１００ｍ１に溶かし、水冷下ＤＰＰＡ１５．３ ？
、 ＴＥＡ １５ｍｌを加えて一昼夜攪拌する。
反応液を１０％クエン酸溶液、飽和重そう水、飽和食塩
水で洗浄した後無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を
留去する。
水で洗浄した後無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を
留去する。
残渣を酢酸エチルエステルより再結晶し無色粉末を得る
。
。
収量１２．１’、収率６２％融点１３３〜１３５℃。
ここで得られたベンゾイル−、−Ｌ−プロリル−Ｌフェ
ニルアラニンエチルエステル１２．ＣＩをメタノール１
００ｍ１に溶かしＮ−カセイソーダ−溶液４５ｍ１を加
えて５時間攪拌する。
ニルアラニンエチルエステル１２．ＣＩをメタノール１
００ｍ１に溶かしＮ−カセイソーダ−溶液４５ｍ１を加
えて５時間攪拌する。
低温でメタノールを留去後酢酸エチルエステルと蒸留水
を加え振とうする。
を加え振とうする。
水層を１０％塩酸溶液で弱酸性とし析出する結晶性粉末
を集める。
を集める。
収量１０．（１５ｓ’、収率９５％融点２００〜２０２
℃。
℃。
Ｂｒ
ＩＲν ３３７５．１７３０１１６７０ｃｍ−１ａ
Ｘ 実施例 ３ ペンソイル−Ｌ−７’ロリル＝Ｌ−フェニルアラニル−
Ｌ−フルギニジー６−ブロモー２−ナフチルエステル塩
酸塩の製法 ペンソイル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニルアラニン３７
６ ｍ９、ＮＧ、ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−６−ブロモ−２−ナフチルエステルト
リフロロ酢酸塩７６１ｍ９をＤＭＦｌｏｍｌに溶かし、
氷冷１”Ｄｃｃ ２６７７７１！７、ＨＯＢ ｔ１３
５７′ｎ９、ＴＥＡ ０．１７ｍｌを加え３時間攪拌す
る。
Ｘ 実施例 ３ ペンソイル−Ｌ−７’ロリル＝Ｌ−フェニルアラニル−
Ｌ−フルギニジー６−ブロモー２−ナフチルエステル塩
酸塩の製法 ペンソイル−Ｌ−プロリル−Ｌ−フェニルアラニン３７
６ ｍ９、ＮＧ、ＮＧ−ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−６−ブロモ−２−ナフチルエステルト
リフロロ酢酸塩７６１ｍ９をＤＭＦｌｏｍｌに溶かし、
氷冷１”Ｄｃｃ ２６７７７１！７、ＨＯＢ ｔ１３
５７′ｎ９、ＴＥＡ ０．１７ｍｌを加え３時間攪拌す
る。
室温でさらに２４時間攪拌した後析出したＤＣＵをろ過
して除き、母液に酢酸エステルを加え１０％クエン酸溶
液、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸
マグネシウムで乾燥する。
して除き、母液に酢酸エステルを加え１０％クエン酸溶
液、飽和重そう水、飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸
マグネシウムで乾燥する。
溶媒を留去した後残渣を酢酸エチルエステル−エーテル
−ｎ−ヘギサンより再結晶することにより無色粉末を得
た。
−ｎ−ヘギサンより再結晶することにより無色粉末を得
た。
収量５００ｍ９、収率５０％ 融点９４〜９７℃。
Ｂｒ
ＩＲν ３３７５ １７５０ １．７１０゜ａＸ
１６１０ｃｘ 。
ここで得られたベンゾイル−Ｌ−プロリル−Ｌフェニル
アラニル−ＮＧ−ＮＧ ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−６−ブロモ−２ナフチルエステル０．
５ＰをＤＭＦ ５ｍｌに溶かし、１０％Ｐｄ−Ｃ２５０
ｍ９塩酸−ジオキサン溶液２５ ｏｒｎ９ｃ ９８ｍ９
ＨＣｔ／Ｐ ） ヲ加え水素カスヲ通じながら室温で３
時間攪拌する。
アラニル−ＮＧ−ＮＧ ジベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−アルギニン−６−ブロモ−２ナフチルエステル０．
５ＰをＤＭＦ ５ｍｌに溶かし、１０％Ｐｄ−Ｃ２５０
ｍ９塩酸−ジオキサン溶液２５ ｏｒｎ９ｃ ９８ｍ９
ＨＣｔ／Ｐ ） ヲ加え水素カスヲ通じながら室温で３
時間攪拌する。
反応後ろ過してＰｄ−Ｃを除き母液に無水エーテル１．
００ｍ１を加え析出する無色粉末を集める。
００ｍ１を加え析出する無色粉末を集める。
収量２１０７７ｉｐ収率３８％ 融点８０〜８５℃。
Ｂｒ
ＩＲν ３３５０．１７５０．１６５０ｃｍ ’。
ａＸ
実施例 ４
Ｌ−プロｌＪルーＬ−フェニルアラニル−Ｌ ＝−ｆル
ギニン−６７”ロモー２−ナフチルエステル塩酸塩の製
法 ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−７’０ ！Ｊ ルー
Ｌフェニルアラニン３９６■ ＮＧ・ＮＧ−ジベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−６−フロモー２−
ナフチルエステルトリフロロ酢酸塩７６１ｍ９をＤＭＦ
ｌｏｍｌに溶かし水冷下ＤＣＣ１２６７ｍ９、ＨＯＢｔ
１３５７％、ＴＥＡ ０．１７ ｍｌを加え、３時間
攪拌した後室温にもどしさらに一昼夜攪拌する。
ギニン−６７”ロモー２−ナフチルエステル塩酸塩の製
法 ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−７’０ ！Ｊ ルー
Ｌフェニルアラニン３９６■ ＮＧ・ＮＧ−ジベンジル
オキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−６−フロモー２−
ナフチルエステルトリフロロ酢酸塩７６１ｍ９をＤＭＦ
ｌｏｍｌに溶かし水冷下ＤＣＣ１２６７ｍ９、ＨＯＢｔ
１３５７％、ＴＥＡ ０．１７ ｍｌを加え、３時間
攪拌した後室温にもどしさらに一昼夜攪拌する。
析出するＤＣＵをろ過して除きろ液に酢酸エチルエステ
ルを加えて、１０％クエン酸溶液飽和重そう水、飽和食
塩水で洗浄する。
ルを加えて、１０％クエン酸溶液飽和重そう水、飽和食
塩水で洗浄する。
無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、溶媒を留去する。
残渣にエーテルを加え攪拌することにより無色粉末６１
０■を得る。
０■を得る。
収率５９．５％ 融点１２５〜１３０′Ｃ０
Ｂｒ
ＩＲν ３４００，３３００，１７５０、ａＸ
１７１０．１６５０，１６］、Ｏｃ／ｒｔ ｉ。
ＮＭＲδｐｐｍ （ＣＤＣ１３）１．５〜２．２（８
Ｈ１ｂｒｏａｄ ）、３．１ （２Ｈ，ｍ）、３．４
（２Ｈ，ｍ）、４．０ （３Ｈ，ｍ ）、４．７ （２
Ｈ，ｍ ）、５．１ （２Ｈ，ｓ ）、５．２ （２Ｈ
，ｓ ）、５．３ （２Ｈ，ｓ ）、７．１〜ｓ、ｏ（
芳香族プロトン）。
Ｈ１ｂｒｏａｄ ）、３．１ （２Ｈ，ｍ）、３．４
（２Ｈ，ｍ）、４．０ （３Ｈ，ｍ ）、４．７ （２
Ｈ，ｍ ）、５．１ （２Ｈ，ｓ ）、５．２ （２Ｈ
，ｓ ）、５．３ （２Ｈ，ｓ ）、７．１〜ｓ、ｏ（
芳香族プロトン）。
ここで得られたベンジルオキシカルボニル−Ｌプロリル
−Ｌ〜フェニルアラニルＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−アルギニン−６ブロモー２−ナフチル
エステル５１０ｍ９をＤＭＦ ５７７Ｉｌに溶かし、
１０％Ｐｄ−Ｃ２５０即、塩酸−ジオキサン溶液４４０
■（９８〜ＨＣＩ／７）を加え水素ガスを通じながら室
温で３時間攪拌する。
−Ｌ〜フェニルアラニルＮＧ−ＮＧ−ジベンジルオキシ
カルボニル−Ｌ−アルギニン−６ブロモー２−ナフチル
エステル５１０ｍ９をＤＭＦ ５７７Ｉｌに溶かし、
１０％Ｐｄ−Ｃ２５０即、塩酸−ジオキサン溶液４４０
■（９８〜ＨＣＩ／７）を加え水素ガスを通じながら室
温で３時間攪拌する。
反応後ろ過してＰｄ−Ｃを除き母液に無水エーテル１０
０ｎ７１を加え水冷下−昼夜放置する。
０ｎ７１を加え水冷下−昼夜放置する。
−Ｅ澄液を傾斜して除き残渣に再びエーテルを加えて攪
拌することにより無色粉末２３０■を得る。
拌することにより無色粉末２３０■を得る。
収率６７％融点８０〜８４℃。
ＫＢｒ
ＩＲｖ ３３５０，１７５０，１６５５ＣｒＩ
′Ｌ−０ａＸ 実施例 ５ プロリルフェニルアラニルアルギニンナフチルエステル
を基質としたカリクレインの活性測定法 ５０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０） Ｌ７ｒｎｌに
各種濃度の人尿カリクレイン０．１ ｍｌおよび０．１
５％ラウリル硫酸ナトリウムに溶かしたプロリルフェニ
ルアラニルアルギニンナフチルエステル溶液（１，５ｍ
Ｍ ） ０．２ｍ１．を加え３７℃で３０分間インキュ
ベートしたのち、８％ラウリル硫酸ナトリウム２０μｌ
を加え氷冷する。
′Ｌ−０ａＸ 実施例 ５ プロリルフェニルアラニルアルギニンナフチルエステル
を基質としたカリクレインの活性測定法 ５０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，０） Ｌ７ｒｎｌに
各種濃度の人尿カリクレイン０．１ ｍｌおよび０．１
５％ラウリル硫酸ナトリウムに溶かしたプロリルフェニ
ルアラニルアルギニンナフチルエステル溶液（１，５ｍ
Ｍ ） ０．２ｍ１．を加え３７℃で３０分間インキュ
ベートしたのち、８％ラウリル硫酸ナトリウム２０μｌ
を加え氷冷する。
これに１％ファーストバイオレットＢツルｌ□ （ＦＶ
Ｂ ） ０．２ｍｌを加えｏ’ｃで１０分間放置し更
に氷酢酸２ｍｌを加え発色を分光光度計により吸光度（
５０５ｎｍ）として測定し、酵素により水解されて遊離
したナフｌ−−ルを定量する。
Ｂ ） ０．２ｍｌを加えｏ’ｃで１０分間放置し更
に氷酢酸２ｍｌを加え発色を分光光度計により吸光度（
５０５ｎｍ）として測定し、酵素により水解されて遊離
したナフｌ−−ルを定量する。
対照としてはカリクレインの代りに緩衝液を加えたもの
を用いる。
を用いる。
この遊離したナフトール量が酵素の活性度に相当する。
この方法によって測定したカリクレインの各濃度段階に
おける結果を第１図に示す。
おける結果を第１図に示す。
尚、ベンゾイルプロリルフェニルアラニルアルギニンナ
フチルエステルを用いた場合この方法と同様に、６−ブ
ロム−２−ナフチルエステル体を用いた場合は吸光度は
５３０ｎ７７Ｌで測定する。
フチルエステルを用いた場合この方法と同様に、６−ブ
ロム−２−ナフチルエステル体を用いた場合は吸光度は
５３０ｎ７７Ｌで測定する。
参考例 Ｉ
Ｎα−トシルアルギニンメチルエステルを基質と１〜た
カリクレインの活性測定法 尿中カリクレイン０．５ ｒｎｌにＮα−トシルアルギ
ニンメチルエステル溶液（１０μｍｏｌｅ ／ ０．４
− ｍ１５％ＤＭＳＯ） ０．４ ｍｌ、及びリン酸緩
衝液（ｐＨ７，４）０．１ｍｌを加える。
カリクレインの活性測定法 尿中カリクレイン０．５ ｒｎｌにＮα−トシルアルギ
ニンメチルエステル溶液（１０μｍｏｌｅ ／ ０．４
− ｍ１５％ＤＭＳＯ） ０．４ ｍｌ、及びリン酸緩
衝液（ｐＨ７，４）０．１ｍｌを加える。
３７℃で３０分間インキュベーションした後、ヒドロキ
シルアミン溶液（２Ｍ−ＮＨ２ＯＨ−ＨＣＩおよび３．
５ＭＮａＯＨの等量混合物）１．５ｒｒｌｌ加え室温で
１５分間放置する。
シルアミン溶液（２Ｍ−ＮＨ２ＯＨ−ＨＣＩおよび３．
５ＭＮａＯＨの等量混合物）１．５ｒｒｌｌ加え室温で
１５分間放置する。
これに１８％トリクロル酢酸１ｍｌ、４Ｎ塩酸１ｍｌ、
及び１０％塩化第二鉄１ｍｌを加え充分にかくはんした
後３０００ｒ、ｐ、ｍ、で１０分間遠心分離する。
及び１０％塩化第二鉄１ｍｌを加え充分にかくはんした
後３０００ｒ、ｐ、ｍ、で１０分間遠心分離する。
上澄液の発色を分光光度計により吸光度（５３０ｎｍ）
として測定する。
として測定する。
この値はカリクレインによって水解されずに残った基質
の量に相関するもので酵素の活性は基質のみの値（対照
）から酵素反応を行なった後に得られる値を引いた値に
相当する。
の量に相関するもので酵素の活性は基質のみの値（対照
）から酵素反応を行なった後に得られる値を引いた値に
相当する。
実施例９及び参考例１で測定したカリクレインの各濃度
段階における結果を第１図に示すが前者の方法は後者の
方法に比べ約１６０倍の感度を有していることが分る。
段階における結果を第１図に示すが前者の方法は後者の
方法に比べ約１６０倍の感度を有していることが分る。
第１図中○印は基質としてプロリルフェニルアラニルア
ルギニンナフチルエステルを用い実施例５の方法による
標準曲線を、・印は参考例１の方法による標準曲線を示
す。
ルギニンナフチルエステルを用い実施例５の方法による
標準曲線を、・印は参考例１の方法による標準曲線を示
す。
後者の場合、横軸の単位はカッコ内の数字を用いる。
実施例 ６
人尿中カリクレインの測定
人尿０．１ ｍｌに５０ ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７，
０）１．７ｍｌ、 １．５ｍＭフロリルフェニルアラ
ニルアルギニン０．２ ｍｌを加え３７℃で３０分間イ
ンキュベートする。
０）１．７ｍｌ、 １．５ｍＭフロリルフェニルアラ
ニルアルギニン０．２ ｍｌを加え３７℃で３０分間イ
ンキュベートする。
これを０℃に冷却し１％ＦＶＢ溶液０．２ｗＬｌを加え
０℃で１０分間放置し氷酢酸２ｍ１．を加え発色を分光
光度計により吸光度（５０５ｎｍ）として測定し、酵素
により水解されて遊離したナフトールを定量する。
０℃で１０分間放置し氷酢酸２ｍ１．を加え発色を分光
光度計により吸光度（５０５ｎｍ）として測定し、酵素
により水解されて遊離したナフトールを定量する。
更に対照として熱処理した尿を用い上記と同様の操作を
行い吸光度を測定し吸光度の差（△Ｏ，Ｄ）を求める。
行い吸光度を測定し吸光度の差（△Ｏ，Ｄ）を求める。
この値が人尿中カリクレインの量に相当する。
この方法によって測定した人尿中カリクレインの測定結
果を第２図に示す。
果を第２図に示す。
但し、尿サンプルは８人のヒト（應１〜應８）より採取
したものである。
したものである。
実施例 ７
等電点電気泳動による尿中酵素パターンの測定内径９ｍ
ｍ、長さ１０ｃｒｒＬのガラス管を用い、最終８度２％
のアンフオライン（ｐＨ３，５〜５）を含む４％アクリ
ルアミドゲルカラムを調整する。
ｍ、長さ１０ｃｒｒＬのガラス管を用い、最終８度２％
のアンフオライン（ｐＨ３，５〜５）を含む４％アクリ
ルアミドゲルカラムを調整する。
２．５ｍｌの尿を凍結乾燥し、これを５０μｌの水に溶
解した検体を上記カラムに添加し、２００Ｖで４時間泳
動した後、ゲルを取り出す。
解した検体を上記カラムに添加し、２００Ｖで４時間泳
動した後、ゲルを取り出す。
このゲルを水洗後、０．５ Ｍ ’Ｊン酸緩衝液中に５
分間浸し、更ニフロリルフェニルアラニルアルギニンナ
フチルエステル０．２μｍ、及び１％ＦＶＢ を含む０
．２５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０） １２ｍｌ中に浸
し、３７℃で３０分間インキュベーションする。
分間浸し、更ニフロリルフェニルアラニルアルギニンナ
フチルエステル０．２μｍ、及び１％ＦＶＢ を含む０
．２５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０） １２ｍｌ中に浸
し、３７℃で３０分間インキュベーションする。
以上の方法により尿中酵素パターンを桃色ないし紫色の
帯状として緩察することができる。
帯状として緩察することができる。
第３図に正常人尿を用いた場合の結果を示す。
第１図は標準曲線を、第２図は尿中カリクレインの活性
を、第３図は等電点電気泳動による尿中酵素パターンを
示す。
を、第３図は等電点電気泳動による尿中酵素パターンを
示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 式（Ｉ） （式中、Ｒ１は水素、又はベンゾイル基を表わし、Ｒ２
は、ナフチル基、又は６−ブロム−２−ナフチル基を表
わす。 ）で示されるアミノ酸誘導体。 ２ 式（Ｉ） （式中、Ｒ１は水素、又はベンゾイル基を表わし、Ｒ２
は、ナフチル基、又は６−ブロム−２−ナフチル基を表
わす。 ）で示されるアミノ酸誘導体を基質として酵素と接触さ
せることを特徴とする酵素活性の測定方法。 ３ 式（Ｉ） （式中、Ｒ１は水素、又はベンゾイル基を表わし、Ｒ２
は、ナフチル基、又は６−ブロム−２−ナフチル基を表
わす。 ）で示されるアミノ酸誘導体を基質として酵素と接触さ
せ、一定時間後、酵素により水解されて遊離したナフト
ールまたは６−ブロム−２−ナフトールを測定すること
を特徴とする特許請求の範囲第２項に記載の酵素活性の
測定法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13339378A JPS5827784B2 (ja) | 1978-10-30 | 1978-10-30 | アミノ酸誘導体 |
| FR7926782A FR2440356A1 (fr) | 1978-10-30 | 1979-10-29 | Derives de prolylphenylalanylarginine, leur procede de preparation, et leur utilisation pour mesurer l'activite d'enzymes |
| DE19792943582 DE2943582C2 (de) | 1978-10-30 | 1979-10-29 | L-Prolyl-L-phenylalanyl-L-argininderivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| GB7937424A GB2034718B (en) | 1978-10-30 | 1979-10-29 | Prolyl-phenylalanylarginine derivatives process for their preparation and their use for measuring enzyme activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13339378A JPS5827784B2 (ja) | 1978-10-30 | 1978-10-30 | アミノ酸誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5559151A JPS5559151A (en) | 1980-05-02 |
| JPS5827784B2 true JPS5827784B2 (ja) | 1983-06-11 |
Family
ID=15103689
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13339378A Expired JPS5827784B2 (ja) | 1978-10-30 | 1978-10-30 | アミノ酸誘導体 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5827784B2 (ja) |
| DE (1) | DE2943582C2 (ja) |
| FR (1) | FR2440356A1 (ja) |
| GB (1) | GB2034718B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4335203A (en) * | 1980-07-10 | 1982-06-15 | The Regents Of The University Of California | Method for identifying potential contrast media reactors |
| US4386075A (en) * | 1982-02-17 | 1983-05-31 | Smithkline Beckman Corporation | Renally active tetrapeptides |
| US4387049A (en) * | 1982-02-22 | 1983-06-07 | Smithkline Beckman Corporation | Adamantyl containing peptides |
| JPS6117956A (ja) * | 1984-07-04 | 1986-01-25 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規な尿中カリクレイン測定用基質 |
| CN114184562B (zh) * | 2021-11-19 | 2024-07-26 | 北京赛升药业股份有限公司 | 一种发色底物法测定尿激酶活性的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2527932C2 (de) * | 1974-07-02 | 1983-04-21 | Pentapharm AG, 4052 Basel | Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein |
-
1978
- 1978-10-30 JP JP13339378A patent/JPS5827784B2/ja not_active Expired
-
1979
- 1979-10-29 GB GB7937424A patent/GB2034718B/en not_active Expired
- 1979-10-29 FR FR7926782A patent/FR2440356A1/fr active Granted
- 1979-10-29 DE DE19792943582 patent/DE2943582C2/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2440356A1 (fr) | 1980-05-30 |
| GB2034718B (en) | 1983-01-06 |
| FR2440356B1 (ja) | 1983-11-25 |
| JPS5559151A (en) | 1980-05-02 |
| DE2943582C2 (de) | 1982-11-18 |
| DE2943582A1 (de) | 1980-05-29 |
| GB2034718A (en) | 1980-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1130801A (en) | Agent for the detection of leukocytes in body fluids | |
| US4897444A (en) | Immobilized fluorogenic substrates for enzymes; and processes for their preparation | |
| CA1152494A (en) | Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes | |
| FI85988B (fi) | Screeningsfoerfarande foer gram-negativa bakterier och foer bakteruri orsakad av dessa, i screeningsfoerfarandet anvaendbar enhetlig screeningsanordning och foerfarande foer framstaellning av den. | |
| EP0034586B1 (en) | 4-trifluoromethylcoumarin peptide derivatives and their use in proteinase assays | |
| JPS60227698A (ja) | 白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの存在を測定するための組成物及び試験具 | |
| JPS60256398A (ja) | 試験試料中の白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの存在を測定するための組成物及び試験具 | |
| JPS6241710B2 (ja) | ||
| JPS60252464A (ja) | ヒドロラ−ゼ用の基質およびそれらの製法 | |
| JPS5827784B2 (ja) | アミノ酸誘導体 | |
| US4308202A (en) | Prolylphenylalanylarginine derivatives, process for producing same and method for measuring activity of enzymes using same | |
| US4409140A (en) | Substrates and method for determining enzymes | |
| US4379764A (en) | Phenylalanylarginine derivatives, process for producing same and method for measuring activity of enzymes using same | |
| US4505852A (en) | 7-Amino-4-trifluoromethylquinolone derived substrates and method for determining enzymes and inhibitors | |
| JPS6126917B2 (ja) | ||
| JPS6126918B2 (ja) | ||
| Lan et al. | Activatable endoplasmic reticulum-targeted NIR fluorescent probe with a large Stokes shift for detecting and imaging chymotrypsin | |
| US4292404A (en) | Method for determining the activity of the angiotensin-converting enzyme | |
| JP5016752B2 (ja) | トリプシン基質及び診断具ならびにその使用方法 | |
| JPS5850986B2 (ja) | リジン誘導体 | |
| JPS62126197A (ja) | 新規な血漿キニノゲナーゼ測定用化合物 | |
| GB2140423A (en) | A method capable of determining cathopsin B in the presence of other proteolytic enzymes and compounds useful therefor | |
| JPS62503035A (ja) | 水溶性キサンチリウム誘導体基質 | |
| JPS593989B2 (ja) | チロシン誘導体 | |
| US4950593A (en) | Improved method for assaying proteolytic enzymes |