JPS58224691A - １２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒド及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−
オン−２０−カルブアルデヒド及びその製造法に関する
。

本発明により提供される１２α−ヒドロキシブレブナ−
４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドは公知文
献に未記載の新規化合物でｉｂ、優れた抗炎症作用を有
するプレドニゾン、〜プレドニゾロンに代表されるコル
チコイド系ステロイドの合成原料となる１２α−ヒドロ
キシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンを製造する
丸めの中間体として有用である。

従来、プレドニゾンの製造法としては、デオキシコール
酸を出発原料として２０数段階の工程を経る方法〔エル
・エフ・フイーザー、エム・フイーザー共著；ステロイ
ド（レインホルト社発行、１９５９年）、６３４’−６
４７頁参照〕が知られているが、この方法は用いる試薬
が高価であるうえに工程が長く、工業的実施には必ずし
も適していない０ 本発明者らＬプレドニゾンを製造するためにその有用な
中間体について鋭意検討した結果、１２α−ヒドロキシ
プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒ
ドがデオキシコール酸及び／又はその塩にシュードモナ
ス属に属する特定の細菌を作用させること罠よって容易
に得られ、かつグレドニゾンの合成原料となる１２α−
ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンに簡
単に誘導できることを見出し５本発明に至った〇（上記
式中、Ｒは水素原子、アルカリ金属又はアルカリ土類金
属を示す。） 本発明によれば、デオキシコール酸及び／又はその塩を
基質として１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３
−オン−２０−カルブアルデヒドを生産するシュードモ
ナス属に属〉する細菌を、デオキシコール酸及び／又は
その塩を含む培地に培養することによりｓ１２α−ヒド
ロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２０カルプアル
テヒトヲ高選択率、高収率で得ることができる。

上記のシュードモナス属に属する細菌としては、シュー
ドモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７（Ｐｓｅｕｄｏ
ｍｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ　Ｄ４０１４−Ａ３５７　）
　９株（微工研菌寄第６３２６号）がある。この菌株は
土壌中から採取したシュードモナス・プチダＤ４０１４
（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ　Ｄ　４０１
４　）　菌株（微工研菌寄第６３２５号）に突然変異処
理を施して得られた変異株でめる０ 本発明者らが得たシュードモナス・プチダＤ４０１４薗
株及びシュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７菌
株の菌学的性質を列挙すると次表のとおりである。

上記の表に示した菌学的性質に基づき、シュードモナス
・プチダＤ４０１４菌株及びシュードモナス・プチダＤ
４０１４−Ａ３５７菌株の同定を行なった。シュードモ
ナス・プチダＤ４０１４菌株は、桿菌であること、極鞭
毛を有していること、ダラム染色が陰性であることなど
の顕微鏡的所見並びにオキシダービ反応及びカタラーゼ
反応がともに陽性であること、好気性であること、Ｏ−
Ｆテストの結果が酸化的（０ｘｉｄａｔｉｖｅ　）であ
ることなどの生理学的性質からパージエイズ・マニュア
ル・オプデイターミネイティブ・バクテリオロジー第７
版及び第８版に基づき、シュードモナス属に属する細菌
であると同定した。さらにシュードモナス・グチダＤ４
０１４菌株は、培養液が螢光色を帯びる点、ゼラチンを
液化しない点、３７℃で生育する点、アルギニン・ジヒ
ドロラーゼを生成する点などからシュードモナス属のプ
チダ種に属する細菌であると同定した。また、一般に突
然変異株はその親株と同じ種に属するものと考えられて
おり。

シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７菌株はシ
ュードモナス属のプチダ種に属する細菌であると判定し
た。

本発明による１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−
３−オン−２０−カルブアルデヒドの生産は、デオキシ
コール酸及び／又はその塩を基質として１２α−ヒドロ
キシプレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアル
デヒドを生産するシュードモナス属に属する細菌を、デ
オキシコール酸及び／又はその塩を含む培地に培養する
ことにより行なわれる。デオキシコール酸の塩としては
具体的にはデオキシコール酸のナトリウム、カリウムな
どのアルカリ金属の塩又はカルシウム、マグネシウムな
どのアルカリ土類金属の塩が挙げられる。デオキシコー
ル酸及び／′又はその塩の濃度は通常的１〜２００　ｆ
／１１の範囲でよいが、生産される１２α−ヒドロキシ
プレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒ
ドの収量、培養条件及び操作性などの経済的観点から約
２〜５０９／１の範囲が好ましい。培養方法は原則的に
は一般微生物の好気培養で採用される方法と同じである
が。

通常は液体培地による振盪培養法又は通気攪拌培養法が
用いられる。″培地は上記のデオキシコール酸及び／又
はその塩を基質として１２α−ヒドロキシプレグナ−４
−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドを生産する
シュードモナス属に属する細菌が資化利用できる栄養源
を含有するものであればよい。炭素源としてはデオキシ
コール酸及び／又はその塩を単一炭素源としてもよく、
或いはデオキシコール酸及び／又はその塩にグルコース
、クリセリン、ペプトン、肉エキス、酵母−ｒ−＊スな
どを併用してもよい。また窒素源としては。

例えば硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、燐酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カ
リウムなどの無機窒素源、又はポリペプトン１ペプトン
、肉エキスなどの有機窒素源が用いられる。甘た、この
他に燐酸水素２カリウム、燐酸２水素カリウム、硫酸、
：マグネシウムなどの無機塩類が添加される０培養条件
に特徴はないが１通常２５〜３５℃で１０時間〜７日間
振盪培養又は通気攪拌培養を行なう０ このようにして培養液中に蓄積された１２α−ヒドロキ
シプレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデ
ヒドは、基質のデオキシコール酸又はその塩と比較して
水に対する溶解度が著しく小さく、通常は培養液中に析
出沈澱してくる。と４７）１２α−ヒドロキシプレグナ
−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドを分離
採取するには、沈澱している１２α−ヒドロキンプレグ
ナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドをデ
カンテーションにより浮遊している菌体を含む培養液か
ら分離するか、または浮遊している菌体が沈澱しないよ
うな回転数で遠心分離を行ない。

析出している１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−
３−オン−２０−カルブアルデヒドを沈澱させたのち上
記のデカンテーションにより１２α−ヒドロキシプレグ
ナ−４−エン−３−メン−２０−カルブアルデヒドを分
離する方法が採られる。

沈澱した１２α−ヒドロキシプレグナ−４−ｘ　７−３
−オン−２０−カルブアルデヒドを除去した培養液に含
まれる菌体その他の不溶成分を濾過又は遠心分離などに
より分離除去して得られた培養濾液又は上清に、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムなどの
アルカリを加えてその培養濾液又は上清をアルカリ性と
したのち、上記のアルデヒドを溶解しかつ水と相分離す
る有機溶媒、例えば酢酸エチル、クロロホルム１　クロ
ロホルムとメタノールの混合液などを用いて抽出操作を
行ない１得られた抽出液を集め、これより溶媒を溜去す
ることによって、培養液中に溶解している１２α−ヒド
ロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブア
ルデヒドを回収することができる。この有機溶媒による
抽出操作は培養濾液又は上清についてのみでなく、培養
液そのものについて行なうことができる。上記の方法で
得られた沈澱物又は抽出物中には１２α−ヒドロキシプ
レグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒド
の他には残存基質のデオキシコール酸及び／又はその塩
並びに副生物はほとんど含まれておらず、例えばメタノ
ール水溶液からの再結晶により容易に高純度の１２α−
ヒドロキシプレグナ−４−工ン−３−オン−２０−カル
ブアルデヒドを取得することができる。

本発明により得られる１２α−ヒト°ロキンブレグナー
４−エン−３−オン−２０−カルフ゛アルアヒドは、こ
れを炭酸カリウム、酸化ノ（リウムなどの脱水剤の存在
下にピペリジンと反応させて１２α−ヒドロキシ−２２
−（Ｎ−ビペ＋Ｊジル）ビスツルー４．２０　（２２）
−コラジエン−３−オンとし。

ついでこの生成物をオゾン酸化することにより１２α−
ヒドロキシプレグｆ−４−ｘン−３，２０−ジオンに誘
導できる。

１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２〇−ジ
オンは例えば次の方法によりソ°レドニン゛ンに誘導で
きる。

〔上記式中、　Ｍｅはメチル基を表わし、　Ａｃはアセチル基を表わす。〕

すなわち、１２α−ヒドロキンプレグナ−４−エン−３
，２０−ジオンを三酸化クロムで酸化し、さらにその酸
化生成物を水酸化カリウムの存在下に二酸化セレンで酸
化することによりプレグナ−４゜９（１１）−ジエン−
３，１２，２０−トリオンを得る０このプレグナ−４，
９（１１）−ジエン−３，１２，２０−トリオンを白金
の存在下に水素添加することにより１２α−ヒドロキシ
プレグナ−４，９（１１）−ジエン−３，２０−ジオン
とし、ついでこの生成物に酸性条件下でメタノールを作
用させて１２α−メトキシプレグナ−４，９（１１）−
ジエン−３，２０−ジオンを得、この生成物に塩化水素
を作用させることにより１２−クロロプレグナ−４＋９
（ｌｌ）−ジエン−３，２０−ジオンを得る。この１２
−クロロプレグナ−４，９（ｌ　ｌ□）−ジエン−３，
２０−ジオンを辰酸水素ナトリウムで処理することによ
りプレグナ−４，１１−ジエン−３，２０−ジオンを得
、この生成物に臭素を作用させて１１．　ｌ　２−ジブ
ロモプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンとシ、つい
でこれをクロム酸銀及び三酸化クロムの存在下に加′水
分解することｅこより１２−ブロモプレグナ−４−エン
−３，ｌ　１．２０−　）ジオンを得、この生成物に金
属亜鉛を作用させてプレグナ−４−工ン−３，ｌ　１．
２０−　）ジオンとする。このプレグナ−４−エン−３
，１１，２０−トリオンを無水酢酸で処理することによ
り２０−アセトキシ−４，１７（２０）−ジエン−３，
１１−ジオンを得る。この生成物に過テレフタル酸を作
用させることにより２０−アセトキシ−１７α、２０α
−エポキシプレグナ−４−エン−３，１１−ジオンとし
、これを加水分解して１７α−ヒドロキシプレグナ−４
−エン−３゜１１．２０−）ジオンを得、ついでこの生
成物にヨードを作用させて１７α−ヒドロキシ−２１−
インドプレグナ−４−エン−３，１１，２０−トリオン
を得る。この１７α−ヒドロキシ−２１−インドプレグ
ナ−４−エン−３，１１，２０−）ジオンをアセトン中
で酢酸カリウムで処理することにより１７α−ヒドロキ
シ−２１−アセトキシプレグナ−４−エン−３，ｌ　１
．２０−　）ジオンを得る。ついで、この１７α−ヒド
ロキシ−２１−７セトキシプレグナー４−エン−３，１
１，２０−トリオンにその１位に二重結合を形成し得る
微生物、例えば容易に入手できるアルスロバクタ−・シ
ンブレツク：’＜　Ｉ　ＡＭＩ　６６０　（Ａｒｔｈｒ
ｏｂａｃｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅｘ　ＩＡＭ１６６０　）
菌を通常の発酵方法によって作用させることにより２１
−アセトキシ−プレドニゾンを得、これを加水分解する
ことによりプレドニゾンとすることができる。

以下実施例及び参考例によって本発明をさらに詳細に説
明する。

参考例 シュードモナス・プチダＤ４０１４−Ａ３５７菌株の取
得方法 培地ｌ（組成：デオキシコール酸０．５％、水酸化ナト
リウム０．０５％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．
５１塩化ナトリウム０．５％及び様天１，５チ）のスラ
ントに生育させたシュードモナス・プチダＤ４０１４菌
株の一白金耳を、予め試験管内に準備（〜た培地２（組
成：デオキシコール酸２チ、水酸化ナトリウム（）、　
２　ｑ６．硝酸アンモニウム０．２チ、燐酸２水素カリ
ウム０．１％、燐酸水素２カリウム０，６％、硫酸マグ
ネシウム・７水和物０．０２チ及び酵母エキス０．０２
％）の１０　ｍｌに植菌し、３０℃で１４〜１５時間振
盪培養した。この培養液の０．３　ｍｌを予め試験管に
準備した培地３（組成：デオキシコール酸０．５％、水
酸化ナトリウム０．０５％、”ルコースｏ、ｔ％、硝酸
アンモニウム０．２チ、燐酸２水素カリウム０．１％、
燐酸水素２カリウム０．６％、硫酸マグネシウム・７水
和物０、０２　％及び酵母エキスｏ、ｏ２％）の１ｏｒ
ｎｌに加え、３０℃で８〜９時間培養した。ついで、こ
の対数増殖期にある菌体を０．４５μのメンブレンフィ
ルターで無菌的に濾過集菌し、０．１Ｍ燐酸塩緩衝液（
ＰＨニア、０）２０＋＋＋ｌで洗滌後、同じ緩衝液２５
ｍｅに懸濁させた。これｉ濃度が５０μ？／ｍｌになる
ようにＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジンを添加し、３〜４分放置することにより突然変異処
理を行なった。突然変異処理を施した菌体’ｉ０．４５
μのメンブレンフィルターで濾過集菌し、Ｏ，１Ｍ燐酸
塩緩衝液（…ニア、Ｏ）２０ｍｌで洗滌後、同じ緩衝液
２０ＷＬｌに懸濁した０得られた菌懸濁液を滅菌生理食
塩水で希釈し、それを培地４（組成：デオキシコール酸
０．５％、水酸化ナトリウム０．０５％、硝酸アンモニ
ウム０．２％、燐酸２水素カリウム０．１％、燐酸水素
２カリウム０．６％、硫酸マグネシウム・７水和物０．
０１％。

酵母エキス０．０２％及び寒天１．５％）の寒天平板上
に５００〜１０００個のコロニーを出現させるように塗
布したのち、３０℃で３〜４日間培養した０出現したコ
ロニー中の極小コロニーを培地ｌのスラントに単離した
のち、その−白金耳を予め試験管に準備した培地５（組
成：デオキシコール酸０．２％、水酸化ナトリウム０．
０２％、グルコースｏ、１％、硝酸アンモニウム０．２
　％　、燐酸２水素カリウム０．１％、燐酸水素２カリ
ウム０．６　％　、硫酸マグネシウム・７水和物００２
係及び酵母エキス０．０２％）の１０ｄに植菌し、３０
℃で２４時間振盪培養した。得られたそれぞれの培養液
中の生産物を薄層クロマトグラフィーにより検定し、目
的とする１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−
オン−２０−カルブアルデヒドを選択的に蓄積している
一菌株を見い出し、これをシュードモナス・プチダＤ４
０１４−Ａ３５７と命名した。

実施例１ シュードモナス・プチダＤ　４０１４−Ａ３５７菌株（
微工研菌宵第６３２６号）を次に示す方法で培養した。

デメキンコールｅｏ、２ｙ、　　グルコース０．１ｆ、
硝酸アンモニウム０．２Ｆ、燐酸２水素カリウム０．１
Ｆ、燐酸水素２カリウム０，６ｆ、硫酸マグネシウム・
７水和物０．０２ｆ及び酵母エキス０．０２２に水道水
５０ｍ１を加え、この溶液に１規定の水酸化ナトリウム
を加えて田８．４に調整したのち、さらに水を加えて容
量を１００ｍＪとし、これを培地とした。この培地を５
００ｍ１容坂ロフラスコに入れ、１２０’Ｇで１５分間
、蒸気殺菌を行なった。

予め上記の培地と同じ培地で試験管振盪機にて１日間増
殖させた種菌の１０ｍＡ！（（上記の５００４容坂ロフ
ラスコに添加し、３０℃で２日間振盪培養した。培養後
、遠心分離機により培養中に生じた沈澱物と菌体を集め
、水洗したのち、これにメタノール５０ｒｎｌを加えた
。沈澱物を充分にメタノールに溶解したのち、再度遠心
分離機により上清のメタノール溶液を得た。ロータリー
・エバポレーターでメタノールを留去することによりｔ
１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２
０−カルブアルデヒド６５■を得た。

得られた１２α−ヒドロキンプレグナ−４−エン−３−
オン−２０−カルブアルデヒドの一部をとり、これにメ
タノールを加えて４％溶液とし。

この溶液２５μＡｅミクロボンダパツクＣ−］、　ｓカ
ラムを備えた高速液体クロマトグラ“フィー（米国ウォ
ーターズ社製、ＨＬＣ−ＧＰｅ−２４４型）に注入した
。移動相として田４．０に調整した水／メタノールの３
０／７０容量比の混合液を流速１ｍ１１分′で流し、検
出を屈折率方式で行なった。得られた液体クロマトグラ
フにおける各ピークの面積比を積分針（島津製作所製、
島津クロマトパックＣ−ＲＩＡ）で求め、この面積比か
ら上記の１２α−ヒドロキシプレグナー４−エンー３−
オン−２０−カルブアルデヒドの純度を求めたところ、
９８チであった。

上記で得られた■２α−ヒドロキシプレグナー４−エン
−３−オン−２０−カルブアルデヒドの確認を下記の方
法で行なった。

融点：１７９〜１８１　’Ｃ マススペク）ｎ、ｍ／Ｚ　：　３４４［Ｍ）３２６　［
Ｍ−Ｈ２０］。

３１６［Ｍ−Ｃｏ叶 またｍ／Ｚ　＝　１２４より３−ケト−４−エンの存在
が確認された。

ＣＤα３゜ ＮＭＲスペクト／’　（９０ＭＨｚ　）δＨＭＳ　　’
０．７２（３Ｈ，ｓ）　１８−ＣＨ３ １，１０（３Ｈ，ｄ）　２ｉ　−ＣＨ５１，１５（３Ｈ
，ｓ）　１９−ＣＨ３ ３，９５（ＬＨ，８）１２β−Ｈ′ ５．７０　（ｔｆ（、ｓ）　４−Ｒ ９，４０（１）ｉ、　ｄ）　２２−ＣＨＯ手続補正書（
自発） １、事件の表示 昭和５７年特許願第１０７４４８号 ２、発明の名称 １２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２
０−カルブアルデヒド及びその製造法３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 倉敷市酒津１６２１番地 （１０８）株式会社り　、ラ　し 代表取締１１上野他− ４、代　理　人 倉敷市酒津青／１１１＋２０４５の１ 電話東京０３　（２７７）　３１８２ ６、補正の内容 （１）明細書第３頁第６行の （２）明細書第３頁第６行と第７行の間に次の記載を挿
入する。

［又は （方法−２） （■）」 （９）明細書第３頁第８行（下から第８行）の「示す。

」を「示し　Ｒ１はアルキル基を示す。」に訂正する。

（４）明細書第４頁第４〜５行及び第１９頁第８行の［
微工研菌寄第６３２６号」を「微工研条寄第２０６号」
に訂正する。

（５）　明細書第４頁第７〜８行の「微工研菌寄第６３
２５号」を「微工研条寄第２０５号」建訂正する。

（６）明細書第１２頁第４〜５行の「カルブアルデヒド
は、これを」を「カルブアルデヒドは、（方法−１）こ
れを」に訂正する。

（γ）明細書第３頁第１１行と第１２行の間に次の起重
を挿入する。

［また（方法−２）によれば、１２α−ヒドロキシプレ
グナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドと
一般式（ＩＶ） Ｒ’Ｃ０ＯＨ・・曲（ＩＶ） （式中、Ｒ１はアルキル基を表わす。）で示されるカル
ボン酸又はその反応性誘導体、例えば酸ハライド、酸無
水物などとを常法によシ反応させ石ことにより一般式（
１）で示される１２α−アシルオキシプレグナ−４−エ
ン−３−オン−２０−カルブアルデヒドが得られる。代
表的な反応例として挙ケラれる１２α−ヒドロキシプレ
グナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒドと
一般式（ＦＶ）で示されるカルボン酸のクロライドとの
反応はトリエチルアミン、ピリジンなどの第３ｐアミン
の存在下に行なわれる。この反応は溶媒中で行なうのが
好ましく、溶媒として塩化メチレン、りこの反応は通常
室温で行なうが、必要に応じて約６０℃までの加温下に
行なうこともできる。反応後、反応混合物を希塩酸水、
重曹水、水などで洗滌したのち乾燥し、ついでこれより
低沸点物を留去することにより一般式（Ｉ）で示される
１２α−アシルオキソプレグナ−４−エン−３−オン−
２０−カルブアルデヒドの粗生成物を得る。この粗生成
物をそのまま次の反応に用いることができる。

一般式（Ｉ）で示される１２α−アシルオキシプレグナ
−４−エン−３−オン−２６−カルブアルデヒドとピペ
リジン、ピロリジン、モルホリンなどの第２級アミンと
を反応させることにより一般式（ＩＩ）で示されるエナ
ミンが生成する。第２級アミンは一般式（Ｉ）で示され
る１２α−アシルオキシプレグ＋−４−エン−３−オン
−２０−カルブアルデヒドに対して等モル−２倍モル量
用いる゛６反応中に副生ずる水を、ベンゼン、トルエン
などの水と共沸する溶媒を用いて加熱還流下に反応系か
ら除去する。この反応は特に触媒を要しないが、ｐ−）
ルエンスルホン酸などの触媒の存在下に反応を行なうこ
ともできる。反応後、反応混合物から減圧下に低沸点物
を留去することにより、一般式（ＩＩ）で示されるエナ
ミンの粗生成物が得られる。

この粗生成物をその一！ま次の反応に用いることができ
る。一般式（ＩＩ）で示されるエナミンをオゾン酸化又
は無水クロム酸、ピリジニウムクロルクロメート、重ク
ロム酸ナトリウムなどを用いて酸化することによシ、一
般式（ＩＩＩ）で示される１２α−アシルオキシプレグ
ナ−４−エン−３，２０−ジオンを得ることができる。

なお、無水クロム酸を用いる酸化反応は通常ピリジン溶
媒中で行なう。この場合、一般式（１）で示されるエナ
ミンを溶解させたピリジン溶液に無水クロム酸とピリジ
ンの混合液を徐々に加えるか、又は無水クロム酸とピリ
ジンの混合液に一般式（ＩＩ）で示されるエナミンを溶
解させたピリジン溶液を徐々に加えることにより反応を
行なう。この酸化反応は水冷下ないしは室温下に行なわ
れる。反応後、反応混合物をベンゼン、トルエンなどで
希釈し、これより固形物を濾過により除去したのち、濾
液に希塩酸水を加え１ついでベンゼン、トルエンなどで
抽出し、抽出液から低沸点物を留去することにより、一
般式（ＩＩＩ）で示される１２α−アシルオキシプレグ
ナ−４−エン−３，２０−ジオンの粗生成物が得られる
。この粗生成物を必要に応じてシリカゲルカラムクロマ
トグラフィーによシ精製するか、再結晶法により精製す
ることにより高純度の一般式（Ｉｌｌ）で示される１２
α−アシルオキンブレグナー４−エン−３，２０−ジオ
ンを得ることができる。一般式（Ｉｎ）で示される１２
α−アシルオキシプレグナ−４−ニンー３．２０−ジオ
ンを通常の加水分解反応に付することにより１２α−ヒ
ドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジオンが得ら
れる。例えば、この加水分解反応はメタノール、エタノ
ールなどの溶媒中で水酸化カリウム、水酸化ナトリウム
などの存在下、室温ないし溶媒の還流温度で行なわれる
。反応後、反応混合物を減圧下に濃縮し、ついでベンゼ
ン、トルエンなどで希釈し、水、希塩酸水などで洗滌し
、乾燥したのち、これより低沸点物を留去することによ
シ１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−
ジオンの粗生成物が得られる。この粗生成物は例えば酢
酸エチルなどから再結晶することにより精製することが
できる。」（８）明細書第１６頁第１０行と第１１行と
の間に次の記載を挿入する。

ｒ　　ｔた１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３
，２０−ジオンは次の方法により公知化合物であるプＶ
グナー４．１１　（１２）−ジエン−３，２０−ジオン
を経由してノ・イドロコルチゾン、さらにはプレドニゾ
ロンに誘導できる。

（Ｖ） （上記式中　Ｒ２はアルキル基を表わす。）すなわち、
１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３，２０−ジ
オンを通常のスルホネート化反応に付することにより、
一般式（Ｖ）で示されるスルホネートが得られる。例え
ば、このスルホネート化反応は、１２α−ヒドロキシプ
レグナ−４−エン−３，２０−ジオンをピリジン、ピコ
リン又はこれらとベンゼン、トルエンなどとの混合溶媒
に溶解し、この溶液に一般式（Ｖｌ） Ｒ２ＳＯ２α　　　　・・・・・・（Ｖｌ）（式中　Ｒ
２はアルキル基を表わす。）で示されるスルホン酸クロ
ライドを該１２α−ヒドロキシプレグナ−４−エラー３
，２０−ジオン１ｔｊＬ等モル〜２倍モル量加え、室温
ないしは必要に応じて約８０°Ｃまでの加温下に行なわ
れる。反応後、反応混合物を希塩酸水などにあけ、ベン
ゼンなどで抽出し、抽出液を希塩酸水、型口水、水など
で洗滌し、乾燥したのち、これより低沸点物を留去する
ことにより一般式（Ｖ）で示されるスルホネートの粗生
成物が得られる。この粗生成物を例えば酢酸エチルなど
から再結晶することにより高純度の一般Ｅ（Ｖ）で示さ
れるスルホネートを得ることができる。一般式（Ｖ）で
示されるスルホネートは、これを脱スルホン酸反応に付
することにより、公知化合物であるプレグナ−４，１１
（１２）−ジエン−３，２〇−ジオンに誘導される。こ
の脱スルホン酸反応は通常、酢酸カリウム、塩化リチウ
ム、コリジン、ボタシウムｔ−ブトキサイドなどの反応
助剤（スルホン酸を捕捉することができる化合物）の存
在下に行なわれる。反応助剤の使用量は一般式（Ｖ）で
示されるスルホネートに対して等モル−２０倍モル量で
ある。゛この反応はへキサメチルホスホルトリアミド、
Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの溶媒中で行なうの
が好ましく、通常約８０〜１４０℃の温度下に加熱しで
行なわれる。プレグナ−４゜１１　（１２）−ジエン−
３，２０−ジオンは常法によりハイドロコルデシン、さ
らに・はプレドニゾロンに誘導される。」

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、１２α−ヒドロキシプレ／　す−４−ｘ　：ｙ　−
   ３−オン−２０−カルブアルデヒド。 ２、　デオキシコール酸及び／又はその塩を基質として
   １２α−ヒドロキシプレグナ−４−エン−３−オン−２
   ０−カルブアルデヒドを生産するシュードモナス属に属
   する細菌を、デオキシコール酸及び／又はその塩を含む
   培地に培養することを特徴とする１２α−ヒドロキシプ
   レグナ−４−エン−３−オン−２０−カルブアルデヒド
   の製造法。