JPS58219150A - 共役分子組成物および薬物共役の生成方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は天然に生ずる生物学的活性分子（ｂｉｏ−ａＯ
ｔｉＶ６　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　）　、すなわち薬物（
ｄｒｕｇｓ　）の薬物動態的（ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎ
ｅｔｉｏ　）　、薬理学的および／または効力（ｐｏｔ
８ｎ０ｙ）特性Ｐ変えるために、生物学的活性分子また
は該分子の誘導体を有機キャリヤーと結合（ｃｏｕｐｌ
ｉｎｇ　）することに関する。この結合は、天然に生ず
る薬物または誘導体をキャリヤーに結合する適当なスペ
ーサー成分（５ｐａｃｅｒ　ｍｏｉｅｔｙ　）を存在さ
せるのが好ましい。

このために、薬物誘導体はキャリヤーに共有的に結合す
る。キャリヤーはそれ自体生物学的活性であるが、しか
し最も一般的には生体内において生物学的に許容さねつ
る任意の広範囲にわたる有機部分（０’ｒｇａｎｉｏ　
ｍｏｉｅｔｉｅｓ　ｌ　”ｔ’ある。ヘフナトハキャリ
ャーとして特に適当であ、る。

発明の従来技術 従来において、天然に生ずる生物学的活性分子の生物学
的活性な変化および／または変性させるための多く研究
が多数の製薬者および化学者によって行われている。こ
れらの研究では、いずれも　　　′生物学的活性分子の
変化または変性において特定生物学的活性を高めること
、生物学的活性゛を長くすること、毒作用を減少するこ
と、副作用を軽減または除去すること、生物学的活性の
範囲を狭くすること、または生物学的特異性を変化する
ことについて試みられている。従来の研究においては、
生物学的活性分子の化学的変性に関する研究が生物学的
活性分子の活性の有効的作用について行わされている。

多くの研究では生物学的活性分子Ｃ薬物）ｒｔ生物学的
活性を変性する目的のためにある種の夕不プの生物学的
に許容しつるキャリヤーに共有結合する研究を゛行って
いる。このために、キャリヤー　　　　゛は薬物に対し
てその活性の強度に影響を及げすこと、活性度の効力な
短くまたは長くすること、活性度を再指向する（　ｒｅ
ｄｉｒｅｃｔ　）こと、および／または副作用を軽減す
ることが予想されている。

他方において、生物学的活性分子の一部として結合する
キャリヤーは生体内環境において変性薬物の活性および
許容性に影Ｗ１２及ぼす多数の付加的要数を導入する。

キャリヤーは生物学的活性を妨害し、すなわち、その正
常受体に結合する薬理作用能力（ｐｈａｒｍａｏｏｐｈ
ｏｒｅ’ｓ　ａｂｉｌｉｔｙ　）　’Ｅ妨げ；またはキ
ャリヤー自体は薬理作用の生物学的活性に対する抵抗作
用を示し；またはキャリヤーは抗原ニナリ、宿主免疫系
（ｈｏｓｔ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　）等からの
応答を援用することができる。このために、有用でかつ
許容しつる薬物−キャリヤーシステムの選択および調製
には多くの問題が潜在的に存在する。それにもかかわら
ず、薬物変性技術を利用する潜在的利益についてはこの
分野において常に研究さねて来ている。

こ＼に使用する用語の「薬物（ｄｒｕｇ　ｌ　Ｊとは特
有の生物学的活性を有する任意の分子単位（ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ　ｅｎｔ：ｔｔｙ　）　、例えばホＡｔ　％　
＞　ｆ意味スル。ｔ＝り、用語の「薬理作用ｔ　ｐｌａ
ｒｍａｃｏｐ、ｈｏｒｅ　）Ｊとは薬物分子の生物学的
活性または結合位置部（ｂｉｎｄｉｎｇ　５ｉｔｅ　ｐ
ｏｒｔｉｏｎ　）を意味する０また１用語の［協同作用
物（ｃｏｎｇｅｎｅｒ　）　Ｊとは化学的にｇ性して機
能化誘導体（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄｄｅｒｉｖ
ａｔｉｖｅ　）を形成する分子構造を有する薬物を意味
する。また、用語の［キャリヤー（ｃａｒｒｉｅｒ　）
Ｊとは生理学的に許容しうる分子構造、例えば薬物にそ
の協同作用物の形態で共有的に結合するのに用いるペプ
チドを意味する。また、用語の「スペーサー（５ｐａｃ
ｅｒ　）　Ｊとは薬物構造を変性してキャリヤーのすぐ
近くからの薬理作用を除去する架橋化学結合を意味する
。スペーサはその末端に付加する官能基な有し薬物をキ
ャリヤーに付着しやすくする。薬争＋付着キャリヤーお
よび結合官能基は協同作用物を含んでいる。薬物はスペ
ーサーおよび結合官能基を介してキャリヤーに結合して
「共役（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　）　Ｊを形成する。他の
用語は次の記載において必要に応じて規宇する。

受体において結合し、かつ生物学的活性を刺激０する能
力を失うことなくキャリヤーに対する共有結合を介しで
ある生物学的活性分子の薬理学的特性を変えつることが
多くの研究者によって報告されている。ドナルマ（Ｄｏ
ｎａｒｕｍａ　）氏はかによる論文「重合性薬物（Ｐｏ
ｌｙｍｅｒｉｃ　Ｄｒｕｇ８　）　Ｊ　７　力テミック
プレス社出版、ニューヨーク、１９７８年ｉクレコリア
デス氏（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ　）による「生物学お
よび医薬における薬物キャリヤー」アカデミツクブレス
社出版、ロンドン、１９７９年；リンクｘ　Ｙ　Ａ／　
ｙ　（Ｒｉｎｇｓｄｏｒｆ　）氏による論文「ジャーナ
ル　オブ　ポリマー　サイエンス　シンポジウムＪＡ５
１．１８５〜１１５８（１９）５　）；　ドナルマ氏に
よる論文「プルブレス　イン　ポリマーサイエンス（Ｐ
ｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｐｏｌｙｍｅｒ　５ｃｉｅｎｃ
ｅ　）　Ｊ４．１〜２６（１９７５１；およびバズ（Ｂ
ｉｔＺ　）氏の論文［了ドバンシス　オプ　ポリマー　
サイｘ　＞　ｘ　（Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｐｏｌｙ
ｍｅｒ　Ｑｏｉｅｎｃｅ　）　Ｊ　２　ｓ　。

２５〜Ｉｓ８　（１９）７）には天然または合成の可溶
性または不溶性重合体に共有的に結合する薬物、の多数
の例が記載している。例えば、ウニイナー（Ｗｅｉｎｅ
ｒ　）氏およびジｋ　ｌ　ハ（Ｚｉｌｋｈａ　）氏によ
る論文「ザ　ジャーナル　オブ　メデシナル　ケミス　
　ト　リ　（Ｔｈｅ　　、ｙｏｕｒｎａｌ　　ｏｆ　Ｍ
ｅｄｉｃｉｎａｌ　　Ｏｈｅｍ土５ｔｒｙ　　）Ｊ１６
．５’１８〜５７４（１９１８）には、局所麻酔薬；プ
リカインのポリエチレンオキシドへの付着について記載
している。共役は活性を生物学的に残留し、長い活性持
続時間を有することは確められている。ゴデ了Ｉ　Ｇｏ
ｄｅａｕ　）氏ほかによる論文「ザ　プロシーデングス
　オプ　ザ　ナショナル　アカデミ　オブ　サイエンセ
ス　ＵＳＡ」７５．２８５８〜２８Ｂ？（１９７８）に
はポリエチレンオキシドに類似のプシゲステｐンを結合
することが報告されている。共役は活性を保有して卵母
細胞部位における熟成を誘発する。リングスドルフ氏ほ
かによる論文「デ　マク四モレキュラヘミ（Ｄｉｅ　Ｍ
ａｋｒｏｍｏｌｅｏｕｌａｒｅ　Ｏｈｅｍｉａ　）　Ｊ
】フッ、７４１〜７４６（１９７６）には１−７ダマン
タンアミンのポリメタクリレート誘導体における抗ウィ
ルス性活！について記載されている６化学構造の理由か
らカテコラミンとして知られている交感神経作用ホルモ
ングループはキャリヤ一部分に付着するために適当な薬
物である生物学的活性化合物のクラスを形成する。カテ
コラミンに対する受体は細胞膜の外面上に位置し、５か
かるホルモンのキャリヤーに付着する観察生物学的作用
は共役分子（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　
）の複合体膜輸送現象または食菌作用に影響または併有
する必要がない。カテコラミンの共有共役１　ｃｏｖａ
ｌｅｎｔｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ　）のためにカテコラミ
ン受体部位をそのまま達成することができる。

他方において、カテコラミン自体は速やかな全身系欠乏
、組織特異性の不足から生ずる問題、およびキャリヤ一
部分に付着するためのカンジダシー　（ｃａｎｄｉｄａ
ｃｙ　）を高める薬物に対する応答性の減少の如き二三
の臨床的制限を有している。キャリヤー付着カテコラミ
ンは酵素によって容易に劣化しないようにできること、
およびキャリヤーはまた著しい特異性を薬物作用に付与
できることが予想されている。

関連する構造を有し、かつ上述する類似制御！を受ける
他の薬物はまたキャリヤーに共有付着するために適当な
カンジダシー（ｃａｎｃｌｉｄａｔｅｓ　）である。こ
れらの薬物はドパミン、フェニレフリン、およびアンフ
ェタミン、エアニドリンの如き他の交感神経作用薬物お
よび関連する薬物；またはヒスタミン、５−ヒトｐキシ
トップタミン（七ｐトニン）、プロスタグランジンおよ
び関連する化合物を含む、いわゆるオータコイドを包含
する。

おもなカテコラミンホルモンの化学構造を次に示す； ＯＨ 式中、Ｒは−Ｈ（ノルエピネフリン）　ｉ　−０Ｈ８（
エピネフリン）；および−〇）Ｉ（ＯＨ，ｌ、　（イソ
プ四テレノール）を示すことができる。

また、主としてβ８作用薬（ａｇｏｎｉｓｔｓ　ｌ　（
腺、平滑筋、肺）としての生理学的作用を示すカテコラ
ミンに極めて類似する多くの化合物がある。こ・の関連
化合物としては次の構造式を有するレゾルシノールアミ
ン： ＯＨ ｔｔ ｃ式中、Ｒは一０Ｒ（ＯＨ，）、　（メタプロテレノー
ル）。

よび−０（ＯＨ，）８１テルブタリン）を示すことがで
き）；および 次の構造式を有するサリゲニン誘導体：Ｈ 便宜上、カテコラミンを移線する場合にはすべての関連
化合物を包含することを意味する。

他の交感神経作用薬物は次の構造式を有する化・合物な
包含する： おもなオータコイドは次の構造式を有する化合物を包含
する： ノルエピネフリンは第一フェネチルアミンであり、エピ
ネフリンはそのＮ−メチル誘導体である。

イソプルテレノールは選択的β−アドレナリン作用性活
性を有するエピネフリンの合成Ｎ−イソプシビル類似物
である。すべての場合において、フェニル環はオルト配
向にヒドロキシル基を有してイル〔カテコール）。塩基
性カテコラミンホルモ、ンは平滑筋組織の収縮Ｃα−ア
ドレナリン作用性応答）；および平滑筋組織の弛緩（β
−アドレナリン作用性応答）に関連する。また、カテコ
ラミンは交感神経系を刺激し、内分泌−心１ｉｎｈ管お
よび腎臓機能の変調のための臨床的に有用な薬物である
。ある種のカテコラミンホルモン、例えばイソプルテレ
ノールは気管支収縮薬、心臓刺激薬等として作用する。

他の関連する交感神経作用薬物は末梢および心臓血管の
α−およびβ−アドレナリン作用性応答に作用する種々
の作用；代謝作用ｉおよび中枢神経系における作用を有
している。また、オータコイドは類似する広範囲の作用
を有している。例えば、ヒスタミンは気管支および消化
管における平滑筋の収縮を刺激し、および毛細血管にお
ける平滑筋を弛緩し、並びに胃酸の生成を刺激しおよび
種々の他の外分泌物を誘発する。６−ヒドｐキシぼりブ
タミン（七ｐトニン）は心臓血管系、呼吸系および胃腸
系における種々の作用に応答する。

プルスタブランジンは血管拡張；小板凝集の抑制、およ
び平滑筋、中枢神経系、内分泌および代謝作用の収縮ま
たは弛緩を包含する多くの逆作用を有する。

カテコラミンは二三の経路によって代謝的に不活性化し
、その結果として生体内において短い作用持続期間を有
している。カナフール０酵素チル転移酵緊は８つの位置
におけるヒドロキシル基をメチル化し、生成物を不溶性
にする。また、同じヒドロキシル基のスルボン化は、経
口投与後における不活性化を考慮して生体内、主として
腸において生ずる。また、カテコラミンは酵素−および
非酵紫−酸化生成アドレノクｐ−ムおよび他の不活性種
に対して不安定である。

カテコラミンのように、また他の交感神経作用薬物およ
びオータコイドは、薬勢としての臨床的使用を著しく制
限する生体内における類似接合代１謝不活性化プロセス
を受ける。

上述する生体内制限のためにζ゛上述るカテコラミンホ
ルモンおよび他の関連薬物は＊　−？　ＩＪ　−？　一
部分に対する共有結合を介して変性する最も重要、なカ
ンジダートである。

カテコラミンホルモンは多孔性ガラスピーズ上に固定さ
れている（　ｉｍｍｏｂｉｂｉｚｅｄ　）　（ｌｘプラ
ン（Ｋａｐｌａｎ　１　氏ほか「プロシーデングス　オ
ブ　ザナショナル　アカデミ　オブ　サイエンセスＵＳ
ＡＪ６９．１１４１〜］１４１Ｓ１１９フ２　）　；　
　「フ。

シーデングス　オプ　ザ　ナショナル　アカデミオブ　
サイエンセスＵＳムＪ７０．１２１４〜１２１フ（１９
７８）；　「プｐシーデングス　オブ　ザ　ナショナル
　アカデミ　オプ　サイエンセスＵＳＡ」７２．８２４
〜８２８（１９７５１；および「メソーヅ　イン　エン
ジモロジイ（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌｏ
ｇｙ　）　Ｊ　ａ　ｓ　、　］　８　ｏ　〜１８６（１
９）４）アカデミツクプレス）。かかるホルモンは了リ
ールアミンガラス上にジアゾ化を介して結合している。

薬物を結合したガラスは麻酔した犬およびひな胚（ｃｈ
ｉｃｋ　ｅｍｂｒｙｏｓ　）　ｋ：おける心搏度数を高
めるおよび培養神経膠腫瘍細胞（ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｇ
ｌｉａｌ　ｔｕｍｏｒ　０ｅｌｌｓ　＋　ニおける環状
　　　　　　□五ＭＰ生成を刺激する激しい能力を示す
。また１、これらの固定カテコラミンは同程度収縮する
ネコの乳頭筋における陽性変力性作用を有するＯガラス
ピーズに対する結合はホルモン環構造に付着するアリー
ルアゾ基を介して生ずる。観察生物学的活性は共°有的
に結合したホルモン−ガラス種によるものであるけれど
も、実際上ホルモンは多孔性ガラスから若干共役解除（
ｄｅｃｏｕｐｌｉｎｇ　Ｉされている。このために、共
役解除ホルモンは観察生物学的作用を生ずるのに有利で
ある。

ある研究者Ｃメルモン（Ｍｅｌｍｏｎ　）氏はか「ジャ
ーナル　オプ　クリニカル　インベステイゲーション（
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　ＯｍｅＩｓ
ｔｉｇａｔｉｏｎ　）　Ｊ５８．２２〜８０（１９７８
）；シアー（５ｈｅａｒ　）氏はか「ジャーナル　オプ
　ビオロジカル　ケミスト　　　リ　　（Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　　　ｏｆ　　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ　　　）　　Ｊ２５１．７５７２〜７６７６（
１９７６）ｉボーン（ｐｏｏｎ　）　氏はか［モレキュ
ラ　）了−マコロシイ（ＭＯ１８０ｕｌａｒ　ｐｈａｒ
ｍａａｏｌｏｇｙ　）　Ｊ　（１９７７）はセフ了ロー
ス（５ｅｐｈａｒｏｓｅ　）上にカテコラミンおよび他
のオータコイドをアミ７基を介しておよ、び受体を有す
るリンパ球に対する親和力としてランダムコーポリペプ
チド系および蛋白質を介して固定することを報告してい
る。ホルモンに応答する細胞は支持体に結合し、競合培
抗薬（ｃａｏｐｅｔｉｔｉｖｅａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ
　）によりまたはホルモンの高濃度に・。

より除去することができる。

β−作用薬および培抗薬およびオータコイドの可溶性共
役については次の文献に記載されている；ビサ（Ｐｉｔ
ｈａ　）氏はか「プｐシーデングス　オプザ　ナショナ
ル　アカデミ　オプ　サイエンセス１（）ＵＳＡＪ？？
、２２１９　〜２！Ｓ’８（１９８０）；ヘルラ＞　Ｊ
ｌ’　−（Ｖｅｒｌａｎｄｅｒ　１氏ほか「フロシーデ
ングス　オプ　ザ　ナショナル　アカデミ　オブサイエ
ンセスＵＳＡＪ　）８．１００９〜１０１２（１９７６
）ｉベンター（ｖｅｎｔｅｒ　）氏はか「ぎリメリツク
　デリバリ−システム、ミドランドマクロモレキュラ　
シンポジウム（Ｐｏｌｙｍｅｒ土０Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　
Ｓｙｓｔｅｍｓ　、　Ｍｉｄｌａｎｄ　Ｍａｏｒｏｍｏ
ｌｅｏｕｌａｒＳｙｍｐ０８１ｕｍ　　）　　Ａ　　５
　　、　２　８　７〜２１５０（１９７ｍｌｌボードマ
ン　Ｇｏｏｃｌｍａｎ　）氏はか「ジャーナル　オプ　
マク四モレキュラ　サイエンス−ケミストリ」ｌＡ１８
．５２９〜５４８　（１９）９）；ヒュ（Ｈｕ氏はか［
モレキュラ　ファーマコロジイＪ１４゜２８）〜２４５
（１９７７１７メルモン氏はか「モレキュラ　）了−マ
コロシイＪ　１２．７０１〜７１０（１９７６）ｉおよ
びウニインスティン氏はか「ジャーナル　オプ　クリニ
カル　インベステイゲーションＪ５２，１８４９〜１８
６Ｂ（１９７８１゜ペルランダー氏およびボードマン氏
の研究および両者共同の研究において、イソプロテレノ
ールは多孔性ガラス結合において用いる同じ化学手段に
よってランダムコーボリペフナトに結合していたことを
確めている。ヒドロキシプロピルグルタミンおよびｐ−
アミノフェニルアラニンを含有するランダム共重合体は
イソプロテレノールとジアゾ化し、結合していた。ホル
モンはジアゾ基を介してペプチドに結合している。ジア
ゾ基はカテコールｌｌｌ１ｖｌｔ造の６位炭素において
ホルモンと結合している。この結合ホルモンーアゾーペ
プチド構造は生物学的活性および長期間にゎた、る生物
学的作用を示している。

メルモン氏はか「モレキュラ　）了−マコロジ」１２．
７０１〜７１０（１９７６）および「ジャーナル　オプ
　クリニカル　インベスティゲーションｊ上２．１Ｂ４
９〜１８６１　（１９１Ｂ　）には、カテコラミンおよ
びオータコイドをフルツミンに、またはアラニンおよび
チロシンのランダム共重合体に結合したカテコラミン共
役について報告している。ノルエピネフリンは二官能剤
、グルタルアル亭ヒトとの縮合によってキャリヤーの第
一アミンに結合している。生成ジイミンは水素化硼素ナ
トリウムで二置換ジアミンに還元している。

しかしながら、この手段による結合は単一生成、物を生
じない。同じタイプの２種の薬物は互いに結合でき、ま
た２種のキャリヤーを共に接合することができる。この
ために、かがる結合反応における所望の共役の生成は極
めて低い。生成共役の構造は予言することができない。

すべての従来において報告されたカテコラミン共役では
生成物の収量が低く、このためにこの技、術は経済的で
なく、また反応生成物は共役または非共役の［混合物（
ｇｅｍｉｓｃｈ　）　Ｊを生じ、もし共役の場合にはそ
の化学構造は予言できなくはないが、決定するのが極め
て困難である。従って、好収率でかつ予言できる特走化
学構造を有する共役を生成する技術の開発が望まれてい
るが、しかしまだ薬物成分の少なくとも１＠の所望とす
る生物学的活性が保有されおよび／または示されている
のにすぎない。

本発明は薬物−キャリヤー共役、特に化学的に正確に規
定されたキャリヤ一部分に付着した生物学的活性なカテ
コラミンホルモン、関連する交感神経作用薬物およびオ
ータコイドの共役に関する６正確に規定できるキャリヤ
ー芦よび共役を生成する方法を用いることから、在学作
用が十分に明らかである共役の結果、これらの生物学的
活性を容易に理解することができる。正確に規定された
キャリヤーから誘導する本発明の共役は不純物な精、製
および検出するのに効果的な方法を用いることができる
。

特に、本発明においては機能化薬物（ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ａｌｉＸＢｌｄｒｕｇ　）　（協同作用物）、例えばカ
テコラミンホルモン誘導体をキャリヤー分子、例えばペ
プチドに共有結合によって結合する共役１Ｅ−形成する
ことを包含している。官能スペーサーは薬物におよびキ
ャリヤーに共有結合するために用いるが、しかし薬物の
薬理学的特性を妨げないようにする。また、スペーサー
はキャリヤーと化学的に安定な結合を形成し、かつ共役
な容易に得ることができるようにする。

本発明における共役は次に示す式によって容易に示すこ
とができる。

上記式中、 Ｓは薬物に付着するスペーサー基を示す；Ｆは薬物−８
−Ｆが協同作用物からなるスペーサーに付着する官能基
を示す； （＋　１１ Ｆ′は協同作用物を結合するアミノ酸残基のキャリヤー
側鎖Ｙ′に付着する官能基を示し、この官能基Ｆ″は官
能基Ｆと反応する； ２は反応基ＦおよびＦ″を示し、これによって協同作用
物はキャリヤーに結合する； ムおよびＢはアミノ酸残基が予じめ示す順序（５ｅｑｕ
ｅｎｃｅｓ　）と同一かまたは異にするオリゴペプチド
プルツクを示す； Ｃは協同作用物を結合するアミノ酸残基を示す；Ｘはア
ミンブロッキング基または−Ｈを示す；Ｘ″はカルボキ
シルブロッキング基またバー　Ｈｆ示す； Ｙは普通のアミノ酸残基の側鎖を示す；Ｙ″は協同作用
物を結合するアミノ酸残基における側鎖を示す； ａ−ｂ、ａメｂ、ａまたはｂは０または任意の小さい整
数を示すｉおよび ｍは１．２．８等の数を示す。

上述する一般構造式から明らかなように、薬物はスペー
サーを介して結合し、官能基部分２がキャリヤーペプチ
ドム−０−ＢのＯアミノ酸残基側　　　　□鎖Ｙ′に反
応する。キャリヤーは単分散ペプチドからなり、この場
合プ胃ツクムおよびＢけホモーオ・リボペプチドブロッ
クにすることができ、アミノ酸残基は同一にするかまた
は予定順序において二三異なるアミノ酸残基な交互に位
置することができる。特定アミノ酸残基Ｃはペプチド鎖
における予定位置に位置する。単一アミノ酸残基からな
るアミノ酸残基Ｃはキャリヤーに付着させる特定の協同
作用物と反応するように選定する。

また、ペプチドキャリャープｐツクム、ＢおよびＣは同
一ブロックム、Ｂおよびａと結合して高められた大きい
分子量のキャリヤーペプチド、例えば〔ム一〇−Ｂ）ｍ
　（Ａ−０−Ｂ）ｎ（こ−にｍ−１，２，２１−−一お
よびｎ−０，１＋２＊８−ｍ−を示し、ペプチド鎖にお
けるプνツクム、ＢおよびＣの順序は任意所望の順序に
することができる）を形成することができる。また、ペ
プチドブロックＡ−０−Ｂは天然に生ずるペプチドまた
は蛋白質の如き規定されたペプチド順序りに結合するこ
とができる。このために、単分散ペプチドの任意所望の
分子量または順序は共役のキャリヤ一部分として用いる
ことができる。

また、キャリヤーは単一ブロックドアミノ酸残基（ｓｉ
ｎｇｌｅ　ｂｌｏａｋｅｄ　ａｍｉｎｓ　ａｏｉｄ　ｒ
ｅｓｉｄｕｅ　）　Ｏノみから形成することができる。

アミノ酸残基の数の選択およびその同一性については後
で説明する。

しかしながら、一般的に云へば、２Ｘ１０”〜】０４ダ
ルトンの範囲の分子量を有するキャリヤ一部分は生体内
における第１の生物学的活性を維持するのに最も適当で
ある。これにもかかわらず　］　０１１ダルトンまたは
これ以上のキャリヤー分子量を本発明の共役に用いるこ
とができる。

また、天然に生ずる単分散ペプチドは合成単分散キャリ
ヤーについてすでに記載するように薬物に対するキャリ
ヤーとして用いることができる。

コツタめに、ペプチドホルモンおよび蛋白質ハ、これら
の構成アミノ酸の側鎖を有する官能基（例えばアミンま
たはカルボキシル基）を自然に含有しているから用いる
ことができる。抗生物質、特にモノクルナル抗生物質を
薬物に対するキャリヤーとして用いる場合には、特定細
胞に対する特異性のために薬物を標的するのに用いるこ
とができ、、これにより副作用を最少にしてまたは除去
して薬物の活性を最適にすることができる。

スペーサ一部分は協同作用物のキャリヤーへの結合を妨
げない限りアルキル、アリール、アリール−アルキル、
アルケニル、ボリエエル基を包含することができる。ス
ペーサー基はカテコラミンの場合に薬物のアミン基のす
ぐ近くに分枝鎖を導入するのが有利である。この事はカ
テコラミンがβ−アドレナリン作用性活性を高めるため
に重要であることが知られているためである。スペーサ
一部分は薬物の了ミノ側鎖の末端に共有的に結合できる
ようにする必要があり、またキャリヤー分子の反応基に
共有的に結合できるようにする。

プロスタグランジンの如きある種の薬物は自然に生ずる
状態のスペーサー基および官能基をすでに保有している
ものと思われ、このために付加スペーサー基はキャリヤ
ーに付着するために必要としない。

薬物に付着するスペーサ一部分は上述する任意の基を用
いることができる。スペーサーの最初の、端部は薬物の
アミン側鎖の末端に共有的に結合できるようにすると共
に、その末端は官能基に結合するようにし、その基を更
にキャリヤーアミノ酸残基Ｏの側鎖Ｙ′に共有結合でき
るようにする。官能基末端はキャリヤーアミノ酸残基Ｏ
の官能基末端とする側鎖Ｙ″に補足するように選択する
。このために、残基Ｃ側鎖がアミノ官能基、例えばリシ
ン”ｊｌ”　タＧｅｔ　ｐ−了ミノフェニルアラニンを
含有スる場合には、付着官能基の末端官能基はカルボキ
シル、スルホン酸等にすることができる。

共役当りの薬物協同作用物の数は１または１より大きい
任意の数にすることができる。アミノ酸残基０はキャリ
ヤー構造内に位置するとしても、薬物協同作用物はかか
る残基に付着することかできる。キャリヤーに存在する
アミノ酸残基Ｏの数を大きくする程、薬物協同作用物の
数を太く付着することができる。任意の共役分子上にお
ける薬物協同作用物相互間の間隔はキャリヤーブロック
　　　　ｊ。

上におけるアミノ酸残基の間隔によって制御することが
できる。このために、オリゴペプチド。プロ、ツクＡお
よび・Ｂの大きざおよび順序Ｃ通常上述する構造式にお
けるツ数ａおよびｂで示す■まペプチド残基０間の間隔
、このため付着薬物協同作用物間の間隔を定める。同様
に、またオリゴペプチドブロックＡ、ＢおよびＣがキャ
リヤー分子に存在する順序は付着薬物協同作用物間の距
ｗ１を岸・ある。

同様に、天然に生ずる単分散ペプチドをキャリヤーとし
て用いる場合に轄、付着位置を一定に維持できるけれど
も、ペプチドまたは蛋白質の規定順序のためにキャリヤ
ー構造内りの薬物分子の数は結合反応中に用いる化学量
論によって制御することができる。

合ａペプ千ドキャリャー分子におけるアミノ酸残基はＬ
−型にまたはＤ−型に存在することができ、または両者
の型の混合物として存在することができる。Ｄ−アミノ
酸残基なキャリヤーに導入することは生体内における共
役の蛋白質分解抵抗を高める。また、高められた蛋白質
分解抵抗は付着薬物の作用を持続する作用をする。

、一般に、本発明における共役は二つのルートのうちの
一つによって合成することができる。第一の方法は薬物
の延長アミノ酸鎖が薬物の７ミノ端に加えた官能基にお
いて末端とした適当なスペーサ一部分を有する適当な協
同作用物を生成させることを含んでいる。次いで、機能
化薬物、すなわち、協同作用物をキャリヤーペプチドに
おけるアミノ酸残基０の側鎖Ｙ゛に順次に結合する。合
成の第二の方法はスペーサー−官能基部分をアミノ酸残
基Ｃの側鎖Ｙ′に直接に結合することによってキャリヤ
ーペプチドを初期変性することを含んでいる。次いで、
生成するペプチド−官能基−スペーサーを、例えば還元
子ミノ化反応によつ、てカテコラミンに直接に結合して
ペプ争ドー薬物共役を生成する。

本発明の目的は生物学的活性の薬物共役１　（ｉｒｕｇ
ｏｏｎｊｕｇａｔｅｓ　）を提供することである。

本発明の他の目的は正確に規定した構造を有する薬物共
役を提供することである。

本発明の他の目的はカテコラミン−ペプチド共投を提供
することである。

本発明の他の目的は薬物共役を生成する化学的に効果的
な方法を提供することである。

本発明の更に他の目的は単分散ペプチドキャリヤーに共
有結合することのできる機能化カテコラｔ　ン協同作用
物を提供することである。

本発明の共役は中間のスペーサー−官能基部分を介して
単分散ペプチドキャリヤーに結合したカテコラミンから
なる。カテコラミン薬物は多くの生物学的活性カテコラ
ミン、または共役構造に用いるのに適当な薬理作用を含
有する上述する化合物のような関連する任意の１種のア
ドレナリン作用性化合物を誘導することができる。生物
学的活性位置（薬理作用）は共役合成中に受ける条件下
で安定であること、および生物学的活性位置がスペーサ
一部分およびキャリヤーに付着する点から離れているこ
とが極めて重要である。従来における研究では、カテコ
ラミンの場合に生物学的活性位置が分子のカテコール端
と密接していることが報告されている。このために、薬
物はこの基から出来るだけ離れた部分において、すなわ
ち、カテコラミン側鎖のアルキル　アミン端においてキ
ャリヤーに付着するのが大切である。

薬物の粟理作・周部の生理学的活性は、スペーサ　　　
□一部分を薬物とこれに付着するキャリヤーとの間に介
在する場合に保持できることが確められている。かかる
スペーサーは鎖構造、例えば鎖中に６個または６個以上
の炭素原子を有するアルキル基または分校アルキル基、
すなわち、メチレン基−ＯＨＯＨｇＯＨｓ−等（Ｒ＝Ｈ
またはＯＨ８′ｔたは高級アルキル）の鎖からなる。ま
た、スペーサー基はキャリヤー　ペプチド上における予
じめ選択されたアミノ酸の側鎖Ｙ′と共有結合できる官
能基を末端とする必要がある。末端官能としては、例え
ばカルボンＷＩまたはスルホン酸等を挙げることができ
るｃ、１゜薬物および付着スペーサーはキャリヤーペプ
チドに結合する協同作用物からなる。

協同作用物は薬物から還元アミノ化により、例えばメチ
ルケト酸を用いて作ることができる。例えば、薬物がノ
ルエピネフリンの場合を次の化学反応式で示す： 同様に、上述する他の薬物は類似する方法によって誘導
することができる。

上記方法によってノルエピネフリンから作った着干の代
表的なカルボキシル含有協同作用物を次の表１に示す： 表　　１ Ａ　　９　５１　２６９．８０ Ｂ　　　　　ｊ！’　　　７９　　２６９．８００　　
Ｂ　　５０　２８８．８８ Ｄ　　４．　　ｅ５　２９７．８６ Ｋ　　６　　ｃ　　８１１．８８ ａ、Ｄ−ノルエピネフリンから作った；生成物の（α）
Ｄ＝ｉ９８．７゜ ｂ、　ＨＰＬＯによる精製前 ０、はぼ定量 若干のカテコラミン協同作用物および代表的なアミド類
の製造については１９８０年９月４日に出願された「生
物学的活性カテコラミン誘導体」のアメリカ特許出願第
１８４．０００号明細書に記載されている。

キャリヤ一 本発明の目的のために、合成または天然に生成する単分
散ペプチドは薬物共役のキャリヤ一部分として最も有用
である。ペプチド　キャリヤーにおけるアミノ酸順序は
明確に定め、かつ注意して制御することが重要である。

説明の目的のために上述するように、ペプチド　キャリ
ヤーは一連の単分散ブロックＡ、　Ｏ，Ｂに分解するこ
とができ、この場合各ブロックは任意所望の順序におい
て他のブロックと結合する。ブロックＣは薬物協同作用
物を共有的に結合する位置として利用される１個のアミ
ノ酸残基からなる。ペプチド　ブロックＡ、Ｂは通常の
ペプチド結合によってブロックＣに結合する。しかしな
がら、ブロックＡ、Ｂ＆よび０は任意所望の順序、例え
ばＡ−Ｂ−０％Ａ−０−Ｂ％Ｂ−０−Ａ、０−Ａ−Ｂ等
で共に結合することができる。天′然に生ずるペプチド
および蛋白質の　　　′□順序は、勿論、完全に予じめ
定めることができる。１キヤリヤーに対する薬物結合は
目的のためにキャリヤー順序に導入するアミノ酸単位（
ブロック０）上における側鎖に生ずる。スペーサー基は
薬物およびキャリヤーに予じめ結合させる。ペプチドに
対する結合のタイプは生物学的活性における安定性およ
び潜在的効果の基準に基づいて選択する。

天然に生ずるペプチドおよび蛋白質の場合には、薬物の
キャリヤーへの結合は自然の順序のアミノ酸の側鎖によ
って得られる官能基が有利である。

例えば、カルボキシル含有協同作用物（表１）はりシン
またはオルニチンの側鎖にまたはペプチド鎖のアミン末
端アミンに付着することができる。

キャリヤーにおける他のアミノ酸は生成共役に対する物
理的および化学的特性の特定セットを分与するように選
択し、これによって薬物の薬理学的特性を調整する。ま
た、キャリヤー分子当りの薬物分子の数は共役の生物学
的活性に作用する。

ペア’？ドブロックＡおよびＢは単分散ホモ−オリゴペ
プチド　ブロックにすることができるがまたはキャリヤ
ーの全所望特性によって二三の異なるアミノ酸からなる
ようにすることができる。

例えば親水性特性はグルタミン、シトルリンマタはヒド
ロキシル含有アミノ酸、例えばａ−ヒドロキシ−αアミ
ノバレリアン醗の導入を介して付与することができる。

他方において、疎水性特性はアラニン、バリン、ロイシ
ン、フェニルアラニン等の如きアミノ酸の挿入を介して
付与することができる。グルタミン酸、アスパラギン酸
、リシン、オルニチン等は負または正帯電キャリヤーま
たは双性キャリヤーを得るのに用いることができる。薬
物結合位置（ブロックＯ）において用いるアミノ酸の選
択はキャリヤーに付着する薬物協同作用物によって影譬
する。

合成キャリヤー　ペプチドにおけるアミノ酸順序を注意
深く制御するおよび十分限定するために、キャリヤー分
子を所望順序にアミノ酸を組合せることによって作るこ
とができる。かかるペプチド合成技術は周知のことで、
かつ広〈実施されている。キャリヤー合成の二三の例に
ついては後述する具体例において説明スル。

ペプチド合成において、アミンおよびカルボキシルブロ
ッキング基の種々の基ｘ、ｘ’を用いることができる。

Ｘはアミドまたはウレタンのそれぞれを介してＮ−末端
アミノ酸残基に結合するカルボニルまたはオキシカルボ
ニル含有基にすることができる。Ｘ′は、例えば８−ヒ
ドロキシプロピルアミド捷たはＮ−メチルアミドの如き
アミドを介して、または例えばメチル、エチルまたは高
級アルキルエステルの如きエステル結合を介してＣ末端
残基に結合することができる。

キャリヤーは単ブロックト　アミノ酸残基からより大き
いペプチド誘導体にわたる範囲の大きさにすることがで
きる。ペプチド　ブロックＡ−Ｂ−Ｃはキャリヤーとし
て用いることができ、または特定状態で類似ブロックに
結合することができる。

これらの十分に制限された特定アミノ酸ペプチド順序は
単分散順序の制御されたキャリヤ分子である。

かかる単分散ペプチドキャリヤーは本発明の共役に対し
て重要である。単分散ペプチドキャリヤーの使用によっ
て、キャリヤーに付着する薬物分子間の数および間隔を
注意して制御することができる。共役分子のクロマトグ
ラフ特性および化学分析は単分散度（ｍｏｎｏ６１ｓｐ
ｅｒｓｉｔｙ　）によって助けられる。また、キャリヤ
ー分子の単分散度は共役の種々の構造およびパラメータ
における変化の薬物活性に及ぼす作用の分析に助けとな
る。

共　　　役 共役の構造および生成については、ノルエピネフリン（
薬物）を単分散ペプチド（キャリヤー）に結合してイソ
プロテレノール類似体を得る特定系列の単分散共役に関
する文献から理解することができる。共役の合成は任意
の二三のルートによって達成でき、その第一の方法とし
ては先づ薬物分子を変性してその協同作用物を生成する
。薬物の変性によって協同作用物を形成するには所望の
スペーサー基を薬物に結合する。スペーサー基は官能基
を末端とし、次いでこれにキャリヤー分子上における適
当なアミノ酸残基に結合するようにする。また、第二の
方法としてはキャリヤニ分子がキャリヤー　ヘフチド鎖
における予じめ定められたアミノ酸残基に結合するスペ
ーサー基を有し、次いで薬物分子を機能化キャリヤーと
反応させて所望の共役を形成するようにする。この第二
の方法は収率が高く、かつ共役形成中薬物の薬理作用部
を分解（ｄａｇｒａｄｉｎｇ　）する機会が少ないため
に小さい合成キャリヤーの場合に一般的に好ましい。

しかしながら、ペプチドホルモンおよび蛋白質の如き天
然に生ずるペプチドキャリヤーの場合には、薬物の上記
第二の方法における予備機能化キャリヤーへの結合反応
中、劣化または分解（変性を含む）に対してキャリヤー
が潜在的に敏感であるために上述する第一の方法が好ま
しい。

上記第二の方法は、先づケト酸をキャリヤーペプチドに
付着、することを含んでいる。次いで、機能化ペプチド
キャリヤーを還元アミン化によって薬物に結合する゛。

次に、カテコラミン系列の場合における合成を化学反応
式で示す： この方法の変形においては、先づケト酸をＮ−保護アミ
ノ酸、すなわち、上述するブロック０のアミノ酸に結合
することができる。次いで、機能化アミノ酸をペプチド
　ブロックＡお工びＢに導入し、次いで上述するように
してカテコラミンと反応させる。

特に、説明の目的のために単共役、すなわち、単アミノ
酸（シロツクＣ）、例えばｐ−アミノフェニルアラニン
に結合したノルエピネフリンを考慮することができる。

この説明において、ｐ−アミノフェニルアラニンのα・
アミノおよびカルボン階末端はアセチル基および８−ヒ
ドロキシプロピルアミド基のそれぞれでブロックする。

８−ヒドロキシプロピルアミド基は生成共役の水溶性を
高める。

実際の処理においては、アミノ酸ｐ−二）ロフェニルア
ラニンを先づ２工程においてＮ−アセチル　メチルエス
テル誘導体に転化する。８つの方法のいずれか１つの方
法を用いることができる。

その第一の方法では、エステル化をピリジン−触１８６
７（１９６Ｂ）に記載されている方法で行う。

第二の方法では、吉日および石井氏「Ｊ、Ｂｉｏｌ。

ＯＭｍ　、　Ｊ　７１　１８５〜１９１　（１（１７！
りに記載されている方法によって最初にアき〕酸を冷水
性塩・基中でラセミ化を生じないようにして無水酢酸で
アセチル化する。次いで、Ｎ−アセチル−ｐ−ニトロフ
ェニルアラニンをジアゾメタンでエステル化する。

Ｌ−型またはＤ−型のＮ−アセチル　メチルエステル誘
導体を過剰の８−アミノ−１−グロパノールを用いてア
ミノ分解によって８−ヒト四キシプ四ピルアミドに転化
する。

メチルケトン官能基は、ニトロ基を接触還元し次いで６
−オキソ−ｎ−へブタン醗の如きケト酸にカップリング
させてアセチル　アミノ酸ヒドロキシプロピルアミド誘
導体に結合する。次いでメチル　ケトン機能化アミノ酸
キャリヤー分子を酢酸の存在でノルエピネフリンで接触
還元アミノ化してノルエピネフリン−アミノ酸共役を形
成する。得られた共役は極性溶剤系におけるシリカゲル
上での薄層クロマドグ２フイーを用いて精製する。

上述すると同様の技術はカテコラミンとペプチドを形成
する複数のアミノ酸残基を有するキャリヤー分子とによ
る共役を生成するのに用いることができる。仁の二三の
方法については後述する具体例において説明する。

ペプチドキャリヤーの製造 単分散ペプチド醤キャリヤーを製造するのに用いる種々
の方法を次に記載する例によって説明する。

例Ｉ　　Ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニ／　（化合物
１　）ｒＪ、ｏｈｅｍ、Ｓｏｏ、Ｊ　１１４０９　Ｎ９
４１？　（１９５４）に記載されているベルゲル（Ｂａ
ｒｇａｌ　）およびストック（５ｚｏｃｋ　）氏による
方法を用いて、Ｌ−フェニルアラニン（５（１）を濃硫
酸（１１０ｍ／）および発煙硝＠　（Ｂ　８　ｍｚ　）
の混合物で処理してニトロ化合物を生成した。収量２６
．９　？　（４Ｂ係）、常、ｐ。

１１１８１ｍ、４８４℃、（α）　”＝　＋　９．６６
（０＝１．７？、ＩＮ　Ｈｅ／　）。

！ユ　凡二叩ｆ二と二に背泣ヱ１５二ＣソニＬステル塩
酸塩　（化合物２） グトマ／およびホイソナス氏の方ｆｆ１（Ｈθｌｖ。

Ｏｈａｍ、ＡａｔａＪ　４１　、　１８６１〜１８６７
　（１９５８）を用いて、塩化亭オニル（蒸留、０．６
９ｍ／、９．５ミリモル）をメタノール５ｏｕｐ、−１
０℃）に滴下した。この混合物にｐ−ニトロ−Ｌ−フェ
ニルアラニン（化合物１．１．００ｆ、　４．フロミリ
モル）を添加し、この溶液を２４時間にわたって攪拌し
た。蒸発乾固した後、残留物をメタノール／エーテルか
ら再結晶して８１８〜ＢＩＧ℃で溶融する白色固体１．
０ｏｆ　（８１１）を得た。（ｇ）　　＝＋１１．２ｉ
Ｏ（０＝０．９．　ＨＯ）ｇ ンメチル　エステル　（化合物８） 上記化合物Ｂ　（４，１Ｏｆ、　１３．７ミリモル）を
蒸留ピリジン（４０ｗｔ／）および無水酢酸（５ｍ／）
の混合物に懸濁した。数分間抜生成した溶液を一夜にわ
たり攪拌した。溶剤を蒸発し、残留物を酢酸エチルに溶
解した。次いで、溶液を０．Ｉ　Ｎ　ＨＯＩ　、　　１
Ｍ重炭酸ナトリウムおよび水で抽出し、乾燥したＣＭ、
５ｏ４）　　へキサ゛ンにより再沈殿させ１１８〜１１
７℃で溶融する固体８．５７　ｆ　（８５，１４）を得
た。この固体を酢酸エタノール／ヘキサンから再結晶し
て生成物（化合物８）Ｂ、？３Ｆを得た。ｍ、Ｉ）、１
１８〜上記化合物８　（０，８８ｆ　、　Ｌ、Ｓミリモ
ル）および８−アミノ−１−フロハノール（１，１ｓＷ
ＬＩ！、８０ミリモル）をメタノール（Ｉｇｍｌりに溶
解し、常温でＮ、下において１８時間にわたり攪拌した
。溶液を水素形のダウエックス６０　（Ｄｏｗａｘ　５
０　）Ｘ　８のカラム（ｇｘｓ）に装填し、メタノール
で溶離した。

溶剤を蒸発し、薄黄色の固体を得、これを酢酸エチル／
ヘキサンから再結晶した。収量０．１！１９ｆ（７Ｉ）
、ｍ、ｐ、　８０６．６〜！０７℃、（α）Ｄ＝＋１４
．８’（Ｑ＝１．４、エタノール）。Ｏ□、Ｈ７，Ｎ、
Ｏ，（８０（１，５Ｂ）に対する元素分析： 理論値：　０５４．８６　、　Ｈ６，１９、Ｎ　１Ｂ、
５８実測値：、Ｑ　５４．４４．　Ｈ６，０１，Ｎ　１
Ｂ、５！ｉ上記化合物４　（７０１ｍ、、　２，２７ミ
リモル）をメタノールニ溶解し、パリ　シェーカー（Ｐ
ａｒｒ　５ｈａｋｅｒ　）において８．ＦＩＲ１ｊｋｆ
／口（５０ｐａｉ）で−夜にわたり１０係パラジウム−
木炭触媒を用いて水素化した。還元をＴＬＯ（クロロホ
ルム／メタノール／酢＠ニア０／ＢＩＳ／６）で行った
。触媒を戸別し、溶剤を真空下で蒸発してきれいなガラ
ス状固体を得た。このアミンをジメチルホルムア建ド（
８０ｍｌりに溶解した。この溶液に６−オキソ−ｎ−へ
ブタン酸（８ｚ〕ｎ＞ｙ、Ｂ、ｆＡ７ミリモル）および
ジシクロへキシルカルボジイミ１ド（０，６４ｆ　、　
１．１当量）を添加し、この溶液を一夜、常温で攪拌し
た。ジシクヘキシル尿素を戸別した後、溶剤を真空中４
０℃で蒸発させた。

残留物をシリカゲル　カラム上で６〜１０チメタノ一ル
段階勾配のクロロホルムで溶離してクロマトグラフを行
った。２０　？　ｔｒＬｙ　（２Ｂ　’Ｉｓ　）のワッ
クス状白色固体（ｍ、ｐ、１４９〜１４７℃）を得た。

融点はメタノール／エーテルから再結晶して１５？〜１
５（１℃に上昇した。〔α）　　＝＋８．２（０＝１．
０、メタノール）。

０、□Ｈ８□）Ｊ８０．（４０５，ｆｉＯ）に対する元
素分析：理論値：　０６Ｂ、２０　、　Ｈ７，７１、Ｎ
　１０．８６実測値：　０６１．Ｈ、Ｈ７，９Ｂ　、　
Ｎ　１０．Ｈ例６Ｐ−ニトロ−Ｄ−フェニルアラニン　
（化合物６）Ｄ−フェニルアラニン（１１１，Ｏｆ、７
８ミリモル）および硝酸カリウム（ｌｌｆ、１０９ミリ
モル）をペプチドの脱保護（ｄｅｐｒｏｔａｏｔｉｏｎ
　）のために一般に用いられているテフロンＨＦ装置に
装填した。混合物を液体ＨＦで約０℃、１時間にわたっ
て処理した。ＨＦを真空除去した後、残留物を水に溶解
し、ｐＨ６になるまで濃アンモニアで処理した。

沈殿物を温水から再結晶した。９．８１１（６１％）の
ほぼ白色の固体（ｍ、ｐ、　Ｌ８６．ト４Ｂ７℃）を得
た。

〔α〕二’＝　−８，６８（０＝　１．？　、　）Ｎ　
Ｈａｔ　）ニン　（化合物？〕 上記化合物６（６，２Ｏｆ）を吉日および石井氏「Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、Ｊ　７１．１８！１〜１９１　（
１９７２）＆：よる方法により１）［９，４℃で水酸化
ナトリウム水溶゛　　ゝ液中で無水酢酸でアセチル化し
た。５．Ｈｔ　（７１，４係）の生成物（化合物７）を
得た。ｍ、ｐ、　１６５〜１６６℃、〔α）Ｄ＝−４ａ
、２°（０＝ｓ、ｓ、エタノール）上記化合物？をテト
ラヒドロフラン（１２０ｍｊ）に溶解し、水浴中で冷却
した。この溶液に氷で冷却したエーテルおよび４θ係水
酸化カリウム水溶ｌ・ｌ液の等容量混合物を添加してジ
アゾメタンを生じさせた。このジアゾメタン溶液を精製
しないでアミノ酸誘導体の攪拌溶液に添加した。ジアゾ
メタンの添加においてＮ、がもはや生じなくなった時に
、反応が完了した。過剰のジアゾメタンが酢酸ｌ・・の
添加によって消費された。溶液を飽和塩水、１Ｍ重炭酸
ナトリウム、　０．１Ｍ　ＨＯ／お工び再び塩水で順次
に抽出し、乾燥した（　Ｍ、Ｓｏ、）。次いで、蒸発し
て８，５６　ｔ　（ｓｓ、４４　）の固体（ｍ、ｐ、　
１１０〜ＩＩ２℃）を得、この固体をＴＬＱ　（クロロ
ホルム／メタノ−ル／酢酸：　８５／１０１５　）で精
製した。

〔α〕“＝−１８，８°（０＝　１１．１．エタノール
）上述する側番の処理を用いて上記化合物８　（１，５
５ｆ　）　カらＤ−異性体を得た。収量１．８４Ｆ（７
０％）、ｍ、ｐ、２ＯＬ５〜２０４℃、〔α）Ｄ＝−１
８，８°（Ｑ＝１．１．エタノール）。Ｇ□、Ｈ，、Ｎ
、Ｏ，（８０９，８２）　ニ対スル元素分析： 理論値：　Ｑ　５４．８６　、　Ｈ６，１９、Ｎ　１Ｂ
、＋＄８実測値：　０５８．９Ｂ　、　Ｈ６，０９、Ｎ
　１８．４８例１０〜１１ 合物１１） 上記化合物ｏ（６ｓｓｍ、　　ＪＱミリモル）を上述す
る例５のＬ−異性体を生成するのに用いる処理によって
６−オキソ−ｎ−へブタン酸に水素化および結合した。

ＴＬＱ　（クロロホルム／メタノール／酢酸：　５０１
５０／Ｉｔ　）にエリカラム　クロマトクラフを行い化
合物１１　（６１に、９ｍｆ？、８　’Ｉｙ　）および
未反応化合物１０（＄１５５ｍ、４ｂ係回収）全４ｂ係
化合物１１はｍ、ｐ、　１８７〜１．８８．５℃および
（−）　　六〇 −１７，８０（Ｑ　＝　１．０　、エタノール）を有し
ていた。

Ｐ−ニトロ−Ｌ−フェニルアラニン（化合物１）（５１
，８ｆ、８４５ミリそル）を水冷却した水酸化ナトリウ
ム水溶液（ＩＮ、Ｂ４５ｆｉ／）中で攪拌した。

この溶液にジオキサン（４００ｍｌ：）およびジーｔ−
プチルージカルボネート（フル力（Ｆｌｕｋａ　）、　
ｓｏ、ｏ　ｆ　。

２？　Ｉｓ　ミＩＪモル）を添加した。混合物を冷却下
で一夜攪拌した後、ジオキサンを真空蒸発した。混合物
を冷却し、重硫醗す）　ＩＪウム（ＩＮ）でｐＨｇｏに
酸性にし、酢酸エチルで８回抽出した。合わせた抽出物
を水で洗浄し、乾燥しく　ＭｆＳ０４）　、蒸発した。

酢酸エチル／ヘキサンから再結晶して６０．７　ｆ（ｓ
ｏ、ｓ　ｃｌ　）の化合物Ｉ　Ｂ　（ｔｏ、ｐ、　１０
５〜１０７℃）を得た。〔α）Ｄ＝＋２５．４　（Ｑ＝
　１．１　、　Ｉ　Ｍ重炭酸ナトリウム） −１）　ルホｙ　酸成分（化谷物１２．１０．Ｏｆ、　
８Ｌ２　Ｚリモル）を、乾燥管を具えたＢ　６０　ｒｎ
ｌ丸底フラスコ内の乾燥テトラヒドロフラン（１ｏｏｍ
ｚ）に溶解した。この溶液にＮ−メチルモルホリン（８
，１５４ｍ／、１当量）を添加し、乾燥氷／インプロパ
ツール浴中で一１５℃に冷却した。この攪拌した溶液に
イソブチルクロロホルマー）　（４，１８ｍ１．１当量
）を徐々に添加した。フラスコを常温に温めて混合無水
物を完全に生成させた。グリシンベンジルエステルｐ−
）ルエンスルホネート（バチエム（Ｂａｃｈｅｍ　）、
　ＩＯＪ　ｆ　、　Ｂ＠、２　ｉリモル）を乾燥テトラ
ヒドロフラン（１００ｍ／）に溶解した溶液を＝１５℃
に冷却し、１当量のＮ−メチルモルホリンで処理した。

上記混合無水物を含有するフラスコを再び一１５℃に冷
却し、これにグリシン誘導体を添加した。この混合物を
常温になるまで放置し、１時間またはこれ以上にわたり
攪拌した。次いで、溶剤を蒸発し、残留物を酢酸エチル
に懸濁させた。この混合物をＨＱ／（０，Ｉ　Ｎ　）　
、飽和重炭酸す）　ＩＪウムおよび水で順次に洗浄した
。乾燥（Ｍ、Ｓｏ、）およびＶ過した後、溶液を蒸発乾
固した。

固体残留物をクロロホルム／ヘキサンから再結晶した。

収量１’１３．１４　ｆ　（８Ｌ４　％　）、ｍ、ｐ、
　１１　Ｉｓ　〜１１８Ｊ℃、　（α）Ｄ＝−７，（１
０°（０≠１．８．クロロホルム）。

０．８Ｈ，、Ｎ８０．（４ｓｙ、４１ｓ）ニ対ｆル元素
分析：理論値：　０６０．８９　、　Ｈ５，９５、Ｎ　
９．１９実測値：　０６０．４２　、　Ｈ６，０？　、
　Ｎ　９．１１ジペプチド（化合物１８．１．１Ｂ？、
　８．７８ミリモル）を乾燥管を具えた２５　ｍ１４丸
底フラスコに入れた乾燥塩化メチレン（５ｍｌ！　）に
溶解した。フラスコを水浴中で冷却した。これに無水ト
リフルオロ酢酸（アルドリッチ（Ａ１６ｒｉｃｈ　）　
＊　　’　ｔｒＬ／　）を添加し、この溶液を常温で攪
拌した。１時間後、溶剤を減圧下で蒸発して油状物を残
留させた。エーテルを添加し、次いで蒸発または傾瀉し
て残留物を固化した。次いで、この残留物を高真空下に
置いて痕跡量のトリフルオロ酢酸を除去した。

トリフルオロアセテート塩を乾燥テトラヒドロフラン（
１０ｍｌりと蒸留ピリジン＜ｓｍｔ＞との混合物に溶解
した。この溶液は強くまたは中程度に酸性にしないよう
にし、次いで無水酢酸（０，５０ｍ７゜５．８ミリモル
）で処理した。反応を一夜継続して生成物を沈殿させた
。これに乾燥エーテルを添加して沈殿を完了させた。生
成物を真空濾過して回収し、エーテルで十分に洗浄した
。収量１．８６　ｔ　（９０ｑｂ）、アセトンから再結
晶した融点１８０４〜１８１℃。

６ 〔α）　　＝＝−８，９°（（１＝１．１ジオキサン）
。

物１５） 化合物１４　（２６？　ｒｎｔ　　Ｏ，ロアミリモル）
をメタノール（５０ｍｌりに溶解した。この溶液に二酸
化白金（ペプチドの重量の８チ）を添加し、この混合物
を大気圧で水素化した。４時間後、ＴＬＱ（クロロホル
ム／メタノール／酢＠　：　８５／ｌ　Ｏ１５）により
アミンに転化したことを確めた。触媒を傾瀉により分離
し、溶剤を減圧下で除去した。ガラス状固体の化合物１
５をｉ／ｌぼ定量的に得た。

化合物１５　（０，８１？、　０．６８ミリモル）を少
量のメタノール（７５ｍ／）に温めながら溶解し、次い
でこの溶液を水浴中で冷却した。この溶液にメチ　　　
□′ルアミンガス゛（マセソン（Ｍａｔｈａｓｏｎ　）
　）を水酸化ナトリウム乾燥管を介し・Ｃ通した。ガス
で飽和した時、ガス供給を止め、フラスコを常温に一夜
放置した。蒸発して残留した油状物をメタノールに再溶
解した。これにクロロホルムおよヒ乾燥エーテルを添加
して沈殿を生成させ、生成物を細いガラス　フィルター
上に回収した。ＴＬＱ　（クロロホルム／メタノール／
酢酸：　５０１５０１５　）で検出した残留メチルアミ
ンは真空下で除去しなかったが、しかし再沈殿によって
除去した。収量１８０　ｍｙ（６（１１）、ｍ、ｐ、　
２０１−２０８℃、〔α）Ｄ＝＋８１．９０’２１Ｈ８
００Ｂ・ＨｇＯに対する元素分析：理論値：　０５７，
７Ｂ　、　Ｈ？、８９　、　Ｎ　１２．８４実測値：　
Ｑ　５７．５５　、　Ｈ７，０６、Ｎ　ＩＢ、９１混合
無水物カップリングを６−オキソ−ｎ−へブタ゛ン酸（
９？　ｒｎｙ　、　０−ロアミリモル）および上記化合
物１５　（２８８ｔｎｙ　　Ｏ，６？ξリモル）を用い
て上記化合物１８の合成に記載するようにして行った。

各成分は１０　ｍｊ’の乾燥テトラヒドロフランに溶解
１した。収量１１１ｆｎｆ（８４Ｌ　ｍ、ｐ、　ｌ？７
．１ｓ〜、１Ｂ、０．５℃。

６ 〔α）Ｄ＝＋　１９．５　（０＝　１．４　、メタノー
ル）。

０、、Ｈ８，Ｎ８０．　（４９Ｂ、ｓ８　）　ｋ−対ｆ
　ル元素分析：理論値：　０６５．４４　、　Ｈ６，７
１、Ｎ　８．４８実側値：　Ｏ６５，４６、Ｈ６，７番
、　Ｎ　８．６１きド　（化合物１８） 化合物１　Ｂ　（７，７８ｆ　、　　Ｉｇ、９ミリモル
）をメタノール（８５０ｍ／）中でメチルアミンにより
上記化合物１６の合成において記載するようにして処理
した。この反応混合物から溶剤を蒸発して黄色固体を残
留し、これをり、ロロホルム／ヘキサンカラ再結晶した
。収量６．０４　Ｆ　（９４，０１）、ｍ、ｐ、１８Ｂ
〜１８４℃、（ａ）Ｄ＝＋６．０°（Ｑ　＝　１．０、
メタノール）。

０□、Ｈｇ４Ｎ、Ｏ，（８８０，４０）に対する元素分
析：理論値：　０５８．８６　、　Ｈ６，８６、Ｎ　１
４．７Ｂ実測値：　０５８．７Ｂ　、　Ｈ６，４１ｉ　
、　　Ｎ　１４．７ｇ°例１９　　Ｎ″−ｔ−ブチルオ
キシカルボニル−ｐ　−（６−’上記化合物１８　（ｌ
５Ｊ８ｆ、　１８．９　ｔリモル）をメタノール（ｘ５
ｏｍｚ）に溶解し、−夜１〜８気圧でｌＯ係パラジウム
−木炭触媒（ペプチドの重量に対して１０俤）を用いて
水素化した。触媒をセライトを通して除去した。溶剤を
蒸発してガラス状固体を得、この固体を精製しないで使
用した。

６−オキソ−ｎ−へブタｙ＠　（２，０Ｏｆ　、　１８
，９ミリモル）を上記化合物１８について記載するよう
にして混合無水物で結合させた。ＴＬＱ（クロｐホルム
／メタ／−ル／酢酸：　８Ｂ／１０／Ｉｓ　）”？’均
質にしたガラス状生成物５．８？　ｔ　（ｓ　ｏ　＊　
）を得た。

（α）　　＝−１１８，８°（Ｑ＝１．９．メタノール
）。

ヘプタノイルアミノ）−Ｌ−フェニルアラニル−グリシ
ル−メチルアちン（化合物Ｂｏ）上記化合物１　Ｇ　（
５？　Ｏｍｙ　　ＩＪ　ｔ　！Ｊモ”）ｆ’上記化合物
１４の合成において記載するようにして脱保膜した（ｄ
・ｐｒｏｔｅｏｔｅｄ）。メチル　トリフルオロアセテ
ート塩を乾燥テトラヒドロフラン（ｌｌｍｊ）°に溶解
し、Ｎ−メチルモルホリンで中和した。次いで、これに
Ｎ″−１−ブチルオキシカルボニル−ｒ−ベンジル−Ｌ
−グルタオン酸（ハチエム、４０８ｔｎｆ、Ｌ、Ｓミリ
モル）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（０，８
ｆ　、　ＩＪミリモル）を添加した。−夜攪拌した後、
混合物をν遇し、溶剤を蒸発した。残留物をクロロホル
ムに再溶解し、ｏ、ＩＮ　ＨＯｊ　、飽和重炭酸ナトリ
ウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で順次洗浄した
。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、濾過し、蒸発
した。残留物をクロルホルム／ヘキサンがら再結晶した
。　　　　１収量５８８Ｗｈｙ　（’６６９Ｇ　）、ｍ
、ｐ、　１１４．１＄−１１８℃、（α）　Ｄ＝−１７
，８（ａ　＝　１．１、メ／／−ル）。

０８６■４９’５０Ｇ・ＩＡＩ、Ｏに対する元素分析：
理論値：　０６１，８！ｉ　、　Ｈフ、１５　、　　Ｎ
　Ｇ、９４実測値：　０６１．５８　、　　Ｈ６，９６
、Ｎ　Ｏ，９フミド　（化合物１１１） 上記化合物＠０（４４４ｍ、　　０．＄８８＃リモル）
を上記化合物１４について記載するようにして塩化メＩ
・・チレンにおいてトリフルオロ酢階を用いて脱保饅し
た。アミントリフルオ・９酢酸塩をテトラにドｐフラｙ
（ｌｏｗ／）と蒸留ピリジン（１，０ｍＪＦ）ノ混合物
に溶解した。この溶液に無水酢＠　（０，ＩＨｌｍｊ　
、　Ｌ６６ｊ９ル）を添加した。８時間攪拌後、沈殿物
を細いガラス　フィルター上に回収し、テトラヒドロフ
ランで洗浄した。’１’ＬＯ（クロロホルム／メタノー
ル／酢膳：　７０７１１６７９１　）で精製した白色固
体８６１　ｔｔｌｙ　（８Ｇ　’４　）を得た。ｍ、ｐ
、　１８７〜１９０℃、６ （ｆｆ）　Ｄ＝−６，１０（０＝　１．０　、　ＤＭＳ
Ｏ）。

剪Ｎ“−ア＋チルーＮ′−メチルーＬ−グルタミニ々ヱ
（化合物８１１） 上記化合物２１　（ｌｆｉｆｉｔｙｔ、　　０．１１９
ミリモル）をメタノール（６０ｍｊ）においてメチルア
ミンにより上記化合物１６について記載するように処理
した。

収量８６ｆＫｙ（８０４）、ｔｌｌｔｐ、　ＢＩＧ　〜
１１４℃、（ｇ）　Ｄ＝−８ｊ１．６’　（０＝１．８
、Ｈ，０）。

’ＪＩＨ４゜Ｎ６０８・Ｈ，Ｏに対する元素分析：理論
値：　Ｏｌｓ６．０４　、　Ｈｙ、ａｓ　、　　ｘ　１
４．ｔｔｓ実側値：　０５６Ｊｌ　、　Ｈ？Ｊ８　、　
Ｎ　１４．１１０上述すると同様の方法は、本発明の共
役を作るのに用りる任意所望の単分散ペプチド　キャリ
ヤーを作るのに利用することができる。

共役の生成 次に、共役を生成するのに用いる一般的な方法について
説明する。キャリヤーを単分散ペプチドとし、薬切をノ
ルエピネフリンとした。

°例Ｓ８Ｎ“−１−ブチルオキシカルボニル−ｐ−［６
−（（化合物２８） 方法ム ペプチド誘導体（化合物１９　）　（２８９ｍｇ、　０
．５０ミリモル）お工びＤＬ−ノルエピネフリン（ａ　
ｓ　ｍｙ。

０．５０　ンリモル）を酢ｅ（Ｂｍｌ）に溶解し、二酸
化白金触媒（ペプチドの重量の２〜ｇｏｄ）上において
大気圧おニーび常圧でＢ日間にわたり水素化した。溶液
を傾瀉して触媒から除去し、この溶液に冷稀塩酸（０，
０１Ｎ、５０ｍ／）を添加し、りｏａホルムで抽出し、
次いでｎ−ブタノールで抽出した。

合わせたブタノ−゛ル抽出物を中性になるまで塩水で洗
浄し、真空下４０℃以下の温度で蒸発した。

残留物をｎ−ブタノールで８回抽出し、濾過し、蒸発し
た。生成した油状物をエーテルと摩砕して固化して化合
物２８の塩酸塩３８０〜を得た。

次いで、この塩酸塩をＨＰＬＯで精製してジヒドロゲン
ホスフエート塩を得た（収率４９係）。

方法Ｂ 上記化合物Ｉ　Ｑ　（Ｎ、５６ｆ、　５．４ミリモル）
およびＤＬ−ノルエピネフリン塩酸塩（１，Ｈｌ　ｆ　
、　５．８ミリモル）を酢酢（０，５７）Ｌ／）を含有
するメタノール（１００ｆｉｊ）に溶解した。この溶液
に、メタノール（Ｂｏｍ／）にナトリウム　シアノボロ
ヒドリド（０，４６ｆ　、　？、８ミリモル）を溶解し
た溶液を滴下し、この溶液を４０℃で２０時間にわたり
加熱した。

これに塩酸（０，１Ｎ、８００鵠ｌ）を１０℃で添加し
、溶液を水吸引器から吸引して脱ガスした。この溶液を
クロロホルムで８回抽出し、抽出物に製塩化す）　ＩＪ
ウムを添加し、生成物を上記方法Ａに記載するようにし
てｎ−ブタノールで抽出した。残留物をフラッシュクル
マドグラフィで精製した（５５Ｘｌ！ｉ０Ｍカラム、６
０部のクロロホルムおよび６部の酢酸において４〜１５
部のメタノール　　□勾配で溶離）。溶離液を真空中に
おいて最初の容゛量の１／１ｏに減少させ、これに冷ｏ
、ｌ　Ｎ　ＨＯＩを添加した。生成物を上記方法人に記
載するようにして抽出および固化して化合物２８の塩酸
塩１，４４５　ｔ６ （４１係）を得た。〔α）　　＝＋６．ｓ°（Ｑ、−１
，５，■、ｏ）。

Ｃ，、Ｈ４８Ｎ、０８０／　’　２／８　ＢｕＯＨ”　
４／８　Ｈ，Ｏに対する元素分析：理論値：　ｏ　ＩＳ
ｓ、ｓｏ　、　Ｈ７，８１、Ｎ　９．４？実測値：　０
５６．２Ｂ　、　Ｈ７，８６、Ｎ　９．４１方法Ｃ ペプチド誘導体（化合物ｉｓ　）　（２４７Ｆｌｙ　　
５７モル）およびＤＬ−ノルエピネフリン（’９．１ｍ
ｇ　　５７部モル）を上記方法人に記載する工うにして
水素化した。

反応混合物を予じめ用意したＴＬＱ（シリカ、クロロホ
ルム／メタノール／酢酸：　５０１５０１５　）上でク
ロマトグラフした。生成物をプレート上において酸化の
ために薄く黒ずむことによっておよび紫外線検出によっ
て確認した。この生成物をメタノールで抽出し、　ＨＰ
ＬＯで精製した。化合物ｚ４のジヒドロゲンホスフェー
ト塩６．４ｍ、（１７係）を得た。

金物１Ｂ） 方法Ｄ トリペプチド誘導体、Ｎ″−７セチルーＮ′−メチル−
Ｌ−グルタミニルーｐ−（６−オキソ−ｎ−ヘプタノイ
ルアミノ）−Ｌ−フェニルアラニル−Ｎ′−メチル−Ｌ
−グルタミニルーメチルアミド（１）　５　ｍｙ、　８
’５μモル）およびＤＬ−ノルエピネフリン塩酸塩（Ｂ
５ｒｇ、１７０＃モル）をｐＨ５酢醗ナトリウム緩衝剤
（ｏ、ｇ　Ｍ、　６ｆｉ／　）に溶解した。この溶液に
、メタノール（Ｂｍｌ）にナトリウム　シアノボロヒド
リド（８８ｍｙ　、　０．６０ミリモル）を溶解した溶
液を添加し、この混合物を６０℃で４８時間にわたり加
熱した。次いで、この反応混合物から多量の溶剤を蒸発
により除去し、塩酸（０，９Ｎ　。

Ｉｓ　ｍｌＪ　）を添加した。混合物をν過し、ビオ−
ゲル（Ｂｉｏ−ｇｅｌ　）　Ｐ　−ＳＳカラム（１，６
Ｘ？Ｆ１ｃｍ）に冷状態で作用した。材料を０．０１　
Ｎ　ＨＯＩで溶離した。化合物２５の塩４　ｒｎｔ　、
　（６９＆　）を０，１６１　Ｖ、で溶離した。

生成物のプロトンＮＭＲスペクトルは上記方法Ｏにおい
て合成した同じ化合物のスペクトルと同様であった。

方法Ｅ　　　　　　　　　・ １４Ｃ−標識トレーサーを含有するＤＬ−ノルエピネフ
リン・ＨＯＩ　（９，５ｒｎｔ　　４６モル）およびペ
ンタ゛ペプチド訴導体Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル
−）　ＩＪ　−（δ−ヒドロキシ−Ｌ−α−アミノバレ
リル）−ｐ−（６−オキソ−ｎ−ヘプタノイルアミノ）
−ｂ−フェニルアラニル−グリシル−メチルアミド（Ｌ
Ｌａｆｉ、　　？１ｆｌＡ％ル）をメタノ−Ａ、　（４
，５叫）および０．２Ｎ酢酸す）　ＩＪウム（ｐＨＩｓ
）緩衝剤の混合物に溶解した。この溶液を蒸発してその
容量を小容量に減少させ、これにｎ−ブタノール（ｇｅ
ｌりを添加した。次いで、溶剤の容量の半分を真突中４
０℃で除去した。残留物に、ナトリウム　シアノボロヒ
ドリド（１４ｍ、　　０．８８モル）をメタノール（１
ｆｎ、／　）に溶解した溶液を添加し、この溶液を５０
℃に４８時間にわたり温めた。沈殿物を遠心分離により
除去し、生成物を逆相ＨＰＬＯで分離した。かようにし
て化合物２６めジヒドロゲン　ホスフェート塩１０　ｍ
ｙ（４０％）を得た。この生成物の特定活性は出発材料
について測定した活性の８係以内であった。゛ 生物学的活性−試験管内 本発明の共役の生物学的活性を広いタイプの８４９細胞
評価分析において試験した。評価は関連するβ−アドレ
ナリン作用性活性で示した。試験した各共役の活性は基
標率（ｂａａｅ　ａｔ＠ｎ＋ｊａｒ６　）としてイソプ
ロテレノールの活性と比較した。

試験において、８４９細胞を遠心分離し、次いでデュル
ペコの変性イーグル媒質（Ｄｕ　１　ｂ　ｓ　ｃ　ｏ　
ｏ　’ａｍｏｄｉｆｉｅ６　Ｅａｇｌａ　ｍｅｄｉｕｍ
　）　（１７当り１．８８　ｆ　）およびＳｌ０ｍＭヘ
ベス（Ｈａｐｓｓ　）　（ｐＨ７，４）＋０．１１牛の
血清アルブミンに再懸濁した。８４９懸濁物を共役しな
いで８７℃で１０分間にわたり保温しく１ｎａｕｂａｔ
ｓｄ　）、次いで更に６分間にわたシ共役しまたは共役
しないで管に添加した。反厄は氷上で冷却して停止した
。共役の存在しない保温は奉線を確立した。

細胞ノペレットを遠心分離により分離した後、このペレ
ットを再懸濁し、沸騰させた。次いで、アリコートを［
プロシーデングス　オブザ　ナショナルアカデミ　オプ
サイエンスＵＳＡＪ　６’７゜８０５〜８１１１（１９
７０）にギルマフ　（Ｇｉｌｍａｎ　）氏により記載さ
れている環状ＡＭＰについての競合結合分析に用いた。

この結果を、類似体の濃度の対数の函数として基線以上
の１０細胞当シ蓄積したピーモル（ｐｍｏｌ）環状ＡＭ
Ｐとしてプロットした。

数種類の代表的な共役化合物の試験内試験の結果を次の
表２に示す。

生物学的活性−生体内 上述する試験管内試験に加えて、生体内試験を本発明の
多くの共役について行った。試験は試験すべき共役をネ
ズミの大腿静脈に種々の割合で投与して、しかる後に６
博度数、動脈脈博圧および平均圧の変化を記録するよう
に行った。

特に、雄のスプラキューダウレイ（Ｓｐｒａｇｕａ　−
１）ａｗｌｅｙ　）ネズミ（体重２８０〜８５０ｆ）の
大腿動脈をスタタム（Ｓｔａｔｈａｍ　）　Ｐ　−２８
圧力変換器に接続し、ペクマン　ダイノブラフ（Ｂａｏ
ｋｍａｎ　Ｄｙｎｏｇｒａｐｈ　）型Ｒ５１１Ａに順次
に記録した。ベニュスカニューレ（ｖｅｎｕｇ　ｏａｎ
ｎｕｌａ　）を大腿静脈に挿入した。２本の注射器を８
一方向停止弁を介して自派に取付けた。１本の注射器に
はヘパリン化食九（４０単位／ｍｌ）を入れ、他の注射
器には試験−べき共役を入れた。

すべてのカニユーレにヘパリン化食塩を周期白に流して
形成から凝塊を防止した。血圧および＋１−博度数を安
定にした後、動物が受けた薬物共役Ｑ容量に相当する一
定容量のヘパリン化食塩を注射し、その応答を観察した
。種々の投与量の試験すべき薬物共役を１０分間投与す
る最小間隔で注射した。投与量は０．００１−１０．０
　ｍ１７ｋｇの範囲にし、常に増加させながら投与した
。

薬物注射から、投与一応答曲線を得た。次いで応答曲線
を同じ条件下で投与したイソプロテレノールに対する動
物応答と比較した。これらの生体内試験の結果を表８に
示す。

表８ イソプロテレノールのペプチド 共役の生体内活性 ＯＨ＋ＯＨ。

Ｉ Ｅ　　　Ｂｏａ−Ｐｈｅ−Ｇａｙ−ＮＨＯＨ，８，７４
Ｇ　　Ｂｏｏ−Ｇａｙ−Ｐｈｅ−ＮＨＯＨ，，９２ＨＡ
Ｏ−Ｇ／ｕ（ＮＨＯＨ８）−Ｐｈｓ−Ｇａｙ−ＮＨＯＨ
，１，７７Ｉ　　　Ａｃ−Ｈｙｖ−Ｐｈｅ−４１’１−
ＮＨＯＨ８１，４８Ｊ　　　Ａｃ　Ｏｌｔ　Ｐｈｅ　Ｇ
ａｙ−、ＮＨＯＨ，，７９Ｋ　　’Ｂｏｏ−０１ｔ−Ｐ
ｈａ−Ｇｌｌ−ＮＨＯＨＩ　　　　、Ｂ２０　　Ｂｏａ
−Ｈｙｖ、−Ｐｈｅ−０１ｙ−ＮＨＯＨ，、？６Ｐ　　
Ｂｏｏ−Ｐｈｅ−Ｈｙｖ、−ＧＡＹ−ＮＨＯＨ，，５Ｑ
、″ ａ、生体内生物学的活性はネズミの血圧が６０係減少す
る有効投与として測定した。相対活性はイソプロテレノ
ールの毎ルＥＤ、。対化合物のモルＥＤ、ｏの比として
示した。

第１頁の続き ０発　明　者　ニール・カスタグノリ アメリカ合衆国カリフォルニア 州９４９０１サン・ラフアニル・プ ロサム・ロード２７ ０発　明　者　ケネス・アラン・ヤコブソンイスラエル
国７６１００レホボト・ ザ・ウエイズマン・インステイ テユート・オブ・サイエンス内 （番地なし） ０発　明　者　ケネス・ロイド・メルモンアメリカ合衆
国カリフォルニア 州９４６０２ヴッドサイド・クラグ モント・ウェイ５１ ０発　　明　者　ロベルト・ペドロ・ローゼンクランツ アメリカ合衆国カリフォルニア 州９４０２５メンロ・パーク・サン ド・ヒル・サークル５６２ ０発　明　者　マイケル・ステファン・ベルランダー アメリカ合衆国カリフォルニア 州９２０１４デル・マル・セブンス ・ストリート４０７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　キャリヤ一部分を薬理作用を含む薬物分子部分に共
   有的に結合し、薬物をスペーサー基に順次に結合する反
   応官能基によって前記キャリヤーに結合し、前記スペー
   サー基をそれ自体前記薬理作用から離れた前記薬物分子
   上の位置に前記薬物を共有的に結合して構成したことを
   特徴とする共役分子組成物。 ｉ　前記キャリヤ一部分をペプチドとした特許請求の範
   囲第１項記戦の組成物。 ＆　前記ペプチドキャリヤ一部分を単分散ペプチドとし
   た特許請求の範囲第２項記載の組成物。 ４　ペプチドのアミンおよびカルボキシル末端を保護し
   た特許請求の範囲第２項記載の組成物。 翫　前記キャリヤ一部分を蛋白質とした特許請求の範囲
   第１項記載の組成物。 ａ　前記キャリヤ一部分をモノクロナル抗体とした特許
   請求の範囲第５項記載の組成物。 〃　前記キャリヤ一部分を天然に生ずるベプチＦとした
   特許請求の範囲第１項記載の組成物。 ＆　前記スペーサー基はアルキル鎖を含む特許請求の範
   囲第１項記載の組成物。 ９、　前記スペーサー基に含むアルキル鎖を分枝メチレ
   ン鎖とした特許請求の範囲第８項記載の組成物Ｏ １ａ　　前記スペーサー基に含む分校メチレン鎖は少な
   くとも２個のメチレン基からなる特許請求の範囲第９項
   記載の組成物。 １１前記スペーサー基に含むメチレン鎖は２〜少なくと
   も６個のアルキレン基からなる特許請求の範囲第９項記
   載の組成物。 ｌｉｔ　　前記スペーサー基は前記アルキル鎖および前
   記キャリヤーを介して付着する了ミド基を有する特許請
   求の範囲第８項記載の組成物。 ｌ＆　前記スペーサー基を分枝鎖有機基とする特許請求
   の範囲第８項記載の組成物。 １４−　前記分枝鎖有機基の一端をその一端で前記薬物
   に共有結合し、かつその他端で官能基に共有結合し、前
   記反応官能基を前記キャリヤーに共有結合した特許請求
   の範囲第１８項記載の組成物。 １Ｎ　前記ペプチドにおけるアミノ酸残基は前記スペー
   サ一部分に対する共有結合について選定した特許請求の
   範囲第２項記載の組成物。 ｌａ　　２または８個の薬物分子部分を前記キャリヤ一
   部分に共有結合した特許請求の範囲第１項記載の組成物
   。 １フ、　　前記薬物分子部分をカテコラミンとした特許
   請求の範囲幀１項記載の組成物。 １＆　前記薬物分子をβ−アドレナリン作用性とした特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。 １９、　　前記薬物分子を交感神、経作用薬物とした特
   ・、　１ 許請求の範囲第１項記載の組成物。 ！α　前記薬物分子をオータコイドとした特許請求の範
   囲第１項記載の組成物。 ｊｌＬ　　薬理作用を含む薬物を機能スペーサ一部勺と
   反応させて薬物協同作用物を生成し、前記スペーサ一部
   分を前記薬理作用から離れた前記薬物に結合させ、次い
   で前記協同作用物をキャリヤ一部分と反応させて前記協
   同作用物を前記機能化スペーサ一部分を介して前記キャ
   リヤーに共有結合することを特徴とする薬物共役の生成
   方法。 ２１　　前記薬−をアドレナリン作用性薬物とする特許
   請求の範囲第２１項記載の方法。 組　前記薬物Ｐカテコラミンホルモンとする特許請求の
   範囲第２１項記載の方法。 眩　前記スペーサ一部分を前記カテコラミンのアミン含
   有基に結合する特許請求の範囲第２８項記載の方法。 北　前記スペーサ一部分は長さを延長するアルキル鎖を
   含む特許請求の範囲第２１項記載の方法。 Ｓａ　　前記アルキル鎖を分校メチレン鎖とする特許請
   求の範囲第２５項記載の方法。 ２？、　　前記アルキル鎖は少なくとも２個または８個
   以上のメチレン基を含む特許請求の範囲第２５項記載の
   方法。 ２＆　前記スペーサーをカルボキシル官能基に結合する
   特許請求の範囲第２１項記載の方法。 ｌｊ９．　　前記薬物を交感神経作用薬物とする特許請
   求の範囲第２１項記載の方法。 ８ａ　　前記薬物をオータコイドとする特許請求の範囲
   第２１項記載の方法。 ８１　　単分散ペプチドを合成し、機能化スペーサ一部
   分を前記ペプチド上の少なくとも１個の予じめ選択した
   アミノ酸残基に結合し、次いで前記ペプチドおよびその
   付着スペーサ一部分を薬物分子と反応させて前記スペー
   サ一部分を共有結合させ、これによって前記ペプチドを
   前記薬物に結合させることを特徴とする薬物共役の生成
   方法。 ８１　　前記薬物をカテコラミンとする特許請求の範囲
   第８１項記載の方法。 ８８　　カテコラミンをそのアミン末端において前記ス
   ペーサ一部分およびペプチドに結合する特許請求の範囲 絃　カテコラミンを還元了ミノ化反応によって前記スペ
   ーサ一部分およびペプチドに結合する特許請求の範囲第
   ０項記載の方法０ ８＆　前記スペーサ一部分は分校アルキル鎖を含む特許
   請求の範囲第８１項記載の方法。 ａａ　　＠配分校了ルキル鎖は長さにおいて少なくとも
   ２個または８個以上のメチレン基とする特許請求の範囲
   第８５項記載の方法。 ８Ｉ　　前記薬物を交感神経作用薬物とする特許請求の
   範囲第８１項記載の方法。 ８＆　前記薬物をオータコイドとする特許請求の範囲第
   ８１項記載の方法。 ８９、　　一般式： ｃ式中ＡおよびＢはアミノ酸残基を同一かまたは予じめ
   定められた順序とする オリゴペプチドブロックを示す； Ｃは薬物を付着するために機能化した アミノ酸残基を示す； Ｓは薬物を反応官能基２に接合するス ペーサー基を示し、この場合スペ ーサー基は分校アルキル鎖を含み、 かかるスペーサー基の一端を薬物 に共有結合させ、その他端を前記 反応官能基に共有結合し、これか らアミノ酸残基Ｏの部分−Ｙ′を 形成する側鎖に共有結合する； Ｘは了ミノプｐツキング基または−Ｈ を示す； Ｘ’ｌゴカルポキシルブロッキング基または−Ｈを示す
   ； Ｙはアミノ酸残基側鎖を示す； ａおよびｂは互いに同一かまたは異に するＯまたは任意の小さい整数を 示す；および ｍは１．２．３等の数を示す）で表わ される薬物共役組成物。 値　前記薬物をアドレナリン作用性薬物とした特許請求
   の範囲第８９項記載の組成物。 ４１′ｆＩｔＩ記アドレナリン作用性薬物をカテコラミ
   ンホルモンとした特許請求の範囲第４０項記載の組成物
   〇 軸　前記！物を交感神経作用薬物とした特許請求の範囲
   第８９項記載の組成物。 ４＆　前記薬物をオータコイドとした特許請求の範囲第
   ８９項記載の組成物。 籠　前記ペプチドプ四ツクムおよびＢおよ・びアミノ酸
   残基０は前記薬物に対する単分散ペプチドキャリヤーを
   含む特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ４１Ｌ　　前記ペプチドプ璽ツクは蛋白質を含む特許請
   求の範囲第８９ｉ記載の組成物。 ４＆ｎ記ペプチドブロツクは七ツクａナル抗体を含む特
   許請求の範囲第８９項記帳の組成物。 鶴前記ペプチドブｐツクは天然に生ずるペプチドを含む
   特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 仏ヘフナト順序はＡｃ　−Ｌ　−Ｐｈｅ　−ＨＰＡであ
   る特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ４９、ペプチド順序はＡｃ　−Ｄ　−Ｐｈｅ　−ＨＰＡ
   である特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ５０、　　ペプチド順序はＡｃ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ　
   −ＯＨである特許請求の範囲第４０項記載の組成物。 ５Ｌ　　ペプチド順序はＡ（ｊ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌ／　
   −ＨＨＯＨ４である特許請求の範囲第８９項記載の組成
   物。 ！ＩｌＬ　　ペプチド順序はＢＯＣ−Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ
   −ＮＨＯＨＢである特許請求の範囲第８９項記載の組成
   物。 ５＆ヘフチド順序はＨ−ｐｈｅ　−Ｇｌｙ−ＮＨＯＨＢ
   である特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ＋１４　　ペプチド順序はＢｏｏ　−Ｇｌｙ−Ｐｈｅｌ
   　−ＮＨＯＨ。 である特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ａａ　　ペプチド順序はＡＯ−Ｇｌｕ（ＮＨＯＨ，）　
   −Ｐｈｅ　−Ｇｌｙ−ＨＨＯＨ８である特許請求の範囲
   第８９項記載の組成物。 ５ａ　　ペプチド順序はＡｃ　−Ｈｙｖ　−Ｐｈｅ　−
   Ｇｌｙ　−ＨＨＯＨ８である特許請求の範囲第８９項記
   載の組成・物０ ５７、　　ペプチド順序はＡａ　−０１ｔ　−Ｐｈｅ　
   −Ｇｌｙ　−ＨＨＯＨ８である特許請求の範囲第８９項
   記載の組成物。 比ペプチド順序はＢｏａ　−０１ｔ　−Ｐｈｅ　−Ｇｌ
   ｙ　−ＨＨＯＨ８である特許請求の範囲第８９項記載の
   組成物。 ５（１，ヘア”ｌ−ド順序はＡｏ　−Ｇｌｕ（ＨＨＯＨ
   ４）　−Ｐｈｅ　−Ｇｌｕ　−（ｌＪＨＯＨ６）２であ
   る特許請求の範囲第８９項記載の組成物。 ６（Ｌ　　ペプチド順序はＢｏｏ　−Ｈｙｖ、　−Ｐｈ
   ｅ　−Ｇｌｙ　−ＨＨＯＨ，である特許請求の範囲第８
   ９項記載の組成物。 ６Ｌ　　ペプチド順序はＢｏｃ　−Ｐｈｅ　−Ｈｙｖ、
   　−Ｇｌｙ　−ＨＨＯＨ８である特許請求の範囲第８９
   項記載の組成物。