JPH04500805A - 標的剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 標的剤 本発明は、悪性黒色腫細胞を指向する標的剤およびそれらの製造および用途に関 する。

悪性黒色腫は世界中で人口１００．０００人当たり１−６人の年間割合で起こる 。特に、南洋用、アメリカ合衆国、スイスおよびスカンジナビアのコーカザス人 種に流行しており、最近２０年間発生率が著しく増加している。黒色腫は早期転 移の傾向並びにガンマ線照射および全身性細胞毒性化学療法に対する耐性がある ため他の皮膚癌に比べて予後は悪い。治療の成功は、−次腫瘍およびそれらの転 移に対して診断剤および治療剤を標的化することができる剤により著しく改良で きるであろう。

この領域の多くの研究は特異細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体の開 発に集中してきた。上記研究では黒色腫に特有であるが、腫瘍の全ての変異およ び患者の免疫体系による抗体分子の認識および除去では共通の細胞表面マーカー を発見するのが困難である。

別の研究は、悪性および正常メラニン細胞の両方がペプチドホルモンアルファー メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳ）りのレセプタ・−をもつという観察結果を利 用する。ＭＳＨは、広範なを索動物でメラニン細胞によるメラニンの生成を刺激 する。哺乳類では、細胞表面レセプターと結合することにより、一連の事象を起 こし、最終的にチロシナーゼすなわちチロシンをメラニンの中間前駆体であるＬ −ドーパに変換する酵素の合成を刺激する。

ＭＳＨはホルモン活性を僅かまたは全く損失しないでＮ−末端で修飾することが でき、この方法でジフテリア毒素に結合したＭＳＨは選択的に試験管内で腫瘍細 胞を殺すことが示された（マーフィー、Ｊ、Ｒ等、プロシーディンゲス・オブ・ ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンシーズ・イン・ニーニスエイ、第 ８３巻、第８２５８−８２６２頁（１９８６年））。同様に、Ｎ−末端でキレー ト化剤であるジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）により置換したＭＳＨは 、試験管内および生体内において腫瘍細胞に急速に結合することができる（バー ド、Ｄ、　Ｒ等、バイオケミカル・ソサイエティー・トランサクション・ロンド ン、第１４巻、第６１４−６１．６頁（１９８６年））。

驚くべきことに２種またはそれ以上のＮ−末端結合ＭＳＨ型部分を含む新規標的 剤がメラニン細胞結合性の改良および／または剤を投与した動物からの急速なり リアランスを示すことを本発明により発見した。

したがって、本発明は式（１） ％式％）（１） ［式中、ｎは１より大、好ましくは２またはそれ以上、それぞれのＭはアルファ ーメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）およびそれらの誘導体および類似体から 選択されたＮ−末端結合ポリペプチドであり、Ｒは所望により連結基によりＭ基 に結合していてもよい標的部分である］ の生成物を提供する。

Ｒ基は、ポリペプチドのＮ−末端が標的部分の利用性を失なわせないで結合する ことができる少な（とも２つの部位を有する直結標的部分であることができる。

別法としては、Ｒ基はそれ自体Ｍ基と結合する連結基を経て結合することができ る。唯一個のみ結合部位をもつ標的部分は、反応性官能基を保持する連結試薬を 通して２つのペプチド鎖をつなぐことによりビス−ＭＳＨに連結することができ る。上記試薬の例は保護アミノ基を含むサクシニル−リジル（Ｆｍｏｃ）〜ベー ターアラニンのジサクシンイミジルエステルである。

適当な標的部分は、ダカルバジン（５−［３，３−ジメチル−１−トリアゼニル ］−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボキシアミド）、アクチノマイシンＤ１メト トレキサートおよびメチルＣＣＮＵ　（Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−（） ランス−４−メチルシクロベキンル）−Ｎ−ニトロソ尿素）およびそれらの前駆 体のような細胞毒剤および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）およびガンマインターフェロ ンのようなサイトカインを含む。

他の標的部分は、腫瘍の位置決定およびイメージングのための放射線ラベルのよ うな検出可能なラベルである。特に、細胞毒性剤として使用する適当な放射性核 種はエルビウム１６９、イツトリウム９０、レニウム１８６およびルテティウム １７７のような半減期の短いベータエミッターを含み、イメージング剤として使 用する適当な核種はインディラム１１１、インディラム１１３ｍおよびガリウム ６７を含む。

一般的に、放射性核種のような小さい標的部分はＭ基と直接結合するのに適当と は思われず、それ故連結基を経て結合する。多数の型の標的部分をペプチドに結 合するに適当な連結基は当業者には既知である。放射性核種の連結では、特にジ エチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）　、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ 、）　、エチレングリコール−０，Ｏ′−ビス（２−アミノエチル）　−Ｎ、Ｎ 、Ｎ’、Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、トリエチレンテトラアミンヘキサ酢酸（Ｔ ＴＨＡ）およびＮ、　Ｎ’−ビス（ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ 、Ｎ“−ジ酢酸（ＨＢＥＤ）のようなキレート剤を使用するのが特に好ましい。

Ｍ基は同じかまたは異なることができるが、現在全て同じであることが好ましい 。各Ｍ基はＮ−末端連結ＭＳＨペプチドまたはその類似体またはその誘導体であ る。他による調査の結果ＭＳＨ受容体に対する結合性を改良したＭＳＨの様々な 類似体および誘導体が同定され、Ｎ−末端連結ＭＳＨまたはソーヤ−・Ｔ、　Ｋ 、等、プロシーデインダス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエ ンシーズ・イン・ニーニスエイ、第７７巻、第５７５４−５７８８頁（１９８０ 年）に記載された［Ｎｌｅ’、Ｄ−Ｐｈｅ’］−アルファーＭＳＨのような「超 強力」合成メラノトロピンおよびＦ、アルーオベイディ等、ジャーナル・オブ・ メディカル・ケミストリー、第３２巻、第１７４−１７９頁（１９８９年）記載 のものが特に好ましく、超強力Ｍ　Ｓ　Ｈ４−１６類似体［Ｎｌｅ’、Ｄ−Ｐｈ ｅ’、Ｌｙｓ”、　Ｇ　Ｉ　Ｙ”］　ＣＩ　ＭＳＨ＋−１３ＮＨ２、［Ｎ１ｅ’ 、Ａｓｐ’、Ｄ−Ｐｈｅ’、Ｌｙｓ”、Ｇｌｙ”ｌ　ａ−ＭＳＨ＋−＋５−ＮＨ ｔ、［Ｎ１ｅ’、Ｄ−Ｐｈｅ’、Ｌｙｓｌｏ、Ｇｌｙ”］　］ａ−ＭＳＨ４−、 −ＮＨ２［Ｎ］ｅ’、Ａｓｐ５．Ｄ−Ｐｈｅ７．ＬｙｓＩｏ、Ｇｌｙ”］　］ａ −ＭＳＨ４−１３　ＮＨ２、［ＮＩｅ’、ＡＳＤ５．Ｄ−Ｐｈｅ’］　ａ−ＭＳ Ｈ４−１０Ｎ　Ｈ２、［Ｎｌｅ’、　Ｄ−Ｐｈｅ　）、　Ｌｙｓ　ｌＯ］　ａ− ＭＳＨ４−＋ａ　ＮＨ２、［Ｎ］ｅ’、Ｄ−Ｐｈｅ’、０ｒｎＩＧ］　ａ−ＭＳ Ｈ４−１゜−ＮＨ２、［Ｎ１ｅ’、　Ａｓｐ’、　Ｄ−Ｐｈｅ’、　Ｏｒｎ”コ 　ａ−ＭＳＨ４−１０Ｎ　Ｈ２、［Ｎ１ｅ’、　Ｄ−Ｐｈｅ　）、　Ｄａｂ　Ｉ Ｏ３ａ−ＭＳＨ４−１０ＮＨ２、［Ｎ］　ｅ’、Ａｓｐ５．Ｄ−Ｐｈｅ”、Ｄｐ ｒＩＯ］　ａ−Ｍ　Ｓ　Ｈ４−１ａ　Ｎ　Ｈ２、［Ｎｌｅ’、Ａｓｐ’、Ｄ−Ｐ ｈｅ’、Ｌｙｓ”］　］ａ−ＭＳＨ４−１０　ＮＨｚ、および［ＮＩｅ’、Ａｓ ｐ５．Ｄ−Ｐｈｅ７．Ｄａｂｌｏ、Ｌｙｓ１０］　（１−ＭＳＨ４−１０−ＮＨ ２およびアルーオベイディ等、ジャーナル・アメリカン・ケミカル・ソサイエテ ィー、第１ＩＩ巻、第３４１３−３４１７頁（１９８９年）に記載された環状α −メラノトロピン類が特に使用するのに好ましい。

本発明の生成物は、混合物または純化合物であることができる。

混合物の場合、混合物の各成分はｎの異なった値を有することができ、その結果 全体として生成物ではｎは整数または分数であることができる平均値となる。本 発明の生成物は、実質的に純化合物であることが好ましく、この場合ｎは２また はそれ以上の整数である。

別の態様では、本発明は式（ｎ） Ｌ　−（Ｍ）　ｎ　（ＩＩ） ［式中、Ｍおよびｎは式（１）と同じ意味であり、Ｌは連結基、好ましくはＤＴ ＰＡのようなキレート剤である］の生成物を提供する。

式（ＩＩ）の特に好ましい化合物は、式（ＩＩ　ａ）の２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡ Ｓ　ｅ　ｒ−Ｔｙｒ−Ｓ　ｅ　ｒ−Ｍｅ　ｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉ　ｓ−Ｐｈｅ−Ａｒ ｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐ　ｒｏ−Ｖａ　１−ＮＨ−（Ｈａｌ および式（ｎｂ）−（Ｉ’ｍ）の類似体である。

Ｓｅ　ｒ−Ｔｙ　ｒ−５ｅ　ｒ　−Ｎｌ　ｅ−Ｇｌｕ−Ｈｉ　５−Ｄ−Ｐｈｅ　 −Ａｒ　ｇ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐ　ｒｏ−Ｖａｌ−mＨ。

Ｎｌ　ｅ−Ｇｌ　ｕ−Ｈｉ　ｓ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔ　ｒｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌ ｙ−Ｐ　ｒ　ｏ−Ｖａ　ｌ　−ＮＨ。

＼　Ｎ１ｅ−Ｇｌｕ−Ｎ４ｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−八【９−丁ｒｐ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ− Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ。

本発明の生成物は通常の技術により作ることができる。２種またはそれ以上のペ プチドを単一標的部分または連結基に連結させるために、ペプチドを例えば通常 ペプチド合成に使用する樹脂ビーズのような固体基質と結合させるのがしばしば 好便である。

それ故、さらに本発明はＲ基またはその反応性誘導体とＭ基またはその反応性誘 導体を反応させることからなる式（Ｉ）の生成物の製造方法を提供する。Ｒ基が 連結基を経て結合した標的部分である場合、方法は（ａ）Ｌ基またはその反応性 誘導体とＭ基またはその反応性誘導体を反応させて、前に示した式（ｎ）の生成 物を形成し、（ｂ）式（ＩＩ）の生成物、またはその反応性誘導体と標的部分Ｒ を含む化合物Ｒ゛またはその反応性誘導体を反応させる段階を一般的に含む。

温度、時間および溶媒の選択のような反応条件および反応性誘導体の性質は基Ｒ ，ＬおよびＲ゛の性質から決定することができ、当業者で適当に選択可能な範囲 内である。

好ましくは製法はさらに生成物の分離および精製を含む。標的部分Ｒが、ＤＴＰ Ａのようなキレート剤である連結基りを経て結合する生成物では、製造方法は保 護アミノ酸残基の連続的添加による樹脂基質上でのペプチド鎖の合成、必要なら ば脱保護およびペプチド鎖と連結試薬との反応後、樹脂基質からペプチド鎖を除 去し、最後に例えば逆相クロマトグラフィーにより、製造された試薬で精製する ことを含むのが好ましい。

本発明の生成物は黒色腫の診断および外科的または療法学的処置、例えば腫瘍イ メージングおよび腫瘍部位への薬剤送達に役立つ。

それ故、さらに本発明は外科または療法によるひとまたは動物体の処置方法また はひとまたは動物体で実施する診断方法に使用する式（Ｉ）または（ＩＩ）の生 成物を提供する。また、ひとまたは動物体から取り出した組織のサンプルの試験 に式（Ｉ）または（ＩＩ）の生成物を使用する診断方法を提供する。さらに本発 明は、式（Ｉ）または（Ｉ［）の生成物の有効、非毒性量を黒色腫を有するかま たは有すると疑われるひとまたは動物に投与することからなる黒色腫の処置また は診断方法を提供する。

式（１）または（ｎ）の生成物は直接使用することができ、または式（Ｉ）また は（ｎ）の生成物および医薬的に許容される希釈剤または担体と共に含有してな る医薬組成物の形で投与することができる。上記希釈剤および担体は錠剤化試剤 、湿潤剤、結合剤および充填剤、抗酸化剤および抗菌物質のような保存剤、緩衝 液および塩および通常の注入媒体、特に注射用水を含む。上記医薬組成物、およ びそれらを形成する製法は、黒色腫の診断または外科または療法処１に使用する 医薬製剤における式（１）または（ＩＩ）の生成物の使用と同様にさらに本発明 の態様を形成する。

式（Ｉ）または（ＩＩ）の生成物、またはその組成物は腸内および非経口経路、 特に静脈内、筋肉内、皮下または腹膜経路による注射を含む任意の通常経路で投 与する。

用量および用法は、剤が位置決定またはイメージング目的に投与されるかまたは 療法剤として投与されるかにより、および患者の年齢、健康、体重および性によ り異なる。典型的な用量は、１日あたりＯ，００１ｍｇ／ｋｇから０．０５ｍｇ ／ｋｇ、好ましくは１日あたり（Ｌ　００３ｍｇ／ｋｇから０．０２ｍｇ／ｋｇ の範囲内であり得る。大人の日用量は、０．０５ｍｇ−５ｍｇ、好ましくは０゜ ０１ｍｇ−１ｍｇ、例えば０．５ｍｇで投与される。本用量は１回もしくは間を おいて分割して投与される。投与は必要に応じて繰り返す。

本発明を次の添付図面の簡単な説明するが、これにより限定されるものではない 。

第１図は、トリブシナーゼ検定におけるＭＳＨ，デス−アセチルＭＳＨ，ＭＳＨ −ＤＴＰＡおよび２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡの比較を示す第２図は、間をおいてマウス に注入した様々な組織における１１１第３図は、マウスに注入後４２時間の２Ｍ ５Ｈ−ＤＴＰＡ、ＭＳＨ−ＤＴＰＡおよびくえん酸インディラム塩の腫瘍／血液 濃度比の比較を示す。

第４図は、ラットに注入後の２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡ、ＭＳＨ−ＤＴＰＡおよびくえ ん酸インディラム塩の体全体のクリアランス速度を示す。

第５図は、４時間および５分での（ａ）前および（ｂ）後面がら体全体の１．Ｇ 、Ｅ、スキャンの結果である。

第６図は、４時間および５分での頚部および頭部（前）のスポット１．Ｇ、Ｅ、 スキャンを示す。

第７図は、４８時間での（ａ）前および（ｂ）後面がらの体全体の１．Ｇ、Ｅ、 スキャンの結果である。

第８図は、プローブ測定、体全体のＬＧ、Ｅ、スキャンおよび尿中で検出した放 射能から計算した２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡの体全体保持率のグラフである。

第９図は、２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡの血液クリアランスのグラフである。

第１０図は、０時での体全体の放射能の割合として表現した、腫瘍、腎臓、肝臓 、肺および膵臓に関する放射能のグラフである。数値は各組織の質量で訂正して いない。

第１１図は、各時点で残った体全体の放射能の割合として表現した、腫瘍、腎臓 、肝臓、肺および膵臓に関する放射能のグラフである。数値は各組織の質量で訂 正していない。

第１２図は、組織の単位体積あたり絶対値として計算した腫瘍、腎臓および肝臓 の放射能のグラフである。体積は（スキャンの領域）２／３として計測し、結果 を任意のスケールで各々相対的に表現した。

実施例Ｉ Ａ）２ＭＳＨ−ＤＴＰＡの合成 ペプチドを、ケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルズ・ペプシンセサイザー （ドライランド、Ａ、およびシェパード、Ｒ，Ｃ。

、テトラヘドロン、第４４巻、第８５９−８７６頁（１９８８年）参照）による 標準方法を使用したＦｍｏｃ−ポリアミド法によりＣ−末端から段階的に合成し た。ペプシンに樹脂（２ｇ１ノルロイシン／ｇの０１モリモル）を使用し、連結 剤はＦ−ｍｏｃ−アミノ−（２，４−ジメトキシ−４“　−カルボキシメトキシ ）ビフェニルメタンを使用した。連結剤のＦｍｏｃ基を除去腰生じたアミノ樹脂 をＦｍｏｃ−バリンペンタフルオロフェニルエステルおよび１−ヒドロキシベン ゾトリアゾール（各０８ミリモル）で処理した。

３０分後アミンのカップリングを完了し、Ｆｍｏｃ基除去および次の残基結合の 前に樹脂を洗浄した。本方法をＦｍｏｃアミノ酸ペンタフルオロフェニルエステ ルを使用して各段階で繰り返したが、セリンの場合はオキソベンゾトリアジンエ ステルでカップリングした。側輪は第３級ブチル誘導体として保護したが、アル ギニンの場合は４−メトキシ−２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル基を 使用した。

ペプチドのアセンブリーが完了した後、Ｆｍｏｃ基をＮ−末端残基から除去し、 ペプシン樹脂をジイソプロピルエチルアミン（０゜０２５ｍ１，０．１５ミリモ ル）の存在下ＤＴＰＡビス無水物（１０８ｍｇ、０３ミリモル）と反応させた。

反応を１時間後完了し、樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　、水、ＤＭＦ 、ジクロロメタンおよびエーテルで洗浄した。乾燥後、樹脂部分（０，７ｇ）を トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）　、エタン−ジチオール、フェノール、アニソール （９７：ｉ：１．：１、容ｌ）で−晩装置した。

ＴＦＡ溶液の蒸留後、エーテルを加えてこすり、白色固体（１１０ｍｇ）を収率 した。これを低圧系バイダックＣ１８（１５１０ｕｍ）のカラム（ｉ５ｍｍｘ５ ００ｍｍ）の逆相クロマトグラフィーで精製した。直線勾配を１５１にわたり水 中０．　１％ＴＦＡから０．１％Ｔ　ＦＡ中３５％（ｖ／ｖ）まで適用した。２ Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡを含む分画は高速液体クロマトグラフィーで同定され、これら を合わせて凍結乾燥し、１］、ｍｇを収得した。生成物の同定は高速原子衝撃質 量分析で確認され、分子量が３６０２±２であった。

Ｂ）１目インディウム標的２Ｍ５Ｈ−ＤＴＰＡの製造ペプチド（０，５ｍｇ）を 水（０，５ｍ１）に溶解し、くえん酸緩衝液（０，１Ｍ、、ｐＨ５，６，１，０ ｍ１）を加えた。コノ溶液を目’Ｉ　ｎＣＩｓ　（０，０４Ｍ塩酸（アメルンヤ ム社）０．１ｍｌ中１．０ＭＣ１）で標的した。ペプチドの結合を二重上昇系を 使ってンリカゲル薄層クロマトグラフィーで確認した。第１溶液は１０％水性酢 酸アンモイウム／メタノール（１：１、Ｖ／Ｖ）で、第２溶液はメタノール／水 （８，５：ｉ、５、ｖ　／　ｖ　）にした。この系で、非結合インディラムは、 Ｒｆ値０．　５を有するコロイド状水酸化物を形成し、一方標的ペプチドが溶媒 先端で移動した。溶液をインディラム添加直後および１８℃５時間後で分析した 場合、溶媒先端で放射能が１００％局在した。

Ｃ）試験管内シロシナーゼ活性 クロードマンＳ９１細胞を１０％熱不活性化胎児うし血清で補足したハムＦＩＯ 培地４ｍｌを使用して２５ｃｍ２培養フラスコ中およそ２５，０００細胞ｃｍ− ”の密度に単層で成長させた。培地を置きカニ、ＭＳＨ，デフ、−アセチルＭＳ Ｈ，ＭＳＨ−ＤＴＰＡｔたは２Ｍ５Ｈ１０−５および１ｏ−ｅモル濃度加えた。

２４時間後、培地およびメラノトロピンを取りかえ、３．　５−３８−チロシン １ｕＣｊを加えた。３．５−３８−チロシンインキュベーション培地の最終比活 性を０．ＩＣｉ／ミリモルにした。

さらに２４時間後、各インキュベーションがらの培地０．　２ｍｌを活性炭懸濁 液１ｍ１（０、ＬＭ＜えん酸中１００ｍｇ／ｍｌ）を含む遠心管に移した。管を 旋回させ５分間７００Ｘｇで遠心した。

各上清の一部（０，５ｍ１）をシンチレーション・バイアルに移し、バラカード ・トリカーブ３００Ｄシンチレーシヨンカウンターで計数した。未抽出培地の一 部（０，１ｍ１）も計数した。最後に残留培地を除去し、細胞単層を１ｍｌの等 張トリプシン／ＥＤＴＡ中に懸濁した。分散した細胞をクールター計数器で計数 した。１０５細胞あたりチロシンから生ずる水を計算し、結果をメラノトロピン なしの対照から得た値で割った。結果を第１図に示す。

Ｄ）生体内比較試験 ２　Ｍ　Ｓ　Ｈ−Ｄ　Ｐ　ＴＡまたはＭＳＨ−ＤＴＰＡを水０．０５ｍ１゜くえ ん酸緩衝液０．２ｍｌおよび”’Ｉｎ５ｕＣｉ中ＤＴＰＡペプチド（２ＭＳＨ− ＤＴＰＡｏ、２７７ｐｇ、、ＭＳＨ−ＤＴＰＡｏ。

１５３ｐｇ）２．５ナノモルを使うほかは（Ｂ）に記載した一般的方法により１ 目Ｉｎで標的した。溶液を生理食塩水とインジウム添加後２５ｍｌに調製し、た 。本溶液０．１ｍｌを事前に１４日間りロードマンＳ９１細胞に腹腔的接種しつ づけた２０ＤＢＡ２マウスに腹腔的注入した。数種の試験では、マウスをＤＴＰ Ａペプチドを省略するほかは上記のように製造された溶液を注入した。

動物を標的したペプチドの注入後５．１７．２６および４２時間で群に分けて殺 した。血液（０，１−０，３ｇ）、脳（全部）、肺（全部）、骨の筋肉（およそ ０１ｇ）および腫瘍（０，１−０゜５ｇ）を取出した。それぞれの組織の重量を 測り、５Ｏ−５００ＫｅＶのガラスを使ったバッカードマルチーブリアス４ガン マシンチレーションカウンターで計数した。結果はＣＤＭＫ／ｇ湿重量として表 現され、各時点での血液量で割った。

体全体保持試験では、すでに記載した３種の放射性製剤各０．５ｍｌを正常ラッ トに腹腔的注入した。放射能を鎮静した動物について、体全体がプローブの受入 れ円錐内にあるように動物の前部に位置し、動物の軸にそって面する外部ガンマ 線シンチレーションプローブにより測定した。測定は注入０．４．２１．４６お よび７２時間後で行い、結果は検出した最大値の割合として表現した。

実施例２ ビス（Ｎｌ　ｅ’、Ａｓｐ’、Ｄ−Ｐｈｅ’、ＬｙｓＩＯ）ａ−ＭＳＨ。

−１゜−ＤＴＰＡの合成 ペプチドをケンブリッジ・リサーチ・バイオケミカルズ・ペブシンセサイザー（ ドライランド、Ａおよびシェパード、Ｒ，Ｃ，、テトラヒドロン、第４４巻、第 ８５９−８７６頁（１９８８年）参照）の標準方法を使ってＦｍｏｃ−ポリアミ ド法によるＣ−末端から段階的合成した。ベジンンＫＢ樹脂（１ｇ、ノルロイシ ン／ｇの０．２モル）を使用し、連結剤をＦｍｏｃ−アミノ−（２，４−ジメト キシ−４°−カルボキシメトキシ）ビフェニルメタンにした。連結剤のＦｍｏｃ 基を除去し、生じたアミノ樹脂をＦｍｏｃ−リジン（Ｂｏｃ）ペンタフルオロフ ェニルエステルおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（各０．６ミリモル） で処置した。１時間後、アミンのカップリングを完了し、樹脂をＦｍｏｃ基を除 去する前に洗浄した。次の残基、トリプトファンをペンタフルオロフェニルエス テルとして加えた。第３および第４残基であるアルギニンおよびＤ−フェニルア ラニンをベンゾトリアゾール−１−イロキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホ ニウムへキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）およびジイソプロピルエチルアミ ン（各試薬とも０．６ミリモル）の存在下遊離酸としてカップリングした。残り の残基をペンタフルオロフェニルエステルとして加えた。側鎖はアルギニンの場 合は２．　２．　５．　７．　８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル基を 使うほかは第３級ブチル誘導体として保護した。

ペプチドのアセンブリーが完了したとき、Ｆｍｏｃ基をＮ−末端残基から除去し 、ペプチド樹脂を１−ヒドロキシベンゾトリアゾールおよびジイソプロピルエチ ルアミン（各０．１５ミリモル）の存在下ＤＴＰＡビス無水物（５５ｍｇ、０． １５ミリモル）と反応させた。−晩生放置後、樹脂をジメチルホルムアミド（Ｄ ＭＦ）で洗浄し、反応を新しい試薬で繰り返した。反応を２４時間後完了し、樹 脂をＤＭＦ、水、ＤＭＦ、酢酸およびエーテルで洗浄した。乾燥後、樹脂（１， ２１ｇ）をトリフルオロ酢酸（５８ｍｌ）、アニソール（１ｍｌ）、エタンジチ オール（０，５ｍ１）およびインドール（１ｇ）からなる混合物とともに穏やか に撹拌した。２時間後、樹脂を濾過、ＴＦＡで洗浄し、濾過物を合わせて旋回蒸 留した。エーテル（１００ｍｌ）を残留物に加え、粗ペプチド（１７３ｍｇ）を 沈殿した。生成物をバイダックＣ１８の逆相クロマトグラフィーで精製した。化 合物を実施例１で記載したように１　ｎｌ１１で標的した。

実施例３ ビス（Ｎｌｅ’、Ａｓｐ’、Ｄ−Ｐｈｅ’、Ｄａｂ”）ＭＳＨ４−＋。

−ＤＴＰＡの合成 第１アミノ酸がＬ−ジアミノブチル酸（Ｄａｂ）であるほかは上記に記載したと おりに製造および精製した。化合物を実施例１に記載したように１ｎＩＩ＋で標 的した。

ひと黒色腫を標的することの証明 患者は４年間の黒色腫歴をもつ５７オの男性であった。左瞼の第１の腫瘍（外科 的に除去）が転移し、首の左側に大きなこぶが形成された。患者は化学療法を受 けていた。

３５ＭＢＱ”で櫟的した２Ｍ５Ｈ−ＤＰＴＡｏ、５ｍｇを数分後低速静脈内注入 により投与した。体全体の放射能をプローブにより注入後すぐに測定した。体全 体の前、後面および腫瘍領域スポット１．Ｇ、Ｅ、スキャ〉・（コンビ、−ター データ取得）および体全体のプローブ測定を注入後４時間、２４時間および４８ 時間に実施し。

た。ヘパリン化した血液ザンブル１０ｍ１を１０分、２時間、４時間、２４時間 および４８時間にきり出し、尿を０−４時間、４−２４時間および２４−４８時 間で集めた。

結果を第５−１２図に示す。

クリにモＩレリ配ハ［ 晴勺 製剤 （ａｔ　ｆｂｌ （ａ）　（ｂ） 時用 中フも一ヲ′　一本−１ｋ　−◆−ＷＢ　スキャ〉時間 Ｊｌｎ勇々 φ月重卯１　−一一竪几叡　今ハ干Ｍ投　−合一置市　÷博〜に−・−月重傷　 −一−３Ｌル駁　今ハ干剛改　−＾−肺　＋ｎｗ吋同 −・−月重チ弧　−輔一臀几椴　−ｅ−７１干關投国際調査報告 １＋＋ｅ＋ｉ１□＋＋１’＾””ｌＩ””’ＰＣＴ／ＧＢ８９１０１１８０国際 調査報告 ＧＢ　８９０１１８０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ） Ｒ−（Ｍ）ｎ （Ｉ） ［式中、ｎは１より大、各Ｍはアルファーメラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ） およびその誘導体および類似体から選択されたＮ−末端連結ポリペプチドであり 、Ｒは、所望により連結基によりＭ基に連結していてもよい、標的部分である］ で示される生成物。 ２．ｎが２またはそれ以上である請求項１記載の生成物。 ３．ｎが２である請求項１記載の生成物。 ４．Ｒ基がＭ基とそれ自体結合する連結基を経て結合する、請求項１−３のいず れか１項記載の生成物。 ５．連結基がキレート剤である請求項４記載の生成物。 ６．キレート剤がジエチレントリアミン五酢酸である請求項５記載の生成物。 ７．Ｍ基が同じでありおのおのがＮ−末端連結アルファーメラニン細胞刺激ホル モン（ＭＳＨ）または［Ｎｌｅ４，Ｄ−Ｐｈｅ７］−α−ＭＳＨ、ＭＳＨの超強 力効果的ＭＳＨ４−１０類似体および環状α−メラノトロピンから選ばれた超強 力合成メラノトロピンである請求項１−６項のいずれか１項の生成物。 ８．標的部分Ｒが細胞毒性剤またはそれの前駆体、サイトカイン剤または放射性 核種である請求項１−７のいずれか１項記載の生成物９．式（ＩＩ） Ｌ−（Ｍ）ｎ （ＩＩ） ［式中、ｎは請求項１記載と同様であり、Ｌは連結基である］で示される生成物 。 １０．基Ｒまたはその反応性誘導体とＭ基またはその反応性誘導体を反応するこ とからなる請求項１−８のいずれか１項の式（Ｉ）の生成物の製造方法。 １１．請求項１−８のいずれか１項の式（Ｉ）の生成物およびその医薬的に許容 される担体または希釈剤を含む医薬製剤。