JPS58213795A - マクロライド抗生物質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ＣＰ−５５，８５８と称される新規抗生物質
複合体に関し、より詳しくは、その複合体中に宮まれる
ＣＰ−５６，０６８およびＣＰ−５６，０６４と称され
る２つの主たる抗生物質に関する。この複合体はインド
の土壌サンプルから得られた新規ストレプトマイセス（
ｓｔｒｅｐｔｏｍ９ｃｇａ）培養物＃４０９−４０から
得られた。化学的には、これら２つの王たる抗生物質は
ラクトン環が１６員であるマクロライド化合物である。

しかし、これらの抗生物質は公知の１６員マクロライド
、たとえばタイロシンとは５位の炭素に以前に知られて
いない糖成分が付加している点で異なる。

本発明は式 ） の化合物から遠択される新規マクロライド抗生物實訃よ
ひその医薬として過当な酸付加塩を提供する。ただし式
中Ｒ１は式 ＮＣＣＨｍ　）　ｔ の基である。

式！および■の化合物は抗菌剤として有用であり、培養
物Ｎ４０９−４０と称されるストレプトマイセス・アル
プス（ａｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ａｌｂｕｍ）の新規
な亜種の培養物によって得られる。この新規な亜種のス
トレプトマイセス・アルプス（ロッジドリア）ワックス
マン・エンド・ヘンリシ亜種インディカス・ハン新亜＠
　（５ｔｒｅｐｔｏｎｙｃｅｓ　ｐｌｂｓｃａ（Ｒｏｓ
ａｉ　Ｄｏｒｉａ）Ｗａｋｓｍａｎ　ａｎｄ　ｔｌｅｔ
ｖｒｉｃｉ　ａｕｂｓｐ。

１ｎｄｉｃｕａ　ｆｌｗａｎｇ　５ｘｂａｐ、ｎｏｖ、
）（ＡＴＣＣ８９０１２）と命名された。

本発明の抗生物質複合体は培養物＃４０９−４０と称さ
れる新しい微生物の発酵によって生産され、該微生物は
インドの土壌サンプル力）ら得られた。培養物＃４１）
９−４０は米国コネチコット州ダロトンの７アイザー・
インコーホレーテッドのＬｉａｎｇ　Ｈ，Ｈｕａｎｇ　
ＶＣよって特性をしらべられ確認された。

培養物Ｎ４０９−４０は放線菌目の細い菌糸、胞子のら
せん状の鎮および細胞壁中のＬＬ−ジアミノピメリン酸
を有し、ストレプトマイセス属の％性を有することがわ
かった： 培養物Ｎ４０９−４０’に斜面培地から液体ＡＴＣＣ培
地１７２に移し、２８℃で４日間振とう培養した。次い
でこれを新しいＡＴＣＣ培地１７２に移し、四−条件下
にさらに４日間インキュベートした。培養物を遠心分離
し、滅菌蒸留水で８回洗い、放ＩＩＩ菌目の確認に通常
使用される培地上に移した。２８℃でインキュベーショ
ンを行ない、結果を梱々の時間に測定した。１４−惺目
に測定するのがもつともふつうである。

培養物の特性をしらべるために使用した確認培地および
それらの組成についての参考文献は次のとおりである： １、　　）リブトン酵母エキスプロス−ＣＩＳＰ◆ｌ培
地、ディフコ） ２、酵母エキス−麦芽エキス寒天−（ｒｓｐす２培地、
゛ディフコ） ８、オートミール寒天（ＩＳＰ÷８培地、ディフコ） ４、無機塩−でんぷん寒天−（ＩＳＰす４培地、ディフ
コ） ５、グリセリン−アスパラギン寒天−（ＩＳＰ＋５培地
、ディフコ） ６、　　Ｊブトンー酵母エキス鉄寒天−（ＩＳＰす６培
地、ディフコ） ７、ツアペック−庶糖縫天−８、Ａ、Ｗａｋｓｒｒｕｘ
ｎ、ＴｈｅＡｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ、Ｖｏｌ、２　
、　ｍｅｄｉｕｍ　ｎｏｖ　１　、　ｐ。

８２８．１９６１ ８、クルコースアスパラギン寒天−上記文献ｒｒｕｒｄ
ｉｕｍ　　ｎｏ　、２　　、　　ｐ、　　８　２　８９
、ヘネットの寒天−上記文献ｍｅｄｉｕｍ　ｎｏ　、　
８０　＋ｐ、８８１ 肚　エマーソンの寒天−上記文献ｍｅｄｉｕｒｎ　ｎｏ
。

２８、ｐ、８８１ １１．栄養寒天−上記文献ｍｔｒｄｉｕｒｎ　ｎｏ、１
４　＊　ｐ。

　８０ 琺コードンとスミスのチロシン寒天−ｕｏｇ。

Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　Ｍ、Ａｆ、Ｓｍ１ｔｈ、Ｊｒ、
Ｂａｃｔ、６９　：１４７−１５０．１９５５ ｂ、カゼイン寒天−上記文献 比　マレイン酸カル′シウム寒天−８，，４，１４％ｋ
ｓｍａｎ。

Ｂａｃｔ、１ｌｅｖ、、２１　　：　　１−２９．１９
５７ｂ、ゼラチン−１１，Ｅ、Ｇｏｒｄｏｎ　ａｎｄ　
Ｊ、Ｍ、ルｆｉｈｒｎ、Ｊｒ。

Ｂａｃｔ、’１８：　　１５−２７．１９５７抵　でん
ぷん−上記文献 ■、有機硝酸塩ブロスー上記文献 凰　デキストロース硝酸塩ブロス−８，Ａ、Ｗａｋｓｍ
ａｎ。

Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍ’Ｉｃｅｔｅａ、Ｖｏｌ　２　
、　ｍｅｄｉｕｍ　ｎｏ。

１、ｐ、８２８，１９６１．３０ｇの蔗糖の代り。にａ
ｇのデキストロースを使用し寒天を省略。

勘、ばれいしょにんじん寒天−Ａ１．Ｐ−Ｌｅｃｈｅｒ
ａｌｉｅｒ。

Ｊｒ、Ｌａｂ、ａｎｄ　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ａｉｅｄ、
Ｔ　Ｉ’　：　９８４−９４４．１９６８ただし、ｇｏ
ｇｏばれいし７よ、２α　２％水道水寒天 ２Ｌ　　スキムミルク−ディフコ ２２、セルロースの利用 ａ）　　Ｈ，Ｌｊｅｎｓｅｎ、Ｐｒｏｃ、Ｌｉｎｎ、Ｓ
ｏｃ、Ｎ、Ｓ、Ｗ−５５：２８１−２４８．１９８０ ｂ）　　　ルｆ、Ｌｅｒｉｎｅ　　　ａｎｄ　　ＨｏＷ
、５ｃｈｏｅｎｌｅｉｎ、ＡＣｏｍｐｉｌａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　ｌ１ｖｆｅｄｉａ、ｍｅｄｉｕ
ｒｎｎｏ、２５１１．１９８０ ２８、炭水化物−ＩＳＰ÷９培地、ディフコ２４、温度
範囲−ＡＴＣＣＣｕ１ｔｕｒｅ　ＣｏｌＣｏ１１ｅｃｔ
ｉｏｎＣａｔａｌｏ、第１２版、ｐ、８２９．１９７６
のＡＴＣＣｍｅｄｉｕｒｎ　１７２゜ 培養物Ｎ４０９−４０は下記特性を示した。色は通常の
用語およびカラー・ノ・−モニイ・マニュアＡ／　（Ｃ
ｏ　ｌ　ｏｒ　ＩＩａｒｍｏｎｙＭａｎｕａｌ　）第４
版の色片を参照して記述した。

生育中１ｉ’／：　１いし良好、無色ないしクリーム色
（２ｃα　）、薄いないし盛り一ヒがりあり、しわあり
、気中菌糸体なし、裏面は表と同一、０Ｔ浴性色素淡い
黄色がかった色（２１ｃ）。

生育中位、黄色がかった白色、わずかに盛り上がりあり
、なめらか、気中菌糸体白、葦ばら、裏面は表吉同−１
可溶性色素なし。

生育中位ないし良好、畝色がかった白色ないし淡い黄色
がかつ７た色（２ｅαないし２ｅα入薄いか盛り上がり
あり、なめらかないししゎあり、気中菌糸体白色、普ば
ら、裏面表と同一、可耐性色累茶色が〃・つた色（Ｒｌ
ｇ）。

生育中位、淡いラベンダー色（８ｅｃ）、薄くなめらか
、気中菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素、非常
に淡いラベンダー色（８ｃα）。

ゴートンおよびスミスのチロシン寒天 生育中位、クリーム色（２ｃａ）、薄くなめらか、気中
菌糸体なし、裏面は表と同一、可溶性色素淡い黄色がか
った色（２ｅα）。

ツアペック−蔗糖寒天 生育中位、淡い黄色がかった色（２ｃα）、薄くなめら
か、気中菌糸体白色、まばら、裏面は表と同一、可溶性
色素淡い黄色がかった色（２ｃα）。

グルコースアスパラギン寒天 生育乏しいか中位、クリーム色（２Ｃａ）、薄いか盛り
上がりあり、なめらかないししわあり、気中菌糸体なし
、裏面は表と同一、可溶性色素なし。

マレイン酸カルシウム寒天 生育中位、淡い黄色がかった色ないし黄色がか１　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１゜つた色（１−
ＣｃＬｚ　１２　ａ　ａないしＩＨｓα）、薄い、なめ
らか、気中菌糸体なし、裏面は淡い黄色がかった色、・
可溶性色素なし。　。

生育中位、淡い黄色がかった色（１２Ｃｏ）、薄い、な
めらか、気中菌糸体なし、硬面は表面と同じ、可溶性色
素淡い黄色がかつに色（２ｅα）。

ベネットの寒天 生育良好、クリーム色ないし黄色がかった色（２Ｃα、
２ｅαないし２ｅα）、盛り上がっており、粗いしわな
いしひび割れあり、気中菌糸体あり、裏面は表と同一、
目Ｔ齢性色素淡い黄色ががった色（２１１α）。

エマーソンの寒天 生育良好、クリーム色（２ｃα）、盛り上がりあり１．
ｖａかＧルわあり、気中菌糸体なし、表裏同一、町浴性
色素淡い黄色ががった茶色（２１ｃ）。

栄養寒天 生育乏しく、無色ないしクリーム色（２ｃα）、薄い、
なめらか、気中繭糸体、裏面は表と同一、可溶性色素な
し。

ゼラチン寒天 生前中位ないし良好、クリーム色（２ｃａ）、わずかに
盛り上がり、なめらかあるいは近縁部にしわ、気中菌糸
体なし、裏面は表と同一、ＯＴｍ性色素なし。

ばれいしょにんじん寒天 生育乏しいが中位、淡い黄色ががった色（ｌｉＣα）、
薄い、なめらか、気中菌糸体白色、わずか、表面は表と
同一、ＯＴｍ性色素なし。

水道水寒天 生育良好、無色ないし白色、薄い、なめらか、気中菌糸
体白色、まばら、裏面は表と同一、ＯＴ溶性色素なし。

培養物＃４０９−４０は下記生化学特性を示した：メラ
ニン生成せず；二硫化水素生成；ゼラチン液化；でんぷ
ん加水分解；銅酸塩を還元して亜硝酸塩とし；両方のセ
ルロースプロス上で生育および分解せず、ミルクを凝固
および（プトン化せず；カゼイン分解（ト）；マレイン
酸カルシウム分解（−１−）：チロシン分解（ト）；グ
ルコース、イノシトール、フラクトース；および蔗糖を
炭水化物源として利用；アラビノース、マンニトール、
メリビオース、チフィ２ノース、ラムノース、およびキ
シロースは炭水化物源として利用せず。

形態学的特徴はツアペック−蔗糖寒天上で１６日間イン
キュベーションしに後観祭した。培養物□ ＃４０９−４０は下記特性を示した二白色系統の胞子塊
；基軸分枝の胞子柄、密生；緻密なら旋形あるいは希に
胞子鎖当り８〜７回巻いたゆるいら旋形の胞子鎖、ら旋
の直径小、しばしは房の中で密集し、胞子鎖当り１０〜
５０胞子；球状、卵形ないし楕円形の胞子、直径０．７
〜ＬＯｐｒｎｓ　　たとえば０．８〜１．１　Ｘ　０．
７−０．９μｍ１　なめらか。以上走査電子顕微鏡での
所見。

培養物Ｎ４０９−４０の温度対生育速度の関係は次のと
おりである：２１℃、良好な生育；２８℃、すぐれた生
育；８７℃、生育乏しい；４５℃、生育乏しい。

培養物−／ｌ／４０９−４０についての全細胞および糖
の分析はＢｅａｋｅｒ、Ｂ、ｉｔｔ　ａｌ、、Ａｐｐｌ
、に１ｉｃｒｏｂｉｏｌ、。

１２：４２１−４２８，１９６４；およびＬｅｃんｅ−
ｒａｌｉｅｒ、Ｍ、Ｐ、、Ｊ、Ｌａｂ、Ｃ１１ｎ、Ａｌ
ｅｄ、、’Ｉ　１　：　９８４−９４４．１９６８の方
法を使用して行なった。

結果は次のとおり：全細胞加水分解物はＬ　Ｚ、−ジア
ミノピメリン酸、ガラクトースおよびリボースを含有す
る。

培養物Ｎ４０９−４０は白色系統の胞子、コイル状の胞
子鎖、なめらかな胞子、およびメラニン反応陰性を特徴
とする。この培養物はストレプトマイセス・アルプス（
ｓｔｒｅｐｔｏｍ’／ａｓｓ　ａｌｂｕｓ）に近似して
おり、ストレプトマイセス・アルプス（５ｔｒｅｐｔｏ
ｒｎｙｃｅｓ　ａｌｂｕｓ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ８００４の
培養物（タイプカルチャー）を・使用して比較する。

両方の培養物はコイル状に巻いた胞子鎖およびなめらか
な表面の白色胞子の塊を産生じ、メラニン反応陰性、硫
化水素生成陽性である。

Ｎ４０９−４０と異なり、ストレプトマイセス・アルプ
スＡＴＣＣ８００４はアラビノース、マンニットおよび
キシロースを利用するが、イノシトールは利用しない。

酵母エキス−麦芽エキス寒天上、ツア（ツク蔗糖寒天、
グルコースアスパラギン寒天、エマーソンの寒天、およ
び栄養寒天において、ストレプトマイセス・アルプスＡ
ＴＣＣ８００４のコロニー（未白色であるが、Ｎ４０９
−４０のコロニーは気中菌糸体がない為クリーム色であ
る。オートミール寒天、グリセリン−アスパラギン寒天
、グルコースアスパラギン寒天、および栄養録天上、ス
トレプトマイセス・アルプスＡｒｃｃ８ｏｏ４は＃４０
９−４０のような合体した垢状物としてではなく閘々に
離れたコロニーとして生育する。さらに、ストレプトマ
イセス・アルプスＡＴＣＣ８００４は酵母エキス−麦芽
エキス寒天、無機塩−でんぷん寒天、ツアペック庶、塘
寒天およびエマーソンの寒天上で可溶性色素を生成しな
い。これらの類似性と相異を根拠にして、培養物Ｎ４０
９−４０はストレプトマイセス・アルプス（８，αｌ　
ｂｕｓ　）の新しい亜種を表わすと考えらし、ストレプ
トマイセス・アルプス（ロッジドリア）ワックスマン・
エンド・ヘンリシ亜種インデイカスハン新亜檀（ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃａｓ　ａｌｂｕｓ（Ｒｏｓｓｉｌ）ｏｒ
ｉａ）Ｗａｋｓｍａｎ　ａｎｄ　Ｈｅｎｒｉｃｉ　５ｕ
ｂｓｐ、ｉｎｄｉｃｍノｈＬａｎｇ　５ｕｂａｐ、ｎｏ
ｖ、と命名し、アメリカン虐タイゾ・カルチャー・コレ
クション（ＡＴＣＣ）（米国、メリーランド州ロックビ
ル）にＡ　Ｔ　ＣＣ８９０１２という番号で寄託されて
いる。この培養物のＡＴＣＣでの寄託の永続性および公
衆への分譲は特許された場合特許４りの存続期間を通し
て確保される。培養物の分譲は８７ＣＦＲ１，１４およ
び８５ＵＳＣ１１２にもとづき出願が係属している限り
可能である。寄託微生物の公衆への分−に対するすべて
の制限は特許付与と同時に完全に除かれる。

この発明の抗生物質複合体はストレプトマイセス・アル
プス亜柚インディカスＡＴＣＣ８９０１２を発酵させ、
発酵ブロスから該複合体を抽出することによって得られ
る。式Ｉおよび■の化合物はクロマトグラフィーまたは
向流分配のような古典的方法によって該複合体から得ら
れる。

ストレプトマイセス・アルプス岨種インディカスＡＴＣ
ＣＢ９０１２の発酵はストレプトマイセス・フラディア
エ（ｓｔｒａｐｔｏｍ’Ｊｃｅｓ　ｆｒａｄｉａｅ）か
らマクロライド抗生物質タイロシンを得るのに使用され
るのと類似の条件下に行なつことができる。

一般に、ストレプトマイセス・アルプス、Ａ１”ＣＣ８
９０１２は２４〜８６℃で水性栄養培地中攪拌し通気し
ながら深部培養条件下に生育できる。該栄養培地は糖、
でんぷんまたはグリセリンのような資化性炭素源：大豆
ひきわり粉、カザミノ酸および酵母抽出物のような有機
窒素物質；穀物可溶性成分、魚粉および綿実粉のような
生育物質：鉄、銅および唾鉛のような微綾元素を含有す
る鉱堪；および緩衝剤としての炭酸カルシウムまたはリ
ン酸カルシウムを含有する。

接種物は培養物＃４０９−４０をインキュベートした斜
面またはルー（＃！０ＵＺ）ボトルからの菌体を・こす
りつけることによって調映される。まず最初に斜面およ
びルーボトル上で生育させるのに適した固体培地はＡＴ
ＣＣ培地４１７２である。

グルコース　　　　　　　　　　　　　　ｌＯ町ｍ性で
んぷん　　　　　　　　　　　　２０酵母エキス　　　
　　　　　　　　　　　　５ＮＺアミンＡ（タンク）０
５ 炭酸カルシウム　　　　　　　　　　　　　ｌ蒸留水ｔ
−）Ｊｎえて１０１００ＯＩにする。

ｐＨをＫＯＨで７．０とする。

寒天を２０ｊｉ／ＩＩ加える。

半　カゼインの酵素分解物を精製したもの。

斜面からの菌体を使用して振とうフラスコあるいは接種
タンクのいずれかを接種する。又は別法おして、接種タ
ンクを振とうフラスコから接種する。振とうフラスコに
おいては、生育は一般は１または８日のうちに最大に達
したが、接種タンクでは生育は通常接種から２０〜４０
時間のうちにもつとも有利な時期が来る。発酵槽は接種
フラスコまたはタンクからの生育ブロスで完全に無菌条
件下に接種し、１２〜８０時間発酵させる。振とうフラ
スコ中では振とう器りの振とうによって、タンク中では
イル２容量の空気／ブロスの容ｔ／分の速度でスパージ
ャ−を通して滅菌した空気を通気することによって通気
し続けた。振とう（撹拌）のスピードは使用した撹拌器
のタイプに依存し、振とうフラスコは通常１５０〜２０
０サイクル／分振とつし、発酵槽は８００〜６００回転
／分撹拌する。

滅菌はすべての時間を通じて保持する。温度は２４℃〜
８６℃に維持した。発酵の間の泡立ちは精製大豆油のよ
うな滅菌した消泡剤で抑制できる。

あるいは接種後補給のために筐たは必装に応じて無菌的
に他の適当な消泡剤を使用できる。

発酵の間の抗生物質の生産状況および、発酵プロスおよ
び回収流の生物活性は黄色ブドウ球菌（ｓｔａｐｈ’／
１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）または枯草菌（Ｂａ
ｃｉｌｌｌＬｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）の感受性菌株を１
史用するプロスの生物検定によって監視できる。黄色ブ
ドウ球菌Ａ’ｌ’ＣＣ６５８Ｂおよび枯草菌Ａ　１’　
ＣＣ６６８８はこの目的のために適当な菌株である。

標準的なブレードによる検定技術を使用する。すなわち
、プロスで飽和したフィルターペーパーディスクの周囲
の阻止帯を抗生物質の効力の測定に使用する。シリカゲ
ルを１史用する薄１−クロマトグラフィーは発酵培地で
生産された抗生物質を分析する有用な道具であり、粗製
およびｆｌｌ製された物質の組成物は発酵プロスから抽
出される。プロスおよび回収流中の成分は、クロロホル
ムとメタノール９：ｌの混合物中のアナルテク（Ａｎａ
ｌｔｅｃｈ）シリカゲルＧＦプレートを使用し、抗生物
質を２５４ｍμの紫外線で可視化することによって検出
できる。該プレートに黄色ブドウ球菌あるいは枯草菌を
接種した寒天を車ね合わせて８７℃で１６時間インキュ
ベートして抗生物質を検出できる。

この発明の抗生物質複合体は酢酸エチルｎ−ブタノール
、クロロホルムまたはメチルイソブチルケトンのような
揮発性水非混和性有機溶媒を使用して全プロスをｐｔｒ
’ｒ〜１０で抽出することによりストレプトマイセス・
アルプス種種インディカス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
　　ａｌｂｗｓ　　５ｕｂｓｐ、１ｎｄｉｃｕｓ）Ａ１
’ＣＣ８９０１２の発酵プロスから回収できる。

別法として菌糸体は全プロスから除去でき、次いでｐ液
は全プロスについてと同じ方法で抽出される。これによ
り有機溶媒中抗生物質様合体の溶液が得られる。酸性ｐ
Ｈ（たとえばリン酸でｐＨ８，５に調節された水を使用
）で抗生物質複合体を水に逆抽出し、次いでｐＨ７〜１
０で酢酸エチル、ｎ−ブタノール、クロロホルムまたは
メチルイソブチルケトンのような水非混和性揮発性有機
溶媒中に再抽出した。有機溶媒を真空蒸発除去し、残渣
をヘキサンと撹拌した。このヘキサンを除去し、抗生物
質を通常固体として得る。この粗製抗生物質複合体はク
ロマトグラフィーまたは向流分配によって各成分に分離
できる。

式■および■の化合物は酸付加塩を形成し、それらの酸
性加塩は本発明の範囲内であるものと考えられる。該酸
性７７０塩はマクロライド化合物についての標準的方法
、たとえば式！または、Ｉの化合物の適当な溶媒（たと
えば酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノールま
たはブタノール）中溶液を化学線論的等量の適当な酸を
含有する溶液といっしょにすることによって製造される
。もし塩が沈殿したらＰ取する。別法としては溶媒の蒸
発によって的１収できる。特に価値があるのは硫酸塩°
、塩酸塩、美化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩、クエン＃
１堪、１石＃Ｉ塩、パモエート、過堪索酸堪、スルホザ
リチル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、４−トルエンスル
ホン酸塩および２−ナフチレンスルホンＶ塩である。

本発明の抗生物質複合体は特定のダラム陽性およびグラ
ム陰性微生物に対して抗菌活性を示す。

この抗菌活性は標準的方法によって檀々の微生物に対す
る該複合体の最小阻止濃度ＣＭＩＣ＞を測定することに
よって示すことができる。Ｍ　Ｉ　Ｃは抗生物質に対す
る感受性試験についての国際的協同研究（１ｌｒｉｃｃ
ａｏｎ　ａｎｄ　５ｈａｒｒｉｓ、ＡｃｔａＪαＬｈｏ
−１ｏｇｉｃａ　ａｔ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉａ　
Ｓ：ａｎｄｉｎａｖ、５ｘｐｐ。

２１　？　、　５ｅｃｔｉｏｎＢ：　６４−６８（１９
７１）　）によって推奨される方法によって測定できる
。これは脳心臓浸出（ＢＨＩ）寒天および接種反復装置
を使用する。−晩生前させた試験管を１００倍に希釈し
て標準的接種物として使用した。（約０．００２ｔｎｌ
に２０．００υ〜１０．０００細胞が寒天光ｒ＊ｉに接
種される；２ＱＭｔＪのＢＨＩ寒天／シャーレ）被験化
合物の１２回２倍希釈物を１史用した。当初の濃度は５
０　ｒｎｃｇ／　ｔｎｌであった。８７℃で１８時間後
プレートを測定する際暎−コロニーは無視した。

試験微生物の感受性（ＭＩＣ）は肉眼で判断して生育を
完全に阻Ｉヒすることのできる化合物の最小濃度とした
。

抗生物質複合体の抗生物質活性および式■および■の２
つの大きな成分ならびにその医薬として適当な塩は咄乳
類の感受性微生物によって生じた細菌感染症の治療に適
する。特に、本発明の抗生物質またはその塩は大きな農
場動物、たとえば馬、牛および豚および家で飼う（ット
、たとえばネコおよび犬の細菌感染症の治療に有用であ
る。

この発明の抗菌性化合物またはその場を補乳類に１史用
するとき、化合物単独で投与することかで　−き、ある
いは他の抗生物質および／又は医薬用担体または希釈剤
と混合できる。該担体または希釈剤は意図する投与方法
にもとづいて選択される。

たとえは、経口投与する場合、本発明の抗菌性化合物は
シロップ、エリキシル、水浴液および水性懸濁ｔＬ等の
形で標準的医薬操作によって使用できる。活性成分対担
体の割合は意図する剤型によって変化するが、割合は通
常１：６〜６：１（重譬比）であり、好ましくは１：１
〜ｌ：４である。

本発明の抗菌性化合物は非経口的に投与することもでき
、筋肉内、腹腔内、皮下および静脈内投与できる。これ
らの目的のために、活性成分の滅菌浴液が調製されるの
がふつうで、これらの溶液のｐＨは適当に調節され緩衝
化される。静脈内投与のために、溶質のａ濃度をコント
ロールして製剤を等張にする。

前述のとおり、本発明の抗菌性化合物はペットや農場動
物に使用され、使用される日用駄はタイロシンのような
他のマクロライド抗生物質と有意には異ならないであろ
う。担当獣医が最終的に患者に適当な投与量を決定でき
るであろうが、これは個々の動物の体重と反応ならびに
動物の症状の性質と重症度によって変化するものと考え
られる。

本発明の化合物は通常経口的に２０〜約５０η／に９（
体重）７日の範囲、非経口的には約１０〜約９９ｍ９／
〜（体重）７日、通常何回かに分けて投与できる。ある
場合ｒＣはこれらの範囲以外の投与量を使用する盛装も
あろう。

下記例は説明のためにのみ示される。

例１　　　ストレプトマイセス・アルプス（５ｔｒｅｐ
ｔｏｒｎｙｃｅｓ　Ａｌｂｕｍ）　Ａ　Ｔ　ＣＣ８９０
１２の発酵 下記培地を調製した： 成　分　　　　　　　　　　　　−曖（ｇ／リットル）
セレロース　　　　　　　　　　　ｌＯとうもろこしで
んぷん　　　　　　２０酵母エキス（ディフコ）　　　
　　　５ＮＺアミンＡ（）Ｗコ（Ｈｕｍｋｏ））’　　
　　　　５地化コバルト　　　　　　　　　　　０．０
０２水を加えて全量を１リツトルとする。ｐＨ１，１〜
７．２ 米　カゼインの酵素分解物を精製したもの。

上記培地をｓｏｏｍｔ振とうフラスコ当り４０１７ずつ
入れ、１２０℃；１５ｐ、ａｊで３０分間滅菌した。冷
却後、この培地に、寒天中のＡ　ｉ’　ＣＣ１７２培地
上で生育させたストレプトマイセス・アルプス曲種イン
ディカス（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｔｔｓａｌｂｕｓ　５
ｕｂａｐ、１ｎｄｉｃｕｓ）斜面培養物ＡＴＣＣ８９０
１２の生育力ある菌体懸濁液を接種した。

１　　　　　　　　１ これらのフラスコを２８℃で１百ないし２百インチの振
巾を有するロータリーシェーカーの上テ１５０〜２００
回／分（ＣＰＭ）２〜４日間振とうした。次いでこの振
とう培養物を使用して下記培地の１つを２リツトル含有
する４リツトル発酵容セレロース　　１Ｏ００セレロー
ス　　　　　　ｔＯＮＺアミンＹｔｔ　　　　　　　コ
ーンステイー（フメコ）米　　氏０　　ブリカー　　　
　　　５ｃｃ塩化コバル）　　　０．０．０２　４化コ
バル）　　　　　０．００２炭酸カルシウム　　ＬＯ炭
酸カルシウム　　　　　＆Ｏ水を加えて１リツトルにす
る。ｐＨ６，９〜７．０米　カゼインの酵素分解物。

１酩の消泡剤を加え、容器を密封し１２０℃１５　ｐ、
ｓ、ｉで４５分間滅菌した。容器に１つ（２％　）′ｆ
たは２つ（４チ）の振とうフラスコの内容物を接種し、
８０℃で１２〜８０時間発酵し、１７００回転／分（３
ＰＭ）で撹拌し、プロスに１容駐／容ｆ／分の割合で通
気した。発酵が完了したとき（枯草％　（Ｂ、５ｕｂｔ
ｉｔｉｓ）　ＡＴＣＣ６６Ｂ　Ｂに対する抗生物質ディ
スク検定にもとづく）、発酵を停止させ、全ブロスを濾
過した。涙液をメチルイソブチルケトンまた（主酢酸エ
チルでｐｔｌ９−０で抽出した。有機相全水性層から吸
引により取り出し、該有機相を０口熱して真空濃縮して
粘稠な油状物を得た。

例ＩＩ　　　ストレプトマイセス・アルプス亜種インデ
ィカスＡＴＣＣＢ９０１２の 発酵物からの２つの主成分の単離お まひ特性 ストレプトマイセス・アルプス能、咄インディカス（５
ｔｒｅｐｔｏｒｎｙｃｅｓ　ａｌｂｕｓ　５ｕｐｓｐ、
１ｎｄｉｃｕｓ　）Ａ１’ＣＣ８９０１２の１０００ガ
ロン発酵物２つを８００ガロンｑ？メチルイソブチルケ
トンで抽出した。メチルイソブチルケトン層を１５ガロ
ンずつの酸性の水（ｐｔｌ　８．５　）で２回抽出した
。これらの抽出物をいっしょにして６ＮＮａＯＨでｐＨ
を９．０に一ヒ昇せしめた。次いで水性相を７ガロンの
クロロホルムで抽出した。このクロロポルムを蒸発させ
て黄色油状物（２５，ｌ’ｅ得た。この油状物を１リツ
トルのへブタンで研和し、生じた固体を戸数し、新しい
ヘプタンで洗って２．６９の固体を得た。

を記２．６ｇの固体をＣｆ１Ｃｅｓ　ＭｅＯＨＮＨ４０
１１（９２：８：１）の混合物中カラム級シリカゲル６
０（メルク）を充填した２、５　Ｘ　１００ｃｍカラム
でクロマトグラフィーにかけた。同じ溶媒を１更用して
カラムを浴出した。流速はｌ０ＩＪ／分で、１分毎に１
つの両分を採取した。谷画分を薄層クロマトグラフィー
で検査し、２つの主たる抗生物質成分を含有する画分を
いっしょにし、真空蒸発させた。これにより１．０ｇの
抗生物質複合体を固体として得た。この固体を同じ条件
ＩＩ：使用してシリカゲル上で再びクロマトグラフィー
にかけて１５０ηの抗生物質複合体を得た。抗生物質複
合体（ＫＢｒディスク）の赤外線ス４クトルは２．９５
．８．４５．５．８０．６．２０．６．９０．７．２６
．７．６５．８．８０．９．８０．９．９５．１０．２
５および１１．８５ミクロンに有意の吸収帯を示した。

この抗生物質複合体（メタノール中）の紫外線吸収スに
クトルは２３８ｍμ（Ｅ　　　１４１）と２７９　ｒｎ
　ｌ’　（Ｅ　１　ｑｌ。

１　％ ８０．５）に吸収極大を示した。

元素分析値：実測値：　Ｃ，５９，００；Ｈ，８，４５
；Ｎ、１．４８％例　　■　　抗生物質複合体の分離 抗生物質複合体を逆相Ｃ１ａシリカゲルカラムを使用し
て各成分に分離した。溶出剤はメタノール−水−２−ア
ミンエタノール（５５：　４５　：　０．５）の混合物
を使用した。・流速は５　ａｔ　７分で１分毎に１つの
両分を集めた。カラムは２５４　ｎｒｎ紫外線検出針で
監視した。溶出した主成分は式■で表わされるもので、
少−鍍成分は式■で示される。下記物理化学データは閘
々の成分について測定された。

式■ 分子式　ＣａａＨ−ｔｍｏｒ？Ｎ 分子畦　８８９ 融点　２１０〜２１５℃（分解） 元素分析直：０．５Ｂ、９０；Ｈ，Ｔ、９Ｔ；Ｎ、１．
６９％旋光度〔α）、＝−５τ（Ｃ＝１　、　ＣＭ、Ｏ
Ｈ）紫外ｋＪｊ　２８８　ｎｍ　；　Ａ　ｔ　’ｉ’−
１５１白色無定形固体 赤外線スペクトル（４Ｕ　００〜２　＋１０　ｆｈｃｍ
−’域）（ＫＢｒ錠）： ８４４０．２９８５．２９８５．１７２０．１６９０．
１６２０．１１７０および１０８０ｃＩｎ−’。

式■ 分子式　　Ｃ４，Ｈ−ｔ＊０．６Ｎ 分子着　８７３ 融点　　１１８〜１８０℃（分解） 紫ｆｉ線２８２　ｔｖｍ：　Ｅ１’＄　〜１８６無定形
固体。

これら２つの化合物の溶解性は類似しており１クロロホ
ルム、メタノール、エタノールおよヒ酢醒エチルＶＣ可
溶；ヘプタンと水に不溶である。

特許出願人　　ファイザー・インコーボレーテット。

（外４名） 第１頁の続き ０発　明　者　柴用理一部 半田市桐ケ丘３丁目１４番１２号 ０発　明　者　刀根淳祐 知多市佐布理字東金久曾９丁目５ ５番地 ９８４−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 の化合物からなる群より選択される化合物およびその医
   薬として適当な酸付加塩。 （式中Ｒ１は式 Ｑ基であり、Ｒ鵞は式 ％式％） （２）式 である特許８１４求の範囲第１項記載の化合物およびそ
   の医薬として適当な塩。 （８）式 である特許請求の範囲第１項記載の化合物および゛　　
   その医薬として適当な塩。 （４）医薬用担体および式 の化合物からなる群より選択される化合物Ｈｓ の基であり、１１は式 Ｑ基である。）またはその医薬として１産当な酸付加塩
   からなる哺乳類の純銅感染症治療用組成物。 （５）　　医薬用担体対上記化合物又はその医薬として
   適当な酸付加塩が重縫比１：６ないし６：１で存在する
   特許請求の範囲第４項記載の組成物。 （６）　　資化性の窒素源および炭素源を含有する水性
   栄養培地中で培養することにより回収ムエｉヒ敏の式の
   化合物からなる群より選択される化合物（式中ＲＩは式 ＣＨ。 の基であり、Ｒ８は式 の苓である。）を産生できる微生物ストレプトマイセス
   ・アルプス亜種インディカス（ｓ　ｔ　ｒｅｐｔｏｍ／
   ｃａｎａｌｂｕｓ　５ｕｂｓｐ、１ｎｄｉｃｕｓ）ＣＡ
   ＴＣＣ８９０１２）の生物学的に純粋な培養物。