JPS58170487A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−リジンの製造法Info
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- JPS58170487A JPS58170487A JP5293782A JP5293782A JPS58170487A JP S58170487 A JPS58170487 A JP S58170487A JP 5293782 A JP5293782 A JP 5293782A JP 5293782 A JP5293782 A JP 5293782A JP S58170487 A JPS58170487 A JP S58170487A
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- lysine
- pyruvate kinase
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- brevibacterium
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明、は発酵法によるＬ ＋ ＩＪジンの製造法に関
し、更に詳細にはピルビン酸キナーゼ活性の低下したブ
レビバクテリウム属のＬ−リジン生産−を用いる発酵法
によるＬ−リジンを製造する方法−関する。
し、更に詳細にはピルビン酸キナーゼ活性の低下したブ
レビバクテリウム属のＬ−リジン生産−を用いる発酵法
によるＬ−リジンを製造する方法−関する。
従来、発酵法によるＬ−リジンの製造法としては８−（
２−アミノエチル）−Ｌ−システィンｌｔ下Ａｇ。
２−アミノエチル）−Ｌ−システィンｌｔ下Ａｇ。
と記す）耐性−を使用する方法（特公昭４２−２８０７
８号公報）、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−スレオニン要求性変
異株を使用する方法（特公昭４２−５５２１５号公報）
、ＡＩ！ＳＯ耐性でかつＬ−ロイシン、Ｌ−ホモセリン
、Ｌ−プロリン、Ｌ−アルギン、あるいはＬ−アラニン
要求性変異株を使用する方法（特開昭４９−４６８８８
．４９−８０２８９ 、特公昭５１−２１０７８号公報
）、７．Ａ／オロピルビン酸感受性変異株を使用する方
法（特開昭５５−９７８５号公報）等が知られている・ 本発明者等はよりＬ−リジン生産性の高いＬ−リジン生
ｐＩｉ１！ｉを育種することを目的として種々研究を植
ねた結果、ブレビバクテリウムに属し、ピルビン酸キナ
ーゼ活性が低下した変異株、特にピルビン酸キナーゼ活
性が低下しかつＡＦｌｉＯに耐性を有する変異株が従来
知られているＬ−リジン生産菌よりも極めて高い収率で
Ｌ−リジンを生成蓄積することを発見し本発明を完成す
るに至りた。
８号公報）、Ｌ−ホモセリン、Ｌ−スレオニン要求性変
異株を使用する方法（特公昭４２−５５２１５号公報）
、ＡＩ！ＳＯ耐性でかつＬ−ロイシン、Ｌ−ホモセリン
、Ｌ−プロリン、Ｌ−アルギン、あるいはＬ−アラニン
要求性変異株を使用する方法（特開昭４９−４６８８８
．４９−８０２８９ 、特公昭５１−２１０７８号公報
）、７．Ａ／オロピルビン酸感受性変異株を使用する方
法（特開昭５５−９７８５号公報）等が知られている・ 本発明者等はよりＬ−リジン生産性の高いＬ−リジン生
ｐＩｉ１！ｉを育種することを目的として種々研究を植
ねた結果、ブレビバクテリウムに属し、ピルビン酸キナ
ーゼ活性が低下した変異株、特にピルビン酸キナーゼ活
性が低下しかつＡＦｌｉＯに耐性を有する変異株が従来
知られているＬ−リジン生産菌よりも極めて高い収率で
Ｌ−リジンを生成蓄積することを発見し本発明を完成す
るに至りた。
グルタミン酸生産薗においては一般に、グルコースより
解糖系の反応によって生成したホスホエノールピルビン
酸（以後ＰＩ！Ｐと記す）は、一方で社ピルビン酸キナ
ーゼ反応によりてピルビン酸に＆換され、更にアセチル
−０ｏＡになりてトリカルボン酸サイクルに入り炭酸ガ
ス、と水に分解される。他方ＰＥＰ ＃１ＰＥＰカルボ
キシラーゼ反応によってオザロ酢酸に変換されアスパラ
ギン酸または アセチル−０ｏＡと縮合してグルタミン
酸に変換される。ピルビン酸キナーゼ活性レベルを低下
さぜることＬＰＥＰがアセチル−０ｏＡを経てＹリカル
ボン酸すイク率を高めるのに役立っており、そのために
Ｌ−リジン生産が増加したと考えられる。
解糖系の反応によって生成したホスホエノールピルビン
酸（以後ＰＩ！Ｐと記す）は、一方で社ピルビン酸キナ
ーゼ反応によりてピルビン酸に＆換され、更にアセチル
−０ｏＡになりてトリカルボン酸サイクルに入り炭酸ガ
ス、と水に分解される。他方ＰＥＰ ＃１ＰＥＰカルボ
キシラーゼ反応によってオザロ酢酸に変換されアスパラ
ギン酸または アセチル−０ｏＡと縮合してグルタミン
酸に変換される。ピルビン酸キナーゼ活性レベルを低下
さぜることＬＰＥＰがアセチル−０ｏＡを経てＹリカル
ボン酸すイク率を高めるのに役立っており、そのために
Ｌ−リジン生産が増加したと考えられる。
本発明に於いて使用される微生物はブレビバクテリウム
属に’１４し、ピルビン酸キナ−（活性の低下した変異
株及びピルビン酸キナ−（活性が低下しかつＡＥＯ耐性
を有する変異株であって ｌ、 −ＩＪジン生産能を有
するものである。
属に’１４し、ピルビン酸キナ−（活性の低下した変異
株及びピルビン酸キナ−（活性が低下しかつＡＥＯ耐性
を有する変異株であって ｌ、 −ＩＪジン生産能を有
するものである。
その代表例としては、例えば、次のような変異株が挙げ
られる。
られる。
レレビバクテリウム・７ラバム人Ｊ １１Ｂ４１ Ｆｇ
ｉ偏−ｐ６４６３（ＰＫｗｅａｋ、 ／１０’ ） ブレビバクテリウム・フラバムＡＪ １１８４２ Ｆ引
Ｗ−Ｐ６４６４（１’Ｋｗｅａｋ、 Ａｇｏ’ 、 Ｈ
ｓｅ−）ＰＫｗｅａｋ ： ピルビン酸キナーゼ活性低
下を示すｈｈ；ｏｒ： ｈｈ：ｏＨ性ｔ−示ス Ｈｓｅ−：Ｌ−ホモセリン要求性を示す本発明で使用す
るピルビン酸キナーゼ活性の低下したし一リジン生産変
異株は、ブレピノ（クテリウムーに属する微生物を親株
とし、これに１１１常の変ｓ洒導操作、例えば飽性線照
射、あるいはＮ−メチル−Ｎ’−二トローＮ−二トロソ
グア二ジン（以下ＮＧと略す）、住硝酸等の化学薬剤処
理を施し、変異処理した一体のピルビン酸キナーゼ活性
を測定し、ピルビン酸キナーゼ活性が低下し、かつＬ−
リジン生賄能の高い１１１株を通訳することによって採
取（＋＃橿）される０ 上記親株としてはプレビバクテ゛リウ五禰の敵生物であ
れば種、１株を問わずどの様な一株でも良いが、以下に
示すような、いわゆるコリネフォームのＬ−グルタえン
酸生産−として知られるものが好適である。
ｉ偏−ｐ６４６３（ＰＫｗｅａｋ、 ／１０’ ） ブレビバクテリウム・フラバムＡＪ １１８４２ Ｆ引
Ｗ−Ｐ６４６４（１’Ｋｗｅａｋ、 Ａｇｏ’ 、 Ｈ
ｓｅ−）ＰＫｗｅａｋ ： ピルビン酸キナーゼ活性低
下を示すｈｈ；ｏｒ： ｈｈ：ｏＨ性ｔ−示ス Ｈｓｅ−：Ｌ−ホモセリン要求性を示す本発明で使用す
るピルビン酸キナーゼ活性の低下したし一リジン生産変
異株は、ブレピノ（クテリウムーに属する微生物を親株
とし、これに１１１常の変ｓ洒導操作、例えば飽性線照
射、あるいはＮ−メチル−Ｎ’−二トローＮ−二トロソ
グア二ジン（以下ＮＧと略す）、住硝酸等の化学薬剤処
理を施し、変異処理した一体のピルビン酸キナーゼ活性
を測定し、ピルビン酸キナーゼ活性が低下し、かつＬ−
リジン生賄能の高い１１１株を通訳することによって採
取（＋＃橿）される０ 上記親株としてはプレビバクテ゛リウ五禰の敵生物であ
れば種、１株を問わずどの様な一株でも良いが、以下に
示すような、いわゆるコリネフォームのＬ−グルタえン
酸生産−として知られるものが好適である。
ブレビバクテリウム・ディバνカタム ＡＴＯＯ１
４０２０ブレビバクテリウム・７ラバム Ａ
ＴＯＯ１４０６７プレビバクテリウムΦラクト７１−メ
ンタム ＡＴＯＯ１３８６？ブレビバクテリウム・ロ
ゼラム ＡＴＯＯ１！５８２５コリネバクテ
リウム・アセトアシドフィラム ＡＴＯｏ １３８
７０コリネバクテリウム・リリウム ＡＴＯ
Ｏ１５９９０親株としては、これら野生株の他に、 Ｌ
＋ ＩＪジン生産に有用な性質、例えばＬ−ホモ七リ
ン、Ｌ−アラニン要求性、λｌ１３０耐性、 α−クロ
ロカプロラクタム耐性、スレオニン又はメチオニンに感
受性等を有する変異株を使用することもできる。その他
上記ブレビバクテリウム属の野生株から誘導されるクエ
ン酸合成ｔＩＩＩ素活性の低下した変異株、例えばブレ
ビバクテリウム・７ラバムＡＪ １１Ｂ４０ Ｆｇｉ（
Ｍ−Ｐ ６４６２（Ｌ−リジン生産能無し）等も親株と
して使用される。
４０２０ブレビバクテリウム・７ラバム Ａ
ＴＯＯ１４０６７プレビバクテリウムΦラクト７１−メ
ンタム ＡＴＯＯ１３８６？ブレビバクテリウム・ロ
ゼラム ＡＴＯＯ１！５８２５コリネバクテ
リウム・アセトアシドフィラム ＡＴＯｏ １３８
７０コリネバクテリウム・リリウム ＡＴＯ
Ｏ１５９９０親株としては、これら野生株の他に、 Ｌ
＋ ＩＪジン生産に有用な性質、例えばＬ−ホモ七リ
ン、Ｌ−アラニン要求性、λｌ１３０耐性、 α−クロ
ロカプロラクタム耐性、スレオニン又はメチオニンに感
受性等を有する変異株を使用することもできる。その他
上記ブレビバクテリウム属の野生株から誘導されるクエ
ン酸合成ｔＩＩＩ素活性の低下した変異株、例えばブレ
ビバクテリウム・７ラバムＡＪ １１Ｂ４０ Ｆｇｉ（
Ｍ−Ｐ ６４６２（Ｌ−リジン生産能無し）等も親株と
して使用される。
以−トの実験例１及び２に、本発明の変異株の具体的誘
導方法の１例及びピルビン酸キナーゼ活性を示す＠ 実験例１ ブレビバクテリウム・７ラプム人Ｔｏｏ １４０６７
ヨり Ｍｍしたクエン酸合成酵素活性の低下した変異株
ＡＪ１１８４０を ＋ｉ表体培地で培妥し
、生育した一体を東めα１Ｍリン酸緩衛液（…７．０
）にｖＩＩＡ濁しく囲体濃ｉ １０” 〜１０”個／雪
Ｌ）、これにＮＧを７５０ Ｐｇ／ａＬ加え、５０℃に
１５分間保持した。このＮＧ処理した一体を同緩衝液で
洗滌した後、−４ＬのＡＥＣと５■／■ＬのＬ−スレオ
ニン含む第１表に示す峡′ν培地に接種しく１ｌｌＩ１
１１１度１０６１固／璽Ｌ）、３０℃で６日関檜誉し生
育してきたコロニーを分離した。次いで第１表に示すリ
ジン生産用培地（２０諷し張抄込み／り（ｌＤｌｌＬフ
ラスコ）に接種し、５０℃で７２時間振童培膏した。
導方法の１例及びピルビン酸キナーゼ活性を示す＠ 実験例１ ブレビバクテリウム・７ラプム人Ｔｏｏ １４０６７
ヨり Ｍｍしたクエン酸合成酵素活性の低下した変異株
ＡＪ１１８４０を ＋ｉ表体培地で培妥し
、生育した一体を東めα１Ｍリン酸緩衛液（…７．０
）にｖＩＩＡ濁しく囲体濃ｉ １０” 〜１０”個／雪
Ｌ）、これにＮＧを７５０ Ｐｇ／ａＬ加え、５０℃に
１５分間保持した。このＮＧ処理した一体を同緩衝液で
洗滌した後、−４ＬのＡＥＣと５■／■ＬのＬ−スレオ
ニン含む第１表に示す峡′ν培地に接種しく１ｌｌＩ１
１１１度１０６１固／璽Ｌ）、３０℃で６日関檜誉し生
育してきたコロニーを分離した。次いで第１表に示すリ
ジン生産用培地（２０諷し張抄込み／り（ｌＤｌｌＬフ
ラスコ）に接種し、５０℃で７２時間振童培膏した。
第１表 培地組成 （ｐＨ７，０）
グリコース ２０ ｇ １００
ｇ硫酸アンモニウム １０ ｇ
６０ １ＫＨ，Ｐｏ、 １０
１ １ ｇＭｇ８０４−７１−１．０
［ｌＬ４ ｇ （１４ｇＦｅ８
０４−７Ｈ，０１０ｗｇ １０ ｗｇＭｎ８０
． ・４Ｈ，０＆ １Ｎ ａｌ ｍｇビオチン
ｓｏ Ｐｇ ｓｏｏ ｐｇサイアミン
塩酸培 １００ ＰＩＥ ２００ Ｐ
ｇ大豆蛋白加水分解液ｌＩ２・ＯｍＬ カザミノ酸 １．０ｇ
炭酸カルシウム（別に殺［）
５．ＯｇＳ＠養液中養液−リジンの蓄檀量を調べると
共に、Ｌ−リジン生産性の確認された１株について以下
の様にしてピルビン酸キナ−（活性を測定した。
ｇ硫酸アンモニウム １０ ｇ
６０ １ＫＨ，Ｐｏ、 １０
１ １ ｇＭｇ８０４−７１−１．０
［ｌＬ４ ｇ （１４ｇＦｅ８
０４−７Ｈ，０１０ｗｇ １０ ｗｇＭｎ８０
． ・４Ｈ，０＆ １Ｎ ａｌ ｍｇビオチン
ｓｏ Ｐｇ ｓｏｏ ｐｇサイアミン
塩酸培 １００ ＰＩＥ ２００ Ｐ
ｇ大豆蛋白加水分解液ｌＩ２・ＯｍＬ カザミノ酸 １．０ｇ
炭酸カルシウム（別に殺［）
５．ＯｇＳ＠養液中養液−リジンの蓄檀量を調べると
共に、Ｌ−リジン生産性の確認された１株について以下
の様にしてピルビン酸キナ−（活性を測定した。
第１表に示すＬ −１３ジン生産培地（更に酵母エキス
５宮／ｌ添加）を５００献容フラスコに２０献宛分注し
１１０℃で１０分間加熱した。これに加熱段―した炭酸
カルシウムを補添後、試験菌を接種し５０℃で４０時間
振盪培養した。培＃液から１体を分離し、α２％塩化カ
リウム溶液で洗浄した後５ｍＭの塩化マグネシウム及び
６０％のグリセロールを含むｐａ−１７，５のＴＨ８−
ＮａＯＨ１ｌｌｌｌ液に懸濁し、超音波処理（１５℃、
２０分間）して一体を破壊した０遠心分離して不溶性残
渣を除去し、得られた上清を同緩淘液で平衡化したセフ
ァデックスＧ−５０カラムでゲルｆ過を行い活性区分を
集め酵素液とした。次いでこの酵素液を含む第２表に示
す組成の酵素反応液を調製し、２１〜２５℃で酵素反応
を行い、５４０圃に於ける吸光度の減少の初速度を測定
してピルビン酸キナーゼ活性を求めた。尚、ホスホエノ
ールピルビン酸を除いた反応液を対照とした。
５宮／ｌ添加）を５００献容フラスコに２０献宛分注し
１１０℃で１０分間加熱した。これに加熱段―した炭酸
カルシウムを補添後、試験菌を接種し５０℃で４０時間
振盪培養した。培＃液から１体を分離し、α２％塩化カ
リウム溶液で洗浄した後５ｍＭの塩化マグネシウム及び
６０％のグリセロールを含むｐａ−１７，５のＴＨ８−
ＮａＯＨ１ｌｌｌｌ液に懸濁し、超音波処理（１５℃、
２０分間）して一体を破壊した０遠心分離して不溶性残
渣を除去し、得られた上清を同緩淘液で平衡化したセフ
ァデックスＧ−５０カラムでゲルｆ過を行い活性区分を
集め酵素液とした。次いでこの酵素液を含む第２表に示
す組成の酵素反応液を調製し、２１〜２５℃で酵素反応
を行い、５４０圃に於ける吸光度の減少の初速度を測定
してピルビン酸キナーゼ活性を求めた。尚、ホスホエノ
ールピルビン酸を除いた反応液を対照とした。
１１Ｍ）リスーＨ０Ｉ緩衝液、 ｐＨ７，４１１ＭＭｎ
８０．−７Ｈ，０易ｍＭ ＮＡＤＨ”
α１５ ＃アデノシンー５′−二リン酸
１．０ クホスホエノールビルビン酸２．’
ｏ ｑ乳酸脱水素酵素（牛心臓・結晶性）
１ｏｐｇ酵素 液 （蛋白質として）１００〜
２００／Ｊｇ−β−ニコチン酸アミドアデニンジヌクレ
オチド、還元型 このようにしてピルビン酸キナーゼ活性を測定し、ピル
ビン酸キナーゼ活性の低下した変異株を選ンだ。ピルビ
ン酸キナーゼ活性低下株の中には高いＬ−リジン生産能
を示すものが多く見い出された。その代表株がＡＪ １
１８４１に同様のＮＧ変異処理を施し、線法によりホモ
セリン要求株ＡＪ １１８４２を得た＠ 次にＡＪｉ１８４１及びＡＪ１１８４２のピルビン酸キ
ナ−（活性等の性質を野生株人ＴＯＯ１４０６７、親株
ＡＪ１１８４０１、重びにＡＪ１１Ｂ４Ｇから誘導した
ホモ七リン要求４１ ＡＪ １１８５２ Ｃ，ＦＷ）Ｌ
Ｍ−Ｐ６４８２ ） 、ＡＴＯＯ１４０６７から誘導
した＾ｇｏ耐性Ｌ−しジン生産’１ｌｉｌ ＦＡＩ−３
０（、ＦＷ制−Ｐ２Ｓ５）、ホモセリン暢求株ＡＪ １
１８４３（Ｆｈ：制−Ｐ６４６５ ）及びメチオニン
感受性リジン生産−ＡＪ １１８４４ （ＦＷ購−Ｐ６
４６６ ）と比較したＯ その結果を第５表に示す０ 第５表 ＡＴＯＯ１４０６７１００なし 、なし なし なＬ
萬ＡＪ １１８４０ １０５ なし なし なし
なし 低ＡＪ １００ なし あり なし
なし 低ＡＪ １１８４１ １０ あり なし な
し あり 低ＡＪ １１８４２ １１ あり あ
り なし なし 低１’Ａｌ−１９９あり なし な
し なし 高ＡＪ １１８４３ １００ なし あ
り なし なし 高ＡＪ １１８４４ １００ な
Ｌ なし なし あり 高秦試験法はＪ、Ｇｅｎ、Ａ
ｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ、、 １７．９ｓ 〜１１
ｇ（１９７１）に記載の方法に従りた。
８０．−７Ｈ，０易ｍＭ ＮＡＤＨ”
α１５ ＃アデノシンー５′−二リン酸
１．０ クホスホエノールビルビン酸２．’
ｏ ｑ乳酸脱水素酵素（牛心臓・結晶性）
１ｏｐｇ酵素 液 （蛋白質として）１００〜
２００／Ｊｇ−β−ニコチン酸アミドアデニンジヌクレ
オチド、還元型 このようにしてピルビン酸キナーゼ活性を測定し、ピル
ビン酸キナーゼ活性の低下した変異株を選ンだ。ピルビ
ン酸キナーゼ活性低下株の中には高いＬ−リジン生産能
を示すものが多く見い出された。その代表株がＡＪ １
１８４１に同様のＮＧ変異処理を施し、線法によりホモ
セリン要求株ＡＪ １１８４２を得た＠ 次にＡＪｉ１８４１及びＡＪ１１８４２のピルビン酸キ
ナ−（活性等の性質を野生株人ＴＯＯ１４０６７、親株
ＡＪ１１８４０１、重びにＡＪ１１Ｂ４Ｇから誘導した
ホモ七リン要求４１ ＡＪ １１８５２ Ｃ，ＦＷ）Ｌ
Ｍ−Ｐ６４８２ ） 、ＡＴＯＯ１４０６７から誘導
した＾ｇｏ耐性Ｌ−しジン生産’１ｌｉｌ ＦＡＩ−３
０（、ＦＷ制−Ｐ２Ｓ５）、ホモセリン暢求株ＡＪ １
１８４３（Ｆｈ：制−Ｐ６４６５ ）及びメチオニン
感受性リジン生産−ＡＪ １１８４４ （ＦＷ購−Ｐ６
４６６ ）と比較したＯ その結果を第５表に示す０ 第５表 ＡＴＯＯ１４０６７１００なし 、なし なし なＬ
萬ＡＪ １１８４０ １０５ なし なし なし
なし 低ＡＪ １００ なし あり なし
なし 低ＡＪ １１８４１ １０ あり なし な
し あり 低ＡＪ １１８４２ １１ あり あ
り なし なし 低１’Ａｌ−１９９あり なし な
し なし 高ＡＪ １１８４３ １００ なし あ
り なし なし 高ＡＪ １１８４４ １００ な
Ｌ なし なし あり 高秦試験法はＪ、Ｇｅｎ、Ａ
ｐｐｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ、、 １７．９ｓ 〜１１
ｇ（１９７１）に記載の方法に従りた。
ｉｈ５表に示す如（ＡＪ１１８４１とＡＪ１１８４２の
ピルビン酸キナーゼ活性は親株ムＴＯＯ１４０６７及び
ＡＪ１１８４０の約脇に低下している。
ピルビン酸キナーゼ活性は親株ムＴＯＯ１４０６７及び
ＡＪ１１８４０の約脇に低下している。
これに対して対照−株にっ−てはいずれもピルＡＪ１１
８４１及びＡＪ １１８４２４１ｉＪは＾ＥＯＩＩＩＩ
Ｆｌ：並びにＬ−メチオニン感受性又はＬ−ホモセリン
要求性を有するが、ｌ、ＩＪリジン成の収率は実施例の
第４表に小すように丸々４０％及び５０％であり、公知
のＡＩ！ＸＯ耐性及びメチオニン感受性Ｌ−リジン生＋
Ｊｉ［及び屁０耐性及びＬ−ホモセリン要求性Ｌ−リジ
ン生賄１の収率が共に５２％（＃Ｉ工５２巻６２〜６９
、１９４７に記載）程度であるのに比べて著しく調い
。ＡＪ１１８４１及びＡＪ１１８４２株は上記の性質の
他にクエン酸合成酵素活性（Ｏ８）及びピルビン酸キナ
ーゼ活性が低下している点で上記公知のＬ−リジン生殖
−と異っているが、この内、クエン酸合成酵素活性の低
下とＬ−リジン生産性の関係を調べて見ると、例えば実
施例第４表に示されているにｌ’ｏｏ １４０６７ （
野生株、Ｌ −Ｌｙｓの収率０．５％）とＡＪ１１８４
０ （Ｏ８低ド、Ｌ−Ｌｙｓｌ、０％）、及びｋＪ／ｉ
ｇｔｚ（Ｏ８＋Ｗ ＋’ 、 Ｈｓｅ−、Ｌ−Ｌｙｓ
３ ５ ％） と ＡＪ １１８４！ｌ （Ｈｓ
ｅ−。
８４１及びＡＪ １１８４２４１ｉＪは＾ＥＯＩＩＩＩ
Ｆｌ：並びにＬ−メチオニン感受性又はＬ−ホモセリン
要求性を有するが、ｌ、ＩＪリジン成の収率は実施例の
第４表に小すように丸々４０％及び５０％であり、公知
のＡＩ！ＸＯ耐性及びメチオニン感受性Ｌ−リジン生＋
Ｊｉ［及び屁０耐性及びＬ−ホモセリン要求性Ｌ−リジ
ン生賄１の収率が共に５２％（＃Ｉ工５２巻６２〜６９
、１９４７に記載）程度であるのに比べて著しく調い
。ＡＪ１１８４１及びＡＪ１１８４２株は上記の性質の
他にクエン酸合成酵素活性（Ｏ８）及びピルビン酸キナ
ーゼ活性が低下している点で上記公知のＬ−リジン生殖
−と異っているが、この内、クエン酸合成酵素活性の低
下とＬ−リジン生産性の関係を調べて見ると、例えば実
施例第４表に示されているにｌ’ｏｏ １４０６７ （
野生株、Ｌ −Ｌｙｓの収率０．５％）とＡＪ１１８４
０ （Ｏ８低ド、Ｌ−Ｌｙｓｌ、０％）、及びｋＪ／ｉ
ｇｔｚ（Ｏ８＋Ｗ ＋’ 、 Ｈｓｅ−、Ｌ−Ｌｙｓ
３ ５ ％） と ＡＪ １１８４！ｌ （Ｈｓ
ｅ−。
Ｌ−Ｌｙｓ５４９６）のＬ−リジン生産性を比較して見
れば明らかなようにクエン酸合成酵素活性の低下はＬ
ＩＪリジン生産向上に全く寄与していない・従ってピ
ルビン酸キナーゼ活性の低下がＬ−リジンの生産性を向
上せしめたものと結論される。
れば明らかなようにクエン酸合成酵素活性の低下はＬ
ＩＪリジン生産向上に全く寄与していない・従ってピ
ルビン酸キナーゼ活性の低下がＬ−リジンの生産性を向
上せしめたものと結論される。
本発明で使用する培地は炭素源・窒素源無機塩類、その
他必要に応じて使用する微生物が要求するビタミン、ア
ミノ酸１．核酸等の有機敏量栄餐素を含有する通線の栄
誉培地が使用される・炭Ｘ源としては使用する変異株の
利用可能なものであれハ良く、例えばグルコース、シュ
ークロース、マルトース、これらを含む澱粉氷解物、糖
蜜、等の糖類、エタノール、ブーパノール等のアルコー
ル類、ｅｔｌ＆、プロピオン酸等の有機酸、１にａＩ味
によってはノルマルパラフィン等も単独あるいは他の炭
１ｇｍと併用して用いられる。窒素源としてＩｆｉｍ酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム
、等のアンモニウム塩、硝酸塩類、羅素、アンモニア、
麺には肉エキス等、無機あるいは有機の窒素源が使用さ
れる◎無機塩類としてｌｄ ＫＨ，ＰＯ４，ＭｇＳＯ４
，Ｍｑ８０．、 Ｍｎ３Ｏ４等通常使用されるもので良
い。
他必要に応じて使用する微生物が要求するビタミン、ア
ミノ酸１．核酸等の有機敏量栄餐素を含有する通線の栄
誉培地が使用される・炭Ｘ源としては使用する変異株の
利用可能なものであれハ良く、例えばグルコース、シュ
ークロース、マルトース、これらを含む澱粉氷解物、糖
蜜、等の糖類、エタノール、ブーパノール等のアルコー
ル類、ｅｔｌ＆、プロピオン酸等の有機酸、１にａＩ味
によってはノルマルパラフィン等も単独あるいは他の炭
１ｇｍと併用して用いられる。窒素源としてＩｆｉｍ酸
アンモニウム、塩化アンモニウム、リン酸アンモニウム
、等のアンモニウム塩、硝酸塩類、羅素、アンモニア、
麺には肉エキス等、無機あるいは有機の窒素源が使用さ
れる◎無機塩類としてｌｄ ＫＨ，ＰＯ４，ＭｇＳＯ４
，Ｍｑ８０．、 Ｍｎ３Ｏ４等通常使用されるもので良
い。
有機微量栄彎素としてはアミノ酸、ビタミン、脂肪酸、
俵醒、史にはこれらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、蛋白加水分解物が使用される◎その
他、生育にアミノ酸等を要求する栄誉要求性変異株を使
用する場合には要求される栄誉素を補添することが必要
であることはいうまでもない。
俵醒、史にはこれらのものを含有するペプトン、カザミ
ノ酸、酵母エキス、蛋白加水分解物が使用される◎その
他、生育にアミノ酸等を要求する栄誉要求性変異株を使
用する場合には要求される栄誉素を補添することが必要
であることはいうまでもない。
培養は好気的条件下で行うことが望ましく、培賛期闇中
−１を５．０〜９．０、温度を２０〜４０℃に制御しつ
つ２〜４日間振Ｉｌ培養父は【！ｌ気攪拌培養すること
によりｌ、 −＋）ジンが著竜培養液中に生成蓄積され
る。
−１を５．０〜９．０、温度を２０〜４０℃に制御しつ
つ２〜４日間振Ｉｌ培養父は【！ｌ気攪拌培養すること
によりｌ、 −＋）ジンが著竜培養液中に生成蓄積され
る。
＠＃液からｌ、 ＩＪリジン回収する方法は公知のが
法に従って行なえば良く、通常のイオン交換樹１１側法
、晶析法等を適宜組合せて回収される。以下実施例にて
説明する。
法に従って行なえば良く、通常のイオン交換樹１１側法
、晶析法等を適宜組合せて回収される。以下実施例にて
説明する。
実施例１
第１表に示したＬ−リジン生産用培地を５００．Ｌ４賊
壷フラスコに２０■Ｌづつ分注し、１１０℃にて１０分
間蒸気殺菌した。この培地にあらかじめ口−−の完全寒
天培地で２４時間生育せしめた試験−を１白金耳づつ接
種し、３０℃にて７２時間振書培養した。培養液中に生
成蓄積したＬ−リジンの１を酸性−銅ニンヒドリン比色
法で測定した＠その結果を第４表に示す〇 第４表 Ｌ−リジンの蓄積量 ＡＴＯＯ１４０６７α５ α５ＡＪ １１
Ｂ４０ １．０ １．ＯＡＪ ｚ
ｌｓｚ ５５＃５５”ＡＪ １１８４２
５０ ５０ＩＩ″明−Ｐ ２８２
１５ １５ＡＪ １１８４３ ５
４ ５４ＡＪ １１８４４ Ｌ ２
奮） １１１本 第１表のＬ−リジン生産用培
地に酵母エキス１０ ｇ／ｌを添加した培地使用 ＊＊第１表のＬ−リジン生産用培地のうちカザミノ酸に
かえてムＪ ／／１５２−の場合には６００■／ＩＬ−
スレオニンと５００ｍｇ／Ｉ Ｌ−メチオニンを、父
ＡＪ１１８４３には５００■／慮 Ｌ−スレオニンと５
００■／Ｉ Ｌ−メチオニンを用いた培地を夫々使用。
壷フラスコに２０■Ｌづつ分注し、１１０℃にて１０分
間蒸気殺菌した。この培地にあらかじめ口−−の完全寒
天培地で２４時間生育せしめた試験−を１白金耳づつ接
種し、３０℃にて７２時間振書培養した。培養液中に生
成蓄積したＬ−リジンの１を酸性−銅ニンヒドリン比色
法で測定した＠その結果を第４表に示す〇 第４表 Ｌ−リジンの蓄積量 ＡＴＯＯ１４０６７α５ α５ＡＪ １１
Ｂ４０ １．０ １．ＯＡＪ ｚ
ｌｓｚ ５５＃５５”ＡＪ １１８４２
５０ ５０ＩＩ″明−Ｐ ２８２
１５ １５ＡＪ １１８４３ ５
４ ５４ＡＪ １１８４４ Ｌ ２
奮） １１１本 第１表のＬ−リジン生産用培
地に酵母エキス１０ ｇ／ｌを添加した培地使用 ＊＊第１表のＬ−リジン生産用培地のうちカザミノ酸に
かえてムＪ ／／１５２−の場合には６００■／ＩＬ−
スレオニンと５００ｍｇ／Ｉ Ｌ−メチオニンを、父
ＡＪ１１８４３には５００■／慮 Ｌ−スレオニンと５
００■／Ｉ Ｌ−メチオニンを用いた培地を夫々使用。
ＡＪ１１８４１及びＡＪ１１８４２の培番液を集め、遠
心分離して不溶性物質を除去し、得られた上清液１０處
を強酸性イオン交換樹脂〔アンバーライト１ルー１２０
，１（型］ カラムに通し、Ｌ−リジンを吸着させた。
心分離して不溶性物質を除去し、得られた上清液１０處
を強酸性イオン交換樹脂〔アンバーライト１ルー１２０
，１（型］ カラムに通し、Ｌ−リジンを吸着させた。
次いで３％アンモニア水で溶出し、溶出液を減圧下ａ縮
し、塩酸を加えた後、冷却・晶析し、それぞれ５４ｇ、
４５ｇのＬ−リジン塩酸塩（２水塩）を得た。
し、塩酸を加えた後、冷却・晶析し、それぞれ５４ｇ、
４５ｇのＬ−リジン塩酸塩（２水塩）を得た。
特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- （１） ブレビバクテリウムＩＩ’６ＣＩＲＬ、、ピ
ルビン酸キ虜・著積せしめ、これを採取することを特徴
とする発酵法によるＬ−リジンの籠造法０（２） 変
異株が８−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン耐性
を併有する変異株である特許請求範囲第１項記載の発酵
法によるＬ−リジンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5293782A JPS58170487A (ja) | 1982-03-31 | 1982-03-31 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5293782A JPS58170487A (ja) | 1982-03-31 | 1982-03-31 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58170487A true JPS58170487A (ja) | 1983-10-07 |
| JPH0346109B2 JPH0346109B2 (ja) | 1991-07-15 |
Family
ID=12928775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5293782A Granted JPS58170487A (ja) | 1982-03-31 | 1982-03-31 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58170487A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002022829A3 (en) * | 2000-09-13 | 2002-07-11 | Degussa | Nucleotide sequences which code for the ppsa gene |
-
1982
- 1982-03-31 JP JP5293782A patent/JPS58170487A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002022829A3 (en) * | 2000-09-13 | 2002-07-11 | Degussa | Nucleotide sequences which code for the ppsa gene |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0346109B2 (ja) | 1991-07-15 |
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