JPS58152500A - コリンエステラ−ゼ活性測定法 - Google Patents
コリンエステラ−ゼ活性測定法Info
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- JPS58152500A JPS58152500A JP3393982A JP3393982A JPS58152500A JP S58152500 A JPS58152500 A JP S58152500A JP 3393982 A JP3393982 A JP 3393982A JP 3393982 A JP3393982 A JP 3393982A JP S58152500 A JPS58152500 A JP S58152500A
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- Japan
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- acid
- benzoic acid
- cholinesterase
- hydroxybenzoic acid
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血清中のコリンエステラーゼ（以下、ｃｈ−ｇ
と記す）活性測定のための方法に関する。
と記す）活性測定のための方法に関する。
更に詳しくは、本発明は基質としてｐ−ヒドロキシベン
ゾイルコリンを用い、Ｃｈ−Ｅの酵素作用によって生成
する。ｐ−ヒドロキシ安息香酸を補酵素ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドフォスフーート還元型（以下、
ＮＡ、ＤＰＩ と記す）の存在下でｐ−ヒドロキシ安
息香酸水酸化酵素の作用によりＮＡＤＰＨがＮＡＤＰ
（酸化型ンに変化する際の吸光度の減少又は溶存酸素量
の消費を測定する方法に関する。
ゾイルコリンを用い、Ｃｈ−Ｅの酵素作用によって生成
する。ｐ−ヒドロキシ安息香酸を補酵素ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドフォスフーート還元型（以下、
ＮＡ、ＤＰＩ と記す）の存在下でｐ−ヒドロキシ安
息香酸水酸化酵素の作用によりＮＡＤＰＨがＮＡＤＰ
（酸化型ンに変化する際の吸光度の減少又は溶存酸素量
の消費を測定する方法に関する。
血清中のＣｈ−Ｅ活性測定は臨床的には肝疾患、特に慢
性の肝実質障害や肝硬変で高率にその活性が低下するこ
とから重要な意味をもつ。従来Ｃｈ−Ｅ活性測定のだめ
の方法は、ガス分析法、ｌｐＨ法、比色法、ＵＶ法、螢
光法、電極法などが知られている。その中で、ｌｐＨ法
と比色法とが日常の臨床検査として普及している。しか
し、ｌｐＨ法〔高橋・柴田、医学と生物学、２０：９６
（１９５１） ）はＣｈ−Ｅにより生成した酢酸をｐＨ
指示薬を用いて測定する方法であるが、検量線が極度に
曲がり、その補正のだめの操作が繁雑なうえ、正確性に
も問題がある。比色法には、ＤＴＮＢ法＋’、 Ｑａｒ
ｒｖ、Ｐ、Ｊ 、Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 １１（２）
：９１（１９６５）Ｊや酵素法〔五味邦英、臨床病理特
集第２９ 号： １４５ （１９７７） 〕カアル。Ｄ
′Ｉ”ＮＢ法ハアセチルチオコリン、ブチリルチオコリ
ン及びプロピオニルチオコリｙなどを基質として用い、
生成したチオコリンに５，５′−ジチオビス−２−ニト
ロ安息香酸（ＤＴＮＢ ）を加え、黄色に発色せしめて
キれを測定するものであるが、その際、標準物質として
ＳＨ化合物である還元型グルタチオンが用いられる。そ
れ故、この方法はビリルビンや還元物質の影響による試
験結果の不正確性がまぬがれないうえ、試薬の安定性も
問題になる。酵素法は、ベンゾイルコリンやオオソトル
オイルコリンなどを基質として用い、酵素反応により生
成したコリンをコリンオキ／ダーゼを用いてベタイ／に
変化させる。その時、生成する過酸化水素をペルオキシ
ダーゼの存在下で４−アミノアンチピリンとフェノール
などとの酸化的縮合反応を進行させ、発色程度を測定す
る方法である。この方法は、コリンにコリ／オキシダー
ゼを作用させることによって過酸化水素−発色系へ導ひ
くため血清中に共存するリン脂質の分解などによって生
じるコリンの影響を受ケたり、ビリルビンやアスコルビ
ン酸ナトの還元物質によって影響をうけろうまた、自動
分析装置による測定には適していない。
性の肝実質障害や肝硬変で高率にその活性が低下するこ
とから重要な意味をもつ。従来Ｃｈ−Ｅ活性測定のだめ
の方法は、ガス分析法、ｌｐＨ法、比色法、ＵＶ法、螢
光法、電極法などが知られている。その中で、ｌｐＨ法
と比色法とが日常の臨床検査として普及している。しか
し、ｌｐＨ法〔高橋・柴田、医学と生物学、２０：９６
（１９５１） ）はＣｈ−Ｅにより生成した酢酸をｐＨ
指示薬を用いて測定する方法であるが、検量線が極度に
曲がり、その補正のだめの操作が繁雑なうえ、正確性に
も問題がある。比色法には、ＤＴＮＢ法＋’、 Ｑａｒ
ｒｖ、Ｐ、Ｊ 、Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｅｍ、 １１（２）
：９１（１９６５）Ｊや酵素法〔五味邦英、臨床病理特
集第２９ 号： １４５ （１９７７） 〕カアル。Ｄ
′Ｉ”ＮＢ法ハアセチルチオコリン、ブチリルチオコリ
ン及びプロピオニルチオコリｙなどを基質として用い、
生成したチオコリンに５，５′−ジチオビス−２−ニト
ロ安息香酸（ＤＴＮＢ ）を加え、黄色に発色せしめて
キれを測定するものであるが、その際、標準物質として
ＳＨ化合物である還元型グルタチオンが用いられる。そ
れ故、この方法はビリルビンや還元物質の影響による試
験結果の不正確性がまぬがれないうえ、試薬の安定性も
問題になる。酵素法は、ベンゾイルコリンやオオソトル
オイルコリンなどを基質として用い、酵素反応により生
成したコリンをコリンオキ／ダーゼを用いてベタイ／に
変化させる。その時、生成する過酸化水素をペルオキシ
ダーゼの存在下で４−アミノアンチピリンとフェノール
などとの酸化的縮合反応を進行させ、発色程度を測定す
る方法である。この方法は、コリンにコリ／オキシダー
ゼを作用させることによって過酸化水素−発色系へ導ひ
くため血清中に共存するリン脂質の分解などによって生
じるコリンの影響を受ケたり、ビリルビンやアスコルビ
ン酸ナトの還元物質によって影響をうけろうまた、自動
分析装置による測定には適していない。
従来広のかかる欠点を克服するため、本願出願人は特願
昭５５−１８２９１０号にてｐ−ヒドロキシベンゾイル
コリンを基質として用い、Ｃｈ−Ｅの酵素作用によって
生成するｐ−ヒドロキシ安息香酸を補酵素ＮＡＤＰＨの
存在下でｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作扇によ
りＮ Ａ Ｄ Ｐ ＨがＮＡＩ）Ｐに変化する際の吸光
度の減少又は溶存酸素量の消費を測定する方法を提案し
た。
昭５５−１８２９１０号にてｐ−ヒドロキシベンゾイル
コリンを基質として用い、Ｃｈ−Ｅの酵素作用によって
生成するｐ−ヒドロキシ安息香酸を補酵素ＮＡＤＰＨの
存在下でｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作扇によ
りＮ Ａ Ｄ Ｐ ＨがＮＡＩ）Ｐに変化する際の吸光
度の減少又は溶存酸素量の消費を測定する方法を提案し
た。
本発明は、特願昭５５−１８２９１０号の方法を更に発
展せしめたものである。即ち、該方法においてＣｈ−Ｅ
活性を測定する場合、使用するｐ −ヒドロキシ安息香
酸水酸化酵素によってはＣｈ−Ｅ測定系における反応中
に吸光度の減少速度が経時的に増加する現象が起り、測
定の正確性に問題が生ずることが明らかになった。
展せしめたものである。即ち、該方法においてＣｈ−Ｅ
活性を測定する場合、使用するｐ −ヒドロキシ安息香
酸水酸化酵素によってはＣｈ−Ｅ測定系における反応中
に吸光度の減少速度が経時的に増加する現象が起り、測
定の正確性に問題が生ずることが明らかになった。
この原因を検討するに、使用する酵素によっては基質で
あるｐ−ヒドロキシ安息香酸との反応の他に、この反応
によって生成される３、４−ジヒドロキシ安息香酸の水
酸化を伴なわずにＮＡＤＰＨの酸化を促進することにあ
ると考えるに至った。
あるｐ−ヒドロキシ安息香酸との反応の他に、この反応
によって生成される３、４−ジヒドロキシ安息香酸の水
酸化を伴なわずにＮＡＤＰＨの酸化を促進することにあ
ると考えるに至った。
これら、検討に鑑み、３，４−ジヒドロキシ安息香酸と
ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の複合体形成を阻止
する目的で、ｃｈ−ｇ測定液中に安息香酸又は水酸基を
含む安息香酸誘導′体を用いることによって上記問題点
は解決され、本発明が達成された。
ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の複合体形成を阻止
する目的で、ｃｈ−ｇ測定液中に安息香酸又は水酸基を
含む安息香酸誘導′体を用いることによって上記問題点
は解決され、本発明が達成された。
本願発明で用いる安息香酸又は水酸基を含む安息香酸誘
導体は次の化学反応式で示される、Ｃｈ−Ｅ活性の測定
系において添加される。
導体は次の化学反応式で示される、Ｃｈ−Ｅ活性の測定
系において添加される。
■
■ ■
く注〉
■ ｐ−ヒドロキシベンゾイルコリン
■ コリンエステラーゼ
■ ρ−ヒドロキシ安息香酸
■ ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素■ ３，４−ジ
ヒドロキシ安息香酸 ■ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドフォスフェ
ート還元型 ■ ■の酸化型 本発明によれば、上記化学反応式（１）で生成したｐ−
ヒドロキシ安息香酸は、補酵素ＮＡＤＰ）（の存在下で
ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作用により化学反
応式（２）の如く３，４−ジヒドロキ７安息香酸に変化
する。この際のＮＡＤＰＨがＮＡＤＰ Ｋ酸化される時
の吸光度を波長３４０ｎｍで測定するか、ｐ−ヒドロキ
シ安息香酸水酸化酵素の作用をうけて消費する際の溶存
酸素量の消費速度を酸素電極を用いて測定すればＣｈ−
Ｅ活性測定ができる。その他、本発明法は特願昭５５−
１８２９１０号による特徴と利益をその丑筐生かせるも
のである。
ヒドロキシ安息香酸 ■ ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドフォスフェ
ート還元型 ■ ■の酸化型 本発明によれば、上記化学反応式（１）で生成したｐ−
ヒドロキシ安息香酸は、補酵素ＮＡＤＰ）（の存在下で
ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の作用により化学反
応式（２）の如く３，４−ジヒドロキ７安息香酸に変化
する。この際のＮＡＤＰＨがＮＡＤＰ Ｋ酸化される時
の吸光度を波長３４０ｎｍで測定するか、ｐ−ヒドロキ
シ安息香酸水酸化酵素の作用をうけて消費する際の溶存
酸素量の消費速度を酸素電極を用いて測定すればＣｈ−
Ｅ活性測定ができる。その他、本発明法は特願昭５５−
１８２９１０号による特徴と利益をその丑筐生かせるも
のである。
本発明で用いる安息香酸又は水酸基を含む安息香酸誘導
体とは、安息香酸、サリチル酸、ｍ−ヒドロキシ安息香
酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸、２，６−ジヒドロ
キシ安息香酸、２．５−ジヒドロキシ安息香酸、２，３
−ジヒドロキシ安息香酸などである。これらのうち、本
発明のＣｈ−Ｂ活性の測定系にはサリチル酸、？息香酸
、ｍ−ヒドロキシ安息香酸を添加剤として用いるのが特
に有効であるっ 例えば、サリチル酸１０ｍＭを用いた場合、３．４−ジ
ヒドロキシ安息香酸の水酸化を伴なわないＮＡＤＰＨの
酸化の阻止効果を相対値でみると吸光度をα０１５（約
２２係）低下させることができ、壕だタイムコースにお
いても直線性が得られる。
体とは、安息香酸、サリチル酸、ｍ−ヒドロキシ安息香
酸、３，５−ジヒドロキシ安息香酸、２，６−ジヒドロ
キシ安息香酸、２．５−ジヒドロキシ安息香酸、２，３
−ジヒドロキシ安息香酸などである。これらのうち、本
発明のＣｈ−Ｂ活性の測定系にはサリチル酸、？息香酸
、ｍ−ヒドロキシ安息香酸を添加剤として用いるのが特
に有効であるっ 例えば、サリチル酸１０ｍＭを用いた場合、３．４−ジ
ヒドロキシ安息香酸の水酸化を伴なわないＮＡＤＰＨの
酸化の阻止効果を相対値でみると吸光度をα０１５（約
２２係）低下させることができ、壕だタイムコースにお
いても直線性が得られる。
表−１は、添加剤を０〜２５ｍＭの範囲で測定液に加え
、血清Ｃｈ−Ｅを測定した時の１分間あたりの吸光度の
変化を表わしたものである。
、血清Ｃｈ−Ｅを測定した時の１分間あたりの吸光度の
変化を表わしたものである。
表−１
本発明法においては、特願昭５５−１８２９１０号に記
載の試薬類を適宜用いるものである。この点、若干説明
を加えれば１、用いるｐ−ヒドロキシ シ安息香酸水酸化酵素は、φ−−トモナス（Ｐ ｓ、−
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌、例えばシー−ト
モナス・ダキューネ（Ｐｓ、ｄａｃｕｎｈａｅ）、シュ
ードモナス番デスモリチ力（Ｐｓ、ｄｅｓｍｏｌｖｔｉ
ｃａ）、シュードモナスΦフルオレッセンス（Ｐｓ、ｆ
ｌｕ−ｏｒｅｃｅｎｓ入シュードモナス・プチダ（Ｐｓ
、ｐｕｔ−４ｄａ ）などから生産されるものである。
載の試薬類を適宜用いるものである。この点、若干説明
を加えれば１、用いるｐ−ヒドロキシ シ安息香酸水酸化酵素は、φ−−トモナス（Ｐ ｓ、−
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する細菌、例えばシー−ト
モナス・ダキューネ（Ｐｓ、ｄａｃｕｎｈａｅ）、シュ
ードモナス番デスモリチ力（Ｐｓ、ｄｅｓｍｏｌｖｔｉ
ｃａ）、シュードモナスΦフルオレッセンス（Ｐｓ、ｆ
ｌｕ−ｏｒｅｃｅｎｓ入シュードモナス・プチダ（Ｐｓ
、ｐｕｔ−４ｄａ ）などから生産されるものである。
ｔＫｅ−ｉｊｉ Ｙａｎｏ、Ｋｅｉ Ａｒｉｍａ、 Ａ
ｇｒ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、８８（５）：６８９
（１９６９）） ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素は、フラビンアデニ
ンジヌクレオチッド（ＦＡＤ）関与の酵素であるので本
発明の測定法においてＦＡＤを適当量存在させた方がよ
り有利な酵素活性を示す。
ｇｒ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、、８８（５）：６８９
（１９６９）） ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素は、フラビンアデニ
ンジヌクレオチッド（ＦＡＤ）関与の酵素であるので本
発明の測定法においてＦＡＤを適当量存在させた方がよ
り有利な酵素活性を示す。
本発明で用いる緩衝剤は、例えばトリスヒドロキシメチ
ルアミノメタン、グリシルグリシン、リン酸塩、ホウ酸
塩゛、ビロリン酸、バルピタール酸塩、Ｎ、Ｎ−ビス（
２−ヒドロキンエチル）グリシン、Ｎ−トリス−（ヒド
ロキシメチル）メチルグリシンなどのうち適宜用いる。
ルアミノメタン、グリシルグリシン、リン酸塩、ホウ酸
塩゛、ビロリン酸、バルピタール酸塩、Ｎ、Ｎ−ビス（
２−ヒドロキンエチル）グリシン、Ｎ−トリス−（ヒド
ロキシメチル）メチルグリシンなどのうち適宜用いる。
本発明は特願昭５５−１８２９１０号の方法を更に安息
香酸又は水酸基を含む安息香酸誘導体を添加物として加
えることにょシ、非特異的なＮＡＤＰＨの減少を小さく
するものであり、正常なＣｈ−Ｅの測定をより正確にさ
せることができた。
香酸又は水酸基を含む安息香酸誘導体を添加物として加
えることにょシ、非特異的なＮＡＤＰＨの減少を小さく
するものであり、正常なＣｈ−Ｅの測定をより正確にさ
せることができた。
以下、本発明を実施例により説明する。
実施例１
（１） 試薬
（Ｄ 組成（最終濃度）
Ｆ’ Ａ Ｉ） −２ナトリウム ０
．００８ｍ〜ＩＮＡＤＰＨ−４ナトリウム
０８ ｍＭサリチル酸
１０ ｍへ１■ 調製法 トリスヒドロキシメチルアミンメタン、１６Ｉ／を水約
８００ｍ１ に溶解し、マレイン酸溶液でｐＨ＆２と
する。これにｐ−ヒドロキ７ペンゾイルコリン１ヨード
３５１ｍｇ、Ｆ’ＡＤ−２ナトリウム２．５ｒｒ＋、９
． ＮＡＤＰＨ−４ナトリウム２７２ｍ１．サリチル酸
１．８８ｙ １ｐ −ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素７
００Ｕを溶解したのち水を加えて全量を１，０００ｍ１
とし測定液とする。
．００８ｍ〜ＩＮＡＤＰＨ−４ナトリウム
０８ ｍＭサリチル酸
１０ ｍへ１■ 調製法 トリスヒドロキシメチルアミンメタン、１６Ｉ／を水約
８００ｍ１ に溶解し、マレイン酸溶液でｐＨ＆２と
する。これにｐ−ヒドロキ７ペンゾイルコリン１ヨード
３５１ｍｇ、Ｆ’ＡＤ−２ナトリウム２．５ｒｒ＋、９
． ＮＡＤＰＨ−４ナトリウム２７２ｍ１．サリチル酸
１．８８ｙ １ｐ −ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素７
００Ｕを溶解したのち水を加えて全量を１，０００ｍ１
とし測定液とする。
（２）測定操作法
測定液ａｏｍｌを取り３７Ｃになるまで予備加温（３分
間位）し、これに血清５０μｌを加える。直ちに８７ｃ
で８４０ｎｍにおける吸光度の減少を連続的に測定する
。
間位）し、これに血清５０μｌを加える。直ちに８７ｃ
で８４０ｎｍにおける吸光度の減少を連続的に測定する
。
二種類の血清を用いて実験した結果は、図１に示すとお
り１、反応時間の経過とともに吸光度は減少し、反卯速
度が一定になった状態で、Ｃｈ−Ｅ活性値は下記の式に
より計算される。
り１、反応時間の経過とともに吸光度は減少し、反卯速
度が一定になった状態で、Ｃｈ−Ｅ活性値は下記の式に
より計算される。
※ ΔＡ３４０ｉｄ１分間当りの３４０ｎｍにおける吸
光度の変化量。 ′ ＮＡＤＰＨの分子吸光條数はｆｉ２２ 実施例２ （１）試薬 ■ 組成（最終濃度） トリスヒドロキシメチルアミノメタン −マレイン酸緩衝液 ５０ｍＭｐ−
ヒドロキシベンゾイルコリン・ヨ ード １．ＯｍＭＦ
Ａｌ）−２ナトリウム ＱＯ０８ｍ＋
＋ＶＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈ−４ナトリウム
１．５ｍＭｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素
７００ Ｕ／ｚ安息香酸
２０ｍＭ■ 調製法 トリスヒドロキシメチルアミノメタン、１６ｙを水約８
００ｍ１に溶解しマレイン酸溶液を適量加えｐＨ＆２と
する。これにｐ−ヒドロキシペンノイルコリン・ヨード
８５１ｍ、ｐ。
光度の変化量。 ′ ＮＡＤＰＨの分子吸光條数はｆｉ２２ 実施例２ （１）試薬 ■ 組成（最終濃度） トリスヒドロキシメチルアミノメタン −マレイン酸緩衝液 ５０ｍＭｐ−
ヒドロキシベンゾイルコリン・ヨ ード １．ＯｍＭＦ
Ａｌ）−２ナトリウム ＱＯ０８ｍ＋
＋ＶＮ Ａ Ｄ Ｐ Ｈ−４ナトリウム
１．５ｍＭｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素
７００ Ｕ／ｚ安息香酸
２０ｍＭ■ 調製法 トリスヒドロキシメチルアミノメタン、１６ｙを水約８
００ｍ１に溶解しマレイン酸溶液を適量加えｐＨ＆２と
する。これにｐ−ヒドロキシペンノイルコリン・ヨード
８５１ｍ、ｐ。
ＦＡＤ−２ナトリウム２．５ｍｆ／、ＮＡＤＰＨ−４ナ
トリウム１．３５ｇ、安息香酸２．４４ｊ’、ｐ−ヒド
ロキシ安息香酸水酸化酵素７００Ｕ ｉ溶解した抜水を
加えて全量を１，０００ｍ１とし測定液とする。
トリウム１．３５ｇ、安息香酸２．４４ｊ’、ｐ−ヒド
ロキシ安息香酸水酸化酵素７００Ｕ ｉ溶解した抜水を
加えて全量を１，０００ｍ１とし測定液とする。
（２）測定操作法
測定液ａｏｍｌを３７ｒになる壕で加温し、これを酸素
センサーが接しているセル内に４（し血清を２０μｌ添
加する。この時の酸素濃度の消費を酸素センサー（スタ
ットグルコースアナライザー８−８０：ＡＩＣ社製）に
より測定する。
センサーが接しているセル内に４（し血清を２０μｌ添
加する。この時の酸素濃度の消費を酸素センサー（スタ
ットグルコースアナライザー８−８０：ＡＩＣ社製）に
より測定する。
（８） Ｃｈ−Ｅ活性値単位換算
■ 単位既知の血清２０μｌを上記測定法と同様に操作
し、その測定値との比で表わすつく式〉 標準血清 ａＵ／ｌ 測定値 ｂｍＶ／ｍｉｎ 試料血清 ｃｍＶ／ｍｉｎ 試料血清Ｕ／ｌ ａＸπ ■ 濃度既知のｐ−ヒドロキシ安息香酸２０ｐｌを反応
させ、反応前後の酸素の消費量より換算する。
し、その測定値との比で表わすつく式〉 標準血清 ａＵ／ｌ 測定値 ｂｍＶ／ｍｉｎ 試料血清 ｃｍＶ／ｍｉｎ 試料血清Ｕ／ｌ ａＸπ ■ 濃度既知のｐ−ヒドロキシ安息香酸２０ｐｌを反応
させ、反応前後の酸素の消費量より換算する。
く式〉
ｐ−ヒドロキシ安息香酸 ａｍＭ反応前後の酸素
濃度の差 ｂｍＭ 試料血清 ｃｍＶ／ｍｉｎ試料血清Ｕ／ｌ
−一先プ二免２ヨＶす 、ｂ （ｂ Ｘ Ｑ Ｏ２ａ Ｘ ５ Ｘ １０’ ）
濃度の差 ｂｍＭ 試料血清 ｃｍＶ／ｍｉｎ試料血清Ｕ／ｌ
−一先プ二免２ヨＶす 、ｂ （ｂ Ｘ Ｑ Ｏ２ａ Ｘ ５ Ｘ １０’ ）
第１図はサリチル酸添加と無添加の場合、第２図は安息
香酸添加と無添加の場合、第３図は１ｎ−ヒドロキシ安
息香酸添加と無添加の場合のＣｈ−Ｅ反応のタイムコー
スを示し、第４図はサリチル酸添加と無添加の場合のｐ
−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素濃度とＣｈ−Ｅ活性値
の関係を示す。 特許出願人 株式会社 ンノテスト研究所ヤー図 Ａ ３４０ ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｅ （ｍｉｎ） ヤニい ３４０ ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｎ（ｍｉｎ） ヤう圓 ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｅ （ｍｉｎ） １．０ 江 Ｐ−ＨＢＡｈｙｄｒｏｘｙｍｅ Ｃｏｎｃ、（Ｕ／ｍｌ
）手 続 補 正 書 昭和５７年８月円日 ２ 発明の名称 コリンエステラーゼ活性測定法ａ
補正をする者 事件との関係 特許出願人 生 補正命令の日付 自 発 ｈ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄
Ｇ 補正の内容
香酸添加と無添加の場合、第３図は１ｎ−ヒドロキシ安
息香酸添加と無添加の場合のＣｈ−Ｅ反応のタイムコー
スを示し、第４図はサリチル酸添加と無添加の場合のｐ
−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素濃度とＣｈ−Ｅ活性値
の関係を示す。 特許出願人 株式会社 ンノテスト研究所ヤー図 Ａ ３４０ ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｅ （ｍｉｎ） ヤニい ３４０ ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｎ（ｍｉｎ） ヤう圓 ０ ２ ４ ６ Ｔｉｍｅ （ｍｉｎ） １．０ 江 Ｐ−ＨＢＡｈｙｄｒｏｘｙｍｅ Ｃｏｎｃ、（Ｕ／ｍｌ
）手 続 補 正 書 昭和５７年８月円日 ２ 発明の名称 コリンエステラーゼ活性測定法ａ
補正をする者 事件との関係 特許出願人 生 補正命令の日付 自 発 ｈ 補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄
Ｇ 補正の内容
Claims (1)
- 基質と酵素反応により得られる反応生成物をｐ−ヒドロ
キシ安息香酸水酸化酵素の存在下でＮＡＤＰＨを酸化し
てＮＡＤＰとする際の吸光度の減少又は溶存酸素量の消
費を測定する方法において、安息香酸又は水酸基を含む
安息香酸誘導体を添加することを特徴とするコリンエス
テラーゼ活性の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3393982A JPS609800B2 (ja) | 1982-03-05 | 1982-03-05 | コリンエステラ−ゼ活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3393982A JPS609800B2 (ja) | 1982-03-05 | 1982-03-05 | コリンエステラ−ゼ活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58152500A true JPS58152500A (ja) | 1983-09-10 |
| JPS609800B2 JPS609800B2 (ja) | 1985-03-13 |
Family
ID=12400471
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3393982A Expired JPS609800B2 (ja) | 1982-03-05 | 1982-03-05 | コリンエステラ−ゼ活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS609800B2 (ja) |
-
1982
- 1982-03-05 JP JP3393982A patent/JPS609800B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS609800B2 (ja) | 1985-03-13 |
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