JPS5813524A - 血栓の位置決定用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は、Ｅト及び動物の車検の存在位置をつきとめ
るための組成物に関する。さらに詳細に言うと、この発
１１杜、生体内の車検の位置をつきとめるための映像化
剤として、架橋したフィブリンをプラス電ｙによりて分
解し良ものから誘導される、放射能ラベルされた４ｆチ
Ｐを會有す為組成物に関する。

血液凝固系の障害を有するにトはかなりの数にのぼる、
この障害のうち１．鑞誓−離葡なものは血栓である。血
４＆社血管や心室内で形成さ親そＯ形゛成され九位置に
留まる、血の塊シである。

血栓が例″えば心血管内に形成された場合には、血液の
流通が阻害され、心筋−塞（心筋の死）を招き、最もは
なはだしい場合には心臓マヒを引き起ζす。

さらに、血栓又はその一部は、それが付着している部位
から離れ、その移動が阻害される点に到達するまで血管
内を移動することがある。

これによりて血流が突然せき止められることは、車検烏
栓症として知られている。循環系において特に１１４＆
が形成される部位は、肺動脈がよシ小さな動脈及び毛管
に分枝する最初の点である。

１９６８年の統計によると、病院で死亡した患者のうち
肺動脈に塞栓を有していえ者は、６０才代で死亡した患
者全体の’ｌ１５”’ｏ−１７０才代で死亡し九患者全
ＱＱＯ６４優に達する。米国で線、偏部全体で７０万件
の肺動脈塞栓が検出されており、これらの塞栓の９０ｆ
ｉ以上は、深い静脈従うて、血栓を検出する方法は医学
上極めて有用である。それによって抗凝血剤による治療
や、外科的治療などの予防手段をとることかで−きるか
らである。

最近、放射性同位体でラベルされたヒトのフイブリノー
ゲンが、足や他の部分の奥深い静脈内の血栓の検出に用
いられている。フィブリノ−ダンは冒つ素１２５　（１
２’Ｉ　）　（米国特許３９８３３９９６）又はテクネ
チウム９９ｎａ（”ＩＴ′ｒｅ）（米国特許４０５７６
１７）によりてラベルすることができる。

そして適轟な担体と共に静脈内へ注射され、そこで血栓
形成に組み入れられる。フィブリノ−ダンを酵素トロン
ビンによって活性化するとアイツリノー４ｆチド（フィ
ブリンモノ！−）が放出され、これが重合して、血栓の
構成要素である７゛イツリンポ□パす１゛−一を形成す
る。放射能２ペルしたフイブリノーゲンが血栓形成に組
み入れられると放射能が局在化し、体外から放射能を検
出することによって血栓の位置をつきとめる仁とができ
る。

放射能ラベルし九フィブリノーダンを用いることは、血
栓の位置決定における進歩をもたらしたけれども、ヤ＜
つかの欠点がいまだに残りている。フィブリノ−ダンは
、比較的新鮮な血栓あるいは形成されつつある血栓にの
み組み入れられるため、古い重役（形成後１日以上経た
もの）では、体外での映像化を行なうことを可能九らし
めるのに十分な種度−局在化しない。

従９て、形成されつつある血栓と、以前に形成された血
栓との双方に組み入れられる映像°北側があれば極めて
望亥しい、しかしながら、このような映像化剤はこの発
明がなされるまでは知られていなかまた・ 従って、この発明の目的は、新しい血栓及び古い血栓の
両方の位置を決定することができる組成物を提供するこ
とである。

すなわち、この発明は１．架橋結合フィブリンから分離
されるＥＩ分画、架橋結合フィブリンから分離されＬ　
Ｎ　ｓ分画、及びｇｍ分画とＥ３分画との中間のアミノ
酸配列を有する（ｌチＰから成る群よシ選ばれる一ｅ７
’チドを放射能ラベルしたものを、体外において血栓の
検出及び位置決定を行なうのに十分な量含み、かつ、静
脈注射のための薬剤として許容できるｊｌｍな担体な含
んで成る血栓位置決定用組成物を提供する。

Ｅｌ及びｇ、分画は、架橋結合したアイプリンから、酵
素トロンビンの作用によりて放出される分解生成物であ
る。これらの分画は以前から知られており報告されてい
るが、これらが新鮮な及び古い血餅あるいは血栓に取シ
込まれるということは知られていなかった。

フィブリノ−ダンとＢ１及びＥｍ分画との関係線、血餅
の形成及び分解の生化学を考えると最もよくわかる。

ヒトのフィブリノ−ダンは、酵素トロンビンによ）分解
されて、血餅の網状構造すなわち母質である不溶性のフ
ィブリンを形成する、可溶性の血漿タンノ譬り質である
。アイプリンは、ｘＩａ因子によって共有結合的に架橋
し、安定化された血餅を形成する。互いに架橋結合し九
ヒトのフィシリンは、酵素ノラス叱ンにようて分解され
、特徴的な分解生成物、すなわち、（ＤＤ）ｊｉｉ複合
体、ＤＤ及びＥ分画、並びに残るα４リマーを遊離する
。（ＤＤ）ｇ複合体は、架橋結合したフィブリンからグ
ラス建ンの作用によシ遊離される主たる＠溶性の分解生
成物である。この複合体社、ゲラスミ／の作用をさらに
受けて次の式で示すように変化されやすい。

架橋結合フィシリン→（ＤＤ）Ｅｌ→（ＤＤ）ｇ、→Ｄ
Ｄ＋ｇ。

最初の複合体はＤＤ及びｌ１１１分画を含んでいる。

Ｆ１分画をさらに消化すると、ＤＤ分画への結合能を喪
失することなく分解されてｇ、分画になる。ｇｓ分画が
ｇｓ分画にまで消化されると、複合体は解離する。従り
て、！ラスミノによる架橋結合フィシリンの最終消化生
産物はＤＤ及イ　・・・ びｇｓ分画である。この／＃ターンは、グ２スミンとフ
ィブリ／との比率にかかわらず一貫している。しかしな
がら、最終生産物の生成速度は、種々のｆ″）スきン分
解生成物をつくることは本願発明者のうちの２人、オレ
キサとプシンスキーとによりて、ＢｉｏＩＩｈ＠ｍ１ｓ
ｔｒｙ　１８．９９１（１９７９）及びＪ、Ｂ１＠ＬＣ
ｈ＠ｍ、２５４．４９２５（１９７９）に報告されてい
る。これらの文献に報告されたＨｌ及びｇ、分画の生成
及び分離の基本的な方法は、第ＸＩＩＩ因子の濃度を高
め九フイ！リノグンからライプリン塊を形成することか
ら始まる。この塊をノ２ス建ンによりて加水分解し、得
られた消化物を遠心して大きな塊粒子を除く、上清は、
所望の１ｍ及びＥ３分画を−含めた可溶性の分解生成物
を含む６分解生成物は、分子量によって、好ましくはア
ガロースゲルビーズカラムを用いて分離され、これによ
って（ＤＤ）Ｅ複合体が得られる。ｇｌ及びＩ、分画は
、精製した（１）Ｄ）１複合体を高淡度塩＋Ｆ中でイ′
キー４−トしてＤＤ分画と８１又はｇｓ分画との解離を
引き起こし、続いて分子量によって、好ましくはアガロ
ースゲルビーズカラムを用いて分離する。用いブシ゛ たこの方法の詳細は、オレキサと一メンスキーの上述の
文献に記載されている。

Ｅ分画は、ヒトの架橋結合フィシリンのｆ２ス建ンによ
る分解生成物でＴｏＪ）　、７４ツリノダンの６つのす
べての４リペデチド鎖ＯＮ−末端部分を含んでいる。Ｅ
分画の少なくとも３つの種が単離され、特徴ずけられて
いる。すなわち、分子量がそれぞれ６万、５万５千、５
万のＥｌ、ｇｓ及び？分画である。これらの種社一連の
分解生成物であシ、これらは・わずかに混交しているこ
とが認められている。ｚｌ及びｇｓ１画は、架橋結合フ
ィシリンから得られるＤＤ分画と結合する能力を有する
が、ＤＤ４＠４４一体、フイ！リノダン並びにフィブリ
ノダン及び非架橋結合フイゾリ゛ンのｆフスミンによ冷
いずれの分解生成物とも結合しない。

この発明を完成するに至り鳥最近の研究において、発明
者らは、８１分画が生体外系に“おいて形成されつつあ
るフィブリン塊に組み入れられることを確緒し友、これ
は、ｇｓ分画が血餅中ＫＭＸ！り込まれることを示した
最初のものである。さらに研究を進めることによって、
正常な血漿から形成され、血清中で２時間放置した、予
め形成された血餅にもまた組み入れられることがわかっ
た。

思え分画は、形成されつつあるフィＩリンクロＩＦ）（
血餅）及び予め形成されたフィブリ／りｐットの双方に
組み入れられるが、可溶性のフィシリンや血漿タンＩ譬
り質には結合しな−ことを見出したの！、発明者ら社、
仁の分子が、体内の血栓の位置をつきとめるためのトレ
ーナ−として機能することに気付いた　１２８１　、１
２＄１、ＩＪ１１夏、１１１１．．９９ｍ１．、又社体
外での映儂化に適幽な、ガンーｆＩＩＩ放射性の他の適
蟲な放射性同位体で放射能ラブルしたｇｓ分画、を、血
栓を有する疑いのある患者に静脈注射することができる
。

患者の体の部分を、ガンマカメラによシ、又は直線シン
テレ−Ｖ１ンスキャナーによりて走査することに°工９
、定期的に訣像化する。６るいは、手に持２７にシンテ
レーシ、ン！ロープで複数の点のカウントをとることに
よシ、足の奥深い静脈を調べることができる。

Ｉｎ分−が体内での映像化剤として適しているか否かを
決定するためには、いくつかの１！素を考慮に入れなけ
ればならない０体内の血栓をラベルする丸めの効果′的
なトレーサーは次の性質を有しているべきである。

（１）放射性同位体によシ容易にラベルされて高い比放
射能を有するに至ること。

（２）　　全身的に注射されたときに、特異的にそして
速やかに、形成されつつある血栓に組み入れられ、かつ
古い血栓に結合すること。

（３）　　結合されなかりたものは、循環系から速やか
に除去されること。

Ｌ４）７４プリノｒンや他の可溶性血漿タン／４り質ｙ
結合しないこと。

、５）□、え、。。量Ｆり’ｌ：％ユ栓、１分解ケれる
につれて減少すること。

（６）・非抗原性でおること。

Ｅｉ分画は、これらすべての要件に合致している。

ＥＩ分画は約２０個のチロシン残基と約１０個のヒスチ
ジン残基を含んでいる。従りて、放射性冒り素によりて
容易にラベルされる０例えば、り冒ラン・ンー！、塩化
ヨウ素、ｖｉ−ｐｃン（１−ｓ−４ｅｅ−テ□トラクロ
ロー３α、６α−ゾ７一ルグリ；−ル尿素）、又はラク
ト（ルオキシメーゼ法によりて２ペルすることができる
。他の。

同位体によりてもまた容易に放射能ラベルすることがで
きる０例えば、アゾ２彎チらの米１ｉ１４１許４０５７
６１７に記載されているように、”町−によることもで
きる、放射性金属イオンの極めて安定な結合は、二車キ
レート化剤、すなわち、共有結合によりてペグチドに結
合される金属錯化基を有する分子′門用いて最も＾〈達
成される・このような二車キレート化剤の例は、クレジ
。

カＶＩｈｌｖカー、：：′・２よ５　Ｙ：、、　ＢＳ。

＊ｈ＊ｍ、Ｂｌｏｐｋｙａ。

Ｒ＠１．Ｃ＊ｍｍｕ、７７：５８１−５８５（１９７７
）に記載されている５ｌｉ８１分両は、こむに示すよう
に、形成されつつある血餅及び古い血餅Ｏ双方に結合す
る。ヒトのＥ１分画の、フサ一体内での生物学的半減期
は、フイゾリノダンの４９．３時間に対し、１．４時間
である。ＥＩ分画の半減期が、ヒトの体内においても比
較的短かいということは、全くありそうなことである。

ＥＩ分画社、フ（ゾリノダンや、フイグリノダンのあら
ゆる分解生成物とは結合しないが、フィブリンストラン
ド中の整列し九フィブリンモノ！−分子には結合する（
第１ｉ！Ｉ及び第２表）ｓｌｅｗ分画は可溶性の血漿タ
ン／４り質のいずれにも結合しないｅｇ１ｍ１分画ラス
電ンによりて°Ｅｓ分゛画に分解されてその結合能を失
うので、フィシリンクロッ）Ｋ組み入れられたＥＩ分画
は分解さ゛れ、血液中に放出され得る。放射性１１分画
の血栓からの消失は、血栓の溶解と並行する。最後に、
ｇ電分画はヒトめフイツリノーンから−４されるので、
抗原性を有していそうにない、結論的に、Ｅ１分画及び
結合部位を有するＥｉ分画のあらゆる部分は、体内の血
栓の位置をつきとめるための効果的なトレニサーとなる
。

ヒトの処置に用いる場合には、抗原性を最小にするため
に、Ｅ１分画をヒトの架橋結合フィシリンから分離する
ことが好ましい。しかし、他の目的のためには、動物の
架橋結合フィシリンは、！８１分画の供給源として適当
である。

Ｅ１分画は、適当ないずれかの薬剤に含まれた形態で単
独で、又は他の治療薬着しくは診断薬とともに静脈注射
することができる。適当な担体はＳｌ１分画を溶解し、
あるい拡懸濁状態に保つことができるも゛の′ｒ：あっ
て、生体に対して永久に害を与える程度に毒性ではない
ものである。ｅｔＬい担体は、塩化ナトリクム中グルコ
ースめような、塩又は非イオン性化合物の無毒性水溶液
であシ、特に好ましいのは、これらめ等張−一め溶液で
ある。ｍ１分画の映倫化剤としての作用を妨げることが
ないならｄ、他の薬剤を共存させてもよい。適当な組み
合わせの比率は、多ベルされ九１！−寡分一が５〜９５
−１他の薬剤が９５〜５−である、特に適当なものは、
へ／譬すン□のような通常、車検映倫北側と共に注射さ
れる物質である。

ｍ１分１ｇ１ａ、血栓の存在が疑われる部分付近の上流
から注射することが好ましいが、都合の嵐いいずれの部
位からでも血流に注射できる・注射の適量は、放射能２
ペルされ九ｇ１分画Ｏ比放射簡に依存するが、計算又は
簡単な実験によりて容易に決定することができる。放射
能ラベルされたＥＩ分分画１ｆ７マカメ２による映倫化
によりて、あるいは血栓中に局在化する放射能の位置を
つきとめることができる、オートツジオグ２フィーのよ
うな体外における放射能検出手段によって検出するのに
十分な量を投与すべきである。一般的に、ヒトＫｓ？い
て社、これを達成するために約１０μＣ１ないし５０ｍ
Ｃ１０放射簡が注射されるべきである。＊＊の投与量は
、電いる放射性核種の性質（例えば物理的半減期及び放
射されるＩン一”’＊のエネルイー）ＫＩ！存する。一
般的に、好ましい投与量は、標的−管及び全身Ｏ放射能
露光に基づいて定められる最大投与許容量（広く行なわ
れている安全以内である。

シンチレーション走査又は他の体外における検出手段に
よる分析は、注射後１時間以内に開始することができる
が、注射後３日までも遅らせることもできる。良い結果
は、一般的に注射後６ないし１８時間に得られる。

投与される放射性Ｅ１分画の重量については、ＥＩ分画
が放射性同位体によってラベルされる量だけ存在するな
らば、明白な下限は存在しない４１Ｅ１分画が、これが
分離された種に注射される場合には、その溶解度によっ
て設定される上限を除き、投与されるＥ１分画の重量の
上限は存在しないように思われ、る、異なる種から免疫
反応によって得られるＥ１分画を注射する場合には、こ
の分野忙おいてよく知られているようにご注射量の上限
が存在する。この上限は、簡単な実験によって決定する
ことができる。Ｅ１分分画比放射能がわかりておｐ、上
述したように所望の放射能がわかっているならば、注射
１れるＩ、分画の量は容易に計算できる１例えば、比放
射能が２声Ｃ１，Δνならば、５ダＯサンプルは１０Ｉ
ａＣ１Ｏ放射能を含んでいる。

放射性曹つ素にようて２ペルされた１８１分−を用いて
、新しい及び古い血栓において得られる、放射能の高い
ｊｆｉｌ＆−血液庇は、放射能ラベルされ’ｋ　ｇ　１
分画が重大な臨床的意義を有していることを示唆してい
る０足の静脈内の血栓を検出することに加え、適当な訣
像化同位体（例えば１１１．１１１１亀、９９ｒｍＴ・
）Ｋよつてラベルされ九る車輪又は塞栓Ｏ検出、そして
ｔた、現在特定Ｏ試験方法が存在しない肺動脈烏＠Ｏ検
出に有用である。

さらに％ｇ、分―もまた、血餅及び血栓と結合するので
、Ｅｓ分画も上述０ｉｃｔ分画と同様ＫＪＩＩＩ！映像
化剤と映像層剤ることができるｇｓ　ＩＩ；　１及びＥ
雪分画の双方とも架橋結合フィブリンへＯ結合性を示す
ので、　ｆｆ１＝分画に存在するアミノ酸配列とＥ、分
画に存在するアきノ酸配列との中間のアミノ酸配列を有
するペグチドも架橋結合フィブリンに結合し、車検映像
北側として有用である。このようなイｌチドは、ｇｔ分
画の種々の鎖の末端アミノ酸を制限的に加水分解するこ
とｋよって得られ、Ｅ重及びＥ、分画と同様に放射性同
位体によってラベルすることができる。

ｌ！施例 Ｍ重及びＥ、分画の精製 架橋結合したヒトのフィブリンを、プラスミンによりて
３７℃で２４時間消化した（フィブリン１１あたジノラ
ス建ン６単位）、約５００ダの消化物を、七７丁ロース
Ｃ，Ｌ−６１カツム（λ５Ｘ１９０ａｗ）を用いてグル
ろ過した。用い九パテ、ファー杜、０．０５Ｍ）リス−
ＨＣ１，０，０２８Ｍクエン酸ナトリウム、０．１Ｍ塩
化ナトリクム。

２Ｓ単位／―トタシロール（アｆａチニン）、及び０，
０２−ナトリクムアノドを含み、Ｆ）１７．８でありた
。（ＤＤ）ｉｃ複合体を含む画分を等体積の。

６Ｍ尿素１０．０５Ｍクエン喰ｊチトリウム（ｐＨ５，
５）で希釈し、これを、３１℃で１時間インキ、ペート
シ、上述のパア、ファーを用いて竜ファロースＣＬ−６
１カラム（２，５ｘ１９Ｇ画）で再びクロマドグ２フイ
ーにかけた。この操作によって（ＤＤ）Ｅ複合体が解離
され、Ｅ分画Ｏｆｆ製が可能になる。

冨１分画と鵞１分画は一緒に集め、ｏ、ｅｘｅ画ＯＤＩ
ム鳶−セルロースカラムにかけて、り冒マドグラフィー
により分離した。溶離溶媒は、ＰＨ＆９００．０１Ｍ炭
酸ナトリクム／臂γｖ７アーに溶けえ、纏形勾配の０〜
０．５　Ｍ　ＮａＣＬであつた。ペグチｒを含む両分は
、２８０！１ｍＯ吸光度を固定して固定した。あるいは
、罵４分繭は、シ１糖勾配安定剤を含む−４〜６０−勾
配の下で等電焦点法（ｌｐ・・ｌ・・ｔｌ・ｆ・・ｍａ
ｉｍｇ）によって分離することもできる。貯”ま５九両
分章集め、鳶分画を５００倍体積Ｏ１，ＯＭ　ｔｌｉ４
ｐ’ｔ、　）リクム′に対して２−に％　５００倍体積
の０．１５Ｍ塩化ナトリウムに対して２ＷＡＳ　ｓｏｏ
倍体積の蒸留水に対して４回透析して両性電解質を除き
、分画を凍結乾放射能ツペルしたｇｌ及びｇ、分画の製
造精製したＥｌ又はＥ、分画を、マク７アーｖノにより
てＢｉｏ＠ｈ＠ｍ、　Ｊ、　、６２　、１３！！−１４
３（１９５ｇ）に記載された一塩化ヨウ素法によって、
放射性曹り素で２ベルした。ラベルし良ものは、１８１
分画１分子あた〕０．９個の曹つ素原子を含み、比放射
能は０．５μＣ１／Ｓ％Ｆでありた０Ｍｌ及びＩｓＥ分
画同じ方法によってラベルした。動物実験Ｏ場合などの
ように、高い比放射が望まれる場合に紘、冒−ドグン（
１，３，４，８−テトラク０−−３α、６α−ジフェニ
ルグリコール尿素）法を用いてＩｅｌ及びＥ茸分画に　
１又は　夏を納会させることができる０Ｍ−ドダンを用
いてタンツク質を冒つ素化する方法は、７レーカーとス
イッタによりて、ｉｌｌ：、Ｏ＠ｈ＠ｍ、引ｏｐｈｙｓ
、　１１＠１．Ｃ１１１１１１１１１゜８０：８４９−
８５７（１９７８）に記載されて−る。

この場合のラベルされたＩｐＩｌｌ物は担体なしで′ト
レースツペルされ、２ｍＣｌ７４１Ｆ以下の比放射能を
有してい九。

１１〜１３分画ＩＤ４１１１１すけ □ １Ｂ　、ｌ、及びｌｌＡｓ分画のアミノ酸配列は決定さ
れている。それぞれのＥ分画は、６個の−９４ｆｆ　）
’鎖、すな、わち、フイノリ／ｌ”：１０ムαｅｌ／、
及びｒ鎖からＯ残金物を２つずつ含む。

ツィツリノｒ２の既知のア々ノ酸配列に基づく璽分−分
子ＯＡツメ一一一の概略を第１９に示す・ 第　　１　　表 ヒトのフイクリノダンのア建ノ酸配列に基１、　　　α
、ｌ’ｌ−’１Ｂ α　１７−７８ β１！＄−１２ｊ β　１５−１２２ ｒ　　　　ｌ−６２ ｊ　　１−６２ Ｅ、　　α　ｌ’ｌ−’７Ｂ α　１７−７８ β　１５−１２１ β　５４−１１１ ｒ　　１−６２ ｒ　　１−６２ Ｅ、　　　（１２Ｇ−７８ α　２４−７８ β　５４−１２０ β５４−１２０ γ　ｌ′ご５２ ｒ　　ｌ＝ｓｚ −ｇ　　　龜　’＜　　　ｌ　ｌ　ｌ　口　１　瞥　１
１　１−ノ ロ　　１１　＋　１１　＋　１　＋　曹　＋　蕃　十　
１口 神　　　　　　　　１）Ｐｑ　　　バ　　−　　桑結合
実験 Ｅｌ及びＥ１分画の、フイクリノグン並びにフィブリノ
ダン及びフィブリンの分画に対する会合又は結合能を調
べた。Ｅ分画と、試験すべき化学種とをモル比１：ｌに
混合し、トリス−グリシンポリアクリルア建ドｒル（９
％）上で分析した。Ｉｃ１及びＥ、分画は、ＤＤ分画と
のみ結合し、フィツリノダン並びにＸ、Ｙ、Ｄ、及びｇ
分画と紘結合しなかりた（第２表）。この仁とｄ、ＤＤ
分画中の整列したＤ領域にのみ結合し、７４デリノｒン
又はフィブリノｒｙｎ導体中の一価００分画領域とは結
合しないことを示してｉる。

表面界面においてこの和合能を調べるために、フイ／リ
ノダン、アイプリンモノマー及び架橋結合７（プリンを
セファロースに固定した。

ｌｃｌ及びＥ１分画は、セファロース−フィブリノダン
及び七７丁ロース−７（プリン曇ツマ−とは結合しなか
つたが、架橋結合フィブリンオリジーマーには結合した
（第３表）−仁のこともまた、Ｉｃｍ及びＥ１分両はフ
ィブリノダン及びフィシリンモノマーには結合せず、フ
ィブリンスト２ンド中に整列したアイプリンモノマーに
のみ結合することを示している。

第　３＃Ｉ 固定化７゛（クリノグン、固定化７４ｆりンモノマー、
及び固定化架橋結合フィ／リンに対するフイノリノダン
及びフイノリン誘導体の結合性 結合したタンノ譬り質の量 固定化フィツ　固定化）（プ　固定化架橋結誘導体　　
　リノダン　　　　　リンモノマー　　合フィシリンＩ
Ｑ　　　ｎｍｏｌ　　　　Ｍ９　　ａｍａｌ　　　１％
Ｆ　　　ｍｍ５ｌＢ１分画　　０　　０　　　０　　０
　　１４　２０．０ｇ、分ＩＩ　　　０　０　　０　　
０−０．９　１８．ＩＩｓ分画　　ｏｏ　　　　ｏ　　
　ｏｏ　　　　。

ＮＤ８Ｋ　　　　　　　０　　　０　　　　０．０５　
　１．０　　０．０４　　　Ｇ、ａｌｌＤＩｉＫ （トロンビン　　　　０．４　　６．６６　　０．８２
５　１３．８　０．７１６　１１．ｉｅ処処理 フィブリンクロットへのＥ　１　＋ｙＰ、ＳＩＩｍ、め
組ｙ２叉れｌ！８１分画が、形成されつつあるフィブリ
ン塊にＩＲシ込まれる能力を、生体外系において試験し
九、１”！でラベルし喪り及びに、分画を、正常なヒト
Ｏ血漿に加え九。り關ット形成社トロンーンを加えるこ
とによって開始しえ、クロットはガラス棒に巻きついて
生成し九、クロット中の放射能及び血清中の放射能を測
定した。Ｂ分間０６度はそれぞれ３回ずつ一定した。平
均値を第４９に示す、有意の割合のＩｔ分分画フィブリ
ンクロットに組み入れられるが、ｍｓ分分画血清中Ｋｌ
ｌる。従りて、Ｅ１分画は形成されつつあるフィブリン
クロットに納金できる。

１′”□ 形成されつつあるアイゾリンクａ、トへの８１及びＩＡ
Ｉ分画の組み込み 罵分画の一度　　　フィブリノｒ　組み込まれた一亭　
　　　　　　　ンの績度一本　Ｅ分画の一合軸本　示し
であるのＨｚ分両及びフイ！リノダンの最初の濃度であ
る、。

＊＊　圧縮し、洗ったりｐット中に残留する総放射能の
ｓ（３つの！ングルＯＸＦ均）予め形成された血漿クロ
ットへのｇ１分画の組み入れ 血漿りｍｙトを、正常なヒトの血漿０５５−から形成し
、ワイヤーコイル上に架け、血清中で２時間放置し九　
１２５１で２ベルしたＥｌ又は１ｉ８ｓ分画をこの血清
に加え、インキ、ページ、ンを１時間続けた。クロ、ト
を０．１５Ｍ塩化ナトリクム００ｓ−で５回流りた。血
清、洗液及びりｐット中の放射能を測定した。ＩＣ１分
両はクロットに結合し九が、Ｅ１分画はしなかった（第
５表）、予め形成されたクロットに結合した８１人れら
れ九ｌ、分画の量よシも少なく、この量はクーラ）の表
面積に比例していた。

第　　５　　表 予め形成されたクロ、トへの１ｉ８Ｋ及びｍｓ分分画結
合 ７．２　　　）Ｉｌｏ−’　　４．４　　Ｘｌ０−’　
　　　１４．１−３．６　　　外１ｇ−’　　４．４　
　ｘｌＯ−’　　　　９．８　参Ｌ８　　　Ｘｌ０−’
　　４．４　　ＸＩＯ″″４　　　８．４　ｅｌｋＯＪ
　　　Ｘｌ０−’　　４．４　　ＸＩＧ−’　　　　８
３１１０．４！！　　Ｘｌ０−’　　４．４　　Ｘｌ０
−’　　　　７Ｊ　１１０．２７５　　Ｘｌ０−’　　
、４．４　　Ｘｌ０−’　　　　？、０−７．２　　　
ｘ　１０−’　　４．４　　ｘ　１Ｇ−’　　　　０．
ＩＪＩＢ、６　　　Ｘｌ０−”　　　４．４　　ＸＩＧ
−’　　　　　０．１１１Ｇ１．８　　　Ｘ　１Ｇ−’
　　４．４　　Ｘ　１０−’　　　　０．１９１１０．
９　　　Ｘｌ０−’　　４．４　８ＩＯ−’　　　　０
．２１９１０４ＲＸｌ０−’　　４．４　　ＸＩＧ″″
４　　　　０．２１−０．２７５　　Ｘｌ０−’　　　
４．４　　ｘｌｏ−’　　　　ｏ、ｘｓ−＊　示しであ
るのはＥ分画及びフィブリノｒノの最初の濃度である。

神　圧縮し、洗ったりｏ　、ｐ’）中に残留する總放射
簡の９６（３つのナンデルの平均）放射性冒つ素化され
ｆｔ　Ｅ　を分画の生体内の血栓への組み入れ 全身的に注射され九放射′ｔＩＡ２ペルＮ１分画が、血
栓症を患らりたヒトの血栓の位置をつきとめる能力を試
験するために、動物の血栓症の生体内毫デルを用いた。

血栓は構造的に不均一でわ〕（この点りｍｙトと異なる
）、また、血液循環及び自然な異化機構が生体内におけ
るトレーナ−の取〉込みに影響を与えるため、これらの
実験は、放射能ラベルし九１８１分画が、血栓の位置を
決定するための放射性薬剤となシ得るか否かを予言する
重要なものである。

実験動物としてはデーを選んだ、なぜならば、−ンドら
Ｋよりて「化物医学的研究における毫デルとしてのツタ
Ｊ　（＠Ｔｈ＠Ｐ１ｇ　ｍｍ　ｍ　Ｍ＠ｄ＠ｌ　ｉｎ組
＊ｍ＊ｄｌ＊ａｌ　Ｒ５５ｓａｒ＊に’）Ｔｈ＠Ｂ１ｏ
１ｅ　　ｏｆ　ｔｂ＠Ｐｉｇ。

□ Ｃｓｍ５ｔｅｅｋ　ｐＨｂ、Ａｓ５ｅｓ、　　　３１〜
３５４−ゾ。

１ｓ丁１１１に記載されているように、ツタは、心血管
系の疾病に関し、ヒトと非常によく似ていることが知ら
れているからである０体重２５〜５０ｄｔンドの若いブ
タに、局所的に電流を流すことによ〉、頚静脈に血栓を
誘導した。血栓をつくる方法は知られておシ、つくられ
た血栓は天然の血栓と形態学的に類似している。血栓を
り≦−）先後、放射性冒つ素化Ｂ１分画をブタに注射す
る前に５日間以下の期間血栓を熟成させた。これにより
、種々の古さの血栓、すなわち非常に新しくてフィブリ
ンの沈着が活性なものから、古くてフィシリンの沈着が
非常に少ないものまでに取シ込まれるトレーサーの量を
調べることが可能になる。多くの場合、　　！又は　夏
によりてラベルした８１分両の他に、　　■で２ベルし
たフ（プリン？”７４ｈ同時に注射した―血栓によるこ
れら２つのトレーサーの取ｐ込みを直接的に比較するえ
めである。放射性田り素化フィゾリノダンは、深静脈血
栓症の形成を検出するために現在臨床的に用いられてい
るトレーサーであル、その血栓によ、る取シ込みはよく
研究されている。放射性トレー讐−注射１ｋ２４時間で
血栓を外科的に除去し、血液サンダルを・採職した。ｆ
：ｙｆルは重量を測シヵウントし九。

これらＯ実験結果を、調べたすべての血栓の古さととも
に第６１１１！！に示す、ｉｆ：／マシンチレーシ、ン
カメツによって、血栓を体外で映像化するためには、標
的物とパックダックンドとの放射能の比が高いことが好
ましい、血栓の映倫化にシけるΔＶクダッンド放射能の
主たる源は、血液中の放射能であるので、この実験にお
いて、血栓へＯ放射能の集中の程度は、血栓中の放射能
と血液中の放射能との比として次のようＫＮわされる。

ｌダツムあ光ルの血栓中の放射能 １ダラムあ九夛の血液中の放射能 ζＯ比が４Ｔｏれば、足の静脈中の血栓を映像化するの
に十分でめシ、胸中の血栓を映像化するためには、この
比が６ないし８は必要であると信じられている。第６表
に示した結果から、放射性冒つ素化し九フイノリノダン
は、非常に新しい血栓（形成１１ｋ２０時間未満のもの
）にのみ、識別できる＠ＩＩに局在化することがわかる
。これに対し、放射性ヨウ素化したＢ１分画は、試験し
たあらゆる古さく０〜５日）の血栓に、映像化できる程
度に局在化するｅ　ｘ、分画紘血楡の表１［Ｋ、結合す
ると考えられる６で、第６表に見られるＥＩ分分画取〕
込み量の相異は、用いた血栓の表面積が動物ごとに異な
うているためであろう。

第　　６　　表 ブタの血ＩＨＣ’″よる、放射色画つ素化され九にトの
ｌ１分画の堆シ込み 血栓の古ｉｉ　　　ｌｉｔ分画を用い　　ツイツリノダ
ンをＬ２ｉ　　　　　　１Ｇ、４　　　　　　４１４４
　　　　　　１０．０　　　　　　１Ｂ、＠ｋｌ！　　
　　　　１Ｇ１１　　　　　　　１８Ｊｓｏ、ｓ　　　
　　　　　ｓ、ｓ　　　　　　　　２．８２３　　　　
　　１７．５　　　　　　　８．９＆５ ４ ４０．５ ｇ　　　　　　　　　ｏ、ｓ １５　　　　　　　　１．２ ２＠　　　　　　　　１４．４　　　　　　　　Ｌ８２
１ＬＳ　　　　　　　１４　　　　　　　　２ｈ３３３
　　　　　　　８．１　　　　　　　１．８４７　　　
　　　　５７　　　　　　　　２．４４８４５、、、．
１：。

２ ７２　　　　　　１０７　　　　　　　　２．６゜■　
　　　　　４２ １２９　　　　　　１１１ 昭和　年　月　日 特許庁長官　　若　杉　和　夫　　殿 １、事件の表示 特願昭５７，５５２１１号 ２、発明の名称 血栓の位置決定用組成物 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 リサーチ・コーーレーＶヨン ４、代理人 昭和５１．年７月、・２７日 １、□ ６、補正の対象　　　　　　□ 適正な願書（代表者の氏名）、委任状およびその訳文。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）　　架橋納金フィブリンから分離される鳶１分画
   、架橋結合フィブリンから分離されるＩ！３分画、及び
   鋏１４分画と＃Ｅ嘗分画の中間のアミノ酸配列を有する
   ペプチドから成る群よ）選ばれる４ｆチｒを放射能ラベ
   ルしたもの舎、６体外において血４＆の検出及び位置決
   定を行なうＯＫ十分な量含み、かつ、静脈注射の光めの
   薬剤として許容できる適轟゛な担体を含んで成る、血ｌ
   ｋＯ位置決定用組成物。
2. （２）　　前記ペプチドは、冒り素、テクネチウム、又
   はインジウムの放射性同位体によりてツ（ルされる特許
   請求の範囲第１項記載の組成物、。
3. （３）　　前記ペプチドは１１１１　ｚ′”１丁＠％１
   ２ｓ！、ｔＭｌｒ、・又は１２３１によりてラベルされ
   る特許請求の範囲第１項記載０＠成物。
4. （４）　　前記担体は、塩又は非イ１オン性化会物Ｏ無
   毒な等張水溶液である特許請求の範囲第１項記−〇組成
   物。
5. （５）　　前記担体社、塩化ナトリウム又社ダルブース
   の無壽な等張水溶液である褥許請求の範囲　　゛第４項
   記載の組成物。
6. （６）　　前記組成物状追加的な薬剤をさらに含む特許
   請求の範囲第１項記載の組成物。
7. （７）前記薬剤は抗凝血剤である特許請求の範囲第６項
   記載の組成物。
8. （８）　　前記抗凝血剣状へ／４リンである特許請求の
   範囲第７項記載の組成物。