JPH1190411A - 環境修復方法 - Google Patents
環境修復方法Info
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- JPH1190411A JPH1190411A JP9255116A JP25511697A JPH1190411A JP H1190411 A JPH1190411 A JP H1190411A JP 9255116 A JP9255116 A JP 9255116A JP 25511697 A JP25511697 A JP 25511697A JP H1190411 A JPH1190411 A JP H1190411A
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- contaminated
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- Processing Of Solid Wastes (AREA)
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 有機化合物で汚染された環境の微生物による
分解浄化修復に於いて、従来より効率のよい方法を提供
する。 【解決手段】 有機化合物で汚染された、土壌や地下水
などの、環境の微生物による分解浄化修復方法であっ
て、該方法が １．汚染物質分解微生物を、該環境の要素の少なくとも
一部分を含んだ培地で予め培養する工程と、 ２．該培養した微生物と該環境中の該有機化合物とを接
触せしめる工程を含む、微生物による分解浄化修復方
法。
分解浄化修復に於いて、従来より効率のよい方法を提供
する。 【解決手段】 有機化合物で汚染された、土壌や地下水
などの、環境の微生物による分解浄化修復方法であっ
て、該方法が １．汚染物質分解微生物を、該環境の要素の少なくとも
一部分を含んだ培地で予め培養する工程と、 ２．該培養した微生物と該環境中の該有機化合物とを接
触せしめる工程を含む、微生物による分解浄化修復方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、フェノール、トル
エン、クレゾールのような芳香族化合物及び、トリクロ
ロエチレン（ＴＣＥ）やジクロロエチレン（ＤＣＥ）の
ような揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法、特に
それらを含む排水や廃液の浄化、それらによって汚染さ
れた土壌の修復に有用な生物分解浄化方法に関する。
エン、クレゾールのような芳香族化合物及び、トリクロ
ロエチレン（ＴＣＥ）やジクロロエチレン（ＤＣＥ）の
ような揮発性有機塩素化合物の生物分解処理方法、特に
それらを含む排水や廃液の浄化、それらによって汚染さ
れた土壌の修復に有用な生物分解浄化方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、生体に対し有害でありかつ難分解
性である揮発性有機塩素化合物による環境汚染が大きな
問題となってきている。特に、国内外の紙・パルプ工業
や精密機械関連産業地域の土壌中にはテトラクロロエチ
レン（ＰＣＥ）やトリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ジク
ロロエチレン（ＤＣＥ）等の揮発性有機塩素化合物によ
る汚染がかなりの範囲で拡がっていると考えられてお
り、実際に環境調査等で検出された事例が多数報告され
ている。これらの揮発性有機塩素化合物は土壌中に残留
したものが雨水等により地下水中に溶解して周辺地域一
帯に拡がるとされている。このような化合物は発癌性や
生殖毒性の疑いがあり、また環境中で非常に安定である
ため、特に飲料水の水源として利用されている地下水の
汚染は大きな社会問題とされている。
性である揮発性有機塩素化合物による環境汚染が大きな
問題となってきている。特に、国内外の紙・パルプ工業
や精密機械関連産業地域の土壌中にはテトラクロロエチ
レン（ＰＣＥ）やトリクロロエチレン（ＴＣＥ）、ジク
ロロエチレン（ＤＣＥ）等の揮発性有機塩素化合物によ
る汚染がかなりの範囲で拡がっていると考えられてお
り、実際に環境調査等で検出された事例が多数報告され
ている。これらの揮発性有機塩素化合物は土壌中に残留
したものが雨水等により地下水中に溶解して周辺地域一
帯に拡がるとされている。このような化合物は発癌性や
生殖毒性の疑いがあり、また環境中で非常に安定である
ため、特に飲料水の水源として利用されている地下水の
汚染は大きな社会問題とされている。
【０００３】このようなことから、揮発性有機塩素化合
物の除去、分解による、汚染地下水等の水性媒体、土
壌、及びそれに伴う周辺気相の浄化は、環境保全の視点
から重要な課題であり、浄化に必要な技術の開発が行わ
れてきている。
物の除去、分解による、汚染地下水等の水性媒体、土
壌、及びそれに伴う周辺気相の浄化は、環境保全の視点
から重要な課題であり、浄化に必要な技術の開発が行わ
れてきている。
【０００４】例えば、活性炭による吸着処理、光や熱に
よる分解処理等が検討されてきたが、コストや操作性の
面からかならずしも実用的であるとはいえない。
よる分解処理等が検討されてきたが、コストや操作性の
面からかならずしも実用的であるとはいえない。
【０００５】一方、環境中では安定であるＴＣＥ等の揮
発性有機塩素化合物に対して近年微生物による分解が報
告され、その実用化に向けた研究がなされ始めている。
即ち、微生物を用いた生物分解処理では、用いる微生物
を選択することで無害な物にまで揮発性有機塩素化合物
を分解できること、基本的に特別な薬品が不要であるこ
と、メンテナンスにかかる労力やコストを軽減できるこ
と等の利点がある。
発性有機塩素化合物に対して近年微生物による分解が報
告され、その実用化に向けた研究がなされ始めている。
即ち、微生物を用いた生物分解処理では、用いる微生物
を選択することで無害な物にまで揮発性有機塩素化合物
を分解できること、基本的に特別な薬品が不要であるこ
と、メンテナンスにかかる労力やコストを軽減できるこ
と等の利点がある。
【０００６】また、フェノールやトルエン、クレゾール
といった芳香族化合物の浄化処理も同様に物理・化学的
手法から微生物分解を用いた手法に移行しつつある。
といった芳香族化合物の浄化処理も同様に物理・化学的
手法から微生物分解を用いた手法に移行しつつある。
【０００７】この様な、微生物を用いた環境修復方法は
バイオレメディエーション（ｂｉｏｒｅｍｅｄｉａｔｉ
ｏｎ）と呼ばれ、それは、次の二つの方法に大別され
る。
バイオレメディエーション（ｂｉｏｒｅｍｅｄｉａｔｉ
ｏｎ）と呼ばれ、それは、次の二つの方法に大別され
る。
【０００８】バイオスティムレーション（ｂｉｏｓｔ
ｉｍｕｌａｔｉｏｎ）汚染環境中に栄養源や酸素等を導
入し、該環境中にもともと棲息している分解微生物（土
着微生物）を活性化することにより汚染物質を分解させ
て環境の浄化修復を行う方法。
ｉｍｕｌａｔｉｏｎ）汚染環境中に栄養源や酸素等を導
入し、該環境中にもともと棲息している分解微生物（土
着微生物）を活性化することにより汚染物質を分解させ
て環境の浄化修復を行う方法。
【０００９】バイオオーグメンテーション（ｂｉｏａ
ｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）難分解性物質を分解できる微
生物を探索して単離し、単離した微生物を育種、培養し
たのち、汚染環境中に、その微生物が棲息するために必
要とする栄養源や酸素等と共に導入して汚染物質を分解
させて環境の浄化修復を行う方法。
ｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）難分解性物質を分解できる微
生物を探索して単離し、単離した微生物を育種、培養し
たのち、汚染環境中に、その微生物が棲息するために必
要とする栄養源や酸素等と共に導入して汚染物質を分解
させて環境の浄化修復を行う方法。
【００１０】の方法に属する先行技術としては、真空
抽出法と酸素供給によって土着微生物を活性化する方法
（米国特許第５，０２１，１５９号公報）、酸素源と栄
養素を含む水溶液を供給・回収して浄化処理を進める方
法（特開平１−３４３８０号公報）、地下水層に注入・
抽出井戸を設けて栄養や酸素を供給して浄化処理を促進
する方法（米国特許第５，２７９，７４０号公報）等が
知られている。
抽出法と酸素供給によって土着微生物を活性化する方法
（米国特許第５，０２１，１５９号公報）、酸素源と栄
養素を含む水溶液を供給・回収して浄化処理を進める方
法（特開平１−３４３８０号公報）、地下水層に注入・
抽出井戸を設けて栄養や酸素を供給して浄化処理を促進
する方法（米国特許第５，２７９，７４０号公報）等が
知られている。
【００１１】の方法に属する先行技術としては、特表
平４−５０２２７７号公報において、シュードモナスプ
チダＦ１株とシュードモナスセパシアＧ４株を用いて擬
似帯水層のトリクロロエチレンの分解を評価し、特開平
８−２９４３８７号公報では、オキシゲナーゼを構成的
に発現するトリクロロエチレン分解菌であるＪＭ１株を
用いてトリクロロエチレンで汚染された地下水や土壌等
の環境の浄化を試みている。
平４−５０２２７７号公報において、シュードモナスプ
チダＦ１株とシュードモナスセパシアＧ４株を用いて擬
似帯水層のトリクロロエチレンの分解を評価し、特開平
８−２９４３８７号公報では、オキシゲナーゼを構成的
に発現するトリクロロエチレン分解菌であるＪＭ１株を
用いてトリクロロエチレンで汚染された地下水や土壌等
の環境の浄化を試みている。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】の方法では、環境中
で増殖、分解等を制御するため、処理効率が低いという
問題がある。またの方法ではもともと存在しない微生
物を導入するため、その環境に適応させて分解能を発揮
せしめるために様々な工夫が必要であるという問題があ
る。
で増殖、分解等を制御するため、処理効率が低いという
問題がある。またの方法ではもともと存在しない微生
物を導入するため、その環境に適応させて分解能を発揮
せしめるために様々な工夫が必要であるという問題があ
る。
【００１３】本発明の課題は上記及びの方法のこの
ような問題点を解決するための方法を提供しようとする
ものである。
ような問題点を解決するための方法を提供しようとする
ものである。
【００１４】
【課題を解決するための手段】上記課題は、以下の本発
明によって達成される。
明によって達成される。
【００１５】すなわち、本発明の方法は、有機化合物で
汚染された、環境修復方法において、 １．該有機化合物を分解可能な微生物を、該環境の要素
の少なくとも一部分を含んだ培地で予め培養する工程
と、 ２．該培養した微生物と該環境中の該有機化合物とを接
触せしめる工程を含むことを特徴とする、環境修復方法
である。
汚染された、環境修復方法において、 １．該有機化合物を分解可能な微生物を、該環境の要素
の少なくとも一部分を含んだ培地で予め培養する工程
と、 ２．該培養した微生物と該環境中の該有機化合物とを接
触せしめる工程を含むことを特徴とする、環境修復方法
である。
【００１６】本発明方法で用いる有機化合物を分解可能
な汚染物質分解微生物は、有機化合物で汚染された環境
中にもともと棲息している土着微生物でもよいし、その
環境とは異なるところから単離された外来の微生物であ
ってもよい。
な汚染物質分解微生物は、有機化合物で汚染された環境
中にもともと棲息している土着微生物でもよいし、その
環境とは異なるところから単離された外来の微生物であ
ってもよい。
【００１７】本発明方法の対象となる有機化合物で汚染
された環境は特に制限されるものではなく、土壌または
地下水や工場廃水、生活廃水などの有機化合物で汚染さ
れた水などがすべて対象となる。
された環境は特に制限されるものではなく、土壌または
地下水や工場廃水、生活廃水などの有機化合物で汚染さ
れた水などがすべて対象となる。
【００１８】
【発明の実施の形態】本発明方法に於いて、培養した汚
染物質分解微生物と環境中の汚染物質との接触は、微生
物が分解活性を発現しうる条件にあればいかなる方法を
用いても実施することが可能で、バッチ法、半連続法、
連続法など種々の方法を用いて実施できる。その際、培
養した微生物は、半固定状態で、あるいは適当な担体に
担持させておいて用いることもできる。
染物質分解微生物と環境中の汚染物質との接触は、微生
物が分解活性を発現しうる条件にあればいかなる方法を
用いても実施することが可能で、バッチ法、半連続法、
連続法など種々の方法を用いて実施できる。その際、培
養した微生物は、半固定状態で、あるいは適当な担体に
担持させておいて用いることもできる。
【００１９】本発明方法は、閉鎖系、開放系いずれの汚
染環境処理方法にも適用できる。なお、培養した微生物
と環境中の汚染物質とを接触せしめる工程に於いて、該
微生物の生育を促進する各種の方法を併用して実施して
もよい。
染環境処理方法にも適用できる。なお、培養した微生物
と環境中の汚染物質とを接触せしめる工程に於いて、該
微生物の生育を促進する各種の方法を併用して実施して
もよい。
【００２０】本発明方法の対象となる環境が土壌である
場合、培養した汚染物質分解微生物と土壌との接触に
は、汚染された土壌中に該微生物を含む液を導入する方
法、該微生物を含む液相中に汚染された土壌を導入する
方法、該微生物を担持させた担体と汚染された土壌の水
懸濁液とを接触させる方法等を用いることができる。
場合、培養した汚染物質分解微生物と土壌との接触に
は、汚染された土壌中に該微生物を含む液を導入する方
法、該微生物を含む液相中に汚染された土壌を導入する
方法、該微生物を担持させた担体と汚染された土壌の水
懸濁液とを接触させる方法等を用いることができる。
【００２１】本発明方法の対象となる環境が地下水、工
場廃水、生活廃水などの汚染された水である場合、培養
した汚染物質分解微生物と汚染された水との接触には、
汚染された水中に該微生物を含む液を導入する方法、該
微生物を含む液相中に汚染された水を導入する方法、該
微生物を担持させた担体に汚染された水を接触させる方
法等を用いることができる。
場廃水、生活廃水などの汚染された水である場合、培養
した汚染物質分解微生物と汚染された水との接触には、
汚染された水中に該微生物を含む液を導入する方法、該
微生物を含む液相中に汚染された水を導入する方法、該
微生物を担持させた担体に汚染された水を接触させる方
法等を用いることができる。
【００２２】本発明の対象となる汚染物質すなわち有機
化合物として適しているのは、フェノール、トルエン、
クレゾール等の芳香族化合物や、トリクロロエチレン
（ＴＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥ）等の揮発性有
機塩素化合物であるが、本発明の方法は、ＰＣＢやγ−
ＨＣＨ、ＰＣＰ等の塩素化炭化水素や、シマジン、クロ
ルニトロフェン等の農薬の微生物分解浄化処理にも適用
することが可能である。本発明方法に於いて、汚染物質
分解微生物を培養する方法は、それぞれの微生物にとっ
て好適な条件で培養すればよいが、培養するための培地
としてはＭ９培地やＭＳＢ培地等の基礎塩培地に、有機
酸塩や酵母エキス、ペプトン等の栄養源を含んだものが
望ましい。
化合物として適しているのは、フェノール、トルエン、
クレゾール等の芳香族化合物や、トリクロロエチレン
（ＴＣＥ）、ジクロロエチレン（ＤＣＥ）等の揮発性有
機塩素化合物であるが、本発明の方法は、ＰＣＢやγ−
ＨＣＨ、ＰＣＰ等の塩素化炭化水素や、シマジン、クロ
ルニトロフェン等の農薬の微生物分解浄化処理にも適用
することが可能である。本発明方法に於いて、汚染物質
分解微生物を培養する方法は、それぞれの微生物にとっ
て好適な条件で培養すればよいが、培養するための培地
としてはＭ９培地やＭＳＢ培地等の基礎塩培地に、有機
酸塩や酵母エキス、ペプトン等の栄養源を含んだものが
望ましい。
【００２３】以下に一例としてＭ９培地の組成を示す。
【００２４】Ｎａ2ＨＰＯ4：６．２ｇ ＫＨ2ＰＯ4：３．０ｇ ＮａＣｌ：０．５ｇ ＮＨ4Ｃｌ：１．０ｇ （培地１リットル中） 本発明方法に於ける培養工程は、浄化対象となる環境の
全要素或いは一部分を含んだ培地で汚染物質分解微生物
を培養して行う。このような要素とは、例えば鉱物成分
や、粒子、有機物等が含まれるが、非常に微量な何らか
の要素が効果をもたらす場合がある。
全要素或いは一部分を含んだ培地で汚染物質分解微生物
を培養して行う。このような要素とは、例えば鉱物成分
や、粒子、有機物等が含まれるが、非常に微量な何らか
の要素が効果をもたらす場合がある。
【００２５】
【実施例】以下、実施例により本発明方法を具体的に示
すが、本発明方法はこれに限定されるものではなく、適
宜本発明の範囲内で変更できるものである。実施例１ 神奈川県横浜市より採取した細砂土１ｇを５０ｍｌ容の
滅菌チューブに入れ、フェノール２００ｐｐｍのみを含
むＭ９液体培地１０ｍｌを加えて、２３℃で振とうし
た。
すが、本発明方法はこれに限定されるものではなく、適
宜本発明の範囲内で変更できるものである。実施例１ 神奈川県横浜市より採取した細砂土１ｇを５０ｍｌ容の
滅菌チューブに入れ、フェノール２００ｐｐｍのみを含
むＭ９液体培地１０ｍｌを加えて、２３℃で振とうし
た。
【００２６】１週間後、上記懸濁液１ｍｌを５０ｍｌ容
の滅菌チューブ中のフェノール２００ｐｐｍのみを含む
Ｍ９液体培地９ｍｌに加え、再び２３℃で振とうした。
の滅菌チューブ中のフェノール２００ｐｐｍのみを含む
Ｍ９液体培地９ｍｌに加え、再び２３℃で振とうした。
【００２７】１週間後、上記懸濁液１ｍｌを５０ｍｌ容
の滅菌チューブ中のフェノール２００ｐｐｍのみを含む
Ｍ９液体培地９ｍｌに加え、再び２３℃で振とうした。
の滅菌チューブ中のフェノール２００ｐｐｍのみを含む
Ｍ９液体培地９ｍｌに加え、再び２３℃で振とうした。
【００２８】１週間後、懸濁液を希釈し、フェノール２
００ｐｐｍのみを含むＭ９寒天培地上に塗布し、２５℃
で１週間培養したところ、形状の異なるコロニーが５種
類確認された。
００ｐｐｍのみを含むＭ９寒天培地上に塗布し、２５℃
で１週間培養したところ、形状の異なるコロニーが５種
類確認された。
【００２９】これらのコロニーをあわせてフェノール２
００ｐｐｍのみを含むＭ９液体培地に摂取して懸濁さ
せ、２７．５ｍｌ容バイアル瓶に１０ｍｌ加えた後、テ
フロンライナー付きブチルゴム栓及びアルミシールで密
栓し、ＴＣＥ飽和蒸気を、初期濃度２ｐｐｍ（すべての
ＴＣＥが溶液に溶解しているものとした場合）となるよ
うにガスタイトシリンジで加えた。
００ｐｐｍのみを含むＭ９液体培地に摂取して懸濁さ
せ、２７．５ｍｌ容バイアル瓶に１０ｍｌ加えた後、テ
フロンライナー付きブチルゴム栓及びアルミシールで密
栓し、ＴＣＥ飽和蒸気を、初期濃度２ｐｐｍ（すべての
ＴＣＥが溶液に溶解しているものとした場合）となるよ
うにガスタイトシリンジで加えた。
【００３０】このバイアル瓶を２５℃で３日間培養した
後、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採取してヘッドス
ペース法によりＴＣＥをガスクロマトグラフィー（島津
製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）にて測定した。
後、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採取してヘッドス
ペース法によりＴＣＥをガスクロマトグラフィー（島津
製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）にて測定した。
【００３１】その結果、初期２ｐｐｍであったＴＣＥが
０．８ｐｐｍにまで減少していた。このことから、混合
培養液中にフェノールの存在下でＴＣＥを分解する微生
物が存在することが示唆されたため、本混合培養液を本
実施例に供することとした。 （１）細砂上澄液の調製 上に示したものと同様の、神奈川県横浜市より採取した
細砂土５０ｇを５００ｍｌの脱イオン水中に添加し、マ
グネチックスターラーで１時間撹拌し、一晩静置した。
上澄を細砂上澄液とした。
０．８ｐｐｍにまで減少していた。このことから、混合
培養液中にフェノールの存在下でＴＣＥを分解する微生
物が存在することが示唆されたため、本混合培養液を本
実施例に供することとした。 （１）細砂上澄液の調製 上に示したものと同様の、神奈川県横浜市より採取した
細砂土５０ｇを５００ｍｌの脱イオン水中に添加し、マ
グネチックスターラーで１時間撹拌し、一晩静置した。
上澄を細砂上澄液とした。
【００３２】（２）前培養 ５００ｍｌ容振とうフラスコに、（１）で調製した細砂
上澄液に上記のＭ９培地組成塩類を溶解させたもの（以
下上澄Ｍ９培地とする）と、通常のＭ９培地とのそれぞ
れにフェノールを２００ｐｐｍとなるように添加し、
０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌したもの２００ｍ
ｌを加え、上記で用いた混合培養液２ｍｌを添加して、
２３℃で２０時間振とう培養した。
上澄液に上記のＭ９培地組成塩類を溶解させたもの（以
下上澄Ｍ９培地とする）と、通常のＭ９培地とのそれぞ
れにフェノールを２００ｐｐｍとなるように添加し、
０．２２μｍのフィルターでろ過滅菌したもの２００ｍ
ｌを加え、上記で用いた混合培養液２ｍｌを添加して、
２３℃で２０時間振とう培養した。
【００３３】（３）ＴＣＥ分解実験 （２）の様にして培養したそれぞれの培養液を遠心分離
にて集菌し、Ｍ９培地に再懸濁してＯＤ（濁度；６６０
ｎｍにて測定）が１になるよう調整した。このそれぞれ
の菌懸濁液１３．５ｍｌを、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に加え、予めＴＣＥを５ｐｐｍとなるように加えた細砂
上澄液を１３．５ｍｌ加えてテフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密栓し、２０℃で静置し
た。
にて集菌し、Ｍ９培地に再懸濁してＯＤ（濁度；６６０
ｎｍにて測定）が１になるよう調整した。このそれぞれ
の菌懸濁液１３．５ｍｌを、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に加え、予めＴＣＥを５ｐｐｍとなるように加えた細砂
上澄液を１３．５ｍｌ加えてテフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密栓し、２０℃で静置し
た。
【００３４】菌液の代わりにＭ９培地を加えたものをブ
ランクとし、３日後にバイアル瓶から各溶液０．５を採
取し、予め０．５ｍｌのノルマルヘキサンを入れた１．
５ｍｌ容のシリンジバイアル瓶に加えて、３分間撹拌し
た。
ランクとし、３日後にバイアル瓶から各溶液０．５を採
取し、予め０．５ｍｌのノルマルヘキサンを入れた１．
５ｍｌ容のシリンジバイアル瓶に加えて、３分間撹拌し
た。
【００３５】ノルマルヘキサン層を１０倍に希釈し、そ
の１ｍｌをガスクロマトグラフィー（島津製作所製ＧＣ
−１４Ｂ、ＥＣＤ検出器）に注入し、ＴＣＥ濃度を測定
した。
の１ｍｌをガスクロマトグラフィー（島津製作所製ＧＣ
−１４Ｂ、ＥＣＤ検出器）に注入し、ＴＣＥ濃度を測定
した。
【００３６】結果を表１に示す。
【００３７】
【表１】 表１に示す結果の通り、本発明の方法によって、ＴＣＥ
の分解効率が明らかに上昇した。実施例２ 分解対象物をフェノール４００ｐｐｍにした他は、実施
例１と全く同じ方法で、本発明の効果を評価した。な
お、フェノールの定量は、溶液０．５ｍｌを採取し、４
−アミノアンチピリンを用いた吸光光度法（ＪＩＳ Ｋ
０１０２−１９９３ ２８．１）によって行った。
の分解効率が明らかに上昇した。実施例２ 分解対象物をフェノール４００ｐｐｍにした他は、実施
例１と全く同じ方法で、本発明の効果を評価した。な
お、フェノールの定量は、溶液０．５ｍｌを採取し、４
−アミノアンチピリンを用いた吸光光度法（ＪＩＳ Ｋ
０１０２−１９９３ ２８．１）によって行った。
【００３８】結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】 表２に示す結果の通り、本発明の方法によって、フェノ
ールの分解効率が明らかに上昇した。実施例３ 千葉県君津市より採取した細砂土１ｇを５０ｍｌ容のバ
イアル瓶に入れ、トルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９
液体培地１０ｍｌを加えて、テフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密閉し、２５℃で振とうし
た。
ールの分解効率が明らかに上昇した。実施例３ 千葉県君津市より採取した細砂土１ｇを５０ｍｌ容のバ
イアル瓶に入れ、トルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９
液体培地１０ｍｌを加えて、テフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密閉し、２５℃で振とうし
た。
【００４０】１週間後、上記懸濁液１ｍｌを５０ｍｌ容
のバイアル瓶中のトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９
液体培地９ｍｌに加えて密閉し、再び２５℃で振とうし
た。１週間後、上記懸濁液１ｍｌを５０ｍｌ容のバイア
ル瓶中のトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９液体培地
９ｍｌに加えて密閉し、再び２５℃で振とうした。１週
間後、懸濁液を希釈し、Ｍ９寒天培地上に塗布し、トル
エンガス雰囲気下、２５℃で１週間培養したところ、形
状の異なるコロニーが３種類確認された。これらのコロ
ニーをあわせてトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９液
体培地に摂取して懸濁させ、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に１０ｍｌ加えた後、テフロンライナー付きブチルゴム
栓及びアルミシールで密栓し、ＴＣＥ飽和蒸気を、初期
濃度２ｐｐｍ（すべてのＴＣＥが溶液に溶解しているも
のとした場合）となるようにガスタイトシリンジで加え
た。
のバイアル瓶中のトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９
液体培地９ｍｌに加えて密閉し、再び２５℃で振とうし
た。１週間後、上記懸濁液１ｍｌを５０ｍｌ容のバイア
ル瓶中のトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９液体培地
９ｍｌに加えて密閉し、再び２５℃で振とうした。１週
間後、懸濁液を希釈し、Ｍ９寒天培地上に塗布し、トル
エンガス雰囲気下、２５℃で１週間培養したところ、形
状の異なるコロニーが３種類確認された。これらのコロ
ニーをあわせてトルエン１００ｐｐｍのみを含むＭ９液
体培地に摂取して懸濁させ、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に１０ｍｌ加えた後、テフロンライナー付きブチルゴム
栓及びアルミシールで密栓し、ＴＣＥ飽和蒸気を、初期
濃度２ｐｐｍ（すべてのＴＣＥが溶液に溶解しているも
のとした場合）となるようにガスタイトシリンジで加え
た。
【００４１】このバイアル瓶を２５℃で３日間培養した
後、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採取してヘッドス
ペース法によりＴＣＥをガスクロマトグラフィー（島津
製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）にて測定した。
後、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採取してヘッドス
ペース法によりＴＣＥをガスクロマトグラフィー（島津
製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）にて測定した。
【００４２】その結果、初期２ｐｐｍであったＴＣＥが
０．３ｐｐｍにまで減少していた。このことから、混合
培養液中にトルエンの存在下でＴＣＥを分解する微生物
が存在することが示唆されたため、本混合培養液を本発
明の実施例に供することとした。
０．３ｐｐｍにまで減少していた。このことから、混合
培養液中にトルエンの存在下でＴＣＥを分解する微生物
が存在することが示唆されたため、本混合培養液を本発
明の実施例に供することとした。
【００４３】（１）細砂上澄液の調製 上に示したものと同様の、千葉県君津市より採取した細
砂土５０ｇを５００ｍｌの脱イオン水中に添加し、マグ
ネチックスターラーで１時間撹拌し、３時間静置した。
微細なシルト成分を含む上液を細砂懸濁液とした。
砂土５０ｇを５００ｍｌの脱イオン水中に添加し、マグ
ネチックスターラーで１時間撹拌し、３時間静置した。
微細なシルト成分を含む上液を細砂懸濁液とした。
【００４４】（２）前培養 １００ｍｌ容バイアル瓶に、（１）で調製した細砂懸濁
液に上記のＭ９培地組成塩類を溶解させたもの（以下懸
濁Ｍ９培地とする）と、通常のＭ９培地とをオートクレ
ーブにて滅菌したもの５０ｍｌを加え、上記で用いた混
合培養液２ｍｌを添加して、テフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密閉し、トルエンガスを初
期濃度１００ｐｐｍ（全てが溶液に溶解したとした時の
濃度）をガスタイトシリンジでくわえ、２５℃で２０時
間振とう培養した。
液に上記のＭ９培地組成塩類を溶解させたもの（以下懸
濁Ｍ９培地とする）と、通常のＭ９培地とをオートクレ
ーブにて滅菌したもの５０ｍｌを加え、上記で用いた混
合培養液２ｍｌを添加して、テフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密閉し、トルエンガスを初
期濃度１００ｐｐｍ（全てが溶液に溶解したとした時の
濃度）をガスタイトシリンジでくわえ、２５℃で２０時
間振とう培養した。
【００４５】（３）ＴＣＥ分解実験 （２）の様にして培養したそれぞれの培養液を遠心分離
にて集菌し、Ｍ９培地に再懸濁してＯＤ（濁度；６６０
ｎｍにて測定）が１になるよう調整した。このそれぞれ
の菌懸濁液１３．５ｍｌを、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に加え、予めＴＣＥを５ｐｐｍとなるように加えた細砂
上澄液を１３．５ｍｌ加えてテフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密栓し、２０℃で静置し
た。
にて集菌し、Ｍ９培地に再懸濁してＯＤ（濁度；６６０
ｎｍにて測定）が１になるよう調整した。このそれぞれ
の菌懸濁液１３．５ｍｌを、２７．５ｍｌ容バイアル瓶
に加え、予めＴＣＥを５ｐｐｍとなるように加えた細砂
上澄液を１３．５ｍｌ加えてテフロンライナー付きブチ
ルゴム栓及びアルミシールで密栓し、２０℃で静置し
た。
【００４６】菌液の代わりにＭ９培地を加えたものをブ
ランクとし、３日後にバイアル瓶から各溶液０．５を採
取し、予め０．５ｍｌのノルマルヘキサンを入れた１．
５ｍｌ容のシリンジバイアル瓶に加えて、３分間撹拌し
た。
ランクとし、３日後にバイアル瓶から各溶液０．５を採
取し、予め０．５ｍｌのノルマルヘキサンを入れた１．
５ｍｌ容のシリンジバイアル瓶に加えて、３分間撹拌し
た。
【００４７】ノルマルヘキサン層を１０倍に希釈し、そ
の１ｍｌをガスクロマトグラフィー（島津製作所製ＧＣ
−１４Ｂ、ＥＣＤ検出器）に注入し、ＴＣＥ濃度を測定
した。
の１ｍｌをガスクロマトグラフィー（島津製作所製ＧＣ
−１４Ｂ、ＥＣＤ検出器）に注入し、ＴＣＥ濃度を測定
した。
【００４８】
【表３】 表３に示す結果の通り、本発明の方法によって、ＴＣＥ
の分解効率が明らかに上昇した。実施例４ 分解対象物をトルエン２００ｐｐｍにした他は、実施例
３と全く同じ方法で、本発明の効果を評価した。なお、
トルエンの定量は、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採
取してヘッドスペース法によりガスクロマトグラフィー
（島津製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）によって
行った。
の分解効率が明らかに上昇した。実施例４ 分解対象物をトルエン２００ｐｐｍにした他は、実施例
３と全く同じ方法で、本発明の効果を評価した。なお、
トルエンの定量は、バイアル瓶中の気相を０．１ｍｌ採
取してヘッドスペース法によりガスクロマトグラフィー
（島津製作所製ＧＣ−１４Ｂ、ＦＩＤ検出器）によって
行った。
【００４９】結果を表４に示す。
【００５０】
【表４】 表４に示す結果の通り、本発明の方法によって、トルエ
ンの分解効率が明らかに上昇した。
ンの分解効率が明らかに上昇した。
【００５１】
【発明の効果】本発明の方法により、有機化合物で汚染
された土壌や地下水といった自然環境の微生物による分
解浄化修復において、従来より効率の良い生物分解処理
が可能となる。
された土壌や地下水といった自然環境の微生物による分
解浄化修復において、従来より効率の良い生物分解処理
が可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 矢野 哲哉 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内
Claims (13)
- 【請求項１】 有機化合物で汚染された、環境の修復方
法において、 １．該有機化合物を分解可能な微生物を、該環境の要素
の少なくとも一部分を含んだ培地で予め培養する工程
と、 ２．該培養した微生物と該環境中の該有機化合物とを接
触せしめる工程を含むことを特徴とする、環境修復方
法。 - 【請求項２】 前記汚染された環境が土壌である、請求
項１に記載の方法。 - 【請求項３】 前記接触が、汚染された土壌中に前記培
養した微生物を含む液を導入することにより行われる、
請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 前記接触が、前記培養した微生物を含む
液中に汚染された土壌を導入することにより行われる、
請求項２に記載の方法。 - 【請求項５】 前記接触が、前記培養した微生物を担持
させた担体と汚染された土壌の水懸濁液とを接触させる
ことにより行われる、請求項２に記載の方法。 - 【請求項６】 前記汚染された環境が汚染された水であ
る、請求項１に記載の方法。 - 【請求項７】 前記接触が、汚染された水中に前記培養
した微生物を含む液を導入することにより行われる、請
求項６に記載の方法。 - 【請求項８】 前記接触が、前記培養した微生物を含む
液中に汚染された水を導入することにより行われる、請
求項６に記載の方法。 - 【請求項９】 前記接触が、前記培養した微生物を担持
させた担体に汚染された水を接触させることにより行わ
れる、請求項６に記載の方法。 - 【請求項１０】 前記有機化合物が芳香族化合物であ
る、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記芳香族化合物がフェノール、トル
エン、クレゾールのいずれか一つ、もしくは二つ以上で
ある、請求項１０に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記有機化合物が揮発性有機塩素化合
物である、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の方
法。 - 【請求項１３】 前記揮発性有機塩素化合物がトリクロ
ロエチレン、ジクロロエチレンのいずれか一つ、もしく
は両方である、請求項１２に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9255116A JPH1190411A (ja) | 1997-09-19 | 1997-09-19 | 環境修復方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9255116A JPH1190411A (ja) | 1997-09-19 | 1997-09-19 | 環境修復方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1190411A true JPH1190411A (ja) | 1999-04-06 |
Family
ID=17274324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9255116A Pending JPH1190411A (ja) | 1997-09-19 | 1997-09-19 | 環境修復方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1190411A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003010834A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-01-14 | Nippon Hodo Co Ltd | 汚染土壌のバイオレメディエーション法 |
| JP2006007182A (ja) * | 2004-06-29 | 2006-01-12 | Ohbayashi Corp | 前培養を伴う原位置バイオレメディエーション工法、及びそのシステム |
| JP2008229579A (ja) * | 2007-03-23 | 2008-10-02 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 土壌及び地下水の浄化方法 |
| US11306012B2 (en) | 2018-01-02 | 2022-04-19 | Reed Scientific Services Ltd. | Soil-based flow-through rhizosphere system for treatment of contaminated water and soil |
-
1997
- 1997-09-19 JP JP9255116A patent/JPH1190411A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003010834A (ja) * | 2001-07-04 | 2003-01-14 | Nippon Hodo Co Ltd | 汚染土壌のバイオレメディエーション法 |
| JP2006007182A (ja) * | 2004-06-29 | 2006-01-12 | Ohbayashi Corp | 前培養を伴う原位置バイオレメディエーション工法、及びそのシステム |
| JP2008229579A (ja) * | 2007-03-23 | 2008-10-02 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 土壌及び地下水の浄化方法 |
| US11306012B2 (en) | 2018-01-02 | 2022-04-19 | Reed Scientific Services Ltd. | Soil-based flow-through rhizosphere system for treatment of contaminated water and soil |
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