JPH1156362A

JPH1156362A - ロドスポリジウム属由来のｄ−アミノ酸オキシダーゼ

Info

Publication number: JPH1156362A
Application number: JP9220474A
Authority: JP
Inventors: Riao Guo-Wen; リアオグオ−ウェン; Yan Lee I; リーイー−ヤン; Lee Yun-Wei; リーユン−ウェイ; Rin Chen Ri; チェンリー−リン; Chuu Uen-Shen; チューウェン−シェン
Original assignee: Food Industry Research and Development Institute
Current assignee: Food Industry Research and Development Institute
Priority date: 1997-07-31
Filing date: 1997-08-15
Publication date: 1999-03-02
Also published as: CA2235771C; EP0897006B1; AU7192598A; EP0897006A1; CA2235771A1; US5877013A; TW514665B; NZ330697A; AU746960B2

Abstract

(57)【要約】【課題】単離されたロドスポリジウム属由来のＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼ、該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼをコ
ード化する単離された核酸、およびその核酸を含むベク
ター及び形質転換された宿主細胞を提供する。【解決手段】ロドスポリジウム属(genus Rhodosporid
ium)由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単
離された核酸。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な単離された
ロドスポリジウム属由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ、
該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離された
核酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換され
た宿主細胞に関するものである。さらに詳しくは、本発
明は、ロドスポリジウム属、例えば、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロ
ドスポリジウムスフェロカルパム(Rhodosporidium sp
haerocarpum)、ロドスポリジウムクラトクヴィロヴァ
エ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウ
ムトルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 、ロド
スポリジウムルシタニエ(Rhodosporidium lusitania
e) 、ロドスポリジウムパルディグネナム(Rhodospori
dium paludignenum) 、ロドスポリジウムダクリオイ
ダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポリジウム
バブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae) 及びロド
スポリジウムフルヴィアレ(Rhodosporidium fluvial
e) 、由来の単離されたＤ−アミノ酸オキシダーゼ、該
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離された核
酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換された
宿主細胞に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ（ＤＡＯ）
は、セファロスポリンＣ（ＣｅｐｈＣ）をα−ケトア
ジピルセファロスポラン酸 (α-ketoadipyl cephalospo
ranic acid) （α−ケトアジピル７−ＡＣＡ）、過酸
化水素及びアンモニアに変換できることが知られている
フラビンタンパク質である。α−ケトアジピル７−Ａ
ＣＡは、過酸化水素と反応すると、さらにグルタリル−
７−アミノセファロスポラン酸(glutaryl-7-aminocepha
losporanic acid)（ＧＬ−７−ＡＣＡ）に変換されう
る。ＧＬ−７−ＡＣＡはセフェム系抗生物質の製造に関
する出発材料であるため、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼは
非常に工業上有益である。

【０００３】α−ケト酸の製造（トサ(Tosa)ら、アグリ
ックバイオルケム(Agric. Biol. Chem.)、［１９７
４年］、３８巻、頁１５２９〜１５３６）に加えて、Ｄ
−アミノ酸オキシダーゼは、アミノ酸のラセミ混合物の
分割（ツ(Tu)ら、セパレーションサイエンス(Separat
ion Sci.) 、［１９７２年］、７巻、頁４０３〜４０
８）およびアミノ酸の分析決定（ギルバルト(Guilbaul
t) ら、アナルキムアクラ(Anal. Chim. Acta.) 、
［１９７１年］、５６巻、頁２８５〜２９０）に使用さ
れてきた。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼは様々な微生物、
昆虫及び動物において見い出されたが、ロドスポリジウ
ム属由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼは未だ知られてい
なかった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、新規
な単離されたロドスポリジウム属由来のＤ−アミノ酸オ
キシダーゼ、該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼをコード化す
る単離された核酸、およびその核酸を含むベクター及び
形質転換された宿主細胞を提供するものである。本発明
の他の目的は、ロドスポリジウム属、例えば、ロドスポ
リジウムディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovat
um) 、ロドスポリジウムスフェロカルパム(Rhodospor
idium sphaerocarpum)、ロドスポリジウムクラトクヴ
ィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドス
ポリジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 、ロドスポリジウムルシタニエ(Rhodosporidium l
usitaniae) 、ロドスポリジウムパルディグネナム(Rh
odosporidium paludignenum) 、ロドスポリジウムダ
クリオイダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポ
リジウムバブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae)
及びロドスポリジウムフルヴィアレ(Rhodosporidium fl
uviale) 、由来の単離されたＤ−アミノ酸オキシダー
ゼ、該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離さ
れた核酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換
された宿主細胞を提供するものである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】上記諸目的は、以下の
（１）〜（１３）のいずれかによって達成される。

【０００６】（１）ロドスポリジウム属(genus Rhodosp
oridium)由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化す
る単離された核酸。

【０００７】（２）上記核酸が以下の配列番号：１の塩
基配列からなる核酸、以下の配列番号２：の塩基配列か
らなる核酸、または配列番号：１若しくは配列番号：２
の塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズしかつＤ−アミノ酸オキシダーゼ活性を
有するタンパク質をコードする核酸である、前記（１）
に記載の核酸。

【０００８】配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 （３）上記核酸が以下の配列番号：１の塩基配列からな
る核酸または以下の配列番号２：の塩基配列からなる核
酸である、前記（２）に記載の核酸。

【０００９】配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ＡＴＧＣＡＣＴＣＴＣＡＧＡＡＧＣＧＣＧＴＣＧＴＴＧＴＣ
ＣＴＣＧＧＡＴＣＡＧＧＣＧＴＴＡＴＣＧＧＴ４８ＭｅｔＨｉｓＳｅｒＧｌｎＬｙｓＡｒｇＶａｌＶａｌＶａｌ
ＬｅｕＧｌｙＳｅｒＧｌｙＶａｌＩｌｅＧｌｙ１５
１０１５ＣＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＣＴＣＡＴＣＣＴＣＧＣＴＣＧＧ
ＡＡＧＧＧＣＴＡＣＡＧＣＧＴＧＣＡＴＡＴＴ９６ＬｅｕＳｅｒＳｅｒＡｌａＬｅｕＩｌｅＬｅｕＡｌａＡｒｇ
ＬｙｓＧｌｙＴｙｒＳｅｒＶａｌＨｉｓＩｌｅ２０２５
３０ＣＴＣＧＣＧＣＧＣＧＡＣＴＴＧＣＣＧＧＡＧＧＡＣＧＴＣ
ＴＣＧＡＧＣＣＡＧＡＣＴＴＴＣＧＣＴＴＣＡ１４４ＬｅｕＡｌａＡｒｇＡｓｐＬｅｕＰｒｏＧｌｕＡｓｐＶａｌ
ＳｅｒＳｅｒＧｌｎＴｈｒＰｈｅＡｌａＳｅｒ３５４０
４５ＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＧＣＧＣＧＡＡＴＴＧＧＡＣＧＣＣＴ
ＴＴＣＡＴＧＡＣＧＣＴＴＡＣＡＧＡＣＧＧＴ１９２ＰｒｏＴｒｐＡｌａＧｌｙＡｌａＡｓｎＴｒｐＴｈｒＰｒｏ
ＰｈｅＭｅｔＴｈｒＬｅｕＴｈｒＡｓｐＧｌｙ５０５５
６０ＣＣＴＣＧＡＣＡＡＧＣＡＡＡＡＴＧＧＧＡＡＧＡＡＴＣＧ
ＡＣＴＴＴＣＡＡＧＡＡＧＴＧＧＧＴＣＧＡＧ２４０ＰｒｏＡｒｇＧｌｎＡｌａＬｙｓＴｒｐＧｌｕＧｌｕＳｅｒ
ＴｈｒＰｈｅＬｙｓＬｙｓＴｒｐＶａｌＧｌｕ６５７０
７５８０ＴＴＧＧＴＣＣＣＧＡＣＧＧＧＣＣＡＴＧＣＣＡＴＧＴＧＧ
ＣＴＣＡＡＧＧＧＧＡＣＧＡＧＧＣＧＧＴＴＣ２８８ＬｅｕＶａｌＰｒｏＴｈｒＧｌｙＨｉｓＡｌａＭｅｔＴｒｐ
ＬｅｕＬｙｓＧｌｙＴｈｒＡｒｇＡｒｇＰｈｅ８５
９０９５ＧＣＧＣＡＧＡＡＣＧＡＡＧＡＣＧＧＣＴＴＧＣＴＣＧＧＧ
ＣＡＣＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＡＣＡＴＣＡＣＧ３３６ＡｌａＧｌｎＡｓｎＧｌｕＡｓｐＧｌｙＬｅｕＬｅｕＧｌｙ
ＨｉｓＴｒｐＴｙｒＬｙｓＡｓｐＩｌｅＴｈｒ１００１０５
１１０ＣＣＡＡＡＴＴＡＣＣＧＣＣＣＣＣＴＣＣＣＡＴＣＴＴＣＣ
ＧＡＡＴＧＴＣＣＡＣＣＴＧＧＣＧＣＴＡＴＣ３８４ＰｒｏＡｓｎＴｙｒＡｒｇＰｒｏＬｅｕＰｒｏＳｅｒＳｅｒ
ＧｌｕＣｙｓＰｒｏＰｒｏＧｌｙＡｌａＩｌｅ１１５１２０
１２５ＧＧＣＧＴＡＡＣＣＴＡＣＧＡＣＡＣＣＣＴＣＴＣＣＧＴＣ
ＣＡＣＧＣＡＣＣＡＡＡＧＴＡＣＴＧＣＣＡＧ４３２ＧｌｙＶａｌＴｈｒＴｙｒＡｓｐＴｈｒＬｅｕＳｅｒＶａｌ
ＨｉｓＡｌａＰｒｏＬｙｓＴｙｒＣｙｓＧｌｎ１３０１３５
１４０ＴＡＣＣＴＴＧＣＡＡＧＡＧＡＧＣＴＧＣＡＧＡＡＧＣＴＣ
ＧＧＣＧＣＧＡＣＧＴＴＴＧＡＧＡＧＡＣＧＧ４８０ＴｙｒＬｅｕＡｌａＡｒｇＧｌｕＬｅｕＧｌｎＬｙｓＬｅｕ
ＧｌｙＡｌａＴｈｒＰｈｅＧｌｕＡｒｇＡｒｇ１４５１５０
１５５１６０ＡＣＣＧＴＴＡＣＧＴＣＧＣＴＴＧＡＧＣＡＧＧＣＧＴＴＣ
ＧＡＣＧＧＴＧＣＧＧＡＴＴＴＧＧＴＧＧＴＣ５２８ＴｈｒＶａｌＴｈｒＳｅｒＬｅｕＧｌｕＧｌｎＡｌａＰｈｅ
ＡｓｐＧｌｙＡｌａＡｓｐＬｅｕＶａｌＶａｌ１６５
１７０１７５ＡＡＣＧＣＴＡＣＧＧＧＡＣＴＴＧＧＣＧＣＣＡＡＧＴＣＧ
ＡＴＴＧＣＧＧＧＣＡＴＣＧＡＣＧＡＣＣＡＡ５７６ＡｓｎＡｌａＴｈｒＧｌｙＬｅｕＧｌｙＡｌａＬｙｓＳｅｒ
ＩｌｅＡｌａＧｌｙＩｌｅＡｓｐＡｓｐＧｌｎ１８０１８５
１９０ＧＣＣＧＣＣＧＡＧＣＣＡＡＴＣＣＧＣＧＧＣＣＡＡＡＣＣ
ＧＴＣＣＴＣＧＴＣＡＡＧＴＣＣＣＣＡＴＧＣ６２４ＡｌａＡｌａＧｌｕＰｒｏＩｌｅＡｒｇＧｌｙＧｌｎＴｈｒ
ＶａｌＬｅｕＶａｌＬｙｓＳｅｒＰｒｏＣｙｓ１９５２００
２０５ＡＡＧＣＧＡＴＧＣＡＣＧＡＴＧＧＡＣＴＣＧＴＣＣＧＡＣ
ＣＣＣＧＣＴＴＣＴＣＣＣＧＣＣＴＡＣＡＴＣ６７２ＬｙｓＡｒｇＣｙｓＴｈｒＭｅｔＡｓｐＳｅｒＳｅｒＡｓｐ
ＰｒｏＡｌａＳｅｒＰｒｏＡｌａＴｙｒＩｌｅ２１０２１５
２２０ＡＴＴＣＣＣＣＧＡＣＣＡＧＧＴＧＧＣＧＡＡＧＴＣＡＴＣ
ＴＧＣＧＧＣＧＧＧＡＣＧＴＡＣＧＧＣＧＴＧ７２０ＩｌｅＰｒｏＡｒｇＰｒｏＧｌｙＧｌｙＧｌｕＶａｌＩｌｅ
ＣｙｓＧｌｙＧｌｙＴｈｒＴｙｒＧｌｙＶａｌ２２５２３０
２３５２４０ＧＧＡＧＡＣＴＧＧＧＡＣＴＴＧＴＣＴＧＴＣＡＡＣＣＣＡ
ＧＡＧＡＣＧＧＴＣＣＡＧＣＧＧＡＴＣＣＴＣ７６８ＧｌｙＡｓｐＴｒｐＡｓｐＬｅｕＳｅｒＶａｌＡｓｎＰｒｏ
ＧｌｕＴｈｒＶａｌＧｌｎＡｒｇＩｌｅＬｅｕ２４５
２５０２５５ＡＡＧＣＡＣＴＧＣＴＴＧＣＧＣＣＴＣＧＡＣＣＣＧＡＣＣ
ＡＴＣＴＣＧＡＧＣＧＡＣＧＧＡＡＣＧＡＴＣ８１６ＬｙｓＨｉｓＣｙｓＬｅｕＡｒｇＬｅｕＡｓｐＰｒｏＴｈｒ
ＩｌｅＳｅｒＳｅｒＡｓｐＧｌｙＴｈｒＩｌｅ２６０２６５
２７０ＧＡＡＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴＣＣＴＣＣＧＣＣＡＣＡＡＣ
ＧＴＣＧＧＣＴＴＧＣＧＡＣＣＴＧＣＡＣＧＡ８６４ＧｌｕＧｌｙＩｌｅＧｌｕＶａｌＬｅｕＡｒｇＨｉｓＡｓｎ
ＶａｌＧｌｙＬｅｕＡｒｇＰｒｏＡｌａＡｒｇ２７５２８０
２８５ＣＧＡＧＧＣＧＧＡＣＣＣＣＧＣＧＴＣＧＡＧＧＣＡＧＡＡ
ＣＧＧＡＴＣＧＴＣＣＴＧＣＣＴＣＴＣＧＡＣ９１２ＡｒｇＧｌｙＧｌｙＰｒｏＡｒｇＶａｌＧｌｕＡｌａＧｌｕ
ＡｒｇＩｌｅＶａｌＬｅｕＰｒｏＬｅｕＡｓｐ２９０２９５
３００ＣＧＧＡＣＡＡＡＧＴＣＧＣＣＣＣＴＣＴＣＧＣＴＣＧＧＣ
ＡＧＧＧＧＣＡＧＣＧＣＡＣＧＡＧＣＣＧＣＧ９６０ＡｒｇＴｈｒＬｙｓＳｅｒＰｒｏＬｅｕＳｅｒＬｅｕＧｌｙ
ＡｒｇＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｒｇＡｌａＡｌａ３０５３１０
３１５３２０ＡＡＧＧＡＧＡＡＧＧＡＧＧＴＣＡＣＧＣＴＴＧＴＧＣＡＴ
ＧＣＧＴＡＴＧＧＣＴＴＣＴＣＧＡＧＴＧＣＧ１００８ＬｙｓＧｌｕＬｙｓＧｌｕＶａｌＴｈｒＬｅｕＶａｌＨｉｓ
ＡｌａＴｙｒＧｌｙＰｈｅＳｅｒＳｅｒＡｌａ３２５
３３０３３５ＧＧＡＴＡＣＣＡＧＣＡＧＡＧＴＴＧＧＧＧＣＧＣＧＧＣＧ
ＧＡＧＧＡＴＧＴＣＧＣＧＣＡＧＣＴＣＧＴＣ１０５６ＧｌｙＴｙｒＧｌｎＧｌｎＳｅｒＴｒｐＧｌｙＡｌａＡｌａ
ＧｌｕＡｓｐＶａｌＡｌａＧｌｎＬｅｕＶａｌ３４０３４５
３５０ＧＡＣＧＡＧＧＣＧＴＴＣＣＡＧＣＧＧＴＡＣＣＡＣＧＧＣ
ＧＣＧＧＣＧＣＧＧＧＡＧＴＣＧＡＡＧＴＴＧ１１０４ＡｓｐＧｌｕＡｌａＰｈｅＧｌｎＡｒｇＴｙｒＨｉｓＧｌｙ
ＡｌａＡｌａＡｒｇＧｌｕＳｅｒＬｙｓＬｅｕ３５５３６０
３６５（４）上記核酸が以下の配列番号：３のアミノ酸配列を
コード化する、前記（１）に記載の核酸。

【００１０】配列番号：３ＭｅｔＨｉｓＳｅｒＧｌｎＬｙｓＡｒｇＶａｌＶａｌＶａｌ
ＬｅｕＧｌｙＳｅｒＧｌｙＶａｌＩｌｅＧｌｙ１５
１０１５ＬｅｕＳｅｒＳｅｒＡｌａＬｅｕＩｌｅＬｅｕＡｌａＡｒｇ
ＬｙｓＧｌｙＴｙｒＳｅｒＶａｌＨｉｓＩｌｅ２０２５
３０ＬｅｕＡｌａＡｒｇＡｓｐＬｅｕＰｒｏＧｌｕＡｓｐＶａｌ
ＳｅｒＳｅｒＧｌｎＴｈｒＰｈｅＡｌａＳｅｒ３５４０
４５ＰｒｏＴｒｐＡｌａＧｌｙＡｌａＡｓｎＴｒｐＴｈｒＰｒｏ
ＰｈｅＭｅｔＴｈｒＬｅｕＴｈｒＡｓｐＧｌｙ５０５５
６０ＰｒｏＡｒｇＧｌｎＡｌａＬｙｓＴｒｐＧｌｕＧｌｕＳｅｒ
ＴｈｒＰｈｅＬｙｓＬｙｓＴｒｐＶａｌＧｌｕ６５７０
７５８０ＬｅｕＶａｌＰｒｏＴｈｒＧｌｙＨｉｓＡｌａＭｅｔＴｒｐ
ＬｅｕＬｙｓＧｌｙＴｈｒＡｒｇＡｒｇＰｈｅ８５
９０９５ＡｌａＧｌｎＡｓｎＧｌｕＡｓｐＧｌｙＬｅｕＬｅｕＧｌｙ
ＨｉｓＴｒｐＴｙｒＬｙｓＡｓｐＩｌｅＴｈｒ１００１０５
１１０ＰｒｏＡｓｎＴｙｒＡｒｇＰｒｏＬｅｕＰｒｏＳｅｒＳｅｒ
ＧｌｕＣｙｓＰｒｏＰｒｏＧｌｙＡｌａＩｌｅ１１５１２０
１２５ＧｌｙＶａｌＴｈｒＴｙｒＡｓｐＴｈｒＬｅｕＳｅｒＶａｌ
ＨｉｓＡｌａＰｒｏＬｙｓＴｙｒＣｙｓＧｌｎ１３０１３５
１４０ＴｙｒＬｅｕＡｌａＡｒｇＧｌｕＬｅｕＧｌｎＬｙｓＬｅｕ
ＧｌｙＡｌａＴｈｒＰｈｅＧｌｕＡｒｇＡｒｇ１４５１５０
１５５１６０ＴｈｒＶａｌＴｈｒＳｅｒＬｅｕＧｌｕＧｌｎＡｌａＰｈｅ
ＡｓｐＧｌｙＡｌａＡｓｐＬｅｕＶａｌＶａｌ１６５
１７０１７５ＡｓｎＡｌａＴｈｒＧｌｙＬｅｕＧｌｙＡｌａＬｙｓＳｅｒ
ＩｌｅＡｌａＧｌｙＩｌｅＡｓｐＡｓｐＧｌｎ１８０１８５
１９０ＡｌａＡｌａＧｌｕＰｒｏＩｌｅＡｒｇＧｌｙＧｌｎＴｈｒ
ＶａｌＬｅｕＶａｌＬｙｓＳｅｒＰｒｏＣｙｓ１９５２００
２０５ＬｙｓＡｒｇＣｙｓＴｈｒＭｅｔＡｓｐＳｅｒＳｅｒＡｓｐ
ＰｒｏＡｌａＳｅｒＰｒｏＡｌａＴｙｒＩｌｅ２１０２１５
２２０ＩｌｅＰｒｏＡｒｇＰｒｏＧｌｙＧｌｙＧｌｕＶａｌＩｌｅ
ＣｙｓＧｌｙＧｌｙＴｈｒＴｙｒＧｌｙＶａｌ２２５２３０
２３５２４０ＧｌｙＡｓｐＴｒｐＡｓｐＬｅｕＳｅｒＶａｌＡｓｎＰｒｏ
ＧｌｕＴｈｒＶａｌＧｌｎＡｒｇＩｌｅＬｅｕ２４５
２５０２５５ＬｙｓＨｉｓＣｙｓＬｅｕＡｒｇＬｅｕＡｓｐＰｒｏＴｈｒ
ＩｌｅＳｅｒＳｅｒＡｓｐＧｌｙＴｈｒＩｌｅ２６０２６５
２７０ＧｌｕＧｌｙＩｌｅＧｌｕＶａｌＬｅｕＡｒｇＨｉｓＡｓｎ
ＶａｌＧｌｙＬｅｕＡｒｇＰｒｏＡｌａＡｒｇ２７５２８０
２８５ＡｒｇＧｌｙＧｌｙＰｒｏＡｒｇＶａｌＧｌｕＡｌａＧｌｕ
ＡｒｇＩｌｅＶａｌＬｅｕＰｒｏＬｅｕＡｓｐ２９０２９５
３００ＡｒｇＴｈｒＬｙｓＳｅｒＰｒｏＬｅｕＳｅｒＬｅｕＧｌｙ
ＡｒｇＧｌｙＳｅｒＡｌａＡｒｇＡｌａＡｌａ３０５３１０
３１５３２０ＬｙｓＧｌｕＬｙｓＧｌｕＶａｌＴｈｒＬｅｕＶａｌＨｉｓ
ＡｌａＴｙｒＧｌｙＰｈｅＳｅｒＳｅｒＡｌａ３２５
３３０３３５ＧｌｙＴｙｒＧｌｎＧｌｎＳｅｒＴｒｐＧｌｙＡｌａＡｌａ
ＧｌｕＡｓｐＶａｌＡｌａＧｌｎＬｅｕＶａｌ３４０３４５
３５０ＡｓｐＧｌｕＡｌａＰｈｅＧｌｎＡｒｇＴｙｒＨｉｓＧｌｙ
ＡｌａＡｌａＡｒｇＧｌｕＳｅｒＬｙｓＬｅｕ３５５３６０
３６５（５）上記核酸が実質的に以下の配列番号：１または以
下の配列番号：２の塩基配列からなる、前記（１）に記
載の核酸。

【００１１】配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 （６）上記核酸がロドスポリジウムトルロイデス(Rho
dosporidium toruloides) 、ロドスポリジウムディオ
ボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロドスポリ
ジウムスフェロカルパム(Rhodosporidium sphaerocar
pum)、ロドスポリジウムクラトクヴィロヴァエ(Rhodo
sporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウムルシ
タニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポリジウ
ムパルディグネナム(Rhodosporidium paludignenum)
、ロドスポリジウムダクリオイダム(Rhodosporidium
dacryoidum) 、ロドスポリジウムバブジェヴァエ(Rh
odosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウム
フルヴィアレ(Rhodosporidiumfluviale) 由来のＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼをコード化する、前記（１）に記載
の核酸。

【００１２】（７）上記核酸がロドスポリジウムトル
ロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由来のＤ−アミ
ノ酸オキシダーゼをコード化する、前記（６）に記載の
核酸。

【００１３】（８）前記（１）から（７）のいずれかに
記載の核酸を含むベクター。

【００１４】（９）前記（１）から（７）のいずれかに
記載の核酸を含む形質転換宿主細胞。

【００１５】（１０）ロドスポリジウム属(genus Rhodo
sporidium)由来の単離されたＤ−アミノ酸オキシダー
ゼ。

【００１６】（１１）上記Ｄ−アミノ酸オキシダーゼが
以下の配列番号：３のアミノ酸配列からなる、または該
配列番号：３のアミノ酸配列において少なくとも一のア
ミノ酸が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列からなり
かつＤ−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する、前記（１
０）に記載のＤ−アミノ酸オキシダーゼ。

【００１７】 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 （１２）上記Ｄ−アミノ酸オキシダーゼがロドスポリジ
ウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 、ロ
ドスポリジウムディオボヴァタム(Rhodosporidium di
obovatum) 、ロドスポリジウムスフェロカルパム(Rho
dosporidium sphaerocarpum)、ロドスポリジウムクラ
トクヴィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、
ロドスポリジウムルシタニエ(Rhodosporidium lusita
niae) 、ロドスポリジウムパルディグネナム(Rhodosp
oridium paludignenum) 、ロドスポリジウムダクリオ
イダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポリジウ
ムバブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae) 、または
ロドスポリジウムフルヴィアレ(Rhodosporidium fluv
iale) 由来である、前記（１０）に記載のＤ−アミノ酸
オキシダーゼ。

【００１８】（１３）上記Ｄ−アミノ酸オキシダーゼが
ロドスポリジウムトルロイデス(Rhodosporidium toru
loides) 由来である、前記（１２）に記載のＤ−アミノ
酸オキシダーゼ。

【００１９】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。

【００２０】本発明の第一の特徴は、ロドスポリジウム
属(genus Rhodosporidium)由来のＤ−アミノ酸オキシダ
ーゼをコード化する単離された核酸を提供するものであ
る。なお、本明細書中で使用される「ロドスポリジウム
属(genus Rhodosporidium)由来のＤ−アミノ酸オキシダ
ーゼ」ということばは、ロドスポリジウム属(genus Rho
dosporidium)由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼの天然ま
たは人為的に作製された変異体(variant) の双方を含
む。

【００２１】本発明において、核酸は、ＲＮＡ及びｃＤ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡや合成（例えば、化学的に合成され
るまたは修飾される）ＤＮＡ等のＤＮＡの双方を包含
し、１本鎖であってもまたは２本鎖であってもよく、本
発明による核酸が１本鎖である際には、センス鎖または
アンチセンス鎖のいずれであってもよい。また、「単離
された核酸」ということばは、プラスミドまたはウィル
スの配列などの、非天然の配列に隣接する核酸を意味
し、コーディング配列と直に近接する５’−非コーディ
ング（例えば、プロモーター）配列を含まない、該配列
の一部を含むまたは該配列のすべてを含むのいずれかで
あってもよい。このような核酸としては、例えば、自律
複製プラスミド若しくはウィルスなどのベクター中に、
またはロドスポリジウム(Rhodosporidium)以外の原核生
物若しくは真核生物のゲノムＤＮＡ中に導入される、ま
たは他の配列に依存しない別の分子（例えば、ＰＣＲ若
しくは制限酵素処理によって産生されるｃＤＮＡ若しく
はゲノムＤＮＡ断片）として存在する組換ＤＮＡが挙げ
られる。本発明による核酸はまた、ポリペプチド配列を
さらにコード化するハイブリッド遺伝子の一部である組
換ＤＮＡまたはＲＮＡを含むものであってもよい。さら
に、本発明による核酸は、天然には断片として生じずに
自然の状態では見い出せない核酸断片を含むものであっ
てもよい。

【００２２】本発明において、核酸は、以下の配列番
号：１の塩基配列からなる核酸、以下の配列番号２：の
塩基配列からなる核酸、または配列番号：１若しくは配
列番号：２の塩基配列からなる核酸とストリンジェント
な条件下でハイブリダイズしかつＤ−アミノ酸オキシダ
ーゼ活性を有するタンパク質をコードする核酸であるこ
とが好ましい。より好ましくは、本発明による核酸は、
配列番号：１の塩基配列からなる核酸または配列番号
２：の塩基配列からなる核酸である。または、本発明に
よる核酸が実質的に配列番号：１または配列番号：２の
塩基配列からなる核酸である。この際、「実質的に核酸
からなる」という表現は、塩基配列が有意な数で相同性
を有するという意味で使用され、少なくとも４０％、５
０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または
９９％（数が大きいほど好ましい）の塩基配列の相同性
を有する。

【００２３】配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 本発明において、「ストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズする」中の「ストリンジェントな条件」とは、
核酸がストリンジェントであると見なされサムブルック
(Sambrook)ら（モレキュラークローニング(Molecular
Cloning) 、アラボラトリーマニュアル(A Laborator
y Munual) 、サムブルックジェー(Sambrook J.) 、フ
リッシュイーエフ(Fritsch, E.F.) 、及びマニアティ
スティ(Maniatis T.) 、第２版［１９８９年］、コー
ルドスプリングハーバーラボラトリープレス(Col
d Spring Harbor Laboratory Press) ）に記載される低
塩濃度及び高温条件下で溶液中にまたは固体支持体上に
上記配列番号：１または２の塩基配列からなる核酸と安
定な、配列に特異的な、非共有結合を形成するような条
件を意味する。本発明における「ストリンジェントな条
件下でハイブリダイズする」工程の一実施態様を以下に
示す。上記配列番号：１または２の塩基配列からなる核
酸等の参照核酸をニトロセルロースフィルター上に固定
し、他の核酸を６８℃で０．２×ＳＳＣ（１．７５ｇ／
ｌＮａＣｌ、０．８８ｇ／ｌクエン酸ナトリウム（Ｃ
₆Ｈ₅Ｏ₇Ｎａ₃・２Ｈ₂Ｏ）；ｐＨ７．０）及び０．
１（ｗ／ｖ）％のドデシル硫酸ナトリウムの存在下で固
定化された参照核酸に特異的に非共有結合させる。

【００２４】または、本発明による核酸は、以下の配列
番号：３のアミノ酸配列をコード化する、または配列番
号：３のアミノ酸配列において少なくとも一のアミノ酸
が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列をコード化する
ものであることが好ましい。

【００２５】配列番号：３ Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 本発明において、核酸は、ロドスポリジウムトルロイ
デス(Rhodosporidiumtoruloides) 、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロ
ドスポリジウムスフェロカルパム(Rhodosporidium sp
haerocarpum)、ロドスポリジウムクラトクヴィロヴァ
エ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウ
ムルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドス
ポリジウムパルディグネナム(Rhodosporidium paludi
gnenum) 、ロドスポリジウムダクリオイダム(Rhodosp
oridium dacryoidum) 、ロドスポリジウムバブジェヴ
ァエ(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジ
ウムフルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来の
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ、より好ましくはロドスポリ
ジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由
来のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化することが好
ましく、特に、アメリカンタイプカルチャーコレ
クション(American Type Culture Collection)（ＡＴＣ
Ｃ）の受託番号がＡＴＣＣ１０７８８であるロドスポ
リジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloides)
由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化することが
好ましい。

【００２６】本発明の第二の特徴は、上記したいずれか
の態様による核酸を含むベクターである。なお、本明細
書において、「ベクター」ということばは、原核若しく
は真核細胞または原核若しくは真核生物中で発現するこ
とを目的とするなどを目的として調節因子またはリポー
ター遺伝子(reporter gene) を含む核酸分子またはウィ
ルスを意味するものである。

【００２７】本発明の第三の特徴は、上記したいずれか
の態様による核酸を含む形質転換宿主細胞である。な
お、本明細書において、「形質転換（された）宿主細
胞」ということばは、中に（またはその祖先の中に）ロ
ドスポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼをコード化する核酸が分子生物学的
な技術によって導入された宿主細胞を意味するものであ
る。本発明において、核酸は、細胞中に導入された後
は、染色体外に存在していてもまたは宿主ゲノム中に組
み込まれていてもよい。

【００２８】本発明の第四の特徴は、ロドスポリジウム
属(genus Rhodosporidium)由来の単離されたＤ−アミノ
酸オキシダーゼである。この際、「単離されたＤ−アミ
ノ酸オキシダーゼ」とは、自然の環境から精製される(p
urify)または強化される(enrich)Ｄ−アミノ酸オキシダ
ーゼを意味し、例えば、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ発現
ベクターを形質転換された宿主細胞から調製された多Ｄ
−アミノ酸オキシダーゼ抽出物が挙げられる。

【００２９】本発明において、Ｄ−アミノ酸オキシダー
ゼは、上記配列番号：３のアミノ酸配列からなる、また
は該配列番号：３のアミノ酸配列において少なくとも一
のアミノ酸が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列から
なることが好ましい。本発明によると、同類アミノ酸置
換としては、例えば、以下の群から選ばれるいずれかに
よる置換が挙げられる：バリン、イソロイシン及びロイ
シン；アスパラギン酸及びグルタミン酸；アスパラギン
及びグルタミン；セリン及びトレオニン；リシン及びア
ルギニン；およびフェニルアラニン及びチロシン。

【００３０】また、本発明によるＤ−アミノ酸オキシダ
ーゼは、好ましくは、ロドスポリジウムトルロイデス
(Rhodosporidium toruloides) 、ロドスポリジウムデ
ィオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロドス
ポリジウムスフェロカルパム(Rhodosporidium sphaer
ocarpum)、ロドスポリジウムクラトクヴィロヴァエ(R
hodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウム
ルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポリ
ジウムパルディグネナム(Rhodosporidium paludignen
um) 、ロドスポリジウムダクリオイダム(Rhodosporid
ium dacryoidum) 、ロドスポリジウムバブジェヴァエ
(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウム
フルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来、より
好ましくはロドスポリジウムトルロイデス(Rhodospor
idium toruloides) 由来であり、特に好ましくは、アメ
リカンタイプカルチャーコレクション(American
Type Culture Collection)（ＡＴＣＣ）の受託番号がＡ
ＴＣＣ１０７８８であるロドスポリジウムトルロイ
デス(Rhodosporidium toruloides) 由来である。

【００３１】形質転換細胞若しくは形質転換生物中にＤ
−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を産生させるまたは
Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ活性が発現する限りＤ−アミ
ノ酸オキシダーゼの読み枠内の特異的な若しくは非特異
的な突然変異を容易にさせる組換核酸またはウィルスも
また本発明の概念に含まれる。上記組換核酸またはウィ
ルスは、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼのコーディング配列
の上流に強力な構成プロモーターなどの；Ｄ−アミノ酸
オキシダーゼのコーディング配列内に高レベルの発現が
可能であるシス−エレメント(cis-element) を含むイン
トロンなどの；またはＤ−アミノ酸オキシダーゼのコー
ディング配列の下流に効果的なポリアデニル化シグナル
などの；様々な配列をさらに有していてもよい。

【００３２】本発明はまた、上記したような核酸または
ウィルスを含むまたは産生する細胞を、およびこのよう
な細胞から産生されるＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパ
ク質をも包含するものである。

【００３３】他の概念、利点及び修飾もまた本発明の概
念に含まれるものである。例えば、本発明のＤ−アミノ
酸オキシダーゼタンパク質は、以下に制限されるもので
はないが、組換タンパク質、天然のタンパク質、及び合
成タンパク質、さらにはプレタンパク質またはプロタン
パク質等のタンパク質を含むものであってもよい。ま
た、組換Ｄ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質は、近接
した若しくは近接しないアミノ酸が欠失したＤ−アミノ
酸オキシダーゼタンパク質、または周辺腔、小胞体、ミ
トコンドリアまたは細胞外空間などの、細胞の様々な区
画中に輸送できるシグナルペプチドを含むＤ−アミノ酸
オキシダーゼタンパク質を含むものであってもよい。

【００３４】本発明者らは、上記開示および下記のロド
スポリジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloid
es) 由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質やＤ−
アミノ酸オキシダーゼ遺伝子の単離に基づいて、当業者
は、さらに詳細を必要とすることなく、本発明を十分利
用できると考える。

【００３５】

【実施例】以下、本発明の実施例によりさらに具体的に
説明する。しかしながら、以下の実施例はロドスポリジ
ウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由来
のＤ−アミノ酸オキシダーゼの遺伝子やタンパク質の単
離方法を単に説明するものであり、本発明を何等制限す
るものでないことはいうまでもないことである。

【００３６】実施例１本実施例では、ロドスポリジウム属(genus Rhodosporid
ium)からセファロスポリンＣに対して活性を有するＤ−
アミノ酸オキシダーゼタンパク質を単離し、さらにその
特性を明らかにした。

【００３７】また、本実施例では、アメリカンタイプ
カルチャーコレクション(American Type Culture C
ollection)（ＡＴＣＣ）から得た受託番号がＡＴＣＣ
１０７８８であるロドスポリジウムトルロイデス(Rho
dosporidium toruloides) を、Ｄ−アミノ酸オキシダー
ゼタンパク質の単離源として使用した。

【００３８】Ｄ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を、
下記のとおり、単離した。Ｄ−アラニンを、最終濃度を
０．３Ｍで、ロドスポリジウムトルロイデス(R. toru
loides) の無細胞抽出液に添加し、この混合物を７０℃
で４分間加熱した。次に、この加熱した混合物を１３，
０００×ｇで４０分間遠心することにより、沈殿物を除
去し、上清を１．５リットルの緩衝液Ａ（５０ｍＭリ
ン酸カリウム緩衝液、ｐＨ８．０、２ｍＭＥＤＴＡ、
５ｍＭ β−メルカプトエタノール、１ｍＭフェニルメ
タンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、及び２．５ｇ
／ｍｌペプスタチンＡ）で透析した。さらに、このよ
うにして透析したタンパク質溶液を、ＤＥＡＥ−セファ
セル(DEAE-Sephacel) カラム（１５×２．４ｃｍ）にか
け、緩衝液Ａで溶出した。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ活
性を有する画分を集め、アミコンセル(Amicon cell)
（ＹＭ３０）で濃縮した。この濃縮液を、予め１５０
ｍｌの２０％グリセロール添加緩衝液Ｂ（ペプスタチン
Ａを含まない以外は、緩衝液Ａと同様の組成）で平衡化
されたフェニル−セファロースシーエル−４ビー(phe
nyl-Sepharose CL-4B)カラム（１５×２．０ｃｍ）にか
け、結合したＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を４
０％グリセロール添加緩衝液Ｂで溶出した。Ｄ−アミノ
酸オキシダーゼ活性を有する画分を集め、１０％グリセ
ロールを含む緩衝液Ｂ１．５リットルで透析し、透析液
を２ｍｌに濃縮し、予め３０ｍｌの１０％グリセロール
添加緩衝液Ｂで平衡化されたタンパク質高速液体クロマ
トグラフィー（ＦＰＬＣ）モノＱエッチアール５／
５(Mono Q HR 5/5) カラムによるクロマトグラフィーに
かけ、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を空隙容量
で即座に溶出させた。酵素活性を有する画分をプール
し、１ｍｌに濃縮した。続いて、この濃縮液をＦＰＬＣ
ゲル瀘過スーパーローズ１２エッチアール１０／
３０(Superose 12 HR 10/30)カラムにのせ、１０％グリ
セロール及び０．２５ＭＮａＣｌを含む緩衝液Ｂで溶
出させた。活性画分をプールし、−２０℃で保存した。

【００３９】最後のスーパーローズ１２エッチアー
ル(Superose 12 HR)カラムによるクロマトグラフィーに
より、ゲル浸透クロマトグラフィーを行い、タンパク質
サンプルから少量の不純物を効果的に除去した。

【００４０】このようにして精製されたＤ−アミノ酸オ
キシダーゼタンパク質０．８８ｍｇが、約１００ｇ（生
重量）のロドスポリジウムトルロイデス(R. toruloid
es)細胞から得られ、この際の収率は２１％であり、比
活性は６０Ｕ／ｍｇタンパク質であった。（Ｄ−アミノ
酸オキシダーゼの活性単位の定義及びアッセイ条件は、
リー(Lee) ら、バイオテクノルレター(Biotechnol. L
ett.) ［１９９４年］、１６巻、頁４６７〜４７２に記
載されるのと同様であった。）この調製物は、未変性Ｐ
ＡＧＥでは単一のバンドを示した。また、この酵素は、
過ヨウ素酸−シッフ試薬により染色されなかったことか
ら、多糖でないことが示された。

【００４１】未変性酵素の分子量は、ＦＰＬＣスーパー
ローズ１２(Superose 12) カラムによるゲル瀘過で参
照タンパク質による標準曲線と比較した際、７２ｋＤａ
であった。ＳＤＳ／ＰＡＧＥでは、３７ｋＤａの分子量
で単一バンドが示された。これらの結果から、未変性の
形態のロドスポリジウムトルロイデス(R. toruloide
s) のＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質は、同一の
大きさの２つのサブユニットから構成されたことが示唆
される。始めの２２残基のＮＨ₂−末端側のアミノ酸配
列を決定したところ、Met His Ser Gln Lys Arg Val Va
l Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly Leu Ser Ser Ala
Leu Ile （配列番号：１０）であった。

【００４２】また、ロドスポリジウムトルロイデス
(R. toruloides) 由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼタン
パク質の吸収スペクトルは３７０ｎｍ及び４５５ｎｍの
２箇所で最大値を示し、これはフラビン発色団では典型
的であった。フラビンタンパク質の純度を評価するため
にしばしば使用されるパラメーターである、Ｅ２８０／
Ｅ４５５比は、８．１であった。高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）分析から、煮沸タンパク質調製物か
ら放出されるフラビンは標準のフラビンアデニンジヌク
レオチド（ＦＡＤ）の保持時間と同等の保持時間を示す
ことが分かった。ＦＡＤの濃度を測定したところ、６．
３４ｇ／ｍｌであり、これはタンパク質溶液の０．２９
７ｍｇ／ｍｌから得られた。上記結果及びＳＤＳ／ＰＡ
ＧＥ分析結果に基づいて、約１．７３モルＦＡＤ／モル
タンパク質の割合が得られ、これから各サブユニットに
１個のＦＡＤが存在することが示された。

【００４３】次に、このＤ−アミノ酸オキシダーゼの酵
素活性を様々な温度で測定した。この結果、このタンパ
ク質は３５℃で最大活性を発揮した。また、このＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼは、３０〜５０℃の温度範囲で活性
を有して（最大活性の７０％超）おり、６０℃で最大活
性の３０％にまで急激に酵素活性が減少した。さらに、
このＤ−アミノ酸オキシダーゼは３５℃を超える温度で
は不安定であり、４０℃及び４５℃で１０分間インキュ
ベーションした後では、それぞれ、最大活性の２０％及
び１０％しか維持されなかった。

【００４４】さらに、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ活性の
最適ｐＨは９．０であり、７．５〜１０．０のｐＨ範囲
で活性を有していた。また、このＤ−アミノ酸オキシダ
ーゼは、７．０〜８．０のｐＨ範囲で安定であり、８０
％以上の残存活性が検出された。しかしながら、８．５
を超えるｐＨではかなり失活し、１１．０のｐＨでは７
０％が不活性化される。

【００４５】続いて、様々なＤ−アミノ酸基質における
精製Ｄ−アミノ酸オキシダーゼの相対的な活性を調べ
た。精製酵素は試験されたすべてのＤ−アミノ酸で活性
を有していた。最も良い基質は、Ｄ−トリプトファンで
あり、次がＤ−メチオニン、Ｄ−フェニルアラニン、Ｄ
−アラニン、及びＤ−ロイシンであった。また、Ｄ−ト
レオニン、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−アスパラギン酸、及
びＤ−リシンでは、上記に比べると低い活性（最大の２
０％未満）を発揮し、Ｌ−アラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ
−フェニルアラニン、及びＬ−メチオニン等のＬ−アミ
ノ酸では活性が検出されなかった。Ｄ−トリプトファ
ン、Ｄ−メチオニン、Ｄ−アラニン、及びＤ−セリンの
見かけのＫm は、それぞれ、０．１８ｍＭ、０．２２ｍ
Ｍ、０．６８ｍＭ、及び３．４ｍＭであった。また、こ
のＤ−アミノ酸オキシダーゼは、ｐ−アミノ安息香酸、
安息香酸、及びニコチン酸の存在下では、それぞれ、７
２％、４９％及び２１％阻害された。これにより、これ
らの芳香族酸はすべてロドスポリジウムトルロイデス
(R. toruloides) のＤ−アミノ酸オキシダーゼの拮抗阻
害剤であることが決定された。これらの試験された芳香
族酸のうち、ｐ−アミノ安息香酸が最も低いＫ_i（０．
３ｍＭ）を示した。

【００４６】以下の配列番号：３のアミノ酸配列を有す
る、精製Ｄ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を用い
て、ＣｅｐｈＣを変換した。その結果、上記酵素は、
Ｄ−アラニンに対して活性を有するものと比較すると、
ＣｅｐｈＣで９５％の活性を有していた。また、Ｃｅ
ｐｈＣに関する酵素の見かけのＫ_mは０．６５ｍＭで
ある。収率は９１％であり、さらにインキュベーション
しても収率は上昇しなかった。さらに、外因性のＨ₂Ｏ
₂が反応に必要であった。

【００４７】配列番号：３ Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 実施例２本実施例では、ロドスポリジウムトルロイデス(R. to
ruloides) 由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子の単
離及び発現を行った。

【００４８】実施例１において、最後の２種のカラムク
ロマトグラフィー、モノＱエッチアール５／５(Mon
o Q HR 5/5) 及びスーパーローズ１０エッチアール
(Superose 10 HR)、の代わりにドデシル硫酸ナトリウム
（ＳＤＳ）／ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧ
Ｅ）を使用する以外は実施例１と同様にして、ロドスポ
リジウムトルロイデス(R. toruloides) 由来のＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼタンパク質を精製した。約３００ピ
コモルのＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質がＳＤＳ
／ＰＡＧＥゲルから精製され、ペプチド配列をプロテイ
ンアンドヌクレイックアシッドファシリティー
(Protein and Nucleic Acid Facility)、スタンフォー
ドユニヴァーシティ(Stanford University) 、アメリ
カ合衆国によって決定した。この結果、３種の内部ペプ
チド配列（ＹＣＱＹＬＡＲＥＬＱ［配列番号：１１］、
ＩＡＧＧＩＤＤＱＡＡＥＰＩＲ［配列番号：１２］、及
びＲＣＴＭＤＳＳＤＰ［配列番号：１３］）が決定され
た。ロドスポリジウムトルロイデス(R. toruloides)
由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子を単離するため
に、４種の十分変性されたオリゴヌクレオチドプライマ
ーを上記ペプチド配列を基礎として合成された。これら
のプライマーは、プライマー１（５’−ＡＡＲＴＡＹＴ
ＧＹＣＡＲＴＡＹＣ−３’）［配列番号：６］、プライ
マー２（５’−ＡＴＮＧＡＹＧＡＹＣＡＹＧＣＮＧＣ−
３’）［配列番号：７］、プライマー３（５’−ＧＣＮ
ＧＣＹＴＧＲＴＣＲＴＣＮＡＴ−３’）［配列番号：
８］、およびプライマー４（５’−ＡＴＧＧＡＹＡＧＹ
ＡＧＹＧＡＹＣＣ−３’）［配列番号：９］であり、こ
の際、ＮはＧ、Ａ、ＴまたはＣを表し；ＹはＴまたはＣ
を表し；およびＲはＡまたはＧを表す。

【００４９】鋳型としてのロドスポリジウムトルロイ
デス(R. toruloides) の染色体ＤＮＡによるポリメラー
ゼ連鎖反応（ＰＣＲ）では、プライマー１を単独で使用
した際には何等産物は得られなかった。プライマー２、
３、または４のみを含むＰＣＲで合成される非特異的な
産物は数個存在した。プライマー２及び４によるＰＣＲ
でもまた、数個の非特異的な産物が生じた。プライマー
１及び３を用いた具体的な結果としては、非特異的な産
物に加えて、約２１０ｂｐ長の特異的なＰＣＲ産物があ
った。この断片を鋳型として使用した際には、ＰＣＲに
おいてプライマー１及び３によって再増幅される。

【００５０】上記断片のヌクレオチド配列を決定した。
この断片は下記２１４ヌクレオチドから構成された： 5'-AAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAGCTGCAGAAGCTCGGCGCGAC
GTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGAGCAGGCGTTCGACGGTGCGG
ATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGgtatgtcccgaactgcccctctc
tacctgcaattttgctgattgatatgctcgcagGCGCCAAGTCGATTGCG
GGCATCGACGACCAAGC-3'（配列番号：１５）（小文字は、下記ｃＤＮＡに基づいた、イントロン配列
を表す。）上記２１４ｂｐの断片によってコード化される推定アミ
ノ酸配列の一部である、ＹＣＱＹＬＡＲＥＬＱ（配列番
号：１１）及びＩＡＧＩＤＤＱＡ（配列番号：１４）
は、決定されたＤ−アミノ酸オキシダーゼのアミノ酸配
列の一部と一致する。この結果から、この２１４ｂｐの
ＤＮＡ断片はロドスポリジウムトルロイデス(R. toru
loides) のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する遺
伝子の一部であることが示された。次に、この断片をＤ
−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子を単離するためのプロー
ブとして使用した。

【００５１】ジゴキシゲニンで標識された上記２１４ｂ
ｐのＤＮＡ断片とのサザンブロットハイブリダイゼーシ
ョンにより、約３．３ｋｂのハイブリッド形成断片が同
定された。３．０〜３．５ｋｂの範囲の大きさのＨｉｎ
ｄＩＩＩで消化されたゲノムＤＮＡ断片をｐＢｌｕｅｓ
ｃｒｉｐｔＳＫ＋中に挿入することによって、ミニゲ
ノムＤＮＡ(mini-genomic DNA)ライブラリーを構築し
た。このライブラリーを同様のプローブでスクリーニン
グした。オートラジオグラムでのシグナルに２種の強度
レベルを有する１５個の陽性クローンが約２００個の細
菌コロニーをスクリーニングすることにより得られた。
各タイプから３個のクローンを任意に選び、これらのク
ローンについて挿入物の制限酵素によるプロフィールを
分析した。結果から、これらのクローンは、シグナルに
２強度レベルを生じる、２種の異なるＤＮＡ挿入物を含
むことが示された。シグナルのより高い強度および２１
４ｂｐのプローブによる挿入物のハイブリッド形成プロ
フィールに基づいてさらに研究するために、一方のタイ
プのクローンを選択した。これらのクローンは、Ｄ−ア
ミノ酸オキシダーゼ遺伝子配列を含むゲノムＤＮＡ断片
を含むことが分かった。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ遺伝
子のコード領域のゲノムＤＮＡ配列は下記に示されると
おりであった： 5'-ATGCACTCTCAGAAGCGCGTCGTTGTCCTCGGATCAGGCGgtgcgtc
ttttccctctcctccccacacccgacagtcctcgacgaggtgtaggacgg
cgagcaaagctgccgagggcgatctgggctgactgagcgctcgagtgtac
agTTATCGGTCTGAGCAGCGCCCTCATCCTCGCTCGGAAGGGCTACAGCG
TGCATATTCTCGCGCGCGACTTGCCGGAGGACGTCTCGAGCCAGACTTTC
GCTTCACCATGGGCTgtgcgtcgtctcactgtagttggaggatgtcagcg
agagctgatcaatctcgtcatccccgcagGGCGCGAATTGGACGCCTTTC
ATGACGCTTACAGACGGTCCTCGACAAGCAAAATGGGAAGAATCGACTTT
gtgcgtctccttctacctcattcttggcctcgagctgacgagtgtatgat
acacagCAAGAAGTGGGTCGAGTTGGTCCCGACGGGCCATGCCATGTGGC
TCAAGGGGACGAGGCGGTTCGCGCAGAACGAAGACGGCTTGCTCGGGCAC
TGGTACAAGGACATCACGCCAAATgtgcgcccacattcactcttcccttc
gcatgtctccgtttactgacccgccctctttcgccgtgcgcagTACCGCC
CCCTCCCATCTTCCGAATGTCCACCTGGCGCTATCGGCGTAACCTACGAC
ACCCTCTCCGTCCACGCACCAAAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAGCT
GCAGAAGCTCGGCGCGACGTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGAGC
AGGCGTTCGACGGTGCGGATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGgtatg
tcccgaactgcccctctctacctgcaattttgctgattgatatgctcgca
gGCGCCAAGTCGATTGCGGGCATCGACGACCAAGCCGCCGAGCCAATCCG
CGGCCAAACCGTCCTCGTCAAGTCCCCATGCAAGCGATGCACGATGGACT
CGTCCGACCCCGCTTCTCCCGCCTACATCATTCCCCGACCAGGTGGCGAA
GTCATCTGCGGCGGGACGTACGGCGTGGGAGACTGGGACTTGTCTGTCAA
CCCAGAGACGGTCCAGCGGATCCTCAAGCACTGCTTGCGCCTCGACCCGA
CCATCTCGAGCGACGGAACGATCGAAGGCATCGAGGTCCTCCGCCACAAC
GTCGGCTTGCGACCTGCACGACGAGGCGGACCCCGCGTCGAGGCAGAACG
GATCGTCCTGCCTCTCGACCGGACAAAGTCGCCCCTCTCGCTCGGCAGGG
GCAGCGCACGAGCCGCGAAGGAGAAGGAGGTCACGCTTGTGCATGCGTAT
GGCTTCTCGAGTGCGGGATACCAGCAGAGTTGGGGCGCGGCGGAGGATGT
CGCGCAGCTCGTCGACGAGGCGTTCCAGCGGTACCACGGCGCGGCGCGGG
AGTCGAAGTTG-3'（配列番号：１）（小文字は、下記ｃＤＮＡに基づいた、イントロン配列
を表す。）ｃＤＮＡ末端の５’及び３’側のラピッド増幅(rapid a
mplification) （ＲＡＣＥ）を行い、Ｄ−アミノ酸オキ
シダーゼ遺伝子のｃＤＮＡ末端を単離した。ＲＡＣＥ
は、製造社のプロトコルに従ってＲＡＣＥキット（ギブ
コビーアールエル(Gibco BRL) 製）を用いて行った。
約５５０ｂｐ及び７２０ｂｐのＤＮＡ断片を、それぞ
れ、５’ＲＡＣＥおよび３’ＲＡＣＥで増幅した。これ
らの断片をヌクレオチド配列決定用のｐＧＥＭ−Ｔベク
ター中にクローニングした。この結果から、これら２個
のｃＤＮＡ断片は１２４ｂｐの重複領域を有することが
示された。これら２断片のヌクレオチド配列を組み合わ
せることにとより、上記３種の内部ペプチドと全く同一
である領域を含むアミノ酸配列をコード化すると考えら
れるオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が得られ
た。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼのｃＤＮＡのコーディン
グ領域を以下に示す： 5'-ATGCACTCTCAGAAGCGCGTCGTTGTCCTCGGATCAGGCGTTATCGG
TCTGAGCAGCGCCCTCATCCTCGCTCGGAAGGGCTACAGCGTGCATATTC
TCGCGCGCGACTTGCCGGAGGACGTCTCGAGCCAGACTTTCGCTTCACCA
TGGGCTGGCGCGAATTGGACGCCTTTCATGACGCTTACAGACGGTCCTCG
ACAAGCAAAATGGGAAGAATCGACTTTCAAGAAGTGGGTCGAGTTGGTCC
CGACGGGCCATGCCATGTGGCTCAAGGGGACGAGGCGGTTCGCGCAGAAC
GAAGACGGCTTGCTCGGGCACTGGTACAAGGACATCACGCCAAATTACCG
CCCCCTCCCATCTTCCGAATGTCCACCTGGCGCTATCGGCGTAACCTACG
ACACCCTCTCCGTCCACGCACCAAAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAG
CTGCAGAAGCTCGGCGCGACGTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGA
GCAGGCGTTCGACGGTGCGGATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGGCG
CCAAGTCGATTGCGGGCATCGACGACCAAGCCGCCGAGCCAATCCGCGGC
CAAACCGTCCTCGTCAAGTCCCCATGCAAGCGATGCACGATGGACTCGTC
CGACCCCGCTTCTCCCGCCTACATCATTCCCCGACCAGGTGGCGAAGTCA
TCTGCGGCGGGACGTACGGCGTGGGAGACTGGGACTTGTCTGTCAACCCA
GAGACGGTCCAGCGGATCCTCAAGCACTGCTTGCGCCTCGACCCGACCAT
CTCGAGCGACGGAACGATCGAAGGCATCGAGGTCCTCCGCCACAACGTCG
GCTTGCGACCTGCACGACGAGGCGGACCCCGCGTCGAGGCAGAACGGATC
GTCCTGCCTCTCGACCGGACAAAGTCGCCCCTCTCGCTCGGCAGGGGCAG
CGCACGAGCCGCGAAGGAGAAGGAGGTCACGCTTGTGCATGCGTATGGCT
TCTCGAGTGCGGGATACCAGCAGAGTTGGGGCGCGGCGGAGGATGTCGCG
CAGCTCGTCGACGAGGCGTTCCAGCGGTACCACGGCGCGGCGCGGGAGTC
GAAGTTG-3'（配列番号：２）このＯＲＦは、１１０４ヌクレオチド長であり、４０，
０７９Ｄａの分子量を有する３６８アミノ酸のタンパク
質をコード化する。このタンパク質の、Ｎ−末端からＣ
−末端の方向の、配列を下記に示す：

【００５２】

【表１】

【００５３】このｃＤＮＡ及びゲノムＤＮＡのヌクレオ
チド配列の比較から、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子
は６個のエクソン及び５個のイントロンを含むことが示
される（上記配列番号：１を参照）。このＤ−アミノ酸
オキシダーゼ遺伝子のイントロンの大きさは、５６ｂｐ
から１０９ｂｐと、比較的小さい。５個のイントロンす
べての両末端はエクソン−イントロン連結部の共通配列
である「ＧＴ…ＡＧ」を有していた。

【００５４】出発コドンのすぐ５’側であってＤ−アミ
ノ酸オキシダーゼ遺伝子の推定の翻訳開始部位の付近の
ヌクレオチド配列は、共通配列「ＣＣＡＣＣＡＴＧＧ
Ｃ」（配列番号：１６）（コザック(Kozak) 、ヌクレイ
ックアシッズレサーチ(Nuc. Acids Res.) ［１９８
４年］、１２巻、頁８５７〜８７２）と一致し、−３番
目の位置のヌクレオチド（この際、出発コドンのＡ残基
を＋１と称する）は、常に、ＧまたはＡである。出発コ
ドンの５’側の配列を下記に示す： 5'-AAGCTTCGGCACGAGCATGAGTGTGAATGATGGTCCAAGGAGGACAG
CGCAGAGTCAACAGGAGGGCACATGGAGGCAGAGCGTGGGGCGGAGGAGG
CAGATGGGGAGTCGCGCTGGGGGACGAGGGGGTGTCGCTCGACTAACAGC
TCTCTATCGCTCTTGCTGCTGCTTGTACTACTCGAACGACGCC-3'（配
列番号：４）真菌の遺伝子と同様、見かけ上のＴＡＴＡボックスは、
ロドスポリジウムトルロイデス(R. toruloides) のＤ
−アミノ酸オキシダーゼの５’−フランキング領域中に
は見つからない。

【００５５】ＯＲＦのすぐ３’側の配列には、ポリアデ
ニル化シグナルの共通配列は存在しないが、ｐｏｌｙ
（Ａ）付加部位から１１〜１８残基上流に位置する配列
「ＴＧＴＡＴＴＧＣ」（配列番号：１８）は、哺乳動物
のｍＲＮＡの正確な３’−末端の形成に関わりのあるこ
とが知られている配列「ＹＧＴＧＴＴＹＹ」（配列番
号：１７）（Ｙはピリミジンを表す）に類似する。ＯＲ
Ｆの３’側の配列を下記に示す： 5'-GGCGGGATTTGTGGCTGTATTGCGGGCATCTACAAGACCAGCTTCAT
CTCGGACGACAACACGAGAGCGGCGAGTCTTCGTACCGTCTGACCTTCGC
AATCCGCCGAGTCCTTGCCCGTTGCCCTGCTTGCTCCTTTCGTATCTCCT
GTGACTCGGAACGTCGCTCTTCGCCTCTGTCACTTGCCAGGCCGTCCCTT
CAAACTGTCGCCGCCCTCCTCCTCCCAATCTCCTCCTCACGCGACTTGCC
ACTACTCTCACTTCTCCTGCTTACCAAGGCTTACACTACGCAACACTAAG
CGCGGCATCAGGTTCCGTTGCGCGCCTCGTCACGACCCGACTTTTTTTCG
CCCGTTCGCTCGCCTCGCTCCGTTGCCGAGCGAAGAACTTCGCCTGCCTT
CGAATCTCTCGCCTTGCTCGTCTCGTCCTGCTCCGTTCCACCACAGATAG
ACTCACAGCAACACACTCACAATGGTCAAGGTGCGCACCCACTCCCGCCA
GTCCAACTCGCGCGACGAGAGACCACCGTCTCGTTGACATCACTGACCTC
GTCGCTCGCCACCCACCCTCCCGCTCGTCCATGCACACAGGCAGCACCAC
GATCAGACGAGCAGCAGCACTACCACGCCACAGTCATGGGCGGACTCAAG
GGCGGCGCGATGGGGTTGGCGGCGGGTGGAGCGGGTGCGGTTGCGCTGCA
GAGGGCGAACGTACAGGCGTTCACGAGGTTGACGCTGCCTCTCAAGGCGT
TTGCTGTCACGTACGTCCCGCGATCCCTTACTATGCGACTCCCTCGGTGA
ATTC-3' （配列番号：５）ロドスポリジウムトルロイデス(R. toruloides) のＤ
−アミノ酸オキシダーゼに関するｃＤＮＡを有する、発
現プラスミドｐＤＡＯ−２３を、ｐＥＴ２３ａベクター
を用い、これを大腸菌ＢＬ２１［ＤＥ３］中に導入する
ことによって、構築した。イソプロピル−１−チオ−β
−Ｄ−ガラクトシド（ＩＰＴＧ）により誘導される形質
転換体は細胞ライゼート中にＤ−アミノ酸オキシダーゼ
活性を発現することから、活性Ｄ−アミノ酸オキシダー
ゼが大腸菌内で発現したことが示された。細胞ライゼー
トのＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析により、Ｄ−アミノ酸オキシ
ダーゼのサブユニットの推定される大きさである、明瞭
な３７ｋＤａのタンパク質のバンドが現れたが、これは
ｐＥＴ２３ａが形質転換された宿主から同様にして調製
されたライゼートには存在しなかった。このタンパク質
は、ＩＰＴＧによる誘導から３０分以内で十分誘導され
た。Ｄ−アミノ酸オキシダーゼを、Ｎｉ−カラムクロマ
トグラフィーを用いてほとんど均質になるまで精製し
た。約４ｍｇのタンパク質が２５０ｍｌの大腸菌培養物
から一段階で得られた。この精製タンパク質の比活性は
１，２１１Ｕ／ｍｇであり、これは未精製抽出物の７倍
高く、精製したロドスポリジウムトルロイデス(R. to
ruloides) のＤ−アミノ酸オキシダーゼタンパク質の２
０倍高い値であった。また、この活性は、ＦＡＤの存在
下で透析することによって調製された酵素の値と同等で
あることから、この組換Ｄ−アミノ酸オキシダーゼは補
欠分子族としてＦＡＤを含むことが示される。

【００５６】Ｄ−アミノ酸オキシダーゼを発現する大腸
菌株である、ｐＤＡＯ−２３形質転換ＤＨ５α株をまた
調製し、これをアメリカンタイプカルチャーコレ
クション(American Type Culture Collection)（ＡＴＣ
Ｃ）に受託番号９８４８５で寄託した。

【００５７】

【発明の効果】上述したように、本発明は、新規なロド
スポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のＤ−アミ
ノ酸オキシダーゼをコード化する核酸、該核酸を含むベ
クター及び形質転換細胞、およびロドスポリジウム属(g
enus Rhodosporidium)由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼ
を提供するものである。したがって、本発明により、ロ
ドスポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のＤ−ア
ミノ酸オキシダーゼ遺伝子が単離され、その特性が明ら
かになり、これにより基質の変換に関するミカエリス定
数（Ｋ_m）が減少するまたはタンパク質の安定性がより
向上するなどの望ましい特性を有するＤ−アミノ酸オキ
シダーゼの様々な変異体の産生が可能になる。

【００５８】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１４５８配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列 ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２配列の長さ：１１０４配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡ配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：1...1104 配列 ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 配列番号：３配列の長さ：３６８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質フラグメント型：中間部フラグメント配列 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 配列番号：４配列の長さ：１９０配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列 AAGCTTCGGC ACGAGCATGA GTGTGAATGA TGGTCCAAGG AGGACAGCGC AGAGTCAACA 60 GGAGGGCACA TGGAGGCAGA GCGTGGGGCG GAGGAGGCAG ATGGGGAGTC GCGCTGGGGG 120 ACGAGGGGGT GTCGCTCGAC TAACAGCTCT CTATCGCTCT TGCTGCTGCT TGTACTACTC 180 GAACGACGCC 190 配列番号：５配列の長さ：８０１配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列 GGCGGGATTT GTGGCTGTAT TGCGGGCATC TACAAGACCA GCTTCATCTC GGACGACAAC 60 ACGAGAGCGG CGAGTCTTCG TACCGTCTGA CCTTCGCAAT CCGCCGAGTC CTTGCCCGTT 120 GCCCTGCTTG CTCCTTTCGT ATCTCCTGTG ACTCGGAACG TCGCTCTTCG CCTCTGTCAC 180 TTGCCAGGCC GTCCCTTCAA ACTGTCGCCG CCCTCCTCCT CCCAATCTCC TCCTCACGCG 240 ACTTGCCACT ACTCTCACTT CTCCTGCTTA CCAAGGCTTA CACTACGCAA CACTAAGCGC 300 GGCATCAGGT TCCGTTGCGC GCCTCGTCAC GACCCGACTT TTTTTCGCCC GTTCGCTCGC 360 CTCGCTCCGT TGCCGAGCGA AGAACTTCGC CTGCCTTCGA ATCTCTCGCC TTGCTCGTCT 420 CGTCCTGCTC CGTTCCACCA CAGATAGACT CACAGCAACA CACTCACAAT GGTCAAGGTG 480 CGCACCCACT CCCGCCAGTC CAACTCGCGC GACGAGAGAC CACCGTCTCG TTGACATCAC 540 TGACCTCGTC GCTCGCCACC CACCCTCCCG CTCGTCCATG CACACAGGCA GCACCACGAT 600 CAGACGAGCA GCAGCACTAC CACGCCACAG TCATGGGCGG ACTCAAGGGC GGCGCGATGG 660 GGTTGGCGGC GGGTGGAGCG GGTGCGGTTG CGCTGCAGAG GGCGAACGTA CAGGCGTTCA 720 CGAGGTTGAC GCTGCCTCTC AAGGCGTTTG CTGTCACGTA CGTCCCGCGA TCCCTTACTA 780 TGCGACTCCC TCGGTGAATT C 801 配列番号：６配列の長さ：１６配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸 degenerate oligonucleotide 配列 AARTAYTGYC ARTAYC 16 配列番号：７配列の長さ：１７配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸 degenerate oligonucleotide 配列 ATNGAYGAYC AYGCNGC 17 配列番号：８配列の長さ：１７配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸 degenerate oligonucleotide 配列 GCNGCYTGRT CRTCNAT 17 配列番号：９配列の長さ：１７配列の型：核酸鎖の数：１本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅｏｌ
ｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ配列ＡＴＧＧＡＹＡＧＹＡＧＹＧＡＹＣＣ
１７配列番号：１０配列の長さ：２２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile 20 配列番号：１１配列の長さ：１０配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列番号：１２配列の長さ：１４配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Ile Ala Gly Gly Ile Asp Asp Gln Ala Ala Glu Pro Ile Arg 1 5 10 配列番号：１３配列の長さ：９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列番号：１４配列の長さ：８配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列番号：１５配列の長さ：２１４配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮ
Ａ配列 AAGTACTGCC AGTACCTTGC AAGAGAGCTG CAGAAGCTCG GCGCGACGTT TGAGAGACGG 60 ACCGTTACGT CGCTTGAGCA GGCGTTCGAC GGTGCGGATT TGGTGGTCAA CGCTACGGGA 120 CTTGGTATGT CCCGAACTGC CCCTCTCTAC CTGCAATTTT GCTGATTGAT ATGCTCGCAG 180 GCGCCAAGTC GATTGCGGGC ATCGACGACC AAGC 214 配列番号：１６配列の長さ：１０配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸 Kozak sequence 配列 CCACCATGGC 10 配列番号：１７配列の長さ：８配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸共通(consensus) 配列 YGTGTTYY 8 配列番号：１８配列の長さ：８配列の型：核酸鎖の数：２本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ＧｅｎｏｍｉｃＤＮＡ配列ＴＧＴＡＴＴＧＣ
８

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/06 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者グオ−ウェンリアオ台湾シンチュー 30099 フードインダストリーリサーチアンドデベロップメントインスティテュート内 (72)発明者イー−ヤンリー台湾シンチュー 30099 フードインダストリーリサーチアンドデベロップメントインスティテュート内 (72)発明者ユン−ウェイリー台湾カオシュンカイ−シエンサードロードレイン 505 ナンバー10 (72)発明者リー−リンチェン台湾シンチュー 30099 フードインダストリーリサーチアンドデベロップメントインスティテュート内 (72)発明者ウェン−シェンチュー台湾シンチュー 30099 フードインダストリーリサーチアンドデベロップメントインスティテュート内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ロドスポリジウム属(genus Rhodosporid
ium)由来のＤ−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単
離された核酸。
【請求項２】該核酸が以下の配列番号：１の塩基配列
からなる核酸、以下の配列番号２：の塩基配列からなる
核酸、または配列番号：１若しくは配列番号：２の塩基
配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズしかつＤ−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する
タンパク質をコードする核酸である、請求項１に記載の
核酸。配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365
【請求項３】該核酸が以下の配列番号：１の塩基配列
からなる核酸または以下の配列番号２：の塩基配列から
なる核酸である、請求項２に記載の核酸。配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365
【請求項４】該核酸が以下の配列番号：３のアミノ酸
配列をコード化する、請求項１に記載の核酸。配列番号：３ Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365
【請求項５】該核酸が実質的に以下の配列番号：１ま
たは以下の配列番号：２の塩基配列からなる、請求項１
に記載の核酸。配列番号：１ ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号：２ ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365
【請求項６】該核酸がロドスポリジウムトルロイデ
ス(Rhodosporidiumtoruloides) 、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロド
スポリジウムスフェロカルパム(Rhodosporidium spha
erocarpum)、ロドスポリジウムクラトクヴィロヴァエ
(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウム
ルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポ
リジウムパルディグネナム(Rhodosporidium paludign
enum) 、ロドスポリジウムダクリオイダム(Rhodospor
idium dacryoidum) 、ロドスポリジウムバブジェヴァ
エ(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウ
ムフルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来のＤ
−アミノ酸オキシダーゼをコード化する、請求項１に記
載の核酸。
【請求項７】該核酸がロドスポリジウムトルロイデ
ス(Rhodosporidiumtoruloides) 由来のＤ−アミノ酸オ
キシダーゼをコード化する、請求項６に記載の核酸。
【請求項８】請求項１から７のいずれかに記載の核酸
を含むベクター。
【請求項９】請求項１から７のいずれかに記載の核酸
を含む形質転換宿主細胞。
【請求項１０】ロドスポリジウム属(genus Rhodospor
idium)由来の単離されたＤ−アミノ酸オキシダーゼ。
【請求項１１】該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼが以下の
配列番号：３のアミノ酸配列からなる、または該配列番
号：３のアミノ酸配列において少なくとも一のアミノ酸
が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列からなりかつＤ
−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する、請求項１０に記
載のＤ−アミノ酸オキシダーゼ。配列番号：３ Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365
【請求項１２】該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼがロドス
ポリジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 、ロドスポリジウムディオボヴァタム(Rhodospori
dium diobovatum) 、ロドスポリジウムスフェロカル
パム(Rhodosporidium sphaerocarpum)、ロドスポリジウ
ムクラトクヴィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvil
ovae) 、ロドスポリジウムルシタニエ(Rhodosporidiu
m lusitaniae) 、ロドスポリジウムパルディグネナム
(Rhodosporidium paludignenum)、ロドスポリジウム
ダクリオイダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドス
ポリジウムバブジェヴァエ(Rhodosporidium babjeva
e) 、またはロドスポリジウムフルヴィアレ(Rhodospo
ridium fluviale) 由来である、請求項１０に記載のＤ
−アミノ酸オキシダーゼ。
【請求項１３】該Ｄ−アミノ酸オキシダーゼがロドス
ポリジウムトルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 由来である、請求項１２に記載のＤ−アミノ酸オキ
シダーゼ。