JPH1156362A - ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼ - Google Patents
ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼInfo
- Publication number
- JPH1156362A JPH1156362A JP9220474A JP22047497A JPH1156362A JP H1156362 A JPH1156362 A JP H1156362A JP 9220474 A JP9220474 A JP 9220474A JP 22047497 A JP22047497 A JP 22047497A JP H1156362 A JPH1156362 A JP H1156362A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ala
- gly
- leu
- val
- ser
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
- C12N9/0014—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4)
- C12N9/0022—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with oxygen as acceptor (1.4.3)
- C12N9/0024—D-Amino acid oxidase (1.4.3.3)
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
ミノ酸オキシダーゼ、該D−アミノ酸オキシダーゼをコ
ード化する単離された核酸、およびその核酸を含むベク
ター及び形質転換された宿主細胞を提供する。 【解決手段】 ロドスポリジウム属(genus Rhodosporid
ium)由来のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単
離された核酸。
Description
ロドスポリジウム属由来のD−アミノ酸オキシダーゼ、
該D−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離された
核酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換され
た宿主細胞に関するものである。さらに詳しくは、本発
明は、ロドスポリジウム属、例えば、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロ
ドスポリジウム スフェロカルパム(Rhodosporidium sp
haerocarpum)、ロドスポリジウム クラトクヴィロヴァ
エ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウ
ム トルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 、ロド
スポリジウム ルシタニエ(Rhodosporidium lusitania
e) 、ロドスポリジウム パルディグネナム(Rhodospori
dium paludignenum) 、ロドスポリジウム ダクリオイ
ダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポリジウム
バブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae) 及びロド
スポリジウム フルヴィアレ(Rhodosporidium fluvial
e) 、由来の単離されたD−アミノ酸オキシダーゼ、該
D−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離された核
酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換された
宿主細胞に関するものである。
は、セファロスポリンC(Ceph C)をα−ケトア
ジピルセファロスポラン酸 (α-ketoadipyl cephalospo
ranic acid) (α−ケトアジピル 7−ACA)、過酸
化水素及びアンモニアに変換できることが知られている
フラビンタンパク質である。α−ケトアジピル 7−A
CAは、過酸化水素と反応すると、さらにグルタリル−
7−アミノセファロスポラン酸(glutaryl-7-aminocepha
losporanic acid)(GL−7−ACA)に変換されう
る。GL−7−ACAはセフェム系抗生物質の製造に関
する出発材料であるため、D−アミノ酸オキシダーゼは
非常に工業上有益である。
ック バイオル ケム(Agric. Biol. Chem.)、[197
4年]、38巻、頁1529〜1536)に加えて、D
−アミノ酸オキシダーゼは、アミノ酸のラセミ混合物の
分割(ツ(Tu)ら、セパレーション サイエンス(Separat
ion Sci.) 、[1972年]、7巻、頁403〜40
8)およびアミノ酸の分析決定(ギルバルト(Guilbaul
t) ら、アナル キム アクラ(Anal. Chim. Acta.) 、
[1971年]、56巻、頁285〜290)に使用さ
れてきた。D−アミノ酸オキシダーゼは様々な微生物、
昆虫及び動物において見い出されたが、ロドスポリジウ
ム属由来のD−アミノ酸オキシダーゼは未だ知られてい
なかった。
な単離されたロドスポリジウム属由来のD−アミノ酸オ
キシダーゼ、該D−アミノ酸オキシダーゼをコード化す
る単離された核酸、およびその核酸を含むベクター及び
形質転換された宿主細胞を提供するものである。本発明
の他の目的は、ロドスポリジウム属、例えば、ロドスポ
リジウム ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovat
um) 、ロドスポリジウム スフェロカルパム(Rhodospor
idium sphaerocarpum)、ロドスポリジウム クラトクヴ
ィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドス
ポリジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 、ロドスポリジウム ルシタニエ(Rhodosporidium l
usitaniae) 、ロドスポリジウム パルディグネナム(Rh
odosporidium paludignenum) 、ロドスポリジウム ダ
クリオイダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポ
リジウム バブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae)
及びロドスポリジウムフルヴィアレ(Rhodosporidium fl
uviale) 、由来の単離されたD−アミノ酸オキシダー
ゼ、該D−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単離さ
れた核酸、およびその核酸を含むベクター及び形質転換
された宿主細胞を提供するものである。
(1)〜(13)のいずれかによって達成される。
oridium)由来のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化す
る単離された核酸。
基配列からなる核酸、以下の配列番号2:の塩基配列か
らなる核酸、または配列番号:1若しくは配列番号:2
の塩基配列からなる核酸とストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズしかつD−アミノ酸オキシダーゼ活性を
有するタンパク質をコードする核酸である、前記(1)
に記載の核酸。
る核酸または以下の配列番号2:の塩基配列からなる核
酸である、前記(2)に記載の核酸。
CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val
Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5
10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG
AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg
Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25
30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC
TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val
Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40
45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT
TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro
Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55
60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG
ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser
Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70
75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG
CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp
Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85
90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG
CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly
His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105
110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC
GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser
Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120
125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC
CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val
His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135
140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC
GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu
Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150
155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC
GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe
Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165
170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG
ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser
Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185
190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC
GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr
Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200
205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC
CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp
Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215
220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC
TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile
Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230
235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA
GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro
Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245
250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC
ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr
Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265
270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC
GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn
Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280
285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA
CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu
Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295
300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC
AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly
Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310
315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT
GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His
Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325
330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG
GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala
Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345
350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC
GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly
Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360
365 (4)上記核酸が以下の配列番号:3のアミノ酸配列を
コード化する、前記(1)に記載の核酸。
Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5
10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg
Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25
30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val
Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40
45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro
Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55
60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser
Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70
75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp
Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85
90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly
His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105
110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser
Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120
125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val
His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135
140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu
Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150
155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe
Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165
170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser
Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185
190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr
Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200
205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp
Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215
220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile
Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230
235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro
Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245
250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr
Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265
270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn
Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280
285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu
Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295
300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly
Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310
315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His
Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325
330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala
Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345
350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly
Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360
365 (5)上記核酸が実質的に以下の配列番号:1または以
下の配列番号:2の塩基配列からなる、前記(1)に記
載の核酸。
dosporidium toruloides) 、ロドスポリジウム ディオ
ボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロドスポリ
ジウム スフェロカルパム(Rhodosporidium sphaerocar
pum)、ロドスポリジウム クラトクヴィロヴァエ(Rhodo
sporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウム ルシ
タニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポリジウ
ム パルディグネナム(Rhodosporidium paludignenum)
、ロドスポリジウム ダクリオイダム(Rhodosporidium
dacryoidum) 、ロドスポリジウム バブジェヴァエ(Rh
odosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウム
フルヴィアレ(Rhodosporidiumfluviale) 由来のD−ア
ミノ酸オキシダーゼをコード化する、前記(1)に記載
の核酸。
ロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由来のD−アミ
ノ酸オキシダーゼをコード化する、前記(6)に記載の
核酸。
記載の核酸を含むベクター。
記載の核酸を含む形質転換宿主細胞。
sporidium)由来の単離されたD−アミノ酸オキシダー
ゼ。
以下の配列番号:3のアミノ酸配列からなる、または該
配列番号:3のアミノ酸配列において少なくとも一のア
ミノ酸が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列からなり
かつD−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する、前記(1
0)に記載のD−アミノ酸オキシダーゼ。
ウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 、ロ
ドスポリジウム ディオボヴァタム(Rhodosporidium di
obovatum) 、ロドスポリジウム スフェロカルパム(Rho
dosporidium sphaerocarpum)、ロドスポリジウム クラ
トクヴィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、
ロドスポリジウム ルシタニエ(Rhodosporidium lusita
niae) 、ロドスポリジウム パルディグネナム(Rhodosp
oridium paludignenum) 、ロドスポリジウム ダクリオ
イダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドスポリジウ
ムバブジェヴァエ(Rhodosporidium babjevae) 、または
ロドスポリジウム フルヴィアレ(Rhodosporidium fluv
iale) 由来である、前記(10)に記載のD−アミノ酸
オキシダーゼ。
ロドスポリジウム トルロイデス(Rhodosporidium toru
loides) 由来である、前記(12)に記載のD−アミノ
酸オキシダーゼ。
属(genus Rhodosporidium)由来のD−アミノ酸オキシダ
ーゼをコード化する単離された核酸を提供するものであ
る。なお、本明細書中で使用される「ロドスポリジウム
属(genus Rhodosporidium)由来のD−アミノ酸オキシダ
ーゼ」ということばは、ロドスポリジウム属(genus Rho
dosporidium)由来のD−アミノ酸オキシダーゼの天然ま
たは人為的に作製された変異体(variant) の双方を含
む。
NA、ゲノムDNAや合成(例えば、化学的に合成され
るまたは修飾される)DNA等のDNAの双方を包含
し、1本鎖であってもまたは2本鎖であってもよく、本
発明による核酸が1本鎖である際には、センス鎖または
アンチセンス鎖のいずれであってもよい。また、「単離
された核酸」ということばは、プラスミドまたはウィル
スの配列などの、非天然の配列に隣接する核酸を意味
し、コーディング配列と直に近接する5’−非コーディ
ング(例えば、プロモーター)配列を含まない、該配列
の一部を含むまたは該配列のすべてを含むのいずれかで
あってもよい。このような核酸としては、例えば、自律
複製プラスミド若しくはウィルスなどのベクター中に、
またはロドスポリジウム(Rhodosporidium)以外の原核生
物若しくは真核生物のゲノムDNA中に導入される、ま
たは他の配列に依存しない別の分子(例えば、PCR若
しくは制限酵素処理によって産生されるcDNA若しく
はゲノムDNA断片)として存在する組換DNAが挙げ
られる。本発明による核酸はまた、ポリペプチド配列を
さらにコード化するハイブリッド遺伝子の一部である組
換DNAまたはRNAを含むものであってもよい。さら
に、本発明による核酸は、天然には断片として生じずに
自然の状態では見い出せない核酸断片を含むものであっ
てもよい。
号:1の塩基配列からなる核酸、以下の配列番号2:の
塩基配列からなる核酸、または配列番号:1若しくは配
列番号:2の塩基配列からなる核酸とストリンジェント
な条件下でハイブリダイズしかつD−アミノ酸オキシダ
ーゼ活性を有するタンパク質をコードする核酸であるこ
とが好ましい。より好ましくは、本発明による核酸は、
配列番号:1の塩基配列からなる核酸または配列番号
2:の塩基配列からなる核酸である。または、本発明に
よる核酸が実質的に配列番号:1または配列番号:2の
塩基配列からなる核酸である。この際、「実質的に核酸
からなる」という表現は、塩基配列が有意な数で相同性
を有するという意味で使用され、少なくとも40%、5
0%、60%、70%、80%、90%、95%または
99%(数が大きいほど好ましい)の塩基配列の相同性
を有する。
リダイズする」中の「ストリンジェントな条件」とは、
核酸がストリンジェントであると見なされサムブルック
(Sambrook)ら(モレキュラー クローニング(Molecular
Cloning) 、アラボラトリー マニュアル(A Laborator
y Munual) 、サムブルック ジェー(Sambrook J.) 、フ
リッシュ イーエフ(Fritsch, E.F.) 、及びマニアティ
ス ティ(Maniatis T.) 、第2版[1989年]、コー
ルド スプリング ハーバーラボラトリー プレス(Col
d Spring Harbor Laboratory Press) )に記載される低
塩濃度及び高温条件下で溶液中にまたは固体支持体上に
上記配列番号:1または2の塩基配列からなる核酸と安
定な、配列に特異的な、非共有結合を形成するような条
件を意味する。本発明における「ストリンジェントな条
件下でハイブリダイズする」工程の一実施態様を以下に
示す。上記配列番号:1または2の塩基配列からなる核
酸等の参照核酸をニトロセルロースフィルター上に固定
し、他の核酸を68℃で0.2×SSC(1.75g/
l NaCl、0.88g/lクエン酸ナトリウム(C
6 H5 O7 Na3 ・2H2 O);pH7.0)及び0.
1(w/v)%のドデシル硫酸ナトリウムの存在下で固
定化された参照核酸に特異的に非共有結合させる。
番号:3のアミノ酸配列をコード化する、または配列番
号:3のアミノ酸配列において少なくとも一のアミノ酸
が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列をコード化する
ものであることが好ましい。
デス(Rhodosporidiumtoruloides) 、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロ
ドスポリジウム スフェロカルパム(Rhodosporidium sp
haerocarpum)、ロドスポリジウム クラトクヴィロヴァ
エ(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウ
ム ルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドス
ポリジウム パルディグネナム(Rhodosporidium paludi
gnenum) 、ロドスポリジウム ダクリオイダム(Rhodosp
oridium dacryoidum) 、ロドスポリジウム バブジェヴ
ァエ(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジ
ウム フルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来の
D−アミノ酸オキシダーゼ、より好ましくはロドスポリ
ジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由
来のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化することが好
ましく、特に、アメリカン タイプ カルチャー コレ
クション(American Type Culture Collection)(ATC
C)の受託番号がATCC 10788であるロドスポ
リジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloides)
由来のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化することが
好ましい。
の態様による核酸を含むベクターである。なお、本明細
書において、「ベクター」ということばは、原核若しく
は真核細胞または原核若しくは真核生物中で発現するこ
とを目的とするなどを目的として調節因子またはリポー
ター遺伝子(reporter gene) を含む核酸分子またはウィ
ルスを意味するものである。
の態様による核酸を含む形質転換宿主細胞である。な
お、本明細書において、「形質転換(された)宿主細
胞」ということばは、中に(またはその祖先の中に)ロ
ドスポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のD−ア
ミノ酸オキシダーゼをコード化する核酸が分子生物学的
な技術によって導入された宿主細胞を意味するものであ
る。本発明において、核酸は、細胞中に導入された後
は、染色体外に存在していてもまたは宿主ゲノム中に組
み込まれていてもよい。
属(genus Rhodosporidium)由来の単離されたD−アミノ
酸オキシダーゼである。この際、「単離されたD−アミ
ノ酸オキシダーゼ」とは、自然の環境から精製される(p
urify)または強化される(enrich)D−アミノ酸オキシダ
ーゼを意味し、例えば、D−アミノ酸オキシダーゼ発現
ベクターを形質転換された宿主細胞から調製された多D
−アミノ酸オキシダーゼ抽出物が挙げられる。
ゼは、上記配列番号:3のアミノ酸配列からなる、また
は該配列番号:3のアミノ酸配列において少なくとも一
のアミノ酸が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列から
なることが好ましい。本発明によると、同類アミノ酸置
換としては、例えば、以下の群から選ばれるいずれかに
よる置換が挙げられる:バリン、イソロイシン及びロイ
シン;アスパラギン酸及びグルタミン酸;アスパラギン
及びグルタミン;セリン及びトレオニン;リシン及びア
ルギニン;およびフェニルアラニン及びチロシン。
ーゼは、好ましくは、ロドスポリジウム トルロイデス
(Rhodosporidium toruloides) 、ロドスポリジウム デ
ィオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロドス
ポリジウム スフェロカルパム(Rhodosporidium sphaer
ocarpum)、ロドスポリジウム クラトクヴィロヴァエ(R
hodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウム
ルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポリ
ジウム パルディグネナム(Rhodosporidium paludignen
um) 、ロドスポリジウム ダクリオイダム(Rhodosporid
ium dacryoidum) 、ロドスポリジウム バブジェヴァエ
(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウム
フルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来、より
好ましくはロドスポリジウム トルロイデス(Rhodospor
idium toruloides) 由来であり、特に好ましくは、アメ
リカン タイプ カルチャー コレクション(American
Type Culture Collection)(ATCC)の受託番号がA
TCC 10788であるロドスポリジウム トルロイ
デス(Rhodosporidium toruloides) 由来である。
−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を産生させるまたは
D−アミノ酸オキシダーゼ活性が発現する限りD−アミ
ノ酸オキシダーゼの読み枠内の特異的な若しくは非特異
的な突然変異を容易にさせる組換核酸またはウィルスも
また本発明の概念に含まれる。上記組換核酸またはウィ
ルスは、D−アミノ酸オキシダーゼのコーディング配列
の上流に強力な構成プロモーターなどの;D−アミノ酸
オキシダーゼのコーディング配列内に高レベルの発現が
可能であるシス−エレメント(cis-element) を含むイン
トロンなどの;またはD−アミノ酸オキシダーゼのコー
ディング配列の下流に効果的なポリアデニル化シグナル
などの;様々な配列をさらに有していてもよい。
ウィルスを含むまたは産生する細胞を、およびこのよう
な細胞から産生されるD−アミノ酸オキシダーゼタンパ
ク質をも包含するものである。
念に含まれるものである。例えば、本発明のD−アミノ
酸オキシダーゼタンパク質は、以下に制限されるもので
はないが、組換タンパク質、天然のタンパク質、及び合
成タンパク質、さらにはプレタンパク質またはプロタン
パク質等のタンパク質を含むものであってもよい。ま
た、組換D−アミノ酸オキシダーゼタンパク質は、近接
した若しくは近接しないアミノ酸が欠失したD−アミノ
酸オキシダーゼタンパク質、または周辺腔、小胞体、ミ
トコンドリアまたは細胞外空間などの、細胞の様々な区
画中に輸送できるシグナルペプチドを含むD−アミノ酸
オキシダーゼタンパク質を含むものであってもよい。
スポリジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloid
es) 由来のD−アミノ酸オキシダーゼタンパク質やD−
アミノ酸オキシダーゼ遺伝子の単離に基づいて、当業者
は、さらに詳細を必要とすることなく、本発明を十分利
用できると考える。
説明する。しかしながら、以下の実施例はロドスポリジ
ウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloides) 由来
のD−アミノ酸オキシダーゼの遺伝子やタンパク質の単
離方法を単に説明するものであり、本発明を何等制限す
るものでないことはいうまでもないことである。
ium)からセファロスポリンCに対して活性を有するD−
アミノ酸オキシダーゼタンパク質を単離し、さらにその
特性を明らかにした。
カルチャー コレクション(American Type Culture C
ollection)(ATCC)から得た受託番号がATCC
10788であるロドスポリジウム トルロイデス(Rho
dosporidium toruloides) を、D−アミノ酸オキシダー
ゼタンパク質の単離源として使用した。
下記のとおり、単離した。D−アラニンを、最終濃度を
0.3Mで、ロドスポリジウム トルロイデス(R. toru
loides) の無細胞抽出液に添加し、この混合物を70℃
で4分間加熱した。次に、この加熱した混合物を13,
000×gで40分間遠心することにより、沈殿物を除
去し、上清を1.5リットルの緩衝液A(50mM リ
ン酸カリウム緩衝液、pH8.0、2mM EDTA、
5mM β−メルカプトエタノール、1mMフェニルメ
タンスルホニルフルオリド(PMSF)、及び2.5g
/ml ペプスタチンA)で透析した。さらに、このよ
うにして透析したタンパク質溶液を、DEAE−セファ
セル(DEAE-Sephacel) カラム(15×2.4cm)にか
け、緩衝液Aで溶出した。D−アミノ酸オキシダーゼ活
性を有する画分を集め、アミコンセル(Amicon cell)
(YM 30)で濃縮した。この濃縮液を、予め150
mlの20%グリセロール添加緩衝液B(ペプスタチン
Aを含まない以外は、緩衝液Aと同様の組成)で平衡化
されたフェニル−セファロース シーエル−4ビー(phe
nyl-Sepharose CL-4B)カラム(15×2.0cm)にか
け、結合したD−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を4
0%グリセロール添加緩衝液Bで溶出した。D−アミノ
酸オキシダーゼ活性を有する画分を集め、10%グリセ
ロールを含む緩衝液B1.5リットルで透析し、透析液
を2mlに濃縮し、予め30mlの10%グリセロール
添加緩衝液Bで平衡化されたタンパク質高速液体クロマ
トグラフィー(FPLC)モノQ エッチアール 5/
5(Mono Q HR 5/5) カラムによるクロマトグラフィーに
かけ、D−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を空隙容量
で即座に溶出させた。酵素活性を有する画分をプール
し、1mlに濃縮した。続いて、この濃縮液をFPLC
ゲル瀘過スーパーローズ 12 エッチアール 10/
30(Superose 12 HR 10/30)カラムにのせ、10%グリ
セロール及び0.25M NaClを含む緩衝液Bで溶
出させた。活性画分をプールし、−20℃で保存した。
ル(Superose 12 HR)カラムによるクロマトグラフィーに
より、ゲル浸透クロマトグラフィーを行い、タンパク質
サンプルから少量の不純物を効果的に除去した。
キシダーゼタンパク質0.88mgが、約100g(生
重量)のロドスポリジウム トルロイデス(R. toruloid
es)細胞から得られ、この際の収率は21%であり、比
活性は60U/mgタンパク質であった。(D−アミノ
酸オキシダーゼの活性単位の定義及びアッセイ条件は、
リー(Lee) ら、バイオテクノル レター(Biotechnol. L
ett.) [1994年]、16巻、頁467〜472に記
載されるのと同様であった。)この調製物は、未変性P
AGEでは単一のバンドを示した。また、この酵素は、
過ヨウ素酸−シッフ試薬により染色されなかったことか
ら、多糖でないことが示された。
ローズ 12(Superose 12) カラムによるゲル瀘過で参
照タンパク質による標準曲線と比較した際、72kDa
であった。SDS/PAGEでは、37kDaの分子量
で単一バンドが示された。これらの結果から、未変性の
形態のロドスポリジウム トルロイデス(R. toruloide
s) のD−アミノ酸オキシダーゼタンパク質は、同一の
大きさの2つのサブユニットから構成されたことが示唆
される。始めの22残基のNH2 −末端側のアミノ酸配
列を決定したところ、Met His Ser Gln Lys Arg Val Va
l Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly Leu Ser Ser Ala
Leu Ile (配列番号:10)であった。
(R. toruloides) 由来のD−アミノ酸オキシダーゼタン
パク質の吸収スペクトルは370nm及び455nmの
2箇所で最大値を示し、これはフラビン発色団では典型
的であった。フラビンタンパク質の純度を評価するため
にしばしば使用されるパラメーターである、E280/
E455比は、8.1であった。高速液体クロマトグラ
フィー(HPLC)分析から、煮沸タンパク質調製物か
ら放出されるフラビンは標準のフラビンアデニンジヌク
レオチド(FAD)の保持時間と同等の保持時間を示す
ことが分かった。FADの濃度を測定したところ、6.
34g/mlであり、これはタンパク質溶液の0.29
7mg/mlから得られた。上記結果及びSDS/PA
GE分析結果に基づいて、約1.73モルFAD/モル
タンパク質の割合が得られ、これから各サブユニットに
1個のFADが存在することが示された。
素活性を様々な温度で測定した。この結果、このタンパ
ク質は35℃で最大活性を発揮した。また、このD−ア
ミノ酸オキシダーゼは、30〜50℃の温度範囲で活性
を有して(最大活性の70%超)おり、60℃で最大活
性の30%にまで急激に酵素活性が減少した。さらに、
このD−アミノ酸オキシダーゼは35℃を超える温度で
は不安定であり、40℃及び45℃で10分間インキュ
ベーションした後では、それぞれ、最大活性の20%及
び10%しか維持されなかった。
最適pHは9.0であり、7.5〜10.0のpH範囲
で活性を有していた。また、このD−アミノ酸オキシダ
ーゼは、7.0〜8.0のpH範囲で安定であり、80
%以上の残存活性が検出された。しかしながら、8.5
を超えるpHではかなり失活し、11.0のpHでは7
0%が不活性化される。
精製D−アミノ酸オキシダーゼの相対的な活性を調べ
た。精製酵素は試験されたすべてのD−アミノ酸で活性
を有していた。最も良い基質は、D−トリプトファンで
あり、次がD−メチオニン、D−フェニルアラニン、D
−アラニン、及びD−ロイシンであった。また、D−ト
レオニン、D−グルタミン酸、D−アスパラギン酸、及
びD−リシンでは、上記に比べると低い活性(最大の2
0%未満)を発揮し、L−アラニン、L−プロリン、L
−フェニルアラニン、及びL−メチオニン等のL−アミ
ノ酸では活性が検出されなかった。D−トリプトファ
ン、D−メチオニン、D−アラニン、及びD−セリンの
見かけのKm は、それぞれ、0.18mM、0.22m
M、0.68mM、及び3.4mMであった。また、こ
のD−アミノ酸オキシダーゼは、p−アミノ安息香酸、
安息香酸、及びニコチン酸の存在下では、それぞれ、7
2%、49%及び21%阻害された。これにより、これ
らの芳香族酸はすべてロドスポリジウム トルロイデス
(R. toruloides) のD−アミノ酸オキシダーゼの拮抗阻
害剤であることが決定された。これらの試験された芳香
族酸のうち、p−アミノ安息香酸が最も低いKi (0.
3mM)を示した。
る、精製D−アミノ酸オキシダーゼタンパク質を用い
て、Ceph Cを変換した。その結果、上記酵素は、
D−アラニンに対して活性を有するものと比較すると、
Ceph Cで95%の活性を有していた。また、Ce
ph Cに関する酵素の見かけのKm は0.65mMで
ある。収率は91%であり、さらにインキュベーション
しても収率は上昇しなかった。さらに、外因性のH2 O
2 が反応に必要であった。
ruloides) 由来のD−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子の単
離及び発現を行った。
ロマトグラフィー、モノQ エッチアール 5/5(Mon
o Q HR 5/5) 及びスーパーローズ 10 エッチアール
(Superose 10 HR)、の代わりにドデシル硫酸ナトリウム
(SDS)/ポリアクリルアミドゲル電気泳動(PAG
E)を使用する以外は実施例1と同様にして、ロドスポ
リジウム トルロイデス(R. toruloides) 由来のD−ア
ミノ酸オキシダーゼタンパク質を精製した。約300ピ
コモルのD−アミノ酸オキシダーゼタンパク質がSDS
/PAGEゲルから精製され、ペプチド配列をプロテイ
ン アンド ヌクレイック アシッド ファシリティー
(Protein and Nucleic Acid Facility)、スタンフォー
ド ユニヴァーシティ(Stanford University) 、アメリ
カ合衆国によって決定した。この結果、3種の内部ペプ
チド配列(YCQYLARELQ[配列番号:11]、
IAGGIDDQAAEPIR[配列番号:12]、及
びRCTMDSSDP[配列番号:13])が決定され
た。ロドスポリジウム トルロイデス(R. toruloides)
由来のD−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子を単離するため
に、4種の十分変性されたオリゴヌクレオチドプライマ
ーを上記ペプチド配列を基礎として合成された。これら
のプライマーは、プライマー1(5’−AARTAYT
GYCARTAYC−3’)[配列番号:6]、プライ
マー2(5’−ATNGAYGAYCAYGCNGC−
3’)[配列番号:7]、プライマー3(5’−GCN
GCYTGRTCRTCNAT−3’)[配列番号:
8]、およびプライマー4(5’−ATGGAYAGY
AGYGAYCC−3’)[配列番号:9]であり、こ
の際、NはG、A、TまたはCを表し;YはTまたはC
を表し;およびRはAまたはGを表す。
デス(R. toruloides) の染色体DNAによるポリメラー
ゼ連鎖反応(PCR)では、プライマー1を単独で使用
した際には何等産物は得られなかった。プライマー2、
3、または4のみを含むPCRで合成される非特異的な
産物は数個存在した。プライマー2及び4によるPCR
でもまた、数個の非特異的な産物が生じた。プライマー
1及び3を用いた具体的な結果としては、非特異的な産
物に加えて、約210bp長の特異的なPCR産物があ
った。この断片を鋳型として使用した際には、PCRに
おいてプライマー1及び3によって再増幅される。
この断片は下記214ヌクレオチドから構成された: 5'-AAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAGCTGCAGAAGCTCGGCGCGAC
GTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGAGCAGGCGTTCGACGGTGCGG
ATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGgtatgtcccgaactgcccctctc
tacctgcaattttgctgattgatatgctcgcagGCGCCAAGTCGATTGCG
GGCATCGACGACCAAGC-3'(配列番号:15) (小文字は、下記cDNAに基づいた、イントロン配列
を表す。) 上記214bpの断片によってコード化される推定アミ
ノ酸配列の一部である、YCQYLARELQ(配列番
号:11)及びIAGIDDQA(配列番号:14)
は、決定されたD−アミノ酸オキシダーゼのアミノ酸配
列の一部と一致する。この結果から、この214bpの
DNA断片はロドスポリジウム トルロイデス(R. toru
loides) のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化する遺
伝子の一部であることが示された。次に、この断片をD
−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子を単離するためのプロー
ブとして使用した。
pのDNA断片とのサザンブロットハイブリダイゼーシ
ョンにより、約3.3kbのハイブリッド形成断片が同
定された。3.0〜3.5kbの範囲の大きさのHin
dIIIで消化されたゲノムDNA断片をpBlues
cript SK+中に挿入することによって、ミニゲ
ノムDNA(mini-genomic DNA)ライブラリーを構築し
た。このライブラリーを同様のプローブでスクリーニン
グした。オートラジオグラムでのシグナルに2種の強度
レベルを有する15個の陽性クローンが約200個の細
菌コロニーをスクリーニングすることにより得られた。
各タイプから3個のクローンを任意に選び、これらのク
ローンについて挿入物の制限酵素によるプロフィールを
分析した。結果から、これらのクローンは、シグナルに
2強度レベルを生じる、2種の異なるDNA挿入物を含
むことが示された。シグナルのより高い強度および21
4bpのプローブによる挿入物のハイブリッド形成プロ
フィールに基づいてさらに研究するために、一方のタイ
プのクローンを選択した。これらのクローンは、D−ア
ミノ酸オキシダーゼ遺伝子配列を含むゲノムDNA断片
を含むことが分かった。D−アミノ酸オキシダーゼ遺伝
子のコード領域のゲノムDNA配列は下記に示されると
おりであった: 5'-ATGCACTCTCAGAAGCGCGTCGTTGTCCTCGGATCAGGCGgtgcgtc
ttttccctctcctccccacacccgacagtcctcgacgaggtgtaggacgg
cgagcaaagctgccgagggcgatctgggctgactgagcgctcgagtgtac
agTTATCGGTCTGAGCAGCGCCCTCATCCTCGCTCGGAAGGGCTACAGCG
TGCATATTCTCGCGCGCGACTTGCCGGAGGACGTCTCGAGCCAGACTTTC
GCTTCACCATGGGCTgtgcgtcgtctcactgtagttggaggatgtcagcg
agagctgatcaatctcgtcatccccgcagGGCGCGAATTGGACGCCTTTC
ATGACGCTTACAGACGGTCCTCGACAAGCAAAATGGGAAGAATCGACTTT
gtgcgtctccttctacctcattcttggcctcgagctgacgagtgtatgat
acacagCAAGAAGTGGGTCGAGTTGGTCCCGACGGGCCATGCCATGTGGC
TCAAGGGGACGAGGCGGTTCGCGCAGAACGAAGACGGCTTGCTCGGGCAC
TGGTACAAGGACATCACGCCAAATgtgcgcccacattcactcttcccttc
gcatgtctccgtttactgacccgccctctttcgccgtgcgcagTACCGCC
CCCTCCCATCTTCCGAATGTCCACCTGGCGCTATCGGCGTAACCTACGAC
ACCCTCTCCGTCCACGCACCAAAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAGCT
GCAGAAGCTCGGCGCGACGTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGAGC
AGGCGTTCGACGGTGCGGATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGgtatg
tcccgaactgcccctctctacctgcaattttgctgattgatatgctcgca
gGCGCCAAGTCGATTGCGGGCATCGACGACCAAGCCGCCGAGCCAATCCG
CGGCCAAACCGTCCTCGTCAAGTCCCCATGCAAGCGATGCACGATGGACT
CGTCCGACCCCGCTTCTCCCGCCTACATCATTCCCCGACCAGGTGGCGAA
GTCATCTGCGGCGGGACGTACGGCGTGGGAGACTGGGACTTGTCTGTCAA
CCCAGAGACGGTCCAGCGGATCCTCAAGCACTGCTTGCGCCTCGACCCGA
CCATCTCGAGCGACGGAACGATCGAAGGCATCGAGGTCCTCCGCCACAAC
GTCGGCTTGCGACCTGCACGACGAGGCGGACCCCGCGTCGAGGCAGAACG
GATCGTCCTGCCTCTCGACCGGACAAAGTCGCCCCTCTCGCTCGGCAGGG
GCAGCGCACGAGCCGCGAAGGAGAAGGAGGTCACGCTTGTGCATGCGTAT
GGCTTCTCGAGTGCGGGATACCAGCAGAGTTGGGGCGCGGCGGAGGATGT
CGCGCAGCTCGTCGACGAGGCGTTCCAGCGGTACCACGGCGCGGCGCGGG
AGTCGAAGTTG-3'(配列番号:1) (小文字は、下記cDNAに基づいた、イントロン配列
を表す。) cDNA末端の5’及び3’側のラピッド増幅(rapid a
mplification) (RACE)を行い、D−アミノ酸オキ
シダーゼ遺伝子のcDNA末端を単離した。RACE
は、製造社のプロトコルに従ってRACEキット(ギブ
コ ビーアールエル(Gibco BRL) 製)を用いて行った。
約550bp及び720bpのDNA断片を、それぞ
れ、5’RACEおよび3’RACEで増幅した。これ
らの断片をヌクレオチド配列決定用のpGEM−Tベク
ター中にクローニングした。この結果から、これら2個
のcDNA断片は124bpの重複領域を有することが
示された。これら2断片のヌクレオチド配列を組み合わ
せることにとより、上記3種の内部ペプチドと全く同一
である領域を含むアミノ酸配列をコード化すると考えら
れるオープンリーディングフレーム(ORF)が得られ
た。D−アミノ酸オキシダーゼのcDNAのコーディン
グ領域を以下に示す: 5'-ATGCACTCTCAGAAGCGCGTCGTTGTCCTCGGATCAGGCGTTATCGG
TCTGAGCAGCGCCCTCATCCTCGCTCGGAAGGGCTACAGCGTGCATATTC
TCGCGCGCGACTTGCCGGAGGACGTCTCGAGCCAGACTTTCGCTTCACCA
TGGGCTGGCGCGAATTGGACGCCTTTCATGACGCTTACAGACGGTCCTCG
ACAAGCAAAATGGGAAGAATCGACTTTCAAGAAGTGGGTCGAGTTGGTCC
CGACGGGCCATGCCATGTGGCTCAAGGGGACGAGGCGGTTCGCGCAGAAC
GAAGACGGCTTGCTCGGGCACTGGTACAAGGACATCACGCCAAATTACCG
CCCCCTCCCATCTTCCGAATGTCCACCTGGCGCTATCGGCGTAACCTACG
ACACCCTCTCCGTCCACGCACCAAAGTACTGCCAGTACCTTGCAAGAGAG
CTGCAGAAGCTCGGCGCGACGTTTGAGAGACGGACCGTTACGTCGCTTGA
GCAGGCGTTCGACGGTGCGGATTTGGTGGTCAACGCTACGGGACTTGGCG
CCAAGTCGATTGCGGGCATCGACGACCAAGCCGCCGAGCCAATCCGCGGC
CAAACCGTCCTCGTCAAGTCCCCATGCAAGCGATGCACGATGGACTCGTC
CGACCCCGCTTCTCCCGCCTACATCATTCCCCGACCAGGTGGCGAAGTCA
TCTGCGGCGGGACGTACGGCGTGGGAGACTGGGACTTGTCTGTCAACCCA
GAGACGGTCCAGCGGATCCTCAAGCACTGCTTGCGCCTCGACCCGACCAT
CTCGAGCGACGGAACGATCGAAGGCATCGAGGTCCTCCGCCACAACGTCG
GCTTGCGACCTGCACGACGAGGCGGACCCCGCGTCGAGGCAGAACGGATC
GTCCTGCCTCTCGACCGGACAAAGTCGCCCCTCTCGCTCGGCAGGGGCAG
CGCACGAGCCGCGAAGGAGAAGGAGGTCACGCTTGTGCATGCGTATGGCT
TCTCGAGTGCGGGATACCAGCAGAGTTGGGGCGCGGCGGAGGATGTCGCG
CAGCTCGTCGACGAGGCGTTCCAGCGGTACCACGGCGCGGCGCGGGAGTC
GAAGTTG-3'(配列番号:2) このORFは、1104ヌクレオチド長であり、40,
079Daの分子量を有する368アミノ酸のタンパク
質をコード化する。このタンパク質の、N−末端からC
−末端の方向の、配列を下記に示す:
チド配列の比較から、D−アミノ酸オキシダーゼ遺伝子
は6個のエクソン及び5個のイントロンを含むことが示
される(上記配列番号:1を参照)。このD−アミノ酸
オキシダーゼ遺伝子のイントロンの大きさは、56bp
から109bpと、比較的小さい。5個のイントロンす
べての両末端はエクソン−イントロン連結部の共通配列
である「GT…AG」を有していた。
ノ酸オキシダーゼ遺伝子の推定の翻訳開始部位の付近の
ヌクレオチド配列は、共通配列「CCACCATGG
C」(配列番号:16)(コザック(Kozak) 、ヌクレイ
ック アシッズ レサーチ(Nuc. Acids Res.) [198
4年]、12巻、頁857〜872)と一致し、−3番
目の位置のヌクレオチド(この際、出発コドンのA残基
を+1と称する)は、常に、GまたはAである。出発コ
ドンの5’側の配列を下記に示す: 5'-AAGCTTCGGCACGAGCATGAGTGTGAATGATGGTCCAAGGAGGACAG
CGCAGAGTCAACAGGAGGGCACATGGAGGCAGAGCGTGGGGCGGAGGAGG
CAGATGGGGAGTCGCGCTGGGGGACGAGGGGGTGTCGCTCGACTAACAGC
TCTCTATCGCTCTTGCTGCTGCTTGTACTACTCGAACGACGCC-3'(配
列番号:4) 真菌の遺伝子と同様、見かけ上のTATAボックスは、
ロドスポリジウム トルロイデス(R. toruloides) のD
−アミノ酸オキシダーゼの5’−フランキング領域中に
は見つからない。
ニル化シグナルの共通配列は存在しないが、poly
(A)付加部位から11〜18残基上流に位置する配列
「TGTATTGC」(配列番号:18)は、哺乳動物
のmRNAの正確な3’−末端の形成に関わりのあるこ
とが知られている配列「YGTGTTYY」(配列番
号:17)(Yはピリミジンを表す)に類似する。OR
Fの3’側の配列を下記に示す: 5'-GGCGGGATTTGTGGCTGTATTGCGGGCATCTACAAGACCAGCTTCAT
CTCGGACGACAACACGAGAGCGGCGAGTCTTCGTACCGTCTGACCTTCGC
AATCCGCCGAGTCCTTGCCCGTTGCCCTGCTTGCTCCTTTCGTATCTCCT
GTGACTCGGAACGTCGCTCTTCGCCTCTGTCACTTGCCAGGCCGTCCCTT
CAAACTGTCGCCGCCCTCCTCCTCCCAATCTCCTCCTCACGCGACTTGCC
ACTACTCTCACTTCTCCTGCTTACCAAGGCTTACACTACGCAACACTAAG
CGCGGCATCAGGTTCCGTTGCGCGCCTCGTCACGACCCGACTTTTTTTCG
CCCGTTCGCTCGCCTCGCTCCGTTGCCGAGCGAAGAACTTCGCCTGCCTT
CGAATCTCTCGCCTTGCTCGTCTCGTCCTGCTCCGTTCCACCACAGATAG
ACTCACAGCAACACACTCACAATGGTCAAGGTGCGCACCCACTCCCGCCA
GTCCAACTCGCGCGACGAGAGACCACCGTCTCGTTGACATCACTGACCTC
GTCGCTCGCCACCCACCCTCCCGCTCGTCCATGCACACAGGCAGCACCAC
GATCAGACGAGCAGCAGCACTACCACGCCACAGTCATGGGCGGACTCAAG
GGCGGCGCGATGGGGTTGGCGGCGGGTGGAGCGGGTGCGGTTGCGCTGCA
GAGGGCGAACGTACAGGCGTTCACGAGGTTGACGCTGCCTCTCAAGGCGT
TTGCTGTCACGTACGTCCCGCGATCCCTTACTATGCGACTCCCTCGGTGA
ATTC-3' (配列番号:5) ロドスポリジウム トルロイデス(R. toruloides) のD
−アミノ酸オキシダーゼに関するcDNAを有する、発
現プラスミドpDAO−23を、pET23aベクター
を用い、これを大腸菌BL21[DE3]中に導入する
ことによって、構築した。イソプロピル−1−チオ−β
−D−ガラクトシド(IPTG)により誘導される形質
転換体は細胞ライゼート中にD−アミノ酸オキシダーゼ
活性を発現することから、活性D−アミノ酸オキシダー
ゼが大腸菌内で発現したことが示された。細胞ライゼー
トのSDS/PAGE分析により、D−アミノ酸オキシ
ダーゼのサブユニットの推定される大きさである、明瞭
な37kDaのタンパク質のバンドが現れたが、これは
pET23aが形質転換された宿主から同様にして調製
されたライゼートには存在しなかった。このタンパク質
は、IPTGによる誘導から30分以内で十分誘導され
た。D−アミノ酸オキシダーゼを、Ni−カラムクロマ
トグラフィーを用いてほとんど均質になるまで精製し
た。約4mgのタンパク質が250mlの大腸菌培養物
から一段階で得られた。この精製タンパク質の比活性は
1,211U/mgであり、これは未精製抽出物の7倍
高く、精製したロドスポリジウム トルロイデス(R. to
ruloides) のD−アミノ酸オキシダーゼタンパク質の2
0倍高い値であった。また、この活性は、FADの存在
下で透析することによって調製された酵素の値と同等で
あることから、この組換D−アミノ酸オキシダーゼは補
欠分子族としてFADを含むことが示される。
菌株である、pDAO−23形質転換DH5α株をまた
調製し、これをアメリカン タイプ カルチャー コレ
クション(American Type Culture Collection)(ATC
C)に受託番号98485で寄託した。
スポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のD−アミ
ノ酸オキシダーゼをコード化する核酸、該核酸を含むベ
クター及び形質転換細胞、およびロドスポリジウム属(g
enus Rhodosporidium)由来のD−アミノ酸オキシダーゼ
を提供するものである。したがって、本発明により、ロ
ドスポリジウム属(genus Rhodosporidium)由来のD−ア
ミノ酸オキシダーゼ遺伝子が単離され、その特性が明ら
かになり、これにより基質の変換に関するミカエリス定
数(Km )が減少するまたはタンパク質の安定性がより
向上するなどの望ましい特性を有するD−アミノ酸オキ
シダーゼの様々な変異体の産生が可能になる。
igonucleotide 配列 ATGGAYAGYA GYGAYCC
17 配列番号:10 配列の長さ:22 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile 20 配列番号:11 配列の長さ:10 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列番号:12 配列の長さ:14 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列 Ile Ala Gly Gly Ile Asp Asp Gln Ala Ala Glu Pro Ile Arg 1 5 10 配列番号:13 配列の長さ:9 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列番号:14 配列の長さ:8 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列番号:15 配列の長さ:214 配列の型:核酸 鎖の数:2本鎖 トポロジー:直鎖状配列の種類:Genomic DN
A 配列 AAGTACTGCC AGTACCTTGC AAGAGAGCTG CAGAAGCTCG GCGCGACGTT TGAGAGACGG 60 ACCGTTACGT CGCTTGAGCA GGCGTTCGAC GGTGCGGATT TGGTGGTCAA CGCTACGGGA 120 CTTGGTATGT CCCGAACTGC CCCTCTCTAC CTGCAATTTT GCTGATTGAT ATGCTCGCAG 180 GCGCCAAGTC GATTGCGGGC ATCGACGACC AAGC 214 配列番号:16 配列の長さ:10 配列の型:核酸 鎖の数:2本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 Kozak sequence 配列 CCACCATGGC 10 配列番号:17 配列の長さ:8 配列の型:核酸 鎖の数:2本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 共通(consensus) 配列 YGTGTTYY 8 配列番号:18 配列の長さ:8 配列の型:核酸 鎖の数:2本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 配列 TGTATTGC
8
Claims (13)
- 【請求項1】 ロドスポリジウム属(genus Rhodosporid
ium)由来のD−アミノ酸オキシダーゼをコード化する単
離された核酸。 - 【請求項2】 該核酸が以下の配列番号:1の塩基配列
からなる核酸、以下の配列番号2:の塩基配列からなる
核酸、または配列番号:1若しくは配列番号:2の塩基
配列からなる核酸とストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズしかつD−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する
タンパク質をコードする核酸である、請求項1に記載の
核酸。 配列番号:1 ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号:2 ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 - 【請求項3】 該核酸が以下の配列番号:1の塩基配列
からなる核酸または以下の配列番号2:の塩基配列から
なる核酸である、請求項2に記載の核酸。 配列番号:1 ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号:2 ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 - 【請求項4】 該核酸が以下の配列番号:3のアミノ酸
配列をコード化する、請求項1に記載の核酸。 配列番号:3 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 - 【請求項5】 該核酸が実質的に以下の配列番号:1ま
たは以下の配列番号:2の塩基配列からなる、請求項1
に記載の核酸。 配列番号:1 ATGCACTCTC AGAAGCGCGT CGTTGTCCTC GGATCAGGCG GTGCGTCTTT TCCCTCTCCT 60 CCCCACACCC GACAGTCCTC GACGAGGTGT AGGACGGCGA GCAAAGCTGC CGAGGGCGAT 120 CTGGGCTGAC TGAGCGCTCG AGTGTACAGT TATCGGTCTG AGCAGCGCCC TCATCCTCGC 180 TCGGAAGGGC TACAGCGTGC ATATTCTCGC GCGCGACTTG CCGGAGGACG TCTCGAGCCA 240 GACTTTCGCT TCACCATGGG CTGTGCGTCG TCTCACTGTA GTTGGAGGAT GTCAGCGAGA 300 GCTGATCAAT CTCGTCATCC CCGCAGGGCG CGAATTGGAC GCCTTTCATG ACGCTTACAG 360 ACGGTCCTCG ACAAGCAAAA TGGGAAGAAT CGACTTTGTG CGTCTCCTTC TACCTCATTC 420 TTGGCCTCGA GCTGACGAGT GTATGATACA CAGCAAGAAG TGGGTCGAGT TGGTCCCGAC 480 GGGCCATGCC ATGTGGCTCA AGGGGACGAG GCGGTTCGCG CAGAACGAAG ACGGCTTGCT 540 CGGGCACTGG TACAAGGACA TCACGCCAAA TGTGCGCCCA CATTCACTCT TCCCTTCGCA 600 TGTCTCCGTT TACTGACCCG CCCTCTTTCG CCGTGCGCAG TACCGCCCCC TCCCATCTTC 660 CGAATGTCCA CCTGGCGCTA TCGGCGTAAC CTACGACACC CTCTCCGTCC ACGCACCAAA 720 GTACTGCCAG TACCTTGCAA GAGAGCTGCA GAAGCTCGGC GCGACGTTTG AGAGACGGAC 780 CGTTACGTCG CTTGAGCAGG CGTTCGACGG TGCGGATTTG GTGGTCAACG CTACGGGACT 840 TGGTATGTCC CGAACTGCCC CTCTCTACCT GCAATTTTGC TGATTGATAT GCTCGCAGGC 900 GCCAAGTCGA TTGCGGGCAT CGACGACCAA GCCGCCGAGC CAATCCGCGG CCAAACCGTC 960 CTCGTCAAGT CCCCATGCAA GCGATGCACG ATGGACTCGT CCGACCCCGC TTCTCCCGCC 1020 TACATCATTC CCCGACCAGG TGGCGAAGTC ATCTGCGGCG GGACGTACGG CGTGGGAGAC 1080 TGGGACTTGT CTGTCAACCC AGAGACGGTC CAGCGGATCC TCAAGCACTG CTTGCGCCTC 1140 GACCCGACCA TCTCGAGCGA CGGAACGATC GAAGGCATCG AGGTCCTCCG CCACAACGTC 1200 GGCTTGCGAC CTGCACGACG AGGCGGACCC CGCGTCGAGG CAGAACGGAT CGTCCTGCCT 1260 CTCGACCGGA CAAAGTCGCC CCTCTCGCTC GGCAGGGGCA GCGCACGAGC CGCGAAGGAG 1320 AAGGAGGTCA CGCTTGTGCA TGCGTATGGC TTCTCGAGTG CGGGATACCA GCAGAGTTGG 1380 GGCGCGGCGG AGGATGTCGC GCAGCTCGTC GACGAGGCGT TCCAGCGGTA CCACGGCGCG 1440 GCGCGGGAGT CGAAGTTG 1458 配列番号:2 ATG CAC TCT CAG AAG CGC GTC GTT GTC CTC GGA TCA GGC GTT ATC GGT 48 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 CTG AGC AGC GCC CTC ATC CTC GCT CGG AAG GGC TAC AGC GTG CAT ATT 96 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 CTC GCG CGC GAC TTG CCG GAG GAC GTC TCG AGC CAG ACT TTC GCT TCA 144 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 CCA TGG GCT GGC GCG AAT TGG ACG CCT TTC ATG ACG CTT ACA GAC GGT 192 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 CCT CGA CAA GCA AAA TGG GAA GAA TCG ACT TTC AAG AAG TGG GTC GAG 240 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 TTG GTC CCG ACG GGC CAT GCC ATG TGG CTC AAG GGG ACG AGG CGG TTC 288 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 GCG CAG AAC GAA GAC GGC TTG CTC GGG CAC TGG TAC AAG GAC ATC ACG 336 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 CCA AAT TAC CGC CCC CTC CCA TCT TCC GAA TGT CCA CCT GGC GCT ATC 384 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 GGC GTA ACC TAC GAC ACC CTC TCC GTC CAC GCA CCA AAG TAC TGC CAG 432 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 TAC CTT GCA AGA GAG CTG CAG AAG CTC GGC GCG ACG TTT GAG AGA CGG 480 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 ACC GTT ACG TCG CTT GAG CAG GCG TTC GAC GGT GCG GAT TTG GTG GTC 528 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 AAC GCT ACG GGA CTT GGC GCC AAG TCG ATT GCG GGC ATC GAC GAC CAA 576 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 GCC GCC GAG CCA ATC CGC GGC CAA ACC GTC CTC GTC AAG TCC CCA TGC 624 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 AAG CGA TGC ACG ATG GAC TCG TCC GAC CCC GCT TCT CCC GCC TAC ATC 672 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 ATT CCC CGA CCA GGT GGC GAA GTC ATC TGC GGC GGG ACG TAC GGC GTG 720 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 GGA GAC TGG GAC TTG TCT GTC AAC CCA GAG ACG GTC CAG CGG ATC CTC 768 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 AAG CAC TGC TTG CGC CTC GAC CCG ACC ATC TCG AGC GAC GGA ACG ATC 816 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 GAA GGC ATC GAG GTC CTC CGC CAC AAC GTC GGC TTG CGA CCT GCA CGA 864 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 CGA GGC GGA CCC CGC GTC GAG GCA GAA CGG ATC GTC CTG CCT CTC GAC 912 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 CGG ACA AAG TCG CCC CTC TCG CTC GGC AGG GGC AGC GCA CGA GCC GCG 960 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 AAG GAG AAG GAG GTC ACG CTT GTG CAT GCG TAT GGC TTC TCG AGT GCG 1008 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 GGA TAC CAG CAG AGT TGG GGC GCG GCG GAG GAT GTC GCG CAG CTC GTC 1056 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 GAC GAG GCG TTC CAG CGG TAC CAC GGC GCG GCG CGG GAG TCG AAG TTG 1104 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 - 【請求項6】 該核酸がロドスポリジウム トルロイデ
ス(Rhodosporidiumtoruloides) 、ロドスポリジウム
ディオボヴァタム(Rhodosporidium diobovatum) 、ロド
スポリジウム スフェロカルパム(Rhodosporidium spha
erocarpum)、ロドスポリジウム クラトクヴィロヴァエ
(Rhodosporidium kratochvilovae) 、ロドスポリジウム
ルシタニエ(Rhodosporidium lusitaniae) 、ロドスポ
リジウム パルディグネナム(Rhodosporidium paludign
enum) 、ロドスポリジウム ダクリオイダム(Rhodospor
idium dacryoidum) 、ロドスポリジウム バブジェヴァ
エ(Rhodosporidium babjevae) 、またはロドスポリジウ
ム フルヴィアレ(Rhodosporidium fluviale) 由来のD
−アミノ酸オキシダーゼをコード化する、請求項1に記
載の核酸。 - 【請求項7】 該核酸がロドスポリジウム トルロイデ
ス(Rhodosporidiumtoruloides) 由来のD−アミノ酸オ
キシダーゼをコード化する、請求項6に記載の核酸。 - 【請求項8】 請求項1から7のいずれかに記載の核酸
を含むベクター。 - 【請求項9】 請求項1から7のいずれかに記載の核酸
を含む形質転換宿主細胞。 - 【請求項10】 ロドスポリジウム属(genus Rhodospor
idium)由来の単離されたD−アミノ酸オキシダーゼ。 - 【請求項11】 該D−アミノ酸オキシダーゼが以下の
配列番号:3のアミノ酸配列からなる、または該配列番
号:3のアミノ酸配列において少なくとも一のアミノ酸
が同類アミノ酸置換されたアミノ酸配列からなりかつD
−アミノ酸オキシダーゼ活性を有する、請求項10に記
載のD−アミノ酸オキシダーゼ。 配列番号:3 Met His Ser Gln Lys Arg Val Val Val Leu Gly Ser Gly Val Ile Gly 1 5 10 15 Leu Ser Ser Ala Leu Ile Leu Ala Arg Lys Gly Tyr Ser Val His Ile 20 25 30 Leu Ala Arg Asp Leu Pro Glu Asp Val Ser Ser Gln Thr Phe Ala Ser 35 40 45 Pro Trp Ala Gly Ala Asn Trp Thr Pro Phe Met Thr Leu Thr Asp Gly 50 55 60 Pro Arg Gln Ala Lys Trp Glu Glu Ser Thr Phe Lys Lys Trp Val Glu 65 70 75 80 Leu Val Pro Thr Gly His Ala Met Trp Leu Lys Gly Thr Arg Arg Phe 85 90 95 Ala Gln Asn Glu Asp Gly Leu Leu Gly His Trp Tyr Lys Asp Ile Thr 100 105 110 Pro Asn Tyr Arg Pro Leu Pro Ser Ser Glu Cys Pro Pro Gly Ala Ile 115 120 125 Gly Val Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Val His Ala Pro Lys Tyr Cys Gln 130 135 140 Tyr Leu Ala Arg Glu Leu Gln Lys Leu Gly Ala Thr Phe Glu Arg Arg 145 150 155 160 Thr Val Thr Ser Leu Glu Gln Ala Phe Asp Gly Ala Asp Leu Val Val 165 170 175 Asn Ala Thr Gly Leu Gly Ala Lys Ser Ile Ala Gly Ile Asp Asp Gln 180 185 190 Ala Ala Glu Pro Ile Arg Gly Gln Thr Val Leu Val Lys Ser Pro Cys 195 200 205 Lys Arg Cys Thr Met Asp Ser Ser Asp Pro Ala Ser Pro Ala Tyr Ile 210 215 220 Ile Pro Arg Pro Gly Gly Glu Val Ile Cys Gly Gly Thr Tyr Gly Val 225 230 235 240 Gly Asp Trp Asp Leu Ser Val Asn Pro Glu Thr Val Gln Arg Ile Leu 245 250 255 Lys His Cys Leu Arg Leu Asp Pro Thr Ile Ser Ser Asp Gly Thr Ile 260 265 270 Glu Gly Ile Glu Val Leu Arg His Asn Val Gly Leu Arg Pro Ala Arg 275 280 285 Arg Gly Gly Pro Arg Val Glu Ala Glu Arg Ile Val Leu Pro Leu Asp 290 295 300 Arg Thr Lys Ser Pro Leu Ser Leu Gly Arg Gly Ser Ala Arg Ala Ala 305 310 315 320 Lys Glu Lys Glu Val Thr Leu Val His Ala Tyr Gly Phe Ser Ser Ala 325 330 335 Gly Tyr Gln Gln Ser Trp Gly Ala Ala Glu Asp Val Ala Gln Leu Val 340 345 350 Asp Glu Ala Phe Gln Arg Tyr His Gly Ala Ala Arg Glu Ser Lys Leu 355 360 365 - 【請求項12】 該D−アミノ酸オキシダーゼがロドス
ポリジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 、ロドスポリジウム ディオボヴァタム(Rhodospori
dium diobovatum) 、ロドスポリジウム スフェロカル
パム(Rhodosporidium sphaerocarpum)、ロドスポリジウ
ム クラトクヴィロヴァエ(Rhodosporidium kratochvil
ovae) 、ロドスポリジウム ルシタニエ(Rhodosporidiu
m lusitaniae) 、ロドスポリジウム パルディグネナム
(Rhodosporidium paludignenum)、ロドスポリジウム
ダクリオイダム(Rhodosporidium dacryoidum) 、ロドス
ポリジウム バブジェヴァエ(Rhodosporidium babjeva
e) 、またはロドスポリジウム フルヴィアレ(Rhodospo
ridium fluviale) 由来である、請求項10に記載のD
−アミノ酸オキシダーゼ。 - 【請求項13】 該D−アミノ酸オキシダーゼがロドス
ポリジウム トルロイデス(Rhodosporidium toruloide
s) 由来である、請求項12に記載のD−アミノ酸オキ
シダーゼ。
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/903,624 US5877013A (en) | 1997-07-31 | 1997-07-31 | Rhodosporidium D-amino acid oxidase |
EP97305968A EP0897006B1 (en) | 1997-07-31 | 1997-08-06 | Rhodosporidium d-amino acid oxidase |
JP9220474A JPH1156362A (ja) | 1997-07-31 | 1997-08-15 | ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼ |
TW087102897A TW514665B (en) | 1997-07-31 | 1998-02-27 | Rhodosporidium D-amino acid oxidase |
CA002235771A CA2235771C (en) | 1997-07-31 | 1998-06-15 | Rhodosporidium d-amino acid oxidase |
NZ330697A NZ330697A (en) | 1997-07-31 | 1998-06-16 | Structure and expression of the d-amino acid oxidase gene from the yeast rhodosporidium toruloides |
AU71925/98A AU746960B2 (en) | 1997-07-31 | 1998-06-16 | Rhodosporidium D-amino acid oxidase |
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/903,624 US5877013A (en) | 1997-07-31 | 1997-07-31 | Rhodosporidium D-amino acid oxidase |
EP97305968A EP0897006B1 (en) | 1997-07-31 | 1997-08-06 | Rhodosporidium d-amino acid oxidase |
JP9220474A JPH1156362A (ja) | 1997-07-31 | 1997-08-15 | ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼ |
CA002235771A CA2235771C (en) | 1997-07-31 | 1998-06-15 | Rhodosporidium d-amino acid oxidase |
NZ330697A NZ330697A (en) | 1997-07-31 | 1998-06-16 | Structure and expression of the d-amino acid oxidase gene from the yeast rhodosporidium toruloides |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH1156362A true JPH1156362A (ja) | 1999-03-02 |
Family
ID=31499583
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP9220474A Pending JPH1156362A (ja) | 1997-07-31 | 1997-08-15 | ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼ |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5877013A (ja) |
EP (1) | EP0897006B1 (ja) |
JP (1) | JPH1156362A (ja) |
AU (1) | AU746960B2 (ja) |
CA (1) | CA2235771C (ja) |
NZ (1) | NZ330697A (ja) |
TW (1) | TW514665B (ja) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2109194B1 (es) * | 1996-04-22 | 1998-07-16 | Antibioticos Sa | Un procedimiento para producir la enzima d-aminoacido oxidasa de rhodotorula gracilis en celulas hospedantes. |
CN1300759A (zh) * | 1999-12-23 | 2001-06-27 | 复旦大学 | 一种新的多肽-黄素蛋白亚基9和编码这种多肽的多核苷酸 |
GB0201043D0 (en) * | 2002-01-17 | 2002-03-06 | Swetree Genomics Ab | Plants methods and means |
ATE548448T1 (de) | 2002-06-19 | 2012-03-15 | Evonik Degussa Gmbh | D-aminosäure-oxidase aus arthrobacter protophormiae |
CN116121316A (zh) * | 2016-03-02 | 2023-05-16 | 巴斯夫欧洲公司 | 制造l-草胺膦的方法 |
CN112852569B (zh) * | 2021-02-19 | 2023-11-21 | 宁夏农产品质量标准与检测技术研究所(宁夏农产品质量监测中心) | 一种基于路西塔尼亚红冬孢锁掷孢酵母和酿酒酵母的混菌发酵工艺 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0364275B1 (en) * | 1988-10-13 | 1995-05-31 | Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. | D-amino acid oxidase |
IT1252308B (it) * | 1990-12-21 | 1995-06-08 | Antibioticos Spa | Procedimento enzimatico per la produzione di acido 7- amminocefalosporanico e derivati |
IT1247818B (it) * | 1991-01-28 | 1995-01-02 | Barilla Flli G & R | Metodo ed apparecchiatura per la produzione di fette biscottate |
IT1247964B (it) * | 1991-06-03 | 1995-01-05 | Ministero Dell Uni E Della | Processo per la preparazione enzimatica di derivati cefalosporanici |
IT1275909B1 (it) * | 1995-03-07 | 1997-10-24 | Mirella Pilone | Frammento di dna codificante d-amminoacido ossidasi |
US5597704A (en) * | 1995-05-01 | 1997-01-28 | Food Industry Research And Development Institute | Bioconversion of cephalosporin C to glutaryl-7-aminocephalosporanic acid |
-
1997
- 1997-07-31 US US08/903,624 patent/US5877013A/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-06 EP EP97305968A patent/EP0897006B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-08-15 JP JP9220474A patent/JPH1156362A/ja active Pending
-
1998
- 1998-02-27 TW TW087102897A patent/TW514665B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-06-15 CA CA002235771A patent/CA2235771C/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-16 NZ NZ330697A patent/NZ330697A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-06-16 AU AU71925/98A patent/AU746960B2/en not_active Expired
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2235771C (en) | 2008-11-25 |
EP0897006B1 (en) | 2004-12-01 |
AU7192598A (en) | 1999-02-11 |
EP0897006A1 (en) | 1999-02-17 |
CA2235771A1 (en) | 1999-12-15 |
US5877013A (en) | 1999-03-02 |
TW514665B (en) | 2002-12-21 |
NZ330697A (en) | 1999-09-29 |
AU746960B2 (en) | 2002-05-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wong et al. | Molecular properties of pyruvate formate-lyase activating enzyme | |
JP4250716B2 (ja) | 酵素的に活性な組換えカルボキシペプチダーゼbの製造 | |
Pedersen-Lane et al. | High-level expression of human thymidylate synthase | |
KR102584789B1 (ko) | Adh 단백질 계열 돌연변이 및 이의 용도 | |
JPH1156362A (ja) | ロドスポリジウム属由来のd−アミノ酸オキシダーゼ | |
CA2253021C (en) | New mutants of formate dehydrogenase from candida boidinii, new gene sequences encoding these and use of the new formate dehydrogenases | |
JPH0956383A (ja) | 変異型ウリカーゼ、変異型ウリカーゼ遺伝子、新規な組み換え体dna及び変異型ウリカーゼの製造法 | |
EP0505553A1 (en) | Cloned leuconostoc mesenteroides glucose-6-phosphate dehydrogenase genes and method of making same | |
KR100629091B1 (ko) | 브레비박테리움 락토퍼멘툼의 사이토크롬 bd 형 퀴놀 옥시다제 유전자 | |
CN115820706A (zh) | 半乳糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶突变体及其在制备l-赖氨酸中的应用 | |
Val et al. | Polymorphism of the yeast pyruvate carboxylase 2 gene and protein: effects on protein biotinylation | |
JPH0587234B2 (ja) | ||
US6280972B1 (en) | Activator for methanol dehydrogenase and gene thereof | |
US5525497A (en) | Recombinant poly(A) polymerase | |
WO2001000797A1 (fr) | Proteines enzymatiques exemptes d'atomes de soufre | |
DE69731827T2 (de) | D-Aminosäure Oxidase aus Rhodosporidium | |
JP4193986B2 (ja) | ガンマグルタミルシステインの生産方法 | |
Lee et al. | Purification and characterization of a D-amino acid oxidase active against cephalosporin C from Rhodosporidium toruloides | |
JPH11155579A (ja) | フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ遺伝子、新規な組み換え体dna及びフルクトシルアミノ酸オキシダーゼの製造法 | |
JP2984143B2 (ja) | 新規なウリカーゼ遺伝子、新規な組み換え体dna及びウリカーゼの製造法 | |
JP2003230381A (ja) | 黒麹菌のフェリクローム生合成に関与するクラスター遺伝子 | |
KR20230058876A (ko) | 7-Keto-LCA에서 우르소데옥시콜산으로의 전환율을 증진시키는 루미노코쿠스 나버스 균주 유래 7-beta-HSDH의 변이체 및 이를 이용한 우르소데옥시콜산 생산방법 | |
EP0492447A1 (en) | Process for preparing active extracellular superoxide dismutase | |
JP3864303B2 (ja) | 麹菌のフェリクローム又はそのデフェリ体生合成に関与するオルニチンn5−オキシゲナーゼ遺伝子 | |
KR950000304B1 (ko) | 아세틸트란스페라제 유전자 함유 dna |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040802 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20061212 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070308 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20070309 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20070410 |