JPH11514870A

JPH11514870A - 新規な唾液結合タンパク質

Info

Publication number: JPH11514870A
Application number: JP9515606A
Authority: JP
Inventors: ホッジソン，ジョン・エドワード; バーナム，マーティン・カール・ラッセル
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1995-10-16
Filing date: 1996-10-15
Publication date: 1999-12-21
Also published as: US5801234A; WO1997014800A1; EP0857214A1; US5700928A

Abstract

(57)【要約】新規唾液結合タンパク質ポリペプチドおよびかかる新規唾液結合タンパク質をコードしているＤＮＡ（ＲＮＡ）ならびに組み換え法によるかかるポリペプチドの製造方法を開示する。また、感染、詳細には、細菌感染に治療のためのかかる新規唾液結合タンパク質の使用方法も開示する。また、新規唾液結合タンパク質の核酸およびそのポリペプチドの宿主における存在に関連した疾病の検出のための診断アッセイも開示する。また、宿主における新規唾液結合タンパク質ファミリーをコードしているポリヌクレオチドの検出ならびに該ポリペプチドの検出のための診断アッセイも開示する。

Description

【発明の詳細な説明】新規な唾液結合タンパク質本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、かかるポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド、このようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドおよび該ポリヌクレオチドで形質転換される組換え宿主細胞の生成に関する。本発明はまた、かかるポリペプチドの作用を阻害に、および治療における阻害剤の使用に関する。発明の背景微生物の種々の宿主組織への付着に関与し、細菌病原性の重要な因子であると考えられるスタフィロコッカスおよびストレプトコッカスの数種の細胞表面結合タンパク質が、過去１０年で同定された(Ｐatti,Ｊ.Ｍ.、Ａllen,Ｂ.Ｌ.、ＭcＧ avin,Ｍ.Ｊ.およびＨook,Ｍ.、ＭＳＣＲＡＭＭ-Ｍediated Ａdherence of Ｍicr oorganisms to Ｈost Ｔissues[１９９４]Ａnnu．Ｒev．Ｍicrobiol．４８，５８５−６１７を参照のこと)。ストレプトコッカス・サングイス（Ｓtreptococcus sanguis）の細胞表面タンパク質である唾液結合タンパク質(Ｇaneskumar ら、[１９９１]Ｉnfect.Ｉmmun. ５９，１０９３−１０９９)は、ストレプトコッカス・サングイスが口腔内で定着するのに役割を果たすアドヘシン（adhesin）であると考えられる。スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓtaphylococcus aureus）からのタンパク質、例えば、フィブロネクチン結合タンパク質(ＥＰ0294349、ＥＰ0397633、ＷＯ94/18327)、フィブリノーゲン結合タンパク質(ＷＯ94/06830)、コラーゲン結合タンパク質（ＷＯ92/07002）および骨シャロ蛋白結合タンパク質（ＷＯ94/133 10）を抗菌標的として取り扱う、種々の方法が提唱されてきた。結合タンパク質またはその結合フラグメントは、宿主動物中で生物に対する抗体を産生するワクチンとして、または宿主組織への生物の結合を遮断するのに用いることのできる治療用抗体を産生するための抗原として、該生物の宿主組織への結合を遮断するための抗菌剤として用いられる。最近、感染の間のグローバルな遺伝子発現を追跡することを目的とする、いくつかの新規な方法が報告されている(Ｃhuang，Ｓ．ら[１９９３]Ｇlobal Ｒegul ation of Ｇene Ｅxpression in Ｅscherichia coli Ｊ．Ｂacteriol．１７５，２０２６−２０３６，Ｍahan，Ｍ．Ｊ．ら、[１９９３]Ｓelection of Ｂacte rial Ｖirulence Ｇenes Ｔhat Ａre Ｓpecifically Ｉnduced in Ｈost Ｔissu es ＳＣＩＥＮＣＥ２５９，６８６−６８８、Ｈensel,Ｍ.ら、[１９９５]Ｓimu ltaneous Ｉdentification of Ｂacterial Ｖirulence Ｇenes by Ｎegative Ｓ election ＳＣＩＥＮＣＥ２６９，４００−４０３)。おそらく、これらの生物における該方法に必要なグローバルトランスポゾン変異誘発および適当なベクターの開発は極めてゆっくりであるため、これらの新規な技法は、これまで、グラム陽性菌での感染ではなく、グラム陰性病原菌感染で説明されてきた。Ｃhuang ，Ｓ．ら、[１９９３]に記載の方法では、高特異的な活性にまで十分に標識化した細菌性ＲＮＡを得るのに、感染組織から誘導される適量の哺乳動物性ＲＮＡ不含の細菌性ＲＮＡを単離することの困難性を記載している。本発明は新規な方法を用いて哺乳動物宿主の感染の種々の段階で病原体の遺伝子発現を測定するものである。本発明の新規な態様は、感染組織からの細菌性ＲＮＡ調製物のノーザンブロットにて、細菌性リボソームＲＮＡに特異的にアニールする、適宜標識化したオリゴヌクレオチドプローブを使用することにある。ハイブリダイゼーション標的としてより豊富なリボソームＲＮＡを使用することで、ＲＴ-ＰＣＲに用いるための適当な大きさおよび量の細菌性ＲＮＡを感染組織から精製するプロトコルの最適化が大いに容易となる。この方法をスタフィロコッカス・アウレウスにて発現させる遺伝子に適用するのに有用な適当なオリゴヌクレオチドは、５’−gctcctaaaaggttactccaccggc−３’ である。本発明の方法を用いて感染の間に転写される細菌性遺伝子の同定が可能であり、その阻害剤は抗菌治療にて有用性を有する。かかる遺伝子転写の、または得られたｍＲＮＡの後の翻訳の、または対応する発現タンパク質の機能の、特定の阻害剤は、抗菌治療にて有用性を有する。発明の要約本発明はスタフィロコッカス・アウレウス（Ｓ．aureus）ＷＣＵＨ29からの新規な細胞表面タンパク質であって、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する細胞表面タンパク質またはそのフラグメント、アナログまたは誘導体に関する。本発明はまた、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する細胞表面タンパク質のポリペプチドフラグメントまたはその誘導体に関する。本発明のもう一つの態様によれば、かかるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が提供される。特に、本発明は配列番号２に示されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、配列番号２に示されるＤＮＡ配列からなることを特徴とする遺伝子の発現により得られるスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29からの新規なタンパク質、またはそのフラグメント、アナログまたは誘導体を提供する。本発明はまた、配列番号２から誘導される、配列番号３および４を含む、新規なオリゴヌクレオチドに関する。本発明は、配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるポリペプチドのフラグメント、アナログおよび変種をコードする、前記したポリヌクレオチドの変種を包含する。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝的操作される宿主細胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの産生に関する。配列番号１のポリペプチドに対する抗体も提供される。さらには配列番号１のポリペプチドの活性を阻害するアンタゴニストも提供される。さらに、新規な唾液結合タンパク質ポリペプチドを阻害することを必要とする個体を治療するための方法であって、本発明のポリペプチドに対するアンタゴニストを治療上有効量該個体に投与することからなる方法も提供される。本発明のポリペプチドの発現に関連付けられる疾患の診断方法であって、配列番号１のポリペプチドをコードする核酸配列を測定することからなる方法が提供される。宿主から由来のサンプル中の配列番号１のポリペプチドの存在について分析することからなる診断方法が提供される。本発明のさらにもう一つの態様によれば、治療または予防を目的として、例えば抗菌剤またはワクチンとして、本発明のポリペプチドの使用が提供される。本発明のもう一つ別の態様によれば、治療または予防を目的として、特に遺伝的免疫処理を目的として、本発明のポリヌクレオチドの使用が提供される。本発明のもう一つ別の態様によれば、抗菌剤として有用な、そのようなポリペプチドに対する阻害剤が提供される。本発明のもう一つ別の態様は、前記した本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤と、医薬上許容される担体とからなる医薬組成物を提供することである。個々の態様において、本発明は、病原体と感染の後遺症に関与する哺乳動物宿主の間の即時的物理的相互作用（immediate physical interaction）を妨げるための、本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤の使用を提供する。本発明はさらには、そのような使用における医薬の製造に関する。本発明は、細胞表面タンパク質または活性フラグメントの哺乳動物細胞に対する相互作用を妨げる薬物を同定するための薬物のスクリーニング法を提供する。さらには、配列番号１のポリペプチドに結合し、その活性を阻害する化合物の同定方法であって、その細胞表面に該ポリペプチドのための結合手段（該結合手段は、化合物とその結合手段の結合に応じて検出可能なシグナルを供給する能力を有する第２成分に関与している）を発現する細胞を、該結合手段との結合を可能とする条件下、スクリーニングすべき化合物と接触させ；化合物と結合手段との相互作用より生じるシグナルの有無を検出することによって、該化合物が結合し、その結合を活性化するか、阻害するかどうかを決定することからなる方法が提供される。図面の簡単な記載以下の図面は本発明の特定の具体例を示すものである。それは単なる例示にすぎず、明細書中に別途開示されている発明を限定するものではない。図１は新規な唾液結合タンパク質のポリペプチド配列（配列番号１）を示す。図２は図１のポリヌクレオチド配列より推定される新規な唾液結合タンパク質のポリヌクレオチド配列（配列番号２）を示す。発明の詳細な記載本発明はスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29からの新規な細胞表面タンパク質であって、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する細胞表面タンパク質またはそのフラグメント、アナログまたは誘導体に関する。スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29は、１９９５年９月１１日付けで、受入れ番号ＮＣＩＭＢ40771の下、スコットランド、アバディーン、Ｎational Ｃollection of Ｉndustrial and Ｍarine Ｂacteria Ｌtd．(ＮＣＩＭＢ)に寄託された。本発明はまた、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質またはその誘導体に関する。配列番号１のアミノ酸配列は、ストレプトコッカス・サングイスの唾液結合タンパク質（Ｓaliva-Ｂinding Ｐrotein of Ｓtreptococcuss anguis：ＳＳＡＢＳＴＲＰＡ）と３０９アミノ酸にわたって４７％の同一性を示し、エンテロコッカス・ファエカリス（Ｅnterococcus faecalis）の心内膜炎特異的抗原遺伝子（ＥＦＵ03756、Ｌoweら、[１９９５]Ｉnfect．Ｉmmun．６３，７０３−７０６）と同レベルの相同性を有した。以下、ポリペプチドなる語は、細胞表面タンパク質およびそのフラグメント、アナログまたは誘導体をいうのに用いる。本発明の他の態様によれば、かかるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）が提供される。特に、本発明は配列番号２に示されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドを提供する。本発明は、さらには、スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29からの細胞表面タンパク質をコードし、配列番号２に示されるＤＮＡ配列からなることを特徴とするポリヌクレオチドを提供する。本発明はまた、配列番号２に示されるＤＮＡ配列を有する遺伝子を発現することにより得られるスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29からの新規なタンパク質、またはそのフラグメント、アナログまたは誘導体を提供する。本発明はまた、配列番号２の配列から誘導される、配列番号３および４を含む、新規なオリゴヌクレオチドであって、本明細書にて記載されている方法にてＰＣＲプライマーとして作用し、全部がまたはその一部が本明細書にて特定されているスタフィロコッカス・アウレウス遺伝子が感染組織にて転写されるかどうかを測定しうるオリゴヌクレオチドに関する。かかる配列はまた、病原体が到達した感染の段階および型を診断するのに有用性を有するであろう。配列番号２に示されるＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドが、エシェリキア・コリ（Ｅ．coli）中のスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29の染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを配列決定することで得られた。本明細書に記載されている方法により、マウスの感染実験にてそれが確立されたスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29の感染にてインビボにて転写されることが明らかにされた。配列番号２に示されるＤＮＡ配列を用いて、細胞表面をコードするポリヌクレオチドを得るには、典型的には、エシェリキア・コリまたは他の適当な宿主中のスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ29の染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを、該配列から由来する放射標識したオリゴヌクレオチド、好ましくは１７倍量以上の長さのオリゴヌクレオチドでプローブする。ついで、該プローブと同じＤＮＡを有するクローンを高ストリンジェント洗浄を使用して区別できる。こうして原型の配列から設計された配列決定プライマーで同定された個々のクローンを配列決定することにより、該配列を両方の方向に伸長し、完全な遺伝子配列を決定することが可能である。都合よくは、プラスミド・クローンから調製された変性二本鎖ＤＮＡを用いてかかる配列決定を行う。適当な技法は、Ｍaniati s,Ｔ.，Ｆritsch,Ｅ.Ｆ.およびＳambrookら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬaboratory Ｍanual［第２版（１９８９）Ｃold Ｓpring Ｈarbor Ｌab oratory.（ハイブリダイゼーションによるスクリーニング１.９０および変性二本鎖ＤＮＡ鋳型の配列決定１３.７０を参照のこと）により記載されている。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態であっても、またはＤＮＡの形態であってもよく、そのＤＮＡはｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡおよび合成ＤＮＡを包含する。ＤＮＡは二本鎖または一本鎖であってもよく、一本鎖であるならば、コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であってもよい。ポリペプチドをコードするコード配列は、配列番号２に示されるコード配列と同一であってもよく、あるいは遺伝暗号の重複性および縮重性の結果として、同じポリペプチドをコードする異なるコード配列であってもよい。本発明は、配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるポリペプチドのフラグメント、アナログおよび誘導体をコードする前記したポリヌクレオチドの変種を包含する。ポリヌクレオチドの変種はポリヌクレオチドの天然の対立遺伝子変種またはポリヌクレオチドの天然に存在しない変種であってもよい。したがって、本発明は、配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるのと同じポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ならびに該ポリペプチドのフラグメント、誘導体またはアナログをコードするそのようなポリヌクレオチドの変種を包含する。かかるヌクレオチド変種として、欠失変種、置換変種および付加または挿入変種が挙げられる。ポリヌクレオチドは配列番号２のＤＮＡ配列により特徴付けられるコード配列の天然に存する対立遺伝子変種であるコード配列を有していてもよい。当該分野にて知られているように、対立遺伝子は、コードされるポリペプチドの機能を実質的に変えることなく、１またはそれ以上のヌクレオチドが置換、欠失または付加されていてもよいポリヌクレオチド配列の対立形である。成熟ポリペプチド、すなわち、天然の細胞膜タンパク質をコードするポリヌクレオチドは、成熟ポリペプチドのためのコード配列だけを、または成熟ポリペプチドのためのコード配列およびリーダーまたは分泌配列あるいはプロタンパク質配列などの付加的なコード配列を含んでいてもよい。かくして、「ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド」は、ポリペプチドのためのコード配列だけを有するポリヌクレオチドならびに付加的なコードおよび／または非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。したがって、本発明は、成熟ポリペプチドのためのコード配列が、同じ読み枠中で宿主細胞からのポリペプチドの発現および分泌を促進するポリヌクレオチド配列、例えば、細胞からのポリペプチドの移動を調節する分泌配列として機能するリーダー配列と融合していてもよい、ポリヌクレオチドを包含する。リーダー配列を有するポリペプチドはプレタンパク質であり、成熟形のポリペプチドを形成するために宿主細胞により切断されるリーダー配列を有していてもよい。該ポリヌクレオチドはまた、成熟タンパク質に加えて付加的な５’−アミノ酸残基とからなるプロタンパク質をコードしてもよい。プロ配列を有する成熟タンパク質はプロタンパク質であり、タンパク質の不活性な形態である。プロ配列が切断されると、活性な成熟タンパク質が残る。かくして、例えば、本発明のポリヌクレオチドは、成熟タンパク質を、またはプロ配列を有するタンパク質を、またはプロ配列およびプレ配列(リーダー配列) の両方を有するタンパク質をコードすることができる。ペプチドの翻訳後の修飾の間に、ＮＨ₂−末端にあるメチオニン残基を欠失させることができる。したがって、本発明は、本発明のタンパク質のメチオニン含有およびメチオニン不含アミノ末端変種の両方の使用を意図とする。本発明のポリヌクレオチドはまた、本発明のポリペプチドの精製を可能とする、遺伝子の５’または３’末端のいずれかでマーカー配列にフレームにて融合したコード配列を有していてもよい。マーカー配列は、細菌宿主の場合に、マーカーに融合したポリペプチドの精製を提供するための、ｐＱＥシリーズのベクター（Ｑuiagen Ｉnc.より商業的に入手可能）により付与されるヘキサ−ヒスチジン・タグであってもよい。本発明はさらには、配列の間に少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％の同一性がある場合に、前記した配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本発明は、特に、ストリンジェントな条件下で前記したポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。本明細書にて用いる場合、「ストリンジェントな条件」という語は、ハイブリダイゼーションが、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にのみ起こることを意味する。好ましい具体例において、前記したポリヌクレオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドは、配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるポリペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持しているポリペプチドをコードする。本発明はまた、(ａ)配列番号１のアミノ酸を有してなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド；(ｂ)(ａ)のポリヌクレオチドと相補性であるポリヌクレオチド；および（ｃ）(ａ)または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の連続した塩基を有してなるポリヌクレオチド；からなる群より選択されるポリヌクレオチドからなる単離ポリヌクレオチドを提供する。本明細書でいう寄託は、特許手続き上の微生物寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件下で行われている。これらの寄託株は当業者の便宜のためにのみ提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.１１２条の下に要求されるような、寄託が実施可能要件であることを承認するものではない。寄託材料に含まれるポリヌクレオチドの配列ならびにそれによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、出典明示により本明細書の一部とされ、本明細書の配列の記載と不一致であるいずれの事象も調節するものである。寄託材料を製造、使用または販売するには、ライセンスが必要であるが、そのようなライセンスはここで付与されるものではない。配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるポリペプチドに言及する場合の、「フラグメント」、「誘導体」および「アナログ」なる語は、かかるポリペプチドと本質的に同一の生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを意味する。従って、アナログにはプロタンパク質部分を切断して活性成熟ポリペプチドを生成して活性化できるプロタンパク質を包含する。本発明のポリペプチドは組換えポリペプチド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであってもよく、好ましくは、組換えポリペプチドである。配列番号１の推定アミノ酸配列により特徴付けられるポリペプチドのフラグメント、誘導体もしくはアナログは、(ｉ)１またはそれ以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ酸残基（好ましくは保存アミノ酸残基）により置換されたもので、かかる置換アミノ酸残基は遺伝暗号によりコードされたものであっても、なくてもよい、または（ii）１またはそれ以上のアミノ酸残基が置換基を含むもの、または（iii）ポリペプチドが別の化合物、例えばポリペプチドの半減期を伸ばす化合物（例えばポリエチレングリコール）と融合したもの、または（iv ）付加的なアミノ酸がリーダーもしくは分泌配列、またはポリペプチドもしくはプロタンパク質配列の精製に用いられる配列のごとき、ポリペプチドと融合したものであってもよい。かかるフラグメント、誘導体およびアナログは本明細書の教示より当業者の範疇であると考えられる。本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、好ましくは、単離された形態、好ましくは均質にまで精製されている。「単離」された語は、材料がその本来の環境（例えば、天然に存する場合、自然環境）から取り出されていることを意味する。例えば、生体に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されていないが、その天然系で共存する物質の一部またはすべてから分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは単離されている。かかるポリヌクレオチドはベクターの一部とすることができ、および／またはかかるポリヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の一部とすることができ、そのようなベクターまたは組成物はその自然環境の一部ではない点で単離されている。本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子操作された宿主細胞、および組換え技法による本発明のポリペプチドの産生に関する。したがって、本発明のさらなる態様によれば、該ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを宿主中で発現させ、発現産物を回収することによる、組換え技法による本発明のポリペプチドの生成法が提供される。別法として、本発明のポリペプチドは通常のペプチドシンセサイザーにより合成して産生することができる。宿主細胞を、例えば、クローニングベクターまたは発現ベクターであってもよい、本発明のベクターで遺伝子操作（形質導入、形質転換またはトランスフェクション）する。該ベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージ等の形態であってもよい。遺伝子操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化するために、形質転換体を選択するために、または遺伝子を増幅するために、適宜修飾された通常の栄養培地にて培養することができる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現用に選択された宿主細胞で以前より使用されている条件であり、当業者に自明である。適当な発現ベクターは、染色体、非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えば、細菌性プラスミド；ファージＤＮＡ；バキュロウイルス；酵母プラスミド；プラスミドとファージＤＮＡの組み合わせから由来のベクターを包含する。しかし、他のいずれのベクターも、宿主中にて複製可能で、生存しうる限り、用いることができる。適当なＤＮＡ配列を種々の操作によりベクターに挿入することができる。一般に、ＤＮＡ配列が、当該分野にて公知の操作により適当な制限エンドヌクレアーゼ部位（複数でも可）に挿入される。ｍＲＮＡ合成を指令するように、発現ベクター中のＤＮＡ配列を適当な発現制御配列（複数でも可）(プロモーター)に作動可能に連結させる。このようなプロモーターの代表例として、ＬＴＲまたはＳＶ40プロモーター、エシェリキア・コリlacまたはtrp、ファージラムダＰ_Lプロモーターおよび真核生物または原核生物細胞あるいはそのウイルス中で遺伝子の発現を制御することが知られている他のプロモーターが挙げられる。発現ベクターはまた、翻訳開始のためのリボソーム結合部位および転写ターミネーターを含有する。ベクターにはまた、発現を増幅するための適当な配列が含まれていてもよい。加えて、発現ベクターは、１またはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子を含有し、形質転換された宿主細胞を選択するための表現型特性、例えば、真核生物細胞培養のためのジヒドロ葉酸レダクターゼまたはネオマイシン耐性、あるいはエシェリキア・コリにおけるテトラサイクリンまたはアンピシリン耐性を付与することが好ましい。望ましいタンパク質をコードするＤＮＡ配列が、この発現構築物を含有するベクターにより形質転換された宿主細胞中のＲＮＡに転写されるように、遺伝子は、プロモーター、リボソーム結合部位（細菌発現用）および、所望によりオペレーター（総称して、本明細書中、「制御」因子という）の制御下に置くことができる。コード配列はシグナルペプチドまたはリーダー配列を有していてもいなくてもよい。本発明のポリペプチドは、例えば、エシェリキア・コリtacプロモーターまたはタンパク質Ａ遺伝子（spa）プロモーターおよびシグナル配列を用いて発現させることができる。リーダー配列は翻訳後プロセッシングにて細菌性宿主より除去できる。例えば、米国特許第４４３１７３９号；第４４２５４３７号；第４３３８３９７号を参照のこと。プロモーター領域は、ＣＡＴ（クロラムフェニコール・トランスフェラーゼ）ベクターまたは選択可能なマーカーを含む他のベクターを用いていずれか所望の遺伝子より選択することができる。２種類の適当なベクターはＰＫＫ232-8およびＰＣＭ7である。細菌性プロモーターとして、 lacＩ lacＺ、Ｔ3、Ｔ7、gpt、ラムダＰ_R、Ｐ_Lおよびtrpが挙げられる。真核生物性プロモーターとして、ＣＭＶ前初期、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期ＳＶ40、レトロウイルス由来のＬＴＲおよびマウス・メタロチオネイン−Ｉが挙げられる。適当なベクターおよびプロモータの選択は、当業者の範囲内である。制御配列に加えて、宿主細胞の増殖に比例してタンパク質配列の発現の調節を可能にする調節配列を付加することが望ましい。調節配列は当業者に周知であり、例えば、調節化合物の存在を含め、化学的または物理的刺激に応答して遺伝子の発現を作動させるかまたはさせない配列が挙げられる。他のタイプの調節因子、例えばエンハンサー配列もまた、ベクター中に存在し得る。発現ベクターは、特定のコード配列が適当な調節配列と共にベクター中に配置されるように構築され、該コード配列の位置決定および方向は、該コード配列が制御配列の「制御」下で転写されるようになっている(すなわち、制御配列にてＤＮＡ分子に結合するＲＮＡポリメラーゼは、コード配列を転写する)。コード配列の修飾は、この目的を達成するために望ましい。例えば、いくつかの場合、適当な方向を有する制御配列に結合するように、すなわち、読み枠を維持するために、配列を修飾する必要があり得る。制御配列および他の調節配列を、前記のクローニングベクターのごときベクター中に挿入する前に、コード配列に連結してもよい。別法で、コード配列は、すでに制御配列および適当な制限部位を含有する発現ベクター中で直接クローン化することができる。一般に、組換え発現ベクターは、宿主細胞の形質転換を可能にする複製起点および選択マーカー、例えば、エシェリキア・コリ（E．coli）のアンピシリン耐性遺伝子およびエス・セレビシエ（S．cerevisiae）ＴＲＰ１遺伝子、ならびに下流構造配列の転写を指示する高−発現遺伝子由来のプロモーターを包含するであろう。異種構造配列は、翻訳開始および終止配列、および好ましくは翻訳されたタンパク質の細胞周辺腔または細胞外培地中への分泌を指示することができるリーダー配列と共に適当な段階で組み立てられる。所望により、異種配列は、所望の性質、例えば発現された組換え産物の安定化または単純化された精製を付加するＮ末端同定ペプチドを包含する融合タンパク質をコードしてもよい。前記のごとき適当なＤＮＡ配列ならびに適当なプロモーターまたは制御配列を含有するベクターを用いて、適当な宿主にタンパク質を発現させるよう該宿主を形質転換してもよい。より詳細には、本発明はまた、広く前記のような１またはそれ以上の配列を含む組換え構築物も包含する。該構築物は、その中に本発明の配列が順方向もしくは逆方向に挿入されているベクター、例えばプラスミドまたはウイルスベクターを含む。この具体例の好ましい態様において、該構築物は、さらに、例えば作動可能に配列に連結されたプロモーターを包含する調節配列を含む。多数の適当なベクターおよびプロモーターが当業者に知られており、商業的に入手可能である。以下のベクターは、例として提供する。細菌性：ｐET-3ベクター(Stratagene) 、ｐQE70、ｐQE60、ｐQE-9(Qiagen)、pbs、ｐD10、phagescript、psiX174、pblu escriptSK、pbsks、ｐNH8A、ｐNH16a、ｐNH18A、ｐNH46A(Stratagene);ptrc99a、ｐKK223-3、ｐKK233-3、ｐDR540、ｐRIT5(Pharmacia)。真核生物：ｐBlueBacIII (Invitrogen)、ｐWLNEO、ｐSV2CAT、ｐOG44、ｐXT1、ｐSG(Stratagene)、ｐSVK3 、ｐBPV、ｐMSG、ｐSVL(Pharmacia)。しかしながら、宿主内で複製でき、生存できる限り、いずれの他のプラスミドまたはベクターを用いてもよい。クローニングのための組換えＤＮＡベクターおよびそれらが形質転換できる宿主細胞の例は、バクテリオファージ１(イー・コリ)、pBR322(イー・コリ)、pACYC17 7(イー・コリ)、ｐKT230(グラム陰性細菌)、ｐGV1106(グラム陰性細菌)、ｐLAFR 1(グラム陰性細菌)、ｐME290(イー・コリではないグラム陰性細菌)、ｐHV14(イー・コリおよびバチルス・ズブチリス(Bacillus subtilis))、ｐBD9(バチルス(Bac illus))、ｐIJ61(ストレプトミセス(Streptomyces))、ｐUC6(ストレプトミセス) 、YIp5(サッカロミセス(Saccharomyces))、バキュロウイルス昆虫細胞系、YCp19 （サッカロミセス）を包含する。一般に、”DNA Cloning”:Vols.I&II，Glover ら編、IRL Press Oxford(1985)(1987)および;T.Maniatisら（”Molecular Cloni ng”Cold Spring Harbor Laboratory(1982)参照のこと。いくつかの場合、宿主生物からのポリペプチドの分泌、分泌シグナルのその後の開裂を引き起こす配列を付加することが望ましい。ポリペプチドは、適当なプロモーターの制御下で宿主細胞中に発現され得る。また、無細胞翻訳系を用いて、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを使用し、かかるタンパク質を生産することもできる。原核生物および真核生物宿主での使用のための適当なクローニングおよび発現ベクターは、Sambrookら、Molecular Cl oning: A Laboratory Manual、第２版、Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)によって記載されており、出典明示してこの開示を本明細書の一部とみなす。適当な宿主株の形質転換および適当な細胞密度までの宿主株の増殖後、選択されたプロモーターを適当な手段（例えば、温度シフトまたは化学的誘導）によって誘導し、細胞をさらに一定時間培養する。細胞は、典型的には、遠心分離によって回収し、物理的または化学的手段による破壊し、得られる粗抽出物をさらなる精製用に保持する。タンパク質の発現において用いられる微生物細胞は、凍結−解凍サイクル、音波処理、機械的破壊、または細胞溶解剤の使用を包含するいずれの慣用的方法によっても破壊でき、かかる方法は当業者によく知られている。選択された発現系および宿主に依存して、本発明のポリペプチドは、それにより目的のポリペプチドが発現される条件下で、前記の発現ベクターによって形質転換された宿主細胞の増殖により生産され得る。次いでポリペプチドを宿主細胞から単離し、精製する。発現系が生育培地中にポリペプチドを分泌する場合、ポリペプチドを直接、培地から精製することができる。ポリペプチドが分泌されない場合、細胞ライゼートから単離、または細胞膜フラクションから回収する。ポリペプチドが細胞表面に局在する場合、細胞全体または単離した膜を所望の遺伝子産物のアッセイ可能な資源として使用できる。イー・コリのごとき細菌宿主中に発現されたポリペプチドは、封入体からの単離および再生を必要とし得る。成熟タンパク質が超発現の不溶性産物を導く非常に疎水性の領域を有する（通常Ｃ末端にて）場合、疎水性領域を欠失した端切断されたタンパク質を発現することが望ましい。適当な増殖条件および回収方法の選択は、当該分野内である。ポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含む方法により、組換え細胞培養物から回収および精製できる。必要ならば、成熟タンパク質の配置を完全なものとするのにタンパク質再生工程を用いることができる。最終的に高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を最終精製工程に用いることができる。組換え生成方法において用いられる宿主により、本発明のポリペプチドはグリコシル化するかまたは非グリコシル化されうる。本発明のポリペプチドはまた開始メチオニンアミノ酸残基を含み得る。「レプリコン」は、インビボでのＤＮＡ複製の自律的単位として機能する、すなわち、その自らの制御下で複製することのできる、遺伝的エレメント（たとえば、プラスミド、染色体、ウイルス）である。「ベクター」は、プラスミド、ファージ、またはコスミドなどのレプリコンであり、連結したセグメントの複製ができるように、これらに他のＤＮＡセグメントを連結させることができる。「二本鎖ＤＮＡ分子」は、弛緩型および超らせん型の両方の二本鎖ヘリックスにおけるデオキシリボヌクレオチド（塩基アデニン、グアニン、チミン、またはシトシン）のポリマー形態を意味する。この用語は、分子の一次的および二次的構造を意味するのみであり、特定の三次元構造を限定するものではない。それゆえ、この用語は、とりわけ、直鎖状ＤＮＡ分子(たとえば、制限フラグメント)、ウイルス、プラスミドおよび染色体に見られる二本鎖ＤＮＡを含む。特定の二本鎖ＤＮＡ分子の構造を議論する場合、配列は、ＤＮＡの非転写鎖（すなわち、ｍＲＮＡと相同性のある配列を有する鎖）にそって５’から３’方向にある配列のみを記載する慣例に従って明細書中に記載される。特定のタンパク質の「コーディング配列」または特定のタンパク質を「コードするヌクレオチド配列」のＤＮＡは、適当な調節配列の制御下に置かれると、転写され、タンパク質に翻訳されるＤＮＡ配列である。「プロモーター配列」は、細胞中でＲＮＡポリメラーゼと結合でき、下流（３ ’方向）コーディング配列の転写を開始できるＤＮＡ調節領域である。本発明を定義する目的では、プロモーター配列は、コーディング配列の翻訳開始コドン（たとえば、ＡＴＧ）により３’末端で境界をひき、上流（５’方向）にのび、バックグラウンドよりも上の検出可能なレベルで転写を開始するのに必要な塩基またはエレメントの最小数を含む。プロモーター配列中に、転写開始部位(通常、ヌクレアーゼＳ１でマッピングにより定義される)、ならびにＲＮＡポリメラーゼの結合に関与するタンパク質結合ドメイン（コンセンサス配列）が見出される。真核プロモーターは、しばしば、いつもでなないが、「ＴＡＴＡ」ボックスおよび「ＣＡＴ」ボックスを含む。原核プロモーターは、−１０および−３５コンセンサス配列に加え、シャイン−ダルガノ配列を含む。ＤＮＡ「制御配列」は、プロモーター配列、リボソーム結合部位、ポリアデニレーションシグナル、転写終結配列、上流調節ドメイン、エンハンサー、および宿主細胞中でコーディング配列の発現（すなわち、転写および翻訳）を提供するようなものを、ひとまとめにして意味する。制御配列は、ＲＮＡポリメラーゼがプロモーター配列に結合し、コーディング配列をｍＲＮＡに転写し、ついでｍＲＮＡをコーディング配列にコードされるポリペプチドに翻訳する時、細胞中でコーディング配列の「発現を制御」する。「宿主細胞」は、トランスフォームまたはトランスフェクトされた細胞であるか、または、外来ＤＮＡ配列によりトランスフォーメーションまたはトランスフェクション可能な細胞である。該外来ＤＮＡが細胞膜中に導入されている時、細胞は外来ＤＮＡにより「トランスフォーム」されている。外来ＤＮＡは、染色体ＤＮＡ中に組み込まれ（共有結合して）細胞のゲノムを構成していてもよく、していないくてもよい。たとえば、原核細胞および酵母では、外来ＤＮＡは、プラスミドなどのエピソームエレメントとして保持され得る。真核細胞についてみると、安定にトランスフォームまたはトランスフェクトされた細胞は、染色体複製により娘細胞に遺伝するように、外来ＤＮＡが染色体中に組み込まれているものである。この安定性は、細胞系、または、外来ＤＮＡを含む娘細胞の集団からなるクローンを確立する、真核細胞の能力により、示される。「クローン」は、単一細胞または有糸分裂による共通の祖先由来の細胞の集団である。「細胞系」は、多世代にわたりインビトロで安定に生育できる一次細胞のクローンである。ＤＮＡ構成の「異種」領域は、天然の他の分子と関連して見出されない、他のＤＮＡ分子中または他のＤＮＡ分子に結合する、ＤＮＡの同定可能なセグメントである。本発明のさらに別の態様によれば、たとえば、抗菌剤またはワクチンのような治療的または予防的目的のための本発明のポリペプチドの使用が提供される。本発明の他の態様によれば、治療的または予防的目的、特に遺伝的免疫感作のための本発明のポリペプチドの使用が提供される。発現時にコードされたタンパク質を、抗菌剤のスクリーニングのための標的として用いることができる。加えて、コードされたタンパク質のアミノ末端領域をコードするＤＮＡ配列またはシャイン−ダルガノまたは他のそれぞれのｍＲＮＡの転写促進配列を、アンチセンス配列を構築し、対象のコーディング配列の発現を制御するのに用いることができる。本発明のさらに他の態様によれば、たとえば、抗菌剤として有用な該ポリペプチドに対する阻害剤が提供される。特に、該ポリペプチドに対する抗体が提供される。本発明の他の態様は、上記の本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤および医薬上許容される担体を含む医薬組成物である。本発明の特定の態様では、感染の余病に関与する病原体と哺乳類宿主間の即時物理的相互作用を妨げるための本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻害剤の使用を提供する。特に本発明の分子は、：ｉ）細菌、特にグラム陽性細菌の内在装置上の哺乳類細胞外マトリックスタンパク質または創傷部の細胞外マトリックスタンパク質への付着の防止；ｉｉ）たとえば、哺乳類チロシンキナーゼのホスホリレーションの開始による、細胞表面タンパク質媒介の哺乳類細胞侵入のブロック； iii）組織損傷を媒介する哺乳類細胞外マトリックスタンパク質と細菌細胞表面タンパク質間の細菌的付着のブロック；ｉｖ）内在装置の埋め込みまたは他の外科的技術以外で開始される感染における病原の通常の進行のブロック；に用いることができる。本発明は、さらに、該使用のための医薬の製造に関する。ポリペプチドは、宿主の予防接種のための抗原として、たとえば細菌の損傷組織への付着をブロックすることにより、細菌の進入に対し保護する特異的抗体を生成するのに、用いることができる。組織損傷の例には、たとえば、機械的、化学的または熱的損傷によりまたは内在装置の埋め込みにより引き起こされる皮膚または結合組織中の創傷、口腔、乳腺、尿道または膣などの粘膜における創傷が含まれる。ポリペプチドまたはそれらを発現する細胞をそのほかに抗体を生成するための免疫原として用いることができる。これらの抗体は、たとえば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。抗体なる用語は、キメラ、１本鎖、およびヒト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントまたはＦａｂ発現ライブラリーの産物を包含する。本発明のポリペプチドに対して生じる抗体は、ポリペプチドを動物に直接注射することによりまたはポリペプチドを動物、好ましくはヒト以外の動物に投与することにより得ることができる。このように得られた抗体は、ついで、ポリペプチドそれ自体に結合する。このように、ポリペプチドのフラグメントのみをコードする配列でさえ、完全な天然のポリペプチドに結合する抗体を生成するのに用いることができる。ついで、該抗体をそのポリペプチドを発現する組織からポリペプチドを単離するのに用いることができる。ポリペプチド誘導体は、抗原的に免疫的に等価な誘導体を包含し、本発明の特定の態様を形成する。本明細書において用いる「抗原的に等価な誘導体」なる用語は、本発明にしたがうタンパク質またはポリペプチドに対して作られたとき、病原体および哺乳類宿主間の即時的物理的相互作用を妨げる特定の抗体により、特異的に認識されるポリペプチドまたはその等価物を包含する。本明細書において用いる「免疫的に等価な誘導体」なる用語は、ペプチドまたは、脊椎動物において抗体を作成するのに適した状態で用いられたとき、抗体が病原と哺乳類宿主間の即時的物理的相互作用を妨げる、ポリペプチドまたはその等価物を包含する。特に、本発明の天然の細胞表面タンパク質またはポリペプチドフラグメントよりもわずかに長いかまたはわずかに短い誘導体を用いることができる。加えて、一つまたはそれ以上のアミノ酸残基が修飾されたポリペプチドを用いることができる。そのようなペプチドは、たとえば、アミノ酸の置換、付加、または転移、またはそれらの化学的修飾により、調製できる。すべてのそのような置換および修飾は、一般的にペプチド化学の分野において当業者に周知である。抗原的にまたは免疫的に等価な誘導体またはそれらの融合タンパク質などのポリペプチドは、抗原として、マウスまたはラットまたはニワトリなどの他の動物を免疫化するのに用いることができる。融合タンパク質は、ポリペプチドに安定性を提供する。抗原は、たとえば接合により、免疫原性担体タンパク質、たとえば、ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)、キーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫＬＨ）と結合できる。別に、タンパク質またはポリペプチド、またはそれらの抗原的または免疫的等価ポリペプチドの多数のコピーを含む多数の抗原性タンパク質は、十分抗原性であり、担体の使用を回避するように免疫原性を改良することができる。モノクローナル抗体の調製には、連続的細胞系培養により得られる抗体を提供するいずれの方法も用いることができる。例えば、ハイブリドーマ法(Ｋohler, Ｇ.およびＭilstein,Ｃ.、1975,Ｎature 256：495-497)、トリオーマ法、ヒトＢ -細胞ハイブリドーマ法（Ｋozborら、1983,Ｉmmunology Ｔoday ４：72）およびヒトモノクローナル抗体を生成するためのＥＢＶ-ハイブリドーマ法（Ｃoleら、 1985，Ｍonoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy，７７−９６頁、Ａlan Ｒ.Liss,Inc.）が挙げられる。一本鎖抗体を生成するのに記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）を適用して、本発明の免疫原性ポリペプチド産物に対する一本鎖抗体を産生できる。ＫohlerおよびＭilstein(1975,Ｎature,256,495-497)の方法を用いて、免疫化哺乳類由来の抗体含有細胞をミエローマ細胞と融合させ、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を作成する。ハイブリドーマを一つまたはそれ以上のオリジナルポリペプチドおよび／または融合タンパク質を用いて、スクリーンし、高結合親和性および他のスタフィロコッカス族と好ましい交差反応を有する細胞系を選択する。モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞系は、本発明の他の態様である。別法として、ファージディスプレイ技術を用い、抗Ｆｂｐの保持に関してスクリーニングされたヒトのリンパ球のＰＣＲ増幅ｖ遺伝子のレパートリー由来の、あるいは未処理のライブラリー由来のポリペプチドに対して結合活性を有する抗体遺伝子を選択ことができる。[マキャファティー、ジェイ（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｊ．）ら、(１９９０)，Ｎａｔｕｒｅ，３４８，５５２−５５４；マークス、ジェイ（Ｍａｒｋｓ，Ｊ.）ら、(１９９１)，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０，７７９−７８３］これらの抗体の親和性は鎖再配列［クラクソン、ティー（Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．）ら、(１９９１)，Ｎａｔｕｒｅ３５２，６２４−６２８］によって向上されうる。抗体は、ポリペプチドおよび／または融合タンパク質に対する高親和性について再びスクリーニングされるべきである。上述のごとく、最終的な抗体のフラグメントが調製されうる。抗体はＭｒが約１５０、０００の無傷の抗体またはその誘導体、例えば、ＦａｂフラグメントあるいはＦｖフラグメント［例えば、スケラ、エー（Ｓｋｅｒｒａ，Ａ.）およびプラクスン、エー(Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ.)(１９８８)，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４０，１０３８−１０４０．に記載］である。２つの抗原結合ドメインが存在するならば、各ドメインを、「二特異的」抗体と称される、異なるエピトープに向けることができる。本発明の抗体は従来の方法、例えば、確立されたモノクローナル抗体技術［コーラー、ジー（Ｋｏｈｌｅｒ，Ｇ.）およびマイルスタイン、シー(Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ.)(１９７５)，Ｎａｔｕｒｅ２５６，４９５−４９７］あるいは組み換え法、(例えば、コンビナトリアルライブラリー［例えば、フセ、ダブル．ディー（Ｈｕｓｅ，Ｗ．Ｄ.）ら、 (１９８９)，Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６，１２７５−１２８１．に記載]）を用いて調製されてもよい。好ましくは、抗体は、本発明の該ポリペプチドの発現について上述されたような適当な発現系において該抗体をコードするＤＮＡポリマーを発現することによって生産される。その発現系のためのベクターの選択は、宿主によって一部決定される。そのような宿主は、イー・コリ（好ましくは、Ｂ株）またはストレプトマイセス種の様な原核細胞、あるいはマウスＣ１２７、マウスミエローマ、ヒトＨｅＬａ、チャイニーズハムスター卵巣、糸状あるいは単細胞菌、または昆虫細胞のような真核細胞であってもよい。そのような宿主はまた、トランジェニック動物あるいはトランジェニック植物［例えば、ハイアット，エー（Ｈｉａｔｔ，Ａ.）ら、(１９８９)，Ｎａｔｕｒｅ３４，７６−７８．に記載］であってもよい。適切なベクターは、プラスミド、バクテリオファージ、コスミドおよび、例えば、バキュロウィルスおよび痘疹から誘導された組み換えウィルスを含む。Ｆａｂフラクグメントはまた、酵素処理（例えば、パパインを用いてＦｃ部分からＦａｂ部分を切断すること）によってその親モノクローナル抗体から生産することもできる。好ましくは、抗体あるいはその誘導体を患者において免疫性が低減するように修飾する。例えば、患者がヒトならば、該抗体は、最も好ましくは、「ヒト化」されてよい。ここで、ハイブリドーマ誘導抗体の相補性決定部位はヒトモノクローナル抗体に移植されている［例えば、ジョーンズ、ピー（Ｊｏｎｅｓ，Ｐ.）ら、(１９８６)，Ｎａｔｕｒｅ，３２１，５２２−５２５；あるいはテンペスト（Ｔｅｍｐｅｓｔ）ら、(１９９１)，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９，２６６ −２７３．に記載］。修飾は「ヒト化」に限定される必要はなく、他の霊長類配列［例えば、ニューマン、アール（Ｎｅｗｍａｎ，Ｒ.）ら、(１９２２)，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１０，１４５５−１４６０.］を用いてもよい。ヒト化モノクローナル抗体、あるいは結合部位を有するそのフラグメントは本発明の個々の態様を形成する。本発明は、細胞表面タンパク質あるいは活性フラグメントと哺乳類細胞との相互作用を妨害する薬剤を同定するため薬剤のスクリーニング方法であって、該薬剤の存在下で、哺乳類細胞あるいは膜調製物を標識化したポリペプチドとインキュベートし、および薬剤のこの相互作用を遮断する能力を測定することからなる方法を提供する。遺伝的免疫化における本発明のポリヌクレオチドの使用は、好ましくは、筋肉へのプラスミドＤＮＡの直接注射[ウォルフ（Ｗｏｌｆｆ）ら、Ｈｕｍ．ＭｏｌＧｅｎｅｔ１９９２，１：３６３，マントープ（Ｍａｎｔｈｏｒｐｅ）ら、Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１９６３：４、４１９]、特異的タンパク質担体と複合させたＤＮＡのデリバリー[ウー（Ｗｕ）ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９８９：２６４，１６９８５]、リン酸カルシウムとのＤＮＡの共沈[ベンベニスティーアンドレシェフ(Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｙ＆Ｒｅｓｈｅｆ)、ＰＮＡＳ，１９８６：８３，９５５１]、種々の形態のリポソーム中へのＤＮＡのカプセル化［カネダ（Ｋａｎｅｄａ）ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１９８９：２４３、３７５]、粒子衝撃［タン（Ｔａｎｇ）ら、Ｎａｔｕｒｅ１９９２，３５６：１５２，アイゼンンブラウン(Ｅｉｓｅｎｂｒａｕｎ)、ＤＮＡＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９９３，１２：７９１］およびクローン化したレトロウィルスベクターを用いたインビボ感染［シーガー（Ｓｅｅｇｅｒ）ら、ＰＮＡＳ１９８４：８１，５８４９］などの適切なデリバリー方法を利用するであろう。筋肉トランスフェクションのための適切なプロモーターはＣＭＶ，ＲＳＶ，ＳＲａ，アクチン、ＭＣＫ，アルファグロビン、アデノウィルスおよびジヒドロ葉酸レダクターゼを含む。治療あるいは予防において、有効な薬剤は、注射組成物、例えば、滅菌水性分散液、好ましくは等張液として患者に投与される。別法として、該組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟膏剤、点眼剤、点耳剤、洗口剤、含浸ガーゼおよび縫合糸、およびエアロゾルなどの局所的塗布用に処方されてもよく、または従来の添加剤、例えば、保存剤、薬剤浸透を助ける溶液、および軟膏ならびクリーム中の緩和剤を含有してもよい。そのような局所処方はまた、適合する従来の担体、例えば、クリームあるいは軟膏の基剤、およびローションのためのエタノールならびにオレイルアルコールを含んでもよい。そのような担体は、処方約１重量％から約９８重量％までを構成してもよい。より一般的には、それらは処方約８０重量％までを構成する。ヒト患者に投与するために、該有効薬の日用量レベルは０．０１から１０ｍｇ／ｋｇ、典型的には、約１ｍｇ／ｋｇである。医者はどんな場合でも、個々の患者に最も適した、年齢、体重および個々の患者の応答によって変化する実際の用量を決定する。上記の用量は平均的なケースの典型例である。もちろん、より多いあるいはより少ない用量範囲が良い個々の事例があり、そのような事例も、本発明の範疇である。内在装置は、外科移植、補綴およびカテーテル（すなわち、患者の体内に導入され、長い時間その位置に留まる装置）を含む。そのような装置は、例えば、人工関節、心臓弁、ペースメーカー、血管移植片、血管カテーテル、脳髄液シャント、尿道カテーテル、持続的歩行腹膜透析（ＣＡＰＤ）などを含む本発明の組成物は、関連する細菌に対して全身的に効果が達成されるように内在装置を挿入する直前に注射によって投与されてもよい。治療は手術後、装置が体内にある間持続されてもよい。加えて、組成物を用いて、手術用の手術周辺カバーを広げて、スタフィロコッカス創傷感染を防止することもできる。多くの整形外科医は、人工関節を着けた患者は、菌血症を起こしうる歯科治療の前に抗生物質による予防を考慮すべきだと考える。後の重い感染は、重篤な合併症であり、時には、人工関節を喪失し、顕著な罹患率と死亡率を伴う。したがって、該活性物質を予防抗生物質の代用品として使用することにまで拡張することが可能であろう。上述の療法に加えて、本発明の組成物は一般的に、創傷組織に曝されているマトリックスタンパク質に細菌が付着することを防止するための創傷治療薬として使用されてもよいし、歯科治療において、抗生物質的予防に代わって、あるいはそれと組み合わせて、予防的に使用できる。また、本発明の組成物は、挿入直前に内在装置を浸すために使用されてもよい。有効薬は、創傷あるいは内在装置を浸すためには、０．１μｇ／ｍｌから１０ｍｇ／ｍｌまでの濃度であるのが好ましい。ワクチン組成物は、簡便には、注射可能な形態である。従来のアジュバントは免疫応答を高めるためにもちいられるであろう。予防接種のための適切内在用量は、０．５から５μｇ／ｋｇ抗原であり、そのような用量は好ましくは、１から３週間の間隔で１から３回投与される。示した用量の範囲において、本発明の化合物で、適当な患者への投与を妨げるような不利な毒性効果は観察されないであろう。上述の抗体はまた、細胞表面タンパク質を含む細菌の存在を検出する診断試薬として使用してもよい。以下の実施例の理解を容易にするために、特定のは汎用する方法および／あるいは用語を記載する。「プラスミド」は、小文字ｐを前に、および／または大文字および／または数字が続くように表される。本明細書の出発プラスミドは商業上入手可能であるか汎用されているか、あるいは公表された手法でもって、入手可能なプラスミドから構築できるものである。加えて、記載されているプラスミドと等価なプラスミドは当該分野にて公知であり、当業者には自明である。ＤＮＡの「消化」とは、ＤＮＡのある塩基配列にのみ作用する制限酵素によるＤＮＡの触媒的切断をいう。本明細書で用いられる種々の制限酵素は商業上入手可能であり、当業者に知られているであろう、それらの反応条件、補因子およびその他の必要事項を用いた。分析の目的では、典型的には、０．１μｇのプラスミドあるいはＤＮＡフラグメントを約２単位の酵素とともに２０μｌの緩衝溶液中で用いた。プラスミド構築のためのＤＮＡフラグメントを単離する目的では、典型的には、５−５０μｇＤＮＡが、大容量にて２０−２５０単位の酵素で消化される。特定の制限酵素に対する適当な緩衝溶液および基質濃度は製造者によって特定される。３７℃で約一時間のインキュベーション時間は通常使用されるが、供給者の指導に従い変わってもよい。消化後、所望のフラグメントを単離するため、反応物をポリアクリルアミドゲル上で直接電気泳動に付す。切断フラグメントのサイズ分離を、ゲッデル、ディー(Ｇｏｅｄｄｅｌ，Ｄ.) ら［ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ.，８：４０５７(１９８０)］によって表せられるように、８パーセントのアクリルアミドゲルを用いて行う。「オリゴヌクレオチド」は、化学的に合成される一本鎖ポリデオキシヌクレオチドあるいは二つの相補性ポリデオキシヌクレオチド鎖のどちらかをいう。そのような合成ポリデオキシヌクレオチドは５’リン酸を持たず、したがって、リン酸をＡＴＰとともに添加することなしにキナーゼ存在下で別のオリゴヌクレオチドと連結しないであろう。合成オリゴヌクレオチドは脱リン酸化されていないフラグメントと連結するであろう。「連結」とは、二つの二本鎖核酸フラグメント［マニアティス、ティー（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ）ら、Ｉｄ.，ｐ．１４６］間でリン酸ジエステル結合を形成する過程のことをいう。特記しない限り、連結は既知の緩衝剤および条件を用い、連結させるべき略等モル量のＤＮＡフラグメント０．５ｕｇ当たり、１０単位のＴ４ＤＮＡリガーゼ（「リガーゼ」）で達成されてもよい。実施例１エス・アウレウスＷＣＵＨ２９由来の新規細胞表面タンパク質をコードしているＤＮＡの単離イー・コリ中のエス・アウレウスＷＣＵＨ２９の染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを配列決定することにより、配列番号：２に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチドを得た。いくつかの場合、重複するエス・アウレウスＷＣＵＨ２９ＤＮＡを含んでいる２個またはそれ以上のクローンからの配列決定データを用いて配列番号：２の連続したＤＮＡ配列を構築した。常套的方法、例えば下記によりライブラリーを調製してもよい：方法１および２標準的方法によりスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９株（ＮＣＩＭＢ４０７７１）から全細胞ＤＮＡを単離し、下記の２つの方法のいずれかによりサイズ分画する。方法１注射針に通すことにより全細胞ＤＮＡを機械的に剪断して、標準的方法に従ってサイズ分画する。１１ｋｂまでのサイズのＤＮＡフラグメントをエキソヌクレアーゼおよびＤＮＡポリメラーゼでの処理により平滑末端化し、ＥｃｏＲI リンカーを付加する。ＥｃｏＲI で切断しておいたベクターラムダＺａｐII中にフラグメントを連結し、標準的方法によりライブラリーをパッケージングし、イー・コリをパッケージングされたライブラリーに感染させる。標準的方法によりライブラリーを増幅する。方法２全細胞ＤＮＡを４種の制限酵素の組み合わせ（ＲｓａI、ＰａlI、ＡｕlＩおよびＢｓｈ１２３５I）を用いて部分加水分解し、標準的方法によりサイズ分画する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡに連結し、次いで、ＥｃｏＲI で切断しておいたベクターラムダＺａｐII中にフラグメントを連結し、標準的方法によりライブラリーをパッケージングし、イー・コリをパッケージングされたライブラリーに感染させる。標準的方法によりライブラリーを増幅する。実施例２感染の間におけるスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９由来の遺伝子発現の検出スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９での感染４日目のマウスの鼠蹊部からの壊死脂肪組織を効果的に破砕し、カオトロピック剤およびＲＮＡａｓｅ阻害剤の存在下で処理して動物および細菌ＲＮＡの混合物を得る。安定な調合品および高収量の細菌ＲＮＡを得るための破砕および処理の最適条件は、ノーザンブロットによるスタフィロコッカス・アウレウス１６ＳＲＮＡに特異的な放射性標識オリゴヌクレオチドへのハイブリダイゼーションの使用によるものである。得られたＲＮＡａｓｅ不含、ＤＮＡａｓｅ不含、ＤＮＡおよびタンパク質不含のＲＮＡ調合品は、スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９の各遺伝子配列から設計した独特なプライマー対を用いる逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）に適する。ａ）マウス動物感染モデルからのスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９で感染した組織の単離寒天培養プレートから単離した個々のスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９のコロニーを体積１０ｍｌの滅菌栄養ブロス（Ｎo.2Ｏxoid）に撒く。培養物を３７℃で１６ないし２０時間好気的にインキュベーションする(静置培養) 。４週齢のマウス（メス、１８ないし２２ｇ、ＭＦ１株）を感染させる。このスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９のブロス培養物０．５ｍｌ（約１０⁸ ｃｆｕ／ｍｌまでブロスを希釈）を前方の右の下方四分円（鼠蹊部）に皮下注射することにより感染させる。感染後最初の２４時間はマウスを規則的にモニターすべきであり、次いで、研究終了まで毎日モニターすべきである。全身感染の徴候、すなわち昏睡、毛の逆立ち、群からの孤立を有する動物を詳細にモニターすべきであり、徴候が瀕死状態にまで進行した場合、すぐに動物を選択すべきである。傷害進行の可視的外部徴候は感染後２４ないし４８時間で現れるであろう。動物の腹部の検査により、皮膚下の膿瘍の盛り上がった輪郭が示されるであろう。局在化した傷害は右の下方四分円に残るはずであるが、場合によっては左の下方四分円に広がるかもしれず、上昇して胸部に至るかもしれない。かかる場合、罹病動物をすぐに選択し、可能ならば組織試料を採る。動物を選択しない場合、膿瘍上にある壊死皮膚組織が脱落し、腹部筋肉壁が露出するかもしれない。感染から約９６時間後、二酸化炭素窒息を用いて動物を殺す。死亡時と組織処理／保存時の隔たりを最小化するため、マウスを群としてではなく個別に殺すべきである。死亡した動物を背を下にして置き、毛を７０％アルコールでおおまかに拭く。左の下方四分円の皮膚から上部へと、次いで、胸部をを通るように、はさみを用いて最初の切開を行う。腹部の右の下方四分円の株を切ることにより切開を完了する。腹膜を貫通しないように注意する。垂れ下がった皮膚を鉗子で持ち、皮膚を静かに腹部から引き上げる。腹膜を覆っているが筋肉シートを完全には貫通していない膿瘍が露出しており、内蔵に穴をあけないように注意しながらこれを切除する。液体窒素中での瞬間凍結の前に、膿瘍／筋肉シートおよび他の感染組織を断片に切る必要があるかもしれず、そのことによりプラスチック製収集バイアル中での貯蔵が簡単になる。ｂ）感染組織試料からのスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９ＲＮＡの単離２ｍｌのスクリューキャップ試験管中の４ないし６種の組織試料それぞれ約０．５ないし０．７ｇ）をー８０℃の貯蔵庫からドライアイスエタノール浴中に取り出す。微生物学的安全キャビネット中で、試料をドライアイスエタノール浴中で冷却しながら試料を個々に破砕する。組織試料中の細菌を破砕するために、１ｍｌのＴＲＩzol試薬（Ｇibco ＢＲＬ,Ｌife Ｔehnologies）を添加し、次いで、十分な０．１ｍｍジルコニア／シリカビーズを試験管をほとんど満たすまで添加し、密封性を良好にし、エアロゾル発生をなくすために、ねじ山にビーズが入らないように注意しながら蓋を戻す。次いで、Ｍini-ＢeadＢeaterＢＸ-４型（Ｂiospec Ｐro ducts）を用いて試料をホモジナイズする。壊死脂肪組織を５０００ｒｐｍで１００秒間処理して細菌を溶解させる。インビボで増殖した細菌についてはインビトロで増殖したエス・アウレウスＷＣＵＨ２９（３０秒間ビーズでビートすることにより破砕）よりも長時間の処理が必要である。ビーズでビートした後、ヒュームフード中で開栓するまで試験管を氷で冷却する。なぜなら破砕中に発生する熱がＴＲＩzolを分解し、シアニドを遊離させるかもしれないからである。室温で２ないし３分後、試験管を１２０００ｇ、４℃ で１５分間遠心分離し、次いで、ＴＲＩzol試薬の製造者により示された方法に従ってＲＮＡ抽出を継続する。すなわち、水相約０．６ｍｌを滅菌エッペンドルフチューブに移し、０．５ｍｌのイソプロパノールを添加する。室温で１０分後、試料を１２０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離する。上清を取り、これを捨てて、ＲＮＡペレットを１ｍｌの７５％エタノールで洗浄する。ボルテックスを用いて短時間撹拌して試料を混合し、次いで、７５００ｇ、４℃で５分間遠心分離する。エタノールを除去し、ＲＮＡペレットを５分間ほど減圧乾燥する。次いで、１００マイクロリットルのＤＥＰＣ処理水中に繰り返しピペッティングすることにより試料を再溶解し、次いで、５ないし１０分間５５℃に置く。最後に、少なくとも１分間氷上に置き、２００ユニットのＲnasin（Ｐromega）を添加する。ＲＮＡ調合品は−８０℃で１カ月まで保存される。長期保存には、プロトコールの７５％エタノール洗浄段階でＲＮＡ沈殿を少なくとも１年間−２０℃で保存できる。１％アガロース、１ｘＴＢＥゲル上を泳動させることにより単離ＲＮＡの品質を評価する。臭化エチジウム染色ゲルを用いて全ＲＮＡ収量を可視化する。感染組織からの細菌ＲＮＡの単離を示すために、１ｘＭＯＰＳ、２．２Ｍホルムアミドゲルで泳動を行い、Ｈybond-Ｎ（Ａmersham）に減圧ブロッティングする。次いで、エス・アウレウスの１６ｓｒＲＮＡに特異的な³²Ｐ標識オリゴヌクレオチドプローブ（Ｋ.Ｇreisen,Ｍ.Ｌoeffelholz,Ａ.Ｐurohit and Ｄ.Ｌeong.Ｊ. Ｃlin.(1994) Ｍicrobiol.32 335-351）にブロットをハイブリダイゼーションさせる。配列が：５’−ｇｃｔｃｃｔａａａａｇｇｔｔａｃｔｃｃａｃｃｇｇｃ−３’ であるオリゴヌクレオチドをプローブとして用いる。ハイブリダイゼーションするバンドのサイズを、インビトロで増殖したエス・アウレウスＷＣＵＨ２９から単離された対照ＲＮＡのサイズとノーザンブロッドにおいて比較する。全ＲＮＡ試料中に正しいサイズの細菌１６ｓｒＲＮＡバンドを検出でき、ＴＢＥゲル上で可視化すると哺乳動物ＲＮＡの進んだ分解が示される。ｃ）スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９由来のからのＤＮＡの除去２００ユニットのＲnasin（Ｐromega）を添加したバッファー中（最終体積９０マイクロリットル）で３ユニットのＤＮＡａｓｅＩ（増幅グレード(ＧibcoＢＲＬ,Ｌife Ｔechnologies)）で１５分間氷上にて処理することにより、７３マイクロリットルのＲＮＡ試料からＤＮＡを除去した。製造者のプロトコールに従ってＤＮＡａｓｅを不活性化し、ＴＲＩzol ＬＳ試薬（Ｇibco ＢＲＬ,Ｌife Ｔechnologies）で処理することにより除去した。ＤＮＡａｓｅ処理したＲＮＡを、方法１と同様にＲnasinを添加した７３マイクロリットルのＤＥＰＣ処理水中に再懸濁した。ｄ）感染組織由来のＲＮＡ試料からのｃＤＮＡの調製ＤＮＡａｓｅ処理したＲＮＡの１０マイクロリットルの試料を、製造者の指示に従ってＳuperＳcript Ｐreamplification Ｓystem for Ｆirst Ｓtrand cＤＮＡＳynthesis Ｋit（Ｇibco ＢＲＬ,Ｌife Ｔechnologies）を用いて逆転写する。１ナノグラムのランダムヘキサマーを用いて各反応を開始させる。ＳuperＳ criptII逆転写酵素を添加していない対照も反応させる。＋／−両方のＲＴ試料をＲＮａｓｅＨ処理し、次いで、ＰＣＲ反応を進行させる。ｅ）細菌ｃＤＮＡ種の存在を調べるためのＰＣＲの使用下記成分を、氷上で０．２ｍｌのチューブ中にＰＣＲ反応物をセットアップする：４５マイクロリットルのＰＣＲＳＵＰＥＲＭＩＸ（Ｇibco ＢＲＬ,Ｌife Ｔe chnologies）１マイクロリットルの５０ｍＭＭｇＣｌ₂（最終濃度を２．５ｍＭに調節する）１マイクロリットルのＰＣＲプライマー(長さ１８ないし２５塩基対であってよく、類似のアニーリング温度を有するように設計されている)、各プライマーの最終濃度１０ｍＭ２マイクロリットルのｃＤＮＡ下記のごとくＰerkin Ｅlmer Ｇene Ａmp ＰＣＲＳystem 9600によりＰＣＲ反応を行う：９５℃で５分、その後、９４℃、４２℃および７２℃でそれぞれ３０秒、次いで、７２℃で３分のサイクルを５０回行い、その後、温度を４℃に維持する（ＰＣＲ生成物の出現または不存在を決定するには、最適にはサイクル数は３０ないし５０回であり、ＲＴ反応から得られたｃＤＮＡの初発量の評価を行う場合には、最適には８ないし３０サイクル）。次いで、１０マイクロリットルの部分試料を１％の１ｘＴＢＥゲルで泳動し、ＰＣＲ生成物を臭化エチジウム染色し、存在する場合には、標識ＰＣＲプライマー（Ｇibco ＢＲＬ,Ｌife Ｔechnologies）を用いて標識した１００ｂｐのＤＮＡラダーとの比較によりサイズを評価する。別法として、ＰＣＲ生成物が標識ＰＣＲプライマー（例えば、色素で５’末端を標識されたもの）により便利に標識される場合には、ＰＣＲ生成物の適当な部分試料をポリアクリルアミド配列決定ゲルで泳動し、適当なゲルスキャンニングシステム（例えば、Ｐerkin Ｅlmerにより提供されるＧeneＳcan^TMソフトウェアを用いるＡＢＩＰrism^TM377シークエンサー）を用いてその存在および量を検出する。ＲＴ／ＰＣＲ対照は、＋／−逆転写酵素反応物、１６ｓｒＲＮＡプライ−または非転写エス・アウレウスＷＣＵＨ２９ゲノム配列からＰＣＲ生成物を得るように設計されたＤＮＡ特異的プライマー対を含んでもよい。プライマー対の効率を試験するために、それらをＷＣＵＨ２９全ＤＮＡを用いるＤＮＡＰＣＲに使用する。ＰＣＲ反応をセットアップし、ｃＤＮＡのかわりに約１マイクログラムのＤＮＡを用いて３５サイクルのＰＣＲを上記のごとく行う。ＤＮＡＰＣＲにおいてもＲＴ／ＰＣＲにおいても予想サイズの生成物を生じないプライマー対はＰＣＲを失敗させるものであり、それゆえ有用でない。ＤＮＡＰＣＲを用いて正しいサイズの生成物を生じるプライマーのうち２つのクラスがＲＴ／ＰＣＲにおいて区別される：１．インビボで再現可能に転写されない遺伝子はＲＴ／ＰＣＲにおいて生成物を生じない。２．インビボで再現可能に転写される遺伝子は、ＲＴ／ＰＣＲにおいて正しいサイズの生成物を生じ、−ＲＴ対照におけるシグナル（存在する場合）よりも強力なシグナルを＋ＲＴ試料において示す。上記試験において、下記ヌクレオチド配列（配列番号：２）をインビボで転写されるものとして同定した。推定アミノ酸配列を配列番号：１に示す。遺伝子同定に使用するＰＣＲプライマー対の例は５’−ａａｔｔｔｔａｔａｔｇａｔａｔｇｇｃ−３’[配列番号：３]および５’−ａａｔｇｔａｔｔｔｇｔｔａｃｃｔｔｇ−３’[配列番号：４]である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 48/00 48/00 Ｃ０７Ｋ 14/31 Ｃ０７Ｋ 14/31 16/12 16/12 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｔ 33/50 33/53 Ｄ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (31)優先権主張番号９６１６１３６．９ (32)優先日 1996年８月１日 (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＵＳ (72)発明者バーナム，マーティン・カール・ラッセルイギリス、ケイティ18・５エックスキュー、サリー、エプソム、ユー・トゥリー・ボトム・ロード、グレート・バーグ、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．(ａ)配列番号：１のアミノ酸１から３１０までを含むポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、（ｂ）(ａ)のポリヌクレオチドに対して相捕的なポリヌクレオチド、および（ｃ）(ａ)または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の連続した塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む単離ポリヌクレオチド。２．ＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。３．ＲＮＡである請求項１のポリヌクレオチド。４．配列番号：２に示すヌクレオチド１から９３０までを含む請求項２のポリヌクレオチド。５．新規唾液結合タンパク質ポリペプチドをコードしている、配列番号：２に示すヌクレオチドを含む請求項２のポリヌクレオチド。６．配列番号：１のアミノ酸１から３１０までを含むポリペプチドをコードしている請求項２のポリヌクレオチド。７．(ａ)ＮＣＩＭＢ受託番号４０７９４に含まれるＤＮＡにより発現されるのと同じ成熟ポリペプチドをコードしていて配列番号：２のポリヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドに対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、（ｂ）(ａ)のポリヌクレオチドに対して相捕的なポリヌクレオチド、および（ｃ）(ａ)または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の塩基を含むポリヌクレオチドからなる群より選択されるメンバーを含む単離ポリヌクレオチド。８．請求項２のＤＮＡを含むベクター。９．請求項８のベクターを含む宿主細胞。１０．請求項９の宿主細胞から上記ＤＮＡによりコードされているポリペプチドを発現させることを含む、ポリペプチドの製造方法。１１．請求項８のベクターで細胞を形質転換またはトランスフェクションして、ベクター中に含まれるｃＤＮＡによりコードされているポリペプチドを細胞が発現するようにすることを含む、ポリペプチドを発現する細胞の製造方法。１２．配列番号：１のアミノ酸１から３１０までに対して少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチド。１３．配列番号：１に示すアミノ酸配列を含むポリペプチド。１４．請求項１２のポリペプチドに対する抗体。１５．請求項１２のポリペプチドの活性を阻害するアンタゴニスト。１６．治療上有効量の請求項１２のポリペプチドを個体に投与することを含む、新規唾液結合タンパク質を必要とする個体の治療方法。１７．該ポリペプチドをコードしていてインビボで該ポリペプチドを発現するＤＮＡを個体に提供することにより該治療上有効量のポリペプチドが投与される請求項１６の方法。１８．治療上有効量の請求項１５のアンタゴニストを個体に投与することを含む、新規唾液結合タンパク質ポリペプチドを阻害する必要のある個体の治療方法。１９．請求項１２のポリペプチドの発現に関連した疾病の診断方法であって、該ポリペプチドをコードしている核酸配列を決定することを含む方法。２０．宿主由来の試料中の請求項１２のポリペプチドの存在について分析することを含む診断方法。２１．結合物質への結合を可能にする条件下にて請求項１２のポリペプチドに対する結合手段を表面上に発現する細胞をスクリーニングすべき化合物と接触させ、次いで、化合物と結合手段との相互作用により生じるシグナルの存在または不存在を検出することにより、化合物が結合物質に結合しこれを活性化または阻害するかどうかを決定することを含む、請求項１２のポリペプチドに結合しその活性を阻害する化合物の同定方法であって、該結合手段が、該結合手段への化合物の結合に応答して検出可能シグナルを発しうる第２の成分に結合しているものである方法。２２．哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させるに十分な新規唾液結合タンパク質、またはそのフラグメントもしくは変種を哺乳動物に接種することを含む、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方法。２３．遺伝子治療により、新規唾液結合タンパク質、またはそのフラグメントもしくは変種をインビボで送達して哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させる免疫学的応答を誘導することを含む、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方法。２４．新規唾液結合ポリヌクレオチドをコードしていてこれを発現するＤＮＡまたはそれによりコードされているタンパク質を含んでなる免疫学的組成物であって、哺乳動物中に導入された場合、新規唾液結合タンパク質のポリヌクレオチドまたはそれによりコードされているタンパク質に対する免疫学的応答を哺乳動物において誘導する組成物。