JP2002247993A - 新規レギュレーター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 レギュレーターポリペプチドおよびレギュレ
ーターポリペプチドをコードしているＤＮＡ（ＲＮ
Ａ）、および組み換え法によるかかるポリペプチドの製
造方法、ならびに抗細菌化合物のスクリーニングのため
のレギュレーターポリペプチドの使用方法を提供する。 【解決手段】 配列番号：２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプ
チド、および配列番号：２のアミノ酸配列を含むポリペ
プチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少な
くとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、一つには、新たに
同定されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド、なら
びにそれらの製造および使用、ならびにそれらの変種、
アゴニストおよびアンタゴニスト、そしてそれらの使用
に関する。詳細には、これらの点および他の点に関し
て、本発明は、転写活性化ファミリーの新規ポリヌクレ
オチドおよびポリペプチド（以下、レギュレーターとい
う）に関する。

【０００２】

【従来の技術】スタフィロコッカス属（Staphylococc
i）の遺伝子および遺伝子産物を抗生物質の開発に用い
ることは特に好ましい。スタフィロコッカス属は医学的
に重要な微生物属を形成している。それらは２つのタイ
プの疾病、すなわち、侵入的および毒素生成的疾病を引
き起こすことが知られている。一般的には、侵入的感染
は皮膚表面および深部組織の両方に影響する膿瘍形成に
より特徴づけられる。エス・アウレウス（S. aureus）
は癌患者における菌血症の第２の主要原因である。骨髄
炎、敗血性関節炎、敗血性の血栓性静脈炎および急性細
菌性心内膜炎も比較的よく見られる。スタフィロコッカ
ス属の毒素生成的特性により生じる３つの臨床的症状が
ある。これらの疾病の明らかな徴候は、組織侵入および
菌血症に対立するものとしてのエンドトキシンの作用に
より生じる。これらの症状は、スタフィロコッカス食品
汚染、熱傷皮膚症候群およびトキシンショック症候群を
包含する。

【０００３】スタフィロコッカス・アウレウス（Staphy
lococcus aureus）感染の頻度は過去２０年間に劇的に
上昇している。これは多重抗生物質耐性株の出現、およ
び免疫系が低下した人の集団の増加に起因している。い
くつかのまたはすべての標準的な抗生物質に対して耐性
を有するスタフィロコッカス・アウレウス株を単離する
ことはもはやめずらしいことではない。この現象がこの
生物に対する新しい抗菌剤、ワクチンおよび診断試験に
ついての必要性を形成した。

【０００４】本発明レギュレーターはＧｎｔＲクラスの
細菌レギュレーター蛋白（RossbachS, Kupla DA, Rossb
ach U, de Brujun FJ, "Molecular and genetic charac
terization of the rhizopine catabolism (mocABRC) g
enes of Rhizobium meliloti L5-30", Mol Gen Genet 1
994 Oct 17;245(1):11-24参照）に対して相同性を有す
る。エシェリシア・コリ（Escherichia coli）のｇｎｔ
Ｒ生成物は３３１アミノ酸の長さで、調節蛋白に典型的
なヘリックス−ターン−ヘリックスモチーフを有する。
今世紀になって抗生物質の発見および開発の成功におい
て多大な努力がなされてきた。逆説的に言えば、抗細菌
剤は哺乳動物における感染を根絶するために工夫されて
いるが、我々は、宿主中の感染状態の細菌病原体の生理
学についてはほとんどわかっていない。スタフィロコッ
カス・アウレウス染色体由来の配列を用いて、我々はＲ
Ｔ−ＰＣＲに基づく方法を開発し、それにより、感染の
いずれかの段階さらに感染の異なる状態において転写さ
れる細菌遺伝子の同定が可能となっている。かかる情報
から得られることは、宿主環境を補う細菌遺伝子の全体
的な応答を理解する最初の重要なステップである。宿主
中で広範に転写される細菌遺伝子の既知機能および未知
機能の両方についての知識から、真正細菌にのみ存在す
る遺伝子をデータベース検索により確認することが可能
である。感染の維持に対する遺伝子産物の可能な役割り
ならびに特徴づけされた遺伝子に対する相同性により示
される生化学的機能に対する阻害剤のスクリーニングを
セットアップすることの容易さを考慮することにより、
有利なことに、かかる遺伝子は、遺伝学的欠失または制
御された調節法を用いる遺伝子必須性の研究のための候
補の蓄積を可能にする。インビトロにおいてあるいは動
物モデルにおける発病において増殖に必要であることが
示された遺伝子により発現される蛋白は、発病を広範に
抑制する作用剤を見いだすための抗細菌剤スクリーニン
グのための新規標的を提供する。本発明は、感染組織に
おいて、詳細には、急性および慢性両方の感染における
感染組織において転写されるエス・アウレウスＷＣＵＨ
２９のポリヌクレオチドを提供する。

【発明が解決しようとする課題】

【０００５】明らかに、抗生物質活性に関して化合物を
スクリーニングするのに有用であるという目下の利益を
有する本発明新規化合物のごとき因子に対する必要性が
ある。かかる因子は、感染、機能不全および疾病の発生
におけるそれらの役割を調べるのにも有用である。感
染、機能不全または疾病の予防、改善または修正におい
て役割を果たしうる、かかる因子ならびにそれらのアン
タゴニストおよびアゴニストに対する必要性もある。

【０００６】本発明ポリペプチドは、リゾビウム・メリ
ロチ（Rhizobium meliloti）のｍｏｃＲ遺伝子の既知の
バチルス（Bacillus）同等物（ＤＤＢＪ：遺伝子座ＡＢ
００１４８８、受託番号AB001488）の蛋白に対してアミ
ノ酸配列相同性を有する。

【０００７】

【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】
表１（配列番号：２）に示すアミノ酸配列および既知ア
ミノ酸配列またはリゾビウム・メリロチのｍｏｃＲ遺伝
子のバチルス同等物の蛋白のごとき他の蛋白の配列の間
の相同性により、新規レギュレーターポリペプチドであ
ると同定されたポリペプチドを提供することが本発明の
目的である。レギュレーターポリペプチドをコードして
いるポリヌクレオチド、詳細には本明細書でレギュレー
ターと命名されたポリペプチドをコードしているポリヌ
クレオチドを提供することが本発明のさらなる目的であ
る。本発明の特に好ましい具体例において、ポリヌクレ
オチドは、表１（配列番号：１）に示す配列を含むレギ
ュレーターポリペプチドをコードする領域を含み、全長
遺伝子またはその変種が包含される。本発明のもう１つ
の特に好ましい具体例において、表１（配列番号：２）
のアミノ酸配列を含むスタフィロコッカス・アウレウス
由来の新規レギュレーター蛋白、またはその変種があ
る。本発明のもう１つの態様によれば、寄託株に含まれ
るスタフィロコッカス・アウレウス WCUH29株により発
現可能な成熟ポリペプチドをコードしている単離核酸分
子が提供される。

【０００８】本発明のさらなる態様は、レギュレータ
ー、詳細にはスタフィロコッカス・アウレウスのレギュ
レーターをコードしている単離核酸分子が提供され、そ
れにはｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡが包含され
る。本発明のさらなる具体例は、生物学的、診断学的、
予防的、臨床的もしくは治療的に有用なその変種、およ
びそれらを含む組成物を包含する。本発明のもう１つの
態様によれば、治療または予防を目的とした、特に遺伝
学的免疫を目的とした、本発明ポリヌクレオチドの使用
が提供される。本発明の特に好ましい具体例には、レギ
ュレーターの天然の対立遺伝子変種およびそれによりコ
ードされるポリペプチドがある。

【０００９】本発明のもう１つの態様において、本明細
書においてレギュレーターと称されるスタフィロコッカ
ス・アウレウスの新規ポリペプチド、ならびに生物学
的、診断学的、予防的、臨床的もしくは治療的に有用な
そのフラグメント、変種および誘導体、および前記した
フラグメントおよびアナログの変種および誘導体、およ
びそれらを含む組成物が提供される。本発明の特に好ま
しい具体例には、レギュレーター遺伝子の天然の対立遺
伝子によりコードされるレギュレーターポリペプチドの
変種がある。本発明の好ましい具体例において、上記レ
ギュレーターポリペプチドの製造方法がある。本発明の
さらに別の態様によれば、例えば、抗体を含め、抗細菌
剤として有用なかかるポリペプチドの阻害剤が提供され
る。

【００１０】本発明の特定の好ましい具体例によれば、
レギュレーター発現の評価、疾病の治療、例えば上気道
感染（例えば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、
甲状腺炎）、下気道感染（例えば、蓄膿症、肺膿瘍）、
心臓感染（例えば、感染性心内膜炎）、胃腸感染（例え
ば、分泌性下痢、脾臓膿瘍、腹膜後膿瘍）、ＣＮＳ感染
（例えば、大脳膿瘍）、眼感染（例えば、眼瞼炎、結膜
炎、角膜炎、眼内炎、前中隔および眼窩蜂巣炎、涙嚢
炎)、腎および尿管感染（例えば、副睾丸炎、腎内およ
び腎周囲膿瘍、トキシックショック症候群）、皮膚感染
（例えば、膿痂疹、毛嚢炎、皮膚膿瘍、蜂巣炎、創傷感
染、細菌性筋炎）、ならびに骨および関節感染（例え
ば、敗血症性関節炎、骨髄炎）のごとき疾病の治療、遺
伝学的変異のアッセイ、ならびに細菌、特にスタフィロ
コッカス・アウレウス細菌に対する免疫学的応答を生起
するための生物へのレギュレーターポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドの投与のための、製品、組成物および
方法が提供される。

【００１１】本発明のこのおよび他の態様の特定の好ま
しい具体例によれば、特に、厳密な条件下でレギュレー
ターポリヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションす
るポリヌクレオチドが提供される。本発明の特定の好ま
しい具体例において、レギュレーターポリペプチドに対
する抗体が提供される。本発明の他の具体例において、
本発明ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの結合、あ
るいは相互作用して、それらの活性を阻害または活性化
する化合物の同定方法が提供され、該方法は、化合物と
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの間の結合ある
いは他の相互作用を可能にする条件下で、本発明ポリペ
プチドまたはポリヌクレオチドをスクリーニングすべき
化合物と接触させて、化合物との結合あるいは他の相互
作用を評価し（かかる結合または相互作用は、ポリペプ
チドまたはポリヌクレオチドと化合物との結合あるいは
相互作用に応答して検出可能なシグナルを提供すること
のできる第２の化合物に関連している）、次いで、化合
物とポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの結合また
は相互作用から生じるシグナルの存在または不存在を検
出することにより、化合物がポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドに結合あるいは相互作用して、それらの活性
を活性化または阻害するかどうかを決定することを含
む。本発明のさらにもう１つの態様によれば、レギュレ
ーターアゴニストおよびアンタゴニスト、好ましくは静
細菌性または殺細菌性アゴニストおよびアンタゴニスト
が提供される。本発明のさらなる態様において、単細胞
または多細胞生物に投与するための、レギュレーターポ
リヌクレオチドまたはレギュレーターポリペプチドを含
む組成物が提供される。開示した本発明の精神および範
囲内での種々の変更および修飾は、以下の記載を読むこ
と、および本明細書のその他の部分を読むことにより、
当業者に容易に明らかとなろう。

【００１２】用語 以下の説明は、本明細書、とりわけ実施例において汎用
される特定の用語の理解を容易にするために示すもので
ある。「宿主細胞」は外来性ポリヌクレオチド配列によ
り形質転換もしくはトランスフェクションされた、また
は形質転換またはトランスフェクションすることのでき
る細胞である。

【００１３】当該分野にて周知であるように「同一性」
または「類似性」は、場合によっては、配列を比較して
測定されるような、二つまたはそれ以上のポリペプチド
配列間または二つまたはそれ以上のポリヌクレオチド配
列間の関係である。当該分野において、「同一性」とは
また、時には、かかる配列の２つの鎖の間の合致により
決定されるような２つのポリペプチドまたはポリヌクレ
オチド配列間の関連性の程度をも意味する。「同一性」
および「類似性」は共に容易に算出できる（Computatio
nal Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォー
ド・ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988
年；Biocomputing：Informatics and Genome Project
s，Smith,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨー
ク、1993年；Computer Analysis of Sequence Data，パ
ートＩ，Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマ
ナ・プレス、ニュージャージー、1994年；Sequence Ana
lysis in Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデ
ミック・プレス、1987年；およびSequence Analysis Pr
imer，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックト
ン・プレス、ニューヨーク、1991年）。２つのポリヌク
レオチドまたは２つのポリペプチド間の同一性および類
似性を測定するための多くの方法がある一方で、その両
方の用語は当業者に周知である（Sequence Analysis in
Molecular Biology, von Heinje,G.,Academic Press,1
987; Squence Analysis Primer, Gribskov,M.およびDev
ereux,J.,編、M Stockton Press, New York,1991;およ
びCarillo,H.,およびLipman,D.,SIAM J., Applied Mat
h., 48:1073(1988)）。２つの配列間で同一性または類
似性を測定するのに通常用いられる方法は、Carillo,H.
およびLipman,D., SIAM J. Applied Math.,48:1073(198
8)に開示されている方法を包含するが、これらに限定さ
れるものではない。同一性を決定するための好ましい方
法は、試験する２つの配列間で最も良く適合するように
設計される。同一性および類似性を測定する方法は、公
に利用できるコンピュータープログラムに集成されてい
る。二つの配列間の同一性および類似性を測定する好ま
しいコンピュータープログラム法は、ＧＣＧプログラム
パッケージ（Devereux,J.ら、Nucleic AcidsResearch 1
2(1):387（1984）、BLASTP、BLASTNおよびFASTA（Atsch
ul,S.F.ら、J.Molec.Biol.215：403（1990）））を包含
するが、これらに限定されるものではない。一例とし
て、配列番号：１の対照ヌクレオチド配列に対して、例
えば少なくとも９５％の同一性を有するヌクレオチド配
列を有するポリヌクレオチドを挙げると、そのポリヌク
レオチド配列が配列番号：１の対照ヌクレオチド酸配列
のヌクレオチド１００個ごとに５個までのヌクレオチド
の変化を含みうることを除き、そのポリヌクレオチドの
ヌクレオチド配列は対照配列と同一である。言い換える
と、対照酸配列に対して少なくとも９５％同一であるヌ
クレオチド配列を有するポリペプチドを得るためには、
対照配列中の５％までのヌクレオチドが欠失または別の
ヌクレオチドと置換されていてもよく、あるいは対照配
列中の全ヌクレオチドのうち５％までの数のヌクレオチ
ドが対照配列に挿入されたものであってもよい。対照配
列のこれらの変異は、対照ヌクレオチド配列の５’また
は３’末端位置に存在していてもよく、あるいはそれら
の末端位置の間のいずれかの位置に存在していてもく、
対照配列のヌクレオチドに散在していてもよく、あるい
は対照配列内の１個またはそれ以上の一連の群となって
いてもよい。同様に、配列番号：２の対照アミノ酸配列
に対して少なくとも例えば９５％の同一性を有するアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドを例に挙げると、そのポ
リペプチド配列が配列番号：２の対照アミノ酸配列のア
ミノ酸１００個ごとに５個までのアミノ酸の変化を含み
うることを除き、そのポリペプチドのアミノ酸配列は対
照配列と同一である。言い換えると、対照アミノ酸配列
に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドを得るためには、対照配列中のアミノ
酸の５％までが欠失または他のアミノ酸と置換していて
もよく、あるいは対照配列中の全アミノ酸のうち５％ま
での数のアミノ酸が対照配列中に挿入されたものであっ
てもよい。対照配列におけるこれらの変化は、対照アミ
ノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置に存在して
もよく、あるいはそれらの末端間のいずれかの位置に存
在してもよく、対照配列中に散在していてもよく、ある
いは対照配列内で１個またはそれ以上の一連の群をなし
ていてもよい。

【００１４】「単離」とは、「人の手によって」天然の
状態から変化させられた、すなわち、天然物の場合、そ
の本来の環境から変化または除去あるいはその両方が行
われたことを意味する。例えば、天然において生体に存
在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、「単
離」されていないが、その天然状態で共存する物質から
分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチド
は、本明細書に用いる用語としての「単離」がなされて
いる。

【００１５】「ポリヌクレオチド（複数でも可）」は、
一般に、修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、また
は修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、ポリ
リボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチド
をも意味する。従って、「ポリヌクレオチド」は、とり
わけ一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領
域の混合物または一本鎖、二本鎖および三本鎖領域の混
合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならび
に一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本
鎖もしくはより典型的には二本鎖もしくは三本鎖、また
は一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよいＤＮ
ＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を包含するが、
これらに限らない。加えて、本明細書で用いる「ポリヌ
クレオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡと
ＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。かかる領域
における鎖は同一の分子または異なる分子由来のもので
よい。この領域はこれらの分子の一つまたはそれ以上の
全てを含んでいてもよいが、より典型的にはいくつかの
分子の一領域のみを含む。三重らせん領域の分子の一つ
は、オリゴヌクレオチドであることがしばしばである。
本明細書で用いる場合、「ポリヌクレオチド」なる用語
は、一つまたはそれ以上の修飾した塩基を含有する、前
記したＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。このように、安
定性または他の理由で修飾された骨格を有するＤＮＡま
たはＲＮＡも、本明細書が意図するろところの「ポリヌ
クレオチド」である。さらに、イノシン等の普通でない
塩基、またはトリチル化塩基等の修飾塩基を含むＤＮＡ
またはＲＮＡ（二つの例だけを示す）も、本明細書の用
語ポリヌクレオチドである。当業者に既知の多くの有用
な目的を提供するＤＮＡおよびＲＮＡに、非常に多くの
修飾がなされていることは、明らかであろう。「ポリヌ
クレオチド」なる用語は、本明細書で用いる場合、ポリ
ヌクレオチドのこのような化学的、酵素的または代謝的
に修飾した形態、ならびにウイルス、とりわけ単純型細
胞および複雑型細胞を含む、細胞に特徴的なＤＮＡおよ
びＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレオチ
ド」は、しばしば、オリゴヌクレオチド（複数でも可）
と称される短鎖ポリヌクレオチドを包含する。

【００１６】本明細書で用いる「ポリペプチド」は、ペ
プチド結合により直鎖で互いに結合している２個または
それ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白をいうの
に用いる。「ポリペプチド」は、当該分野で通常例えば
ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称され
る短鎖、および多くの型があり、当該分野で一般的に蛋
白と称する長鎖の両方を意味する。ポリペプチドは、遺
伝子によりコードされる２０種のアミノ酸以外のアミノ
酸を含んでいてもよい。「ポリペプチド」は、プロセッ
シングおよび他の翻訳後修飾のような自然の工程によ
り、ならびに化学修飾によるものを包含する。かかる修
飾は基礎的なテキストおよびさらに詳細な論文ならびに
多数の研究文献にも詳しく記載されており、これらは当
業者に周知である。同じタイプの修飾がポリペプチド中
にいくつかの部位に同程度または種々の程度で存在して
もよいことが理解されるであろう。修飾は、ペプチド骨
格、アミノ酸側鎖、およびアミノもしくはカルボキシ末
端を包含するポリペプチドのいずれの場所にあってもよ
い。修飾としては、例えば、アセチル化、アシル化、Ａ
ＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘ
ム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘
導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホ
スホチジルイノシトールの共有結合、架橋結合、環化、
ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有結合架橋形
成、シスチン形成、ピログルタミン酸塩形成、ホルミル
化、ガンマー−カルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアン
カー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリ
ストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシング、リン
酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸化、
アルギニル化などの転移ＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸
付加、およびユビキチネーションがある。例えば、Prot
eins-Structure and Molecular Properties、第2版、T.
E.Creighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク
（1993）に記載されている。例えば、Posttranslationa
l Covalent Modification of Proteins、B.C.Johnson
編、アカデミック・プレス、ニューヨーク（1983）のWo
ld,F., Posttranslational Protein Modifications：Pe
rspective and Prospects、1〜12頁；Seifterら、Meth.
Enzymol. 182:626-646（1990）およびRattanら、Prote
in Synthesis：Posttranslational Modifications and
Aging，Ann. N. Y. Acad. Sci. 663:48-62（1992）参
照。ポリペプチドは分枝状あるいは分枝ありまたはなし
の環状であってもよい。環状、分枝状、および分枝状か
つ環状のポリペプチドは、翻訳後の天然プロセスから生
じるものであってもよく、同様に全く合成的な方法によ
り製造されるものであってもよい。

【００１７】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチ
ドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、
全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なもの
に限られる。変種および対照ポリペプチドは、１または
それ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こ
ることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコー
ドされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチ
ドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種
のような自然発生的なものでもよく、または自然発生す
ることが知られていない変種でもよい。ポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技
術または直接的合成および当業者に知られた他の組み換
え法により製造できる。

【００１８】本発明は、とりわけ、以下に非常に詳細に
説明する、新規レギュレーターポリペプチドおよびポリ
ヌクレオチドに関する。詳細には、本発明は、リゾビウ
ム・メリロチ（Rhizobium meliloti）のｍｏｃＲ遺伝子
の既知のバチルス（Bacillus）同等物（ＤＤＢＪ：遺伝
子座ＡＢ００１４８８、受託番号AB001488）のポリペプ
チドに対するアミノ酸配列相同性により関連付けられ
る、スタフィロコッカス・アウレウスの新規レギュレー
ターのポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。
特に本発明は、それぞれ表１（配列番号：１）および表
１（配列番号：２）に示すヌクレオチド配列およびアミ
ノ酸配列を有するレギュレーターに関し、さらに寄託株
中のＤＮＡのレギュレーターヌクレオチド配列およびそ
れによりコードされるアミノ酸配列に関する。

【００１９】 表１ レギュレーターポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列 (A) スタフィロコッカス・アウレウスのレギュレーターポリヌクレオチド配列由 来の配列 [配列番号：1] 5'-1 ATGGTACAAC CAATCTCGAA TGGATTTACC TATCCAATTT TAAAAGGGAG 51 GGAGAAGATG GCTAAATATC AAGATATTGC TAGTGACATA AGAGATAAAA 101 TAATCACAG G GGATTGGTTT TATGGAATGA AGATACCTCC ACAGAGGCAG 151 TTGGCGATAC AATACAACGT AAATAGAGTG ACGATTATTA AAAGTATTGA 201 GTTATTAGAG GCTGAAGGAT TTATCTATAC TAAAGTGGGG AGTGGAACAT 251 ATGTTAATGA CTATTTGAAT GAAGCACATA TTACAAATAA GTGGTCTGAA 301 ATGATGTTAT GGTCCTCTCA ACAAAGAAGT CAGTATACGG TGCAATTAAT 351 TAATAAAATT GAGACAGATG ATTCGTATAT ACATATAAGT AAAGGTGAAT 401 TGGGTATATC GTTAATGCCA CATATTCAAT TGAAAAAAGC CATGTCTAAT 451 ACAGCCAGTC ATATTGAAGA CTTATCTTTT GGTTATAATA ATGGCTATGG 501 TTATATCAAG TTAAGAGATA TTATCGTTGA ACGAATGTCA AAGCAAGGTA 551 TAAATGTAGG TAGAGAAAAT GTAATGATCA CTTCAGGCGC TTTACATGCC 601 ATTCAACTTT TATCTATTGG GTTTTTAGGT CAAGATGCCA TAATAATTTC 651 GAATACACCA TCATATATTC ACTCTACAAA TGTTTTTGAG CAATTGAATT 701 TTAGACATAT TGATGTTCCT TATAATCAAA TTAATGAAAT TAATACCATC 751 ATTGATAGAT TTATTAATTT TAAAAATAAA GCGATTTATA TAGAACCTAG 801 GTTTAATAAC CCGACAGGTC GTTCTTTAAC GAATGAGCAA AAGAAAAATA 851 TAATTACTTA TAGCGAAAGA CATAATATTC CTATCATTGA AGATGATATC 901 TTTAGAGATA TTTTCTTTAG CGATCCAACT CCTGCTATCA AAACTTATGA 951 TAAATTGGGA AAAGTTATAC ATATAAGCAG TTTTTCAAAA ACGATTGCAC 1001 CAGCAATAAG AATAGGTTGG ATTGTTGCTT CTGAAAAAAT AATAGAGCAA 1051 TTGGCAGATG TAAGAATGCA AATCGACTAT GGATCCAGTA TGTGGTCACA 1101 AATGGTTGTA TATGAGATGT TGAAAAATAA GTCTTATGAT AAACACTTAG 1151 TAAAGTTAAG GTATGTTTTA AAAGATAAAC GAGACTTTAT GTTAAACATC 1201 CTCAATAATT TATTTAAGGA TATAGCACAT TGGGAGGTTC CAAGTGGAGG 1251 TTATTGTGTA TGGTTAGTCT TTAAAATAGA TATAGATATT AAATATTTAT 1301 TTTACGAATT GTTAAGTAAA GAAAAAATAT TAATCAATCC GGGTTACATT 1351 TATGGCAGTA AAGAAAAGAG TATAAGGCTA TCTTTTGGCT TTGAATCAAA 1401 TGAAAATATT AAGCATGCGC TCTATAAAAT TTATACATAT TGTTGA -3'

【００２０】 (B)この表中のポリヌクレオチド配列から推定されるレギュレーターポリペプチ ド配列 [配列番号：2] NH₂-1 MVQPISNGFT YPILKGREKM AKYQDIASDI RDKIITGDWF YGMKIPPQRQ 51 LAIQYNVNRV TIIKSIELLE AEGFIYTKVG SGTYVNDYLN EAHITNKWSE 101 MMLWSSQQRS QYTVQLINKI ETDDSYIHIS KGELGISLMP HIQLKKAMSN 151 TASHIEDLSF GYNNGYGYIK LRDIIVERMS KQGINVGREN VMITSGALHA 201 IQLLSIGFLG QDAIIISNTP SYIHSTNVFE QLNFRHIDVP YNQINEINTI 251 IDRFINFKNK AIYIEPRFNN PTGRSLTNEQ KKNIITYSER HNIPIIEDDI 301 FRDIFFSDPT PAIKTYDKLG KVIHISSFSK TIAPAIRIGW IVASEKIIEQ 351 LADVRMQIDY GSSMWSQMVV YEMLKNKSYD KHLVKLRYVL KDKRDFMLNI 401 LNNLFKDIAH WEVPSGGYCV WLVFKIDIDI KYLFYELLSK EKILINPGYI 451 YGSKEKSIRL SFGFESNENI KHALYKIYTY C-COOH

【００２１】 (C)ポリヌクレオチド配列の具体例 [配列番号：1]. X-(R1)n-1 ATGGTACAAC CAATCTCGAA TGGATTTACC TATCCAATTT TAAAAGGGAG 51 GGAGAAGATG GCTAAATATC AAGATATTGC TAGTGACATA AGAGATAAAA 101 TAATCACAG G GGATTGGTTT TATGGAATGA AGATACCTCC ACAGAGGCAG 151 TTGGCGATAC AATACAACGT AAATAGAGTG ACGATTATTA AAAGTATTGA 201 GTTATTAGAG GCTGAAGGAT TTATCTATAC TAAAGTGGGG AGTGGAACAT 251 ATGTTAATGA CTATTTGAAT GAAGCACATA TTACAAATAA GTGGTCTGAA 301 ATGATGTTAT GGTCCTCTCA ACAAAGAAGT CAGTATACGG TGCAATTAAT 351 TAATAAAATT GAGACAGATG ATTCGTATAT ACATATAAGT AAAGGTGAAT 401 TGGGTATATC GTTAATGCCA CATATTCAAT TGAAAAAAGC CATGTCTAAT 451 ACAGCCAGTC ATATTGAAGA CTTATCTTTT GGTTATAATA ATGGCTATGG 501 TTATATCAAG TTAAGAGATA TTATCGTTGA ACGAATGTCA AAGCAAGGTA 551 TAAATGTAGG TAGAGAAAAT GTAATGATCA CTTCAGGCGC TTTACATGCC 601 ATTCAACTTT TATCTATTGG GTTTTTAGGT CAAGATGCCA TAATAATTTC 651 GAATACACCA TCATATATTC ACTCTACAAA TGTTTTTGAG CAATTGAATT 701 TTAGACATAT TGATGTTCCT TATAATCAAA TTAATGAAAT TAATACCATC 751 ATTGATAGAT TTATTAATTT TAAAAATAAA GCGATTTATA TAGAACCTAG 801 GTTTAATAAC CCGACAGGTC GTTCTTTAAC GAATGAGCAA AAGAAAAATA 851 TAATTACTTA TAGCGAAAGA CATAATATTC CTATCATTGA AGATGATATC 901 TTTAGAGATA TTTTCTTTAG CGATCCAACT CCTGCTATCA AAACTTATGA 951 TAAATTGGGA AAAGTTATAC ATATAAGCAG TTTTTCAAAA ACGATTGCAC 1001 CAGCAATAAG AATAGGTTGG ATTGTTGCTT CTGAAAAAAT AATAGAGCAA 1051 TTGGCAGATG TAAGAATGCA AATCGACTAT GGATCCAGTA TGTGGTCACA 1101 AATGGTTGTA TATGAGATGT TGAAAAATAA GTCTTATGAT AAACACTTAG 1151 TAAAGTTAAG GTATGTTTTA AAAGATAAAC GAGACTTTAT GTTAAACATC 1201 CTCAATAATT TATTTAAGGA TATAGCACAT TGGGAGGTTC CAAGTGGAGG 1251 TTATTGTGTA TGGTTAGTCT TTAAAATAGA TATAGATATT AAATATTTAT 1301 TTTACGAATT GTTAAGTAAA GAAAAAATAT TAATCAATCC GGGTTACATT 1351 TATGGCAGTA AAGAAAAGAG TATAAGGCTA TCTTTTGGCT TTGAATCAAA 1401 TGAAAATATT AAGCATGCGC TCTATAAAAT TTATACATAT TGTTGA -(R2)n-Y

【００２２】 (D)ポリペプチド配列の具体例 [配列番号：2] X-(R1)n-1 MVQPISNGFT YPILKGREKM AKYQDIASDI RDKIITGDWF YGMKIPPQRQ 51 LAIQYNVNRV TIIKSIELLE AEGFIYTKVG SGTYVNDYLN EAHITNKWSE 101 MMLWSSQQRS QYTVQLINKI ETDDSYIHIS KGELGISLMP HIQLKKAMSN 151 TASHIEDLSF GYNNGYGYIK LRDIIVERMS KQGINVGREN VMITSGALHA 201 IQLLSIGFLG QDAIIISNTP SYIHSTNVFE QLNFRHIDVP YNQINEINTI 251 IDRFINFKNK AIYIEPRFNN PTGRSLTNEQ KKNIITYSER HNIPIIEDDI 301 FRDIFFSDPT PAIKTYDKLG KVIHISSFSK TIAPAIRIGW IVASEKIIEQ 351 LADVRMQIDY GSSMWSQMVV YEMLKNKSYD KHLVKLRYVL KDKRDFMLNI 401 LNNLFKDIAH WEVPSGGYCV WLVFKIDIDI KYLFYELLSK EKILINPGYI 451 YGSKEKSIRL SFGFESNENI KHALYKIYTY C-(R2)n-Y

【００２３】 （Ｅ）スタフィロコッカス・アウレウスのレギュレーターのポリヌクレオチドＯ ＲＦ配列由来の配列［配列番号：３］ 5'-1 ATGGTACAAC CAATCTCGAA TGGATTTACC TATCCAATTT TAAAAGGGAG 51 GGAGAAGATG GCTAAATATC AAGATATTGC TAGTGACATA AGAGATAAAA 101 TAATCACAG G GGATTGGTTT TATGGAATGA AGATACCTCC ACAGAGGCAG 151 TTGGCGATAC AATACAACGT AAATAGAGTG ACGATTATTA AAAGTATTGA 201 GTTATTAGAG GCTGAAGGAT TTATCTATAC TAAAGTGGGG AGTGGAACAT 251 ATGTTAATGA CTATTTGAAT GAAGCACATA TTACAAATAA GTGGTCTGAA 301 ATGATGTTAT GGTCCTCTCA ACAAAGAAGT CAGTATACGG TGCAATTAAT 351 TAATAAAATT GAGACAGATG ATTCGTATAT ACATATAAGT AAAGGTGAAT 401 TGGGTATATC GTTAATGCCA CATATTCAAT TGAAAAAAGC CATGTCTAAT 451 ACAGCCAGTC ATATTGAAGA CTTATCTTTT GGTTATAATA ATGGCTATGG 501 TTATATCAAG TTAAGAGATA TTATCGTTGA ACGAATGTCA AAGCAAGGTA 551 TAAATGTAGG TAGAGAAAAT GTAATGATCA CTTCAGGCGC TTTACATGCC 601 ATTCAACTTT TATCTATTGG GTTTTTAGGT CAAGATGCCA TAATAATTTC 651 GAATACACCA TCATATATTC ACTCTACAAA TGTTTTTGAG CAATTGAATT 701 TTAGACATAT TGATGTTCCT TATAATCAAA TTAATGAAAT TAATACCATC 751 ATTGATAGAT TTATTAATTT TAAAAATAAA GCGATTTATA TAGAACCTAG 801 GTTTAATAAC CCGACAGGTC GTTCTTTAAC GAATGAGCAA AAGAAAAATA 851 TAATTACTTA TAGCGAAAGA CATAATATTC CTATCATTGA AGATGATATC 901 TTTAGAGATA TTTTCTTTAG CGATCCAACT CCTGCTATCA AAACTTATGA 951 TAAATTGGGA AAAGTTATAC ATATAAGCAG TTTTTCAAAA ACGATTGCAC 1001 CAGCAATAAG AATAGGTTGG ATTGTTGCTT CTGAAAAAAT AATAGAGCAA 1051 TTGGCAGATG TAAGAATGCA AATCGACTAT GGATCCAGTA TGTGGTCACA 1101 AATGGTTGTA TATGAGATGT TGAAAAATAA GTCTTATGAT AAACACTTAG 1151 TAAAGTTAAG GTATGTTTTA AAAGATAAAC GAGACTTTAT GTTAAACATC 1201 CTCAATAATT TATTTAAGGA TATAGCACAT TGGGAGGTTC CAAGTGGAGG 1251 TTATTGTGTA TGGTTAGTCT TTAAAATAGA TATAGATATT AAATATTTAT 1301 TTTACGAATT GTTAAGTAAA GAAAAAATAT TAATCAATCC GGGTTACATT 1351 TATGGCAGTA AAGAAAAGAG TATAAGGCTA TCTTTTGGCT TTGAATCAAA 1401 TGAAAATATT AAGCATGCGC TCTATAAAAT TTATACATAT TGT-3'

【００２４】 （Ｆ）この表中のポリヌクレオチドＯＲＦ配列から推定されるレギュレーターポ リペプチド配列［配列番号：４］ NH₂-MVQPISNGFT YPILKGREKM AKYQDIASDI RDKIITGDWF YGMKIPPQRQ 51 LAIQYNVNRV TIIKSIELLE AEGFIYTKVG SGTYVNDYLN EAHITNKWSE 101 MMLWSSQQRS QYTVQLINKI ETDDSYIHIS KGELGISLMP HIQLKKAMSN 151 TASHIEDLSF GYNNGYGYIK LRDIIVERMS KQGINVGREN VMITSGALHA 201 IQLLSIGFLG QDAIIISNTP SYIHSTNVFE QLNFRHIDVP YNQINEINTI 251 IDRFINFKNK AIYIEPRFNN PTGRSLTNEQ KKNIITYSER HNIPIIEDDI 301 FRDIFFSDPT PAIKTYDKLG KVIHISSFSK TIAPAIRIGW IVASEKIIEQ 351 LADVRMQIDY GSSMWSQMVV YEMLKNKSYD KHLVKLRYVL KDKRDFMLNI 401 LNNLFKDIAH WEVPSGGYCV WLVFKIDIDI KYLFYELLSK EKILINPGYI 451 YGSKEKSIRL SFGFESNENI KHALYKIYTY C-COOH

【００２５】寄託物質 スタフィロコッカス・アウレウス WCUH29株を含有する
寄託物は、ナショナル・コレクション・オブ・インダス
トリアル・アンド・マリン・バクテリア・リミテッド
（ＮＣＩＭＢという）、２３ストリート、マッカードラ
イブ、アベルディーンＡＢ２１ＲＹ、スコットランドに
１９９５年９月１１日寄託し、ＮＣＩＭＢ受託番号４０
７７１が付与された。寄託したことにより、寄託株をス
タフィロコッカス・アウレウス WCUH29株という。本明
細書においてスタフィロコッカス・アウレウス株の寄託
物を「寄託株」または「寄託株のＤＮＡ」という。寄託
株は全長のレギュレーター遺伝子を含んでいる。寄託株
中に含まれるポリヌクレオチド配列ならびにそれにより
コードされるポリペプチドのアミノ酸配列は、本明細書
の配列に関する任意の記載に矛盾する事象において支配
的である。寄託株の寄託は、特許手続き上の微生物寄託
の国際承認に関するブダペスト条約の条件下でなされて
いる。特許が発行されると何らの制限または条件もな
く、最終的に株は分譲される。寄託は当業者の便宜のた
めにのみ提供され、３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.１１２条のもとに要
求されるような、寄託が実施可能要件であることを承認
するものではない。寄託物を製造、使用または販売する
ためにはライセンスが必要であるが、そのようなライセ
ンスはここでは賦与されていない。

【００２６】ポリペプチド 本発明ポリペプチドは表１［配列番号：２］のポリペプ
チド（詳細には、成熟ポリペプチド）ならびにポリペプ
チドおよびフラグメント、詳細にはレギュレーターの生
物学的活性を有するものを包含し、さらに表１［配列番
号：２および４］のポリペプチドまたはその重要部分に
対して少なくとも７０％、好ましくは表１［配列番号：
２および４］のポリペプチドに対して少なくとも８０％
の同一性を有するポリペプチドおよびフラグメント、よ
り好ましくは表１［配列番号：２および４］のポリペプ
チドに対して少なくとも９０％の類似性を有し（より好
ましくは、少なくとも９０％の同一性を有し）、さらに
より好ましくは表１［配列番号：２および４］のポリペ
プチドに対して少なくとも９５％の類似性を有する（さ
らにより好ましくは少なくとも９５％の同一性を有す
る）ポリペプチドおよびフラグメント、さらに通常には
少なくとも３０個、より好ましくは少なくとも５０個の
アミノ酸を含むかかるポリペプチドの部分を包含する。

【００２７】また本発明は表１（Ｄ）に示す式のポリペ
プチドを包含し、式中のアミノ末端においてＸは水素で
あり、カルボキシル末端においてＹは水素または金属で
あり、Ｒ１およびＲ２はアミノ酸残基、ｎは１ないし１
０００の整数である。いずれかのＲ基（Ｒは１個よりも
多い）により示されるアミノ酸残基の伸長部分はヘテロ
ポリマーであってもホモポリマーであってもよく、好ま
しくはヘテロポリマーである。

【００２８】フラグメントは、前述のポリペプチドのア
ミノ酸配列のすべてではなく一部に対して全く同一であ
るアミノ酸配列を有する変種ポリペプチドである。レギ
ュレーターポリペプチドについては、フラグメントは
「独立して存在（free standing）」しているか、また
は一部分もしくは領域を形成することにより、大型のポ
リペプチド内に含まれていてもよく、最も好ましくは単
一の連続した領域、すなわち大型の単一ポリペプチドと
して含まれる。好ましいフラグメントは、表１［配列番
号：２および４］のアミノ酸配列の一部分を有する末端
切断されたポリペプチド、またはそれらの変種を包含す
るが、その例としてはアミノ末端を含む一連の残基を切
断、またはカルボキシル末端を含む一連の残基を切断し
たものがある。宿主、とりわけスタフィロコッカス・ア
ウレウスにおける、本発明のポリペプチドの分解形態も
また好ましい。また、構造的または機能的属性により特
徴づけられたフラグメント、例えばアルファーヘリック
スおよびアルファーヘリックス形成領域、ベータシート
およびベータシート形成領域、ターンおよびターン形成
領域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水
性領域、アルファー両親媒性領域、ベータ両親媒性領
域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および高
抗原性指標領域を含むフラグメントなども好ましい。レ
ギュレーター活性を媒介し、あるいは活性を改善し、望
ましくない活性を減じられたフラグメントである生物学
的に活性のあるフラグメントも好ましい。動物、とりわ
けヒトにおいて抗原的または免疫原的なフラグメントも
また含まれる。個体、特にヒトにおけるスタフィロコッ
カス・アウレウス の生存に必須の機能、あるいは疾病
を開始または維持する能力を付与する酵素の受容体また
はドメインを含むフラグメントが特に好ましい。本発明
ポリペプチドのフラグメントである変種を、ペプチド合
成による対応全長ポリペプチドの製造に使用してもよ
く、それゆえ、これらの変種を全長のポリペプチド製造
のための中間体として用いてもよい。本発明ポリヌクレ
オチドのフラグメントである変種を用いて本発明の全長
のポリヌクレオチドを合成してもよい。

【００２９】ポリヌクレオチド 本発明の別の態様は単離ポリヌクレオチドに関するもの
であり、それには表１［配列番号：２および４］の推定
アミノ酸配列を有するレギュレーターポリペプチドをコ
ードする全長遺伝子およびそれに密接に関連するポリヌ
クレオチドおよびそれらの変種が包含される。本明細書
に提供される情報を用いて、例えば表１［配列番号：１
および３］に示すポリヌクレオチド配列を用い、出発物
質スタフィロコッカス・アウレウス WCUH29細胞からの
染色体ＤＮＡフラグメントをクローニングおよび配列決
定するために用いるような標準的なクローニングおよび
スクリーニングを用いて、レギュレーターポリペプチド
をコードしている本発明ポリヌクレオチドを得て、次い
で、全長のクローンを得てもよい。例えば、本発明ポリ
ヌクレオチド配列、例えば表１［配列番号：１および
３］に示す配列を得るために、イー・コリ（E.coli）ま
たはいくつかの他の適切な宿主におけるスタフィロコッ
カス・アウレウス WCUH29の染色体ＤＮＡのクローンの
典型的なライブラリーを、部分的配列に由来する、好ま
しくは１７量体またはそれ以上の長さの放射性標識化オ
リゴヌクレオチドにてプローブする。プローブのＤＮＡ
に同一であるＤＮＡを担持するクローンは厳密な条件を
用いて区別できる。元の配列から設計した配列決定プラ
イマーを用いてこのように同定した個々のクローンを配
列決定することにより、両方向で配列が伸長できるよう
になり、全遺伝子配列を決定できる。このような配列決
定は便宜的にプラスミドクローンから調製した変性二本
鎖ＤＮＡを用いて実施する。適切な技法については、Ma
niatis,T.、Fitsch,F.F.およびSambrookら、Molecular
Cloning，A Laboratory Manual、第２版；コールド・ス
プリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド
・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（1989）に記載
されている（Screening By Hybridization 1.90およびS
equencingDenatured Double-Stranded DNA Templates 1
3.70参照）。本発明の典型例において、表１［配列番
号：１］に示すポリヌクレオチドが、スタフィロコッカ
ス・アウレウス WCUH29由来のＤＮＡライブラリー中に
見いだされた。

【００３０】表１［配列番号：１］に示すＤＮＡ配列
は、表１［配列番号：２］に示すアミノ酸残基数とほぼ
同数のアミノ酸からなる蛋白をコードしている読み枠を
含んでおり、蛋白の推定分子量は、当該分野でよく知ら
れたアミノ酸の分子量を用いて算出できる。ヌクレオチ
ド番号１から１４４３の間の配列番号：１のポリヌクレ
オチドは配列番号：２のポリペプチドをコードする。停
止コドンは配列番号：１の１４４４〜１４４６である。
本発明レギュレーター蛋白は、寄託株のレギュレーター
をコードしているＤＮＡの配列決定結果により示される
ように、転写活性化ファミリーの他の蛋白に構造的に関
連している。本発明蛋白は、知られた蛋白の中でもリゾ
ビウム・メリロチのｍｏｃＲ遺伝子のバチルス同等物
（DDBJ:遺伝子座AB001488、受託番号AB001488）の蛋白
に対して最大の相同性を示す。表１［配列番号：２］の
レギュレーター蛋白は、リゾビウム・メリロチのｍｏｃ
Ｒ遺伝子のバチルス同等物（DDBJ:遺伝子座AB001488、
受託番号AB001488）のポリペプチドのアミノ酸配列に対
して、その全長にわたり約３９％の同一性、そしてその
全長にわたり約６０％の類似性を示す。

【００３１】本発明は、表１［配列番号：１］のコーデ
ィング配列に対して全長にわたり同一であるポリヌクレ
オチド配列を提供する。成熟ポリペプチドのコーディン
グ配列またはそれらのフラグメント、ならびにその他の
コーディング配列を有する読み枠中の成熟ポリペプチド
のコーディング配列またはそのフラグメント、例えばリ
ーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プレプロ蛋白配列
をコードする配列も本発明により提供される。ポリヌク
レオチドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグ
ナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配
列、イントロン、ポリアデニル化シグナル等の転写非翻
訳配列、および付加アミノ酸をコードする付加コーディ
ング配列等の非コーディング５'および３'配列等の非コ
ーディング配列をも含有しうるが、これらに限定するの
ではない。例えば、融合ポリペプチドの精製を促すマー
カー配列をコードすることもできる。本発明のある好ま
しい態様において、マーカー配列は、ｐＱＥベクター
（Qiagen, Inc.）中に提供されるようなヘキサ−ヒスチ
ジンペプチド（Gentzら、Proc. Natl. Acad. Sci., US
A， 86:821-824（1989）に記載される）またはＨＡタグ
（Wilsonら、Cell，37:767（1984））である。本発明の
ポリヌクレオチドはまた、構造遺伝子および遺伝子発現
を調節する天然の配列をも含むが、これらに限定するも
のではない。

【００３２】本発明の好ましい具体例は、レギュレータ
ーポリペプチドをコードいしている、表１の配列番号：
１に示すヌクレオチド１から１４４３または１４４６ま
でを含むポリヌクレオチドである。

【００３３】また本発明は、表１（Ｃ）に示す式のポリ
ヌクレオチドを包含し、式中の５’末端においてＸは水
素であり、３’末端においてＹは水素または金属であ
り、Ｒ１およびＲ２は核酸残基、ｎは１ないし１０００
の整数である。いずれかのＲ基（Ｒは１個よりも多い）
により示される核酸残基の伸長部分はヘテロポリマーで
あってもホモポリマーであってもよく、好ましくはヘテ
ロポリマーである。

【００３４】上記した本明細書の用語「ポリペプチドを
コードしているポリヌクレオチド」は、本発明ポリペプ
チド配列を含むポリヌクレオチドを包含し、詳細には、
細菌のポリペプチド、より詳細には表１［配列番号：
２］に示すアミノ酸配列を有するスタフィロコッカス・
アウレウスのレギュレーターのポリペプチドを包含す
る。該用語は、コーディング配列および／または非コー
ディング配列を含んでいてもよいさらなる領域を伴っ
た、ポリペプチドをコードしている単一の連続領域また
は不連続領域（例えば、組み込まれたファージまたは配
列の挿入または配列の編集により分断されたもの）を含
むポリヌクレオチドを包含する。さらに本発明は、表１
［配列番号：２］の推定アミノ酸配列を有するポリペプ
チドの変種をコードする上記ポリヌクレオチドの変種に
も関する。本発明ポリヌクレオチドのフラグメントであ
る変種を用いて本発明の全長ポリヌクレオチドを合成し
てもよい。

【００３５】さらに特に好ましい具体例は、表１［配列
番号：２］のレギュレーターポリペプチドのアミノ酸配
列を有するレギュレーター変種をコードするポリヌクレ
オチドであり、その中には、いくつか、少しの、５ない
し１０、１ないし５、１ないし３、２、１または０個の
アミノ酸残基を置換、欠損または付加を任意の組み合わ
せで施したアミノ酸配列を有する。中でもとりわけ好ま
しいものは、レギュレーターの特性および活性を変化さ
せないサイレント置換、付加および欠損である。

【００３６】本発明のさらに好ましい具体例は、表１
［配列番号：２および４］に示すアミノ酸配列を有する
レギュレーターポリペプチドをコードしているポリヌク
レオチドに対して、その全長にわたり少なくとも７０％
の同一性があるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌ
クレオチドに対して相補的なポリヌクレオチドである。
あるいはまた、寄託株のレギュレーターポリペプチドを
コードしているポリヌクレオチドに対してその全長にわ
たり少なくとも８０％同一である領域を含むポリヌクレ
オチド、およびそれに対して相補的なポリヌクレオチド
が最も非常に好ましい。この点に関して、全長で少なく
とも９０％同一であるポリヌクレオチドがとりわけ好ま
しく、中でも少なくとも９５％の同一性を有するものが
特に好ましく、さらに少なくとも９５％の同一性を有す
るものの中でも少なくとも９７％であるのがより好まし
く、中でも少なくとも９８％および少なくとも９９％で
あるのが特に好ましく、さらに少なくとも９９％である
のがより好ましい。特に好ましい具体例は、表１［配列
番号：１］によりコードされる成熟ポリペプチドと実質
的に同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチ
ドをコードしているポリヌクレオチドである。

【００３７】本発明はさらに本明細書上述の配列にハイ
ブリダイズするポリヌクレオチドに関する。この点に関
して、本発明は特に厳密な条件で本明細書上述のポリヌ
クレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドに関
する。本明細書で用いる「厳密な条件」および「厳密な
ハイブリダイゼーション条件」なる用語は、配列間の同
一性が少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
である場合のみに起こるハイブリダイゼーションを意味
する。厳密なハイブリダイゼーション条件の例として
は、５０％ホルムアミド。５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ Ｎ
ａＣｌ、１５ｍＭクエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７.６）、５ｘデンハーツ溶液、
１０％硫酸デキストラン、および２０マイクログラム／
ｍｌの変性し、剪断されたサケ精子ＤＮＡを含有する溶
液中、４２℃で一晩インキュベーションし、続いて約６
５℃で０.１ｘＳＳＣ中でフィルターを洗浄するもので
ある。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件は周知で
あり、Sambrookら、Molecular Cloning，A Laboratory
Manual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー、ニ
ューヨーク（1989）、とりわけその第１１章に実例が示
されている。

【００３８】本発明はまた、厳密なハイブリダイゼーシ
ョン条件で、配列番号：１または配列番号：３に示すポ
リヌクレオチド配列に関する完全遺伝子を含む適当なラ
イブラリーを、配列番号：１に示す上記ポリヌクレオチ
ド配列またはそのフラグメントの配列を有するプローブ
でスクリーニングし、ＤＮＡ配列を単離することにより
得ることのできるポリヌクレオチド配列を本質的に含む
ポリヌクレオチドをも提供する。かかるポリヌクレオチ
ドを得るために有用なフラグメントには、例えば本明細
書の別の箇所において説明するプローブおよびプライマ
ー等がある。

【００３９】本発明のポリヌクレオチドアッセイに関し
てここでさらに論じるが、例えば上述の本発明のポリヌ
クレオチドは、レギュレーターをコードするｃＤＮＡ全
長およびゲノムクローンを単離するための、およびレギ
ュレーター遺伝子に高度な配列類似性を有するその他の
遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するため
の、ＲＮＡ、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリ
ダイゼーションプローブとして使用することができる。
このようなプローブは通常少なくとも１５塩基を含む。
好ましくはこのようなプローブは少なくとも３０塩基を
有し、少なくとも５０塩基を有していてもよい。とりわ
け好ましいプローブは少なくとも３０塩基を有し、５０
塩基またはそれ以下である。例えば、レギュレーター遺
伝子のコーディング領域は、配列番号：１に示すＤＮＡ
配列を用いてオリゴヌクレオチドプローブを合成してス
クリーニングすることにより単離できる。次いで、本発
明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する標識オリゴヌ
クレオチドを、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮＡ
のライブラリーのスクリーニングに用い、プローブがラ
イブラリーのいずれのメンバーにハイブリダイゼーショ
ンするのかを決定する。

【００４０】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、例えば、疾病とりわけヒトの疾病の治療法およ
び診断法の発見のための研究試薬および材料として使用
でき、とりわけポリヌクレオチドアッセイに関連して本
明細書でさらに論じる。配列番号：１および／または２
の配列由来のオリゴヌクレオチドである本発明ポリヌク
レオチドを本明細書記載の方法に使用してもよいが、好
ましくはＰＣＲに使用して、本明細書で同定したポリヌ
クレオチドの全体または一部が感染した組織に転写され
るかどうかを決定する。かかる配列が、病原体が達成し
た感染段階および感染型の診断にも有用であることが理
解される。

【００４１】また本発明は、さらなるアミノもしくはカ
ルボキシル末端アミノ酸、または成熟ポリペプチドに内
在するアミノ酸を加えた成熟蛋白であるポリペプチドを
コードできるポリヌクレオチドも提供する（例えば成熟
形態が一つ以上のポリペプチド鎖を有する場合）。この
ような配列は、前駆体から成熟形態への蛋白のプロセッ
シングに役割を担い、蛋白の輸送を可能にし、蛋白の半
減期を延長もしくは短縮し、またはとりわけアッセイも
しくは製造のための蛋白の操作を容易にすることができ
る。一般的にインビボの場合、付加アミノ酸は、細胞性
酵素によりプロセッシングされ、成熟蛋白から取り除か
れる。１またはそれ以上のプロ配列と融合した成熟形態
のポリペプチドを有する前駆蛋白は、ポリペプチドの不
活性形態でありうる。プロ配列が除去されると、通常に
はこのような不活性前駆体が活性化される。プロ配列の
いくつかまたはすべてを活性化の前に除去できる。通
常、このような前駆体はプロ蛋白と称される。要する
に、本発明のポリヌクレオチドは成熟蛋白、リーダー配
列を加えた成熟蛋白（プレ蛋白と称することができ
る）、プレ蛋白のリーダー配列ではない１またはそれ以
上のプロ配列を有する成熟蛋白の前駆体、またはリーダ
ー配列および１またはそれ以上のプロ配列を有するプロ
蛋白の前駆体であるプレプロ蛋白をコードしていてもよ
く、プロ配列は通常ポリペプチドの活性および成熟形態
を生成するプロセッシング段階で除去される。

【００４２】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明ベクターで遺伝子操
作される宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。本発明ＤＮＡ構築物に由来
するＲＮＡを用い、無細胞翻訳系を用いてこのような蛋
白を製造できる。組換え体を製造するために、宿主細胞
を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、また
は本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができる。
ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davi
sら、Basic Methods in Molecular Biology（1986）；S
ambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory Manua
l、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラ
トリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニ
ューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実験マニ
ュアルに記載される方法により行うことができ、例えば
リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デ
キストラン媒介トランスフェクション、トランスベクシ
ョン、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介ト
ランスフェクション、エレクトロポレーション、トラン
スダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入お
よび感染等がある。

【００４３】適当な宿主の代表的なものには、細菌細
胞、例えばストレプトコッカス属（Streptococci）、ス
タフィロコッカス属（Staphylococci）、エンテロコッ
カス属（Enterococci）、イー・コリ（E.coli）、スト
レプトミセス（Streptomyces）およびバチルス・ズブチ
リス（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞、例えば酵母
細胞およびアスペルギルス属（Aspergillus）細胞；昆
虫細胞、例えばドロソフィラＳ２（Drosophila S2）お
よびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf9）細胞；動物
細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３
Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bows）黒色腫細
胞；ならびに植物細胞等がある。

【００４４】本発明のポリペプチドを製造するために非
常に多くの発現系を使用できる。このようなベクターに
は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクタ
ー、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エ
レメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキ
ュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワク
シニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性
狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来
のベクター、ならびにそれらを組み合わせたものに由来
するベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファ
ージの遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコス
ミドおよびファージミド等がある。発現系の構築物は発
現を制御および引き起こす調節領域を含有していてもよ
い。この点に関して、一般的には、宿主中にポリヌクレ
オチドを保持、伸長または発現するのに、および／また
はポリペプチドを発現するのに適した任意の系またはベ
クターを発現に使用できる。周知のおよび通常的な種々
の任意の技術により、適当なＤＮＡ配列を発現系に挿入
してもよく、例えばSambrookら、Molecular Cloning，A
Laboratory Manual（上述）に記載されている。

【００４５】翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミッ
クスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当
な分泌シグナルを発現するポリペプチドに組み込むこと
ができる。これらのシグナルはポリペプチドに本来的な
ものであってもく、あるいは異種性のシグナルでもよ
い。

【００４６】本発明のポリペプチドは周知の方法によ
り、組換え細胞培養物から回収および精製でき、その方
法には、例えば硫酸アンモニウムまたはエタノール沈
殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラ
フィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性
相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィ
ー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよび
レクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体クロマ
トグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。ポリペ
プチドが単離および／または精製中に変性した場合、再
び活性なコンホーメーションにするために、蛋白再生の
ための周知の技法を用いることができる。

【００４７】診断アッセイ 本発明はまた診断試薬として使用するための本発明のレ
ギュレーターポリヌクレオチドの使用にも関する。真核
生物とりわけ哺乳動物、特にヒトにおけるレギュレータ
ーの検出は、疾患の診断のための診断法を提供する。レ
ギュレーター遺伝子を含む生物に感染した真核生物（本
明細書において「個体」とも称する）とりわけ哺乳動
物、特にヒトを種々の方法によりＤＮＡレベルで検出で
きる。診断用の核酸は、感染した個体の細胞および組
織、例えば骨、血液、筋肉、軟骨および皮膚より得るこ
とができる。ゲノムＤＮＡを直接検出に使用してもよ
く、あるいは分析の前にＰＣＲもしくはその他の増幅法
を用いることにより酵素的に増幅できる。ＲＮＡまたは
ｃＤＮＡもまた同じ方法で用いることができる。増幅法
を用いると、真核生物とりわけ哺乳動物、特にヒトに存
在する原核生物株を、原核生物遺伝子の遺伝子型の分析
により特徴づけすることができる。対照配列の遺伝子型
と比較した場合の増幅産物の大きさの変化により、欠損
および挿入を検出できる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを
標識化レギュレーターポリヌクレオチド配列にハイブリ
ダイズさせることにより同定できる。完全に対合した配
列はＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差によ
り、誤対合二重らせんから区別できる。変性剤含有また
は不含ゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動度
の変化を検出することにより、または直接的なＤＮＡの
配列決定により、ＤＮＡ配列の差を検出してもよい。例
えばMeyersら、Science，230:1242（1985）参照。ま
た、特異的な位置での配列の変化を、ヌクレアーゼ保護
アッセイ、例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学
的切断法によって明らかにしてもよい。例えばCotton
ら、Proc. Natl. Acad. Sci., USA， 85:4397-4401 （1
985）参照。

【００４８】本発明の遺伝子の突然変異または多型性を
担持する細胞を、種々の技術により、ＤＮＡレベルで、
例えばセロタイピングすることにより検出してもよい。
例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出すること
ができる。ＲＴ−ＰＣＲは自動検出系、例えばGeneScan
等と組み合わせて用いるのがとりわけ好ましい。ＲＮＡ
またはｃＤＮＡを同じ目的でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲ
に用いてもよい。例を挙げると、レギュレーターをコー
ドする核酸に相補的なＰＣＲプライマーは、突然変異を
同定および分析するのに用いることができる。典型的な
プライマーの例を下表２に示す。

【００４９】表２ レギュレーターポリヌクレオチドの増幅のためのプライ
マー 配列番号 プライマー配列 5 5'-GAAGCACATA TTACAAATAA G-3' 6 5'-TTATATGTATAACTTTTCCC-3'

【００５０】本発明はまた、５'および／または３'末端
から１、２、３または４個のヌクレオチド除去したプラ
イマーをも提供する。該プライマーを用いて、感染個体
から単離された遺伝子を増幅してもよく、次いで、該遺
伝子をＤＮＡ配列を調べるための種々の技法に供しても
よい。このように、ＤＮＡ配列における突然変異を検出
し、感染の診断および感染性物質のセロタイピングおよ
び／または分類に使用することができる。

【００５１】本発明はまた、疾患、好ましくは細菌感
染、より好ましくはスタフィロコッカス・アウレウスに
よる感染、および最も好ましくは、上気道感染（例え
ば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺
炎）、下気道感染（例えば、蓄膿症、肺膿瘍）、心臓感
染（例えば、感染性心内膜炎）、胃腸感染（例えば、分
泌性下痢、脾臓膿瘍、腹膜後膿瘍）、ＣＮＳ感染（例え
ば、大脳膿瘍）、眼感染（例えば、眼瞼炎、結膜炎、角
膜炎、眼内炎、前中隔および眼窩蜂巣炎、涙嚢炎)、腎
および尿管感染（例えば、副睾丸炎、腎内および腎周囲
膿瘍、トキシックショック症候群）、皮膚感染（例え
ば、膿痂疹、毛嚢炎、皮膚膿瘍、蜂巣炎、創傷感染、細
菌性筋炎）、ならびに骨および関節感染（例えば、敗血
症性関節炎、骨髄炎）のごとき疾病の診断方法を提供
し、該方法は、表１［配列番号：１］の配列を有するポ
リヌクレオチドのの発現レベルの上昇を個体由来の試料
から検出することを特徴とする。レギュレーターポリヌ
クレオチドの発現の増加または低下は、ポリヌクレオチ
ドの定量法として当該分野でよく知られたいずれかの方
法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保
護、ノーザンブロッティングおよびその他のハイブリダ
イゼーション法を用いて測定できる。

【００５２】さらに、正常対照組織サンプルと比較し
て、レギュレーター蛋白の過剰発現を検出するための本
発明診断アッセイを用いて、例えば感染の存在を検出し
てもよい。宿主由来のサンプル中のレギュレーター蛋白
のレベルを決定するために用いることができるアッセイ
技法は、当業者に周知である。かかるアッセイ法には、
ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタン
ブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００５３】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそ
れらを発現する細胞を免疫源として用いて、かかるポリ
ペプチドに免疫特異的な抗体を得ることができる。本明
細書で用いる「抗体」には、モノクローナルおよびポリ
クローナル抗体、キメラ、一本鎖、サル化抗体およびヒ
ト化抗体、ならびにＦａｂフラグメントが包含され、さ
らに免疫グロブリン発現ライブラリーの産物等のＦａｂ
フラグメントも包含される。本発明のポリペプチドに対
して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエピトープが付
いたフラグメント、アナログまたは細胞を、好ましくは
ヒトはでない動物に通常の実験法を用いて投与すること
により得ることができる。連続的細胞系培養により産生
される抗体を提供する、当業者周知の技術を用いて、モ
ノクローナル抗体を調製することができる。例として
は、Kohler， G.およびMilstein, C.，Nature， 256:49
5-497 （1975）； Kozborら、Immunology Today， 4:72
（1983）； Coleら、Monoclonal Antibodies and Canc
er Therapy, Alan R Liss, Inc.、77-96頁（1985）に記
載されるような種々の技法がある。一本鎖抗体の産生の
ために記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）
を適用して、本発明ポリペプチドに対する一本鎖抗体を
得ることができる。また、トランスジェニックマウスま
たはその他の生物、例えばその他の哺乳動物を用いてヒ
ト化抗体等の抗体を発現させてもよい。

【００５４】別法として、ファージディスプレイ技法を
用いて、抗−ポリペプチドを有することにつきスクリー
ニングされたヒト・リンパ球のＰＣＲ増幅されたｖ遺伝
子のレパートリーから、抗−レギュレーターを有するこ
とについてスクリーニングされたヒトから、あるいは無
処理のライブラリーから、ポリペプチドに対する結合活
性を有する抗体遺伝子を選別することもできる（McCaff
erty, J.ら、Nature 348:552-554 （1990）； Marks,
J.ら、Biotechnology 10:779-783 （1992））。これら
の抗体の親和性はチェインシャフリング（chain shuffl
ing）により改善することもできる（Clackson, T.ら、N
ature 352:624-628 （1991））。

【００５５】二つの抗原結合ドメインが存在する場合、
各ドメインは「二特異性」抗体と称する異なるエピトー
プに対して指向される。上記抗体を用いてポリペプチド
を発現するクローンを単離または同定してもよく、上記
抗体を親和性クロマトグラフィーにより精製することが
できる。

【００５６】従って、とりわけレギュレーターに対する
抗体を、感染、とりわけ細菌感染、特に上気道感染（例
えば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、甲状腺
炎）、下気道感染（例えば、蓄膿症、肺膿瘍）、心臓感
染（例えば、感染性心内膜炎）、胃腸感染（例えば、分
泌性下痢、脾臓膿瘍、腹膜後膿瘍）、ＣＮＳ感染（例え
ば、大脳膿瘍）、眼感染（例えば、眼瞼炎、結膜炎、角
膜炎、眼内炎、前中隔および眼窩蜂巣炎、涙嚢炎)、腎
および尿管感染（例えば、副睾丸炎、腎内および腎周囲
膿瘍、トキシックショック症候群）、皮膚感染（例え
ば、膿痂疹、毛嚢炎、皮膚膿瘍、蜂巣炎、創傷感染、細
菌性筋炎）、ならびに骨および関節感染（例えば、敗血
症性関節炎、骨髄炎）のごとき疾病の治療に用いてもよ
い。

【００５７】ポリペプチド変種には抗原的、エピトープ
的または免疫学的に等価な変種等があり、本発明の特定
の態様である。本明細書で用いる「抗原的に等価な誘導
体」なる用語は、本発明により蛋白またはポリペプチド
に対して生成した場合、病原および哺乳動物宿主間での
即時的な物理的相互作用を妨害する特定の抗体により特
異的に認識されるポリペプチドまたはその同等物を包含
する。本明細書で用いる「免疫学的に等価な誘導体」な
る用語は、脊椎動物において抗体を産生させるのに適し
た処方を用いた場合、抗体が病原および哺乳動物宿主間
での即時的な物理的相互作用を妨害するように作用する
ペプチドまたはその等価物を包含する。

【００５８】ポリペプチド、例えば抗原的、免疫学的に
等価な誘導体、またはそれらの融合蛋白は、マウスまた
はその他の動物例えばラットもしくはニワトリを免疫す
るための抗原として使用できる。融合蛋白はポリペプチ
ドに安定性を付与できる。抗原は、例えば抱合すること
により、免疫原性キャリヤ蛋白、例えばウシ血清アルブ
ミン（ＢＳＡ）またはキーホール・リンペット・ヘモシ
アニン（keyhole limpet haemocyanin：ＫＬＨ）に結合
することができる。あるいはまた、蛋白もしくはポリペ
プチド、またはそれらに抗原的もしくは免疫学的に等価
なポリペプチドの多重コピーを含む多重抗原ペプチド
は、免疫原性を改良するための十分な抗原性を有してい
るので、キャリヤーを使用しなくてすむ。

【００５９】好ましくは、抗体またはそれらの変種を、
個体における免疫原性を減じるために修飾する。例え
ば、個体がヒトである場合、最も好ましくは、抗体は
「ヒト化」されており；この場合、ハイブリドーマ由来
の抗体の相補性決定領域がヒト・モノクローナル抗体に
移植されており、例えばJones,P.ら、Nature 321:522-5
25（1986）またはTempestら、Biotechnology 9:266-273
（1991）に記載されている。本発明のポリヌクレオチド
を遺伝学的免疫において使用する場合、例えばプラスミ
ドＤＮＡの筋肉への直接注射（Wolffら、Hum.Mol.Gene
t.1:363（1992）；Manthorpeら、Hum.Gene Ther.4:419
（1963））、特異的蛋白キャリヤーとＤＮＡとの複合体
の送達（Wuら、J.Biol.Chem.264:16985（1989））、リ
ン酸カルシウムとのＤＮＡ共沈（Benvenisty & Reshe
f、PNAS 83:9551（1986））、種々の形態のリポソーム
中へのＤＮＡ封入（Kanedaら、Science 243:375（198
9））、微粒子爆撃（Tangら、Nature 356:152（199
2）；Eisenbraunら、DNA Cell Biol.12:791（1993））
およびクローン化レトロウイルスベクターを用いたイン
ビボ感染（Seegerら、PNAS 81:5849（1984））等の適切
な送達方法を用いるのが好ましい。

【００６０】アンタゴニストおよびアゴニスト−アッセ
イおよび分子 本発明ポリペプチドを用いて、例えば、細胞、無細胞標
品、化学ライブラリー、および天然産物混合物中におけ
る小型分子基質およびリガンドの結合を評価してもよ
い。これらの基質およびリガンドは天然基質およびリガ
ンドであってもよく、構造上または機能上の模倣物であ
ってもよい。例えば、Coligan et al.,Current Protoco
ls in Immunology 1(2):Chapter 5 (1991)参照。

【００６１】また本発明は、レギュレーターポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドの作用を増強（アゴニスト）
または阻害（アンタゴニスト）する化合物、詳細には、
静菌性および／または殺菌性化合物を同定するための、
化合物のスクリーニング方法をも提供する。該スクリー
ニング方法は高処理量の方法である。例えば、アゴニス
トまたはアンタゴニストをスクリーニングするために、
レギュレーターポリペプチドを含む、合成反応混合物、
膜、細胞表面膜もしくは細胞壁のごとき細胞コンパート
メント、またはそれらのいずれかの調製物、およびこの
ようなポリペプチドの標識基質またはリガンドを、レギ
ュレーターアゴニストまたはアンタゴニストとなりうる
候補分子の存在下または不在下でインキュベーションす
る。候補分子がレギュレーターポリペプチドにアゴナイ
ズまたは拮抗する能力は、標識化リガンドの結合の低下
またはこのような基質からの生成物の産生の低下に反映
される。結合しても影響を及ぼさない分子、すなわちレ
ギュレーターの効果を誘導しない分子は、最も良好なア
ンタゴニストである可能性がある。結合性が良好で、基
質からの生成物の生成速度を高める分子はアゴニストで
ある。基質からの生成物の生成速度またはレベルはリポ
ーターシステムを用いることにより強調できる。この点
に関して有用なリポーターシステムには、生成物に転換
される比色測定用標識化基質、レギュレーターポリヌク
レオチドまたはポリペプチド活性の変化に反応するリポ
ーター遺伝子、および当該分野で周知の結合アッセイ等
があるが、これらに限定するものではない。

【００６２】レギュレーターアンタゴニストのアッセイ
のもう１つの例は競争アッセイであり、競争阻害アッセ
イに適した条件下で、レギュレーターおよび潜在的アン
タゴニストを、レギュレーター結合分子、組換えレギュ
レーター結合分子、天然基質もしくはリガンド、または
基質もしくはリガンド模倣物と混合する。例えば放射活
性または比色測定用化合物によりレギュレーターを標識
し、結合分子に結合した、または生成物に変換されたレ
ギュレーター分子の数を正確に決定して、潜在的なアン
タゴニストの効果を評価できる。

【００６３】潜在的アンタゴニストには、本発明ポリペ
プチドに結合し、そのことによりその活性を阻害し消失
させる小型有機分子、ペプチド、ポリペプチドおよび抗
体などがある。また、潜在的アンタゴニストは、密接に
関連した蛋白または抗体のごとき小型有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチドであってもよく、それらは結合分子の
同じ部位に結合するが、レギュレーターにより誘導され
る活性を誘導せず、それゆえレギュレーターを結合から
排除することによりレギュレーターの作用を妨害する。
潜在的アンタゴニストには、ポリペプチドの結合部位に
結合し、およびそれを占領し、それにより細胞性結合分
子への結合を防御して、正常の生物学的活性を防御する
小型分子等がある。小型分子の例としては、小型有機分
子、ペプチド、ペプチド様分子等があるが、これらに限
定するものではない。その他の潜在的アンタゴニストに
はアンチセンス分子等がある（これらの分子についての
記載に関してはOkano,J.，Neurochem.56:560（1991）；
Oligodeoxy-nucleotides as Antisense Inhibitors of
Gene Expression，ＣＲＣプレス、ボッカラートン、フ
ロリダ州（1988）参照）。好ましい潜在的アンタゴニス
トには、レギュレーター関連化合物およびレギュレータ
ー変種等がある。

【００６４】本明細書に示す各ＤＮＡ配列を、抗細菌化
合物の発見および開発に使用してもよい。コードされて
いる蛋白は、発現した場合、抗細菌剤のスクリーニング
のための標的として使用されうる。さらに、コードされ
ている蛋白のアミノ末端領域または各ｍＲＮＡのシャイ
ン−ダルガノ配列または他の翻訳容易化配列をコードし
ているＤＮＡ配列を用いてアンチセンス配列を構築し、
目的コーディング配列の発現を制御することもできる。

【００６５】本発明は、感染の続発症に関与する病因お
よび哺乳動物宿主間の最初の物理的相互作用を妨害する
ための本発明ポリペプチド、ポリヌクレオチドまたは阻
害物質の使用を提供する。とりわけ本発明分子を、内在
デバイス上の哺乳動物細胞外マトリックス蛋白または傷
における細胞外マトリックス蛋白への細菌の付着、詳細
にはグラム陽性細菌の付着の防止；例えば、哺乳動物チ
ロシンキナーゼのホスホリレーションを開始することに
よる、レギュレーター蛋白により媒介される哺乳動物細
胞への侵入のブロック（Rosenshine et al.,Infect.Imm
unol.60:2211(1992)）；哺乳動物細胞外マトリックス蛋
白と細菌レギュレーター蛋白との間の、組織ダメージを
媒介する細菌付着のブロック；内在デバイスの移植また
は他の外科的方法以外により開始される、感染における
通常の病状の進行のブロックに使用することができる。

【００６６】本発明アンタゴニストおよびアゴニスト
を、例えば、感染、とりわけ細菌感染、特に上気道感染
（例えば、中耳炎、細菌性気管炎、急性咽頭蓋炎、甲状
腺炎）、下気道感染（例えば、蓄膿症、肺膿瘍）、心臓
感染（例えば、感染性心内膜炎）、胃腸感染（例えば、
分泌性下痢、脾臓膿瘍、腹膜後膿瘍）、ＣＮＳ感染（例
えば、大脳膿瘍）、眼感染（例えば、眼瞼炎、結膜炎、
角膜炎、眼内炎、前中隔および眼窩蜂巣炎、涙嚢炎)、
腎および尿管感染（例えば、副睾丸炎、腎内および腎周
囲膿瘍、トキシックショック症候群）、皮膚感染（例え
ば、膿痂疹、毛嚢炎、皮膚膿瘍、蜂巣炎、創傷感染、細
菌性筋炎）、ならびに骨および関節感染（例えば、敗血
症性関節炎、骨髄炎）のごとき疾病の抑制および治療に
用いてもよい。

【００６７】ワクチン 本発明の別の態様は、個体とりわけ哺乳動物における免
疫学的反応を誘導する方法に関し、該方法は、感染、詳
細には細菌感染、最も詳細にはスタフィロコッカス・ア
ウレウス感染から個体を防御するための抗体および／ま
たはＴ細胞応答を生じさせるに十分なレギュレーターま
たはそのフラグメントもしくは変種を個体に接種するこ
とを特徴とする。かかる免疫学的応答が細菌の複製を遅
らせる方法も提供される。本発明のさらにもう１つの態
様は、個体における免疫学的応答の誘導方法に関し、該
方法は、疾病が個体においてすでに確立されているか否
かにかかわらず、インビボでレギュレーター、またはそ
のフラグメントもしくは変種を発現させるためにレギュ
レーターまたはそのフラグメントもしくは変種の発現を
指令する核酸ベクターをかかる個体に送達して、例え
ば、抗体および／またはＴ細胞免疫応答（例えば、サイ
トカイン産生Ｔ細胞または細胞毒性Ｔ細胞）を生じさせ
る免疫学的応答を誘導して、該個体を疾病から防御する
抗体を産生させることを特徴とする。迅速に遺伝子を所
望細胞中に投与する方法としては、粒子上にコーディン
グすること等がある。かかる核酸ベクターはＤＮＡ、Ｒ
ＮＡ、修飾核酸、またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリッドを
含んでいてもよい。

【００６８】本発明のさらなる態様は、免疫学的反応を
宿主内に誘導できる、または誘導されたた宿主に導入し
た場合、レギュレーターまたはそれによりコードされて
いる蛋白に対する免疫学的反応を該宿主に誘導する免疫
学的組成物に関し、その組成物は組換えレギュレーター
またはそれによりコードされている蛋白を含み、レギュ
レーターまたはそれによりコードされている蛋白に対す
る抗原をコードし発現するＤＮＡを含む。免疫学的応答
を治療的または予防的に用いてもよく、また免疫学的応
答はＣＴＬまたはＣＤ４＋Ｔ細胞から生じるような抗体
免疫または細胞性免疫の形態であってもよい。

【００６９】レギュレーターポリペプチドまたはそれら
のフラグメントを、それ自身は抗体を産生しないが、第
１の蛋白を安定化し、免疫原的および保護特性を有する
融合蛋白を産生する能力のある共存蛋白（co-protein）
と融合させてもよい。好ましくは、かかる融合組換え蛋
白は、抗原補蛋白、例えばヘモフィルス・インフルエン
ザエ（Hemophilus influenzae）由来のリポ蛋白Ｄ、グ
ルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）または
ベーターガラクトシダーゼのごとき共存蛋白、蛋白を可
溶化してそれらの産生および精製を促進する比較的大き
な共存蛋白等を含む。さらに、共存蛋白は免疫系におい
て普遍的な刺激を提供するという意味で、アジュバント
として作用することができる。共存蛋白は第１の蛋白の
アミノまたはカルボキシル末端のどちらかに結合でき
る。

【００７０】本発明は、本発明のポリペプチドまたはポ
リヌクレオチドおよびSato Y.ら、Science 273:352 (19
66)に記載されているような免疫刺激ＤＮＡ配列を含む
組成物、とりわけワクチン組成物、および方法を提供す
る。

【００７１】また、本発明は、スタフィロコッカス・ア
ウレウスに感染した動物モデルにおいて、かかる遺伝的
免疫化実験に用られるＤＮＡ構築物中の細菌細胞表面蛋
白の不変領域をコードすることが示されている、説明し
たポリヌクレオチドまたはとりわけそれらのフラグメン
トを用いる方法を提供し、これらはとりわけ予防的また
は治療的免疫反応を刺激することができる蛋白エピトー
プを同定するのに有用である。この研究は、哺乳動物、
とりわけヒトにおける細菌感染とりわけスタフィロコッ
カス・アウレウス感染の予防薬または治療的処置の開発
のために、感染に抵抗しこれを一掃するのに成功した動
物の必須器官から特に価値あるモノクローナル抗体をう
まく調製することを可能にすると思われる。

【００７２】ポリペプチドを宿主接種用抗原として用い
て、例えば損傷組織への細菌の付着を阻害することによ
り細菌の侵入に対して防御する特異的抗体を得てもよ
い。組織損傷の例としては、例えば機械的、化学的もし
くは熱的ダメージにより、または内在デバイスの埋め込
みにより引き起こされた皮膚または結合組織の創傷、ま
たは粘膜、例えば口、乳腺、尿道または膣の創傷等があ
る。

【００７３】また本発明は、適切な担体と一緒になった
免疫原性組換え蛋白を含有するワクチン処方を包含す
る。蛋白は胃で分解されうるので、非経口的に、例えば
皮下、筋肉内、静脈内または皮膚内等に投与するのが好
ましい。非経口投与に適した処方には、抗酸化剤、緩衝
液、静細菌剤、および処方を個体の体液（好ましくは血
液）と等張にする溶質を含有していてもよい水性または
非水性無菌注射液、および懸濁化剤または増粘剤を含有
していてもよい水性または非水性無菌懸濁液等がある。
処方は１回投与または多回投与用容器、例えばシールし
たアンプルおよびバイアルに入れてよく、使用直前に無
菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態として
保存してもよい。ワクチン処方は処方の免疫原性を高め
るアジュバント系を含有していてもよく、例えば水中油
系または当該分野で周知のその他の系等がある。投与量
はワクチンの特異的活性に依存し、通常の実験法により
容易に決定できる。本発明を特定のレギュレーター蛋白
に関して説明したが、本発明は天然に存在する蛋白およ
び、実質的に組換え蛋白の免疫原特性に影響しない付
加、欠失または置換を施した類似の蛋白のフラグメント
を包含することが理解されよう。

【００７４】組成物、キットおよび投与 本発明はまた上述のポリヌクレオチドもしくはポリペプ
チド、またはそれらのアゴニストもしくはアンタゴニス
トを含む組成物にも関する。本発明ポリペプチドを、細
胞、組織もしくは生物に用いられる未滅菌もしくは滅菌
済み担体と混合して、例えば対象への投与に適した医薬
的担体と混合して用いることができる。このような組成
物は、例えば溶媒添加物または治療上有効量の本発明ポ
リペプチド、および医薬的に許容できる担体または賦形
剤を含む。このような担体には生理食塩水、緩衝化生理
食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノー
ルおよびそれらの組み合わせ等があるが、これらに限定
するものではない。処方は投与法に適したものにすべき
である。さらに本発明は、１またはそれ以上の上記本発
明組成物成分を充填した１またはそれ以上の容器を含む
診断用および医薬用パックおよびキットにも関する。

【００７５】本発明ポリペプチドおよびその他の化合物
を、単独で、あるいは治療用化合物等のその他の化合物
と組み合わせて用いてもよい。いずれかの有効かつ利便
的な方法、例えば、とりわけ局所、経口、経膣、静脈
内、腹膜腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または皮膚内の
経路で医薬組成物を投与してもよい。治療において、ま
たは予防薬として、活性物質を注射用組成物として、例
えば好ましくは等張の無菌水性分散物として個体に投与
できる。別法として、組成物を局所適用用、例えば軟
膏、クリーム、ローション、眼軟膏、点眼液、点耳液、
洗口剤、含浸包帯および縫合用の糸、ならびにエアロゾ
ール等の形態に処方してもよく、適当な慣用的な添加
物、例えば保存剤、薬物の浸透を補助する溶媒、ならび
に軟膏およびクリームには軟化剤を含有していてもよ
い。かかる局所用処方は、適合した慣用的な担体、例え
ばクリームまたは軟膏基剤、およびローションにはエタ
ノールまたはオレイルアルコールを含有していてもよ
い。このような担体は重量で処方の約１％から約９８％
であってよく、より通常には重量で処方の約８０％まで
とする。哺乳動物とりわけヒトに投与するために、活性
物質の１日あたりの投与量は、０.０１ｍｇ／ｋｇから
１０ｍｇ／ｋｇであり、典型的には約１ｍｇ／ｋｇであ
る。医者はあらゆる場合、個体に最も適した実際の投与
量を決定し、年齢、体重および特に個体の反応性に応じ
て変化させる。上述の投与量は、平均的なケースの典型
例である。もちろん、高用量および低用量の範囲が適合
する個々の例もあり、かかる例は本発明の範囲内であ
る。

【００７６】内在デバイスには外科的インプラント、補
てつデバイスおよびカテーテル等があり、即ち個体の体
に導入し、長時間その位置に存在するものである。この
ようなデバイスには、例えば人工関節、心臓弁、ペース
メーカー、血管移植片、血管カテーテル、脳脊髄液シャ
ント、尿カテーテル、継続的歩行可能腹膜透析（contin
uous ambulatory peritoneal dialysis：ＣＡＰＤ）カ
テーテル等がある。本発明の組成物を注射により投与
し、内在デバイスの挿入の直前に、関連細菌に対する全
身的な効果を得てもよい。手術後、デバイスが体内に存
在する期間中、処置を続けてもよい。さらに、外科的手
技中に広げるカバーに用いて、細菌性創傷感染、とりわ
けスタフィロコッカス・アウレウスの創傷感染を防御す
ることもできる。多くの整形外科医は、補てつ関節を有
するヒトについては、菌血症を生じうる歯科的処置の前
に抗生物質予防法を考慮すべきであると考えている。遅
延性の重篤な感染は、時々補てつ関節を失うに至る深刻
な合併症であり、有意性のある罹病率および死亡率を伴
う。それゆえ、この状況において、予防的な抗生物質に
代わるものとして、活性物質の使用を拡張することが可
能である。上述の治療に加え、一般的には本発明組成物
を創傷の治療薬として使用して、創傷組織に曝露したマ
トリックス蛋白に細菌が付着するのを防いでもよく、歯
科治療においては抗生物質による予防法に代えて、また
はそれと組み合わせて予防的に使用してもよい。

【００７７】別法として、本発明の組成物を用いて挿入
直前の内在デバイスを浸してもよい。創傷または内在デ
バイスを浸すためには、活性物質は１μｇ／ｍｌから１
０ｍｇ／ｍｌの濃度であるのが好ましい。ワクチン組成
物を便宜的に注射可能な形態にする。慣用的なアジュバ
ントを用いて免疫反応を高めてもよい。ワクチン化に適
した単位投与量は、抗原０.５〜５μｇ／ｋｇであり、
このような投与量は１〜３週間隔で１〜３回投与するの
が好ましい。本発明化合物については、指示した投与量
範囲では、適切な個体への投与を妨げるような不利な毒
性効果は観察されない。本明細書に開示した各文献を、
参照によりその全体が本明細書に記載されているものと
みなす。本願が優先権を主張しているいずれの特許出願
も、参照によりその全体が本明細書に記載されているも
のとみなす。

【００７８】

【実施例】以下の実施例は、詳細に説明したこと以外
は、当業者に周知で通常的な標準的な技法を用いて実施
する。実施例は説明のためにのみ示すもので、本発明を
限定するものではない。 実施例１：菌株の選択、ライブラリーの製造および配列
決定 配列番号：１に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチ
ドを、イー・コリ（E.coli）中のスタフィロコッカス・
アウレウスの染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーか
ら得た。重複するスタフィロコッカス・アウレウスのＤ
ＮＡを含有する２個またはそれ以上のクローンからの配
列決定データを用いて配列番号：１の隣接ＤＮＡ配列を
構築した場合もある。通常の方法、例えば以下の方法１
および２によりライブラリーを製造できる。全細胞ＤＮ
Ａは、スタフィロコッカス・アウレウス WCUH29から、
標準法に準じて単離し、二つの方法のどちらかによりサ
イズ分画する。

【００７９】方法１ 標準法に準じてサイズ分画化するために、全細胞ＤＮＡ
を注射針に通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまでの
大きさのフラグメントを、エクソヌクレアーゼおよびＤ
ＮＡポリメラーゼで処理することにより、平滑末端化
し、ＥｃｏＲＩリンカーを加える。フラグメントを、Ｅ
ｃｏＲＩで切断されているベクターラムダＺａｐＩＩに
連結し、標準法によりライブラリーをパッケージング
し、次いでパッケージングしたライブラリーで大腸菌を
感染させる。ライブラリーは標準法により増幅する。 方法２ 全細胞ＤＮＡは、ライブラリーベクター（例えば、Ｒｓ
ａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓｈｌ２３５Ｉ）にクロ
ーニングするための一連のフラグメントを適切に生じる
１の制限酵素または制限酵素の組み合わせで部分的加水
分解し、かかるフラグメントを標準法に準じてサイズ分
画化する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡおよびフラグメ
ントに連結し、次いでＥｃｏＲＩで切断されているベク
ターラムダＺａｐＩＩに連結し、標準法によりライブラ
リーをパッケージングし、次いでパッケージングしたラ
イブラリーで大腸菌を感染させる。ライブラリーを標準
法により増幅する。

【００８０】実施例２ 感染期間中のスタフィロコッカ
ス・スレウス由来の遺伝子の発現の決定 スタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９に感染し
た７２時間目のマウス鼠蹊部由来の壊死脂肪組織または
感染８日目の切除した腎臓を、カオトロピック剤および
ＲＮＡａｓｅ阻害剤の存在下で効果的に破砕し処理して
動物ＲＮＡおよび細菌ＲＮＡの混合物を得る。安定な調
合物および高収率の細菌ＲＮＡを得るための破砕および
処理の最適条件は、その後のノーザンブロット上におけ
るスタフロコッカス・アウレウスエ １６Ｓ ＲＮＡに特
異的な放射性標識オリゴヌクレオチドとのハイブリダイ
ゼーションの使用にも用いる。得られたＲＮＡについて
のＲＮＡａｓｅ不含、ＤＮＡａｓｅ不含、ＤＮＡおよび
蛋白不含の調合物は、スタフィロコッカス・アウレウス
ＷＣＵＨ２９の各遺伝子の配列から設計されたユニーク
なプライマーペアーを用いる逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣ
Ｒ）に適する。

【００８１】ａ）感染のマウス動物モデル（鼠蹊部）か
らのスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９感染
組織の単離 体積１０ｍｌの滅菌栄養培地（No.2 Oxoid）に、寒天培
養プレートから単離した個々のスタフィロコッカス・ア
ウレウスＷＣＵＨ２９を撒く。３７℃で１６〜２０時間
培養物を好気的にインキュベーション（静置培養）す
る。このスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９
ブロス培養物（ブロス中に約１０^８ｃｆｕ／ｍｌとなる
よう希釈）０．５ｍｌを右前足の大腿部（鼠蹊部）に皮
下注射することにより４週齢のマウス（メス、１８〜２
２ｇ、ＭＦ１株）をそれぞれ感染させる。感染後２４時
間は、マウスを定期的にモニターすべきであり、その
後、研究終了まで毎日モニターすべきである。全身感染
の徴候、すなわち、昏睡、逆立った毛、群れからの離脱
を示す動物を詳細にモニターすべきであり、徴候が瀕死
状態に至る場合には動物を即座に除去すべきである。傷
害進展を示す外部から目で見てわかる徴候は感染２４〜
４８時間後に現れるであろう。動物の腹部の試験によ
り、皮膚下の膿瘍の盛り上がった輪郭が示されるであろ
う。局所的な傷害は右の下大腿部にとどまるはずである
が、場合によっては左の下大腿部および上に広がって胸
部に至るかもしれない。場合によっては、膿瘍が皮膚層
から破裂してくるかもしれない。このような場合、感染
動物を即座に除去し、可能ならば組織をサンプリングす
る。動物を除去しないと、膿瘍を覆っている壊死皮膚組
織が脱落し、腹部筋肉壁が露出するかもしれない。感染
から約９６時間後に、二酸化炭素による窒息を用いて動
物を殺す。死亡と組織処理／保存との間の時間を最短に
するために、グループにおいてではなく、個々にマウス
を殺すべきである。死亡したマウスを仰向けに置き、７
０％アルコールで毛を横向けに拭く。左下大腿部から腹
部へと、はさみを用いる最初の皮膚の切開を行い、次い
で、胸部を切る。腹部から右の下大腿部への切開により
切開を完了する。腹膜を貫通しないように注意すべきで
ある。鉗子で皮膚を固定し、含むから皮膚を静かに引っ
張る。腹膜を覆っているが通常には筋肉シートを完全に
は貫通していない、露出した膿瘍を切除するが、内蔵を
傷つけないように注意する。液体窒素中での迅速凍結の
前に、膿瘍／筋肉シートおよび他の感染組織を切片化す
る必要があるかもしれない。切片化によりプラスチック
製収集バイアル中での保存が容易となる。

【００８２】ｂ）血液原性腎盂腎炎のネズミのモデルか
らのスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９感染
組織の単離 エス・アウレウスＷＣＵＨ２９の一晩培養を、５ｍｌの
トリプリン消化ソイブロス（ＴＳＢ）中で開始し、振盪
しながら３７℃で増殖させる。次いで、滅菌金酸塩緩衝
化セイライン（ＰＢＳ）で培養物をを２回洗浄し、希釈
してＡ６００＝０．３とする。ツベルクリン用シリンジ
に装着した３０ｇの注射針を用いて尾の静脈に接種する
ことにより、オスのＣＤ−１マウス（体重１８〜２０
ｇ）をこの懸濁液０．２ｍｌで感染させる。このやり方
で各マウスは４ｘ１０^７個の細菌を与えられる。疾病の
徴候についてマウスを毎日モニターし、通常には、４８
時間以内に昏睡状態、逆立った毛、不活発さの徴候が見
られ、実験終了前に瀕死と思われる動物を安楽死させ
る。感染７日後、二酸化炭素過剰摂取によりすべての動
物を安楽死させる。動物を仰向けに置き、エタノールで
拭き、次いで、ＲＮＡＺａｐで拭く。器具も同様に拭
く。腹腔を開き、腎臓を無菌的に取り、４片に切り、凍
結バイアルに入れ、即座に液体窒素で凍結する。

【００８３】ｃ）感染組織試料からのスタフィロコッカ
ス・アウレウスＷＣＵＨ２９の単離 ２ｍｌの凍結保存チューブ中の４〜６個の感染組織試料
（各０．５〜０．７ｇ）を−８０℃の貯蔵庫からドライ
アイス−エタノール浴中に取り出す。微生物安全キャビ
ネット中で試料を破砕し、残った試料をドライアイス−
エタノール浴中で保存する。組織試料中の細菌を破砕す
るために、TRIzol Reagent（Gibco BRL,Life Technolog
ies）を添加し、次いで、０．１ｍｍジルコニア／シリ
カビーズをチューブにほとんどいっぱいになるまで満た
し、ネジの部分にビーズか付かないように注意してふた
をして、良好な密閉状態を保ち、エアロゾル発生をなく
す。次いで、試料をMini-BeadBeater Type BX-4（Biosp
ec Products）でホモジナイズする。壊死脂肪組織を５
０００ｒｐｍで１００秒間処理して細菌溶解物を得る。
インビボで増殖した細菌はインビトロで増殖したスタフ
ィロコッカス・アウレウス（３０秒のビーズ処理で破砕
される）よりも長時間処理を要する。ビーズ処理後、フ
ーム−フード（fume-hood）中で開栓する前に、氷でチ
ューブを冷却する。なぜなら、破砕中に熱が発生し、TR
Izolが分解され、シアニドが有利する可能性があるため
である。次いで、２００ｍｌのクロロホルムを添加し、
チューブを手で１５秒間振盪して完全に混合する。室温
で２〜３分後、チューブを１２０００ｘｇ、４℃で遠心
分離し、TRIzol Reagentの製造者による方法によりＲＮ
Ａ抽出を続行する。すなわち、約０．６ｍｌの水相を滅
菌エッペンドルフチューブに移し、０．５ｍｌのイソプ
ロパノールを添加する。室温で１０分後、試料を１２０
００ｘｇ、４℃で１０分遠心分離する。上清を取って捨
て、次いで、ＲＮＡペレットを１ｍｌの７５％エタノー
ルで洗浄する。短時間ボルテックス撹拌して試料を混合
し、その後７５００ｘｇ、４℃で５分間遠心分離する。
エタノールを除去し、ＲＮＡペレットを５分以上減圧乾
燥する。次いで、試料を１００マイクロリットルのＤＥ
ＰＣ処理水中に繰り返しピペッティングすることにより
再懸濁し、次いで、５５℃で５〜１０分置く。最後に氷
上で少なくとも１分置いた後、２００ユニットのＲｎａ
ｓｉｎ（Promega）を添加する。ＲＮＡ調合物は−８０
℃で１カ月まで保存される。長期保存には、プロトコー
ルの洗浄段階における７５％エタノール中のＲＮＡ沈殿
は−２０℃で少なくとも１年保存できる。１％アガロー
スゲル上に試料を泳動することにより単離ＲＮＡの品質
を評価する。臭化エチジウム染色した１ｘＴＢＥゲルを
用いて収集全ＲＮＡを可視化する。感染組織からの細菌
ＲＮＡの単離を示すために、１ｘＭＯＰＳ、２．２Ｍホ
ルムアルデヒドゲルで泳動を行い、Hybond-N（Amersha
m）に減圧ブロッティングする。次いで、ブロットを、
スタフィロコッカス・スレウスの１６Ｓ ｒＲＮＡに特
異的な^３２Ｐ標識オリゴヌクレオチドプローブ（K. Gre
isen, M. Loeffelholz, A. Purohit and D. leong. J.
Clin. (1994) Microbiol. 32 335-351）とハイブリダイ
ゼーションさせる。配列：５’−gctcctaaaaggttactcca
ccggc−３’のオリゴヌクレオチドをプローブとして使
用する。ハイブリダイゼーションしているバンドのサイ
ズを、インビボ増殖したスタフィロコッカス・アウレウ
スＷＣＵＨ２９から単離された対照ＲＮＡのものとノー
ザンブロットにおいて比較する。全ＲＮＡ試料中におい
て正しいサイズの細菌１６Ｓ ｒＲＮＡバンドが検出で
き、ＴＢＥゲル上で可視化した場合、哺乳動物ＲＮＡの
分解が示される。

【００８４】ｄ）スタフィロコッカス・アウレウスＷＣ
ＵＨ２９由来のＲＮＡからのＤＮＡの除去 最終体積９０マイクロリットルのバッファー（２００ユ
ニットのRnasin（Promega）を添加補足）中で、３ユニ
ットのＤＮＡａｓｅＩ（増幅グレード）（GibcoBRL, Li
fe Technologies）を用いて、氷上で１５分処理するこ
とにより、７３マイクロリットルのＲＮＡ試料からＤＮ
Ａを除去した。製造者のプロトコールに従ってTRIzol L
S試薬（Gibco BRL, Life Technologies）によりＤＮＡ
ａｓｅを不活性化し除去した。ＤＮＡａｓｅ処理したＲ
ＮＡを、Ｒｎａｓｉｎを添加したＤＰＥＣ処理水７３マ
イクロリットル中に再懸濁した。

【００８５】ｅ）感染組織由来のＲＮＡ試料からのｃＤ
ＮＡの調製 製造者の指示に従って、ＤＮＡａｓｅ処理したＲＮＡの
試料１０マイクロリットルを、First Strand cDNA合成
キット用のSuperScript Preamplification System（Gib
co BRL, Life Technologies）を用いて逆転写する。１
ナノグラムのランダムヘキサマーを用いて各反応を開始
する。SuperScripItI逆転写酵素を添加しない対照も反
応させる。＋／−ＲＴ双方の試料をＲＮａｓｅＨで処理
し、次いで、ＰＣＲ反応に供する。

【００８６】ｆ）細菌ｃＤＮＡ種の存在を調べるための
ＰＣＲの使用 下記成分を添加することにより氷上で０．２ｍｌのチュ
ーブにおいてＰＣＲ反応物をセットアップする：４５マ
イクロリットルのPCR SUPERMIX（Gibco BRL, Life Tech
nologies）；マクロリットルの５０ｍＭ ＭｇＣｌ
_２（最終濃度２．５ｍＭとする）；１マイクロリットル
のＰＣＲプライマー（最適には、１８〜２５塩基対の長
さで、類似のアニーリング温度を有するように設計され
たもの）（各プライマーは初発濃度１０ｍＭ）；および
５マイクロリットルのｃＤＮＡ。Perkin Elmer GeneAmp
PCR System 9600においてＰＣＲ反応を行った：９５℃
で５分、次いでそれぞれ９４℃、５０℃そして７２℃で
３０秒を５０サイクル、その後７２℃で３分、次いで、
保持温度４℃とする（最適には、ＰＣＲ生成物の出現ま
たは欠乏を決定するためのサイクル数は３０〜５０回、
ＲＴ反応からの初発ｃＤＮＡ量の評価を行う場合には、
最適には８〜３０サイクル）。次いで、１０マイクロリ
ットルの部分試料を１％ １ｘＴＢＥゲルで泳動し、臭
化エチジウム染色する。ＰＣＲ生成物については、存在
するならば、１００ｂｐのＤＮＡラダー（Gibco BRL, L
ife Technologies）との比較によりサイズを評価する。
別法として、便利には、標識ＰＣＲプライマー（例え
ば、５’末端を標識したもの）を用いてＰＣＲ生成物を
標識し、ＰＣＲ生成物の適当な部分試料をポリアクリル
アミドゲルで泳動し、適当なゲルスキャンニングシステ
ム（例えば、Perkin Elmerにより提供されるGeneScanTM
ソフトウェアを用いたABI PrismTM 377 Sequencer）を
用いてその存在および量を調べる。ＲＴ／ＰＣＲ対照は
＋／−逆転写酵素反応物、非転写スタフィロコッカス・
アウレウスＷＣＵＨ２９ゲノム配列からＰＣＲ生成物を
生じるように設計された１６Ｓ ｒＲＮＡプライマーも
しくはＤＮＡ特異的プライマーペアーを含んでいてもよ
い。プライマーペアーの効率を試験するために、それら
をスタフィロコッカス・アウレウスＷＣＵＨ２９全ＤＮ
Ａを用いるＤＮＡ ＰＣＲに使用する。ＰＣＲ反応をセ
ットアップし、ｃＤＮＡの代わりに約１マイクログラム
のＤＮＡを用いて上記のごとく３５サイクルのＰＣＲ反
応を行う。ＤＮＡ ＰＣＲまたはＰＴ／ＰＣＲのいずれ
においても予想サイズの生成物を生じないプライマーペ
アーはＰＣＲ反応できず、そのようなものとしては不均
一である。ＤＮＡ ＰＣＲで正しいサイズの生成物を生
じるものは２つのクラスに分類される：１．インビボで
転写されない遺伝子であって、ＲＴ／ＰＣＲにおいて生
成物を生じる再現性がないもの；および２．インビボで
転写される遺伝子であって、ＲＴ／ＰＣＲにおいて正し
いサイズの生成物を再現性をもって生じ、＋ＲＴ試料に
おいて−ＲＴ対照におけるシグナル（生じた場合には）
よりも強力なシグナルを生じるもの。

【００８７】

【配列表】 <110> SmithKline Beecham Corporation SmithKline Beecham plc <120> Novel Regulator <130> 181690 <150> US 08/900,953 <151> 1997-07-25 <160> 6 <210> 1 <211> 1446 <212> DNA <213> <400> 1 atggtacaac caatctcgaa tggatttacc tatccaattt taaaagggag ggagaagatg 60 gctaaatatc aagatattgc tagtgacata agagataaaa taatcacagg ggattggttt 120 tatggaatga agatacctcc acagaggcag ttggcgatac aatacaacgt aaatagagtg 180 acgattatta aaagtattga gttattagag gctgaaggat ttatctatac taaagtgggg 240 agtggaacat atgttaatga ctatttgaat gaagcacata ttacaaataa gtggtctgaa 300 atgatgttat ggtcctctca acaaagaagt cagtatacgg tgcaattaat taataaaatt 360 gagacagatg attcgtatat acatataagt aaaggtgaat tgggtatatc gttaatgcca 420 catattcaat tgaaaaaagc catgtctaat acagccagtc atattgaaga cttatctttt 480 ggttataata atggctatgg ttatatcaag ttaagagata ttatcgttga acgaatgtca 540 aagcaaggta taaatgtagg tagagaaaat gtaatgatca cttcaggcgc tttacatgcc 600 attcaacttt tatctattgg gtttttaggt caagatgcca taataatttc gaatacacca 660 tcatatattc actctacaaa tgtttttgag caattgaatt ttagacatat tgatgttcct 720 tataatcaaa ttaatgaaat taataccatc attgatagat ttattaattt taaaaataaa 780 gcgatttata tagaacctag gtttaataac ccgacaggtc gttctttaac gaatgagcaa 840 aagaaaaata taattactta tagcgaaaga cataatattc ctatcattga agatgatatc 900 tttagagata ttttctttag cgatccaact cctgctatca aaacttatga taaattggga 960 aaagttatac atataagcag tttttcaaaa acgattgcac cagcaataag aataggttgg 1020 attgttgctt ctgaaaaaat aatagagcaa ttggcagatg taagaatgca aatcgactat 1080 ggatccagta tgtggtcaca aatggttgta tatgagatgt tgaaaaataa gtcttatgat 1140 aaacacttag taaagttaag gtatgtttta aaagataaac gagactttat gttaaacatc 1200 ctcaataatt tatttaagga tatagcacat tgggaggttc caagtggagg ttattgtgta 1260 tggttagtct ttaaaataga tatagatatt aaatatttat tttacgaatt gttaagtaaa 1320 gaaaaaatat taatcaatcc gggttacatt tatggcagta aagaaaagag tataaggcta 1380 tcttttggct ttgaatcaaa tgaaaatatt aagcatgcgc tctataaaat ttatacatat 1440 tgttga 1446 <210> 2 <211> 1446 <212> DNA <213> <400> 2 Met Val Gln Pro Ile Ser Asn Gly Phe Thr Tyr Pro Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Arg Glu Lys Met Ala Lys Tyr Gln Asp Ile Ala Ser Asp Ile Arg Asp 20 25 30 Lys Ile Ile Thr Gly Asp Trp Phe Tyr Gly Met Lys Ile Pro Pro Gln 35 40 45 Arg Gln Leu Ala Ile Gln Tyr Asn Val Asn Arg Val Thr Ile Ile Lys 50 55 60 Ser Ile Glu Leu Leu Glu Ala Glu Gly Phe Ile Tyr Thr Lys Val Gly 65 70 75 80 Ser Gly Thr Tyr Val Asn Asp Tyr Leu Asn Glu Ala His Ile Thr Asn 85 90 95 Lys Trp Ser Glu Met Met Leu Trp Ser Ser Gln Gln Arg Ser Gln Tyr 100 105 110 Thr Val Gln Leu Ile Asn Lys Ile Glu Thr Asp Asp Ser Tyr Ile His 115 120 125 Ile Ser Lys Gly Glu Leu Gly Ile Ser Leu Met Pro His Ile Gln Leu 130 135 140 Lys Lys Ala Met Ser Asn Thr Ala Ser His Ile Glu Asp Leu Ser Phe 145 150 155 160 Gly Tyr Asn Asn Gly Tyr Gly Tyr Ile Lys Leu Arg Asp Ile Ile Val 165 170 175 Glu Arg Met Ser Lys Gln Gly Ile Asn Val Gly Arg Glu Asn Val Met 180 185 190 Ile Thr Ser Gly Ala Leu His Ala Ile Gln Leu Leu Ser Ile Gly Phe 195 200 205 Leu Gly Gln Asp Ala Ile Ile Ile Ser Asn Thr Pro Ser Tyr Ile His 210 215 220 Ser Thr Asn Val Phe Glu Gln Leu Asn Phe Arg His Ile Asp Val Pro 225 230 235 240 Tyr Asn Gln Ile Asn Glu Ile Asn Thr Ile Ile Asp Arg Phe Ile Asn 245 250 255 Phe Lys Asn Lys Ala Ile Tyr Ile Glu Pro Arg Phe Asn Asn Pro Thr 260 265 270 Gly Arg Ser Leu Thr Asn Glu Gln Lys Lys Asn Ile Ile Thr Tyr Ser 275 280 285 Glu Arg His Asn Ile Pro Ile Ile Glu Asp Asp Ile Phe Arg Asp Ile 290 295 300 Phe Phe Ser Asp Pro Thr Pro Ala Ile Lys Thr Tyr Asp Lys Leu Gly 305 310 315 320 Lys Val Ile His Ile Ser Ser Phe Ser Lys Thr Ile Ala Pro Ala Ile 325 330 335 Arg Ile Gly Trp Ile Val Ala Ser Glu Lys Ile Ile Glu Gln Leu Ala 340 345 350 Asp Val Arg Met Gln Ile Asp Tyr Gly Ser Ser Met Trp Ser Gln Met 355 360 365 Val Val Tyr Glu Met Leu Lys Asn Lys Ser Tyr Asp Lys His Leu Val 370 375 380 Lys Leu Arg Tyr Val Leu Lys Asp Lys Arg Asp Phe Met Leu Asn Ile 385 390 395 400 Leu Asn Asn Leu Phe Lys Asp Ile Ala His Trp Glu Val Pro Ser Gly 405 410 415 Gly Tyr Cys Val Trp Leu Val Phe Lys Ile Asp Ile Asp Ile Lys Tyr 420 425 430 Leu Phe Tyr Glu Leu Leu Ser Lys Glu Lys Ile Leu Ile Asn Pro Gly 435 440 445 Tyr Ile Tyr Gly Ser Lys Glu Lys Ser Ile Arg Leu Ser Phe Gly Phe 450 455 460 Glu Ser Asn Glu Asn Ile Lys His Ala Leu Tyr Lys Ile Tyr Thr Tyr 465 470 475 480 <210> 3 <211> 1443 <212> DNA <213> <400> 3 atggtacaac caatctcgaa tggatttacc tatccaattt taaaagggag ggagaagatg 60 gctaaatatc aagatattgc tagtgacata agagataaaa taatcacagg ggattggttt 120 tatggaatga agatacctcc acagaggcag ttggcgatac aatacaacgt aaatagagtg 180 acgattatta aaagtattga gttattagag gctgaaggat ttatctatac taaagtgggg 240 agtggaacat atgttaatga ctatttgaat gaagcacata ttacaaataa gtggtctgaa 300 atgatgttat ggtcctctca acaaagaagt cagtatacgg tgcaattaat taataaaatt 360 gagacagatg attcgtatat acatataagt aaaggtgaat tgggtatatc gttaatgcca 420 catattcaat tgaaaaaagc catgtctaat acagccagtc atattgaaga cttatctttt 480 ggttataata atggctatgg ttatatcaag ttaagagata ttatcgttga acgaatgtca 540 aagcaaggta taaatgtagg tagagaaaat gtaatgatca cttcaggcgc tttacatgcc 600 attcaacttt tatctattgg gtttttaggt caagatgcca taataatttc gaatacacca 660 tcatatattc actctacaaa tgtttttgag caattgaatt ttagacatat tgatgttcct 720 tataatcaaa ttaatgaaat taataccatc attgatagat ttattaattt taaaaataaa 780 gcgatttata tagaacctag gtttaataac ccgacaggtc gttctttaac gaatgagcaa 840 aagaaaaata taattactta tagcgaaaga cataatattc ctatcattga agatgatatc 900 tttagagata ttttctttag cgatccaact cctgctatca aaacttatga taaattggga 960 aaagttatac atataagcag tttttcaaaa acgattgcac cagcaataag aataggttgg 1020 attgttgctt ctgaaaaaat aatagagcaa ttggcagatg taagaatgca aatcgactat 1080 ggatccagta tgtggtcaca aatggttgta tatgagatgt tgaaaaataa gtcttatgat 1140 aaacacttag taaagttaag gtatgtttta aaagataaac gagactttat gttaaacatc 1200 ctcaataatt tatttaagga tatagcacat tgggaggttc caagtggagg ttattgtgta 1260 tggttagtct ttaaaataga tatagatatt aaatatttat tttacgaatt gttaagtaaa 1320 gaaaaaatat taatcaatcc gggttacatt tatggcagta aagaaaagag tataaggcta 1380 tcttttggct ttgaatcaaa tgaaaatatt aagcatgcgc tctataaaat ttatacatat 1440 tgt 1443 <210> 4 <211> 480 <212> PRT <213> <400> 4 Met Val Gln Pro Ile Ser Asn Gly Phe Thr Tyr Pro Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Arg Glu Lys Met Ala Lys Tyr Gln Asp Ile Ala Ser Asp Ile Arg Asp 20 25 30 Lys Ile Ile Thr Gly Asp Trp Phe Tyr Gly Met Lys Ile Pro Pro Gln 35 40 45 Arg Gln Leu Ala Ile Gln Tyr Asn Val Asn Arg Val Thr Ile Ile Lys 50 55 60 Ser Ile Glu Leu Leu Glu Ala Glu Gly Phe Ile Tyr Thr Lys Val Gly 65 70 75 80 Ser Gly Thr Tyr Val Asn Asp Tyr Leu Asn Glu Ala His Ile Thr Asn 85 90 95 Lys Trp Ser Glu Met Met Leu Trp Ser Ser Gln Gln Arg Ser Gln Tyr 100 105 110 Thr Val Gln Leu Ile Asn Lys Ile Glu Thr Asp Asp Ser Tyr Ile His 115 120 125 Ile Ser Lys Gly Glu Leu Gly Ile Ser Leu Met Pro His Ile Gln Leu 130 135 140 Lys Lys Ala Met Ser Asn Thr Ala Ser His Ile Glu Asp Leu Ser Phe 145 150 155 160 Gly Tyr Asn Asn Gly Tyr Gly Tyr Ile Lys Leu Arg Asp Ile Ile Val 165 170 175 Glu Arg Met Ser Lys Gln Gly Ile Asn Val Gly Arg Glu Asn Val Met 180 185 190 Ile Thr Ser Gly Ala Leu His Ala Ile Gln Leu Leu Ser Ile Gly Phe 195 200 205 Leu Gly Gln Asp Ala Ile Ile Ile Ser Asn Thr Pro Ser Tyr Ile His 210 215 220 Ser Thr Asn Val Phe Glu Gln Leu Asn Phe Arg His Ile Asp Val Pro 225 230 235 240 Tyr Asn Gln Ile Asn Glu Ile Asn Thr Ile Ile Asp Arg Phe Ile Asn 245 250 255 Phe Lys Asn Lys Ala Ile Tyr Ile Glu Pro Arg Phe Asn Asn Pro Thr 260 265 270 Gly Arg Ser Leu Thr Asn Glu Gln Lys Lys Asn Ile Ile Thr Tyr Ser 275 280 285 Glu Arg His Asn Ile Pro Ile Ile Glu Asp Asp Ile Phe Arg Asp Ile 290 295 300 Phe Phe Ser Asp Pro Thr Pro Ala Ile Lys Thr Tyr Asp Lys Leu Gly 305 310 315 320 Lys Val Ile His Ile Ser Ser Phe Ser Lys Thr Ile Ala Pro Ala Ile 325 330 335 Arg Ile Gly Trp Ile Val Ala Ser Glu Lys Ile Ile Glu Gln Leu Ala 340 345 350 Asp Val Arg Met Gln Ile Asp Tyr Gly Ser Ser Met Trp Ser Gln Met 355 360 365 Val Val Tyr Glu Met Leu Lys Asn Lys Ser Tyr Asp Lys His Leu Val 370 375 380 Lys Leu Arg Tyr Val Leu Lys Asp Lys Arg Asp Phe Met Leu Asn Ile 385 390 395 400 Leu Asn Asn Leu Phe Lys Asp Ile Ala His Trp Glu Val Pro Ser Gly 405 410 415 Gly Tyr Cys Val Trp Leu Val Phe Lys Ile Asp Ile Asp Ile Lys Tyr 420 425 430 Leu Phe Tyr Glu Leu Leu Ser Lys Glu Lys Ile Leu Ile Asn Pro Gly 435 440 445 Tyr Ile Tyr Gly Ser Lys Glu Lys Ser Ile Arg Leu Ser Phe Gly Phe 450 455 460 Glu Ser Asn Glu Asn Ile Lys His Ala Leu Tyr Lys Ile Tyr Thr Tyr 465 470 475 480 <210> 5 <211> 21 <212> DNA <213> <400> 5 gaagcacata ttacaaataa g 21 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> <400> 6 ttatatgtat aacttttccc 20

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 14/31 ４Ｃ０８４ Ｃ０７Ｋ 14/31 16/12 ４Ｃ０８５ 16/12 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５ Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 33/68 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/68 5/00 Ａ (71)出願人 595047190 スミスクライン・ビーチャム・パブリッ ク・リミテッド・カンパニー ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ｐ．ｌ．ｃ. イギリス国ミドルセックス・ティーダブリ ュ８・９イーピー、ブレンフォード、ニュ ー・ホライズンズ・コート (72)発明者 マーティン・カール・ラッセル・バーナム アメリカ合衆国19403ペンシルベニア州ノ ーリスタウン、タングルウッド・レイン 2927番 (72)発明者 マイケル・アーサー・ロネット アメリカ合衆国19426ペンシルベニア州カ レッジビル、ビクトリア・サークル18番 (72)発明者 パトリック・バーノン・ウォーレン アメリカ合衆国19136ペンシルベニア州フ ィラデルフィア、シェフィールド・アベニ ュー3507番 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 BB24 BB46 DA13 DA36 FB02 FB03 FB05 FB07 4B024 AA01 AA11 BA31 BA40 CA04 DA06 EA04 GA11 HA01 HA11 4B063 QA01 QA07 QQ43 QR32 QR55 QR62 QS34 4B064 AG01 AG26 CA02 CA19 CC24 DA01 DA15 4B065 AA26X AA53Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C084 AA01 AA02 AA13 AA16 BA01 BA22 CA04 DC50 MA17 MA28 MA52 MA55 MA56 MA59 MA66 NA14 ZB352 ZC412 4C085 AA03 BA13 GG02 GG03 GG04 GG06 GG08 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA11 DA75 DA86 EA29 EA52 FA74

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ａ）配列番号２のアミノ酸配列を含むポ
   リペプチドコードしているポリヌクレオチドに対して少
   なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド； （ｂ）寄託株のスタフィロコッカス・アウレウス中に含
   まれるレギュレーター遺伝子により発現されるのと同じ
   成熟ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに
   対して少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオ
   チド； （ｃ）配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも
   ７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコ
   ードしているポリヌクレオチド； （ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチド
   に対して相捕的であるポリヌクレオチド；および （ｅ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチド
   の少なくとも１５個の連続した塩基を含むポリヌクレオ
   チドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を
   含む単離ポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ＤＮＡである請求項１のポリヌクレオチ
   ド。
3. 【請求項３】 ＲＮＡである請求項１のポリヌクレオチ
   ド。
4. 【請求項４】 配列番号１に示す核酸配列を含む請求項
   ２のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 配列番号１に示すヌクレオチド１から１
   ４４３までを含む請求項２のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号：２のアミノ酸配列を含むポリ
   ペプチドをコードしている請求項２のポリヌクレオチ
   ド。
7. 【請求項７】 請求項１のポリヌクレオチドを含むベク
   ター。
8. 【請求項８】 請求項７のベクターを含む宿主細胞。
9. 【請求項９】 請求項８の宿主細胞から上記ＤＮＡによ
   りコードされているポリペプチドを発現させることを含
   む、ポリペプチドの製造方法。
10. 【請求項１０】 レギュレーターポリペプチドまたはフ
    ラグメントの製造方法であって、該ポリペプチドまたは
    フラグメントの生成に十分な条件下で請求項８の宿主を
    培養することを含む方法。
11. 【請求項１１】 配列番号：２のアミノ酸配列に対して
    少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペ
    プチド。
12. 【請求項１２】 配列番号：２に示すアミノ酸配列を含
    むポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１のポリペプチドに対する抗
    体。
14. 【請求項１４】 治療上有効量の請求項１１のポリペプ
    チドを個体に投与することを含む、レギュレーターポリ
    ペプチドを必要とする個体の治療方法。
15. 【請求項１５】 配列番号：２のアミノ酸配列に対して
    少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含むポリペ
    プチドに対する治療上有効量のアンタゴニストを個体に
    投与することを含む、レギュレーターポリペプチドの阻
    害を必要とする個体の治療方法。
16. 【請求項１６】 個体における請求項１１のポリペプチ
    ドの発現または活性に関連した疾病の診断方法であっ
    て、 （ａ）該ポリペプチドをコードしている核酸配列を決定
    すること、および／または（ｂ）個体由来の試料中の該
    ポリペプチドの存在または量について分析することを含
    む方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１のポリペプチドと相互作用
    して、その活性を阻害または活性化する化合物の同定方
    法であって、化合物とポリペプチドとの間の相互作用を
    可能にする条件下で、ポリペプチドとスクリーニングす
    べき化合物とを接触させて化合物の相互作用を評価し
    （かかる相互作用はポリペプチドと化合物との相互作用
    に応答した検出可能シグナルを提供しうる第２の成分に
    関連したものである）、次いで、化合物とポリペプチド
    との相互作用により生じるシグナルの存在または不存在
    を検出することにより、化合物がポリペプチドと相互作
    用して、その活性を活性化または阻害するかどうかを決
    定することを含む方法。
18. 【請求項１８】 哺乳動物における免疫学的応答を誘導
    する方法であって、抗体および／またはＴ細胞を生じさ
    せて動物を疾病から防御するに十分な請求項１１のレギ
    ュレーターポリペプチドまたはそのフラグメントもしく
    は変種を哺乳動物に接種することを含む方法。
19. 【請求項１９】 哺乳動物における免疫学的応答を誘導
    する方法であって、レギュレーターポリペプチドまたは
    そのフラグメントもしくは変種をインビボで発現させ
    て、抗体および／またはＴ細胞を生じさせる免疫学的応
    答を誘導して該動物を疾病から防御するするために、請
    求項１１のレギュレーターポリペプチドまたはそのフラ
    グメントもしくは変種の発現を指令する核酸ベクターを
    送達することを含む方法。