JPH11511731A - 粒状薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、１種類以上のアニオン性−または部分的アニオン性有効物質が担体物質に結合しており、該担体物質が次式 〔式中、Ｎはｐ：ｎ＝０：１００〜９９：１のモル比のアクリル酸またはアクリル酸エステルまたはメタクリル酸エステルよりなる粒状共重合体または単独重合体であり；Ｏはエステル基の酸素であり；Ｘは２〜１０の炭素原子より成る分岐したまたは直鎖状のアルキル鎖であり；ＢはＲが水素原子および低級アルキル鎖の任意の組合せである−ＮＲ₂であり；Ｅは水素原子または低級アルキル鎖である。〕で表される構造を有している、１０〜１０００ｎｍの粒度分布を有している粒状薬剤に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 粒状薬剤 本発明は、１種類以上のアニオン性−または部分的アニオン性有効物質が担体 物質に結合しており、該担体物質が次式 〔式中、Ｎはｐ：ｎ＝０：１００〜９９：１のモル比のアクリル酸またはアクリ ル酸エステルまたはメタクリル酸エステルよりなる粒状共重合体または単独重合 体であり；Ｏはエステル基の酸素であり；Ｘは２〜１０の炭素原子より成る分岐 したまたは直鎖状のアルキル鎖であり；ＢはＲが水素原子および低級アルキル鎖 の任意の組合せである−ＮＲ₂あり；Ｅは水素原子または低級アルキル鎖である 。〕 で表される構造を有している、１０〜１０００ｎｍの粒度分布を有している粒状 薬剤に関する。本発明の１０〜約１０００ｎｍの粒度の粒子は、重要なオリゴマ ーのまたは巨大分子の構造の結合の他に、分解酵素の保護および有効物質の目的 に合ったおよび細胞膜を通しての運搬を確実にするという目的を有している。 本発明の粒子は重合反応によって相応するモノマー成分から合成されあるいは 縮合される。モノマーとしては、重合の後に水不溶性の生理学的に親和性の生成 物となる物質が適してる。塩基性変性したまたは塩基性変性してないアクリル酸 エステルまたはメタクリル酸エステルが適している。塩基性変性したアクリル酸 エステルまたはメタクリル酸エステルは、アルキル鎖が２〜１０個の炭素原子を 介して結合することに特徴がある。４〜１０、特に５〜８の炭素原子数の鎖長を 用いるのが有利である。これによって当該物質に結合させるために塩基性アミノ 基を適切に用いることが保証される。 重合メカニズムとしては例えば水性または有機相でまたは水と有機溶剤、例え ばアセトンまたはエタノールとの混合物中でのラジカル−またはイオン重合を選 択できる。重合および溶剤除去の終了後に担体物質を水または好ましくは生理学 的に親和性のある緩衝媒体に再懸濁させてもよい。 保護されたアミノ基、殊にトリフルオロアセチル保護基を持つモノマーを縮合 反応に使用する場合には、オートクレーブ中でアンモニアと一緒に加熱すること によって該保護基を除くことができる。場合によっては適当な精製段階、好まし くは透析を後で行ってもよい。 こうして製造された担体物質は粒状であり、１０〜１０００ｎｍの粒度、好ま しくは５０〜５００ｎｍ、特に好ましくは５０〜３００ｎｍの粒度を有している 。更に担体物質は、正のＺ−ポテンシャル（Ｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ）によ って表される正の表面電荷によって水中に懸濁される。 本発明の担体物質は好ましくはイオン相互作用によって核酸、例えばオリゴヌ クレオチドまたはペプチドを結合させるために使用される。オリゴヌクレオチド 、例えば抗感性−オリゴヌクレオチドの結合技術またはゲントランスファー（Ｇ ｅｎｔｒａｎｓｆｅｒ）のために使用されそしてリポソーム担体〔リポフェクチ ン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）〕に有効物質を結合させることを基礎とするプラス ミドの結合技術に対して、この特許発明は、リポソーム調製物に比べて水性懸濁 物の状態で本質的に高い安定性を有する固体粒状担体であるという本質的長所を 有している。リポフェクチンと違って、本発明の担体物質は色々な投薬形態に加 工することができる。例えば有効物質を一定の時間に渡ってコントロールしなが ら放出するインプラント（Ｉｍｐｌａｎｔ）として圧縮された状態で利用するか または圧縮によって製造される経口使用可能な薬剤形態が可能である。 アルキルシアノアクリレートを基礎とする小粒状物の如き従来に使用された粒 状担体に比較して、ここに記載の発明は、有効物質を意図的に結合させることを 保証する特別な機能性基をポリマー中に導入することができるという長所を有し ている。従来にはアルキルシアノアクリレートを基礎とするかまたはメタクリレ ートをベースとする粒状担体が開発されているが、結合しないかまたは不充分に しか結合しない。 実施例１：５０モル% の塩基性成分を有する体持ポリマーの製造 １% のメチルメタクリレート（ＭＭＡ）と１% のトリフルオロアセチルアミノ ヘキシル−メタクリレートというモノマーを４４% アセトンに溶解したモノマー 溶液を６３℃で０．０３% のアンモニウム−ペルオキソジスルファート溶液（Ａ ＰＳ）によって重合開始後に攪拌（４００回転／分）下に重合する。 詳しくは、水溶液を窒素導入下に１時間沸騰させる。それの４０ｇおよび３３ ｍｌのアセトン（２６．１g ）を１００ｍｌのねじぶた式容器中に入れる。５５ ℃の温度で最初にトリフルオロアセチルアミノヘキシルメタクリレート−モノマ ー／アセトン溶液（１：１）、ＭＭＡを添加しそしてその後に４５０μＬのＡＰ Ｓ−出発溶液（５% ）を添加する。次いで６３℃に加熱しそしてこの温度で２０ 時間攪拌する。その後に容器からねじぶたを取り除き、この温度で更に１．５時 間攪拌する。最後に水を補充して５０g とする。 生じる分散物を１：２（ｇ／ｇ）の比で濃厚アンモニアと混合しそして１２１ ℃で６０分にわたってオートクレーブで処理する。その後に流水中に３日間そし て水中に１日透析処理する。 得られるポリマーを次いで乾燥する。粒度および表面付着量は塩基性基の含有 量によってｐＨに左右される。凝集物の形成によって粒度は重合で生ずる大きさ １０〜１０００ｎｍより大きい粒度も得られ得る（図１）。 実施例２：オリゴヌクレオチドの結合 ７．５ｍｇの実施例１の担体ポリマーを１．０ｍＬの蒸留水中に超音波によっ て分散させる。それから得られる６０μＬの０．７５% 濃度の担体懸濁物を室温 （２０℃）で３０ｍＬの燐酸塩緩衝液（７０ｍＭ）とｐＨ７．０で混合する。こ の担体懸濁物を６０μＬのオリゴヌクレオチド溶液（３６．４μｇ／ｍＬ）と混 合しそして２０℃で２時間保温する。 結合したオリゴヌクレオチドの割合を測定するために、１００μＬのこの粒状 懸濁物を約１００，０００g で超遠心機中で３０分遠心分離する。結合していな い成分は上澄み液中で光測定によって測定される（図２）。 実施例３：ペプチドの結合を例としてＴＣＦαについて試みる 実施例１に従って製造された２０ｍｇの担体ポリマーを１．０ｍＬの蒸留水中 に超音波によって分散させる。１２５μＬの２% 濃度の担体懸濁液が得られ、こ れを６２．５μＬの０．３% ＢＳＡ含有ＰＢＳ−緩衝溶液（ｐＨ７．４）と混合 する。この懸濁液に６２．５μＬのＴＧＦα溶液（３０μｇ／ｍＬ）を混入し、 室温で２４時間保存する。 結合したペプチドの割合を実施例２と同様に測定する。ＴＧＦαは適当なＥＬ ＩＳＡ−試験によってまたは¹²⁵Ｉでマーキングした後に粒子に残る放射線を測 定することによって測定できる。 平均してペプチド使用量の７０〜９０% が粒状担体に結合している。 実施例４：３０% の塩基成分を含有する担体ポリマーの製造 ２．１% のメチルメタクリレート（ＭＭＡ）および０．９% のトリメチルアミ ノエチルメタクリレート−モノマーを１０% アセトンに溶解したモノマー溶液を ７８℃で重合開始後に０．０３% のアンモニウム−ペルオキソ二硫酸塩溶液（Ａ ＰＳ）によって攪拌（４００回転／分）下に重合する。 詳しくは、水溶液を窒素導入下に１時間沸騰させる。それの６７．５g および ７．５ｍｌのアセトンを１００ｍｌのねじぶた式容器中に入れる。７８℃の温度 でモノマーを供給しそして次に４５０μＬのＡＰＳ−開始剤溶液（５% 濃度）を 供給する。次に２０時間攪拌する。その後に容器のねじぶたを除きそして更に１ ．５時間、この温度で攪拌する。最後に水を補充して７５g とする。 更に流水中に３日間そして水溶液中に１日間、透析し、そして次に得られるポ リマーを乾燥させる。 実施例５：オリゴヌクレオチドの結合 ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４中に２００μｇ／ｍＬの実施例４の担体ポリマーを分 散させた分散物を、オリゴヌクレオチドの濃度を増加させながら（１０〜１００ μｇ／ｍＬ）室温で３時間、保存する。 結合したオリゴヌクレオチドの割合を測定するために、この粒子懸濁液を約１ ００，０００g で超遠心機中で３０分遠心分離する。結合していないオリゴヌク レオチドの割合は上澄みＨＰＬＣ−分析によって測定する（図３）。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年４月７日 【補正内容】 明細書 粒状薬剤 本発明は、１種類以上のアニオン性−または部分的アニオン性有効物質、好ま しくは核酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ペプチドまたは生物学的巨大分 子がイオン相互作用によって担体物質に結合しており、該担体物質が次式 〔式中、Ｎはｐ：ｎ＝０：１００〜９９：１のモル比のアクリル酸またはアクリ ル酸エステルまたはメタクリル酸エステルよりなる粒状共重合体または単独重合 体であり；Ｏはエステル基の酸素であり；Ｘは２〜１０の炭素原子より成る分岐 したまたは直鎖状のアルキル鎖であり；ＢはＲが水素原子および低級アルキル鎖 の任意の組合せである−ＮＲ₂であり；Ｅは水素原子または低級アルキル鎖であ る。〕 で表される構造を有している、１０〜１０００ｎｍの粒度分布を有している粒状 薬剤に関する。本発明の１０〜約１０００ｎｍの粒度の粒子は、重要なオリゴマ ーのまたは巨大分子の構造の結合の他に、分解酵素の保護および有効物質の目的 に合ったおよび細胞膜を通しての運搬を確実にするという目的を有している。 本発明の粒子は重合反応によって相応するモノマー成分から合成されあるいは 縮合される。モノマーとしては、重合の後に水不溶性の生理学的に親和性の生成 物となる物質が適してる。塩基性変性したまたは塩基性変性してないアクリル酸 エステルまたはメタクリル酸エステルが適している。塩基性変性したアクリル酸 エステルまたはメタクリル酸エステルは、アルキル鎖が２〜１０個の炭素原子を 介して結合することに特徴がある。４〜１０、特に５〜８の炭素原子数の鎖長を 用いるのが有利である。これによって当該物質に結合させるために塩基性アミノ 基を適切に用いることが保証される。 重合メカニズムとしては例えば水性または有機相でまたは水と有機溶剤、例え ばアセトンまたはエタノールとの混合物中でのラジカル−またはイオン重合を選 択できる。重合および溶剤除去の終了後に担体物質を水または好ましくは生理学 的に親和性のある緩衝媒体に再懸濁させてもよい。 保護されたアミノ基、殊にトリフルオロアセチル保護基を持つモノマーを縮合 反応に使用する場合には、オートクレーブ中でアンモニアと一緒に加熱すること によって該保護基を除くことができる。場合によっては適当な精製段階、好まし くは透析を後で行ってもよい。 こうして製造された担体物質は粒状であり、１０〜１０００ｎｍの粒度、好ま しくは５０〜５００ｎｍ、特に好ましくは５０〜３００ｎｍの粒度を有している 。更に担体物質は、正のＺ−ポテンシャル（Ｚｅｔａｐｏｔｅｎｔｉａｌ）によ って表される正の表面電荷によって水中に懸濁される。 本発明の担体物質は好ましくはイオン相互作用によって核酸、例えばオリゴヌ クレオチドまたはペプチドを結合させるために使用される。オリゴヌクレオチド 、例えば抗感性−オリゴヌクレオチドの結合技術またはゲントランスファー（Ｇ ｅｎｔｒａｎｓｆｅｒ）のために使用されそしてリポソーム担体〔リポフェクチ ン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）〕に有効物質を結合させることを基礎とするプラス ミドの結合技術に対して、この特許発明は、リポソーム調製物に比べて水性懸濁 物の状態で本質的に高い安定性を有する固体粒状担体であるという本質的長所を 有している。リポフェクチンと違って、本発明の担体物質は色々な投薬形態に加 工することができる。例えば有効物質を一定の時間に渡って遊離制御するインプ ラント（Ｉｍｐｌａｎｔ）として圧縮された状態で利用するかまたは圧縮によっ て製造される経口使用可能な薬剤形態が可能である。 アルキルシアノアクリレートを基礎とする小粒状物の如き従来に使用された粒 状担体に比較して、ここに記載の発明は、有効物質を意図的に結合させることを 保証する特別な機能性基をポリマー中に導入することができるという長所を有し ている。従来にはアルキルシアノアクリレートを基礎とするかまたはメタクリレ ートをベースとする粒状担体が開発されているが、結合しないかまたは不充分に しか結合しない。従来公知の小粒状薬剤は本発明に記載の塩基性の官能性基によ って使用することができない。従来公知の小粒状物、大抵はメチルメタクリレー ト小粒状物への有効物質の結合は脂肪好性物質の吸着作用によってまたはカプセ ル化あるいはポリマー骨格中への埋め込みによって非特異的に行われている。更 に、塩基変性によって利用できる巨大粒子状態の、アクリレートを基礎とする粒 子も公知である。この担体物質は本発明の物質と、＞１μm の粒度が使用される 点で本質的に相違している。かゝる調製物はタブレットの被覆物を製造するため の出発物質としてまたは経口−またはトランスデターム（ｔｒａｎｓｄｅｔｅｒ ｍａｌｅ）薬剤のための貯蔵マトリックス系の製造に原料としてしばしば使用さ れる（ヨーロッパ特許出願公開（Ａ２）第０，１６４，６６９号明細書およびヨ ーロッパ特許出願公開（Ａ）第３１５，２１９号明細書〕。固有の薬剤としての かゝる微小粒状担体物質を静脈内注射で非経口的投与することは従来知られてい ない。 実施例１：５０モル% の塩基性成分を有する体持ポリマーの製造 １% のメチルメタクリレート（ＭＭＡ）と１% のトリフルオロアセチルアミノ ヘキシルーメタクリレートというモノマーを４４% アセトンに溶解したモノマー 溶液を６３℃で０．０３% のアンモニウム−ペルオキソジスルファート溶液（Ａ ＰＳ）によって重合開始後に攪拌（４００回転／分）下に重合する。 詳しくは、水溶液を窒素導入下に１時間沸騰させる。それの４０g および３３ ｍｌのアセトン（２６．１g ）を１００ｍｌのねじぶた式容器中に入れる。５５ ℃の温度で最初にトリフルオロアセチルアミノヘキシルメタクリレート−モノマ ー／アセトン溶液（１：１）、ＭＭＡを添加しそしてその後に４５０μＬのＡＰ Ｓ−出発溶液（５% ）を添加する。次いで６３℃に加熱しそしてこの温度で２０ 時間攪拌する。その後に容器からねじぶたを取り除き、この温度で更に１．５時 間攪拌する。最後に水を補充して５０g とする。 請求の範囲 １．１種類以上のアニオン性−または部分的アニオン性有効物質、好ましくは核 酸、オリゴヌクレオチド、タンパク質、ペプチドまたは生物学的巨大分子がイオ ン相互作用によって担体物質に結合しており、該担体物質が次式 〔式中、Ｎはｐ：ｎ＝０：１００〜９９：１のモル比のアクリル酸またはアク リル酸エステルまたはメタクリル酸エステルよりなる粒状共重合体または単独重 合体であり；Ｏはエステル基の酸素であり；Ｘは２〜１０の炭素原子より成る分 岐したまたは直鎖状のアルキル鎖であり；ＢはＲが水素原子および低級アルキル 鎖の任意の組合せである−ＮＲ₂であり；Ｅは水素原子または低級アルキル鎖で ある。〕 で表される構造を有している、１０〜１０００ｎｍの粒度分布を有している粒 状薬剤。 ２．Ｘが４〜１０の炭素原子より成る分岐したまたは直鎖状のアルキル鎖である 請求項１に記載の薬剤。 ３．Ｘが５〜８の炭素原子より成るアルキル鎖である請求項２に記載の薬剤。 ４．Ｘが２または３の炭素原子より成る分岐したまたは直鎖状のアルキル鎖であ り、１０〜５００μm の粒度である請求項１に記載の薬剤。 ５．担体物質に１種類以上のペプチド物質が結合している請求項４に記載の粒状 薬剤。 ６．蛋白質または他の生物活性巨大分子が担体物質に結合する請求項４に記載の 粒状薬剤。 ７．Ｂはアンモニウム基を意味し、従って−Ｎ⁺Ｒ₃として存在しており、その際 にＲは請求項１に記載の意味を有する、請求項１〜６のいずれか一つに記載の薬 剤。 ８．アニオン性−または部分的アニオン性有効物質が核酸、オリゴヌクレオチド またはペプチドである請求項１〜７のいずれか一つに記載の薬剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＵ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ ，ＥＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＸ，ＮＺ，ＴＲ， ＵＳ (72)発明者 クロイター・イエルク ドイツ連邦共和国、Ｄ−61350 バート・ ホムブルク、ゲオルク−アウグスト−ツィ ン−ストラーセ、13 (72)発明者 ツィムマー・アンドレアス ドイツ連邦共和国、Ｄ−60437 フランク フルト・アム・マイン、アウフ・デム・リ ート、９ (72)発明者 ツォーベル・ハンス−ペーター ドイツ連邦共和国、Ｄ−65439 フレール スハイム、ホスピタルストラーセ、57 (72)発明者 シュティーネッカー・フランク ドイツ連邦共和国、Ｄ−65719 ホーフハ イム、イム・ロールスバッハタール、35 (72)発明者 アトマカ−アブデル・アジズ・セラプ ドイツ連邦共和国、Ｄ−64521 グロース −ゲラウ、マインツェルストラーセ、29

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．１種類以上のアニオン性−または部分的アニオン性有効物質が担体物質に結 合しており、該担体物質が次式 〔式中、Ｎはｐ：ｎ＝０：１００〜９９：１のモル比のアクリル酸またはアク リル酸エステルまたはメタクリル酸エステルよりなる粒状共重合体または単独重 合体であり；Ｏはエステル基の酸素であり；Ｘは２〜１０の炭素原子より成る分 岐したまたは直鎖状のアルキル鎖であり；ＢはＲが水素原子および低級アルキル 鎖の任意の組合せである−ＮＲ₂であり；Ｅは水素原子または低級アルキル鎖で ある。〕 で表される構造を有している、１０〜１０００ｎｍの粒度分布を有している粒 状薬剤。 ２．Ｘが４〜１０の炭素原子より成る分岐したまたは直鎖状のアルキル鎖である 請求項１に記載の薬剤。 ３．Ｘが５〜８の炭素原子より成るアルキル鎖である請求項２に記載の薬剤。 ４．Ｘが２または３の炭素原子より成る分岐したまたは直鎖状のアルキル鎖であ り、１０〜５００μm の粒度である請求項１に記載の薬剤。 ５．担体物質に１種類以上のペプチド物質が結合している請求項４に記載の粒状 薬剤。 ６．蛋白質または他の生物活性巨大分子が担体物質に結合する請求項４に記載の 粒状薬剤。 ７．Ｂはアンモニウム基を意味し、従って−Ｎ⁺Ｒ₃として存在しており、その 際にＲは請求項１に記載の意味を有する、請求項１〜６のいずれか一つに記載の 薬剤。 ８．アニオン性−または部分的アニオン性有効物質が核酸、オリゴヌクレオチド またはペプチドである請求項１〜７のいずれか一つに記載の薬剤。 ９．薬剤の担体としての請求項１〜７のいずれか一つに記載の粒状担体物質の使 用。 １０．核酸および未変性のまたは変性オリゴムクレオチドの担体としての請求項 １〜７のいずれか一つに記載の粒状担体物質の使用。 １１．ペプチドあるいはペプチド担体物質のための担体としての請求項１〜７の いずれか一つに記載の粒状担体物質の使用。 １２．ペプチドあるいは蛋白質または他の生物活性巨大分子のための担体として の請求項１〜７のいずれか一つに記載の粒状担体物質の使用。