JPH11510062A

JPH11510062A - 多機能性造血受容体アゴニスト

Info

Publication number: JPH11510062A
Application number: JP9514385A
Authority: JP
Inventors: フェン，イイキン; スタテン，ニコラス，アール．; バウム，チャールズ，エム．; サマーズ，ニーナ，エル．; キャパロン，メア，エイチ．; バウアー，エス．，シー．; ザーフルー，リンダ; マッキャン，ジョン，ピー．; クライン，バーバラ，キュア; リー，スチーブン，シー．; マックファーター，チャールズ，エイ．; ジリ，ジュディス，ジー．
Original assignee: ジー．ディー．サールアンドカンパニー
Priority date: 1995-10-05
Filing date: 1996-10-04
Publication date: 1999-09-07
Also published as: WO1997012985A2; KR100456212B1; PL326072A1; AU705083B2; NO981500D0; AU7384496A; CZ96598A3; CN1590407A; CZ295518B6; KR19990064068A; EP0854928A2; PL184424B1; CA2234061A1; IL123832A0; NZ320978A; MX9802730A; CN1124348C; BRPI9610977A2; NO981500L; WO1997012985A3

Abstract

(57)【要約】新規な多機能性造血受容体アゴニストタンパク質、多機能性造血受容体アゴニストタンパク質をコードするＤＮＡ，多機能性造血受容体アゴニストタンパク質の製造方法および多機能性造血受容体アゴニストタンパク質の使用方法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】多機能性造血受容体アゴニスト本出願は１９９５年１０月０５日付出願に係わる米国特許仮出願一連番号第６０／００４，８３４号の３５ＵＳＣ§１１９（ｅ）に基づく優先権を主張するものである。発明の分野本発明は多機能性造血受容体アゴニストに関する。発明の背景骨髄細胞の分化および／または増殖を刺激するコロニー刺激因子（ＣＳＦ）は造血幹細胞由来の細胞のレベルの低下を回復させるそれらの治療的可能性により多大の興味を生じている。ヒトおよびマウス系両者のＣＳＦは同定され、それらの活性によって識別されている。たとえば、顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）およびマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）は、それぞれ、好中性顆粒球およびマクロファージコロニーのインビトロ形成を刺激し、一方ＭＧ−ＣＳＦおよびインターロイキン−３（ＩＬ−３）はより広範な活性を有し、マクロファージ、好中性および好酸性顆粒球コロニー両者の形成を刺激する。ＩＬ−３はまた、マスト細胞、巨核球ならびに純粋および混合赤芽球コロニーの形成を刺激する。ＩＬ−３は、多くの異なる細胞種の増殖を刺激し、前駆細胞の成長および増殖を支持するその能力により、疾患または治療的処置たとえば放射線照射および化学療法により細胞数が低下した症例の造血細胞の正常数への回復における治療的使用の可能性を有する。米国特許第４，８７７，７２９号および米国特許第４，９５９，４５５号にはヒトＩＬ−３およびテナガザルＩＬ−３ｃＤＮＡならびにそれらがコードするタンパク質配列が開示されている。開示されたｈＩＬ−３はタンパク質配列の位置８にプロリンではなくセリンを有する。国際特許出願（ＰＣＴ）ＷＯ８８／００５９８号には、テナガザルおよびヒト様ＩＬ−３が開示されている。このｈＩＬ−３はＳer⁸→Ｐro⁸置換を含有する。ＣysをＳerで置換してジスルフィド結合を破壊することおよびグリコシル化部位における１個もしくは２個以上のアミノ酸を置換することが示唆されている。ＵＳ４，８１０，６４３後には、ヒトＧ−ＣＳＦをコードするＤＮＡ配列が開示されている。ＷＯ９１／０２７５４号には、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−３単独に比較して生物活性が増大しているＧＭ−ＣＳＦとＩＬ−３からなる融合タンパク質が開示されている。多機能性造血受容体アゴニストの成分として、非グリコシル化ＩＬ− ３およびＧＭ−ＣＳＦも開示されている。ＷＯ９２／０４４５５号には、ＩＬ−３，ＩＬ−６，ＩＬ−７，ＩＬ−９，ＩＬ−１１，ＥＰＯおよびＧ−ＣＳＦからなる群より選択されるリンフォカインに融合させたＩＬ−３からなる融合タンパク質が開示されている。ＷＯ９５／２１１９７号およびＷＯ９５／２１２５４号には、広範な多機能性造血活性を発揮できる融合タンパク質が開示されている。ＧＢ２，２８５，４４６号は、栓球減少症の処置に使用できる巨核球および巨核球前駆細胞の複製、分化および成熟に影響することが示されるｃ−ｍｐｌリガンド（トロンボポエチン）および様々な形態のトロンボポエチンに関する。ＥＰ６７５，２０１Ａ１号は、ｃ−ｍｐｌリガンド［巨核球成長および発達因子（ＭＧＤＦ）、ｃ−ｍｐｌリガンドの対立形質変異体および水溶性ポリマーたとえばポリエチレングリコールに結合したｃ−ｍｐｌリガンドに関する。ＷＯ９５／２１２９０号は、マウスおよびヒトｃ−ｍｐｌリガンドおよびそれらのポリペプチドフラグメントを提供する。これらのタンパク質は血小板の産生を刺激するインビボおよびエキソビボ療法に有用である。タンパク質配列の再配列進化において、ＤＮＡ配列の再配列は、タンパク質の構造および機能の多様性の発生に重要な役割を果たす。遺伝子重複およびエキソンのシャッフリングは、とくに基礎突然変異率が低いことから、多様性を迅速に発生させ、それによって競合的利点を有する生物体を与える重要な機構を提供する（Doolittle，Protein Science １：１９１−２００，１９９２）。組換えＤＮＡ法の開発は、タンパク質のフォールディング、構造および機能に対する配列転位の効果の検討を可能にした。新たな配列の創成に用いられるアプローチはそれらのアミノ酸配列の線状認識が関係する天然に起こるタンパク質対合の場合に類似する（Cunninghamら，Proc.Natl.Acad.Sci．USA ７６：３２１８ −３２２２，１９７９；Teather & Erfle，J．Bacteriol. １７２：３８３７− ３８４１，１９９０； Schimmingら，Eur.J.Biochem. ２０４：１３−１９，１９９２； Yamiuchi & Minamikawa，FEBS Lett. ２６０：１２７−１３０，１９９１； MacGregreら，FEBS Lett. ３７８：２６３−２６６，１９９６）。このタイプの再配列のタンパク質への最初のインビトロの適用は Goldenberg & Crei ghton（J.Mol.Biol.１６５：４０７−４１３，１９８３）によって記載された。新たなＮ末端は元の配列の中間部位（切断点）に選択され、新たな配列は切断点からそれが元のＣ末端またはその付近のアミノ酸に到達する点まで元の配列と同じ順序のアミノ酸を有する。この点で、新たな配列は元のＮ末端またはその付近のアミノ酸に直接または配列の付加的部分（リンカー）を介して接続され、新たな配列は元の配列の切断部位に対してＮ末端であったアミノ酸またはその付近の点に到達するまで元の配列と同じ配列で連続して、この残基がこの鎖の新しいＣ末端を形成する。このアプローチは５８〜４６２アミノ酸サイズ範囲のタンパク質に適用されている（Goldenberg & Creighton，J.Mol.Biol．１６５：４０７−４１３，１９８３；Li & Coffino，Mol.Cell.Biol.１３：２３７７−２３８８，１９９３）。調べられたタンパク質は広範囲の構造クラスに及び、α−ヘリックス（インターロイキン−４；Kreitmanら，Cytokine ７：３１１−３１８，１９９５），β−シート（インターロイキン-1；Horlick ら，Protein Eng. ５：４２７−４３１，１９９２）を支配的に含有するタンパク質、あるいはその二者の混合物（酵母ホスホリボシル／アントラニル酸イソメラーゼ；Luger ら，Science ２４３：２０６−２１０，１９８９）が包含される。これらの配列認識研究においては、以下のように、広範なカテゴリーのタンパク質機能が表現されている。酵素Ｔ４リゾチーム：Zhang ら，Biochemistry ３２：１２３１１−１２３１８，１９９３；Zhang ら，Nature Struct.Biol．１：４３４−４３８，１９９５ジヒドロ葉酸レダクターゼ：Buchwalderら，Biochemistry ３１：１６２１− １６３０，１９９４；Protasova ら，Prot.Eng．７：１３７３−１３７７，１９９５リボヌクレアーゼＴ１：Mullins ら，J.Am.Chem.Soc. １１６：５５２９−５５３３，１９９４； Garrettら，Protein Science ５：２０４−２１１，１９９６バシラスβ−グルカナーゼ：Hahnら，Proc.Natl.Acad.Sci．U.S.A ９１：１０４１７−１０４２１，１９９４アスパラギン酸トランスカルバモイラーゼ：Yang & Schachman，Proc．Natl． Acad．Sci．U.S.A ９０：１１９８０−１１９８４，１９９３ホスホリボシル／アントラニル酸イソメラーゼ：Luger ら，Science ２４３：２０６−２１０，１９８９；Luger ら，Prot．Eng. ３：２４９−２５８，１９９０ペプシン／ペプシノーゲン：Lin ら，Protein Science ４：１５９−１６６，１９９５グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ：Vignais ら，Protein Sc ience ４：９９４−１０００，１９９５オルニチンデカルボキシラーゼ：Li & Coffino，Mol．Cell．Biol. １３：２３７７−２３８８，１９９３酵母のホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ：Ritco-Vonsovici ら，Biochemi stry ３４：１６５４３−１６５５１，１９９５酵素インヒビター塩基性膵臓トリプシンインヒビター：Goldenberg & Creighton，J.Mol.Biol．１６５：４０７−４１３，１９８３サイトカインインターロイキン−１β：Horlick ら，Protein Eng. ５：４２７−４３１，１９９２インターロイキン−４：Kreitmanら，Cytokine ７：３１１−３１８，１９９５チロシンキナーゼ認識ドメイン α−スペクトリンＳＨ３ドメイン：Viguera ら，J.Mol.Biol．２４７：６７０ −６８１，１９９５トランスメンブレンタンパク質ｏｍｐＡ：Koebnik & Kramer，J.Mol.Biol．２５０：６１７−６２６，１９５５キメラタンパク質インターロイキン−４−シュウドモナスエキソトキシン：Kreitmanら，Proc． Natl.Acad.Sci．U.S.A．９１：６８８９−６８９３，１９９４これらの研究の結果は高度な変動性を示した。多くの場合、実質的に低下した活性、溶解性または安定性が観察された（大腸菌ジデヒドロ葉酸レダクターゼ、アスパラギン酸トランスカルバモイラーゼ、ホスホリボシル／アントラニル酸イソメラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ、ｏｍｐＡ，酵母ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ）。他の場合には、配列が再配列されたタンパク質は、多くのその天然対応物とほぼ同一の性質を有するように思われた（塩基性膵臓トリプシンインヒビター、Ｔ４リゾチーム、リボヌクレアーゼＴ１，バシラスβ−グルカナーゼ、インターロイキン−１β，α−スペクトリンＳＨ３ドメイン、ペプシノーゲン、インターロイキン−４）。例外的な場合には天然の配列のある性質、たとえば再配列されたα− スペクトリンＳＨ３ドメイン配列については溶解度および再フォールディング率、転位したインターロイキン−４−シュウドモナスエキソトキシンの受容体親和性および抗腫瘍活性に対する予期されない改良が観察された（Kreitmanら，Proc ．Natl.Acad.Sci．U.S.A．９１：６８８９−６８９３，１９９４；Kreitmanら， CancerRes．５５：３３５７−３３６３，１９９５）。これらのタイプの研究の一次的な動機は、タンパク質のフォールディングおよび安定性における短レンジおよび長レンジ相互作用の役割を検討することであった。このタイプの配列再配置は、元の配列において長レンジである相互作用のサブセットを新しい配列における短レンジ相互作用またはその逆に変換する。これらの配列再配置の多くが少なくともある種の活性をもつコンフォーメーションを達成できるという事実は、タンパク質のフォールディングが多重フォールディング経路によって起こることの納得できる証拠である(Viguera ら，J．Mol．Biol. ２４７：６７０−６８１，１９９５)。α−スペクトリンのＳＨ３ドメインの場合には、β−ヘアピンターンに相当する位置に新たな末端を選択すると、安定性はわずかに低下するものの、なおフォールディング可能なタンパク質を生じた。ここに引用した試験に用いられた中間部切断点の位置は、もっぱらタンパク質の表面上に見出され、末端または中央に対する明らかな偏りはなく線状配列を通じて分布している（元のＮ末端から切断点までの相対距離の変動は、総配列長の約１０％〜８０％である）。これらの研究において元のＮ末端とＣ末端を連結するリンカーは０〜９残基の範囲であった。一つの例（Yang & Schachman，Proc． Natl.Acad.Sci．U.S.A．９０：１１９８０−１１９８４，１９９３）では、配列の一部は元のＣ末端セグメントから欠失させ、連結は切断されたＣ末端から元のＮ末端に行われた。可撓性の親水性残基、たとえばＧlyおよびＳerが、リンカー中に頻繁に使用される。Viguera ら（J.Mol.Biol．２４７：６７０−６８１，１９９５）は元のＮおよびＣ末端の３または４残基リンカーによる接続を比較した。３塩基リンカーの方が熱力学的安定性が低かった。Protasova ら（Protein En g.７：１３７３−１３７７，１９９４）は大腸菌ジヒドロ葉酸レダクターゼの元のＮ末端の連結に３または５残基リンカーを使用した。３残基リンカーのみがタンパク質を好収率で生成させた。発明の概要本発明はの新規な造血タンパク質は以下の式によって表される。Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１式中、Ｒ１およびＲ２は独立に以下のポリペプチドからなる群より選択される。（Ｉ）式：（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチド；（II）式：［式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaは、Ｐro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された０〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３−の相当するアミノ酸とは異なり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー(Ｌ₂)を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；または（III）式：［式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー(Ｌ₂)を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ヒトｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸配列からなるポリペプチド；または（IV）式：［式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaはＰro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された１〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；または（Ｖ）コロニー刺激因子。Ｌ１は、Ｒ１とＲ２を連結できるリンカーである。ただし、少なくともＲ１またはＲ２は式（Ｉ），（II）または（III）のポリペプチドから選択され、また、上記造血タンパク質は所望により、直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい。上記ポリペプチド（Ｉ）において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できるさらに好ましい切断点は、 38-39，39-40，40-41，41-42，48-49，53-54，54-55，55-56，56-57， 57-58，58-59，59-60，60-61，61-62，62-63，64-65，65-66，66-67， 67-68，68-69，69-70，96-97，125-126，126-127，127-128，128-129， 129-130，130-131，131-132，132-133，133-134，134-135，135-136， 136-137，137-138，138-139，139-140，140-141 および 141-142 である。上記ポリペプチド（Ｉ）において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できる最も好ましい切断点は３８−３９，４８−４９，９６−９７，１２５−１２６，１３２−１３３および１４１−１４２である。上記ポリペプチド（II）において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できるさらに好ましい切断点は、 28-29，29-30，30-31，31-32，32-33，33-34，34-35，35-36，36-37， 37-38，38-39，39-40，66-67，67-68，68-69，69-70，70-71，84-85， 85-86，86-87，87-88，88-89，89-90，90-91，98-99，99-100，100-101 および 101-102 である。上記ポリペプチド（II）において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できる最も好ましい切断点は、３４−３５，６９−７０および９０−９１である。上記ポリペプチド（III）または（SEQ ID NO ：２５６）のアミノ酸配列において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できるさらに好ましい切断点は、 80-81，81-82，82-83，83-84，84-85，85-86，86-87，108-109，109-110， 110-111，111-112，112-113，113-114，114-115，115-116，116-117， 117-118，118-119，119-120，120-121，121-122，122-123，123-124， 124-125，125-126 および 126-127，である。上記ポリペプチド（III）または（SEQ ID NO ：２５６）のアミノ酸配列において、新たなＣ末端およびＮ末端を作成できる最も好ましい切断点は８１−８２，１０８−１０９，１１５−１１６，１１９−１２０，１２２−１２３および１２５−１２６である。本発明の多機能受容体アゴニストは、以下の式： (Ｔ¹)_a−(Ｌ¹)_b−Ｘ¹−（Ｌ）_c−Ｘ²−(Ｌ²)_d−(Ｔ²)_e Ｘ¹−（Ｌ）_c−Ｘ²−（Ｌ）−Ｙ¹−（Ｌ）_c−Ｙ² （式中、Ｘ¹は順次１〜Ｊの番号を付されアミノ末端が残基１である元のタンパク質の残基ｎ＋１〜Ｊの配列に相当するアミノ酸配列からなるペプチドであり、Ｌは、任意のリンカーであり、Ｘ²は元のタンパク質の残基１〜ｎのアミノ酸配列からなるペプチドであり、Ｙ¹は順次１〜Ｋの番号を付されアミノ末端が残基１である元のタンパク質の残基ｎ＝１〜Ｋの配列に相当するアミノ酸配列からなるペプチドであり、Ｙ²は元のタンパク質の残基１〜ｎのアミノ酸配列からなるペプチドであり、Ｌ¹およびＬ²は、任意のペプチドリンカーであり、ｎは１〜Ｊ−１の範囲の整数であり、ｂ，ｃおよびｄはそれぞれ独立に０または１であり、ａおよびｅは０または１であるが、ａおよびｅの両者がいずれも０であることはなく、Ｔ¹およびＴ²はタンパク質である）によって表すこともできる。さらに、本発明は、多機能造血受容体アゴニストをコードするヌクレオチド配列からなる組換え発現ベクター、関連微生物発現系、および多機能造血受容体アゴニストの作成方法に関する。本発明はまた、多機能造血受容体アゴニストを含有する医薬組成物、および多機能造血受容体アゴニストの使用方法に関する。本発明の多機能造血受容体アゴニストのインビボにおける使用に加えて、患者への輸注の前に骨髄および血液細胞の活性化および増殖を刺激する能力のインビトロにおける使用を包含することを意図するものである。図面の簡単な説明図１はタンパク質の配列再配置を模式的に例示する。ネイティブなタンパク質のＮ末端（Ｎ）およびＣ末端（Ｃ）はリンカーを介して接続されるかまたは直接接続される。タンパク質は切断点で開裂して新しいＮ末端（新Ｎ）および新しいＣ末端（新Ｃ）を創成させると、新しい線状アミノ酸配列を有するタンパク質が生成する。再配列された分子は線状分子として新たに合成し、元のＮ末端およびＣ末端の接続ならびに切断点でのタンパク質の開裂工程を行わなくてもよい。図２はネイティブなタンパク質の元のＮ末端およびＣ末端をリンカーで接続して、タンパク質の異なるＮ末端およびＣ末端を生成させる新たなタンパク質の創成のための方法Ｉを模式的に示す。示した例では、配列再配置により元のタンパク質のアミノ酸９７に創成された新しいＮ末端を有し、元のＣ末端（a.a.１７４）はリンカー領域を介してアミノ酸11に接続され（a.a.１〜１０は欠失させる）、新しいＣ末端は元の配列のアミノ酸９６に創成されたタンパク質をコードする新たな遺伝子を生じる。図３はネイティブなタンパク質の元のＮ末端およびＣ末端をリンカーを用いないで接続させ、タンパク質の異なるＮ末端およびＣ末端を生成させる新たなタンパク質創成のための方法IIを模式的に示す。示した例では、配列再配置により元のタンパク質のアミノ酸９７に創成された新しいＮ末端を有し、元のＣ末端（a. a.１７４）は元のＮ末端に接続され、新しいＣ末端は元の配列のアミノ酸９６に創成されたタンパク質をコードする新たな遺伝子を生じる。図４はネイティブなタンパク質の元のＮ末端およびＣ末端をリンカーで接続して、タンパク質の異なるＮ末端およびＣ末端を生成させる新たなタンパク質創成のための方法IIIを模式的に示す。示した例では、配列再配置により元のタンパク質のアミノ酸９７に創成された新しいＮ末端を有し、元のＣ末端（a.a.１７４）はリンカー領域を介しアミノ酸１に接続させ、新しいＣ末端は元の配列のアミノ酸９６に創成されたタンパク質をコードする新たな遺伝子を生じる。発明の詳細な説明本発明は、それぞれ異なる特異的な細胞受容体を介して作用し、補足的な生物学的活性を誘発させるポリペプチドを共有結合によって連結して形成される多機能造血受容体アゴニストを包含する。造血機能には複雑な一連の細胞現象が要求され、幹細胞は絶えず、すべての主要系統における成熟細胞の大集団に産生される。現在では少なくとも２０種の造血増殖活性の調節物質が知られている。これらの増殖調節物質の大部分は、インビトロにおける１種または２種のコロニー形成を刺激することができるのみで、それぞれの調製物質により刺激されるコロニー形成の正確なパターンはそれぞれの調製物質によって異なっている。コロニー数で評価して、またさらに重要には発達するコロニーを構成する細胞の系統および成熟パターンにより評価して、２種の調節物質が正確に同じパターンのコロニー形成を刺激することはない。増殖応答は単純化したインビトロ培養系中で極めて容易に分析することができる。３つの全く異なるパラメーターすなわちコロニーサイズの変化、コロニー数および細胞系統の変化が識別可能である。２種またはそれ以上の因子は、前駆細胞に対して作用し、多数の子孫細胞の形成を誘導し、それによりコロニーサイズを増大させる。２種またはそれ以上の因子は増殖する前駆細胞数の増加を可能にする。１つの因子にもっぱら応答する異なるサブセットの前駆細胞が存在するからであり、また一部の前駆細胞は応答可能になる前に２種またはそれ以上の因子による刺激を要求するからである。２種またはそれ以上の因子の使用による細胞上の付加的受容体の活性化は、核に到達する共通の最終経路に至る最初は異なるシグナル経路の提携により、分裂シグナルを増強させるものと考えられる（Metcalf，Nature ３３９：２７，１９８９）。他の機構によっても相乗効果を説明できる。たとえば、あるシグナリング経路が第二の因子によって生じる付加的シグナリング経路の中間的活性化により制限されている場合には、これは超相加応答を生じる可能性がある。ある場合には、１つの受容体タイプの活性化が他の受容体の発現の増強を誘導することができる（Metcalf，B lood ８２：３５１５−３５２３，１９９３）。２種またはそれ以上の因子は、単一因子の場合とは異なるパターンの細胞系統を生成させる。多機能造血受容体アゴニストの使用は、単一因子によっては不可能な増殖応答からもたらされる臨床的な利点を与える可能性がある。造血因子および他の成長因子の受容体は、関連タンパク質の２つの異なるファミリーにグループ化することが可能である。すなわち（１）チロシンキナーゼ受容体、たとえば表皮性成長因子、Ｍ−ＣＳＦ（Sherr，Blood ７５：１，１９９０）およびＳＣＦ（Yardenら，EMBO J．６：３３４１，１９８７）；および（２）チロシンキナーゼドメインを含まないが、それらの細胞外ドメインに明らかなホモロジーを示す造血受容体（Bazan，PNAS USA ８７：６９３４−６９３８，１９９０）。後者のグループにはエリスロポエチン（ＥＰＯ）（D'Andreaら，Cell ５７：２７７，１９８９），ＧＭ−ＣＳＦ（Gearing ら，EMBO J．８：３３６７，１９８９），ＩＬ−３（Kitamuraら，Cell ６６：１１６５，１９９１），Ｇ−ＣＳＦ（Fukunagaら，J.Biol.Chem．２６５：１４００８-１５，１９９０），ＩＬ−４（Haradaら，PNAS USA ８７：８５７，１９９０），ＩＬ−５（Taka kiら，EMBO J．９：４３６７，１９９０），ＩＬ−６（Yamasakiら，Science ２４１：８２５，１９８８），ＩＬ−７（Goodwin ら，Cell ６０：９４１−５１，１９９０），ＬＩＦ（Gearing ら，EMBO J．１０：２８３９，１９９１）およびＩＬ−２（Cosmanら，Mol-Immunol．２３：９３５−９４，１９８６）である。後者のグループの受容体の大部分はヘテロダイマーとして高親和性型で存在する。リガンド結合後、特異的α鎖が少なくとも１個の他の受容体鎖（β鎖，γ鎖）に会合する。これらの因子の多くは共通の受容体サブユニットをもっている。ＧＭ −ＣＳＦ，ＩＬ−３およびＩＬ−５に対するα鎖は同一のβ鎖をもち（Kitamura ら，Cell ６６：１１６５，１９９１；Takakiら，EMBO J．１０：２８３３−８，１９９１），ＩＬ−６，ＬＩＦ，およびＩＬ−１１に対する受容体複合体は共通のβ鎖（ｇｐ１３０）をもっている（Tagaら,Cell ５８：５７３−８１，１９８９；Gearing ら，Science ２２５：１４３４−７，１９９２）。ＩＬ−２，ＩＬ−４，ＩＬ−７，ＩＬ−９およびＩＬ−１５の受容体複合体は共通のγ鎖を有する（Kondo ら，Science ２６２：１８７４，１９９３；Russell ら，Science ２６６：１０４２−１０４５，１９９３；Noguchi ら，Science ２６２：１８７７，１９９３；Giriら， EMBO J．１３：２８２２−２８３０，１９９４）。多重作用性造血因子の使用はまた因子産生細胞およびそれらの誘導系に課せられる要求を減弱することによる利点の可能性がある。細胞の因子産生能力に限界がある場合には、それぞれの因子に要求される濃度を低下させ、それらを配合して使用することにより、因子産生細胞に対する要求が軽減され有用である。多重作用性造血因子の使用は因子の必要量を低下させ、多分有害な副作用の可能性は低下する。本発明の新規な化合物は式：Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ１−Ｒ２およびＲ２−Ｒ１（式中、Ｒ１およびＲ２は上に定義した通りである）からなる群より選ばれる式によって表される。Ｒ２は、Ｒ１とは異なるが補足的な活性を有するコロニー刺激因子とすることが好ましい。補足的活性とは、他の細胞調節因子に対する応答を増強または変化させる活性を意味する。Ｒ１ポリペプチドは直接またはリンカーセグメントを介してＲ２ポリペプチドに接続させる。「直接」の語は、ポリペプチドがペプチドリンカーを用いないで接続された多機能性造血受容体アゴニストと定義される。すなわち、Ｌ１は化学結合またはＲ１とＲ２の両者をインフレームに接続するポリペプチドセグメントを表し、最も普通には、Ｒ１とＲ２は、Ｒ１のカルボキシ末端をＬ１のアミノ末端に、Ｌ１のカルボキシ末端をＲ２のアミノ末端に連結するアミド結合によって接続される。「インフレームに接続」とは、Ｒ１とＲ２をコードするＤＮＡのリーディングフレームの間に翻訳停止または分断がないことを意味する。（Ｉ），（II）または（III）に接続できる他の成長因子、すなわちコロニー刺激因子（ＣＳＦ）の非限定的リストはサイトカイン、リンフォカイン、インターロイキン、造血性成長因子であり、ＧＭ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦ，ｃ−ｍｐｌリガンド（ＴＰＯまたはＭＧＤＦとしても知られる），Ｍ−ＣＳＦ，エリスロポエチン（ＥＰＯ），ＩＬ−１，ＩＬ−４，ＩＬ−２，ＩＬ−３，ＩＬ−５，ＩＬ− ６，ＩＬ−７，ＩＬ−８，ＩＬ−９，ＩＬ−１０，ＩＬ−１１，ＩＬ−１２，ＩＬ−１３，ＩＬ−１５，ＬＩＦ，ｆｌｔ３／ｆｌｋ２リガンド，ヒト成長因子，Ｂ細胞成長因子，Ｂ細胞分化因子，好酸球分化因子およびスティール因子もしくはｃ−ｋｉｔリガンドしても知られる幹細胞因子（ＳＣＦ）が包含される。さらに、本発明には、修飾Ｒ１もしくはＲ２分子またはこれらのＲ１もしくはＲ２分子をコードする突然変異もしくは修飾ＤＮＡ配列の使用が包含される。本発明はまた、Ｒ１またはＲ２がｈＩＬ−３変異体，ｃ−ｍｐｌリガンド変異体またはＧ −ＣＳＦ変異体である多機能造血受容体アゴニストを包含する。「ｈＩＬ−３変異体」はＷＯ９４／１２６３８号、ＷＯ９４／１２６３９号およびＷＯ９５／００６４６号に開示されているようなアミノ酸置換および／またはｈＩＬ−３の部分欠失を有するｈＩＬ−３分子、ならびに本技術分野で既知の他の変異体と定義される。「ｃ−ｍｐｌリガンド変異体」は米国特許出願一連番号０８／３８３，０３５号に開示されているようなアミノ酸置換および／またはｃ−ｍｐｌリガンドの部分欠失を有するｃ−ｍｐｌリガンド分子、ならびに本技術分野で既知の他の変異体と定義される。「Ｇ−ＣＳＦ変異体」は、本明細書に開示されるようなアミノ酸置換および／またはＧ−ＣＳＦの部分欠失を有するＧ−ＣＳＦ分子、ならびに本技術分野で既知の他の変異体と定義される。リンカー基（Ｌ１）は一般的に長さ１〜５００アミノ酸のポリペプチドである。２つの分子を接続するリンカーは好ましくは、（１）２つの分子が互いに独立にフォールドして作用可能なように、（２）２つのタンパク質の機能性ドメインと干渉できる規則二次構造を発生する傾向をもたないように、（３）機能性タンパク質ドメインと相互作用できる疎水性特性が最小になるように、また（４）Ｒ１とＲ２が単一細胞上のそれらの対応する受容体と同時に相互作用できるＲ１およびＲ２の立体的分離を与えるように、設計される。通常、可撓性タンパク質領域中の表面アミノ酸はＧly，ＡsnおよびＳerを包含する。実際にＧly，ＡsnおよびＳerを含有するアミノ酸配列の順列はリンカー配列の上述の基準を満たすことが期待される。他の中性アミノ酸たとえばＴhrおよびＡlaもリンカー配列中に使用できる。リンカー配列中にユニークな制限部位を付加して多機能造血受容体アゴニストの構築を容易にするために、他のアミノ酸をリンカー中に包含させることもできる。本発明の好ましいＬ１リンカーには、式：の群から選択される配列が包含される。高度に可撓性のリンカーの一例は、繊維状バクテリオファージたとえばバクテリオファージＭ１３またはｆｄのｐIIIタンパク質内に存在するグリシンおよびセリンに富むスペーサー領域である（Schallerら，PNAS USA ７２：７３７−７４１，１９７５）。この領域はｐIII表面タンパク質の２つのドメインの間の長い、可撓性スペーサーを提供する。このスペーサー領域は、アミノ酸配列：から構成される。本発明はまた、エンドペプチダーゼ認識配列を含むリンカーを包含する。このような切断部位は、多機能造血受容体アゴニストの個々の成分を、それらがインビトロで適正にフォールドし活性を示すかどうかを決定するため分離するのに価値がある。様々なエンドペプチダーゼの例にはそれらに限定されるものではないが、プラスミン、エンテロキナーゼ、カリクレイン、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクティベーター、クロストリパイン、キモシン、コラーゲナーゼ、ラッセルクサリヘビ毒液プロテアーゼ、ポストプロリン分解酵素、Ｖ８プロテアーゼ、トロンビンおよびＸａ因子が含まれる。免疫グロブリンＩｇＧ，ＩｇＡ，ＩｇＭ，ＩｇＤまたはＩｇＥ重鎖のヒンジ領域からのペプチドリンカーセグメントは、結合したポリペプチドの間に角度関係を提供する。システインをセリンで置換したそれらのヒンジ領域がとくに有用である。本発明の好ましいリンカーにはシステインをセリンに変化させたマウスのＩｇＧγ２ｂヒンジ領域に由来する配列が包含される。これらのリンカーはまたエンドペプチダーゼ切断部位も包含する。このようなリンカーの例には、以下の配列が包含される。本発明はしかしながら、使用するリンカー配列によって限定されるものではなく、リンカーへの単なる要求はそれが多機能造血受容体アゴニストの個々の分子のフォールディングおよび機能を機能的に妨害しないことである。リンカーＬ₂の決定Ｒ１および／またはＲ２に用いられるリンカーＬ２のアミノ酸配列の長さは、経験的にもしくは構造情報からの指針によりまたはこの両アプローチの組合せを用いて選択できる。構造情報がない場合には、長さを０〜５０Åの範囲をまたぐように変動させ、配列を表面への露出（親水性：Hopp & Woods，Mol.Immunol.２０：４８３−４８９，１９８３；Kyte & Doolittle，J.Mol.Biol．１５７：１０５−１３２，１９８２），溶媒露出表面積（Lee & Richards，J.Mol.Biol．５５：３７９−４００，１９７１）およびＲ１またはＲ２のコンフォーメーションを妨害しないで必要なコンフォーメーションを採用する能力（コンフォーメーション可撓性：Karplu s & Schulz，Naturwissenschaften ７２：２１２−２１３，１９８５）と矛盾しないように選択する設計を用いて試験用に少数の一連のリンカーを調製することができる。翻訳の平均を残基あたり２．０〜３．８Åと仮定すると、これは試験すべき長さは０〜３０残基であり、好ましい範囲は０〜１５残基であることを意味する。このような経験的シリーズの例では、カセット配列たとえばＧly−Ｇly− Ｇly−Ｓer（SEQ ID NO ：１２）をｎ回反復使用してリンカーを構築することになる（ｎは１，２，３または４である）。本技術分野の熟練者には明らかなように、長さまたは組成が異なり、リンカーとして機能できるこのような配列には多くの配列があり、第一に考慮すべき点はそれらが長すぎも短すぎもしないことである（Sandhu，Critical Rev．１２：４３７−４６２，１９９２参照）。長すぎるとエントロピー効果が三次元フォールドを不安定化し、またフォールディングを運動論的に非実際的にすることが考えられ、短すぎるとねじれおよび立体的張力により分子が不安定化するものと思われる。タンパク質の構造情報の分析の熟練者には明らかなように、ｃ−α炭素の間の距離として定義される鎖の末端の間の距離が、使用すべき配列の長さの決定または少なくともリンカーの経験的選択において試験しなければならない可能性の数の限定に使用できる。ポリペプチド鎖の末端の位置が、Ｘ線解析から誘導された構造モデルまたは核磁気共鳴スペクトルデータでははっきりしない場合があり、したがって、実際の場合、要求されるリンカーの長さを的確に推定するためにはこの状態を考慮する必要があることは本技術分野の熟練者には明らかな通りである。位置がはっきりしている残基から配列中の鎖の末端に近い２つの残基を選択し、それらのｃ−α炭素間の距離を用いてそれらの間のリンカーのおおよその長さを計算する。計算された長さ指針として用い、ある範囲の残基数もつリンカー（残基あたり２〜３．８Åを用いて計算）をついで選択する。これらのリンカーは最初の配列から構成させるか、必要に応じて短縮または延長させ、延長する場合は付加的残基を上述のように可撓性および親和性を示すように選択するかまたは所望により最初の配列を一連のリンカー、一例としては上述のＧly−Ｇly−Ｇ ly−Ｓer（SEQ ID NO ：２）カセット法を用いて置換するか、また所望により、適当な全長を有する最初の配列と新しい配列の組合せを使用する。Ｒ１およびＲ２のアミノおよびカルボキシル末端の決定生物学的に活性な状態へのフォールディングが可能なＲ１およびＲ２の配列は元のポリペプチド鎖の内部から最初（アミノ末端）および最後（カルボキシル末端）の位置を適当に選択し、一方上述のリンカー配列Ｌ２を用いて調製できる。アミノおよびカルボキシル末端は以下に述べる指針を用いて切断領域と呼ばれる配列の共通のストレッチ内から選択される。すなわち新規なアミノ酸配列は同一の切断領域内からアミノおよびカルボキシル末端を選択することにより発生させる。多くの場合、新しい末端の選択は元のカルボキシル末端の位置が元のアミノ末端の直前にくるように行われる。しかしながら、本技術分野の熟練者には明らかなように、その領域内いずれの位置における末端の選択も機能を果たし、これらは新たな配列のアミノまたはカルボキシル部分への欠失または付加を有効に導くものである。タンパク質の一次アミノ酸配列がその生物学的機能の発現に必要な三次元構造へのフォールディングを指令することは分子生物学の中心的教義である。タンパク質の単一結晶のＸ線解析またはタンパク質溶液の核磁気共鳴スペクトルを用いて三次元構造情報を取得し解釈する方法は本技術分野の熟練者には周知である。切断領域の同定に関連する構造情報の例には、タンパク質の二次構造（αおよび３−１０ヘリックス、パラレルおよびアンチパラレルβシート、折返し構造およびターンならびにループ：Kabsch & Sander，Biopolymers ２２：２５７７−２６３７，１９８３）の位置およびタイプ、アミノ酸残基の溶媒露出程度、残基相互の作用の程度およびタイプ（Chothia，Ann.Rev.Biochem．５３：５３７−５７２，１９８４）ならびにポリペプチド鎖に沿ったコンフォーメーションの静的および動的分布（Alber & Mathews,Methods Enzymol.１５４：５１１−５３３，１９８７）がある。一部の場合には、残基の溶媒露出について付加的情報が得られる。一つの例は炭水化物の翻訳後付着部位であり、これは必然的にタンパク質の表面上に存在する。実験的な構造情報がないかまたは得ることができない場合には、タンパク質の三次および二次構造、溶媒の接近容易性ならびにターンおよびループの存在を予測するため、一次アミノ酸配列の解析も利用できる。直接的な構造決定方法が困難な場合、表面への露出を経験的に決定するために生化学的方法を適用できる場合もある。たとえば表面露出を推定するために制限タンパク分解後に鎖の切断部位を同定する方法を使用する（Gentile & Salvatore，Eur．J. Biochem．２１８：６０３−６２１，１９９３）。すなわち、実験的に誘導された構造情報もしくは予測方法（たとえばSrinivisan & Rose，Proteins；Struct ．Funct．& Genetics，２２：８１−９９，１９９５）のいずれかを用い、母体アミノ酸配列を調べて、領域をそれらが二次および三次構造の維持に必須か否かによって分類する。周期的二次構造（αおよび３−１０ヘリックス、パラレルおよびアンチパラレルβシート）に関与することが知られている領域内の配列の存在は避けるべき領域である。同様に溶媒露出度の低いことが観察または予測されるアミノ酸配列の領域もタンパク質のいわゆる疎水性コアの部分である可能性が高く、アミノおよびカルボキシル末端の選択は避けるべきである。これに反して表面ターンまたはループ内にあることが知られているか予測される領域、とくに生物活性には必要でないことが知られている領域は、ポリペプチド鎖の末端の選定に好ましい部位である。上述の基準に基づいて好ましいアミノ酸配列の連続ストレッチが切断領域と呼ばれる。非共有結合多機能造血成長因子２つの造血成長因子を連結する別の方法は非共有結合相互作用によるものである。このような複合タンパク質は以下の式の一つによって表される。Ｒ１−Ｃ１＋Ｒ２−Ｃ２；またはＣ１−Ｒ１＋Ｃ２−Ｒ２；Ｃ１−Ｒ１＋Ｒ２−Ｃ２；またはＣ１−Ｒ１＋Ｒ２−Ｃ２Ｒ１およびＲ２は上に定義した通りである。ドメインＣ１およびＣ２は同一のまたは同一でない化学構造であり、通常は非共有結合性の特異的会合を形成できる蛋白性の構造である。Ｃ１とＣ２の間の複合体は、各複合体についてＲ１およびＲ２の間に１：１の化学量論的関係を生じる。会合するドメインの例としては転写因子の「ロイシンジッパー」ドメイン、細菌転写レプレッサーの二量化ドメインおよび免疫グロブリン定常部ドメインがある。共有結合がＲ１とＣ１およびＲ２とＣ２をそれぞれ連結する。式中に表示されるように、ドメインＣ１およびＣ２はそれらの相当する造血成長因子（Ｒ）のＮ末端またはＣ末端のいずれに存在していてもよい。これらの多重化ドメイン（Ｃ１およびＣ２）には、ｂＺＩＰファミリータンパク質に由来するドメイン（Abelら，Nature ３４１：２４−２５，１９８９；Landshulz ら，Science ２４０：１７５９−１７６４，１９８８； Puら，Nuc.Acid Res．２１：４３４８−４３５５，１９９３；Kozarides ら，Na ture ３３６：６４６−６５１，１９８８）、ならびにタンパク質のヘリックス −ループ−ヘリックスファミリーの多重化ドメイン（Abelら，Nature ３４１：２４−２５，１９８９；Murre ら，Cell ５６：７７７−７８３，１９８９；Ta pacottら，Science ２４２：４０５−４１１，１９８８；Fisherら，Genes & De v.５：２３４２−２３５２，１９９１）が包含される。本発明の好ましい多機能造血受容体アゴニストには、翻訳多機能造血受容体アゴニストとしてのそれらの導入により、ｂＺＩＰファミリータンパク質ＦosおよびＪunのロイシンジッパー多重化ドメインと二量化したコロニー刺激因子が包含される。Ｊunのロイシンジッパードメインは同一のドメインと相互作用できる。他方ＦosのロイシンジッパードメインはＪunロイシンジッパードメインとは相互作用するが、他のＦosロイシンジッパードメインとは相互作用しない。ＦosとＪunの混合物からは、Ｆos− Ｊunヘテロダイマーの形成が優先して起こる。したがって、コロニー刺激因子に接続した場合、Ｊunドメインは直接、ホモまたはヘテロダイマーの形成に使用できる。コロニー刺激因子パートナーの一方がＪunロイシンジッパードメインをもち、他方がＦosジッパーをもつように操作すれば、ヘテロダイマーの形成を優先させることができる。多機能造血受容体アゴニストタンパク質の精製または同定を容易にするために他のペプチド配列（たとえばポリ−Ｈis）付加することもできる。特異的モノクローナル抗体による多機能造血受容体アゴニストタンパク質の迅速なアッセイおよび容易な精製を可能にする高度に抗原性のペプチドを付加してもよい。「突然変異アミノ酸配列」、「突然変異タンパク質」、「変異タンパク質」、「ムテイン」または「突然変異ポリペプチド」の語は、アミノ酸欠失、置換もしくはその両者によりネイティブな配列とは異なるかまたはネイティブな配列から意図的に変動させたヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を有するポリペプチドを意味する。「ネイティブな配列」とは野生型またはネイティブな型の遺伝子またはタンパク質と同一のアミノ酸または核酸配列を意味する。造血成長因子はヒト造血前駆細胞によるコロニー形成を刺激するその能力によって特徴づけることができる。形成されるコロニーには、赤芽球、顆粒球、巨核球、顆粒球マクロファージおよびそれらの混合物が包含される。造血成長因子の多くは最初に霊長類ついでヒトにおいて実施された試験で骨髄機能および末梢血液細胞集団を治療的に有益なレベルに回復させる能力が証明された。造血成長因子のこれらの生物活性の多くまたはすべてにシグナル伝達および高親和性受容体結合が関与する。本発明の多機能造血受容体アゴニストは、有用な性質たとえば単一因子と比較して類似のもしくはより大きい生物活性、あるいは半減期の改良もしくは有害な副作用の減弱またはこれらの性質の組合せを示す。アゴニスト活性をほとんどまたは全く示さない多機能造血受容体アゴニストもアンタゴニストとして、免疫学または免疫療法に使用するための抗体産生用の抗原として、または他の有用なｈＩＬ−３ムテインの構築のために使用される遺伝子プローブもしくは中間体として有用な場合がある。本発明の多機能造血受容体アゴニストの生物学的活性は、因子依存性細胞系におけるＤＮＡ合成またはインビトロ骨髄アッセイにおけるコロニー形成単位の計数によって測定することができる。本発明の多機能造血受容体アゴニストは、単一の活性な造血性アゴニストに比較して改良された治療像を有する。たとえば、本発明の多機能造血受容体アゴニストの一部は、他の造血性アゴニストに比較して同様のまたはより強力な成長因子活性を有し、副作用には同様のまたは相当する増大は認められない。本発明はまた、多機能造血受容体アゴニストタンパク質をコードするＤＮＡ配列、実質的に類似し実質的に同一の機能を果たすＤＮＡ配列、および本発明の多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡとは遺伝子コドンの縮重によってのみ異なる相違するＤＮＡ配列を包含する。本発明はまた、突然変異ＤＮＡの構築に使用されるオリゴヌクレオチド中間体およびこれらのオリゴヌクレオチドによってコードされるポリペプチドも包含する。本技術分野における現在の標準的な遺伝子操作技術（米国特許第４，９３５，２３３号およびSambrookら，“Molecular Cloning A Laboratory Manual”，Col d Spring Harbor Laboratory，１９８９）が本発明のＤＮＡ配列の構築に使用できる。このような方法の一つにはカセット突然変異（Wellら，Gene ３４：３１５−３２３，１９８５）があり、これはプラスミド中のコード配列の部分を２つの制限部位の間の遺伝子の部分における所望のアミノ酸置換をコードする合成オリゴヌクレオチドで置換する方法である。所望の遺伝子をコードする相補性合成オリゴヌクレオチドのペアを合成し、互いにアニーリングさせることもできる。オリゴヌクレオチドのＤＮＡ配列は所望の遺伝子のアミノ酸の配列を、その配列の置換および／または欠失を除いてコードすることになる。プラスミドＤＮＡは選ばれた制限エンドヌクレアーゼで処理し、ついでアニーリングされたオリゴヌクレオチドにライゲートすることができる。ライゲーション混合物は、適当な抗生物質に抵抗性のコンピテントＪＭ１０１細胞のトランスフォーメーションに使用できる。単一のコロニーを採取し、プラスミドＤＮＡを制限分析および／またはＤＮＡ配列決定によって検査して所望の遺伝子を有するプラスミドを同定することができる。本発明の少なくとも１種の新規な多機能造血アゴニストのＤＮＡ配列の他のコロニー刺激因子のＤＮＡ配列とのクローニングは、中間ベクターの使用によって達成される。別法として、一方の遺伝子を他の遺伝子を含有するベクター中に直接クローン化することができる。ＤＮＡ配列の接合ならびに制限部位が関心領域の内部にあった場合には失われた配列を置換するためには、リンカーおよびアダプターを使用することができる。すなわち、１種のポリペプチド、ペプチドリンカーおよび他のポリペプチドをコードする遺伝子材料（ＤＮＡ）を適当な発現ベクターに挿入し、細菌、酵母。昆虫細胞または哺乳類細胞のトランスフォーメーションに使用する。トランスフォームされた生物体を増殖させ、標準技術でタンパク質を単離する。したがって、得られた生成物はコロニー刺激因子をリンカーによって第二のコロニー刺激因子に接続させた新規なタンパク質である。本発明の他の態様は、これらの新規な多機能造血受容体アゴニストの発現において用いられるプラスミドＤＮＡベクターを提供する。これらのベクターは本発明の新規なポリペプチドをコードする上述の新規なＤＮＡ配列を含有する。多機能造血受容体アゴニストの発現が可能な微生物をトランスフォームできる適当なベクターには、多機能造血受容体アゴニストをコードするヌクレオチド配列を用いられる宿主細胞に応じて選択される転写および翻訳調節配列に接続してなる発現ベクターが包含される。上述の修飾配列を導入するベクターは本発明に包含され、多機能造血受容体アゴニストの製造に有用である。この方法に用いられるベクターはまた、本発明のＤＮＡコード配列に操作性に結合し、選ばれた宿主細胞内でのその複製および発現を指示できる選択された調節配列を含有する。本発明の他の態様として、新規な多機能造血受容体アゴニストの製造方法が提供される。本発明の方法は、新規な多機能造血受容体アゴニストの発現をコードするＤＮＡ配列を含有するベクターでトランスフォームされた適当な細胞または細胞系の培養を包含する。適当な細胞または細胞系は細菌細胞とすることができる。たとえば、生物工学の分野においては大腸菌の様々な株が宿主細胞として周知である。このような株の例には大腸菌株ＪＭ１０１（Yanish-Perron ら，Gene ３３：１０３−１０９，１９８５）およびＭＯＮ１０５(Obukowiczら，Applied Environmental Microbiology ５８：１５１１−１５２３，１９９２)が包含される。本発明にはまた、バクテリオファージＭｕに基づく大腸菌の染色体発現ベクターを用いる多機能造血受容体アゴニストタンパク質の発現も含まれる（Wein bergら，Gene １２６：２５−３３，１９９３）。枯草菌の様々な株もこの方法に使用できる。本技術分野の熟練者に周知の酵母細胞の多くの株も、本発明のポリペプチドの発現のための宿主細胞として利用できる。大腸菌の細胞質で発現させる場合には、本発明の多機能造血受容体アゴニストをコードする遺伝子は遺伝子の５'末端に、そのタンパク質のＮ末端にＭet^-1−Ａla^-2−またはＭet^-1をコードするコドンが付加されるように構築することもできる。大腸菌の細胞質内で作成されるタンパク質のＮ末端はメチオニンアミノペプチダーゼ（Ben Bassatら，J．Bac．１６１：７５１−７５７，１９８７）および多分他のペプチダーゼによる翻訳後プロセッシングによって発現時にＮ末端からメチオニンが切断されるように影響される。本発明の多機能造血受容体アゴニストには、Ｎ末端にＭet^-1 ，Ａla^-1またはＭet^-2−Ａla^-1を有する多機能造血受容体アゴニストポリペプチドが包含される。これらの突然変異多機能造血受容体アゴニストも大腸菌内でＮ末端に分泌シグナルペプチドを融合することにより発現される。このシグナルペプチドは分泌過程の一部としてそのポリペプチドから切断される。本発明における使用には哺乳類細胞たとえばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）も適当である。哺乳類細胞における異種遺伝子発現の一般的な方法は Kaufman,R.J.，１９８７，Genetic Engineering，Principles and Methods,Vol. ９，J.K.Setlow編，Plenum Press，New Yorkに総説されている。哺乳類細胞内で機能できる強力なプロモーターが真核細胞分泌シグナルペプチドコード領域の転写を駆動し、それが多機能造血受容体アゴニストのコード領域に翻訳可能に接続された発現ベクターが構築される。たとえばｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏ，ｐＲｃ／ＲＳＶおよびｐＲｃ／ＣＭＶ（Invitrogen Corp.，San Diego，California から入手）のようなプラスミドが使用できる。真核細胞分泌シグナルペプチドコード領域はその遺伝子自体または他の分泌性哺乳類タンパク質からのものとすることができる（Bayne，M.L．ら，Proc.Natl.Acad.Sci．USA ８４：２６３８−２６４２，１９８７）。遺伝子を含有するベクターの構築後、ベクターＤＮＡを哺乳類細中にトランスフェクトする。このような細胞はたとえば、ＣＯＳ７，ＨｅＬａ，ＢＨＫ，ＣＨＯまたはマウスＬ系統とすることができる。細胞は、たとえばＤＭＥＭ培地（JRH Scientific）中で培養できる。培地中に分泌されるポリペプチドは、細胞のトランスフェクション後２４〜７２時間の一過性発現に続いて、または抗生物質抵抗性について選択して安定な細胞系を樹立したのちに、標準的生化学アプローチにより回収できる。適当な哺乳類宿主細胞の選択ならびにトランスフォーメーション、培養、増幅、スクリーニングおよび生成物の産生と精製の方法は、本技術分野において周知である。たとえば、Gething & Sambrook，Nature ２９３：６２０−６２５，１９８１または Kaufmanら，Mol.Cell.Biol.５（７）１７５０−１７５９もしくは Howley ら，米国特許第４，４１９，４４６号を参照されたい。他の適当な哺乳類細胞系はサルＣＯＳ−１細胞系である。同様に有用な哺乳類細胞系はサルＣＶ−１細胞系である。所望により、本発明の方法における宿主細胞として昆虫細胞を利用することができる。たとえばMillerら，Genetic Engineering ８：２７７−２９８(Plenum Press １９８６)およびそれに引用された参考文献参照。さらに、バキュロウイルスベクターを用いて昆虫細胞中で異種遺伝子を発現させる一般的方法はSummer s，M.D．& Smith，G.E.,１９８７,A manual of methods for Baculovirus vectors and insectcell culture procedures,Texas Agriculture Experiment Station Bulletin,No.１５５５に記載されている。強力なバキュロウイルスプロモーター（たとえば、ポリヘドロンプロモーター）が、真核細胞分泌シグナルペプチドコード領域の転写を駆動し、それを多機能造血受容体アゴニストポリペプチドのコード領域に翻訳可能に接続して構成される発現ベクターが構築される。たとえば、プラスミド（ｐＶＬ１３９２；Invitrogen Corp.，San Diego，Calif orniaから入手）を使用できる。多機能造血受容体アゴニストポリペプチドをコードする遺伝子を有するベクターの構築後このＤＮＡ２μg を１μg のバキュロウイルスＤＮＡ（Summers & Smith,１９８７参照）とともに昆虫細胞ＳＦ９株にコトランスフェクトする。多機能造血受容体アゴニストを有する純粋な組換えバキュロウイルスを用いて、たとえば Excell ４０１無血清培地(JRH Biosciences ，Lenexa，Kansas)中で培養細胞を感染させる。培地中に分泌される多機能造血受容体アゴニストは標準生化学的アプローチにより回収できる。多機能造血受容体アゴニストタンパク質を発現する哺乳類または昆虫細胞の上清はまず、多くの市販濃縮ユニットのいずれかを用いて濃縮できる。本発明の多機能造血受容体アゴニストは、造血系の骨髄系、赤血球系、リンパ系もしくは巨核球細胞またはそれらの組合せのレベルの低下によって特徴づけられる疾患の処置に有用である。さらに、それらは成熟骨髄系および／またはリンパ系細胞の活性化に使用できる。本発明のポリペプチドによる処置に感受性の状態には、末梢血液中の循環白血球数が低下する白血球減少症がある。白血球減少症はある種のウイルスまたは放射線への暴露によって誘発される。それは多くの場合、様々な形態の癌治療たとえば化学療法剤、放射線への暴露の副作用、および感染または出血の結果である。本発明のこれら多機能造血受容体アゴニストによる白血球減少症の治療処置は、現在利用されている薬物での処置によって起こる望ましくない副作用を回避することができる。本発明の多機能造血受容体アゴニストは好中球減少症の処置および、たとえば再生不良性貧血、周期性好中球減少症、医原性好中球減少症、チェジアック・東病、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、白血病、骨髄異形成症候群および骨髄線維症の状態の処置に有用である。本発明の多機能造血受容体アゴニストは栓球減少症の処置または予防に有用である。現在、栓球減少症の唯一の治療法は血小板輸注であるが、これは経費がかかり、感染（ＨＩＶ，ＨＢＶ）および同種免疫化の重大な危険がある。多機能造血受容体アゴニストは血小板輸注の必要性を緩和または減少させる。重篤な栓球減少症は遺伝子欠損たとえばファンコニー貧血、ウィスコット・アルドリック症候群またはメイ・ヘグリン症候群によって生じる。後天性栓球減少症は、免疫血栓性栓球減少性紫斑病、全身性エリテマトーデス、溶血性貧血、または胎児母体不適合のように自己抗体または同種抗体によって生じる。さらに、脾腫、播種性血管内凝固、血栓性栓球減少性紫斑病、感染、または人工心臓弁が栓球減少症を起こすことがある。重篤な栓球減少症は癌の化学療法および／または放射線療法によっても起こる。また、癌、リンパ腫、白血病または線維症による骨髄侵襲によっても栓球減少症が起こる。本発明の多機能造血受容体アゴニストは末梢血液中の造血前駆細胞および幹細胞の可動化に有用である。末梢血液由来の前駆細胞は自家骨髄移植のセッティングで患者の体力回復に有効なことが示されている。Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦを含む造血細胞成長因子は末梢血中の循環前駆細胞および幹細胞の数を増大させることが明らかにされている。これは末梢幹細胞の収集操作を単純化し、必要なフォレーシスの回数が減ることにより操作の経費を劇的に低下させた。多機能造血受容体アゴニストは幹細胞の可動化に有用であり、末梢幹細胞移植の効率をさらに増大させる。本発明の多機能造血受容体アゴニストは造血前駆細胞および幹細胞のエキソビボ拡張にも有用である。ｈＩＬ−３のようなコロニー刺激因子（ＣＳＦ）は、高用量の化学療法に続いて、このような処置の結果しばしば認められる好中球減少症および血小板減少症の処置のために、単独で投与され、他のＣＳＦと共投与され、また骨髄移植片と配合して投与される。しかしながら、重篤な好中球減少症および血小板減少症の期間を完全に消失させることはできない。単球（マクロファージ）、顆粒球（好中球を含む）および巨核球からなる骨髄細胞系統は、生命の危険を伴う感染および出血の防止に重要である。好中球減少症および栓球減少症はまた、疾患、遺伝子異常、薬物、毒素、放射線照射および多くの治療的処置たとえば慣用の癌治療の結果である場合もある。骨髄移植はこの患者群の処置に使用されている。しかしながら、危険に曝された造血系を回復させるための骨髄の使用には、付随する幾つかの問題、たとえば１）骨髄、脾臓または末梢血中の幹細胞数は限られていること、２）移植片対宿主病、３）移植片拒絶、および４）腫瘍細胞の夾雑の可能性がある。幹細胞は骨髄、脾臓および末梢血中の有核細胞の極めて小さな割合を占めるにすぎない。幹細胞の数が多いほど造血機能の回復は増強される用量依存性の存在が明らかである。したがって、幹細胞のインビトロ拡張は造血機能の回復および患者の生存率を増大させることになる。移植用の骨髄の提供には同種ドナーからの骨髄が使用されている。しかしながら、移植片対宿主病および移植片拒絶はＨＬＡがマッチした同胞ドナーからのレシピエントにおいても骨髄移植を制限する。同種骨髄移植の代替法が自家骨髄移植である。自家骨髄移植においては、患者自身の骨髄の一部を、骨髄破壊療法たとえば高用量化学療法の前に収穫し、その後患者に戻し移植する。自家移植は、移植片対宿主病および移植片拒絶の危険を消失させる。しかしながら、自家骨髄移植にもなお、骨髄中の幹細胞の限られた数および腫瘍細胞による汚染の可能性という意味での問題がある。幹細胞の限られた数は幹細胞のエキソビボ拡張によって克服きる。さらに幹細胞は、骨髄移植片の腫瘍細胞の夾雑を低下させるために、特異的表面抗原たとえばＣＤ３４＋の存在に基づき特異的に単離することができる。以下の特許には、幹細胞の分離、ＣＤ３４＋細胞、造血因子との細胞の培養、造血障害患者の処置のためのそれらの細胞の使用、ならびに細胞の拡張および遺伝子療法のための造血因子の使用に関するさらに詳細が含まれている。第５，０６１，６２０号は、供与された細胞からの幹細胞の分離によって得られるヒト造血幹細胞からなる組成物に関する。第５，１９９，９４２号には、（１）患者からの造血前駆細胞の採取、（２）ＩＬ−３，ｆｌｔ３リガンド，ｃ−ｋｉｔリガンド，ＧＭ−ＣＳＦ，ＩＬ−１，ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−３融合タンパク質およびそれらの配合物から選択される成長因子による細胞のエキソビボ拡張、（３）細胞プレパレーションの患者への投与、からなる自家造血細胞移植方法が記載されている。第５，２４０，８５６号は、細胞分離過程を自動的に制御する装置を包含する細胞セパレーターに関する。ＷＯ９１／１６１１６号には、細胞の混合物から標的細胞を選択的に単離および分離する装置および方法が記載されている。ＷＯ９１／１８９７２号には、骨髄細胞の懸濁液を中空繊維バイオリアクターを用いてインキュベートすることによる骨髄のインビトロ培養方法が記載されている。ＷＯ９２／１８６１５号は、サイトカインの特定の混合物を含有する培養培地中で移植に使用するための骨髄細胞を維持および拡張する方法に関する。ＷＯ９３／０８２６８号には、（ａ）ＣＤ３４＋幹細胞を他の細胞からの分離工程および（ｂ）分離された細胞の幹細胞が選択的に拡張される選択培地中においてインキュベートする工程からなる幹細胞の選択的拡張方法が記載されている。ＷＯ９３／１８１３６には、末梢血液に由来する哺乳類細胞のインビトロ支持方法が記載されている。ＷＯ９３／１８６４８号は、ヒト好中球前駆細胞と高含量の骨髄芽球および前骨髄球からなる遺伝性または後天性好中球減少症の処置のための組成物に関する。ＷＯ９４／０８０３９号には、ｃ−ｋｉｔタンパク質を発現する細胞の選択によるヒト造血幹細胞の濃縮方法が記載されている。ＷＯ９４／１１４９３号には、対向流溶出法を用いて単離されるＣＤ３４＋であり、サイズの小さい幹細胞集団が記載されている。ＷＯ９４／２７６９８号は、不均一細胞混合物から有核不均一細胞集団を選択的に分離するための免疫親和性分離と連続流遠心分離を組み合わせた方法に関する。ＷＯ９４／２５８４８号には、標的細胞の収集および処理のための細胞分離装置が記載されている。 Brandtら，J.Clin.Invest.８６：９３２−９４２，１９９０には、ヒト骨髄からの造血前駆細胞の高度に濃縮されたＣＤ３４＋前駆体の、ＩＬ−１ａ，ＩＬ− ３，ＩＬ−６またはＧＭ−ＣＳＦ含有培地中での長期培養が論じられている。本発明の一態様では幹細胞の選択的なエキソビボ拡張方法が提供される。「幹細胞」の語は、骨髄、脾臓または末梢血液から単離できる全能性造血幹細胞ならびに初期前駆体および前駆細胞を意味する。「拡張」の語は、細胞の分化および増殖を意味する。本発明は（ａ）他の細胞からの幹細胞の分離、（ｂ）分離された細胞の、多機能造血受容体アゴニストタンパク質（単数または複数）を含有する選択培養培地での培養、ならびに（ｃ）培養細胞の収穫の工程からなる幹細胞の選択的エキソビボ拡張方法を提供する。幹細胞、ならびに好中球、赤血球、血小板等になる運命の担当前駆細胞は、これらの細胞の表面上に存在する特定の前駆細胞マーカー抗原たとえばＣＤ３４の存在もしくは不存在によりおよび／または形態学的特性により、大部分の他の細胞から識別することができる。高度に濃縮されたヒト幹細胞分画の表現型にはＣＤ３４＋，Ｔhy−１＋および lin−が報告されているが、本発明はこの幹細胞集団の展開に限定されるものではないことを理解すべきである。ＣＤ３４＋濃縮ヒト幹細胞分画は報告されている多くの方法たとえば親和性カラムもしくはビーズ、磁性ビーズまたは表面抗原たとえばＣＤ３４＋に向けられた抗体を使用するフローサイトメトリーによって分離することができる。さらに、造血前駆細胞の濃縮には物理学的分離方法たとえば対向流溶出法を使用することができる。ＣＤ３４＋前駆細胞は不均一であり、異種系統関連細胞表面関連抗原の共発現の存在または不存在によって特徴づけられる数種のサブ集団に分割することができる。最も未成熟な前駆細胞は既知の系統関連マーカーたとえばＨＬＡ−ＤＲもしくはＣＤ３８は発現しないが、ＣＤ９０（thy −１）を発現する場合がある。ＣＤ３３，ＣＤ３８，ＣＤ４１，ＣＤ７１，ＨＬＡ−ＤＲまたはｃ−ｋｉｔのような他の表面抗原も造血前駆細胞の選択的単離に使用することができる。分離された細胞は、培養フラスコ、滅菌バッグまたは中空繊維内において選択培地中でインキュベートすることが可能である。細胞を選択的に拡張させるためには様々なコロニー刺激因子が利用できる。骨髄のエキソビボ拡張に利用されている代表的な因子にはｃ−ｋｉｔリガンド、ＩＬ−３，Ｇ −ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦ，ＩＬ−１，ＩＬ−６，ＩＬ−１１，ｆｌｔ−３リガンドまたはそれらの配合物が包含される。幹細胞の増殖は、標準方法（たとえば血球計算盤、ＣＦＵ，ＬＴＣＩＣ）またはフローサイトメトリーにより、インキュベーションの前または後に幹細胞および他の細胞の数を計数することによってモニターできる。幹細胞のエキソビボ拡張には多くの選択方法および様々なコロニー刺激因子たとえばｃ−ｋｉｔリガンド（Brandtら，Blood ８３：１５０７−１５１４，１９９４；McKenna ら，Blood ８６：３４１３−３４２０，１９９５），ＩＬ−３（ Brandtら，Blood ８３：１５０７−１５１４，１９９４；Satoら，Blood ８２３６００−３６０９，１９９３），Ｇ−ＣＳＦ（Satoら，Blood ８２：３６００− ３６０９，１９９３），ＧＭ−ＣＳＦ（Satoら，Blood ８２：３６００−３６０９，１９９３），ＩＬ−１（Muenchら，Blood ８１：３４６３−３４７３，１９９３），ＩＬ−６（Satoら，Blood ８２：３６００−３６０９，１９９３），ＩＬ−１１（Lemoliら，Exp.Hem.２１：１６６８−１６７２，１９９３；Satoら， Blood ８２：３６００−３６０９，１９９３），flt −３リガンド（McKenna ら，Blood ８６：３４１３−３４２０，１９９５）および／またはそれらの配合物（Brandtら，Blood ８３：１５０７−１５１４，１９９４；Haylock ら，Blood ８０：１４０５−１４１２，１９９２； Koller ら，Biotechnology １１：３５８−３６３，１９９３； Lemoli ら，Exp．Hem．２１：１６６８−１６７２，１９９３；McKenna ら，Blood ８６：３４１３−３４２０，１９９５；Muenchら， Blood ８１：３４６３−３４７３，１９９３；Patchen ら，Biotherapy ７：１３−２６，１９９４；Satoら，Blood ８２：３６００−３６０９，１９９３；Sm ith ら，Exp.Hem．２１：８７０−８７７，１９９３；Steen ら，Stem Cell １２：２１４−２２４，１９９４；Tsujino ら，Exp.Hem.２１：１３７９−１３８６，１９９３）を用いる拡張を利用したいくつかの方法が報告されている。個々のコロニー刺激因子の中ではｈＩＬ−３が末梢血ＣＤ３４＋細胞の拡張に最も強力な因子の一つであることが示されている（Satoら，Blood ８２：３６００−３６０９，１９９３；Kobayashi ら，Blood ７３：１８３６−１８４１，１９８９）。しかしながら、単一因子で多重因子の配合物と同等に有効であることが示された因子はない。本発明は単一因子の単独よりも有効な多機能造血受容体アゴニストを利用するエキソビボ拡張方法を提供する。本発明の他の態様は、造血前駆細胞を維持および／または拡張する方法において、間質細胞系たとえばＨＳ−５に暴露して調整し（ＷＯ９６／０２６６２号， Roecklein& Torok-Strob，Blood ８５：９９７−１１０５，１９９５）、本発明の多機能造血受容体アゴニストを補充した培養培地を含む培養容器中に細胞を接種することを包含する方法を提供する。成長因子の他の突出した臨床的使用は、遺伝子療法のための造血前駆細胞および幹細胞のインビトロ活性化においてである。造血前駆細胞の長い寿命およびそれらの娘細胞の全身を通じての分布により、造血前駆細胞はエキソビボ遺伝子トランスフェクションのための優れた候補である。関心遺伝子を造血前駆細胞または幹細胞のゲノム内に導入するためには、細胞分裂およびＤＮＡ複製を刺激することが必要である。造血幹細胞の周期は極めて低頻度で循環し、これは遺伝子トランスダクションを促進し、それにより遺伝子療法の臨床的成功の可能性を高めるために成長因子が有用であることを意味する。遺伝子療法の可能性がある適応（Crystal，Science ２７０：４０４−４１０，１９９５の総説参照）には１）多くの先天性代謝異常および免疫不全（Kay & Woo，Trends Genet.１０：２５３ −２５７，１９９４），２）神経障害（Friedmann，Trends Genet.１０：２１０ −２１４，１９９４），３）癌（Culver &Blaese，Trends Genet. １０：１７４ −１７８，１９９４）および４）感染性疾患（Gilboa & Smith，Trends Genet．１０：１３９−１４４，１９９４）がある。遺伝子材料の宿主細胞への導入には、本技術分野の熟練者には周知の様々な方法がある。治療用遺伝子の一次細胞への移送には、ウイルス性、非ウイルス性両者の多くのベクターが開発されている。ウイルスに基づくベクターには１）複製欠損組換えレトロウイルス（Boris-Lawrie & Temin，Curr.Opin.Genet.Dev.３：１０２−１０９，１９９３；Boris-Lawrie & Temin，Annal．New York Acad．Sc i.７１６：５９−７１，１９９４；Miller,Current Top．Microbiol．Immunol．１５８：１−２４，１９９２）および複製欠損組換えアデノウイルス（Berkner, BioTechniques ６：６１６−６２９，１９８８；Berkner，Current Top．Microb iol.Immunol.１５８：３９−６６，１９９２；Brody & Crystal，Annal．New Yo rk Acad．Sci．７１６：９０−１０３，１９９４）がある。非ウイルスベースのベクターには、タンパク質／ＤＮＡ複合体（Cristiano ら，PNAS USA．９０：２１２２−２１２６，１９９３；Curielら，Annal．New York Acad．Sci．７１６：３６−５８，１９９４）、エレクトロポレーションおよびリポソーム仲介送達たとえば陽イオン性リポソーム（Farhoodら，Annal．New York Acad．Sci．７１６：２３−３５，１９９４）がある。本発明は、新しい遺伝子材料が導入されている造血細胞を拡張する現存の方法に対する、単一のコロニー刺激因子によっては認められなかった活性を含む改良された生物活性および／または物理学的性質を有する多機能造血アゴニストを用いる方法を提供する点での改良を提供する。多くの薬物が骨髄抑制または造血不全を引き起こすことがある。このような薬物の例には、ＡＺＴ，ＤＤＩ，アルキル化剤および化学療法に用いられる抗代謝物、抗生物質たとえばクロラムフェニコール、ペニシリン、ガンシクロビール、ダウノマイシンおよびサルファ剤、フェノチアジン、トランキライザーたとえばメプロバメート、鎮痛剤たとえばアミノピリンおよびジピロン、抗けいれん剤たとえばフェニトインまたはカルバマゼピン、抗甲状腺剤たとえばプロピルチオウラシルおよびメチマゾールならびに利尿剤がある。本発明の多機能造血受容体アゴニストは、これらの薬物で処置された患者にしばしば認められる骨髄抑制または造血不全の防止または処置に有用である。造血不全はまた、ウイルス、微生物または寄生虫感染の結果として、および腎疾患または腎不全の処置たとえば透析の結果としても起こる。本発明の多機能造血受容体アゴニストはこのような造血不全の処置に有用である。造血不全の処置は多機能造血受容体アゴニストを含有する医薬組成物の患者への投与を包含する。本発明の多機能造血受容体アゴニストはまた、造血前駆細胞の患者への注射の前に本発明の多機能造血受容体アゴニストタンパク質によりインビトロで処置するこれらの細胞の活性化および増幅に有用である。たとえばＴおよび／もしくはＢリンパ球における各種免疫不全、または免疫疾患たとえば慢性関節リウマチも、本発明の多機能造血受容体アゴニストによる処置によって有利に影響される。免疫不全は、ウイルス感染たとえばＨＴＬＶＩ，ＨＴＬＶII，ＨＴＬＶIIIの感染の結果、大線量照射線への暴露、癌治療または他の薬物療法の結果である場合もある。本発明の多機能造血受容体アゴニストは、単独でまたは他のコロニー刺激因子と併用して、他の血液細胞欠損たとえば栓球減少症（血小板欠損）または貧血の処置にも使用できる。これらの新規なポリペプチドの他の用途には、骨髄移植から回復中の患者のインビボおよびエキソビボ処置、ならびに診断および治療用に標準方法で発生されるモノクローナルおよびポリクローナル抗体の開発がある。本発明の他の態様は、上述の状態の処置方法および処置用組成物である。このような組成物は本発明の多機能造受容体アゴニストの１種または２種以上の治療有効量を医薬的に許容される担体と混合してなる組成物である。この組成物は非経口的、静脈内または皮下のいずれかにより投与できる。投与に際して、本発明において使用される治療用組成物は、パイロジェンを含まない、非経口投与に許容される水溶液の形態とすることが好ましい。ｐＨ，等張性、溶解性等を十分に考慮した非経口投与が許容されるこのようなタンパク質溶液の調製については本分野の技術の範囲を超えるものではない。他の態様は、新規なｈＩＬ−３受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列および遺伝子コードの縮重を除いて同一のＤＮＡ配列を提供することにある。ＤＮＡ配列に「稀な」コドンを除去するための変更、ＤＮＡ配列のＧＣ含量を変更するための修飾、ＲＮＡメッセージの安定性を増大させるための修飾、および特定の宿主細胞での発現を改善するためのＮ末端における修飾を実施できることは、本技術分野の熟練者には周知の通りである。上述の状態の処置方法における投与計画は担当医師により、薬物の作用を修飾する様々な因子、たとえば患者の状態、体重、性別および食餌、感染があればその重篤度、投与回数ならびに他の臨床的因子を考慮して決定される。一般に、１日投与量は体重１kgあたり多機能造血受容体アゴニストタンパク質０．２〜１５０μgの範囲とすることができる。投与量は与えられた多機能造血受容体アゴニストタンパク質の活性に関して調整されるものであり、投与基準を体重１kgあたりの１日用量最低 0.1μg，最高１mgの範囲とするのは不合理ではないと思われる。さらに、多機能造血受容体アゴニストの体重１kgあたりの１日投与量を０．２〜１５０μgの範囲より高くまたは低く調整することになる特殊な環境がある。これらには他のコロニー刺激因子もしくはＩＬ−３変異体または成長因子との共投与、化学療法剤および／または放射線照射との共投与、グリコシル化多機能造血受容体アゴニストタンパク質の使用、ならびにこの項で前述した患者に関連する様々な問題が包含される。上述のように、治療方法および組成物は他のヒト因子との共投与も包含する。本発明のポリペプチドとの同時または連続共投与に適当な他のコロニー刺激因子（ＣＳＦ），サイトカイン，リンフォカイン，造血成長因子およびインターロイキンの非限定的リストにはＧＭ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦ，ｃ−ｍｐｌリガンド（ＴＰＯもしくはＭＧＤＦとしても知られる），Ｍ−ＣＳＦ，エリスロポエチン（ＥＰＯ），ＩＬ−１，ＩＬ−４，ＩＬ−２，ＩＬ−３，ＩＬ−５，ＩＬ−６，ＩＬ−７，ＩＬ−８，ＩＬ−９，ＩＬ−１０，ＩＬ−１１，ＩＬ−１２，ＩＬ−１３，ＩＬ−１５，ＬＩＦ，ｆｌｔ３／ｆｌｋ２リガンド，Ｂ細胞成長因子，Ｂ細胞分化因子，好酸球分化因子，およびスティール因子もしくはｃ−ｋｉｔリガンドしても知られる幹細胞因子（ＳＣＦ）またはそれらの配合物が包含される。上述の投与量は治療組成物中のこのような付加成分を補償して調整される。処置患者の経過は血液学的プロフィルたとえば血球分類等を周期的に評価してモニターできる。材料および方法とくに指示のない限りすべての化学試薬はSigma，Co．（St．Louis，MO）から入手した。制限エンドヌクレアーゼおよびＴ４リガーゼはNew England Biolabs (Beverly，MA)もしくはBoehringer Mannheim（Indianapolis，IN）から入手した。大腸菌株のトランスフォーメーション大腸菌株、たとえばＤＨ５α（登録商標，Life Technologies，Gaithersburg ，MD）およびＴＧ１(Amersham Corp.，Arlington Heights，IL)をライゲーション反応物のトランスフォーメーションに用い、哺乳類細胞をトランスフェクトするためのプラスミドＤＮＡの起源とする。大腸菌株たとえばＪＭ１０１（Yanisc h-Perronら，Gene ３３：１０３−１１９，１９８５）とＭＯＮ１０５（Obukow iczら，Appl．Envir.Micr．５８：１５１１−１５２３，１９９２）は本発明の多機能造血受容体アゴニストを細胞質またはペリプラスム間隙中で発現させるために使用できる。ＭＯＮ１０５ＡＴＣＣ＃５５２０４：lamda −，ＩＮ(rrnＤ，rrＥ)１， rpo Ｄ＋，rpo Ｈ３５８ＤＨ５α（登録商標）：Ｆ−，phi ８０dlacＺ deltaＭ１５，delta（lacＺＹＡ-argＦ）Ｕ１６９，deo Ｒ，rec Ａ１，endＡ１，hsd Ｒ１７(rk−，mk＋)，p ho Ａ，sup Ｅ４４１amda−，thi−１，gyr Ａ９６，rel Ａ１ＴＧ１：delta(lac-pro)，sup Ｅ，thi−１，hsd Ｄ５／Ｆ’(tra Ｄ３６,pro Ａ＋Ｂ＋，lac Ｉq，lacＺ deltaＭ１５) ＪＭ１０１ＡＴＣＣ＃３３８７６：delta(pro lac)，sup Ｅ，thi,Ｆ’(t raＤ３６，pro Ａ＋Ｂ＋，lac Ｉq，lacＺ deltaＭ１５) ＤＨ５α（登録商標）サブクローニング効率細胞は、コンピテント細胞として購入し、製造業者のプロトコールを用いてそのままトランスフォーメーションできるが、ＴＧ１およびＭＯＮ１０５の両大腸菌株はＤＮＡを取り込ませるためにはＣａＣｌ₂法を用いてコンピテントにする。通常、２０〜５０mlの細胞をＬＢ培地（１％バクト−トリプトン，０．５％バクト−酵母エキス，１５０mM ＮａＣｌ）中で、Baush & Lomb Spectronic分光光度計(Rochester，NY)により測定して６００ナノメーターにおける光学密度単位（ＯＤ６００）が約１．０の密度になるまで増殖させる。細胞を遠心分離によって収集し、培養容量の５分の１のＣａＣｌ₂溶液（５０mM ＣａＣｌ₂，１０mM Ｔris-Ｃｌ,ｐＨ７．４）に再懸濁して４℃に３０分間保持する。細胞を再び遠心分離により収集し、培養容量の１０分の１のＣａＣｌ₂溶液に再懸濁する。これらの細胞０．２mlにライゲートしたＤＮＡを加え、サンプルを４℃に３０〜６０分間保持する。サンプルを４２℃ に２分間シフトさせ、１．０mlのＬＢを添加したのち、サンプルを３７℃で１時間振盪する。これらのサンプルからの細胞を、アンピリシン抵抗性トランスフォーマントを選択する場合はアンピシリン（１００μg/ml）、スペクチノマイシン抵抗性トランスフォーマントを選択する場合はスペクチノマイシン（７５μg/ml ）を含むプレート（ＬＢ培地＋１．５％バクトアガール）上に播く。プレートを３７℃で一夜インキュベートする。コロニーを採取し、適当な抗生物質（アンピシリン１００μg/mlまたはスペクチノマイシン７５μg/ml）を加えたＬＢ中に接種し、振盪しながら３７℃で成長させる。新たなＮ末端／Ｃ末端を有する遺伝子の創成方法方法Ｉ：新たなＮ末端／Ｃ末端を有しリンカー領域（Ｌ２）を含有する遺伝子の創成新たなＮ末端／Ｃ末端を有して、元のＣ末端とＮ末端を分離するリンカー領域（Ｌ２）を含有するする遺伝子は、L.S.Mullins ら，J.Am.Chem.Soc.１１６：５５２９−５５３３，１９９４に記載された方法にほぼ従って作成することができる。ポリメラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）増幅の多重工程を用いてタンパク質の一次アミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列を再配列する。工程は図２に例示する。第１工程においては、プライマーセット(“New start”と“linker start”) を用いて、元の遺伝子配列から、新たなタンパク質の新たなＮ末端部分およびそれに続いて元のタンパク質のＣ末端とＮ末端を連結するリンカー（Ｌ２）をコードする配列を含有するＤＮＡフラグメント（“Fragment Start”）を創成し増幅させる。第２工程では第２のプライマーセット（“New stop”と“linker stop ”）を用い、元の遺伝子配列から、上に用いたのと同じリンカーおよびそれに続く新たなタンパク質の新たなＣ末端部分をコードするＤＮＡフラグメント(“Fra gment Stop”)を創成し、増幅させる。“New start”および“New stop”プライマーは新しい遺伝子の発現プラスミドへのクローニングを可能にする適当な制限部位を包含するように設計される。通常のＰＣＲ条件は９５℃溶融２分間１サイクル；９４℃変性１分間，５０℃アニーリング１分間および７２℃伸長１分間２５サイクル；プラス７２℃伸長７分間１サイクルである。Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagentキットを使用する。１００μｌの反応は各プライマー１００p moleおよび鋳型ＤＮＡ１μg ；および１×ＰＣＲ緩衝液，２００μM ｄＧＴＰ，２００μM ｄＡＴＰ，２００μM ｄＴＴＰ，２００μM ｄＣＴＰ，２．５単位のＡmpliＴaq ＤＮＡポリメラーゼおよび２mM ＭｇＣｌ₂を含む。ＰＣＲ反応は４８０型ＤＮＡサーマルサイクラー（Perkin Elmer Corporation，Norwalk，CT ）によって実施する。リンカー領域における相補性配列およびリンカーの両側における２個のアミノ酸のコード配列を有する“Fragment Start”および“Fragment Stop”を第３のＰＣＲ工程で一緒に接続して、新しいタンパク質をコードする完全長遺伝子を作成する。ＤＮＡフラグメント“Fragment Start”および“Fragment Stop”は１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドで染色し、Qiaex Gel Extractionキット（Qiagen）を用いて単離する。これらのフラグメント等モル量を混合し、７０℃に１０分間加熱し、ついで徐々に冷却し、“linker start”と“linker sto p”にそれぞれ配分された配列によってアニーリングさせる。第３ＰＣＲ工程においては、プライマー“New start”および“New stop”をアニーリングしたフラグメントに加え、完全長の新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を創成し、増幅させる。通常のＰＣＲ条件は、９５℃溶融２分間１サイクル；９４℃変性１分間，６０ ℃アニーリング１分間および７２℃伸長１分間２５サイクル；プラス７２℃伸長７分間１サイクルである。Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagent キットを使用する。１００μl の反応液は各プライマー１００pmole およびＤＮＡ０．５μ g ；および１×ＰＣＲ緩衝液，２００μM ｄＧＴＰ，２００μM ｄＡＴＰ，２００μM ｄＴＴＰ，２００μM ｄＣＴＰ，２．５単位ＡmpliＴaq ＤＮＡポリメラーゼおよび２mM ＭｇＣｌ₂を含有する。ＰＣＲ反応産物はWizard PCR Preps キット(Promega)を用い精製する。方法II：新たなＮ末端／Ｃ末端を有しリンカー領域を含まない遺伝子の創成元のＮ末端とＣ末端をリンカーを用いないで連結した新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、２工程のＰＣＲ増幅およびブラント末端ライゲーションを用いて作成することができる。工程は図３に例示する。第１工程においては、プライマーセット(“New start”および“P-bl start”)を用いて、元の遺伝子配列から、新たなタンパク質の新たなＮ末端部分をコードする配列を含有するＤＮＡフラグメント（“Fragment Start”）を創成し、増幅する。第２工程においては、プライマーセット（“New stop”および“P-bl stop”）を使用して、元の遺伝子配列から、新たなタンパク質の新たなＣ末端をコードする配列を含有するＤＮＡフラグメント(“Fragment Stop”)を創成し、増幅する。“New start”および“New st op”プライマーは、新しい遺伝子の発現プラスミドへのクローニングを可能にする適当な制限部位を包含するように設計される。通常のＰＣＲ条件は、９５℃溶融２分間１サイクル；９４℃変性１分間，５０℃アニーリング４５秒間および７２℃伸長４５秒間２５サイクルである。オーバーハングの出現を減少させるために、Deep Ventポリメラーゼ(New England Biolabs)を製造業者の推薦する条件下に使用する。“P-bl start”および“P-bl stop”プライマーは、その後の“Fragment St art”および“Fragment Stop”相互のブラント末端ライゲーションを補助するために５’末端でリン酸化する。反応液１００μl は各プライマー１５０pmole および鋳型ＤＮＡ１μg ；ならびに１×Vent緩衝液(New England Biolabs)，３００μM ｄＧＴＰ，３００μM ｄＡＴＰ，３００μM ｄＴＴＰ，３００μM ｄＣＴＰ，１単位 Deep Ventポリメラーゼを含有する。ＰＣＲ反応は４８０型ＤＮＡサーマルサイクラー(Perkin Elmer Corporation，Norwalk，CT)により実施する。ＰＣＲ反応産物は Wizard PCR Preps キット(Promega)を用いて精製する。プライマーは新しい遺伝子の発現ベクターへのクローニングを可能にする適当な制限部位を包含するように設計される。通常、“Fragment Start”はＮcoＩ制限部位が創成されるように設計され、“Fragment Stop”はＨind III制限部位が創成されるように設計される。制限消化反応物は、Magic DNA Clean-up System キット(Promega)を用いて精製する。Fragment Start および Stop は１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドで染色し、Qiaex Gel Extraction キット( Qiagen)を用い単離する。これらのフラグメントをｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ／Ｈind IIIベクターフラグメントと混合し、５０℃に１０分間加熱し、徐々に冷却してその末端にアニーリングさせる。３種のフラグメントをＴ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim)を用いて互いにライゲートさせる。完全長の新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を含有するプラスミドが得られる。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gai thersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いる。プラスミドＤＮＡを精製し、以下のように配列を確認する。方法III：新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子の縦列二重化法による創成新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、R.A．Horlickら，Protein Eng.５：４２７− ４３１，１９９２に記載された方法に基づいて作成することができる。新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子のポリメラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）増幅は、縦列に二重化した鋳型ＤＮＡを用いて実施する。工程は図３に例示する。縦列に二重化した鋳型ＤＮＡはクローニングにより創成し、２コピーの遺伝子の元のＣ末端とＮ末端を連結するリンカーをコードするＤＮＡ配列によって分離された遺伝子２コピーを含有する。縦列に二重化した鋳型ＤＮＡから、完全長の新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子を創成し、増幅するためには特異的なプライマーセットを使用する。これらのプライマーは新しい遺伝子の発現ベクターへのクローニングを可能にする適当な制限部位を包含するように設計される。通常のＰＣＲ条件は、９５℃溶融２分間１サイクル；９４℃変性１分間，５０℃アニーリング１分間および７２℃伸長１分間２５サイクル；プラス７２℃伸長７分間１サイクルを用いる。Perkin Elmer GeneAmp PCR Core Reagent キット（Perkin Elmer C orporation，Norwalk，CT）を使用する。１００μl の反応は各プライマー１００pmoleおよび鋳型ＤＮＡ１μg ；および１×ＰＣＲ緩衝液，２００μM ｄＧＴＰ，２００μM ｄＡＴＰ，２００μM ｄＴＴＰ，２００μM ｄＣＴＰ，２．５単位のＡmpliＴaqＤＮＡポリメラーゼおよび２mM ＭｇＣｌ₂を含有する。ＰＣＲ反応は４８０型ＤＮＡサーマルサイクラー(Perkin Elmer Corporation，Norwalk ，CT)によって行う。ＰＣＲ反応産物は Wizard PCR Preps キット(Promega)を用いて精製する。新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子の発現ベクターへのクローニング新たなＮ末端／Ｃ末端遺伝子を制限ヌクレアーゼで消化し、他のコロニー刺激因子を含有する発現ベクターへの挿入に適合する末端を創成する。この発現ベクターも同様に制限ヌクレアーゼで消化して適合する末端を形成させる。精製後、遺伝子とベクターＤＮＡとを混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いてライゲートする。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌をトランスフォームする。プラスミドＤＮＡを精製し、正しい挿入を確認するために配列を決定する。正しいクローンを成長させてタンパク質を発現させる。ＤＮＡの単離および特性解析プラスミドＤＮＡは、多くの様々な方法により、本技術分野の熟練者には周知の市販キットを用いて単離できる。このような方法の数種を以下に示す。プラスミドＤＮＡは、Promega Wizard（登録商標）Miniprepキット(Madison，WI)、Qia gen QIAwell Plasmid単離キット（Chatsworth，CA）またはQiagen Plasmid Midi キットを用いて単離される。これらのキットは同じ一般的操作に従ってプラスミドＤＮＡの単離に用いられる。略述すれば、細胞を遠心分離（５０００×ｇ）によりペレット化し、プラスミドＤＮＡを連続ＮａＯＨ／酸処理によって放出させ、遠心分離（１００００×ｇ）により細胞屑を除去する。上清（プラスミドＤＮＡを含有する）をＤＮＡ結合樹脂を含むカラムに負荷し、カラムを洗浄し、プラスミドＤＮＡをＴＥで溶出する。コロニーを関心プラスミドについてスクリーニングしたのち、選ばれたトランスフォーマントの大腸菌細胞を５０〜１００ mlのＬＢ＋適当な抗生物質中に接種し、エアインキュベーター中３７℃で一夜、振盪しながら増殖させる。精製したプラスミドＤＮＡは、ＤＮＡ配列決定、更なる制限酵素消化、ＤＮＡフラグメントの付加的サブクローニング、および哺乳類細胞、大腸菌または他の細胞へのトランスフェクションに用いられる。配列の確認精製されたプラスミドＤＮＡをｄＨ₂Ｏに再懸濁し、Bausch and Lomb Spectro nic ６０１型ＵＶ光度計により２６０／２８０nmの吸収を測定して定量する。ＤＮＡサンプルは ABI PRISM（登録商標）DyeDeokisy（登録商標）ターミネーター配列決定化学(Applied Biosystems Division of Perkin Elmer Corporation， Lincoln City，CA)キット（部品番号：４０１３８８または４０２０７８）を用い、製造業者によって示唆されたプロトコールに従い、通常は配列決定混合物への５％ＤＭＳＯ添加による改良によって配列を決定する。配列決定反応は４８０型ＤＮＡサーマルサイクラー(Perkin Elmer Corporation，Norwalk，CT)を用い推薦された増幅条件により実施する。サンプルは Centri-Sep（登録商標）スピンカラム（Priceton Separations，Adelphia，NJ）で過剰の色素ターミネーターを除去して精製し、ついで凍結乾燥する。蛍光染料で標識された配列決定反応物を脱イオンホルムアミドに再懸濁して、変性４．７５％ポリアクリルアミド−８Ｍ尿素ゲル上ＡＢＩ３７３Ａ型自動ＤＮＡシクエンサーを用いて配列を決定する。重複したＤＭＡ配列フラグメントを、Sequencher v ２．１ＤＮＡ解析ソフトウエア（Gene Codes Corporation,Ann Arbor，MI）を用いてマスターＤＮＡコンティグに組み立てる。哺乳類細胞における多機能造血受容体アゴニストの発現哺乳類細胞トランスフェクション／調整培地の製造ＢＨＫ−２１細胞はＡＴＣＣ(Rockville，MD)から入手できる。細胞は２mM Ｌ−グルタミンおよび１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）補充ダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ／高グルコース）中で培養する。この処方はＢＨＫ生育培地と命名する。選択培地は４５３単位／mlハイグロマイシンＢ（Calbiochem，San Di ego,CA）補充ＢＨＫ生育培地である。ＢＨＫ−２１細胞系は、プラスミドｐＭＯＮ３３５９に見出されるＩＥ１１０プロモーターをトランス活性化するＨＳＶトランス活性化プロテインＶＰ１６により、以前に安定にトランスフェクトされた（Hippenmeyer ら，Bio/Technology，pp１０３７−１０４１，１９９３参照）。ＶＰ１６プロテインはＩＥ１１０プロモーターの後方に挿入された遺伝子の発現を駆動する。トランス活性化プロテインＶＰ１６を発現するＢＨＫ−２１細胞はＢＨＫ−ＶＰ１６と呼ばれる。プラスミドｐＭＯＮ１１１８（Highkin ら，Poul try Sci.７０：９７０−９８１，１９９１参照）はＳＶ４０プロモーターからハイグロマイシン抵抗性遺伝子を発現する。類似のプラスミドｐＳＶ２−hphもＡＴＣＣから入手できる。ＢＨＫ−ＶＰ１６細胞はトランスフェクション24時間前に、６０mm組織培養皿に各皿あたり３×１０⁵細胞を接種する。細胞は各皿あたり、関心遺伝子含有プラスミドＤＮＡ１０μg，３μg のハイグロマイシン抵抗性プラスミドｐＭＯＮ１１１８，ならびに８０μg のGibco-BRL“LIPOFECTAMINE”（登録商標）を含む “OPTIMEM”(登録商標；Gibco-BRL，Gaithersburg，MD)３μｌ中で１６時間トランスフェクトする。ついで培地を吸引し、３mlの生育培地で置換する。トランスフェクション４８時間後に各皿から培地を収集し活性をアッセイする（一過性調整培地）。トリプシン−ＥＤＴＡにより細胞を皿から取り出し、１：１０に希釈し、１０mlの選択培地を含有する１００mm組織培養皿に移す。選択培地中に約７日間置くと、抵抗性の細胞は直径数ミリのコロニーに成長する。コロニーをろ紙（コロニーとほぼ同じサイズに切断し、トリプシン／ＥＤＴＡで濯ぐ）で皿から取り出し１mlの選択培地を含有する２４ウエルプレートの個々のプレートに移す。クローンがコンフルーエンスに成長したのち、調整培地を再アッセイし、陽性のクローンを増殖培地中に拡張する。大腸菌におけるｈＩＬ−３受容体アゴニストの発現関心プラスミドを有する大腸菌株ＭＯＮ１０５またはＪＭ１０１をＭ９＋カサミノ酸培地中、New Brunswick Scientific（Edison，New Jersey）製Ｇ２５型エアインキュベーター内で振盪しながら３７℃で増殖させる。増殖はＯＤ６００でモニターしながら値１．０に達するまで続け、この時点で０．１ＮＮａＯＨ中ナリジキシン酸（１０mg／ml）を加えて最終濃度を５０μg/mlとする。ついで培養液を３７℃でさらに３〜４時間振盪する。所望の遺伝子産物の最大の産生を達成するため高度の通気を培養期間を通じて維持する。細胞を光学顕微鏡下に、封入体（ＩＢ）の存在について調べる。培養液の１mlアリコートを採取し、ペレット化した細胞を煮沸し、還元緩衝液で処理し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより電気泳動を行って蛋白含量を分析する（Maniatisら，Molecular Cloning: A Laboratory Manual，１９８２参照）。培養液を遠心分離して（５０００×ｇ）細胞をペレット化する。大腸菌内に封入体として蓄積する修飾ｈＩＬ−３受容体アゴニストの封入体の調製、抽出、再フォールディング、透析、ＤＥＡＥクロマトグラフィー、および特性解析封入体の単離３３０mlの大腸菌培養液からの細胞ペレットを、超音波処理緩衝液［１０mM ２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）１，３−プロパンジオール塩酸塩（Ｔri s-ＨＣｌ），ｐＨ８．０＋１mMエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）］１５mlに再懸濁する。これらの懸濁した細胞を Sonicator Cell Disruptor（Ｗ−３７５型：Heat Systems-Ultrasonics，Inc.，Farmingdale，New York）のマイクロチッププローブを用いて超音波処理する。細胞を破壊し、封入体（ＩＢ）を洗浄するためには、超音波処理緩衝液中での３ラウンドの超音波処理ついで遠心分離を採用する。超音波処理の第１ラウンドは３分間のバーストついで１分間のバーストとし、超音波処理の最後の２ラウンドはそれぞれ１分間とする。封入体ペレットからのタンパク質の抽出および再フォールディング最終の遠心分離工程後、ＩＢペレットを、５０mM Ｔris-ＨＣｌ，ｐＨ９．５，８Ｍ尿素および５mMジチオスレイトール（ＤＴＴ）１０mlに再懸濁し、室温で約４５分間攪拌して、発現したタンパク質を変性させる。抽出溶液を、５mM Ｔris-ＨＣｌ，ｐＨ９．５および２．３Ｍ尿素７０mlを含むビーカーに移し、空気に曝しながら４℃で１８〜４８時間穏やかに攪拌してタンパク質を再フォールドさせる。再フォールディングは Vydac（Hesperia，Ca）Ｃ１８逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）カラム（０．４６× ２５cm）上で分析してモニターする。０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）含有４０％〜６５％アセトニトリルの直線勾配を使用して再フォールドをモニターする。この勾配を流速１．５ml／分で３０分間にわたり展開する。変性タンパク質は一般にこの勾配中では再フォールドしたタンパク質よりも遅れて溶出する。精製：再フォールドしたのち、夾雑した大腸菌タンパク質を酸沈殿により除去する。再フォールド溶液のｐＨを１５％(v/v)酢酸（ＨＯＡｃ）を用いてｐＨ５．０〜５．２に滴定する。この溶液を４℃で２時間攪拌し、ついで１２，０００×ｇで２０分間遠心分離して、不溶性のタンパク質があればペレット化する。酸沈殿工程からの上清を、分子量カットオフ値（ＭＷＣＯ）３，５００ダルトンの Spectra/Por３メンブランを用い透析する。透析は４ L（５０倍過剰）の１０mM Ｔris-ＨＣｌ，ｐＨ８．０に対して、これを２回交換して計18時間行う。透析はサンプルの伝導度を低下させ、ＤＥＡＥクロマトグラフィー前に尿素を除去する。サンプルをついで遠心分離し（１２，０００×ｇ）、透析後に不溶性のタンパク質があればペレット化する。イオン交換クロマトグラフィーには Bio-Rad Bio-Scale DEAE ２カラム（７× ５２mm）を使用する。カラムは平衡緩衝液中１０mM Ｔris-ＨＣｌ，ｐＨ８．０および０〜５００mM食塩（ＮａＣｌ）勾配を含有する緩衝液に平衡化し、４５カラム容量以上を使用してタンパク質を溶出する。この操作を通じ流速１．０ml／分を用いる。勾配を越えてカラム分画（２．０ml／分画）を収集して、Vydac(He speria，Ca.)Ｃ１８カラム（０．４６×２５cm）上ＲＰ−ＨＰＬＣによって分析する。０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）含有４０％〜６５％アセトニトリルの直線勾配を使用する。この勾配を流速１．５ml／分で３０分間にわたり展開する。プールした分画をついで４ L（５０〜５００倍過剰）の１０mM酢酸アンモニウム（ＮＨ₄Ａｃ）ｐＨ４．０に対し、これを２回交換して計１８時間透析する。透析はＭＷＣＯ３，５００ダルトンの Spectra/Por ３メンブランを用いて行う。最後にサンプルを０．２２μm シリンジフィルター（μStar LB シリンジフィルター；Costar，Cambridge，Ma.）を用いて滅菌ろ過し、４℃で保存する。場合により、フォールドしたタンパク質は、親和性試薬たとえば適当なマトリックスに結合させたｍＡｂまたは受容体サブユニットを使用して親和性精製することができる。別法として（または付加的に）精製は様々なクロマトグラフィー法のいずれかたとえばイオン交換、ゲルろ過もしくは疎水性クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣを用いて達成できる。これらのおよび他のタンパク質精製方法については、Methods in Enzymology ，１８２巻，“Guide to Protein Purification”，Murray Deutscher編集，Aca demic Press，San Diego，CA，１９９０に詳細に記載されている。タンパク質の特性解析：精製したタンパク質はＲＰ−ＨＰＬＣ，エレクトロスプレー質量スペクトル，およびＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分析する。タンパク質の定量はアミノ酸組成、ＲＰ−ＨＰＬＣ，および Bradford タンパク質定量によって行う。場合により、タンパク質の同一性を確認するために、トリプシンペプチドマッピングをエレクトロスプレー質量スペクトルと接合して実施する。生物活性ヒトインターロイキン−３のＡＭＬ増殖アッセイファクタ−依存性細胞系，ＡＭＬ１９３はAmerican Type Culture Collection (ATCC，Rockville，MD)から入手した。急性骨髄性白血病の患者から樹立されたこの細胞系は、ＧＭ−ＣＳＦ補充培地中で増殖の亢進を示す成長因子依存性の細胞系である（Lange,B.ら，Blood ７０：１９２，１９８７； Valtieri,M.ら，J. Immunol.１３８：４０４２，１９８７）。ヒトＩＬ−３の存在下におけるＡＭＬ１９３細胞の増殖能も報告されている（Santoli,D.ら，J.Immunol.１３９：３４８，１９８７）。成長因子をウォッシュアウトし、サイトカイン依存性ＡＭＬ１９３細胞を２４時間成長因子飢餓状態にして、ＩＬ−３中での長期生育に適合させた細胞系変異体、ＡＭＬ１９３１．３を使用した。細胞をついで、１００Ｕ／mlのＩＬ−３を含有する培地中２４ウエルプレートに１×１０⁵細胞／ウエルで再プレーティングする。細胞がＩＬ−３中で迅速に増殖するには約２カ月を要した。これらの細胞は以後、ヒトＩＬ−３を含む組織培養培地（下記参照）を補充することにより、ＡＭＬ１９３１．３として維持する。ＡＭＬ１９３１．３細胞は、冷ハンクス平衡塩溶液（HBSS，Gibco，Grand I sland，NY）中細胞懸濁液を２５０×ｇで１０分間遠心分離し、ついで上清を傾瀉することにより６回洗浄する。ペレット化された細胞をＨＢＳＳに再懸濁し、６洗浄サイクルが完了するまで上記操作を反復する。この操作で６回洗浄した細胞は、密度を２×１０⁵〜５×１０⁵生存細胞／mlの範囲として組織培養培地に再懸濁する。この培地はイスコブ改良ダルベッコ培地（IMDM，Hazelton，Lenexa， KS）にアルブミン、トランスフェリン、脂質および２−メルカプトエタノールを補充し調製される。ウシアルブミン（Boehringer-Mannheim，Indianapolis，IN ）は５００μg/mlを加え、ヒトトランスフェリン（Boehringer-Mannheim，India napolis，IN）は１００μg/mlを添加し、大豆脂質（Boehringer-Mannheim，Indi anapolis，IN）は５０μg/mlを加え、2-メルカプトエタノール(Sigma，St.Louis ，MO)は５×１０^-5Ｍを添加する。ヒトインターロイキン−３または多機能造血受容体アゴニストタンパク質の希釈系列を、上述のように補充した組織培養培地中９６ウエル Costar ３５９６組織培養プレートに三重に作成する。希釈系列が完成されたならば、各ウエルにインターロイキン−３または多機能造血受容体アゴニストタンパク質を含む培地５０μｌを含有させる。対照ウエルは組織培養培地単独を含有させる（陰性対照）。上述のようにして調製されたＡＭＬ１９３１．３細胞懸濁液５０μl（２．５×１０⁴細胞）をピペットにより各ウエルに加える。組織培養プレートを加湿空気中５％ＣＯ₂，３７℃で３日間インキュベートする。日３に、５０μl の組織培養培地中０．５μＣi の³Ｈ−チミジン（２Ｃi/mM，New England Nuclear， Boston，MA）を加える。培養液を加湿空気中５％ＣＯ₂，３７℃で１８〜２４時間インキュベートする。細胞ＤＮＡを水洗浄サイクルついで７０％エタノール洗浄サイクルを用いた TONTEC 細胞ハーベスター（TONTEC，Orange，CT）によってガラスフィルターマット(Pharmacia LKB，Gaithersburg)上に収穫する。フィルターマットを風乾させ、ついでサンプルバッグに取り、これにシンチレーション液(Scintiverse II，Fisher Scientific，St.Louis，MO または BetaPlate Scintillation Fruid，Pharmacia LKB，Gaithersburg，MD)を加える。個々の組織培養ウエルからサンプルのβ放射線をLKB BetaPlate １２０５型シンチレーションカウンター(Pharmacia LKB，Gaithersburg，MD)によりカウントし、データは各組織培養ウエルから細胞中に導入された³Ｈ−チミジンのカウント／分で表す。各ヒトインターロイキン−３プレパレーションまたは多機能造血受容体アゴニストタンパク質プレパレーションの活性はインターロイキン−３または多機能造血受容体アゴニストの濃度を漸増させて細胞増殖(³Ｈ−チミジンの取り込み) を測定することにより定量する。通常、０．０５pM〜１０⁵pMの濃度範囲がこれらのアッセイにおいて定量される。活性は最大増殖の５０％を与えるインターロイキン−３または多機能造血受容体アゴニストタンパク質の用量を測定することによって決定される［ＥＤ₅₀＝０．５×（試験したインターロイキン−３の全濃度の三重培養中ウエルあたり³Ｈ−チミジンの取り込みの最大平均カウント／分 −インターロイキン−３を欠く三重培養中で観察される³Ｈ−チミジンの取り込みにより測定したバックグランド増殖）］。このＥＣ₅₀値はまた１単位の生物活性に等しい。すべてのアッセイは、相対的活性レベルの指示が可能なように対照標準としてネイティブなインターロイキン−３を用いて実施する。通常、多機能造血受容体アゴニストタンパク質は、２倍希釈系列に滴定した濃度範囲２０００pM〜０．０６pMで試験される。各サンプルの活性は、データに４パラメーターロジスティックモデルをフィッティングすることによる最大応答の５０％を与えた濃度によって決定する。サンプルとそれと比較した標準の上部プラトー（最大応答）には差がないことが認められた。したがって、各サンプルについての相対強度計算は上述のようにサンプルと標準についてのＥＣ₅₀評価から決定される。ＡＭＬ１９３１．３細胞はｈＩＬ−３，ｈＧＭ−ＣＳＦおよびｈＧ−ＣＳＦに応答して増殖する。したがって、多機能造血受容体アンタゴニストタンパク質のＧ−ＣＳＦ受容体アゴニスト部分が活性であるかを証明するために、一部のサンプルについてはさらに以下のアッセイを実施した。増殖アッセイは、多機能造血受容体アゴニストによりｈＩＬ −３受容体アゴニストに対する中和モノクローナル抗体の存在下および不存在下に実施した。さらに、融合分子も、第Ｘａ因子切断部位を切断、精製し、ついで分子の半分を増殖活性についてアッセイした。これらの実験により、多機能造血受容体アンタゴニストタンパク質の両成分が活性であることが明らかにされた。ＴＦ1 c-ｍｐｌリガンド依存性増殖アッセイ c-ｍｐｌリガンドの増殖活性は多能性ヒト細胞系ＴＦ１（Kitamuraら，J.Cell Physiol １４０：３２３−３３４，１９８９）のサブクローンを用いてアッセイされた。ＴＦ１細胞はｈＩＬ−３（１００U/ml）中に維持される。c-ｍｐｌリガンドに応答するサブクローンを確率するためには、細胞を、c-ｍｐｌリガンドの１−１５３型を発現する遺伝子（ｐＭＯＮ２６４４８）でトランスフェクトしたＢＨＫ細胞からの上清を含む継代培地中に維持する。大部分の細胞は死滅するが、サブセットの細胞が生存する。希釈クローニング後、c-ｍｐｌリガンド応答クローンを選択し、これらの細胞をアッセイのセットアップ前日０．３×１０⁶細胞／mlの密度で継代培地中に分割する。これらの細胞の継代培地は次の通りである：ＲＰＭＩ１６４０(Gibco)，１０％ＦＢＳ（Harlan，Lot ＃９１２０６），トランスフェクトしたＢＨＫ細胞からの１０％ｃ−ｍｐｌリガンド上清，１mM ピルビン酸ナトリウム(Gibco)，および１００μg/mlペニシリン−ストレプトマイシン(Gibco)。翌日細胞を収穫しＲＰＭＩまたはＩＭＤＭ培地中で２回洗浄し、最後にＡＴＬまたはアッセイ培地で洗浄する。ＡＴＬ培地の構成は以下の通りである：ＩＭＤＭ(Gibco)，５００μg/mlウシ血清アルブミン、１００μg/mlヒトトランスフェリン、５０μg/ml大豆脂質、４×１０^-8Ｍ β−メルカプトエタノールおよびＡＴＬ１０００mlあたりＡ９９０９（Sigma,抗生物質溶液）２ml。細胞は９６ウエル低蒸発プレート（Costar）中にて最終密度０．２５×１０⁶細胞／ml，最終容量５０μl でアッセイ培地に希釈する。トランスフェクトしたクローンからの一過性上清（調整培地）を二重サンプルとして５０μl の容量、最終濃度５０％で加え、３倍に希釈して最終希釈を１．８％とする。１ng／mlで始めてＩＬ−３変異体ｐＭＯＮ１３２８８用量曲線の三重サンプルを０．００１４ ng／mlまで３倍希釈し陽性対照として包含させる。プレートを５％ＣＯ₂，３７ ℃でインキュベートする。培養日６にプレートを、容量２０μl ／ウエルで０．５Ｃi の３Ｈ／ウエル（ＮＥＮ）でパルスし、５％ＣＯ₂，３７℃で４時間インキュベートする。プレートを収穫し、Bettaplateカウンターで計数する。他のインビトロ細胞ベースの増殖アッセイ本技術分野の熟練者には周知の他のインビトロ細胞ベースアッセイも、ＡＭＬ１９３１．３細胞増殖アッセイにおける記載と同様に、その分子を構成する因子依存性の多機能造血受容体アゴニストの活性の測定に有用である。以下は他の有用なアッセイの例である。ＴＦ１増殖アッセイ：ＴＦ１はｈＩＬ−３に応答する多能性ヒト細胞系である（Kitamuraら，J.Cell Physiol１４０：３２３−３３４，１９８９）。３２Ｄ増殖アッセイ：３２ＤはマウスＩＬ−３依存性細胞系であり、ヒトＩＬ −３には応答しないが、ヒトＧ−ＣＳＦには応答し、種に限定されない。Ｂaf／３増殖アッセイ：Ｂaf／３は、マウスＩＬ−３依存性細胞系であり、ヒトＩＬ−３またはヒトｃ−ｍｐｌリガンドには応答しないが、ヒトＧ−ＣＳＦには応答し、種に限定されない。Ｔ１１６５増殖アッセイ：Ｔ１１６５はＩＬ−６依存性マウス細胞系であり（ Nordanら，１９８６）、ＩＬ−６およびＩＬ−１１に応答する。ヒト血漿クロットｍｅｇ−ＣＳＦアッセイ：巨核球コロニー形成活性のアッセイに用いられる（Mazur ら，１９８１）。トランスフェクトされた細胞系マウスＢaf／３細胞系のような細胞系は、その細胞系がもたないコロニー刺激因子受容体、たとえばヒトＧ−ＣＳＦ受容体またはヒトｃ−ｍｐｌ受容体でトランスフェクトすることができる。これらのトランスフェクトされた細胞系は、その細胞系にトランスフェクトされた受容体のリガンドの活性の測定に使用することができる。トランスフェクトされたＢaf／３細胞系のような細胞系は、ｃ−ｍｐｌ応答性細胞系から作成され、プラスミドｐｃＤＮＡ３(Invitrogen，San Diego，CA)の多重クローニング部位にクローン化されたライブラリーから、ｃ−ｍｐｌをコードするｃＤＮＡをクローニングするによって作成することができる。Ｂaf／３細胞はエレクトロポレーションによりプラスミドでトランスフェクトする。細胞は Wehi調整培地中マウスＩＬ−３の存在下Ｇ４１８選択により増殖させる。クローンは限界希釈法によって確率された。同様にして、ヒトＧ−ＣＳＦ受容体をＢaf／３細胞系にトランスフェクトし、多機能造血受容体アゴニストの生物活性の測定に使用できる。ｃ−ｍｐｌリガンド増殖アッセイの解析方法１．骨髄増殖アッセイａ．ＣＤ３４＋細胞精製吸引骨髄（１５〜２０ml）は、インフォームドコンセントを得たのち正常な異種骨髄ドナーから入手した。細胞をリン酸緩衝食塩液(ＰＢＳ，Gibco-BRL)中に１：３に希釈し、３０mlを１５mlの Histopaque−１０７７(Sigma)上に重ね、３０分間３００RCF で遠心分離した。単核球の界面層を収集し、ＰＢＳ中で洗浄した。単核細胞プレパレーションから、親和性カラムを製造業者（cellPro，Inc， Bothell WA）の説明書に従いＣＤ３４＋細胞を濃縮した。濃縮後、ＣＤ３４＋細胞の純度はフルオレセインに接合した抗−ＣＤ３４モノクローナル抗体およびフィコエリスリンに接合した抗−ＣＤ３４(Becton Dickinson，San Jose CA)を用いるフローサイトメトリー分析によって測定して平均約７０％であった。細胞を X-Vivo １０培地(Bio-Whittaker，Walkersville，MD)中４０，０００細胞／mlに再懸濁し、１mlを１２−ウエル組織培養プレート（Costar）にプレーティングした。成長因子ｒｈＩＬ−３を１００ ng/ml（ｐＭＯＮ５８７３）を一部のウエルに添加した。ｈＩＬ−３変異体を１０ng/ml 〜１００ng/ml で使用した。ｃ−ｍｐｌリガンドまたは多機能造血受容体アゴニストをコードするプラスミドでトランスフェクトしたＢＨＫ細胞からの調整培地を、１ml培養液に添加した上清１００μl（約１０％に希釈）の添加により試験した。細胞を３７℃の加湿インキュベーター中５％ＣＯ₂，３７℃で８〜１４日間インキュベートした。ｂ．細胞の収穫および分析培養期間の終わりに、各条件について総細胞数を得た。蛍光分析および倍数性の測定には、細胞を巨核球緩衝液（ＭＫ緩衝液，ＰＢＳ中１３．６mMクエン酸ナトリウム，１mMテオフィリン，２．２μM ＰＧＥ１，１１mMグルコース，３％ w /v ＢＳＡ，ｐＨ７．４）中で洗浄し（Tomer ら，Blood ７０：１７３５−１７４２，１９８７）、抗−ＣＤ４１ａＦＩＴＣ抗体(１：２００，AMAC， Westbrook，ME)含有ＭＫ緩衝液５００μl 中に再懸濁し、ＭＫ緩衝液中で洗浄した。ＤＮＡ分析には、細胞を０．５％Ｔween−２０（Fisher，Fair Lawn NJ）含有ＭＫ緩衝液中、氷上で２０分間浸出させ、ついで０．５％Ｔween−２０および 1％パラホルムアルデヒド（Fisher，Fair Lawn NJ）中３０分間固定し、ついで５５％v/v ＭＫ緩衝液（２００mOsm）中ＲＮＡアーゼ（４００U/ml）とともにヨウ化プロピジウム（Calbiochem，La Jolla，CA）（５０μg/ml）中氷上で１〜２時間インキュベートした。細胞を FACScanもしくは Vantageフローサイトメーター(Becton Dickinson，San Jose，CA)で分析した。緑色蛍光（ＣＤ４１ａ−ＦＩＴＣ）を赤色蛍光（ＰＩ）に対する線状および対数シグナルに沿って収集して、ＤＮＡ倍数性を測定した。全細胞を収集して、ＣＤ４１＋であった細胞の百分率を測定した。データの解析には LYSIS（Becton Dickinson，San Jose，CA）によるソフトウエアを用いて実施した。ＣＤ４１抗原を発現する細胞の百分率はフローサイトメトリー分析から得られた（百分率）。ＣＤ４１＋細胞／mlの絶対（Ａ bs）数は、（Ａbs）＝（細胞数）×（百分率）／１００によって計算した。２．巨核球フィブリンクロットアッセイＣＤ３４＋濃縮集団は上述のように単離した。細胞は、サイトカイン（単数または複数）の存在下、０．３％ＢＳＡ，０．４mg/ml アポトランスフェリン，６．６７μM ＦｅＣｌ，２５μg/ml ＣａＣｌ，２５μg/ml Ｌ−アスパラギン，５００μg/ml ε−アミノ−ｎ−カプロン酸およびペニシリン−ストレプトマイシンを補充した基本イスコブＩＭＤＭ培地中に懸濁した。３５mmのプレートにプレ−ティングする前に、トロンビン（０．２５単位／ml）を加えてクロットの形成を開始させた。細胞を３７℃の加湿インキュベーター中５％ＣＯ₂，３７℃で１３日間インキュベートした。培養期間の終わりに、プレートをメタノール：アセトン（１：３）で固定し、風乾し、染色まで−２００℃で保存した。抗−ＣＤ４１ａ，ＣＤ４２およびＣＤ６１からなる一次モノクローナル抗体のカクテルを用いてペルオキシダーゼ免疫細胞化学染色操作を行った(Zymed，Histostain-SP．San Francisco，CA)。染色後、コロニーをカウントし、陰性，ＣＦＵ−ＭＫ（小コロニー，１〜２フォーカス，および約２５未満細胞），ＢＦＵ−ＭＫ（＞２５細胞の大、多重フォーカスコロニー）または混合コロニー（陽性および陰性細胞両者の混合物）に分類した。メチルセルロースアッセイこのアッセイは正常骨髄細胞を刺激するコロニー刺激因子がインビトロで異種造血コロニーを産生する能力を反映する(Bradleyら，Aust.Exp.Biol.Sci.４４：２８７−３００，１９６６；Pluznik ら，Cell Comp.Physio ６６：３１９−３２４，１９６５)。方法新鮮な、正常、健康骨髄の約３０ml吸引をインフォームドコンセントを受けた個体から実施する。滅菌条件下に、サンプルを１×ＰＢＳ（＃１４０４０．０５９ Life Technologies，Gaithersburg，MD）溶液で５０mlのコニカル管（＃２５３３９−５０ Corning，Cornibg MD）中１：５に希釈する。希釈サンプルの下にフィコール（Histopaque １０７７ SigmaＨ−８８８９）を敷いて３００×ｇで３０分間遠心分離する。単核細胞バンドを除去し、１×ＰＢＳ中で２回および１％ＢＳＡＰＢＳ(CellPro Co.，Bothel，WA)で１回洗浄する。単核細胞を計数し、ＣＤ３４＋細胞は Ceprate LC（ＣＤ３４＋）キット（CellPro Co.，Bothel ，WA）カラムを用いて選択する。骨髄内のすべての幹細胞および前駆細胞はＣＤ３４＋表面抗原を示すことから、この分画化を実施する。培養液は、３５×１０mmペトリ皿（Nunc ＃１７４９２６）中最終容量１．０ mmで三重にセットアップする。培養培地は Terry Fox Labs（Vancouver，B.C.,C anada）から購入し、エリスロポエチン（Amgen，Thousand Oaks，CA）を培養培地に添加する。皿あたり３，０００〜１０，０００ＣＤ３４＋細胞を添加する。トランスフェクトした哺乳類細胞からの調整培地中またはトランスフェクトした哺乳類細胞もしくは大腸菌からの調整培地から精製した哺乳類細胞または大腸菌から精製した組換えＩＬ−３および多機能造血受容体アゴニストタンパク質を、０．００１〜１０nMの最終濃度範囲を与えるように添加する。組換えｈＩＬ−３，ＧＭ−ＣＳＦ，ｃ−ｍｐｌリガンドおよび多機能造血受容体アゴニストは自家供給される。Ｇ−ＣＳＦ（Neupogen）は Amgen(Thousand Oaks，CA)製である。培養液は３ccシリンジを用いて再懸濁し、皿あたり１．０mlを分配する。対照（基底応答）培養液にはコロニー刺激因子は加えない。陽性対照培養液には調整培地（ＰＨＡ刺激ヒト細胞：Terry Fox Labs，Ｈ２４００）を加える。培養液は加湿空気中５％ＣＯ₂，３７℃でインキュベートする。５０細胞以上と定義された造血コロニーをピーク応答の日（日１０〜１１）にNikon 倒立相顕微鏡を用い40× 対物レンズを組み合わせてカウントする。５０細胞未満を含む細胞群はクラスターと呼ぶ。別法として、コロニーは、コロニーをスライド上に広げて染色するか、または採取し、再懸濁し、染色のためにサイトスピンスライド上で回転させて同定することができる。ヒト臍帯血造血細胞成長因子のアッセイ造血コロニー刺激因子（ＣＳＦ）活性のインビトロアッセイには伝統的に骨髄細胞が使用されている。しかしながら、ヒト骨髄は常に利用できるとは限らず、ドナー間でかなりの変動がある。臍帯血は造血幹細胞および前駆細胞の原料としては骨髄に匹敵する（Broxmeyer ら，PNAS USA ８９：４１０９−１１３，１９９２; Mayaniら，Blood ８１：３２５２−３２５８，１９９３）。骨髄とは異なり、臍帯血は規則的なベースでの入手が容易である。また、数人のドナーから新たに得られた細胞をプールするかまたはこの目的で凍結保存細胞のバンクを設立することによって、アッセイの変動性を低下できる可能性がある。培養条件の改良および／または系統特異的マーカーの分析により、顆粒球／マクロファージコロニー（ＣＦＵ−ＧＭ）、巨核球ＣＳＦ活性または高度増殖能コロニー形成因子（ＨＰＰ−ＣＦＣ）活性を特異的にアッセイすることが可能になると思われる。方法単核細胞（ＭＮＣ）は臍帯血から、収集24時間以内に、標準密度勾配（１．０７７g/ml Histopaque）を用いて単離する。臍帯血ＭＮＣは、ＣＤ１４−，ＣＤ３４＋細胞の免疫磁性選択、Applied Immune Science(Santa Clara，CA)からのコーティングされたフラスコを使用するＳＢＡ−，ＣＤ３４＋分画のパンニング、ならびにCellPro (Bothell，WA)アビジンカラムを使用するＣＤ３４＋の選択を包含する数種の操作によって、造血幹細胞および前駆細胞をさらに濃縮する。新たに単離されたまたは凍結保存されたＣＤ３４＋細胞濃縮分画は、アッセイに使用される。サンプルの各希釈系列（濃度範囲１pM〜１２０４pM）の二重培養を、付加的な成長因子を含まない０．９％メチルセルロース含有培地（Methocult Ｈ４２３０，Stem CellTechnologies，Vancouver，BC）１m中１×１０⁴細胞に調製する。一部の実験においては、Methocult Ｈ４２３０の代わりにエリスロポエチン（ＥＰＯ）を含有するMethocult Ｈ４２３０を用い、あるいは幹細胞因子（ＳＣＦ）５０ng/ml（Biosource International，Camarillo，CA）を添加する。７〜９日間培養したのち、＞３０細胞を含むコロニーをカウントする。計数における主観的な偏見を排除するため、アッセイオは盲検で計数する。変異体の創成、それらの細菌、哺乳類または昆虫細胞内発現、所望のタンパク質の精製および再フォールド、ならびにタンパク質の生物活性を測定するためのアッセイに使用できる組換えＤＮＡ法についての更なる詳細は共出願された出願ＷＯ９５／００６４６号、ＷＯ９４／１２６３９号、ＷＯ９４／１２６３８号、ＷＯ９５／２０９７６号、ＷＯ９５／２１１９７号、ＷＯ９５／２０９７７号、ＷＯ９５／２１２５４号、およびＵＳ０８／３８３，０３５号に見出される。これらは引用により、その全体が本明細書に導入される。本技術分野の熟練者に周知の更なる詳細は、引用により本明細書に導入される T.Maniatisら，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory（１９８２）およびそこに引用された参考文献ならびに J．Sambrook ら，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，２版，Cold Spring Harbor Lab oratory（１９８９）およびそこに引用された参考文献に見られる。以下の実施例は本発明をさらに詳細に例示するが、本発明はこの特定の例によって限定されるものではないことを理解すべきである。実施例１親ＢＨＫ発現ベクターの構築Ａ．哺乳類発現プラスミドからＡflIII部位の除去新しい哺乳類発現ベクターは、ＮcoＩ−Ｈind IIIまたはＡflIII−Ｈind III 遺伝子フラグメントを、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３１４６（ＷＯ９４／１２６３８）遺伝子およびマウスＩｇＧ２ｂリンカーフラグメントに対しインフレームに３’に受け入れるように構築された。最初に単一のＡflIII部位をｐＭＯＮ３３５９の誘導体であるｐＭＯＮ３９３４から除去した。ｐＭＯＮ３３５９は哺乳類発現カセットを含有するｐＵＣ１８−ベースのベクターである。このカセットには単純ヘルペスウイルスプロモーターＩＥ１１０（−８００〜＋１２０）、続いて修飾ヒトＩＬ−３シグナルペプチド配列、およびｐＵＣ１８ポリリンカー中に予めサブクローニングされたＳＶ４０後期ポリアデニル化（ポリ −Ａ）シグナル（Hippenmeyer ら，Bio/Technology，１９９３，pp．１０３７− １０４１参照）が包含される。遺伝子産物の細胞外分泌を促進する修飾ヒトＩＬ −３シグナル配列は５’末端でＢamＨＩ部位に、３’末端でユニークなＮcoＩ部位に隣接する。ユニークなＨind III部位はＮcoＩ部位の３’，ポリ−Ａ配列の５’に存在する。シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列は以下に示す（制限酵素部位は上に指示する）。ＮcoＩ部位内のＡＴＧコドンはシグナルペプチドのイニシエーターＡＴＧ（下線）とインフレームである。ｐＭＯＮ３９３４から、ＡflIII消化ついでＤＮＡポリメラーゼおよびヌクレオチドの添加によるオーバーハングの充填により、単一のＡflIII部位を除去した。消化されたＤＮＡフラグメントは Magic PCR Clean up キット(Promega)によって精製し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼでライゲートした。ライゲーション反応物をＤＨ５α（登録商標）にトランスフォームし、細胞をＬＢ−アガール＋アンピシリン上にプレーティングした。個々のコロニーについて、ＡflIII部位が除去されていれば単一のフラグメントを生じるＡflIIIおよびＨind IIIによる制限分析を用いてＡflIII部位の消失をスクリーニングした。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３０２７５と命名した。Ｂ．ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６／ＩｇＧ２ｂカセットのｐＭＯＮ３０２７５中へのトランスファーｐＭＯＮ３０２４５からのＮcoＩ−Ｈind IIIフラグメント（約４２５bp）を、ｐＭＯＮ３０２７５のＮcoＩ−Ｈind IIIフラグメント（約３８００bp）にライゲートした。ｐＭＯＮ３０２４５（ＷＯ９４／１２６３８）はマウスＩｇＧ２ｂヒンジフラグメントに接続したｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３１４６をコードする遺伝子を含有する。ＩｇＧ２ｂヒンジの直ぐ３’およびＨind II I部位の５’にＡflIII部位がある。遺伝子はＮcoＩ−Ｈind IIIもしくはＡflIII −Ｈind IIIフラグメントとしてＡflIII−Ｈind III部位に、ｈＩＬ−３変異体ｐＭＯＮ１３１４６／ＩｇＧ２ｂヒンジとインフレームにクローン化して新規なキメラを創成することができる。ＮcoＩ部位およびＡflIII部位は適合性のオーバーハングを有しライゲートするが、いずれの認識部位も失われる。マウスＩｇＧ２ｂヒンジ領域と連結したｈＩＬ−３変異体ｐＭＯＮ１３１４６をコードするＤＮＡ配列(SEQ ID NO：７８)を含有するプラスミドｐＭＯＮ３０３０４がこのクローニングによって得られた。実施例２ダイマー鋳型のｃ−ｍｐｌリガンド（１−１５３）遺伝子の１コピーを含有する中間体プラスミドの構築ｃ−ｍｐｌ（１−１５３）リガンドのコード配列に続いてユニークなＥcoＲＩ制限部位を有するプラスミドＤＮＡを生成させるため、遺伝子を逆転写酵素／ポリメラーゼチェーン反応（ＲＴ／ＰＣＲ）によって単離する。ヒト胎児（lot ＃３８１３０）および成人肝臓（lot ＃４６０１８）Ａ＋ＲＮＡはｃ−ｍｐｌリガンドｍＲＮＡの原料用に Clontech（Palo Alto，CA）から入手する。第１鎖ｃＤＮＡ反応は Invitrogen（San Diego，CA）から入手した cDNA Cycle（登録商標）を用いて実施した。ＲＴ反応においてはランダムプライマーおよびオリゴｄＴプライマーを用いてヒトおよび胎児肝臓ｍＲＮＡの混合物からｃＤＮＡを生成させる。アミノ酸１−１５３をコードするｃ−ｍｐｌリガンド遺伝子フラグメントの増幅には、プライマーの組合せ、順プライマー：ｃ−ｍｐｌＮcoＩ(SEQ ID NO ：１３)および逆プライマー：Ｅcompl とともにＲＴ産物がＰＣＲの鋳型として働く。ｃ−ｍｐｌＮcoＩプライマーはｃ−ｍｐｌリガンド遺伝子（遺伝子バンク受入番号＃Ｌ３３４１０または de Sauvage ら，Nature３６９：５３３−５３８，１９９４に基づく塩基＃２７９−３１１）にアニーリングし、ｃ−ｍｐｌリガンドの第１コドン（Ｓer＋１）の直ぐ５’のＮcoＩ制限酵素部位をコードする。ＮcoＩ制限酵素部位はＳer＋１の前のメチオニンおよびアラニンコドンをコードし、ｃ−ｍｐｌリガンドのＡlaおよび最初の４つのコドン（Ｓer，Ｐro，Ａla およびＰro）にはコドン縮重を包含する。Ｅcompl プライマーはｃ−ｍｐｌリガンドの塩基＃７２０−７３７にアニーリング化、Ａrg１５３に直ぐ続くｃ−ｍｐｌリガンド遺伝子とインフレームのＥcoＲＩ部位（ＧＡＡＴＴＣ）をコードする。ＥcoＲＩ部位はＡrg−１５３に続いてＧluおよびＰheコドンを創成する。約４８０bpのＰＣＲ産物を精製し、ＮcoＩおよびＥcoＲＩで消化し、ｐＭＯＮ３９９３のＮcoＩ−ＥcoＲＩベクターフラグメント（約４５５０bp）にライゲートさせた。ｐＭＯＮ３９９３はｐＭＯＮ３３５９の誘導体であった（実施例１に記載）。ＩＥ１１０プロモーターとポリ−Ａシグナルの間のユニークなＢamＨＩ部位にＢamＨＩフラグメントとして予めサブクローニングしたヒトＩＬ−３シグナルペプチド配列はその３’末端にＮcoＩ部位を含有し、ユニークなＥcoＲＩ部位が続く。ｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸１−１５３(SEQ ID NO：１６１)をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：７９）を含有するプラスミドｐＭＯＮ２６４８５がこのクローニングによって得られた。実施例３ダイマー鋳型の第２の遺伝子を含有する親プラスミドの構築アミノ酸１（Ｓer）に始まりアミノ酸１５３（Ａrg）に続いて終結コドンを有するｃ−ｍｐｌリガンドの遺伝子フラグメントの増幅には、以下のプライマーの組合せ：ｃ−ｍｐｌＮcoＩ(SEQ ID NO：１３)（順プライマー）およびｃ−ｍｐｌＨind III(SEQ ID NO：１５)（逆プライマー）とともに実施例２からのＲＴ反応がＰＣＲの鋳型として働く。ｃ−ｍｐｌＮcoＩプライマー(SEQ ID NO ：１３)は実施例２に記載した通りである。ｃ−ｍｐｌリガンドの塩基＃Ｌ７１６−７３７にアニーリングするｃ−ｍｐｌＨind III(SEQ ID NO：１５)プライマは最終コドンＡrg¹⁵³の直後に終結コドンおよびＨind III制限酵素部位の両者を付加する。ＲＴｃＤＮＡサンプルから２つのタイプのＰＣＲ産物、アミノ酸１１２−１１５のコドンが欠失した産物およびこれらのコドンの欠失がない産物を生成する。ｃ−ｍｐｌリガンドＰＣＲ産物（約４８０bp）を哺乳類発現ベクターｐＭＯＮ３９３４にトランスファーするために、ＮcoＩおよびＨind III制限酵素によって消化する。ｐＭＯＮ３９３４ＮcoＩおよびＨind IIIで消化すると（約３８００b p）ＰＣＲ産物が受け入れられる。ｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸１−１５３(SEQ ID NO：２５２)をコードするプラスミドｐＭＯＮ３２１３２(SEQ ID NO：２４９)がこのクローニングによって得られた。ｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸１−１５３(SEQ ID NO：２５３)をコードするプラスミドｐＭＯＮ３２１３４(SEQ ID NO：２５０)がこのクローニングにより得られた。コドン１１２−１１５が欠失したｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸１−１５３（Δ１１２−１１５）(SEQ ID NO：２５４)をコードするプラスミドｐＭＯＮ３２１３３(SEQ ID NO：２５１)もこのクローニングによって得られた。実施例４第２のｃ−ｍｐｌリガンド遺伝子中にΔ１１２−１１５欠失を有するＰＣＲダイマー鋳型５Ｌの生成ｃ−ｍｐｌリガンドの新規な型を発生させるためのＰＣＲ鋳型はｐＭＯＮ２６４５８の３．７Kbp ＢstＸＩ／ＥcoＲＩフラグメントをｐＭＯＮ３２１３３（アミノ酸１１２−１１５の欠失を含む）からの１Kbp ＮcoＩ／ＢstＸＩフラグメントに、ＥcoＲＩ／ＡflIII５Ｌ合成オリゴヌクレオチドリンカー５Ｌ−５’(SEQ ID NO：１８)ならびに５Ｌ−３’(SEQ ID NO：１９)とともにライゲートすることにより構築する。リンカーのＥcoＲＩ末端はｐＭＯＮ２６４５８のＥcoＲＩ末端にライゲートする。リンカーのＡflIII末端はｐＭＯＮ３２１３３のＮcoＩ末端にライゲートし、いずれの制限部位もライゲーションにより維持されない。ｐＭＯＮ２６４５８およびｐＭＯＮ３２１３２のＢstＸＩ部位も同様にライゲートする。プラスミドｐＭＯＮ２８５４８がクローニングにより得られ、これはＧluＰheＧlyＧlyＡsnＭ etＡla（SEQ ID NO：２２２）リンカーを介しアミノ酸１１２−１１５の欠失を含むアミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンド（SEQ ID NO：１６２）に融合したアミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンドをコードするＤＮＡ配列（SEQ ID N O：８０）を含有する。実施例５ＰＣＲダイマー鋳型４Ｌの生成ｃ−ｍｐｌリガンドの新規な型を発生させるためのＰＣＲ鋳型はｐＭＯＮ２６４５８の３．７Kbp ＢstＸＩ／ＥcoＲＩフラグメントをｐＭＯＮ３２１３３からの１Kbp ＮcoＩ／ＢstＸＩフラグメントにＥcoＲＩ／ＡflIII４Ｌ合成オリゴヌクレオチドリンカー４Ｌ−５’(SEQ ID NO：１６)および４Ｌ−３’(SEQ ID NO ：１７)とともにライゲートすることにより構築するリンカーのＥcoＲＩ末端はｐＭＯＮ２６４５８のＥcoＲＩ末端にライゲートする。リンカーのＡflIII末端はｐＭＯＮ３２１３２のＮcoＩ末端にライゲートし、いずれの制限部位もライゲーションにより維持されない。ｐＭＯＮ２６４５８およびｐＭＯＮ３２１３２のＢstＸＩ部位も、同様にライゲートする。プラスミドｐＭＯＮ２８５００がクローニングによって得られ、これは、ＧluＰheＧlyＡ snＭetＡla（SEQ ID NO：２２３）リンカー（４Ｌ）を介して、アミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンド（SEQ ID NO：１６３）に融合したアミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンドをコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：８２）を含有する。実施例６ＰＣＲダイマー鋳型５Ｌの生成ｃ−ｍｐｌリガンドの新規な型を発生させるためのＰＣＲ鋳型はｐＭＯＮ２６４５８の３．７Kbp ＢstＸＩ／ＥcoＲＩフラグメントをｐＭＯＮ３２１３３からの１Kbp ＮcoＩ／ＢstＸＩフラグメントにＥcoＲＩ／ＡflIII５Ｌ合成オリゴヌクレオチドリンカー５Ｌ−５’(SEQ ID NO：１８)および４Ｌ−３’(SEQ ID NO ：１９)とともにライゲートすることにより構築するリンカーのＥcoＲＩ末端はｐＭＯＮ２６４５８のＥcoＲＩ末端にライゲートする。リンカーのＡflIII末端はｐＭＯＮ３２１３２のＮcoＩ末端にライゲートし、いずれの制限部位もライゲーションにより維持されない。ｐＭＯＮ２６４５８およびｐＭＯＮ３２１３２のＢstＸＩ部位も同様にライゲートする。プラスミドｐＭＯＮ２８５０１がクローニングにより得られ、これは、ＧluＰheＧlyＧlyＡ snＭetＡla（SEQ ID NO：２２２）リンカー（５Ｌ）を介して、アミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンド（SEQ ID NO：１６４）に融合したアミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンドをコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：８２）を含有する。実施例７ＰＣＲダイマー鋳型８Ｌの生成ｃ−ｍｐｌリガンドの新規な型を発生させるためのＰＣＲ鋳型はｐＭＯＮ２６４５８の３．７Kbp ＢstＸＩ／ＥcoＲＩフラグメントをｐＭＯＮ３２１３４からの１Kbp ＮcoＩ／ＢstＸＩフラグメントにＥcoＲＩ／ＡflIII８Ｌ合成オリゴヌクレオチドリンカー８Ｌ−５’(SEQ ID NO：２０)および８Ｌ−３’(SEQ ID NO ：２１)とともにライゲートすることにより構築するリンカーのＥcoＲＩ末端はｐＭＯＮ２６４５８のＥcoＲＩ末端にライゲートする。リンカーのＡflIII末端はｐＭＯＮ３２１３４のＮcoＩ末端にライゲートし、いずれの制限部位もライゲーションにより維持されない。ｐＭＯＮ２６４５８およびｐＭＯＮ３２１３４のＢstＸＩ部位も同様にライゲートする。プラスミドｐＭＯＮ２８５０２がクローニングによって得られ、これはＧluＰheＧlyＧlyＡ snＧlyＧlyＡsnＭetＡla（SEQ ID NO：２２４）リンカー（８Ｌ）を介して、アミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンド（SEQ ID NO：１６５）に融合したアミノ酸１−１５３ｃ−ｍｐｌリガンドをコードするＤＮＡ配列(SEQ ID NO：８３ )を含有する。実施例８−４４新しいＮ−末端およびＣ−末端を有する新規なｃ−ｍｐｌリガンド遺伝子の生成Ａ．新規なｃ−ｍｐｌリガンド受容体アゴニストをコードする遺伝子のＰＣＲ生成新規なｃ−ｍｐｌリガンド受容体アゴニストをコードする遺伝子は方法IIIを用いて生成させた（Horlickら，Prot.Eng．５：４２７−４３３，１９９２）。ＰＣＲ反応はダイマー鋳型，ｐＭＯＮ２８５００，２８５０１，２８５０２または２８５４８および以下の合成プライマーセットの１つを用いて実施した（最初の数が元の配列中の最初のアミノ酸の位置を示す。たとえば、３１−５’および３１−３’はそれぞれ、元の配列の残基３１に相当するコドンに始まる５’および３’オリゴプライマーを意味する）。Ｂ．新規なｃ−ｍｐｌリガンド受容体アゴニスト遺伝子産物の、キメラ生成のための哺乳類発現ベクターへのサブクローニングｃ−ｍｐｌリガンド受容体アゴニスト遺伝子ＰＣＲ産物を哺乳類発現ベクターへのトランスファーするために、ＮcoＩおよびＨind IIIまたはＡflIIIおよびＨ ind III制限酵素で消化した（約４７０bp）。発現ベクター、ｐＭＯＮ３０３０４をＮcoＩおよびＨind IIIで消化し（約４２００bp）、ＰＣＲ産物をＮcoＩ− Ｈind IIIまたはＡflIII−Ｈind IIIフラグメントとして受け入れる。ＰＣＲ産物の制限消化および得られたプラスミドを表４に示す。実施例４５ｐＭＯＮ１５９６０の構築新しいＮ末端およびＣ末端とともにＧ−ＣＳＦＳer¹⁷をコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドを構築するために、中間体プラスミドｐＭＯＮ１５９６０を使用した。プラスミドｐＡＣＹ１７７（Chang，A.C.Y．& Cohen，S.N.，J． Bacteriol.１３４：１１４１−１１５６，１９７８）ＤＮＡを制限酵素Ｈind II IおよびＢamＨＩで消化し、３０９２塩基対Ｈind III，ＢamＨＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３０３７（ＷＯ９５／２１２５４）ＤＮＡを制限酵素ＢglIIおよびＦspＩで消化し、６１６塩基対ＢglII，ＦspＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３０３７の第２のサンプルは、ＤＮＡをＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、５５６塩基対のＮcoＩ，Ｈind IIIフラグメントを得た。合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド lＧＧＧＳfor（SEQ ID NO：７６）および 1ＧＧＧＳrev（SEQ ID NO：７７）を互いにアニーリングさせ、ついでＡflIII およびＦspＩで消化し、２１塩基対のＡflIII，ＦspＩフラグメントを得た。制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて、大腸菌Ｋ −１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析して正しい挿入を確認した。実施例４６ｐＭＯＮ１５９８１の構築多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミド、ｐＭＯＮ１５９８１の構築．プラスミドｐＭＯＮ１５９６０のＤＮＡを制限酵素ＳmaＩで消化し、プライマーとして合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド３８ stop（SEQ ID NO：６５）および３９ start（SEQ ID NO：６４）を用いるＰＣＲ反応の鋳型とし、５７６塩基対のＤＮＡフラグメントを増幅させた。増幅したフラグメントを制限酵素Ｈind III およびＮcoＩで消化し５５８塩基対のＨind III，ＮcoＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３１８１のＤＮＡを制限酵素Ｈind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対Ｈind III，ＡflIIIフラグメントを得た。これらの制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上において選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析し、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミドｐＭＯＮ１５９８１は以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１５５）を含有する。実施例４７ｐＭＯＮ１５９８２の構築多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミド、ｐＭＯＮ１５９８２の構築．プラスミドｐＭＯＮ１５９６０のＤＮＡを制限酵素ＳmaＩで消化し、プライマーとして合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド９６ stop（SEQ ID NO：６７）および９７ start（SEQ ID NO：６６）を用いるＰＣＲ反応の鋳型とし、５７６塩基対のＤＮＡフラグメントを増幅させた。増幅したフラグメントを制限酵素Ｈind III およびＮcoＩで消化し５５８塩基対のＨind III，ＮcoＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３１８１のＤＮＡを制限酵素Ｈind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のＨind III，ＡflIIIフラグメントを得た。これらの制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析し、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミドｐＭＯＮ１５９８２は以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１５７）を含有する。実施例４８ｐＭＯＮ１５９６５の構築多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミド、ｐＭＯＮ１５９６５の構築．プラスミドｐＭＯＮ１５９６０のＤＮＡを制限酵素ＳmaＩで消化し、合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド１４２ stop（SEQ ID NO：７３）および１４１ start（SE Q ID NO：７２）をプライマーとして用いるＰＣＲ反応の鋳型とし、５７６塩基対のＤＮＡフラグメントを増幅させた。増幅したフラグメントを制限酵素Ｈind IIIおよびＮcoＩで消化し、５５８塩基対のＨind III，ＮcoＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３１８１のＤＮＡを、制限酵素Ｈind IIIおよびＡflI IIで消化し、４０６８塩基対のＨind III，ＡflIIIフラグメントを得た。これらの制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析し、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミドｐＭＯＮ１５９６５は以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１５７）を含有する。実施例４９ｐＭＯＮ１５９６６の構築多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミド、ｐＭＯＮ１５９６６の構築．プラスミドｐＭＯＮ１５９６０のＤＮＡを制限酵素ＳmaＩで消化し、合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド１２６ stop（SEQ ID NO：６８）および１２５ start（SE Q ID NO：６９）をプライマーとして用いるＰＣＲ反応の鋳型とし、５７６塩基対のＤＮＡフラグメントを増幅させた。増幅したフラグメントを制限酵素Ｈin d IIIおよびＮcoＩで消化し、５５８塩基対のＨind III，ＮcoＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３１８１のＤＮＡを制限酵素Ｈind IIIならびのＡf lIIIで消化し、４０６８塩基対のＨind III，ＡflIIIフラグメントを得た。これらの制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析し、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミドｐＭＯＮ１５９６６は以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１５８）を含有する。実施例５０ｐＭＯＮ１５９６７の構築多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミド、ｐＭＯＮ１５９６７の構築．プラスミドｐＭＯＮ１５９６０のＤＮＡを制限酵素ＳmaＩで消化し、合成ＤＮＡオリゴヌクレオチド１３２ stop（SEQ ID NO：７１）および１３３ start（SE Q ID NO：７０）をプライマーとして用いるＰＣＲ反応の鋳型とし、５７６塩基対のＤＮＡフラグメントを増幅させた。増幅したフラグメントを制限酵素Ｈind IIIおよびＮcoＩで消化し、５５８塩基対のＨind III，ＮcoＩフラグメントを得た。プラスミドｐＭＯＮ１３１８１のＤＮＡを制限酵素Ｈind IIIおよびＡfl IIIで消化し、４０６８塩基対のＨind III，ＡflIIIフラグメントを得た。これらの制限フラグメントをライゲートし、ライゲーション反応混合物を用いて大腸菌Ｋ−１２株ＪＭ１０１をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析で分析し、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミドｐＭＯＮ１５９６７は以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１５９）を含有する。実施例５１多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドを構築するために使用される中間体プラスミド、ｐＭＯＮ１３１８０の構築プラスミドｐＭＯＮ１３０４６（ＷＯ９５／２１２５４）のＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼＸmaＩおよびＳnaＢＩで消化し、４０１８塩基対のベクターフラグメントを得た。４０１８塩基対ＸmaＩ−ＳnaＢＩフラグメントは、２５塩基対ＸmaＩ−ＳnaＢＩ挿入フラグメントを維持しない Magic DNA Clean-up Systemキット(Promega，Madison,WI)を用いて精製した。合成オリゴヌクレオチドの相補性ペア、glyxa１(SEQ ID NO：７４)および glyxa２(SEQ ID NO：７５)を第Ｘａ因子切断部位をコードする配列を除去するように設計した。適正に組み立てられると、これらのオリゴヌクレオチドはまたＸmaＩおよびＳnaＢＩ末端を生じる。プライマー、glyxa１および glyxa２はアニーリング緩衝液（２０mM Ｔris-ＨＣl ｐＨ７．５，１０mM ＭｇＣｌ₂，５０mM ＮａＣｌ）中、７０℃で１０分間加熱し、徐々に冷却させる。ｐＭＯＮ１３０４６からの４０１８塩基対ＸmaＩ −ＳnaＢＩフラグメントを組み立てられたオリゴヌクレオチドとＴ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gai thersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡをトランスフォーマントから単離し、ＰＣＲベースのアッセイを用いて分析した。選択されたトランスフォーマントからのプラスミドＤＮＡを配列を決定してオリゴヌクレオチドの正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８０と命名し、ＤＮＡ配列(SEQ ID N0：XX)を含有する。実施例５２多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドを構築するために使用される中間体プラスミド、ｐＭＯＮ１３１８１の構築プラスミドｐＭＯＮ１３０４７（ＷＯ９５／２１２５４）のＤＮＡを制限エンドヌクレアーゼＸmaＩおよびＳnaＢＩで消化し、４０６３塩基対のベクタ−フラグメントを得た。４０６３塩基対ＸmaＩ−ＳnaＢＩフラグメントは、２５塩基対ＸmaＩ−ＳnaＢＩ挿入フラグメントを維持しない Magic DNA Clean-up Systemキット（Promega，Madison，WI）を用いて精製した。合成オリゴヌクレオチドの相補性ペア、glyxa１(SEQ ID NO：７４)およびglyxa２(SEQ ID NO：７５)を第Ｘａ因子切断部位をコードする配列を除去するように設計した。適正に組み立てられると、これらのオリゴヌクレオチドはまたＸmaＩおよびＳnaＢＩ末端を生じる。 glyxa１および glyxa２はアニーリング緩衝液中、７０℃で１０分間加熱し、徐々に冷却させる。ｐＭＯＮ１３０４７からの４０６３塩基対ＸmaＩ−ＳnaＢＩフラグメントを組み立てられたオリゴヌクレオチドとＴ４ＤＮＡリガーゼ (Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gaither sburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡをトランスフォーマントから単離し、ＰＣＲベースのアッセイを用いて分析した。選択されたトランスフォーマントからのプラスミドＤＮＡを配列を決定してオリゴヌクレオチドの正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８１と命名し、ＤＮＡ配列（SEQ ID NO：XX）を含有する。実施例５３ｐＭＯＮ１３１８２の構築ｐＭＯＮ１３０３７中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIIを用いて創成した。Fragment Startは、ｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３９ start（SEQ ID NO：６４）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）により創成し、増幅させた。Fragmen t Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列から、プライマーセット３８ stop（SEQ ID NO：６５）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー３９start および３８ stop を用いて創成、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８２と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８２でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３８２は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：９４）を含有する。実施例５４ｐＭＯＮ１３１８３の構築ｐＭＯＮ１３１８３中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３９ start（SEQ ID NO：６４）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列から、プライマーセット３８ stop（SEQ ID NO：６５）およびＬ−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー３９ startおよび３８ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega， Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technolog ies，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８３と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８３でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８３は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：９５）を含有する。実施例５５ｐＭＯＮ１３１８４の構築ｐＭＯＮ１３１８４中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット９７ start（SEQ ID NO：６６）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット９６ stop（SEQ ID NO：６７）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー９７start および９６ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８４と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８４でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８４は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：９６）を含有する。実施例５６ｐＭＯＮ１３１８５の構築ｐＭＯＮ１３１８５中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット９７ start（SEQ ID NO：６６）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列から、プライマーセット９６ stop（SEQ ID NO：６７）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー９７start および９６ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８５と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８５でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８５は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：６７）を含有する。実施例５７ｐＭＯＮ１３１８６の構築ｐＭＯＮ１３１８６中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２６start（SEQ ID NO：６８）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列から、プライマーセット１２５ stop（SEQ ID NO：６９）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start およびStopからプライマー１２６ start および１２５ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega， Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technolog ies，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８６と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８６でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８６は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：９８）を含有する。実施例５８ｐＭＯＮ１３１８７の構築ｐＭＯＮ１３１８７中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２６start（SEQ ID NO：６８）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２５ stop（SEQ ID NO：６９）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリンクした Fragment Start および Stop からプライマー１２６start および１２５ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８７と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８７でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８７は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：９９）を含有する。実施例５９ｐＭＯＮ１３１８８の構築ｐＭＯＮ１３１８８中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ− ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３３ start（SEQ ID NO：７０）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３２ stop（SEQ ID NO：７１）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー１３３ start および１３２ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８８と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８８でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８８は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１００）を含有する。実施例６０ｐＭＯＮ１３１８９の構築ｐＭＯＮ１３１８９中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ− ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３３ start（SEQ ID NO：７０）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３２ stop（SEQ ID NO：７１）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー１３３ start および１３２ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega， Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technolog ies，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１８９と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１８９でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１８９は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０１）を含有する。実施例６１ｐＭＯＮ１３１９０の構築ｐＭＯＮ１３１９０中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ− ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４２ start（SEQ ID NO：７２）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４１ stop（SEQ ID NO：７３）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー１４２ start および１４１ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット(Promega，Ma dison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９０と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９０でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９０は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０２）を含有する。実施例６２ｐＭＯＮ１３１９１の構築ｐＭＯＮ１３１９１中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法Ｉを用いて創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ− ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４２ start（SEQ ID NO：７２）および L−１１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４１ stop（SEQ ID NO：７３）および L−１１ stop（SEQ ID NO：６１）を用いて創成し、増幅させた。完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子はアニーリングした Fragment Start および Stop からプライマー１４２ start および１４１ stop を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼ酵素ＮcoＩおよびＨind IIIで消化し、Magic DNA Clean-up System キット（P romega，Madison，WI）を用いて精製した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up Systemキット(Promega，Mad ison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologie s，Gaithersburg，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９１と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９１でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９１は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０３）を含有する。実施例６３ｐＭＯＮ１３１９２の構築ｐＭＯＮ１３１９２中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを用いて創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ− ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３９ start（SEQ ID NO：６４）および P-b１ start（SEQ ID NO：６０）を用いて創成、増幅させた。Fragment Sto pはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３８ stop（SEQ ID NO：６５）および P-b１stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fra gment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista，C A）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット（Promega，Madison，WI）を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehr inger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gaithersburg ，MD）をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９２と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９２でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９２は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０４）を含有する。実施例６４ｐＭＯＮ１３１９３の構築ｐＭＯＮ１３１９３中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３９ start（SEQ ID NO：６４）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット３８ stop（SEQ ID NO：６５）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehrin ger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD )をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９３と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９３でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９３は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０５）を含有する。実施例６５ｐＭＯＮ２５１９０の構築ｐＭＯＮ２５１９０中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを用いて創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦ配列から、プライマーセット９７ start（SEQ ID NO：６６）およびP-b 1 start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列から、プライマーセット９６ stop （SEQ ID NO：６７）および P-b１stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成し、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragmen t Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fra gment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対Ｎco Ｉ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringe r Mannheim，Indianapolis，IN）を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD) をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ２５１９０と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ２５１９０でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ２５１９０は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０６）を含有する。実施例６６ｐＭＯＮ２５１９１の構築ｐＭＯＮ２５１９１中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット９７ start（SEQ ID NO：６６）および P-b１start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment S top はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット９６ stop（SEQ ID NO：９８）および P-b１stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、F ragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehr inger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg， MD)をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ２５１９１と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ２５１９１でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ２５１９１は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０７）を含有する。実施例６７ｐＭＯＮ１３１９４の構築ｐＭＯＮ１３１９４中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment Start はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２６start（SEQ ID NO：６８）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２５ stop（SEQ ID NO：６７）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehrin ger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD )をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９４と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９４でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９４は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０８）を含有する。実施例６８ｐＭＯＮ１３１９５の構築ｐＭＯＮ１３１９５中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２６ start（SEQ ID NO：６８）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１２５ stop（SEQ ID NO：６９）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehrin ger Mannheim，Indianapolis，IN）を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD )をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９５と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９５でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９５は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１０９）を含有する。実施例６９ｐＭＯＮ１３１９６の構築ｐＭＯＮ１３１９６中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３３ start（SEQ ID NO：７０）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３２ stop（SEQ ID NO：７１）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringe r Mannheim，Indianapolis，IN）を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD) をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９６と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９６でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９６は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１０）を含有する。実施例７０ｐＭＯＮ１３１９７の構築ｐＭＯＮ１３１９７中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３３ start（SEQ ID NO：７０）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１３２ stop（SEQ ID NO：７１）および P-b１stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean（Bio １０１，Vista ，CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehrin ger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD )をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９７と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９７でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９７は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１１）を含有する。実施例７１ｐＭＯＮ１３１９８の構築ｐＭＯＮ１３１９８中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４２ start（SEQ ID NO：７２）および P-b１ start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment Stop はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４１ stop（SEQ ID NO：７３）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用い創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を Geneclean(Bio １０１,Vista,CA )を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８０を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０２３塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNA Clean-up System キット（Promega，Madison，WI）を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehrin ger Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD )をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９８と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９８でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９８は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１２）を含有する。実施例７２ｐＭＯＮ１３１９９の構築ｐＭＯＮ１３１９９中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子を材料および方法の項に記載した方法IIを使用して創成した。Fragment StartはｐＭＯＮ１３０３７中のＧ −ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４２ start（SEQ ID NO：７２）および P-b１start（SEQ ID NO：６２）を用いて創成、増幅させた。Fragment S top はｐＭＯＮ１３０３７中のＧ−ＣＳＦＳer¹⁷配列からプライマーセット１４１ stop（SEQ ID NO：７３）および P-b１ stop（SEQ ID NO：６３）を用いて創成、増幅させた。Fragment Start は制限エンドヌクレアーゼＮcoＩで消化し、Fragment Stop は制限エンドヌクレアーゼＨind IIIで消化した。精製後、消化した Fragment Start および Stop を合わせ、ｐＭＯＮ３９３４の約３８００塩基対ＮcoＩ−Ｈind IIIベクターフラグメントにライゲートした。上述の中間体プラスミドは完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子を含有し、制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＨind IIIで消化した。消化したＤＮＡを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、完全長の新Ｎ末端／Ｃ末端Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷遺伝子をGeneclean（Bio １０１，Vista， CA）を用いて単離した。中間体プラスミドｐＭＯＮ１３１８１を制限エンドヌクレアーゼＨind IIIおよびＡflIIIで消化し、４０６８塩基対のベクターフラグメントを得、Magic DNAClean-up Systemキット(Promega，Madison，WI)を用いて精製した。精製した制限フラグメントを合わせて、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringe r Mannheim，Indianapolis，IN)を用いてライゲートした。ライゲーション反応物の部分を用いて大腸菌ＤＨ５α細胞(Life Technologies，Gaithersburg，MD) をトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して新しい遺伝子の正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ１３１９９と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質の発現および封入体からのタンパク質の単離のためにｐＭＯＮ１３１９９でトランスフォームした。プラスミドｐＭＯＮ１３１９９は以下に示すアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１３）を含有する。実施例７３縦列二重化プラスミド鋳型，Syntan1 の構築縦列二重化ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６鋳型，Syntan1 の創成には３種のＤＮＡをＴ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim)を用いるライゲーションにより接続させた。３種のＤＮＡは１）ＢstＥIIおよびＳnaＢＩにより消化したｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６を含有するｐＭＯＮ１３０４６；２）合成オリゴヌクレオチド，L１syn．for（SEQ ID NO：４８）および L１syn．rev（SEQ ID NO：４９）がアニーリングした相補性対（これらは元のタンパク質のＣ末端およびＮ末端を連結するリンカーをコードする配列およびｐＭＯＮ１３４１６配列の周辺小量を含有し、適正に組み立てられた場合にはＢstＥIIおよびＣlaＩ末端を生じる）；および３）ｐＭＯＮ１３０４６からＣ laＩ［ＤＮＡは、dam-細胞，ＤＭ１(Life Technologies)中で予め増殖させた］およびＳnaＢＩで消化したｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の部分である。消化したＤＮＡは０．９％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミド染色し、Beneclean（Bio １０１）を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gai thersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。トランスフォーマントから Miniprep ＤＮＡを単離し、トランスフォーマントをＰＣＲベースのアッセイを用いてスクリーニングした。選ばれたトランスフォーマントからのプラスミドＤＮＡの配列を決定して、正しい鋳型を得た。得られたプラスミドはsyntan１と命名され、SEQ ID NO：８４のＤＮＡ配列を含有する。実施例７４縦列二重化プラスミド鋳型，Syntan３の構築縦列二重化ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６鋳型，Syntan３の創成には３種のＤＮＡをＴ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim)を用いるライゲーションにより接続させた。３種のＤＮＡは１）ＢstＥIIおよびＳnaＢＩにより消化したｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６を含有するｐＭＯＮ１３０４６；２）合成オリゴヌクレオチド，L３syn．for(SEQ ID NO：５０)および L３syn．rev(SEQ ID NO：５１)がアニーリングした相補性対（これらは元のタンパク質のＣ末端およびＮ末端を連結するリンカーをコードする配列およびｐＭＯＮ１３４１６配列の周辺小量を含有し、適正に組み立てられた場合はＢst ＥIIおよびＳnaＢＩ末端を生じる）；および３）ｐＭＯＮ１３０４６からＣlaＩ［ＤＮＡはdam −細胞，ＤＭ１(Life Technologies)中で予め増殖させた］およびＳnaＢＩで消化したｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の部分である。消化されたＤＮＡは０．９％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドによって染色し、Geneclean（Bio １０１）を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gai thersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。トランスフォーマントから Miniprep ＤＮＡを単離し、トランスフォーマントをＰＣＲベースのアッセイを用いてスクリーニングした。選ばれたトランスフォーマントからのプラスミドＤＮＡの配列を決定して、正しい鋳型を得た。得られたプラスミドはsyntan３と命名され、SEQ ID NO：８５のＤＮＡ配列を含有する。実施例７５ｐＭＯＮ３１１０４の構築ｐＭＯＮ３１１０４中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan１から、プライマーセット３５ start（SEQ ID NO：５２）および３４ rev（SEQ ID NO：５３）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化されたフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドによって染色し、Geneclean(Bio １０１，Vist a，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化して、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean（Bio １０１，Vista，C A）を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Lif e Technologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して，正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０４と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０４でトランスフォームした。（SEQ ID NO：８６）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０４は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例７６ｐＭＯＮ３１１０５の構築ｐＭＯＮ３１１０５中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に紀載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan１から、プライマーセット７５ start（SEQ ID NO：５４）および６９ rev（SEQ ID NO：５５）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドにより染色し、Geneclean(Bio １０１，Vi sta，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean（Bio １０１，Vista，CA）を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Tec hnologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０５と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０５でトランスフォームした。（SEQ ID NO：８７）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０５は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例７７ｐＭＯＮ３１１０６の構築ｐＭＯＮ３１１０６中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan１から、プライマーセット９１ start（SEQ ID NO：５６）および９０ rev（SEQ ID NO：５７）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドにより染色し、Geneclean(Bio １０１，Vi sta，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA)を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Techn ologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０６と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０６でトランスフォームした。（SEQ ID NO：８０）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０６は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例７８ｐＭＯＮ３１１０７の構築ｐＭＯＮ３１１０７中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan１から、プライマーセット１０１ start（SEQ ID NO：５８）および１００ rev（SEQ ID NO ：５９）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcolおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドによって染色し、Geneclean(Bio １０１， Vista，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA)を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Technologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０７と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０７でトランスフォームした。（SEQ ID NO：８９）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０７は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例７９ｐＭＯＮ３１１０８の構築ｐＭＯＮ３１１０８中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan３から、プライマーセット３５ start（SEQ ID NO：５２）および３４ rev（SEQ ID NO：５３）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドによって染色し、Geneclean(Bio １０１， Vista，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA)を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Tec hnologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０８と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０８でトランスフォームした。（SEQ ID NO：９０）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０８は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例８０ｐＭＯＮ３１１０９の構築ｐＭＯＮ３１１０９中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan３から、プライマーセット７０ start（SEQ ID NO：５４）および６９ rev（SEQ ID NO：５５）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドにより染色し、Geneclean(Bio １０１，Vi sta，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA)を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Techn ologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１０９と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１０９でトランスフォームした。（SEQ ID NO：９１）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１０９は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例８１ｐＭＯＮ３１１０の構築ｐＭＯＮ３１１１０中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan３から、プライマーセット９１ start（SEQ ID NO：５６）および９０rev（SEQ ID NO：５７）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドにより染色し、Geneclean(Bio １０１，Vi sta，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA)を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life Techn ologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１１０と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１１０でトランスフォームした。（SEQ ID NO：９２）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１１０は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例８２ｐＭＯＮ３１１１の構築ｐＭＯＮ３１１１１中新しいＮ末端／Ｃ末端遺伝子は、材料および方法の項に記載の方法IIIを用いて創成された。ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６の完全長新Ｎ末端／Ｃ末端遺伝子は、中間体プラスミドsyntan３から、プライマーセット１００ start（SEQ ID NO：５８）および１００ rev（SEQ ID NO ：５９）を用いて創成し、増幅させた。新しい遺伝子を含有する得られたＤＮＡフラグメントを制限エンドヌクレアーゼＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化した。消化したＤＮＡフラグメントを１％ＴＡＥゲル上で分割し、エチジウムブロミドにより染色し、Geneclean(Bio １０１，Vi sta，CA)を用いて単離した。精製された消化ＤＮＡフラグメントを、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)を用いて発現ベクターｐＭＯＮ１３１８９にライゲートした。ｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡは予めＮcoＩおよびＳnaＢＩで消化し、ｈＩＬ−３受容体アゴニストｐＭＯＮ１３４１６のコード配列を除去し、４２５４塩基対ベクターフラグメントを、０．８％ＴＡＥゲル上分割およびエチジウムブロミド染色後 Geneclean(Bio １０１，Vista，CA) を用いて単離した。ライゲーション反応の部分を大腸菌株ＤＨ５α細胞（Life T echnologies，Gaithersburg，MD）のトランスフォーメーションに用いた。細菌トランスフォーマントをアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、配列を決定して、正しい挿入を確認した。得られたプラスミドはｐＭＯＮ３１１１１と命名した。大腸菌株ＪＭ１０１を、タンパク質発現および封入体からのタンパク質の単離のために、ｐＭＯＮ３１１１１でトランスフォームした。（SEQ ID NO：９３）のＤＮＡ配列を含有するプラスミド，ｐＭＯＮ３１１１１は以下のアミノ酸配列をコードする。実施例８３ｐＭＯＮ３１１２の構築ｈＩＬ−３受容体およびＧ−ＣＳＦ受容体を活性化する多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドｐＭＯＮ３１１１２の構築．プラスミドｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡを制限酵素ＮcoＩおよびＸmaＩで消化し、得られたＮcoＩ，ＸmaＩＤＮＡベクターフラグメントは０．８％ゲル上で単離し精製した。第２のプラスミドｐＭＯＮ１３２２２（ＷＯ９４／１２６３９，ＵＳ０８／４１１，７９６）からのＤＮＡはＮcoＩおよびＥcoＲＩで消化し、２８１塩基対のＮcoＩ，ＥcoＲＩフラグメントを得た。このフラグメントは１％アガロースゲルから単離し精製した。２つのオリゴヌクレオチド SYNNOXA１．REQ（SEQ ID NO：２４０）および SYNNOXA２．REQ（SEQ ID NO：２４１）をアニーリングさせ、ｐＭＯＮ１３２２２からの２８１塩基対のＤＮＡフラグメントおよびｐＭＯＮ１３１８９からのＤＮＡベクターフラグメントにライゲートした。ライゲーション混合物の部分を、ついで大腸菌株Ｋ−１２株ＪＭ１０１にトランスフォームした。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析による解析で、ＥcoＲＶフラグメントの存在が認められ、配列を決定して，正しい挿入を確認した。プラスミド，ｐＭＯＮ３１１１２は、以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１４）を含有する。実施例８４ｐＭＯＮ３１１１３の構築ｈＩＬ−３受容体およびＧ−ＣＳＦ受容体を活性化する多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドｐＭＯＮ３１１３２の構築．プラスミドｐＭＯＮ１３１９７ＤＮＡを制限酵素ＮcoＩおよびＸmaＩで消化し、得られたＮcoＩ，ＸmaＩＤＮＡベクターフラグメントは０．８％ゲル上で単離し精製した。第２のプラスミドｐＭＯＮ１３２３９（ＷＯ９４／１２６３９，ＵＳ０８／４１１，７９６）からのＤＮＡはＮcoＩおよびＥcoＲＩで消化し、２８１塩基対のＮcoＩ，ＥcoＲＩフラグメントを得た。このフラグメントは１％アガロースゲルから単離し精製した。２つのオリゴヌクレオチド SYNNOXA１．REQ（SEQ ID NO：２４０）および SYNNOXA２．REQ（SEQ ID NO：２４１）をアニーリングさせ、ｐＭＯＮ１３２３９からの２８１塩基対のＤＮＡフラグメントおよびｐＭＯＮ１３１８９からのＤＮＡベクターフラグメントにライゲートした。ライゲーション混合物の部分を、ついで大腸菌株Ｋ−１２株ＪＭ１０１にトランスフォームした。トランスフォーマントの細菌をアンピシリン含有プレート上で選択した。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析によって解析で、ＥcoＲＶフラグメントの存在が認められ、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミド，ｐＭＯＮ３１１１３は、以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１５）を含有する。実施例８５ｐＭＯＮ３１１４の構築ｈＩＬ−３受容体およびＧ−ＣＳＦ受容体を活性化する多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドｐＭＯＮ３１１１４の構築．プラスミドｐＭＯＮ１３１８９ＤＮＡを制限酵素ＮcoＩおよびＸmaＩで消化し、得られたＮcoＩ，ＸmaＩＤＮＡベクターフラグメントは０．８％ゲル上で単離し精製した。第２のプラスミドｐＭＯＮ１３２３９（ＷＯ９４／１２６３９，ＵＳ０８／４１１，７９６）からのＤＮＡはＮcoＩおよびＥcoＲＩで消化し、２８１塩基対のＮcoＩ，ＥcｏＲＩフラグメントを得た。このフラグメントは１％アガロースゲルから単離し精製した。２つのオリゴヌクレオチド SYNNOXA１．REQ（S EQ ID NO：２４０）および SYNNOXA２．REQ（SEQ ID NO：２４１）をアニーリングさせ、ｐＭＯＮ１３２３９からの２８１塩基対のＤＮＡフラグメントおよびｐＭＯＮ１３１８９からのＤＮＡベクターフラグメントにライゲートした。ライゲーション混合物の部分を、ついで大腸菌株Ｋ−１２株ＪＭ１０１にトランスフォームした。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析による解析で、ＥcoＲＶフラグメントの存在が認められ、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミド，ｐＭＯＮ３１１１４は、以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１６）を含有する。実施例８６ｐＭＯＮ３１１５の構築ｈＩＬ−３受容体およびＧ−ＣＳＦ受容体を活性化する多機能造血受容体アゴニストをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドｐＭＯＮ３１１１５の構築．プラスミドｐＭＯＮ１３１９７ＤＮＡを制限酵素ＮcoＩおよびＸmaＩで消化し、得られたＮcoＩ，ＸmaＩＤＮＡベクターフラグメントは０．８％ゲル上で単離し精製した。第２のプラスミドｐＭＯＮ１３２２２からのＤＮＡはＮcoＩおよびＥcoＲＩで消化し、２８１塩基対のＮcoＩ，ＥcoＲＩフラグメントを得た。このフラグメントは１％アガロースゲルから単離し精製した。２つのオリゴヌクレオチド SYNNOXA１．REQ（SEQ ID NO：２４０）および SYNNOXA２．REQ（SEQ ID NO ：２４１）をアニーリングさせ、ｐＭＯＮ１３２２２からの２８１塩基対のＤＮＡフラグメントおよびｐＭＯＮ１３１９７からのＤＮＡベクターフラグメントにライゲートした。ライゲーション混合物の部分をついで大腸菌株Ｋ−１２株ＪＭ１０１にトランスフォームした。プラスミドＤＮＡを単離し、制限分析による解析で、ＥcoＲＶフラグメントの存在が認められ、配列を決定して正しい挿入を確認した。プラスミド，ｐＭＯＮ３１１１５は、以下のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ配列（SEQ ID NO：１１７）を含有する。実施例８７多機能造血受容体アゴニストタンパク質のインビトロ活性の測定多機能造血受容体アゴニストタンパク質のタンパク質濃度は親和性精製ポリクローナル抗体に基づくサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて測定できる。別法としてタンパク質濃度はアミノ酸組成分析によっても決定できる。多機能造血受容体アゴニストの生物活性は多数のインビトロアッセイで測定できる。たとえば、ｈＩＬ−３受容体およびＧ−ＣＳＦ受容体に結合する多機能造血受容体アゴニストは、ｈＩＬ−３受容体および／またはＧ−ＣＳＦ受容体を発現する細胞系を用いる細胞増殖アッセイによってアッセイできる。このようなアッセイの一つには、ＡＭＬ−１９３細胞増殖アッセイがある。ＡＭＬ−１９３細胞はＩＬ−３およびＧ −ＣＳＦに応答しＩＬ−３／Ｇ−ＣＳＦ多機能造血受容体アゴニスの組合せ活性の測定を可能にする。他のこのようなアッセイにはＴＦ１細胞増殖アッセイがある。さらに、他の因子依存性細胞系、たとえばＭ−ＮＦＳ−６０(ATCC，CRL １８３８)またはマウスＩＬ−３依存性細胞系である３２Ｄも使用できる。ＩＬ−３の活性は種特異的であるが、Ｇ−ＣＳＦには種特異性ななく、したがってＩＬ− ３／Ｇ−ＣＳＦ多機能造血受容体アゴニスのＧ−ＣＳＦ成分の生物活性は独立に測定することができる。与えられたリガンドトに対する受容体を発現しないＢＨＫまたはマウスＢaf／３のような細胞系は所望の受容体をコードする遺伝子を含有するプラスミドでトランスフェクトすることができる。このような細胞系の例にはｈＧ−ＣＳＦ受容体でトランスフェクトしたＢaf／３（Ｂaf３／ｈＧ−ＣＳＦ）がある。これらの細胞系における多機能造血受容体アゴニストの活性はＩＬ −３もしくはＧ−ＣＳＦ単独または両者と比較することができる。本発明の多機能造血受容体アゴニストの例の生物活性はＢaf３／ｈＧ−ＣＳＦ増殖およびＴＦ１細胞増殖アッセイで測定し、表５および表６に示す。多機能造血受容体アゴニストの生物活性は、標準タンパク質ｐＭＯＮ１３０５６（ＷＯ９５／２１２５４）と比較した相対活性として表す。Ｂaf３／ｃ−ｍｐｌ細胞増殖およびＴＦ１細胞増殖アッセイで測定した本発明の多機能造血受容体アゴニストの例の生物活性を表７および表８に示す。ｎｄ＝測定していない。 * 多機能造血受容体アゴニストの生物活性は標準タンパク質ｐＭＯＮ１３０５６と比較した相対活性として表す。ｎ＝３またはそれ以上である。ｎｄ＝測定していない。 * 多機能造血受容体アゴニストの生物活性は標準タンパク質ｐＭＯＮ１３０５６と比較した相対活性として表す（ｎ＝１または２）。＋はその分子がｐＭＯＮ１３０５６に匹敵することを示す。ｎｄ＝測定していない。 * ｃ−ｍｐｌ受容体でトランスフェクトしたＢaf３細胞系において測定し、ｃ−ｍｐｌリガンド（１−１５３）と比較した活性。 **ｐＭＯＮ１３０５６比較した活性。同様に、本技術分野の熟練者に周知の他の因子依存性細胞系を、所望の多機能造血受容体アゴニストの生物活性の測定に使用することができる。メチルセルロースアッセイは、インビトロにおいて造血前駆細胞の拡張および造血コロニーの異なるタイプのパターンに対する多機能造血受容体アゴニストの作用の測定に使用できる。メチルセルロースアッセイは、インプット細胞１００，０００あたりの前駆細胞の頻度を測定することから、前駆細胞の頻度の評価を提供する。長期の間質依存性培養は未成熟造血前駆細胞および幹細胞の記述に使用されてきた。このアッセイはる多機能造血受容体アゴニストが極めて未成熟な前駆細胞および／または幹細胞の拡張を刺激するかどうかの決定に使用できる。さらに、限界希釈培養は多機能造血受容体アゴニストによって刺激される未成熟な前駆細胞の頻度を示すために実施できる。実施例８８単一または多重アミノ酸置換を含有するＧ−ＣＳＦはＷＯ９４／１２６３９およびＷＯ９４／１２６３８に記載されているＰＣＲ突然変異誘発法によって作成された。これらのおよび他の変異体（すなわち、アミノ酸置換、挿入または欠失、およびＮ末端またはＣ末端伸長）も、本技術分野の熟練者によれば他の様々な方法を用いて、たとえば合成遺伝子アッセンブリーまたは特定部位の突然変異誘発を用いて作成することができる（Taylorら，Nucl．Acid．Res.１３：７８６４ −８７８５，１９８５；Kunkelら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，８２４８８ −４９２，１９８５；Sambrookら，Molecular Cloning: a Laboratory Manual，２版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY,１９８９；ＷＯ９４／１２６３９およびＷＯ９４／１２６３８参照）。これらの置換は１回に１個、または他のアミノ酸置換、および／または欠失、および／または伸長と組み合わせて行うこともできる。配列の変化を確認したのち、プラスミドＤＮＡは，製造用に適当な哺乳類細胞、昆虫細胞または細菌細胞たとえば大腸菌にトランスフェクトすることができる。活性のある既知のＧ−ＣＳＦには、位置１（Ｔhr→Ｓer，ＡrgまたはＧly），２（Ｐro→Ｌeu），３（Ｌeu→ＡrgまたはＳ er）および１７（Ｃys→Ｓer）ならびにアミノ酸１−１１の欠失がある（Kugaら，Biochemical & Biophysical Research Comm.１５９：１０３−１１１，１９８９）。これらのＧ−ＣＳＦアミノ酸置換変異体は、新Ｎ末端および新Ｃ末端が創成されるＧ−ＣＳＦ受容体アゴニストの作製のための鋳型として用いることができる。Ｇ−ＣＳＦアミノ酸置換変異体の例を表９に示す。実施例８９Ｇ−ＣＳＦアミノ酸置換変異体の生物活性の測定Ｇ−ＣＳＦアミノ酸置換変異体は、ヒトＧ−ＣＳＦ受容体でトランスフェクトしたＢaf３細胞系を用いる細胞増殖活性についてアッセイできる。Ｇ−ＣＳＦアミノ酸置換変異体の例の生物活性をネイティブなヒトＧ−ＣＳＦと比較して示す。＋はネイティブに匹敵する活性を、−は活性の有意な低下または活性は検出されないことを示す。 * ネイテフィブなｈＧ−ＣＳＦと比較した活性ｎ＝測定せずさらに詳細に説明しないでも、以上の記述から、本技術分野の熟練者には本発明をその完全な範囲で利用できるものと確信する。したがって、以上の好ましい実施態様は単なる例示と解すべきであり、いかなる意味においても本発明の開示を限定するものではない。分子生物学技術、タンパク質の精製およびバイオアッセイに関するさらに詳細はＷＯ９４／１２６３９，ＷＯ９４／１２６３８，ＷＯ９５／２０９７６，ＷＯ９５／２１１９７，ＷＯ９５／２０９７７，ＷＯ９５／２１２５４に見出すことができる。引用により、これらの全体が本明細書に導入される。本明細書において引用されたすべての参考文献、特許または特許出願は、それが本明細書に記載されているのと同様に、本明細書に導入される。本開示を読んだのちには、本技術分野の熟練者には、本発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な他の例が自明であろう。このような他の例はすべて添付の請求の範囲に包含することを意図するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 14/52 Ｃ０７Ｋ 19/00 19/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者バウム，チャールズ，エム. アメリカ合衆国63131 ミズーリ州セントルイス，メイソンクノールロード 1712 (72)発明者サマーズ，ニーナ，エル. アメリカ合衆国63304−2423 ミズーリ州セントチャールズ，サドルブルック 1203 (72)発明者キャパロン，メア，エイチ. アメリカ合衆国63017 ミズーリ州チェスターフィールド，ビーチウッドコート 109 (72)発明者バウアー，エス．，シー. アメリカ合衆国63068 ミズーリ州ニューヘイブン，オーチャドロード 4656 (72)発明者ザーフルー，リンダアメリカ合衆国63122 ミズーリ州カークウッド，イー．メイプル 126 (72)発明者マッキャン，ジョン，ピー. アメリカ合衆国63038 ミズーリ州セントルイス，バブラーメドウズドライブ 18612 (72)発明者クライン，バーバラ，キュアアメリカ合衆国63131 ミズーリ州タウンアンドカントリー，トッピングイーステイツ 12917 (72)発明者リー，スチーブン，シー. アメリカ合衆国63141 ミズーリ州セントルイス，ファーンビュードライブ 828 (72)発明者マックファーター，チャールズ，エイ. アメリカ合衆国63011 ミズーリ州ワイルドウッド，サンダーヘッドキャニヨンコート 16564 (72)発明者ジリ，ジュディス，ジー. アメリカ合衆国63017 ミズーリ州チェスターフィールド，グラントリードライブ 15446

Claims

【特許請求の範囲】１．式：Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１およびＲ２は独立に以下のポリペプチド、（Ｉ）式：（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチド；（II）式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaは、Ｐro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された０〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；（III）式：（式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ヒトｃ−ｍｐ１リガンドアミノ酸配列からなるポリペプチド；および（IV）式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaはＰro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Phe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された１〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；および（Ｖ）コロニー刺激因子からなる群より選択され、Ｌ１は、Ｒ１とＲ２を連結できるリンカーであり、ただし、少なくともＲ１またはＲ２は式（Ｉ），（II）または（III）のポリペプチドから選択され、また、上記造血タンパク質は所望により、直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］で表されるアミノ酸配列からなる造血タンパク質。２．式：Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１およびＲ２は独立に以下のポリペプチド、（Ｉ）式：（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチド；（II）式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaは、Ｐro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された０〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；（III）式：（式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸配列からなるポリペプチド；および（IV）式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaはＰro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された１〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる］の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチド；および（Ｖ）コロニー刺激因子からなる群より選択され、Ｌ１は、Ｒ１とＲ２を連結できるリンカーであり、ただし、少なくともＲ１またはＲ２は式（Ｉ），（II）または（III）のポリペプチドから選択され、また、上記造血タンパク質は所望により、直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］で表されるアミノ酸配列からなる造血タンパク質。３．（IV）のポリペプチドは以下の群：から選択される「請求項１」記載の造血タンパク質。４．（IV）のポリペプチドは以下の群：から選択される「請求項２」記載の造血タンパク質。５．式：Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１は式（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｒ２は式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaは、Ｐro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭＭetであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された０〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｌ１は、Ｒ１とＲ２を連結できるリンカーである］のアミノ酸配列からなる造血タンパク質、およびその直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行してる造血タンパク質。６．式：Ｒ１−Ｌ１−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ１−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１は式（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｒ２は式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaは、Ｐro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaはＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaはＳer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，ＰroまたはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaはＬys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇln またはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaはＬeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された０〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる）の修飾ヒトＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｌ₁は、Ｒ２にＲ１を連結できるリンカーであり、上記造血タンパク質には直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］のアミノ酸配列からなる造血タンパク質。７．式：Ｒ１−Ｌ₁−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ₁−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１は式（式中、位置１におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａrg，ＴyrまたはＧlyであり、位置２におけるＸaaは、ＰroまたはＬeuであり、位置３におけるＸaaは、Ｌeu，Ａrg，ＴyrまたはＳerであり、位置１３におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｈis，ＴhrまたはＰroであり、位置１６におけるＸaaは、Ｌys，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置１７におけるＸaaは、Ｃys，Ｓer，Ｇly，Ａla，Ｉle，ＴyrまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，ＩleまたはＣysであり、位置２２におけるＸaaは、Ａrg，Ｔyr，Ｓer，ＴhrまたはＡlaであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、位置２７におけるＸaaは、ＡspまたはＧlyであり、位置３０におけるＸaaは、Ａla，Ｉle，ＬeuまたはＧlyであり、位置３４におけるＸaaは、ＬysまたはＳerであり、位置３６におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４２におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置４３におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ｖal，Ｌys，Ｔrp，Ａla，Ａrg ，ＣysまたはＬeuであり、位置４４におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ａla，Ｈis，Ｔrp ，ＧlnまたはＴhrであり、位置４６におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，Ｐhe，Ａrg，ＩleまたはＡlaであり、位置４７におけるＸaaは、ＬeuまたはＴhrであり、位置４９におけるＸaaは、Ｌeu，Ｐhe，ＡrgまたはＳerであり、位置５０におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ｈis，ＰroまたはＴyrであり、位置５４におけるＸaaは、ＬeuまたはＨisであり、位置６４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｇln，Ｌys，ＬeuまたはＣysであり、位置７０におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｌeu，ＡrgまたはＳerであり、位置７４におけるＸaaは、ＣysまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaは、Ａsp，ＧlyまたはＶalであり、位置１０８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｖal，Ａrg，Ｔrp，ＧlnまたはＧly であり、位置１１５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，ＬeuまたはＡlaであり、位置１２０におけるＸaaは、Ｇln，Ｇly，Ａrg，ＬysまたはＨisであり、位置１２３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａrg，ＰheまたはＴhrであり、位置１４４におけるＸaaは、Ｐhe，Ｈis，Ａrg，Ｐro，Ｌeu，ＧlnまたはＧlu であり、位置１４６におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１４７におけるＸaaは、ＡrgまたはＧlnであり、位置１５６におけるＸaaは、Ｈis，ＧlyまたはＳerであり、位置１５９におけるＸaaは、Ｓer，Ａrg，Ｔhr，Ｔyr，ＶalまたはＧlyであり、位置１６２におけるＸaaは、Ｇln，Ｌeu，ＧlyまたはＴrpであり、位置１６３におけるＸaaは、Ｖal，Ｇly，ＡrgまたはＡlaであり、位置１６９におけるＸaaは、Ａrg，Ｓer，Ｌeu，ＡrgまたはＣysであり、位置１７０におけるＸaaは、Ｈis，ＡrgまたはＳerであり、Ｎ末端からの１〜１１のアミノ酸およびＣ末端からの１〜５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトＧ−ＣＳＦアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｒ２は式：（式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ヒトｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｌ₁はＲ２にＲ１を連結できるリンカーであり、上記造血タンパク質には直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］のアミノ酸配列からなる造血タンパク質。８．式：Ｒ１−Ｌ₁−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ₁−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１は式：（式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する）の修飾ヒトｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｒ２は式：（式中、位置１７におけるＸaaは、Ｓer，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｍet，ＧlnまたはＡrgであり、位置１８におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ｌeu，Ｉle，Ｐhe，ＡrgまたはＧlnであり、位置１９におけるＸaaは、Ｍet，Ｐhe，Ｉle，Ａrg，Ｇly，ＡlaまたはＣysであり、位置２０におけるＸaaは、Ｉle，Ｃys，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２１におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｌys，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｇln ，Ａsn，Ｔhr，ＳerまたはＶalであり、位置２２におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔrp，Ｐro，Ｓer，Ａla，Ｈis，Ａsp，Ａsn ，Ｇln，Ｌeu，ＶalまたはＧlyであり、位置２３におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ａla，Ｇly，Ｔrp，Ｌys，Ｐhe，Ｌeu ，ＳerまたはＡrgであり、位置２４におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ａrg，Ｓer，ＰheまたはＬeuであり、位置２５におけるＸaaは、Ｔhr，Ｈis，Ｇly，Ｇln，Ａrg，ＰroまたはＡlaであり、位置２６におけるＸaaは、Ｈis，Ｔhr，Ｐhe，Ｇly，Ａrg，ＡlaまたはＴrpであり、位置２７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇly，Ａrg，Ｔhr，ＳerまたはＡlaであり、位置２８におけるＸaaはＬys，Ａrg，Ｌeu，Ｇln，Ｇly，Ｐro，ＶalまたはＴ rpであり、位置２９におけるＸaaは、Ｇln，Ａsn，Ｌeu，Ｐro，ＡrgまたはＶalであり、位置３０におけるＸaaは、Ｐro，Ｈis，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，Ｇln，Ｓer，Ｌeu またはＬysであり、位置３１におけるＸaaは、Ｐro，Ａsp，Ｇly，Ａla，Ａrg，ＬeuまたはＧlnであり、位置３２におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ａrg，Ｇln，Ａsn，Ｇly，ＡlaまたはＧ luであり、位置３３におけるＸaaはＰro，Ｌeu，Ｇln，Ａla，ＴhrまたはＧluであり、位置３４におけるＸaaは、Ｌeu，Ｖal，Ｇly，Ｓer，Ｌys，Ｇlu，Ｇln，Ｔhr ，Ａrg，Ａla，Ｐhe，ＩleまたはＭetであり、位置３５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｇly，Ａsn，Ｐro，ＧlnまたはＶalであり、位置３６におけるＸaaは、Ａsp，ＬeuまたはＶalであり、位置３７におけるＸaaは、Ｐhe，Ｓer，Ｐro，ＴrpまたはＩleであり、位置３８におけるＸaaは、ＡsnまたはＡlaであり、位置４０におけるＸaaは、Ｌeu，ＴrpまたはＡrgであり、位置４１におけるＸaaは、Ａsn，Ｃys，Ａrg，Ｌeu，Ｈis，ＭetまたはＰroであり、位置４２におけるＸaaは、Ｇly，Ａsp，Ｓer，Ｃys，Ａsn，Ｌys，Ｔhr，Ｌeu ，Ｖal，Ｇlu，Ｐhe，Ｔyr，Ｉle，ＭetまたはＡlaであり、位置４３におけるＸaaは、Ｇlu，Ａsn，Ｔyr，Ｌeu，Ｐhe，Ａsp，Ａla，Ｃys ，Ｇln，Ａrg，Ｔhr，ＧlyまたはＳerであり、位置４４におけるＸaaは、Ａsp，Ｓer，Ｌeu，Ａrg，Ｌys，Ｔhr，Ｍet，Ｔrp ，Ｇlu，Ａsn，Ｇln，ＡlaまたはＰroであり、位置４５におけるＸaaは、Ｇln，Ｐro，Ｐhe，Ｖal，Ｍet，Ｌeu，Ｔhr，Ｌys ，Ｔrp，Ａsp，Ａsn，Ａrg，Ｓer，Ａla，Ｉle，ＧluまたはＨisであり、位置４６におけるＸaaは、Ａsp，Ｐhe，Ｓer，Ｔhr，Ｃys，Ｇlu，Ａsn，Ｇln ，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｉle，ＶalまたはＧlyであり、位置４７におけるＸaaは、Ｉle，Ｇly，Ｖal，Ｓer，Ａrg，ＰroまたはＨisであり、位置４８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｃys，Ａrg，Ｉle，Ｈis，Ｐhe，Ｇlu ，Ｌys，Ｔhr，Ａla，Ｍet，ＶalまたはＡsnであり、位置４９におけるＸaaはＭet，Ａrg，Ａla，Ｇly，Ｐro，Ａsn，ＨisまたはＡ spであり、位置５０におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌeu，Ｔhr，Ａsp，Ｔyr，Ｌys，Ａsn，Ｓer ，Ａla，Ｉle，Ｖal，Ｈis，Ｐhe，ＭetまたはＧlnであり、位置５１におけるＸaaは、Ａsn，Ａrg，Ｍet，Ｐro，Ｓer，ＴhrまたはＨisであり、位置５２におけるＸaaは、Ａsn，Ｈis，Ａrg，Ｌeu，Ｇly，ＳerまたはＴhrであり、位置５３におけるＸaaは、Ｌeu，Ｔhr，Ａla，Ｇly，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，Ｓer またはＭetであり、位置５４におけるＸaaは、Ａrg，Ａsp，Ｉle，Ｓer，Ｖal，Ｔhr，Ｇln，Ａsn ，Ｌys，Ｈis，ＡlaまたはＬeuであり、位置５５におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｖal，Ｓer，ＬeuまたはＧlyであり、位置５６におけるＸaaは、Ｐro，Ｇly，Ｃys，Ｓer，Ｇln，Ｇlu，Ａrg，Ｈis ，Ｔhr，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｌeu，ＶalまたはＬysであり、位置５７におけるＸaaは、ＡsnまたはＧlyであり、位置５８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ａsp，Ａrg，Ｇln，ＶalまたはＣysであり、位置５９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｔyr，Ｈis，Ｌeu，ＰroまたはＡrgであり、位置６０におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｐro，Ｔyr，ＡsnまたはＴhrであり、位置６１におけるＸaaは、Ｐhe，Ａsn，Ｇlu，Ｐro，Ｌys，ＡrgまたはＳerであり、位置６２におけるＸaaはＡsn，Ｈis，Ｖal，Ａrg，Ｐro，Ｔhr，ＡspまたはＩ leであり、位置６３におけるＸaaはＡrg，Ｔyr，Ｔrp，Ｌys，Ｓer，Ｈis，ＰroまたはＶ alであり、位置６４におけるＸaaは、Ａla，Ａsn，Ｐro，ＳerまたはＬysであり、位置６５におけるＸaaは、Ｖal，Ｔhr，Ｐro，Ｈis，Ｌeu，ＰheまたはＳerであり、位置６６におけるＸaaは、Ｌys，Ｉle，Ａrg，Ｖal，Ａsn，ＧluまたはＳerであり、位置６７におけるＸaaは、Ｓer，Ａla，Ｐhe，Ｖal，Ｇly，Ａsn，Ｉle，Ｐro またはＨisであり、位置６８におけるＸaaはＬeu，Ｖal，Ｔrp，Ｓer，Ｉle，Ｐhe，ＴhrまたはＨ isであり、位置６９におけるＸaaは、Ｇln，Ａla，Ｐro，Ｔhr，Ｇlu，Ａrg，Ｔrp，Ｇly またはＬeuであり、位置７０におけるＸaaは、Ａsn，Ｌeu，Ｖal，Ｔrp，ＰroまたはＡlaであり、位置７１におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｌeu，Ｐro，Ａrg，Ｇlu，Ｔhr，Ｇln ，ＴrpまたはＡsnであり、位置７２におけるＸaaはＳer，Ｇlu，Ｍet，Ａla，Ｈis，Ａsn，ＡrgまたはＡ spであり、位置７３におけるＸaaはＡla，Ｇlu，Ａsp，Ｌeu，Ｓer，Ｇly，ＴhrまたはＡ rgであり、位置７４におけるＸaaは、Ｉle，Ｍet，Ｔhr，Ｐro，Ａrg，ＧlyまたはＡlaであり、位置７５におけるＸaaは、Ｇlu，Ｌys，Ｇly，Ａsp，Ｐro，Ｔrp，Ａrg，Ｓer ，ＧlnまたはＬeuであり、位置７６におけるＸaaは、Ｓer，Ｖal，Ａla，Ａsn，Ｔrp，Ｇlu，Ｐro，Ｇly またはＡspであり、位置７７におけるＸaaは、Ｉle，Ｓer，Ａrg，ＴhrまたはＬeuであり、位置７８におけるＸaaは、Ｌeu，Ａla，Ｓer，Ｇlu，Ｐhe，ＧlyまたはＡrgであり、位置７９におけるＸaaはＬys，Ｔhr，Ａsn，Ｍet，Ａrg，Ｉle，ＧlyまたはＡ spであり、位置８０におけるＸaaはＡsn，Ｔrp，Ｖal，Ｇly，Ｔhr，Ｌeu，ＧluまたはＡ rgであり、位置８１におけるＸaaはＬeu，Ｇln，Ｇly，Ａla，Ｔrp，Ａrg，ＶalまたはＬ ysであり、位置８２におけるＸaaは、Ｌeu，Ｇln，Ｌys，Ｔrp，Ａrg，Ａsp，Ｇlu，Ａsn ，Ｈis，Ｔhr，Ｓer，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，Ｉle，ＭetまたはＶalであり、位置８３におけるＸaaは、Ｐro，Ａla，Ｔhr，Ｔrp，ＡrgまたはＭetであり、位置８４におけるＸaaは、Ｃys，Ｇlu，Ｇly，Ａrg，ＭetまたはＶalであり、位置８５におけるＸaaは、Ｌeu，Ａsn，ＶalまたはＧlnであり、位置８６におけるＸaaは、Ｐro，Ｃys，Ａrg，ＡlaまたはＬysであり、位置８７におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，ＴrpまたはＧlyであり、位置８８におけるＸaaは、Ａla，Ｌys，Ａrg，ＶalまたはＴrpであり、位置８９におけるＸaaは、Ｔhr，Ａsp，Ｃys，Ｌeu，Ｖal，Ｇlu，Ｈis，Ａsn またはＳerであり、位置９０におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｇly，Ａsp，ＩleまたはＭ etであり、位置９１におけるＸaaはＡla，Ｐro，Ｓer，Ｔhr，Ｐhe，Ｌeu，ＡspまたはＨ isであり、位置９２におけるＸaaは、Ｐro，Ｐhe，Ａrg，Ｓer，Ｌys，Ｈis，Ａla，Ｇly ，ＩleまたはＬeuであり、位置９３におけるＸaaはＴhr，Ａsp，Ｓer，Ａsn，Ｐro，Ａla，ＬeuまたはＡ rgであり、位置９４におけるＸaaは、Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇlu，Ｌeu，Ｖal，Ｇln，Ｌys ，Ｈis，ＡlaまたはＰroであり、位置９５におけるＸaaは、Ｈis，Ｇln，Ｐro，Ａrg，Ｖal，Ｌeu，Ｇly，Ｔhr ，Ａsn，Ｌys，Ｓer，Ａla，Ｔrp，Ｐhe，ＩleまたはＴyrであり、位置９６におけるＸaaは、Ｐro，Ｌys，Ｔyr，Ｇly，ＩleまたはＴhrであり、位置９７におけるＸaaは、Ｉle，Ｖal，Ｌys，ＡlaまたはＡsnであり、位置９８におけるＸaaは、Ｈis，Ｉle，Ａsn，Ｌeu，Ａsp，Ａla，Ｔhr，Ｇlu ，Ｇln，Ｓer，Ｐhe，Ｍet，Ｖal，Ｌys，Ａrg，ＴyrまたはＰroであり、位置９９におけるＸaaは、Ｉle，Ｌeu，Ａrg，Ａsp，Ｖal，Ｐro，Ｇln，Ｇly ，Ｓer，ＰheまたはＨisであり、位置１００におけるＸaaは、Ｌys，Ｔyr，Ｌeu，Ｈis，Ａrg，Ｉle，Ｓer，Ｇ lnまたはＰroであり、位置１０１におけるＸaaはＡsp，Ｐro，Ｍet，Ｌys，Ｈis，Ｔhr，Ｖal，Ｔyr ，Ｇlu，Ａsn，Ｓer，Ａla，Ｇly，Ｉhe，ＬeuまたはＧlnであり、位置１０２におけるＸaaは、Ｇly，Ｌeu，Ｇlu，Ｌys，Ｓer，ＴyrまたはＰro であり、位置１０３におけるＸaaは、ＡspまたはＳerであり、位置１０４におけるＸaaはＴrp，Ｖal，Ｃys，Ｔyr，Ｔhr，Ｍet，Ｐro，Ｌeu ，Ｇln，Ｌys，Ａla，ＰheまたはＧlyであり、位置１０５におけるＸaaはＡsn，Ｐro，Ａla，Ｐhe，Ｓer，Ｔrp，Ｇln，Ｔyr ，Ｌeu，Ｌys，Ｉle，ＡspまたはＨisであり、位置１０６におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ａla，Ｌys，Ｔhr，Ｉle，ＧlyまたはＰroであり、位置１０８におけるＸaaはＡrg，Ｌys，Ａsp，Ｌeu，Ｔhr，Ｉle，Ｇln，Ｈis ，Ｓer，ＡlaまたはＰroであり、位置１０９におけるＸaaは、Ａrg，Ｔhr，Ｐro，Ｇlu，Ｔyr，Ｌeu，ＳerまたはＧlyであり、位置１１０におけるＸaaはＬys，Ａla，Ａsn，Ｔhr，Ｌeu，Ａrg，Ｇln，Ｈis ，Ｇlu，ＳerまたはＴrpであり、位置１１１におけるＸaaは、Ｌeu，Ｉle，Ａrg，ＡspまたはＭetであり、位置１１２におけるＸaaは、Ｔhr，Ｖal，Ｇln，Ｔyr，Ｇlu，Ｈis，ＳerまたはＰheであり、位置１１３におけるＸaaはＰhe，Ｓer，Ｃys，Ｈis，Ｇly，Ｔrp，Ｔyr，Ａsp ，Ｌys，Ｌeu，Ｉle，ＶalまたはＡsnであり、位置１１４におけるＸaaは、Ｔyr，Ｃys，Ｈis，Ｓer，Ｔrp，ＡrgまたはＬeu であり、位置１１５におけるＸaaはＬeu，Ａsn，Ｖal，Ｐro，Ａrg，Ａla，Ｈis，Ｔhr ，ＴrpまたはＭetであり、位置１１６におけるＸaaはＬys，Ｌeu，Ｐro，Ｔhr，Ｍet，Ａsp，Ｖal，Ｇlu ，Ａrg，Ｔrp，Ｓer，Ａsn，Ｈis，Ａla，Ｔyr，Ｐhe，ＧlnまたはＩleであり、位置１１７におけるＸaaは、Ｔhr，Ｓer，Ａsn，Ｉle，Ｔrp，ＬysまたはＰro であり、位置１１８におけるＸaaは、Ｌeu，Ｓer，Ｐro，Ａla，Ｇlu，Ｃys，ＡspまたはＴyrであり、位置１１９におけるＸaaは、Ｇlu，Ｓer，Ｌys，Ｐro，Ｌeu，Ｔhr，ＴyrまたはＡrgであり、位置１２０におけるＸaaは、Ａsn，Ａla，Ｐro，Ｌeu，Ｈis，ＶalまたはＧln であり、位置１２１におけるＸaaは、Ａla，Ｓer，Ｉle，Ａsn，Ｐro，Ｌys，ＡspまたはＧlyであり、位置１２２におけるＸaaはＧln，Ｓer，Ｍet，Ｔrp，Ａrg，Ｐhe，Ｐro，Ｈis ，Ｉle，ＴyrまたはＣysであり、位置１２３におけるＸaaは、Ａla，Ｍet，Ｇlu，Ｈis，Ｓer，Ｐro，ＴyrまたはＬeuであり、Ｎ末端からの１〜１４のアミノ酸および／またはＣ末端からの１〜１５のアミノ酸は所望により欠失していてもよく、Ｘaaで表示された１〜４４のアミノ酸はネイティブな（１〜１３３）ヒトインターロイキン−３の相当するアミノ酸とは異なる）の修飾ｈＩＬ−３アミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｌ₁は、Ｒ２にＲ１を連結できるリンカーであり、上記造血タンパク質には直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］のアミノ酸配列からなる造血タンパク質。９．Ｒ２は以下の群：から選択される「請求項６または８」記載の造血タンパク質。 10．式：Ｒ１−Ｌ₁−Ｒ２，Ｒ２−Ｌ₁−Ｒ１，Ｒ１−Ｒ２またはＲ２−Ｒ１［式中、Ｒ１は式（式中、位置１１２におけるＸaaは、欠失しているか、またはＬeu，Ａla，Ｖal，Ｉle ，Ｐro，Ｐhe，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１３におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpまたはＭetであり、位置１１４におけるＸaaは、欠失しているか、またはＰro，Ｐhe，Ａla，Ｖal ，Ｌeu，Ｉle，ＴrpもしくはＭetであり、位置１１５におけるＸaaは、欠失しているか、またはＧln，Ｇly，Ｓer，Ｔhr ，ＴyrもしくはＡsnであり、Ｎ末端は、直接またはＮ末端をＣ末端に接続できるリンカー（Ｌ₂）を介してＣ末端に接続され、新しいＣおよびＮ末端をアミノ酸：に有する］の修飾ヒトｃ−ｍｐｌリガンドアミノ酸配列からなるポリペプチドであり、Ｒ２はＧ−ＣＳＦまたはＧ−ＣＳＦＳer¹⁷であり、Ｌ₁は、Ｒ１をＲ２に連結できるリンカーであり、上記造血タンパク質には直前に（メチオニン^-1）、（アラニン^-1）または（メチオニン^-2，アラニン^-1）が先行していてもよい］のアミノ酸配列からなる造血タンパク質。 11．該リンカー（Ｌ₂）が以下のアミノ酸配列からなる群より選ばれる請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８または１０の造血蛋白質： 12．該リンカー（Ｌ₂）が以下のアミノ酸配列からなる群より選ばれる請求の範囲９の造血蛋白質： 13．以下のアミノ酸配列からなる群より選ばれる請求の範囲１の造血蛋白質： 14．ＧＭ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷，ｃ−ｍｐｌリガンド（ＴＰＯ），Ｍ−ＣＳＦ，エリスロポイエチン（ＥＰＯ），ＩＬ−１，ＩＬ−４，ＩＬ−２，ＩＬ−３，ＩＬ−５，ＩＬ−６，ＩＬ−７，ＩＬ−８，ＩＬ−９，ＩＬ−１０，ＩＬ−１１，ＩＬ−１２，ＩＬ−１３，ＩＬ−１５，ＬＩＦ，ｆ１ｔ３／ｆ１ｋ２リガンド、ヒト成長ホルモン、Ｂ−セル成長因子、Ｂ−セル分化因子、好酸球分化因子及び幹細胞因子（ＳＦＦ）からなる群より選ばれるコロニー促進因子である請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，１０また１１の造血蛋白質。 15．Ｇ−ＣＳＦ，Ｇ−ＣＳＦＳer¹⁷及びｃ−ｍｐｌリガンド（ＴＰＯ）からなる群より選ばれるコロニー促進因子である請求の範囲１４の造血蛋白質。 16．請求の範囲１の造血蛋白質をコードする核酸分子。 17．請求の範囲２の造血蛋白質をコードする核酸分子。 18．請求の範囲３の造血蛋白質をコードする核酸分子。 19．請求の範囲４の造血蛋白質をコードする核酸分子。 20．請求の範囲５の造血蛋白質をコードする核酸分子。 21．請求の範囲６の造血蛋白質をコードする核酸分子。 22．請求の範囲７の造血蛋白質をコードする核酸分子。 23．請求の範囲８の造血蛋白質をコードする核酸分子。 24．請求の範囲９の造血蛋白質をコードする核酸分子。 25．請求の範囲１０の造血蛋白質をコードする核酸分子。 26．請求の範囲１１の造血蛋白質をコードする核酸分子。 27．請求の範囲１２の造血蛋白質をコードする核酸分子。 28．請求の範囲１３の造血蛋白質をコードする核酸分子。 29．請求の範囲１４の造血蛋白質をコードする核酸分子。 30．請求の範囲１５の造血蛋白質をコードする核酸分子。 31．以下の塩基配列からなる群より選ばれる請求の範囲２７の核酸分子： 32．造血蛋白質の製造法であって、請求の範囲１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，３０または３１の核酸分子を含む複製可能なベクターで形質転換または形質導入された宿主細胞を、該造血蛋白質の発現が可能な方法で、適当な栄養条件下で、成育させ、次いで、該造血蛋白質を回収する、ことを含む上記製造法。 33．請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３または１４の造血蛋白質と、薬学的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。 34．患者の造血細胞の産生を促進する方法であって、請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，１０，１１，１２，１３または１４の造血蛋白質の有効量を患者に投与する、ことを含む上記方法。 35．患者の造血細胞の産生を促進する方法であって、請求の範囲９の造血蛋白質の有効量を患者に投与する、ことを含む上記方法。 36．幹細胞の選択的 ex vivo増殖方法であって、（ａ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｂ）請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，１０，１１，１２，１３または１４の造血細胞を含む選択培養培地で、分離された幹細胞を培養し；次いで（ｃ）培養細胞を採集する；ことを含む上記方法。 37．幹細胞の選択的 ex vivo増殖方法であって、（ａ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｂ）請求の範囲９の造血細胞を含む選択培養培地で分離された幹細胞を培養し；次いで（ｃ）培養細胞を採集する；ことを含む上記方法。 38．造血疾患患者の治療法であって、（ａ）幹細胞を取り；（ｂ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｃ）請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，１０，１１，１２，１３または１４の造血蛋白質を含む選択培養培地で分離された幹細胞を培養し；（ｄ）培養細胞を採取し；次いで（ｅ）該培養細胞を患者に移植する；ことを含む上記方法。 39．造血疾患患者の治療方法であって、（ａ）幹細胞を取り；（ｂ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｃ）請求の範囲９の造血蛋白質を含む選択培養培地で分離した幹細胞を培養し；（ｄ）培養細胞を採取し；次いで（ｅ）患者に該培養細胞を移植する；ことを含む上記方法。 40．ヒト遺伝子治療法であって、（ａ）患者から幹細胞を取り；（ｂ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｃ）請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３または１４の造血蛋白質を含む選択培養培地で分離した幹細胞を分離し；（ｅ）該培養細胞にＤＮＡを導入し；（ｆ）形質導入された細胞を採集し；次いで（ｇ）該細胞を患者に移植する；ことを含む上記方法。 41．ヒト遺伝子治療法であって、（ａ）患者から幹細胞を取り；（ｂ）他の細胞から幹細胞を分離し；（ｃ）請求の範囲１，２，３，４，５，６，７，８，１０，１１，１２，１３または１４の造血蛋白質を含む選択培養培地で分離した幹細胞を培養し；（ｄ）該培養細胞にＤＮＡを導入し；（ｅ）形質導入された細胞を採集し；次いで（ｆ）該形質導入細胞を患者に移植する；ことを含む上記方法。