JPH11506337A

JPH11506337A - 骨刺激因子

Info

Publication number: JPH11506337A
Application number: JP9500059A
Authority: JP
Inventors: タム，チャーク，シン
Original assignee: ジェンサイリジェネレイションサイエンスイズインコーポレイテッド
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1999-06-08
Also published as: ZA964821B; EP0832221A1; HUP9802589A3; KR19990022716A; NZ310391A; CZ389397A3; WO1996040909A1; CA2222789A1; BR9608614A; CN1190437A; IN185705B; NO975565D0; US5880094A; NO975565L; MX9709618A; PL326357A1; AU6117996A; IL118598A0; HUP9802589A2; TW469273B

Abstract

(57)【要約】骨成長を刺激するポリペプチド類：ＧｌｙＩｌｅＧｌｙＬｙｓＡｒｇＴｈｒＡｓｎＧｌｕＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｓｐＣｙｓＬｙｓＩｌｅＬｙｓＰｒｏＡｓｎＴｈｒＬｅｕＨｉｓＬｙｓＬｙｓＡｌａＡｌａＧｌｕＴｈｒＬｅｕＭｅｔＶａｌＬｅｕＡｓｐＧｌｎＡｓｎＧｌｎＰｒｏおよび部分配列、特に、ＡｒｇＴｈｒＡｓｎＧｌｕＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｓｐＣｙｓＬｙｓおよび関連ヌクレオチド配列、製法および使用、抗体およびキット。

Description

【発明の詳細な説明】骨刺激因子本発明は骨成長を刺激するポリペプチドに関するものである。骨の成長および強度に関する問題の理解はここ数年進歩し、１９９４年９月１５日に国際公開Ｎｏ.ＷＯ９４／２０６１５として公表された国際特許出願Ｎｏ. ＰＣＴ／ＣＡ９４／００１４４に概要が述べられている。骨量減少に関する疾患および随伴症状を治療する種々のアプローチが特許文献に例示されている。例えば１９８９年１０月３１日に発行された米国特許第４, ８７７,６６４号はヒトおよびウシ“骨誘導因子”を記載している。１９９２年９月１７日に公表された国際特許出願Ｎｏ．９２／１５６１５はブタ膵臓から誘導され、血清カルシウム濃度を低下するようにはたらき、血清カルシウム濃度の増加をおこす骨疾患を治療する蛋白質を記載している。１９９２年９月２３日に公表された欧州特許出願第５０４９３８号は骨疾患の治療に、システインプロテアーゼを阻害するジ−またはトリペプチドを使用することを記載している。１９９２年９月３日に公表された国際特許出願Ｎｏ．９２／１４４Ｂ１は骨成長を誘導する組成物を開示している。その組成物はアクチビンおよび骨形態形成蛋白質を含む。１９９２年８月１９日に公表された欧州特許出願第４９９２４２号は、骨芽細胞増殖をおこすため、骨量減少に関係する骨疾患に有効と思われる細胞増殖因子組成物の使用を開示している。１９９２年６月２５日公表の国際特許出願Ｎｏ．９２／１０５１５はヒトＮ−末端副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）フラグメント１−３７を含む薬を記載している。１９９１年９月１６日に公表された欧州特許出願第４５１８８７号はカルシウムまたはリン酸に関連する代謝異常（dysb olism）、例えば骨粗鬆症を治療するための副甲状腺ホルモンペプチド拮抗剤を記載している。１９９５年１０月２４日に発行されたエルサレムのヘブルー（He brew）大学、イッスム（Yissum）研究開発部の米国特許第５,４６１,０３４号は再生骨髄から確認された骨原性成長ポリペプチド類を記載している。血清中のＰＴＨの比較的短い半減期、および間歇的ＰＴＨ注射の骨量に与えるプラスの効果から、現在の研究者は、ＰＴＨが何らかの方法で循環系への二次的因子の誘導に導くかも知れないと仮定するに至った。そのためラットおよびヒト血清中におけるこのような二次的因子の存在が研究されている。ＰＴＨを産生することができないラット（副甲状腺摘出ラット）に投与したときに、観察中の骨ミネラル付着（apposition）速度の上昇をおこすポリペプチド物質をラット血清から分離できることがわかっている。ラットペプチドのアミノ酸配列に基づく核酸プローブを合成し、これを用いてヒト肝臓ｃＤＮＡ胎児ライブラリーをスクリーニングし、ヒト骨付着ポリペプチドをコードしているヒト核酸配列を分離する。こうして核酸配列から誘導されるポリペプチドを、誘導された配列ＧｌｙＩｌｅＧｌｙＬｙｓＡｒｇＴｈｒＡｓｎＧｌｕＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｓｐＣｙｓＬｙｓＩｌｅＬｙｓＰｒｏＡｓｎＴｈｒＬｅｕＨｉｓＬｙｓＬｙｓＡｌａＡｌａＧｌｕＴｈｒＬｅｕＭｅｔＶａｌＬｅｕＡｓｐＧｌｎＡｓｎＧｌｎＰｒｏ（配列番号：１）にしたがって化学的に合成した。完全無傷ラットの骨付着速度はこの化学的に合成した化合物の投与で、用量依存的に増加することが認められる。卵巣摘出ラットで普通認められる骨成長低下は、卵巣摘出の２週間後から始めて４週間にわたってこのポリペプチドを投与した後のラットにはおきないことが認められた。卵巣摘出の８週間後から始めて８週間にわたりこのポリペプチドを投与した卵巣摘出ラットでは骨カルシウム密度が維持されることが見いだされた。この活性ポリペプチドは上記の配列の二量体である可能性がある；それは顕著な二量体形成の証拠があるからである（多分、示した配列を有する２つのポリペプチド間のジスルフィッド結合による）。そこでｃｙｓ−ａｌａ置換を含むポリペプチドの改質形を合成した：ＧｌｙＩｌｅＧｌｙＬｙｓＡｒｇＴｈｒＡｓｎＧｌｕＨｉｓＴｈｒＡｌａＡｓｐＡｌａＬｙｓＩｌｅＬｙｓＰｒｏＡｓｎＴｈｒＬｅｕＨｉｓＬｙｓＬｙｓＡｌａＡｌａＧｌｕＴｈｒＬｅｕＭｅｔＶａｌＬｅｕＡｓｐＧｌｎＡｓｐＧｌｎＰｒｏ（配列番号：３）。“正常”ポリペプチド（配列番号：１）の骨刺激効果の幾らかが改質ポリペプチドで見いだされた。その他の実験において、正常ポリペプチド（配列番号：１）に対するウサギ抗体を投与したラットにおいて骨ミネラル付着速度が抑制されるのが認められた。その抑制は、正常ポリペプチドとこれに対する抗体とを両方投与したラットでは減少することが見いだされた。さらに、正常ポリペプチド（配列番号：１）の２、３のフラグメントを合成したところ、各々が骨刺激効果を有することが見いだされた。さらに、配列番号：７と決定されたポリペプチドは、８ないし１２週にわたって投与したとき、卵巣摘出ラットの骨カルシウム含量を高めることがわかった。正常ポリペプチド（配列番号：１）のその他のポリペプチドフラグメントも合成し、正常ポリペプチドに認められる骨刺激効果が不足していることがわかった。こうして本発明は、（ａ）配列番号：１のＮ−末端から１ないし約４の４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：１のＣ−末端から１ないし約２２のアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：１に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等である均等物を含める。対応して、本発明は（ａ）配列番号：３のＮ−末端から１ないし約４の４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：３のＣ−末端から１ないし約２２アミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：３に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等である均等物を含める。ポリペプチドおよび蛋白質における配列相同は、例えば分子細胞生物学（Ｈ.Ｌodo sh,Ｄ.Ｂaltimore,Ａ.Ｂerk,Ｓ.Ｌ.Ｚipursky,Ｐ.Ｍatsudaira およびＪ.Ｄanie ll、Ｓcientific Ａmerican Ｂooks,Ｎew Ｙork Ｃity,第３版、１９９５）で論じられているように、熟練せる当業者には理解できる。同様に、本発明は配列番号：４のＮ−末端から約４つまでの４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：４のＣ−末端から約１６までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：４に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等である均等物も含める。本発明は（ａ）配列番号：５のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：５のＣ−末端から約１１までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：５に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等である均等物を含める。本発明は（ａ）配列番号：６のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：６のＣ−末端から約５までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：６に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等である均等物を含める。本発明は（ａ）配列番号：７のＮ−末端から約４つまでの４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：４のＣ−末端から約１までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：７に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド；または機能的に同等の均等物を含める。本発明は、Ｎ−末端から約４の４アミノ酸が決失した配列番号：８に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチド、または機能的に同等の均等物をも含める。本発明は配列番号９に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドまたは機能的に同等のその均等物を含める。本発明のポリペプチドは合成でき、そのアミノ酸配列は約１０００から４０００までの範囲の分子量を有する。本発明は、（ａ）配列番号：１（または配列番号：３）のＮ−末端から１ないし約４の４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：１（または配列番号：３）のＣ−末端から１ないし約２２のアミノ酸が決失した、または(ａ)でもあり(ｂ)でもある、配列番号：１（または配列番号：３）に相当するアミノ酸配列を有する別のポリペプチドを、すなわち第２のポリペプチドを十分に複製できるアミノ酸配列を有するポリペプチド、または機能的にそれと同等である均等物を含める；その際ポリペプチドは、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている。もう一つの面では、本発明は、哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のミネラル含量（すなわちカルシウム）を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して少なくとも約１９％保存されるアミノ酸配列を有し、それから少なくとも１つのアミノ酸が決失している合成ペプチド、または機能的に同等である均等物に関する。本発明は哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２２％保存されるアミノ酸配列を有し、それから最低１つのアミノ酸が決失している合成ペプチドを含める。本発明は、哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２５％保存されるアミノ酸配列を有し、それから最低１つのアミノ酸が決失している合成ペプチドを含める。本発明は、哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に関して最低約２８％は保存されるアミノ酸配列を有し、およびそれらから最低１つのアミノ酸が決失している合成ペプチドを含める。本発明は、ポリペプチド配列から最低６アミノ酸が決失し；またはその配列から最低１１アミノ酸が決失し；またはその配列から最低１６アミノ酸が決失し；またはその配列から最低２１アミノ酸が決失し；またはその配列から最低２６アミノ酸が決失している前記合成ポリペプチドのいずれをも含める。本発明は、前記合成ポリペプチドの１つを十分に複製することができるアミノ酸配列を有するポリペプチドであって、（そのポリペプチドが）前記合成ポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリダイズするＤＮＡによってコードされているようなポリペプチドを含める。また別の一面において、本発明は、哺乳動物において骨刺激活性を示すポリペプチドであり、そのポリペプチドは配列番号：１、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、または配列番号：９と決定された配列を有するポリペプチド、その配列の三次元構造に由来する哺乳動物の骨刺激活性が保存される限り、その配列中のアミノ酸が置換され、決失し、または付加されたその同族体；その各ポリペプチドの結合体またはそれらの同族体であり、その際もしもそのポリペプチド配列が配列番号：１と決定された配列をもっているならば、それからは最低１つのアミノ酸が決失している。本発明は、骨刺激ポリペプチド（または機能的に同等のその均等物）を十分に複製できるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含める、その際そのポリペプチドは、前記骨刺激ポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされるている。もう一つの面では、本発明は配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし９０％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし８６％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし６９％が保存されるアミノ酸配列；配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし５６％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし４２％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし３９％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して１９％ないし２８％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし９０％が保存されるアミノ酸配列；配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし８６％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし６９％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし５６％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし４２％が保存されるアミノ酸配列；または配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して２８％ないし３９％が保存されるアミノ酸配列を含むポリペプチド；または哺乳動物において骨刺激活性を有する機能的に同等な均等物に関する。上記ポリペプチドは、本発明の１部としての上記アミノ酸配列のいずれかを含むキメラ骨刺激因子でもよい。本発明は、本発明の１部として上に記載したいずれかのポリペプチドを―もちろんキメラポリペプチドも―活性成分として含む、骨減少性疾患の予防および治療に用いる作用物質を含める。こうして本発明は、本発明の１部として上に記載のポリペプチドの治療的有効量を含む骨成長を促進するための薬物学的組成物でもある。本発明は本発明の１部として上に記載したポリペプチド（またはポリペプチドを含む薬物学的組成物）の治療的有効量を投与することによって哺乳動物の骨成長を高める方法を含める。本発明は、骨粗鬆症の治療、哺乳動物の骨成長の促進、または骨減少性疾患にかかっているヒトの治療を含める。本発明は、本発明のいずれかのポリペプチドによる配列を有するポリペプチドを、骨成長の促進または骨粗鬆症の治療などのために使用することを含める。本発明は本発明のポリペプチドの存在を確認するための診断キットを含める；そのキットはリポーター系に連結したポリペプチド（またはポリペプチド類）に対する抗体を含み、ここであらかじめ決められた量のポリペプチド（またはポリペプチド類）およびその抗体が結合した場合にはそのリポーター系は検出可能の反応を生ずる。本発明は本発明のポリペプチドに結合する抗体を含める。特に、本発明は、そのポリペプチドを用いて抗体を合成した場合にそのようなポリペプチドに結合する抗体を含める。本発明は分子、例えば本発明のポリペプチドに関連して分離されたヌクレオチド配列などを含める。例えば、本発明は、本発明のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメントを含める。このようなフラグメントは、遺伝コードの縮退により互いに異なることはもちろん理解できる。さらに本発明はこのようなＤＮＡ配列のいずれかを組み込んだベクターを含める。本発明は本発明のいずれかのアミノ酸配列をコードしている分離ＤＮＡ配列、または、その配列の三次元コンフォメーションに由来する哺乳動物の骨刺激活性がそのアミノ酸配列を有するポリペプチドに保存される限り、その配列中のそれらのアミノ酸が置換され、決失し、または付加されたその同族体；ＤＮＡにハイブリッド化して、哺乳動物の骨刺激活性をあらわすポリペプチドのアミノ酸配列をコードする配列；および遺伝暗号の縮退のためにその配列とは異なったＤＮＡを含める。本発明はこうして次の諸段階を含んでなる本発明のいずれかのポリペプチドの製法を含める：ａ）このようなポリペプチドをコードするヌクレオチッド配列を含むＤＮＡ配列を作成し；ｂ）そのＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入して、そのＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを作り；ｃ）ホスト細胞をその組換えＤＮＡで形質転換して、そのポリペプチドを発現できるトランスフォーマントを分離し；およびｄ）そのトランスフォーマントを培養してそのポリペプチドを産生せしめ、そのポリペプチドを生成培養混合物から回収する。図面の簡単な説明下記の説明においては添付の図を参照されたい。図において、図１は化学的に合成したヒトＮ−アセチル（Ｎ−末端）ポリペプチド（配列番号：２）を注入によって与えた副甲状腺摘出ラットにおける骨ミネラル付着速度（μｍ／日）をグラフで示したものである。誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。ｐ値は０.００１以下である。図２は、４週間にわたって治療したラットの右大腿骨カルシウム密度をグラフにしたものである。Ａ群ラットは卵巣摘出し、化学的に合成した正常ペプチド( 配列番号：１)を毎日注射した。Ｂ群ラットは卵巣を摘出し、対照溶液を毎日注射した。Ｃ群ラットは疑似卵巣摘出手術を受け、対照溶液を毎日注射した。Ｄ群は対照溶液を毎日注射された完全無傷ラットである。誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図３は、図２に関連して述べたような治療後、テトラサイクリン標識によって測定したラットの骨ミネラル付着速度をグラフで示したものである。図４は、８週間にわたって治療したラットの大腿骨カルシウム濃度をグラフで示したものである。Ａ群ラットは卵巣を摘出し、化学的に合成した正常ペプチド（配列番号：１）を手術の８週間後から始めて、毎日注射した。Ｂ群ラットも同様に卵巣を摘出し、対照溶液を毎日注射した。Ｃ群ラットは疑似卵巣摘出手術を受け、対照溶液を毎日注射した。Ｄ群は対照溶液を毎日注射した完全無傷ラットである。誤差棒は±標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図５はテトラサイクリン標識によって測定した完全無傷ラットの骨ミネラル付着速度のグラフである。Ａ群ラットには化学的に合成した正常ポリペプチド（配列番号：１）に対するウサギ抗体を投与した。Ｂ群ラットには同じ抗体とポリペプチドそのものとを投与した。Ｃ群は対照群である。誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図６は化学的に合成したヒトポリペプチド（配列番号：１）と、ｃｙｓ−ａｌａ置換を含む同じポリペプチド（配列番号：３）のトリシンＳＤＳ電気泳動ゲルを示す。図７は化学的に合成したヒトポリペプチド（配列番号：１）、Ａ群：改質化学的合成ヒトポリペプチド（配列番号：３）、Ｂ群：および対照、Ｃ群を注射したラットの骨ミネラル付着速度（μｍ／日）をグラフで示したものである。（全群共Ｎ＝６。）誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図８はＮ−末端化学的合成ポリペプチド；配列番号：１（Ａ群）；配列番号：７（Ｂ群）；配列番号：６（Ｃ群）；配列番号：５（Ｄ群）；および配列番号：４（Ｅ群）を注射したラットの骨ミネラル付着速度（μｍ／日）のグラフである。（全群共Ｎ＝６）。誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図９は化学的に合成したポリペプチド：配列番号：８（Ｇ群）；配列番号：９（Ｈ群）を注射したラットにおける骨ミネラル付着速度のグラフである。図１０は走査領域を示すラット右大腿のＤＥＸＡ画像である：Ａ、近位端；Ｂ、骨幹；Ｃ、遠位端。図１１は、走査頸部領域を示すラットの右大腿骨のＤＥＸＡ画像である。図１２は、非Ｎ−末端−化学的合成ポリペプチドフラグメント配列番号：１（Ｈ群）；配列番号：１６（Ｉ群）；配列番号：１５（Ｊ群）；配列番号：１４（Ｋ群）；および配列番号：１０、１１、１２＆１３（Ｌ群）を注射したラットにおける骨ミネラル付着速度（μｍ／日）のグラフである。（全群共Ｎ＝６）。誤差棒は±１標準偏差（Ｓ．Ｄ．）を示す。図１３は種々の被験ポリペプチドのアミノ配列であり、活性ポリペプチドは中線上に示され、骨成長の刺激が認められなかった配列は中線の下に示される。方法国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＣＡ９４／００１４４の一般的方法の部に記載されている適用法にしたがった。Ｎ−末端アセチル化学的合成ポリペプチド（配列番号：２）に関する毒性実験小型浸透圧ポンプ（Alzet）に、Ｎ−末端を有する化学的合成ペプチド（配列番号：２）の０.１％酢酸溶液約１.５ｍｌを充填し、約２５μｇ／日の定量デリバリーが毎日行われるようにした。７日前に副甲状腺を摘出した５匹のラットの喉の左側の背側の皮下筋膜下にポンプを埋め込んだ。５匹の同様に副甲状腺を摘出したラットには０.１％酢酸のみを含む同様なインプラントを埋め込んだ。５匹の完全無傷ラットも対照として用いた。２８日後、テトラサイクリン塩酸水溶液０.５ｍｌを、移植ラットの各々の右大殿筋に既述のように筋肉注射した。さらに４８時間後、テトラサイクリン塩酸溶液の第２回目の注射をした。さらに２４時間後にラットを殺した。骨ミネラル付着速度を、インプラントを埋め込んだ１０匹の各ラットの右大腿骨の下方骨幹端の横断面の検査によって測定した。結果を表１にまとめる；これは図１にグラフで示したものである。表１に示した各群の５匹のラットの選択した組織の組織学的評価を顕微鏡検査によって行った。毒性損傷の兆候は認められなかった。卵巣摘出ラットおよび正常化学的合成ポリペプチド（配列番号：１）の４週間にわたる投与に関する実験６匹の雌Ｓprague-Ｄawley ラットで卵巣を摘出した。各ラットをバルビツール酸ナトリウム１ｍｇの腹腔内注射で鎮静した。擬似手術を第２の６匹ラット群で行った。ラットは２週間かけて手術から回復させた。６匹の卵巣摘出ラットに、化学的合成ペプチド（配列番号：１）１００μｇを含む０.１％酢酸溶液を２４時間おきに２８日間皮下注射した。２５日目に、テトラサイクリン塩酸溶液を各ラットに、投与量が２４ｍｇ／ｋｇ体重になるように既述のように筋肉注射した。２７日目に、２回目のテトラサイクリン塩酸注射を行い、２８日目にラットを殺した。６匹の卵巣摘出ラットからなる第２群にも同様に、だがペプチドを含まない０ .１％酢酸溶液を同じ２８日間投与した。擬似手術を受けた６匹のラットからなる第３群にもペプチドを含まない０.１％酢酸溶液を同じ２８日間投与した。６匹の完全無傷ラットからなる第４群にも同様にペプチドを含まない０.１％酢酸溶液を同じ２８日間投与した。死後の血液を心臓穿刺によって採取し、血清を分析時まで凍結した。完全な剖検を各ラットで行った。このポリペプチドを投与したラットには不都合な効果は認められなかった。右大腿骨の各々からその軟組織を切り離し、２日間固定して、７０ｋＶで１分、２分および３分間、Ｘ線を照射した。３分間の照射は最も満足すべき結果を与えた。第２群ラット、ペプチドを投与しなかった卵巣摘出ラットからの大腿の骨密度は明らかに低い骨密度を示した。各ラットの右大腿を個別に脱灰した（decalcified）。脱灰液は１０％蟻酸（ｖ／ｖ）および５％クエン酸ナトリウム（ｗ／ｖ）、ｐＨ３.０、からなっていた。各骨を脱灰液６ｍｌ中に置いた。４日後に液体を取り換え、さらに４日後、さらに２日後、そしてさらに３日後に取り換えた。さらに２日後、脱灰液を除去し、電離水に代え、サンプルを２日間振盪した。２日後に水を代え、さらに１日後に代えた。さらに１日後、各ラットの液体サンプルのすべてを合一し、各々の最終容量を電離水で５０ｍｌに調節した。各右大腿骨の容量を、その骨を水に浸したときに置換される水の量の測定によって測定した。各サンプルのカルシウム濃度を標準法によって測定し、各骨のカルシウム密度を計算した。結果を表２、および図２のグラフで示す。ペプチド( 配列番号：１)を投与した卵巣摘出ラットで測定した骨カルシウム濃度は正常であるようにみえるが、非投与卵巣摘出ラットのカルシウム濃度は低下していることがわかる。左大腿骨の下骨幹端の測定によって、既述のように骨ミネラル付着速度を測定した。結果を表３、および図３のグラフで示す。卵巣摘出ラット、および８週間にわたって投与した正常化学的合成ポリペプチドに関する実験卵巣摘出の８週間後、５匹の卵巣摘出ラットに、Ｎ−末端アミノ基をアセチル基で改質した化学的合成ペプチド（配列番号：２）１００μｇを含む０.１％酢酸溶液を皮下注射した。これを２４時間おきに８週間行った。５４日目に各ラットの右大殿筋にテトラサイクリン塩酸溶液を、投与量２４ｍｇ／ｋｇ体重となるように、既述のように筋肉注射した。５６日目にテトラサイクリン塩酸の２回目の注射を行い、ラットを５７日目に殺した。７匹の卵巣摘出ラットからなる第２群には、ペプチドを含まない０.１％酢酸溶液を同様に同期間投与した。５匹の擬似手術を受けたラットからなる第３群にもペプチドを含まない０.１％酢酸溶液を同期間投与した、５匹の完全無傷ラットからなる第４群にもペプチドを含まない０.１％酢酸溶液を同じ８週間投与した。第２群の２匹のラットは８週間の期間中に病気になり、予定より早く殺した。死後の血液を心臓穿刺によって採取し、血清を、分析時まで凍結した。剖検を各ラットで行った。明らかな病変は、手術傷、および卵巣摘出ラットの子宮および膣の萎縮以外はラットに認められなかった。右大腿骨を脱灰し、カルシウム密度を前のように測定した。結果を表４および図４に示す。化学的合成蛋白質（配列番号：１）に対する抗体の合成化学的合成蛋白質(配列番号：１)を下記のように３種類の架橋剤でＫＬＨ(キーホールリンペット（かさがい）ヘモシアニン)に結合した。グルタールアルデヒド結合２.７ｍＭＫＣl、１.２ｍＭＫＨ₂ＰＯ₄、１３８ｍＭＮａＣl、８.１ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄、からなるＰＢＳ溶液２.５ｍｌでペプチド（配列番号：１）５ｍｇを希釈し、最終ペプチド濃度２ｍｇ／ｍｌを得た。ＫＬＨ溶液１.２５ｍｌにこのペプチド溶液１.２５ｍｌを加えた。グルタールアルデヒドを最終濃度０.２５％になるように加えた。生成した溶液を室温で１時間撹拌した。撹拌後、その溶液をＰＢＳ１リットルに対して透析した。ＰＢＳを３回取り換えた。カルボジイミド（ＥＤＣ）結合前節に記載のようにペプチドおよびＫＬＨ溶液を調製した。１.２５ｍｌＫＬＨ溶液に１.２５ｍｌペプチド溶液を加えた。生成した溶液に２.５ｍｇＥＤＣを加えた。その溶液を室温で４時間、定常的に撹拌し、それから１リットルのＰＢＳに対して透析した。ＰＢＳを３回取り換えた。Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）結合Ｈ₂Ｏ５００μｌにペプチド５ｍｇを加え、ＮａＯＨでｐＨを８.５に調節し、最終濃度１０ｍｇ／ｍｌとした。無水シトラコン酸をＨ₂Ｏで薄め、１０ｍｇ／ｍｌの濃度にした。無水物溶液５００μｌをペプチド溶液１００μｌに加え、各添加の間にはｐＨを８.５に調節した。その後溶液を室温で１時間定常的に撹拌した。その後、１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７.２）１００μｌを添加し、その後１００ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７.２）を９００μｌ加えた。スルホ−ＭＢＳをＨ₂Ｏで希釈して２５ｍｇ／ｍｌ濃度とし、この溶液４００μｌをペプチド溶液に加えて約５ｍｇ／ｍｌのＭＢＳ濃度を得た。この溶液を室温で３０分間定常的に撹拌した。β−メルカプトエタノール６μｌを加え、β−メルカプトエタノールの最終濃度を３５ｍＭとした。その溶液を室温で１時間定常的に撹拌した。ＫＬＨをＰＢＳに３ｍｇ／ｍｌになるように溶解し、その２.５ｍｌをペプチド溶液に加えた。その溶液を室温で３時間定常的に撹拌し、１リットルのＰＢＳに対して透析した。ＰＢＳを３回取り換えた。最終ペプチド濃度は約１ｍｇ／ｍｌで、最終的ＫＬＨ濃度は約１.５ｍｇ／ｍｌであった。抗体の生成ウサギに合成ペプチド溶液を下記のように注射した。各２５０μｌのグルタールアルデヒド−およびＥＤＣ結合ペプチド溶液を一緒にフロインドのアジュバントと混合した。この溶液をウサギの後肢に、肢１本につき５００μｌを筋肉注射した。注射ペプチドの総量は０.５ｍｇであった。ＭＢＳでＫＬＨに結合した合成ペプチド５００μｌをフロインドのアジュバント５００μｌと混合した。この溶液を別のウサギの後肢に５００μｌ／肢を筋肉内注射した。注射ペプチドの総量は０.５ｍｇであった。合成ペプチドをゲルの２レーン上に１．５μｇおよび４μｇ載せた（１８％移動、５％スタッキング）。ゲルを一晩３０Ｖでブロットし、ＰＢＳ中３％ミルクでブロックした。ゲルを、１％ミルク／ＰＢＳで１：２５０に希釈したウサギ血清と共に一晩インキュベートし、その後１：１０００に希釈した抗ウサギ−アルカリホスファターゼと共に１時間インキュベートした。それからゲルを基質で発現させた。合成ペプチドはクーマシーブルー染色によって見ることができた。ペプチドは各ウサギの２回目の放血によって検出され、どのウサギでも免疫前血清によっては検出されなかった。固定ペプチドと血清抗体との間の相互作用を、Ｂ１ＡｃｏｒｅＴＭを用いる表面プラスモン共鳴によってさらに研究した。合成ペプチドはアミン結合によってデキストラン基質上に共有結合的に固定されていた。異なる希釈のウサギ血清をその表面に５分間注入し、その固定ペプチドに結合した抗体量を測定した。タイター（力価）は、陽性反応を与える、すなわち５０共鳴単位より大きい反応を与える血清の最後の希釈と決められた。このやり方を用いて、抗体は両方のウサギの血清中に存在することがわかった、そしてその相互作用はその血清をそのペプチドと共に前インキュベートすることによって阻止できる。ウサギ血清中の抗体は固定された無関係のペプチドとは相互作用しないことがわかった。ラットおよび化学的合成ペプチドに対する抗体に関する実験抗体血清を１０ｍＭトリスＣｌ、ｐＨ７.４、で調製した。５匹ラットの各々に、この溶液１００μｌを左大殿筋に注射することによって投与した。５匹ラットの第２群の各ラットにも同様に投与したが、ポリペプチド（配列番号：１）４５μｇを含む溶液を右大殿筋に付加的に注射した。５匹ラットの第３群の各ラットは１０ｍＭトリスＣl、ｐＨ７.４、１００μｌの注射を受けた。その後１５匹の各ラットに前記のようにテトラサイクリン塩酸２４ｍｇ／ｋｇ体重を注射した。テトラサイクリン塩酸の２回目の投与は約４８時間後の注射であった。さらに約２４時間経過後にラットを殺した。骨ミネラル付着速度を上記のように右大腿骨の下骨幹端の測定によって決定した。結果を表５および図５に示す。このように、方法および生成物類は、抗体が結合するポリペプチドの検出に使用するための、そのポリペプチドに対する抗体を用いて開発することができる。例えば、抗体は、ポリペプチドと抗体との陽性結合を示すように作られた数種の公知のリポーター系のいずれかと連結、または結合することができる。公知のリポーター系にはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡｓ）、または免疫放射定量法（ＩＲＭＡｓ）が含まれる。或いは、固相酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）はＲＩＡｓおよびＩＲＭＡｓと共通する比較的高い感度を有するが、普通は放射性同位元素の使用には依存しない。可視的に検出できる、または少なくとも分光光度法で検出できる物質が生成するかも知れない。測定しようとする、酵素に結合した物質の蛍光に基づく分析試験法を用いることができる。本発明によって、特殊のポリペプチドの存在の検出のために用いることのできるリポーター系は多数あることが認められる。標準化されたサンプル収集および処理により、血清中の閾値量以上のポリペプチドの存在が良く確認できる。化学的合成ポリペプチド（配列番号：１）に対する抗原性反応に基づくこのような方法を開発することができ、アミノ酸置換、決失および付加（および結合）に関し上記のようにして得られたポリペプチドの変形物を潜在的骨刺激因子として予備スクリーニングすることができる。すでに公知のペプチドに対する抗体と陽性反応するものについて、その後骨刺激効果を、ここに例えばラットに関して記載する系を用いて in vivo で試験することができる。このような抗体結合リポーター系は対象の血清が不十分な量のポリペプチドを含むかどうかを調べる方法に用いることができる。或る種類の対象の血清中のこのようなポリペプチドの正常閾値濃度が与えられるならば、こうして試験キットを開発することができる。システイン−アラニン置換を含む化学的合成ヒトポリペプチドに関する実験１３位置のシステイン残基をアラニンで置換して得られる、化学的合成ペプチド（配列番号：１）の改質配列（配列番号：３）を標準的化学的操作によって作成した。アラニン残基は立体配置的に還元システイン残基に近く、一方自然発生的二量体化できないポリペプチドを与える。改質および未改質（正常）ペプチドのトリシンＳＤＳ電気泳動ゲルを図６に示す。実験は２９５ないし３２０ｇ体重の６匹ラットからなる３群で行われた。改質ペプチド（配列番号：３）の１ｍｇ／ｍｌ溶液を０.１％酢酸で作った。正常ペプチド（配列番号：１）の１ｍｇ／ｍｌ溶液を０.１％酢酸で作った。最初の群の各ラットには右腿に改質ペプチド溶液０.１ｍｌを皮下注射した。同様に、第２群の各ラットには正常ペプチド溶液０.１ｍｌを注射した。第３群、対照群、の各ラットには０.１％酢酸溶液０.１ｍｌを注射した。これらの注射直後に各ラットに、水０.５ｍｌに溶解したテトラサイクリン塩酸、２４ｍｇ／ｋｇ体重を筋肉内注射した。テトラサイクリン塩酸の２回目の投与を４８時間後に行った。２回目の投与の２４時間後にＣＯ₂麻酔によって動物を殺した。右大腿骨の下骨幹端を切り取り、酢酸緩衝液によってｐＨ７.２に緩衝された１０％ホルムアルデヒド水溶液中で固定した。骨切片を作り、上記のように測定した。結果を表７、および図７のグラフに示した。改質ポリペプチドを注射したラットの骨付着速度は対照群のそれらより有意に高いが、正常ペプチドを注射したラットで示された骨付着速度よりは低いことがわかる。３６アミノ酸ヒトポリペプチドの活性グラグメントに関する実験配列番号：４、５、６、７、８、および９と決められたアミノ酸配列を有するポリペプチドを公知の化学的処理によって合成した。試験動物としてＳprague-Ｄawley ラットを用い、上記のように骨ミネラル付着速度を決定した。体重２８０ないし３８０ｇの雄ラットを１週間環境順化させた後、皮下注射を行った。各動物に０.１％酢酸試験溶液２００μｌを注射した；１匹の動物にポリペプチド約２５ｎｍｏｌ量が与えられるような濃度に溶液を調製した。各試験投与後、直ちに２４ｍｇ／ｋｇ体重のテトラサイクリン塩酸を筋肉内に注射した。４８時間後にテトラサイクリンの２回目の注射を行った。対照群：０.１％酢酸溶液同様な、だが異なる実験組において、次の化学的合成ポリペプチドを用いて骨ミネラル付着速度を試験した。骨ミネラル付着速度を既述のように右大腿骨の下骨幹端の測定によって決定した。２組の実験で得られた結果を表７および表８、および図８および図９のグラフにまとめる。これらからわかるように、試験ポリペプチドのすべては骨付着速度にプラスの影響を与える、すなわち骨刺激活性を示した。配列番号：７に関する骨カルシウム含量実験その他の１組の実験を配列番号：７と決定されたポリペプチドを用いて行い、ラットに投与したとき、そのポリペプチドが骨カルシウムに与える効果を調べた。上記のようにラットの卵巣摘出を行った。ポリペプチド２５ｎｍｏｌを含む０ .１％酢酸を各ラットに実験期間中毎日皮下投与した。１群のラットには卵巣摘出後１００日目から始めて１２週間投与した。もう一つの群のラットには卵巣摘出後８週間目から始めて８週間投与した。投与期間終了後ラットを殺し、解剖し、骨ミネラル含量の死後評価を行った。腰椎Ｌ１−Ｌ４を強力ナイロンブラシで洗い、付着した筋肉を除去した。それらをポリプロピレン容器内の蒸留水の３ｃｍ下で腹側を上して置いた。二重エネルギーＸ線吸収計（ＤＥＸＡ）、Ｈologic １００、によって走査し、カルシウム含量をグラムで算出した。各ラットの右大腿骨も完全無傷に切り開き、付着筋肉を強力ナイロンブラシで除去した。それは背側を蒸留水の３ｃｍ下でＤＥＸＡによって走査した。大腿骨の４部分を走査した；それらは図１０および図１１（Ａ、近位端；Ｂ、骨幹；Ｃ、遠位端；およびＤ、頸部）に示される。骨ミネラル（すなわちカルシウム）含量（ｇ）が吸収に基づき、および機械の内部標準を用いて大腿骨の４部分で推定された。結果を表９〜１８に示す。表にしたデータからわかるように、 in vivo 骨カルシウム量の増加が大腿骨頸部および大腿骨幹部に非常に明らかであった、これは投与ペプチドの効果が部位特異的で、多分機械的応力下にある骨格部位ではより大きいことを示唆する。３６アミノ酸ヒトポリペプチドのその他のフラグメントに関する実験正常ポリペプチド（配列番号：１）のポリペプチドフラグメント類も合成し、Ｃ−末端フラグメント類で行ったと同様に骨刺激活性を試験した。対照群：０.１％酢酸ここでも骨ミネラル付着速度を右大腿骨の下骨幹端の測定によって確認した。得られた結果は表１９および図１２のグラフにまとめる。図１２からわかるように、配列番号：１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６と決定された非Ｎ−末端−変形物のどれにも対照と比較して骨付着速度の増加は認められなかった。試験した特定のポリペプチド配列に関して得られた結果をまとめて図１３に示す。配列番号：９と決定されたポリペプチドは配列番号：１と決定されたポリペプチドの３６アミノ酸配列に含まれる１０アミノ酸の配列を有することがわかる、すなわち配列番号：１のアミノ酸配列のうちのたった２８％しか保存していないポリペプチドで in vivo 骨刺激活性を得ることができる。骨刺激効果は配列番号：９と決定されたポリペプチドの均等物でも認められると考えられる。配列番号：９に示されるアミノ酸の１つ以上が決失し、それでもそのポリペプチド（または均等物）の活性が保有されることも多分見いだされる。同様の活性を提供するポリペプチド類は、その他の作用物質、例えばそのポリペプチドが何らかの方法で結合するリセプターなど、と相互作用する同じまたは同様な三次元部分（１個以上）を有することによって関連づけられることは、熟練せる当業者にはもちろん公知である。これは、同様な骨刺激活性を示す互いに関連する幾つかのポリペプチドを有することが可能だからである。本発明は、哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のカルシウム密度または含量を高める、そして配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約１９％が保存されているアミノ酸配列を有し、そして最低１つのアミノ酸がそこから決失した合成ポリペプチド、およびその相同体を提供する。本発明に関連して、配列番号：１のアミノ酸配列と整列して並んだアミノ酸配列を含むペプチドであって、元の配列の個々のアミノ酸残基の最低約３０％がそのペプチド中に存在するようなペプチドは、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列の約３０％が保存されており、整列化配列間で相同置換および限られた数の挿入または決失が可能であると言われる。整列化配列において配列番号：１の３６アミノ酸残基のうちの７個を有するアミノ酸配列は、１９％保存である。整列化配列において、配列番号：１の３６アミノ酸残基のうちの８個を有するアミノ酸配列は、２２％保存されている。整列化配列において配列番号：１の３６アミノ酸残基のうちの９個を有するアミノ酸配列は２５％保存である。整列化配列において配列番号：１の３６アミノ酸残基のうちの１０個を有するアミノ酸配列は２８％保存されている。言い方を少し変えるならば、本発明のポリペプチドは、（ａ）配列番号：１のＮ−末端から１個のアミノ酸ないし４個のアミノ酸が決失し、（ｂ）配列番号：１のＣ−末端から１ないし２２のアミノ酸が決失し、または(ａ)でもあり(ｂ)でもある、配列番号：１に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等である均等物である。配列番号：１のＮ−末端から５または６個以上のアミノ酸の決失または配列番号：１のＣ−末端からの２２個以上のアミノ酸の決失が可能であることが判明した。別の意味で、本発明のポリペプチドは、哺乳動物において骨刺激活性をあらわすポリペプチド、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、または配列番号：９と決定された配列を有するポリペプチド；それらの同族体であって、配列の三次元構造に由来する哺乳動物の骨刺激活性が保持される限り、配列中のアミノ酸が置換され、決失し、または付加され得る前記同族体；および前記ポリペプチドの各々の結合物またはその同族体であって、もしもそのポリペプチド配列が配列番号：１と決定された配列を有するならば、それから最低１つのアミノ酸が決失している前記結合物またはその同族体と記載することができる。本発明のポリペプチドは、分子量が約１０００ないし４０００の範囲にある配列を含める。しかし結合またはその他の方法によってその配列に付加し、その結果全体的化合物の分子量を４０００以上に増加させ得ることは理解できる。アミノ酸の種々の置換が可能であり、一方本明細書に開示されたポリペプチド類の骨刺激効果をおこす三次元構造を“保持する”ことも、制限的意図なしに、理解される。こうして、例えば無極性脂肪族中性アミノ酸、グリシン、アラニン、プロリン、バリンおよびイソロイシン間の相互交換が可能であると予想される。同様に、極性脂肪族中性アミノ酸、セリン、スレオニン、メチオニン、システイン、アスパラギンおよびグルタミン間の置換も多分可能である。ペプチドのジスルフィド架橋による結合は或る程度重要であるようにみえる。そして孤立(lon e)システイン残基が多分完全無傷に保たれ、たとえ上記のようにｃｙｓ−ａｌａ置換が成功するとはいえ、ジスルフィド結合可能のその他のアミノ酸はそれ以外には配列中において置換されないはずである。帯電した酸性アミノ酸、アスパラギン酸およびグルタミン酸間の置換は、多分行われ得る、それは帯電塩基性アミノ酸、リジンおよびアルギニン間の置換が起こり得るのと同様である。フェニラミン、ヒスチジン、トリプロファンおよチロシンを含める芳香族アミノ酸間の置換も同様に可能である。置換は単独で、または組み合わせて行われ得る。これらの種類の置換および相互交換は熟練せる当業者には公知である。例えば米国特許第５,４８７,９８３号および第５,５１２,５４８号は、その他のあり得る置換、例えば遺伝子によってコードされていないアミノ酸に関する置換などを記載している。その他の置換が多分可能である。配列のＮ−末端部分の重要性がここに記載の結果から明らかである。配列番号：１のアミノ酸５ないし１４を有するポリペプチド（配列番号：９）は骨刺激活性を示し、一方最初の９個のＮ−末端アミノ酸が欠如し、アミノ酸１０ないし３２（配列番号：１４）またはアミノ酸２０ないし３５（配列番号：１０）を有するポリペプチドは骨刺激活性を示さない。配列番号：９と決定されたポリペプチドのどちらの末端からも比較的多くのアミノ酸が決失することは可能であり、ポリペプチド配列の三次元構造の保持が骨刺激活性の生成に重要であるらしい。内部決失は、多分或る限られた範囲でおこり得るとはいえ、少ないはずである。特に注目すべきは、配列番号：１６と決定された配列を有するポリペプチドである；これは配列番号：９と決定されたアミノ酸配列とはたった１個のアミノ酸残基が異なるだけである。前者は活性をあらわさず、後者は骨刺激活性をあらわす。ここに開示した実験法を用いて骨成長を刺激するまたは刺激しない配列間を、およびカルシウム骨含量を増加する、または増加しない配列間を識別することができる。配列の末端にアミノ酸の少量を付加することもできるはずであり、カルボキシルおよびアミノ末端への対称的またはほぼ対称的付加も同様に可能である。内部付加は、或る限られた範囲では可能であるらしいが、少ないはずである。上に列挙した改質のなかで、末端付加、決失または置換が最も役立ちそうである、なぜならばこのような改質は種々の機能、例えばラジオイムノアッセイに使用するための確認基（identifying group）；または結合基（linking group）など、に役立つからである。正常ペプチド（配列番号：１）の場合のように、システイン残基を含む活性物質（すなわち配列番号：４、５、６、７、８または９）は自然に二量体化し、二量体型で存在するらしい。当業者には公知のように、蛋白質のキメラ型はさらに利益を提供する。例えば全蛋白質または蛋白質の１部をコードするＤＮＡ配列を、大腸菌（Ｅ-Ｃoli）β -ガラクトシダーゼのＣ−末端部分をコードする配列と結合させ、融合蛋白質を作ることができる。ヒト呼吸合胞体ウィルス糖蛋白質ＦおよびＧの発現系が例えば１９９４年２月２２日発行の米国特許第５,２８８,６３９号に記載されている。これは引例によってここに挿入される。本発明のポリペプチドは、従来の“化学”の技術によって作られようと、組換え技術によって作られようと、合成ポリペプチドであるのが普通である。ここでこうして作られたポリペプチドは、もしそれが天然に―例えば動物からの血清中などに―直接見いだされる場合に、それと一緒に出現するポリペプチドまたは蛋白質が概してない場合は、実質上純粋または生化学的に純粋と言われている。正常ポリペプチドの活性部分をコードする核酸（ＤＮＡ）配列は次のようである：よって上記のような、特に国際特許出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＣＡ９４／００１４４に記載されている、このようなＤＮＡ配列を組み込んだベクターを作り、ポリペプチドの合成に使用することができる。配列番号：１と決定されたポリペプチドをコードするＤＮＡ配列はこの明細書の配列リストにおいて配列番号：２３として与えられている。本発明のＤＮＡ配列またはフラグメントは、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチドを含むいかなるフラグメントでもよい。上記コーディング配列に加えて、ＤＮＡフラグメントは適したプロモーターおよびＳＤ配列（または適したリボソーム結合部位）をその５’末端にもつことができ、必要ならば、５’− 末端に翻訳開始コドンをを含むヌクレオチド配列および３’−末端に終始コドンを含むヌクレオチド配列を含むことができる。熟練せる当業者には公知のように、遺伝暗号は“縮退する”。例えば遺伝子配列中の或るヌクレオチドは特定のコドン（トリプレットをコードする）の縮退によって、その遺伝子によってコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変えることなく、別のヌクレオチドに置換され得る。本発明のＤＮＡフラグメントは、こうして、上記のいずれかの配列（および置換ポリペプチドまたはその他の同族体に対応する、明快には説明されていないＤＮＡ配列類）から誘導され得る。そして本発明のポリペプチドを遺伝子工学的技術を用いて作る場合、そのような置換は、生成コドン（１個以上）が特異的ホスト細胞において高い利用頻度をあらわすような方法で行われる。正常ポリペプチド（配列番号：１）と関連して説明したが、ここに開示されたポリペプチドのどれに対しても抗体が生成し得ることはもちろん理解される。本発明のポリペプチドは、効率的投与を必要とする患者、例えば骨生成の低下を蒙っている患者などに効率的投与するために使用するのに適した薬物学的組成物を作ることができる。予防的治療がもう一つの可能性である。投与経路としては注射が可能性のある候補であるようにみえる。薬物学的組成物は正当な担体またはメジウム、例えば滅菌水、生理食塩液、植物油、無毒性有機溶媒など、または薬剤に一般的に使用されるものを含む。充填剤、着色剤、乳化剤、懸濁剤、安定剤、保存剤、なども用いられる。その他の可能性のある投与経路は直腸内、局所的、非経口的、眼、鼻、舌下、バッカル（錠）、静脈内などがあり、徐放型または徐放デバイスを用いることができる。用量は、患者の種類、年齢、性別など、および治療する条件の特性および苦しさによって変化するようである。一般に、骨刺激要因を減少するのに関した条件の治療に対する用量範囲は、患者の体重当たり約０．０１ｐｍｏｌ〜１００ｎｍｏｌである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年８月２５日【補正内容】請求の範囲１．配列番号：４と決定されたアミノ酸配列からの３０個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。２．配列番号：５と決定されたアミノ酸配列からの２５個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。３．配列番号：６と決定されたアミノ酸配列からの２０個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。４．配列番号：７と決定されたアミノ酸配列からの１５個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。５．配列番号：８と決定されたアミノ酸配列からの１４個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。６．配列番号：９と決定されたアミノ酸配列からの１０個までの連続アミノ酸を含み、骨刺激活性を有するポリペプチド、または機能的に同等である均等物。７．請求項１ないし請求項６のいずれかの項に記載のポリペプチドの保存的に置換された変形物。８．ポリペプチドが合成されたものであり、アミノ酸配列が約１０００ないし４０００までの範囲の分子量を有する請求項１ないし請求項７のいずれかの項に記載のポリペプチド。９．請求項１のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる３０までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際第１のポリペプチドが、第２ポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、コードされている前記第１のポリペプチド。１０．請求項２のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる２５個までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、コードされている前記第１のポリペプチド。１１．請求項３のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる２０個までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、コードされている前記第１のポリペプチド。１２．請求項４のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる１５個までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、コードされている前記第１のポリペプチド。１３．請求項５のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる１４個までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。１４．請求項６のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる１０個までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。１５．請求項９ないし請求項１４のいずれかの項に記載のポリペプチドの保存的に置換された変形物。１６．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドを含むキメラ骨刺激因子。１７．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドを活性成分として含む、骨減少性疾患の予防および治療に使用するための作用物質。１８．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドの治療的有効量を含む、骨成長を促進するための薬物学的組成物。１９．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に定義されたポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって、哺乳動物における骨成長を高める方法。２０．骨粗鬆症の治療のために請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドの使用。２１．哺乳動物における骨成長を促進するために請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドの使用。２２．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に使用するための薬剤の製造における請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載の配列を有するポリペプチドの使用。２３．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドの存在を確認するための、リポーター系に結合する前記ポリペプチドに対する抗体を含んでなる診断キットであって、あらかじめ決めた量のポリペプチドと抗体とが結合するときに、前記リポーター系が検出可能の反応を生ずる前記診断キット。２４．請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドの１つを用いて合成された抗体。２５．請求項１ないし請求項１５のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退によって前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。２６．請求項１ないし請求項１５のポリペプチドのいずれかの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。２７．ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入して、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）ホスト細胞を前記組換えＤＮＡフラグメントで形質転換して、前記ポリペプチドを発現し得るトランスフォーマントを分離し；ｄ）前記トランスフォーマントを培養して前記ポリペプチドを産生せしめ、生成した培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階を含んでなる請求項１ないし請求項１５のいずれかの項に記載のポリペプチドの製法。２８．哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約１９％保存および８３％まで保存されているアミノ酸配列を有する合成ポリペプチド；または機能的に同等である均等物。２９．哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２２％保存され、および６９％まで保存されているアミノ酸配列を有する合成ポリペプチド；または機能的に同等である均等物。３０．哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２５％保存され、および５６％まで保存されているアミノ酸配列を有する合成ポリペプチド；または機能的に同等である均等物。３１．哺乳動物において in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２８％保存され、および４２％まで保存されているアミノ酸配列を有する合成ポリペプチド；または機能的に同等である均等物。３２．前記配列から少なくとも６個のアミノ酸が決失している請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３３．前記配列から少なくとも１１個のアミノ酸が決失している請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３４．前記配列から少なくとも１６個のアミノ酸が決失している請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３５．前記配列から少なくとも２１個のアミノ酸が決失している請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３６．前記配列から少なくとも２６個のアミノ酸が決失している請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３７．ポリペプチドが約１０００ないし４０００の範囲の分子量を有する請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のポリペプチド。３８．請求項２８のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる３０までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。３９．請求項２９のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる２５までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。４０．請求項３０のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる２０までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。４１．請求項３１のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる１５までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。４２．請求項３２のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる１０までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチドであって、その際前記第１のポリペプチドが、第２のポリペプチドをコードしているＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド。４３．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のアミノ酸配列を含むキメラ骨刺激因子。４４．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のアミノ酸配列を含む、骨減少性疾患の予防および治療に使用するための作用物質。４５．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドの治療的有効量を含む、骨成長を促進するための薬物学的組成物。４６．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２に定義されたポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって哺乳動物における骨成長を高める方法。４７．骨粗鬆症の治療のために請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドの使用。４８．哺乳動物の骨成長を促進するために請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドの使用。４９．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に用いる薬剤の製造において請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２に記載の配列を有するポリペプチドの使用。５０．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドの存在を確認するための、リポーター系に結合した前記ポリペプチドに対する抗体を含む診断キットであって、あらかじめ決めた量のポリペプチドと抗体とか結合すると前記リポーター系が検出可能の反応を生ずる前記診断キット。５１．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２に定義されたポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドを用いて合成された抗体。５２．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退により前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。５３．請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１、または請求項３２のポリペプチドのいずれかの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。５４．ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）ホスト細胞を前記組換えＤＮＡフラグメントで形質転換し、前記ポリペプチドを発現し得るトランスフォーマントを分離し；ｄ）前記トランスフォーマントを培養して前記ポリペプチドを産生せしめ、生成した培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階を含んでなる請求項２８、請求項２９、請求項３０、請求項３１または請求項３２のいずれかのポリペプチドの製法。５５．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、または配列番号：９と決定された配列からの３０までの連続アミノ酸を含むポリペプチド；およびその同族体であって、配列の三次元構造に由来する哺乳動物の骨刺激活性が保存される限り、その配列中のアミノ酸が置換、決失または付加され得る前記同族体；および前記ポリペプチドまたはその同族体のそれぞれの結合物。５６．ポリペプチドが実質的に純粋で、アミノ酸配列が約１０００から４０００までの範囲の分子量を有する請求項５５のいずれかのポリペプチド。５７．請求項５５または請求項５６のポリペプチドに対応する第２のポリペプチドを十分に複製できる３０までの連続アミノ酸を含む第１のポリペプチド、または機能的に同等であるその均等物であって、その際第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、第１ポリペプチドがコードされている前記第１のポリペプチド、または機能的に同等であるその均等物。５８．請求項５５または請求項５６のアミノ酸配列を含むキメラ骨刺激因子。５９．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドを活性成分として含む、骨減少性疾患の予防および治療に使用するための作用物質。６０．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドの治療的有効量を含む、骨成長を促進するための薬物学的組成物。６１．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８に定義されるポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって哺乳動物の骨成長を高める方法。６２．骨粗鬆症を治療するために請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドの使用。６３．哺乳動物の骨成長を促進するために請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドの使用。６４．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に使用するための薬剤の製造に請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８に記載の配列を有するポリペプチドの使用。６５．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドの存在を確認するための、リポーター系に結合する前記ポリペプチドに対する抗体を含む診断キットであって、あらかじめ決めた量の前記ポリペプチドと前記抗体とが結合すると、リポーター系が検出可能の反応を生ずる前記診断キット。６６．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８に定義されたポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドを用いて合成された抗体。６７．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退により前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。６８．請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドのいずれかの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。６９．ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製を受け得る組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）ホスト細胞を前記組換えＤＮＡフラグメントで形質転換し、前記ポリペプチドを発現し得るトランスフォーマントを分離し；ｄ）前記トランスフォーマントを培養して前記ポリペプチドを産生せしめ、生成した培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階を含んでなる請求項５５、請求項５６、請求項５７、または請求項５８のポリペプチドの製法。７０．請求項１ないし請求項１５、請求項２８ないし請求項４２、または請求項５５ないし請求項５８のいずれかの項に示されるアミノ酸配列をコードする分離ＤＮＡ配列、またはその同族体であって、前記配列の三次元コンフォメーションに由来する哺乳動物の骨刺激活性が、前記アミノ酸配列を含むポリペプチドに保存される限り、前記配列の前記アミノ酸が置換、決失または付加され得る前記同族体；前記ＤＮＡにハイブリッド化し、哺乳動物の骨刺激活性をあらわすポリペプチドのアミノ酸配列をコードする配列；および遺伝暗号の縮退によって前記配列とは異なるＤＮＡ。７１．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：４として確認された配列から３０までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７２．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：５と決定された配列から２５までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７３．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：６と決定された配列から２０までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７４．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：７と決定された配列から１５までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７５．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：８と決定された配列から１４までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７６．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、配列番号：９と決定された配列から１０までの連続アミノ酸を含むポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７７．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：４として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７８．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：５として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。７９．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：６として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。８０．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：７として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。８１．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：８として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。８２．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：９として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド、および保存的に置換されたその変形物。８３．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：４として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。８４．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：５として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。８５．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：６として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。８６．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：７として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。８７．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：８として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。８８．哺乳動物において骨刺激活性をあらわし、本質的に配列番号：９として確認されたアミノ酸配列からなる分離ポリペプチド。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＪ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．(ａ)配列番号：１のＮ−末端から１ないし４の４アミノ酸が決失した、(ｂ) 配列番号：１のＣ−末端から１ないし２２のアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：１または配列番号：３に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等の均等物を含むポリペプチド。２．（ａ）配列番号：４のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、(ｂ) 配列番号：４のＣ−末端から約１６までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：４に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等の均等物を含むポリペプチド。３．（ａ）配列番号：５のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、(ｂ) 配列番号：５のＣ−末端から約１１までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：５に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等の均等物を含むポリペプチド。４．（ａ）配列番号：６のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、(ｂ) 配列番号：６のＣ−末端から約５までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：５に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等の均等物を含むポリペプチド。５．（ａ）配列番号：７のＮ−末端から約４までの４アミノ酸が決失した、(ｂ) 配列番号：４のＣ−末端から約１までのアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：７に対応するアミノ酸配列；または機能的に同等の均等物を含むポリペプチド。６．Ｎ−末端から約４までの４アミノ酸が決失している配列番号：８に対応するアミノ酸配列または機能的に同等のそれらの均等物を含んでなるポリペプチド。７．配列番号：９に対応するアミノ酸配列または機能的に同等のそれらの均等物を含んでなるポリペプチド。８．ポリペプチドが合成ポリペプチドであり、アミノ酸配列が約１０００ないし４０００の範囲の分子量を有する請求項１ないし請求項７に記載のポリペプチド。９．（ａ）配列番号：１または配列番号：３のＮ−末端から１ないし４の４アミノ酸が決失した、（ｂ）配列番号：１のＣ−末端から１ないし約２２のアミノ酸が決失した、または（ａ）でもあり（ｂ）でもある、配列番号：１または配列番号：３に対応するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを十分複製できる（du plicable）第１のポリペプチド；または機能的に同等であるその均等物であって、その際第１のポリペプチドは第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによってコードされている前記第１のポリペプチド、または機能的に同等であるその均等物。１０．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のアミノ酸配列を含むキメラ骨刺激因子。１１．疾患による骨減少の予防および治療に使用するための作用物質であって、請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のポリペプチドを活性成分として含む作用物質。１２．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のポリペプチドの治療的有効量を含む、骨成長を促進する薬物学的組成物。１３．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項において定義されたポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって哺乳動物の骨成長を増加する方法。１４．骨粗鬆症の治療のために請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のポリペプチドの使用。１５．哺乳動物の骨成長の促進のために請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のポリペプチドの使用。１６．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に使用するための薬剤の製造に、請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載の配列を有するポリペプチドの使用。１７．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に記載のポリペプチドの存在を調べるための診断キットであって、リポーター系に結合する前記ポリペプチドに対する抗体を含み、あらかじめ決めた量のポリペプチドとその抗体とが結合したときに、前記リポーター系が検出可能の反応を生ずる診断キット。１８．配列番号：１、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９として決定されたアミノ酸配列を有するポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドの１つを用いて合成された抗体。１９．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかの項に定義されたポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドを用いて合成された抗体。２０．請求項１ないし請求項７または請求項９のポリペプチド類のいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退により前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。２１．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかのポリペプチドの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。２２．請求項１ないし請求項７または請求項９のいずれかのポリペプチドを産生する方法であって、ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）前記組換えＤＮＡフラグメントでホスト細胞を形質転換して、前記ポリペプチドを発現し得るトランスフォーマントを分離し；ｄ）前記トランスフォーマントを培養して、前記トランスフォーマントに前記ポリペプチドを産生せしめ、生成した培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階を含んでなる方法。２３．哺乳動物における in vivo 骨刺激活性を有し、哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約１９％保存されたアミノ酸配列を有し、およびそれから最低１つのアミノ酸が決失している合成ポリペプチド、または機能的に同等の均等物。２４．哺乳動物における in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２２％保存されたアミノ酸配列を有し、およびそれから最低１つのアミノ酸が決失している合成ポリペプチド。２５．哺乳動物における in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２５％保存されたアミノ酸配列を有し、およびそれから最低１つのアミノ酸が決失している合成ポリペプチド。２６．哺乳動物における in vivo 骨刺激活性を有し、それは哺乳動物の骨のミネラル含量を高め、配列番号：１と決定されたアミノ酸配列に対して最低約２８％保存されたアミノ酸配列を有し、およびそれから最低１つのアミノ酸が決失している合成ポリペプチド。２７．前記配列から少なくとも６個のアミノ酸が決失している請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。２８．前記配列から少なくとも１１個のアミノ酸が決失している請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。２９．前記配列から少なくとも１６個のアミノ酸が決失している請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。３０．前記配列から少なくとも２１個のアミノ酸が決失している請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。３１．前記配列から少なくとも２６個のアミノ酸が決失している請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。３２．ポリペプチドが約１０００ないし４０００の範囲の分子量を有する請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチド。３３．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを十分複製できるアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、その際第１のポリペプチドは、第２のポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、コードされている前記第１のポリペプチド。３４．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のアミノ酸配列を含むキメラ骨刺激因子。３５．骨減少性疾患の予防および治療に使用するための、請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチドを含む作用物質。３６．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチドの治療的有効量を含んでなる、骨成長を促進する薬物学的組成物。３７．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に定義されるポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって、哺乳動物の骨成長を高める方法。３８．骨粗鬆症の治療のために請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６のポリペプチドの使用。３９．哺乳動物の骨成長を促進するために請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６のポリペプチドの使用。４０．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に使用するための薬剤の製造に請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載の配列を有するポリペプチドの使用。４１．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に記載のポリペプチドの存在を調べるための診断キットにおいて、あらかじめ決めた量のポリペプチドとその抗体とが結合したときに、リポーター系が検出可能の反応を生ずる診断キット。４２．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６に定義されたポリペプチドに結合し、前記ポリペプチドを用いて合成される抗体。４３．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退によって前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。４４．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６のポリペプチドのいずれかの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。４５．請求項２３、請求項２４、請求項２５、または請求項２６のいずれかのポリペプチドの製法であって、ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）ホスト細胞を前記組換えＤＮＡフラグメントで形質転換し、前記ポリペプチドを発現できるトランスフォーマントを分離し；そしてｄ）前記トランスフォーマントを培養して、前記トランスフォーマントに前記ポリペプチドを産生せしめ、生成培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階からなる製法。４６．骨刺激活性をあらわし、配列番号：１、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：４、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９として決定された配列を有するポリペプチド；およびその同族体であって前記配列の三次元構造に由来する哺乳動物の骨刺激活性が保存される限りにおいて前記配列中のアミノ酸が置換され、決失し、または付加され得る前記同族体；および前記ポリペプチド配列が配列番号：１と決定された配列を有する場合、少なくとも１つのアミノ酸がそれから決失している前記ポリペプチドの各々の結合物またはその同族体。４７．ポリペプチドが実質的に純粋であり、アミノ酸配列が約１０００ないし４０００の範囲の分子量を有する請求項４６に記載のポリペプチド。４８．請求項４５または請求項４６のアミノ酸に対応するアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを十分に複製できるアミノ酸の配列を含む第１のポリペプチド、または機能的に同等である均等物であって、その際第２ポリペプチドをコードするＤＮＡと緊縮条件下でハイブリッド化するＤＮＡによって、第１ポリペプチドがコードされている前記第１のポリペプチドまたは機能的に同等の均等物。４９．請求項４６または請求項４７のアミノ酸配列を含むキメラ骨刺激因子。５０．請求項４６または請求項４７のポリペプチドを活性成分として含む骨減少性疾患の予防および治療に使用する作用物質。５１．請求項４６または請求項４７のポリペプチドの治療的有効量を含んでなる骨成長を促進する薬物学的組成物。５２．請求項４６または請求項４７に定義されるポリペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドの治療的有効量を投与することによって骨成長を高める方法。５３．骨粗鬆症の治療のために請求項４６または請求項４７に記載のポリペプチドの使用。５４．哺乳動物の骨成長を促進するために請求項４６または請求項４７に記載のポリペプチドの使用。５５．骨成長の促進または骨粗鬆症の治療に使用するための薬剤の製造における請求項４６または請求項４７に記載の配列を有するポリペプチドの使用。５６．請求項４６または請求項４７のポリペプチドの存在を確認するための、リポーター系に結合する前記ポリペプチドに対する抗体を含んでなる診断キットであって、あらかじめ決めた量のポリペプチドと抗体とが結合するときに、前記リポーター系が検出可能の反応を生ずる前記診断キット。５７．請求項４６または請求項４７で定義されたポリペプチドに結合する抗体であって、前記ポリペプチドを用いて合成された抗体。５８．請求項４６または請求項４７のポリペプチドのいずれかの発現をコードする分離ＤＮＡフラグメント、および遺伝暗号の縮退により前記フラグメントとは異なるＤＮＡ。５９．請求項４６または請求項４７のポリペプチドのいずれかの発現をコードするＤＮＡ配列を含むベクター。６０．ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むＤＮＡフラグメントを作成し；ｂ）前記ＤＮＡフラグメントを発現ベクターに挿入し、前記ＤＮＡフラグメントを含み、複製することができる組換えＤＮＡフラグメントを生成し；ｃ）ホスト細胞を前記組換えＤＮＡフラグメントで形質転換し、前記ポリペプチドを発現できるトランスフォーマントを分離し；そしてｄ）前記トランスフォーマントを培養して、前記トランスフォーマントに前記ポリペプチドを産生せしめ、生成した培養混合物から前記ポリペプチドを回収する諸段階を含んでなる請求項４６または請求項４７のポリペプチドの製法。３７．請求項１ないし請求項７、請求項９、請求項２３、請求項２４、請求項２５、請求項２６、請求項４６または請求項４７のいずれかの項に示されるアミノ酸配列をコードする分離ＤＮＡ配列、またはその同族体であって、その配列の三次元コンフォメーションに由来する哺乳動物における骨刺激活性が、そのアミノ酸配列を含むポリペプチド；前記ＤＮＡにハイブリッド化し、哺乳動物において骨刺激活性をあらわすポリペプチドのアミノ酸配列をコードする配列；そして遺伝暗号の縮退により前記配列とは異なるＤＮＡ；に保存される限りにおいて、その配列中のアミノ酸が置換され、決失し、または付加され得る、前記分離ＤＮＡ配列、またはその同族体。