RU2119800C1 - Аналог пептида фактора гормона роста (фгр), способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции - Google Patents
Аналог пептида фактора гормона роста (фгр), способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2119800C1 RU2119800C1 RU93032314A RU93032314A RU2119800C1 RU 2119800 C1 RU2119800 C1 RU 2119800C1 RU 93032314 A RU93032314 A RU 93032314A RU 93032314 A RU93032314 A RU 93032314A RU 2119800 C1 RU2119800 C1 RU 2119800C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ser
- ala
- ile
- val
- lei
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 91
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 47
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 230000028327 secretion Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 7
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 87
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 31
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- -1 homoseryl Chemical group 0.000 claims description 21
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 8
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 8
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 8
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 claims description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N Chlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)Cl VOPWNXZWBYDODV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N Ser-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XJDMUQCLVSCRSJ-VZFHVOOUSA-N 0.000 claims 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 claims 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 claims 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 165
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 117
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 48
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 29
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 21
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 12
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 102000038461 Growth Hormone-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 9
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 9
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 description 6
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical group [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 5
- 244000309464 bull Species 0.000 description 5
- 238000013461 design Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Chemical group CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Chemical group 0.000 description 4
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 4
- WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N (2s)-2-amino-4-hydroxybutanamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CCO WEAYSODFUHQOTI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 description 3
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 3
- 101000825742 Homo sapiens Somatoliberin Proteins 0.000 description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 108010036176 Melitten Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000007126 N-alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- WTWGOQRNRFHFQD-JBDRJPRFSA-N Ser-Ala-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WTWGOQRNRFHFQD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 3
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N melitten Chemical compound NCC(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NCC(=O)NC(C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)NCC(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(C)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 VDXZNPDIRNWWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108050004290 Cecropin Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- 108010038049 Mating Factor Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N ethyl (2s,5s)-5-methylpyrrolidine-2-carboxylate;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)[C@@H]1CC[C@H](C)N1 VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N isobutyric acid Chemical compound CC(C)C(O)=O KQNPFQTWMSNSAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 2
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-1-[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetyl]amino]-5-oxopentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 SBKVPJHMSUXZTA-MEJXFZFPSA-N 0.000 description 1
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical class OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUSPCLTUKXQREV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N Ala-Ile-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O TZDNWXDLYFIFPT-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 241000252073 Anguilliformes Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N Asn-Ser Chemical group NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SONUFGRSSMFHFN-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 101800003223 Cecropin-A Proteins 0.000 description 1
- 108010010737 Ceruletide Proteins 0.000 description 1
- 241000270617 Cheloniidae Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O JZDHUJAFXGNDSB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000692870 Inachis io Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N L-homoserine lactone Chemical group N[C@H]1CCOC1=O QJPWUUJVYOJNMH-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L L-tartrate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-L 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- UEQUQVLFIPOEMF-UHFFFAOYSA-N Mianserin Chemical compound C1C2=CC=CC=C2N2CCN(C)CC2C2=CC=CC=C21 UEQUQVLFIPOEMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 230000006181 N-acylation Effects 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 102000006877 Pituitary Hormones Human genes 0.000 description 1
- 108010047386 Pituitary Hormones Proteins 0.000 description 1
- 241000269913 Pseudopleuronectes americanus Species 0.000 description 1
- 101000886298 Pseudoxanthomonas mexicana Dipeptidyl aminopeptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 241000382353 Pupa Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 101800002865 Xenopsin Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHIBWURJLGCHAY-UHFFFAOYSA-N [S].C1=CC=CC=C1 Chemical compound [S].C1=CC=CC=C1 AHIBWURJLGCHAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003659 bee venom Substances 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010352 biotechnological method Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000003857 carboxamides Chemical group 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N cecropin-a Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C1=CC=CC=C1 HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- YRALAIOMGQZKOW-HYAOXDFASA-N ceruletide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 YRALAIOMGQZKOW-HYAOXDFASA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 229940001468 citrate Drugs 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102000045304 human GHRH Human genes 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 239000002303 hypothalamus releasing factor Substances 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L malate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)C(O)CC([O-])=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- SKEFKEOTNIPLCQ-LWIQTABASA-N mating hormone Chemical compound C([C@@H](C(=O)NC(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCS(C)=O)C(=O)NC(CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CN=CN1 SKEFKEOTNIPLCQ-LWIQTABASA-N 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Chemical class 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 230000007096 poisonous effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000006485 reductive methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229940086735 succinate Drugs 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YRALAIOMGQZKOW-UHFFFAOYSA-N sulfated caerulein Natural products C=1C=CC=CC=1CC(C(N)=O)NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(O)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 YRALAIOMGQZKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000001810 trypsinlike Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Tires In General (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Amplifiers (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- General Preparation And Processing Of Foods (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины и молекулярной биологии. Создан аналог пептида фактора гормона роста, представлена новая аминокислотная последовательность. В заявке изложены также способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции. Изобретение расширяет арсенал средств для стимулирования секреции гормона роста у млекопитающих. 3 с. и 13 з.п.ф-лы, 3 табл., 2 ил.
Description
Изобретение относится к пептидам, оказывающим влияние на функцию гипофиза у человека и животных, особенно у млекопитающих. В частности, настоящее изобретение направлено на пептиды, стимулирующие секрецию гипофизом гормона роста. Пептиды настоящего изобретения сильно действуют in vivo, более стабильны в плазме, а некоторые пептиды более стабильны в водной среде при нейтральном pH, чем последовательности естественного ФГР.
Физиологам давно известно, что гипоталамус регулирует секреторную функцию аденогипофиза, продуцируя особые вещества, стимулирующие или ингибирующие секрецию каждого из гормонов гипофиза. В 1982 г. из экстрактов опухолей поджелудочной железы у человека были выделены панкреатические (опухолевые) рилизинг-факторы человека (чпФГР). Эти факторы были очищены, идентифицированы, синтезированы, испытаны, и было установлено, что они стимулируют секрецию гормона роста (ГР) гипофизом. Gufllemin R. et. al., Science 218, 585-585 (1982).
После этого были идентифицированы и синтезированы также соответствующие гипоталамические рилизинг-факторы ГР других видов животных, включая крыс, свиней, овец, быков и морских свинок, и человека.
Было обнаружено, что гипоталамический ФГР человека (чФГР) имеет такую же формулу, как чпФГР, а именно H-Тир-Ала-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Гли-Глн-Лей-Сер-Ала-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Мет-Сер-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-Сер-Асн-Глн-Глу-Арг-Гли-Ала-Арг-Ала-Арг-Лей-NH2.
Было обнаружено, что ФГР крыс (кФГР) имеет остаток Сер в положении 8 и формулу H-Гис-Ала-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Сер-Сер- Тир-Арг-Арг-Иле-Лей-Гли-Глн-Лей-Тир-Ала-Арг-Лиз-Лей-Лей-Гис-Глу-Иле-Мет-Асн-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-Арг-Асн-Глн-Глу-Глн-Арг-Сер-Арг-Фен-Асн-OH. (Например, см. патент США 4595676).
Было обнаружено, что бычий ФГР (бФГР) имеет формулу H-Тир-Ала-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Гли-Глн-Лей-Сер-Ала-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Мет-Асн-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-Арг-Асн-Глн-Глу-Глн-Гли-Ала-Лиз-Вал-Арг-Лей-NH2.
Было обнаружено, что свиной ФГР имеет остаток Сер в положении 28.
Описано, что последовательности естественного ФГР подвергаются быстрой инактивации ферментами плазмы крови. Быстрое разрушение осуществляется за счет расщепления 2-3 связи пептида дипептидилпептидазой IV типа (ДПП-IV), которая раньше называлась также дипептидиламинопептидазой IV. Frohman L.A. et. J. Clin. Invest., 78, 906-913 (1986).
Метаболическая стабильность ФГР и различные способы защиты пептидов ФГР от расщепления дипептидилпептидазой описаны в различных источниках, включая Felix et al., Synthesis and biological activity of novel linear and cyclic GRF analogs, in Peptides. Chemistry and Biology, Proc 10 th Am. Peptide Symp. Ed.GR. Morshall Leidin. pp. 465-467 (1988), где сообщается об аналогах ФГР с замещениями на дезаминированный Тир в положении 1 и/или D-Ала в положении 2, что повышает устойчивость их аминоокончаний к разрушению ферментами. Эту информацию недавно подтвердили Frohman et al., Dipeptidylpeptidase-IV and trypsin - like enzymatic degradation of human growth hormone-releasing hormone in. .. (1989). К тому же, последняя группа исследователей показала, что N-ацилирование и N-метилирование N-окончания тирозинового остатка или замещение на D-Тир-1- в ФГР полностью ингибирует расщепление во 2-3 положении. С другой стороны, альфа-метилирование Тир-1 только частично блокировало разрушение дипептидилпептидазой IV. Murphy W.A. and Coy D.H., Potent long-acting alkylated analogs of growth hormone releasing factor, Peptide Researсh, 1, 36... описывают аналоги ФГР с повышенной резистентностью к разрушению ферментами в результате N-алкилирования или N-арилалкилирования N-терминальной аминокислоты с или без сопутствующего N-алкилирования боковых групп лизинов в пептидной цепи.
Последовательности естественного ФГР имеют остаток Гли в 15 положении. Известно, что аналоги с Ала или Лей в 15 положении сильнее стимулируют секрецию ГР. Например, см. патенты США 4649131 и 4734399, а также Ling N. et al, Quo vadis? Symposium, Sanofi Group, May 29-30, 1985, Toulouse - Labege, France (pp. 309-322). Замещение Гли-15 на Вал или альфа-изомасляную кислоту также усиливает действие аналогов ФГР, Felix et al. Synthesis and biological activity of novel growth hormone relеasing factor analogs, in Peptides 1986, Walter de Gruyter & Co., Berlin-New York, pp.481-484 (1987).
A. M. Felix сообщил о программе для синтеза аналогов с повышенной и/или пролонгированной биологической активностью, включая получение и испытание Ала15 чФГР (1-29) NH2 и des NH2- Тир1, D-Ала2, Ала15 чФГР (1-29) NH2. Например, см. патенты США 4649131 и 4734399, а также A.M.Felix, E.P. Heimer, T. F. Mowles, H. Bisenfeis, P. Leund. T.J. Lambros, M. Ahmad, C.T. Waug & Paul Bruzeau; Synthesis and biolodical activity of novel drowth hormone releasind factor analogs. in Peptides 1986, pp. 481-484 (1987); Felix A.M., Wang C.T., Heimes E. , Fourmer A. Bolin D., Ahmad M., Lambros T., Mowles T. and Miller L.: Synthesis and biological activity of novel linear and cyclic GRF analogs in Peptides Chemistry and Biology. Procecdiuds of the 10th American Peptide. Symposium, Ed. G. R. Marshall. Escom Acience Publishers, Leiden, Fhe hetherlauds (1988), pp. 465-467; D. Petriderc, H.Lapierre, G. Pelletier, P. Dubrenil, P. Gaudrean, T. Mowles, A. Felix and P. Brazean: Effect of a potent analog of human growth hormone-releasing factor (hGRF) on growth hormone (GH) release and milk production of dairy cows. Meeting Abstract, p. 223, 82 nd Meeting American Dairy Sci. Assn. Columbia, MO, June 21 - 24 (1987).
Аналог ФГР с Сер во втором положении, помимо 8 других модификаций, описан Joll et al., Amphiphilic Groath Hormone-Releasing Factor (GRF) analogs; peptide design and biological activity in vivo, Biochem. Biophis, Res. Commun. 139, 763 - 770 (1986). Этот аналог по описанию проявляет 165% активности в организме овец по сравнению с бФГР (1 - 44) NH2.
В патенте США 4734399 раскрыты аналоги ФГР с замещением Ала, N-метил-D-Ала или D-Ала во 2 положении и Ала, Лей, Вал, Иле, нор-Лей, нор-Вал или бета-Ала в положении 15. См. также патент США 4649131.
В Европейской патентной заявке Coy и Murphy, публикация N 0188214, заявка N 86100127, 9 раскрыты аналоги ФГР с Лей или Фен в положении 2, помимо пептидов ФГР, замещенных различными, не встречающимися в природе аминокислотами L- или D-конфигурации в положении 2.
Аналоги ФГР с очень низкой биоактивностью, вызванной замещением Ала2 НА САРКОЗИН или Про, описаны Coy et al., Strategies in the design of synthetic agonists and antagonists of growth hormone-rebasing factor, Peptides, Vol.7, Suppe. 49-52 (1986).
Hing et al., Growth hormone releasing factor analogs with potent antagonistics activety in Peptides. Chemistry and Biology Proceeding of the 10th American Ptptide Symposium Ed. G. R. Marshall, Escom Science Publishers, heiden, The Hetherlands (1988), рр. 484-486, описали серию аналогов ФГР с замещениями либо Арг, либо различными аминокислотами в положении 2. Все они менее активны, чем исходный гормон, а некоторые из них проявляют анатагонистическую активность.
В известном изобретении представлены синтетические полипептиды ФГР, имеющие остаток Сер вместо нормального аминокислотного остатка в положениях 8 и 28 полипептида для подавления химического разрушения (дезаминирования) в водной среде. См. патентную заявку США, серийный N 07/303518, поданную 27 января 1989 г., и серийный N 07/323955, поданную 15 марта 1989 г. См. также A. R. Friedman, A.K.Schkpuriapi, D.M. Brown, R.M.Hillman, L.F.Krabill, R.A. Mortin, H.A.Lureher-Heely and D.M. Guido, Fhe Degradation of Growth Hormone Rellasing Factor Analogs in Heutral Agulons Solutian is Delated to Dlamidation of Aspargine Residuss by Serine Stabilizer, Int, J. Peptide Protein Res., 37, 14-20 (1991).
В известном изобретении представлены синтетические полипептиды ФГР с замещением остатка цистеиновой кислоты на аминокислотный остаток в положении R3 и/или R25. См. патентную заявку США, серийный N 07/150301, поданную 29 января 1988 г., и серийный N 89/00245, поданную 27 января 1989 г.
Аналог чФГР из 29 аминокислот был создан G. Velicellbi et al., Proc. Motl. Aca. Sci. USA, Vol. 83, 5397-5399 (1986), в котором на амино-конце - последовательность первых шести аминокислот, а в остатке последовательности с Сер в положении 8 имеется отличие от естественного полипептида по 13-ой аминокислоте. Аналог в форме амида и свободной кислоты имел формулу Н-Тир-Ала-Асп-Ала-Иле-Фен-Сер-Сер-Ала-Тир-Арг-Арг-Лей-Лей-Ала-Глн-Лей-Ала-Сер-Арг-Арг-Лей-Лей-Глн-Глу-Лей-Лей-Ала-Арг-NH2 /OH. При проверке на способность стимулировать секрецию гормона роста (ГР) в первичной культуре клеток передней доли гипофиза крыс установлено, что амидный аналог активнее чФГР (1-40) OH в 1,57 раза, тогда как его форма в виде свободной кислоты в том же опыте имела только 1/6 часть активности. Vall et al. (патентная заявка США, серийный N 053233, поданная 22 мая 1987 г.) описывают аналоги чФГР из 31 остатка, в которых пользуются остатком в 31 положении, обладающим функциональной группой боковой цепи, которую можно конъюгировать с отдельным протеином. В аналогах чФГР из 31 остатка возможны также замещения других остатков, встречающихся в естественной последовательности ФГР, такие как Асн или Сер в положении 8, Фен в положении 10 или Ала в положении 15. Асн или Сер могут быть представлены в 28 положении.
Описывается, что при некоторых условиях, в присутствии воды, остатки Асн в полипептидах подвергаются дезаминированию. Неясно, однако, какими правилами определяется степень дезаминирования. Например, в таком полипептиде, как трипсин, дезаминированию подвергаются только остатки Асн в последовательности Асн-Сер, в то время как другие остатки Асн не дезаминируются. См. Kossiakoff A.A., Science 240, 181-190 (1988).
Европейская патентная заявка N 86308337.4, публикация N 0220958, раскрывает класс соединений, имеющих формулу Н-Х-Про-пептид, где Х является остатком аминокислоты, встречающейся в природе. Про относится к встречающейся в природе аминокислоте, пролину, и пептидом является последовательность остатков аминокислот, определяемая как биологически активный пептид или белок. Примеры Н-Х-Про-пептидов включают Мет-Про-(рилизинг-фактор гормона роста), который можно химическим путем превратить в ФГР.
Описаны аналоги, созданные путем удлинения амино-конца пептидов, не относящихся к ФГР, и служащие различным целям, например: M.A. Tallon et al., Biochem, 26: 7767-7774 (1987), создали серию аналогов альфа-фактора спаривания дрожжей с присоединенными к амино-концу остатками: Ала, Глу-Ала, Ала-Глу-Ала или Глу-Ала-Глу-Ала. Эти пептиды использовались в исследованиях взаимосвязи структуры и активности. D. Andren et al., 20th Eur. Peptide Symp. , Tubingen, GFR, September 4-9, 1988, Symposium Abstracts, p. 33, синтезировали целиком последовательность предшественника цекропина А из 64 аминокислот вместе с несколькими более короткими пептидами, соответствующими потенциальным промежуточным продуктам. Среди них была полная последовательность цекропина, удлиненная на Ала-Про-Гли-Про на амино-конце, которую использовали для того, чтобы показать, что присоединенная часть на самом деле может отщепляться частично очищенным ферментным препаратом, напоминающим дипептидилпептидазу, полученным из куколки павлиноглазки цекропин. См. также H. Boman et al., J. Biol. Chem., 264: 5852-5860 (1989).
G. Kreil et al., Enr. J. Biochem., 111: 49-58 (1980) сообщают, что меллитин, главный компонент пчелиного яда, образуется из про-меллитина. Пред-последовательность про-меллитина состоит из шести Х-Про и пяти Х-Ала чередующихся дипептидильных остатков. Результаты, представленные Kreil et al., наводят на мысль, что превращение продукта-предшественника может происходить путем постепенного отщепления дипептидных единиц ферментом типа дипептидилпептидазы IV, присутствующим в экстрактах из ядовитых желез. C. Mollay et al. , Eur. J. Biochem., 160: 31-35 (1986). Церулеин и ксенопсин - два пептида, обнаруженные в кожном секрете у Xeropus Laevis. У их предшественников к амино-концу присоединены последовательности Фен-Ала-Асп-Гли у первого и Сер-Ала-Глу-Ала у последнего. Дипептидилпептидаза IV типа, выделенная из кожного секрета лягушки, обладает специфичностью, требуемой для отщепления этих присоединенных последовательностей от амино-конца, ведущего к образованию зрелых продуктов.
D. Julins et al., Cell, 32: 839-852 (1983). Альфа-фактор феромона спаривания является пептидом из 13 аминокислот, выделяемым альфа-клетками Saccharomyces cervisiae. Неспаривающиеся мутанты альфа-клеток, лишенные связанной с оболочкой дипептидилпептидазы, не вырабатывают нормальный альфа-фактор, а секретируют совокупность соединений, на прошедших полной обработки, со структурой Глу-Ала-Глу-Ала-альфа-фактор или Асп-Ала-Глу-Ала-альфа-фактор, обладающих заметно сниженной биологической активностью. Показано, что для нормальной обработки предшественника альфа-фактора требуется связанная с оболочкой дипептидилпептидаза и что в нормальных альфа-клетках дрожжей этот процесс может ограничивать степень созревания альфа-фактора. C.L. Choy et al. , Eur. J. Biochem., 160: 267-272 (1986). Последовательность предшественника белка, препятствующего замерзанию, у ньюфаундлендской зимней камбалы состоит из четырех Х-Про и семи Х-Ала чередующихся повторений на амино-конце. Хотя превращения этого предшественника не были исследованы, авторы предположили, что этот процесс может проходить в сыворотке крови с помощью фермента, относящегося к дипептидилпептидазам, который мог бы последовательно отщеплять дипептидильные единицы от удлиненной части с тем, чтобы высвободить зрелый белок, препятствующий замерзанию.
После зарегистрированной даты приоритета по основной заявке Subr et al. сообщили о выделении и характеристике всей протяженности цДНК клона, кодирующей ФГР у мышей. Предсказано, что мышиный ФГР должен быть пептидом, состоящим из 42 аминокислотных остатков со свободным карбоксильным концом. У этого пептида в положении 2 находится остаток Вал, что резко отличает его от ФГР других видов, в которых положение 2 занято Ала. См. Mol. Endocrinology 3: 1693-1700, 1989.
На основании соображений, высказанных другими исследователями, были получены аналоги ФГР с замещением аминокислоты в 19 положении на Лей, а именно Тре2 Ала15 Лей19 Лей27- бФГР (1-29)NH2 трифторуксусная соль, соединение N3: Лей19 Лей27- бФГР(1-29)NH2 трифторуксусная соль; Тре2 Лей19 Лей27 бФГР(1-29)NH2 трифторуксусная соль; Ала15 Лей19 Лей27 бФГР(1-29)NH2. При проверке на клетках передней доли гипофиза крыс in vitro аналоги с Лей19 (а именно Тре2 Ала15 Лей19 Лей27 бФГР (1-29)-NH2, трифторуксусная соль, соединение N3: Лей19 Лей27 бФГР (1-29)NH2 трифторуксусная соль, Тре2 Лей19 Лей27 бФГР (1-29)NH2 трифторуксусная соль и Ала15 Лей19 Лей27 бФГР(1-29)NH2, трифторуксусная соль) значительно менее активно стимулировали секрецию гормона роста (ГР), чем соответствующие аналоги Ала19. При проверке in vivo на растущих быках в дозе 10 пмоль/кг количество ГР, выделенного за двухчасовой испытательный период после введения аналогов Лей19, незначительно отличалось (p > 0,05) от уровня после введения соединений с Ала19. При проверке на стабильность в бычьей плазме соединения с Лей19 были более стабильными, чем аналоги с Ала19.
В молекуле ФГР остаток 19 расположен в области молекулы, которая имеет спиральную форму в окружении, напоминающем оболочку клетки [Clore G.M., Martin S. R. and Gronenborn A.M., J. Mol. Biol., 191, 553-561 (1986)]. Не известно, является ли роль остатка Ала19 в молекуле ФГР структурной или обусловливающей контакт рецептора с молекулой [Soto K., Hotta M., Kagegama J. , Chiang T. C. , Hu H.Y., Dong M.H. and Sing N., Biochem. Biophys, Res, Commun. , 149(2) 531 - 537 (1987); Schiffer M. and Edmundson A.B., Biophys, J., 7, 121 (1967)] Ahmed M., Lambros Т., Mowles Т. and. Miller L. "Synthesis and Biological activity of Novel Linear & Cyclic GRF Analogs" in Peptides. Chemistry and Biology, Proc. 10th Am. Peptide Symposium, Ed. G.R.Marshall, ESGOM Sci Publishers, Leiden, The Hetherland, pp. 465-467 (1988); Tou J.S., Kaempfe L. А. , Vineyard B.D., Buonomo F.C., Della-Fera M.A. and Baile C.A. "Amphiphilic Growth Hormone Releasing Factor Analogs. Peptide Design and Biological Activity in vivo", Biochem. Biophys. Res. Commun. 139/2, pp. 763-770 (1986); Coy D.H., Murphy W.A. Sueires-Diaz J., Coy E.J., Lance V.A. "Structure Activity Studies on the N-Terminal Region of Growth Hormone Releasing Factor", J. Med. Chem. 28, pp. 481-485 (1985); Felix A.M., Heimer E. P. , Mowles Т.Е., Eisenbeis H., Leung P., Lambros T.J., Ahmed M. and Wang C. T. "Synthesis and Biological Activity of Novel Growth Hormone Releasing Factor Analogs", in Peptides 1986, Walter de Gruyter & Co., Berlin-New York, pp. 481-484 (1987); Velicelebi G., Patthi S. and Kaiser E.T. "Design and Biological Activity of Analogs of Growth Hormone Releasing Factor with Potential Amphiphilic Helical Garboxyl Termini", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , 85, pp. 5397-5399 (1986); Ling N., Baird A., Wehrenberg W.B., Munegumi Т. and Ueno N. "Synthesis GRF Analogs as Competitive Antagonists of GRF Therapeutic Agents Produced by Genetic Engineering", Quo Vadis? Symposium, Sanofi Group, May 29-30, 1985, Toulouse-Labege, France, pp. 309-329; Murphy W. A. and Coy D.H. Potent long-acting alkylated analogs of growth hormone-releasing factor, Peptide Research 1, 36-41 (1988). J. С.Тоu, L.A.Kaempfe, В. D. Vineyard, F. С.Buonomo, M.A. Della-Fera and C.A.Baile; Amphiphilic Growth Hormone-Releasing Factor (GRF) analogs: peptide design and biological activity in vivo, Biochem. Biophys. Res. Commun. 139, 763-770 (1986). Термин пептид ФГР включает нетоксические соли этого соединения.
Для определения пептида ФГР использована номенклатура, приведенная в книге Schroder Lubke "The Peptides", Akademic Press (1965), где в соответствии с общепринятыми представлениями аминогруппа на амино-конце изображается слева, а карбоксильная группа на C-конце - справа. Если остатки аминокислот имеют изомеры, имеются в виду L-формы, кроме специально указанных случаев.
Настоящее изобретение представляет синтетические аналоги пептида ФГР, имеющие следующие формулы:
R-R1-R2-R3-Ала-Иле-Фен-Тре-R8-Сер-Тир-Арг-R12-R13-Лей-R15-Глн-Лей-R18-R19-Арг-R21-R22-Лей-Глн-R25-Иле-R27-R28-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-R34-R35-Глн-Глу-R38-R39-R40-Арг-R42-Арг-Лей-Z,
где R - H, алкил C1-C5 или бензол, предпочтительно H; R1 - Тир или Гис, предпочтительно Тир; R2 - Гли, Тре, Вал или Иле, предпочтительно Вал или Иле; R3 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, предпочтительно Асп; R8 - Асн или Сер, предпочтительно Сер; R12 - Лиз, N -ε- алкил или N -ε- бензил-Лиз или Арг, предпочтительно Лиз, или N -ε- алкил или N -ε-бензил-Лиз, когда R представлен C1-C5-алкилом или бензолом, R13 - Вал или Иле, предпочтительно Вал, R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Гли (предпочтительно Ала, Вал или Иле, более предпочтительно Ала), R18 - Сер или Тир, предпочтительно Сер, R19 - Вал или Иле (предпочтительно Вал), R21 - Лиз, N -ε- алкил или N -ε- бензил-Лиз или Арг, предпочтительно Лиз, или N -ε- алкил, или N -ε- бензил-Лиз, когда R представлен C1-C5-алкилом или бензолом, R22 - Ала или Лей, предпочтительно Лей, R25 - Асп или Глу, предпочтительно Асп, R27 - Мет, Иле или Лей, предпочтительно Лей, R28 - Асн или Сер, предпочтительно Сер, R34 - Сер или Арг, предпочтительно Арг, R35 - Асн или Сер, предпочтительно Асн, R38 - Арг или Глн, предпочтительно Глн, R39 - Гли или Арг, предпочтительно Гли, R40 - Ала или Сер, предпочтительно Ала, R42 - Ала, Вал или Фен, предпочтительно Вал, и Z - означает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом - COORa, -CRaO, -CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) или -CH2ORa, где Ra и Rb представлены C1-C8-алкилом или водородом; или биологически активный фрагмент этого соединения, отходящий от R на амино-конце к остатку в любом из 27-44 положений на C-конце; или гомосерин (лактон), гомо СерOH или гомоСер N (Ra) (Rb) вышеуказанного и/или нетоксическая соль вышеуказанного.
R-R1-R2-R3-Ала-Иле-Фен-Тре-R8-Сер-Тир-Арг-R12-R13-Лей-R15-Глн-Лей-R18-R19-Арг-R21-R22-Лей-Глн-R25-Иле-R27-R28-Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-R34-R35-Глн-Глу-R38-R39-R40-Арг-R42-Арг-Лей-Z,
где R - H, алкил C1-C5 или бензол, предпочтительно H; R1 - Тир или Гис, предпочтительно Тир; R2 - Гли, Тре, Вал или Иле, предпочтительно Вал или Иле; R3 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, предпочтительно Асп; R8 - Асн или Сер, предпочтительно Сер; R12 - Лиз, N -ε- алкил или N -ε- бензил-Лиз или Арг, предпочтительно Лиз, или N -ε- алкил или N -ε-бензил-Лиз, когда R представлен C1-C5-алкилом или бензолом, R13 - Вал или Иле, предпочтительно Вал, R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Гли (предпочтительно Ала, Вал или Иле, более предпочтительно Ала), R18 - Сер или Тир, предпочтительно Сер, R19 - Вал или Иле (предпочтительно Вал), R21 - Лиз, N -ε- алкил или N -ε- бензил-Лиз или Арг, предпочтительно Лиз, или N -ε- алкил, или N -ε- бензил-Лиз, когда R представлен C1-C5-алкилом или бензолом, R22 - Ала или Лей, предпочтительно Лей, R25 - Асп или Глу, предпочтительно Асп, R27 - Мет, Иле или Лей, предпочтительно Лей, R28 - Асн или Сер, предпочтительно Сер, R34 - Сер или Арг, предпочтительно Арг, R35 - Асн или Сер, предпочтительно Асн, R38 - Арг или Глн, предпочтительно Глн, R39 - Гли или Арг, предпочтительно Гли, R40 - Ала или Сер, предпочтительно Ала, R42 - Ала, Вал или Фен, предпочтительно Вал, и Z - означает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом - COORa, -CRaO, -CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) или -CH2ORa, где Ra и Rb представлены C1-C8-алкилом или водородом; или биологически активный фрагмент этого соединения, отходящий от R на амино-конце к остатку в любом из 27-44 положений на C-конце; или гомосерин (лактон), гомо СерOH или гомоСер N (Ra) (Rb) вышеуказанного и/или нетоксическая соль вышеуказанного.
Ra - предпочтительно водород (H).
Rb - предпочтительно этил.
Примерами C1-C8-алкила являются метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, октил и их изомеры.
Символ iPr относится к изопропилу.
Символ Bz1 относится к бензилу.
Воплощением этого изобретения являются пептиды ФГР, где R19 является Вал или Иле, включая пептиды Тре2 Ала15 Вал19 Лей27 бФГР(1-29)NH2, Тре2Ала15Иле19Лей27бФГР(1-29)NH2, Вал2Ала15 Иле19Лей27-бФГР(1-29)NH2,
Иле2Ала15Иле19Лей27-бФГР(1-29)NH2, Вал2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2,
Иле2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2, Гли2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2,
Гли2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2, предпочтительно пептиды Тре2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2 , Тре2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28гомоСер33-бФГР( 1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, или Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, более предпочтительны Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-ЗО)NHэтил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NHэтил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NHэтил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер-бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27-Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8 Ала15Иле19Лей27Сер28гомоСер44-бФГР(1-44) NH2, Вал2Сер8Ала15 Иле19Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2 Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Cep28гомоCep44-бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH-н-пропил или его нетоксическая соль.
Иле2Ала15Иле19Лей27-бФГР(1-29)NH2, Вал2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2,
Иле2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2, Гли2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2,
Гли2Ала15Вал19Лей27-бФГР(1-29)NH2, предпочтительно пептиды Тре2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2 , Тре2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28гомоСер33-бФГР( 1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, или Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, более предпочтительны Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-ЗО)NHэтил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NHэтил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NHэтил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер-бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44-бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27-Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8 Ала15Иле19Лей27Сер28гомоСер44-бФГР(1-44) NH2, Вал2Сер8Ала15 Иле19Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NH2 Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33-бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Cep28гомоCep44-бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37-бФГР(1-37)NH-н-пропил или его нетоксическая соль.
Самым предпочтительным пептидом ФГР предмета изобретения является Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH-этил.
Еще одним воплощением этого изобретения являются пептиды с удлиненным амино-концом, включая, например, N -α- (Тир-Ала-Фен-Про-Фен-Ала)-Тир1Тре2Сер8Ала15Иле19 Лей27Сер28-бФГР(1-29)NH2; N -α- (Лей-Про-Гли-Про-Тир-Ала)-Тир1Тре2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28-бФГР(1-29)NH2; N -α- (Ала-Про-Гли-Про-Тир-Сер)2-Тир1Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер32-бФГР(1-32)NH2; N -α- (Лей-Про-Тир-Ала-Тир-Ала) -Тир1Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Cep28-бФГP(1-29)NH2; N -α- (Гис-Ала-Тир-Про-Тир-Ала)-Тир1Иле2 Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28- бФГР(1-29)NH2; N -α- (Глу-Про-Фен-Ала-Тир- Про-Гис-Ала)-Тир1Иле2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28-бФГР(1-29)NH2; N -α- (Гис-Про-Гис-Про-Гис-Ала-Тир-Ала)-Тир1Тре2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28-бФГР(1-37)NH2; N -α- (Тир-Ала-Гли-Про-Лей- Про-Фен-Ала)2-Тир1Иле2Сер8Ала15Вал19 Лей27Сер28гомоСер32-бФГР(1-32)NH2, N -α- (Вал-Про-Арг-Про-Фен-Про-Тир-Сер)-Тир1Вал2Сер8 Ала15Иле19Лей27Сер28гомоСер33- бФГР(1-33)NHэтил; N -α- (Арг-Про-Тир-Ала-Иле-Про-Фен-Ала)-Тир1Иле2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28гомоСер30-бФГР(1-30)NHэтил; N -α- (Тир-Ала)4-Тир1Вал2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28гомоСер34-бФГР(1-34)NHCH3; N -α- (Иле-Про-Глу-Ала-Тир-Ала)-Тир1Иле2Сер8Ала15 Вал19Лей27Сер28-бФГР(1-37)NH2.
Другим воплощением этого изобретения является любое из вышеупомянутых воплощений, в котором цистеиновая кислота замещается на Асп в положении 3 и/или 25, предпочтительно в положении 3.
Соединения с Вал19 и Иле19 предмета изобретения являются такими же активными (а иногда более активными) в выделении ГР in vitro (клетками гипофиза крыс), чем аналогичные соединения с Ала19 (таблица I и рисунок 1). Они более устойчивы к протеолизу при инкубации в бычьей плазме. Доказательство повышенной метаболической стабильности соединений этого изобретения (при сравнении с естественной последовательностью ФГР в виде соединения Лей27 -бФГР (1-29)NH2), полученное при исследовании стабильности in vitro, представлено в таблице II. Соединения этого изобретения более активны in vivo в дозе 10 пмоль/кг, чем аналоги с Лей19 (рисунок 2) и, как правило, больше способствуют выделению гормонов роста и эффект сохраняется дольше, чем при введении аналогов с Ала19 и Лей19 при испытаниях на быках в дозе 30 пмоль/кг (таблица III). На рисунках 1 и 2 (испытаны трифторуксусные соли соединений) T2 означает Тре2, A15 означает Ала15, L27 означает Лей27, L19 означает Лей19, V19 означает Вал19 и I19 означает Иле19.
В таблице III и на рисунке 2 освещено повышение in vivo силы действия соединений этого изобретения при R19 = Вал. Например, из сопоставления силы действия in vivo специалисту должно быть ясно, что в дозе 10 пмоль/кг (рисунок 2) Тре2 Ала15 Вал19 Лей27 бФГР (1-29)NH2, трифторуксусная соль и Тре2Ала15Иле19Лей27 -бФГР (1-29) NH2, трифторуксусная соль так же, как в дозе 30 пмоль/кг (таблица III), соединения с Вал19 и Иле19 обладают большей биоактивностью, чем естественный ФГР.
Для технологии промышленного производства предпочтительнее, чтобы остаток на C-конце был представлен гомосерином, лактоном гемосерина, амидом гомосерина или C1-C8-алкилом (предпочтительнее C1-C4-алкилом), вторичными или третичными амидами гомосерина.
Синтетические аналоги пептида ФГР синтезируются соответствующим способом, включая, например, способы, раскрытые в патенте США 4529595 (столбец 2, строка 35 по столбец 5, строка 64) и патенте США 4689318 (со столбца 2, строки 23 по столбец 9, строку 13), включенные в настоящую заявку в порядке ссылки.
Методика A представляет собой синтез аналогов пептида ФГР предмета изобретения.
Методика A
Пептиды синтезируются твердофазным способом с применением синтезатора пептидов Applied Biosystems 430 A (Applied Biosystems, Foster City, California), используя циклы синтеза, предоставляемые этими системами. Аминокислоты и другие реактивы получены от этой же фирмы и из других коммерческих источников. Для получения карбоксамидов на C-конце использовалась химическая процедура Вос создания последовательностей с двойными спаренными протоколами и производилось прикрепление к исходной пара-метилбензгидриламидной смоле. Для получения кислот на C-конце применялась соответствующая смола РАМ. Присоединение аспарагина, глутамина и аргинина производилось при помощи ранее образованных гидроксибензтриазоловых эфиров. Все другие аминокислоты присоединялись при помощи ранее образованных симметричных ангидридов Вос аминокислот.
Пептиды синтезируются твердофазным способом с применением синтезатора пептидов Applied Biosystems 430 A (Applied Biosystems, Foster City, California), используя циклы синтеза, предоставляемые этими системами. Аминокислоты и другие реактивы получены от этой же фирмы и из других коммерческих источников. Для получения карбоксамидов на C-конце использовалась химическая процедура Вос создания последовательностей с двойными спаренными протоколами и производилось прикрепление к исходной пара-метилбензгидриламидной смоле. Для получения кислот на C-конце применялась соответствующая смола РАМ. Присоединение аспарагина, глутамина и аргинина производилось при помощи ранее образованных гидроксибензтриазоловых эфиров. Все другие аминокислоты присоединялись при помощи ранее образованных симметричных ангидридов Вос аминокислот.
Применялась следующая защита боковой цепи:
Арг, тосил
Асп, бензол
Цис, 4-метилбензол
Глу, бензол
Сер, бензол
Тре, бензол
Тир, 4-бромкарбобензокси
Лиз, 2-хлоркарбобензокси
Снятие защиты Вос производится трифторуксусной кислотой (ТФК) в метиленхлориде. Когда хотят получить аналоги, содержащие гомосерин, нужно включить метионин при помощи твердой фазы, а затем модифицировать цианогенбромидом после расщепления фтористым водородом способами, хорошо известными специалистам. Это отщепление цианогенбромида превращает метионин в лактон гомосерина на C-конце пептида. Обработкой соответствующим амином в таком растворителе, как метанол или диметилформамид, он может быть превращен в гомосеринамидный пептид. C - терминальный гомоСер (лактон), гомоСерOH и гомоСерN(Ra)(Rb) аналоги можно получить способами, раскрытыми в Kempeet al., Bioferhnology, vоl. 4, pp. 565-563 (1986).
Арг, тосил
Асп, бензол
Цис, 4-метилбензол
Глу, бензол
Сер, бензол
Тре, бензол
Тир, 4-бромкарбобензокси
Лиз, 2-хлоркарбобензокси
Снятие защиты Вос производится трифторуксусной кислотой (ТФК) в метиленхлориде. Когда хотят получить аналоги, содержащие гомосерин, нужно включить метионин при помощи твердой фазы, а затем модифицировать цианогенбромидом после расщепления фтористым водородом способами, хорошо известными специалистам. Это отщепление цианогенбромида превращает метионин в лактон гомосерина на C-конце пептида. Обработкой соответствующим амином в таком растворителе, как метанол или диметилформамид, он может быть превращен в гомосеринамидный пептид. C - терминальный гомоСер (лактон), гомоСерOH и гомоСерN(Ra)(Rb) аналоги можно получить способами, раскрытыми в Kempeet al., Bioferhnology, vоl. 4, pp. 565-563 (1986).
После завершения синтеза с пептидов снимают защиту и отделяют их от смолы при помощи безводного фтористого водороводорода, содержащего 10% пара-крезола. Отщепление защитных групп от боковых цепей и пептида от смолы проводится при температуре 0oC или ниже, предпочтительно при -20oC в течение 30 минут и в течение следующих 30 минут при 0oC. После удаления хлористого водорода смолу с пептидом промывают эфиром, пептид экстрагируют ледяной уксусной кислотой и лиофилизируют. Перед очисткой пептиды, содержащие цистеин, подвергают оксидированию надмуравьиной кислотой при температуре в диапазоне от -10oC до 10oC, предпочтительно при 0oC, до получения соединения, содержащего цистеиновую кислоту, как описано Стюартом и соавт., Solid Phase Peptide Synthesis, p. 113, Pieree Chemical Company, Rorkford, Illinois, 1984.
Превращение в C-терминальные лактоны и амиды гомосерина проводится так, как описано выше.
Очистка проводится при помощи ионообменной хроматографии на катионнообменной колонке Synchroprep 8-300 (Synchrom Inc. Linden, Indiana).
Пептид вводится в буфере из 20 миллимолярного Трис (pH 6,8) в 20% ацетонитриле и элюируется градиентом 0-0,3 молярного хлористого натрия в том же растворителе. Дальнейшая очистка соединений и освобождение от соли происходит при жидкостной хроматографии с обращенными фазами на колонке Vydac C-18 (Separation Group, Hesperia, California) при помощи градиента вода/ацетонитрил, содержащих в каждой фазе 0,1 ТФК. Нужные фракции собирают и лиофилизируют, получая трифторуксусную соль заданного пептида ФГР. По желанию трифторуксусная соль может превращаться в другие подходящие соли при помощи хорошо известных ионообменных способов.
Пептиды подвергают гидролизу в вакууме способом фракционного испарения в Pico-Tag Work Station (Waters), пользуясь постоянно кипящей соляной кислотой (Пирс), в присутствии фенола в качестве акцептора при 110oC в течение 24 часов. Гидролизаты исследуются в аминокислотном анализаторе Бекмана, модель 6300. Содержание пептида вычисляется по норлейцину, который используют как внутренний стандарт, так как концентрация его известна.
Масс-спектрометрию осуществляли масс-спектрометром Applied Biosystems Time of Flight Mass Spectrometer.
Примеры
Пример 1.
Пример 1.
Получение соединения N 1 - трифторуксусная соль
Тре2 Ала15 Вал19 Лей26 бФГР (1-29)NH2.
Тре2 Ала15 Вал19 Лей26 бФГР (1-29)NH2.
Синтез пептида аналога ФГР, имеющего формулу
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот (теоретические показатели даны в скобках): Асн 4,06 (4); Тре 1,57 (2), Сер 1,64 (2); Глу 2,10 (2); Ала 2,25 (2); Вал 2,00 (2); Иле 1,68 (2); Лей 5,15 (5), Тир 1,88 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 2,00 (2), Арг 2,94 (3).
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот (теоретические показатели даны в скобках): Асн 4,06 (4); Тре 1,57 (2), Сер 1,64 (2); Глу 2,10 (2); Ала 2,25 (2); Вал 2,00 (2); Иле 1,68 (2); Лей 5,15 (5), Тир 1,88 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 2,00 (2), Арг 2,94 (3).
Пример 2.
Получение соединения N 2 - трифторуксусная соль
Тре2 Ала15 Иле19 Лей27 - бФГР (1-29)NH2.
Тре2 Ала15 Иле19 Лей27 - бФГР (1-29)NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле/Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,09 (4); Тре 1,98 (2); Сер 1,64 (2); Глу 2,05 (2); Ала 2,25 (2); Вал 1,0 (1); Иле 2,84 (3); Лей 5,07 (5); Тир 1,87 (2); Фен 0,82 (1); Лиз 1,97 (2); Арг 2,94 (3).
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле/Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,09 (4); Тре 1,98 (2); Сер 1,64 (2); Глу 2,05 (2); Ала 2,25 (2); Вал 1,0 (1); Иле 2,84 (3); Лей 5,07 (5); Тир 1,87 (2); Фен 0,82 (1); Лиз 1,97 (2); Арг 2,94 (3).
Пример 3.
Получение соединения N 3 - трифторуксусная соль
Тре2 Ала15 Лей19 Лей27 - бФГР (1-29)NH2.
Тре2 Ала15 Лей19 Лей27 - бФГР (1-29)NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,01 (4); Тре 1,87 (2); Сер 1,72 (2); Глу 2,07 (2); Ала 1,93 (2); Вал 1,04 (1); Иле 1,88 (2); Лей 6,11 (6); Тир 1,90 (2); Фен 0,93 (1); Лиз 2,03 (2); Арг 3,09 (3).
H-Тир-Тре-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,01 (4); Тре 1,87 (2); Сер 1,72 (2); Глу 2,07 (2); Ала 1,93 (2); Вал 1,04 (1); Иле 1,88 (2); Лей 6,11 (6); Тир 1,90 (2); Фен 0,93 (1); Лиз 2,03 (2); Арг 3,09 (3).
Пример 4.
Получение соединения N 4 - трифторуксусная соль
Вал2 Ала15 Лей19 Лей27 -бФГР (1-29)NH2.
Вал2 Ала15 Лей19 Лей27 -бФГР (1-29)NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
H-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf - 252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3454,6; теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,01 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,68 (2); Глу 2,03 (2); Ала 2,00 (2); Вал 1,85 (2); Иле 1,88 (2); Лей 6,11 (6); Тир 1,94 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 1,97 (2); Арг 3,11 (3).
H-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf - 252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3454,6; теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические показатели даны в скобках: Асп 4,01 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,68 (2); Глу 2,03 (2); Ала 2,00 (2); Вал 1,85 (2); Иле 1,88 (2); Лей 6,11 (6); Тир 1,94 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 1,97 (2); Арг 3,11 (3).
Пример 5.
Получение соединения N 5 - трифторуксусная соль
Иле2Ала15Лей19Лей27-бФГР (1-29)NH2.
Иле2Ала15Лей19Лей27-бФГР (1-29)NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
Н-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m / z для [M + H] : наблюдавшийся 3468,6; теоретический 3466,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,02 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,67 (2); Глу 2,05 (2); Ала 2,00 (2); Вал 0,94 (1); Иле 2,83 (3); Лей 6,12 (6); Тир 1,92 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,99 (2); Арг 3,13 (3).
Н-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Лей-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m / z для [M + H] : наблюдавшийся 3468,6; теоретический 3466,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,02 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,67 (2); Глу 2,05 (2); Ала 2,00 (2); Вал 0,94 (1); Иле 2,83 (3); Лей 6,12 (6); Тир 1,92 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,99 (2); Арг 3,13 (3).
Пример 6.
Получение соединения N 6 - трифторуксусная соль
Вал2Ала15Иле19Лей27 бФГР (1-29) NH2.
Вал2Ала15Иле19Лей27 бФГР (1-29) NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
Н-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей- Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]: наблюдавшийся 3453,4: теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,03 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,03 (2); Ала 2,04 (2); Вал 1,89 (2); Иле 2,85 (3); Лей 5,11 (5); Тир 1,95 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,99 (2); Арг 3,08 (3).
Н-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей- Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]: наблюдавшийся 3453,4: теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,03 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,03 (2); Ала 2,04 (2); Вал 1,89 (2); Иле 2,85 (3); Лей 5,11 (5); Тир 1,95 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,99 (2); Арг 3,08 (3).
Пример 7.
Получение соединения N 7 - трифторуксусная соль
Иле2Ала15Иле19Лей27 - бФГР (1-29) NH2.
Иле2Ала15Иле19Лей27 - бФГР (1-29) NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
Н-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3469,7; теоретический 3466,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках:
Асп 4,03 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,06 (2); Ала 2,04 (2); Вал 0,94 (1); Иле 3,78 (2); Лей 5,12 (5); Тир 1,94 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,09 (3).
Н-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Иле-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3469,7; теоретический 3466,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках:
Асп 4,03 (4); Тре 0,94 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,06 (2); Ала 2,04 (2); Вал 0,94 (1); Иле 3,78 (2); Лей 5,12 (5); Тир 1,94 (2); Фен 0,95 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,09 (3).
Пример 8.
Получение соединения N 8 - трифторуксусная соль
Вал2Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-29) NH2.
Вал2Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-29) NH2.
Синтез аналога пептида ФГР, имеющего формулу
Н-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3440,6; теоретический 3438,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках:
Асп 4,02 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,67 (2); Глу 2,08 (2); Ала 2,00 (2); Вал 2,78 (3); Иле 1,86 (2); Лей 5,09 (5); Тир 1,92 (2); Фен 1,04 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,05 (3).
Н-Тир-Вал-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей-Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3440,6; теоретический 3438,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках:
Асп 4,02 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,67 (2); Глу 2,08 (2); Ала 2,00 (2); Вал 2,78 (3); Иле 1,86 (2); Лей 5,09 (5); Тир 1,92 (2); Фен 1,04 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,05 (3).
Пример 9.
Получение соединения N 9 - трифторуксусная соль
Иле2Ала15Вал19Лей27 бФГР (1-29) NH2.
Иле2Ала15Вал19Лей27 бФГР (1-29) NH2.
Синтез аналога пептида, ФГР, имеющего формулу
H-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей- Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3454,9; теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,02 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,04 (2); Ала 2,06 (2); Вал 1,86 (2); Иле 2,84 (3); Лей 5,10 (5); Тир 1,94 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,07 (3).
H-Тир-Иле-Асп-Ала-Иле-Фен-Тре-Асн-Сер-Тир-Арг-Лиз-Вал-Лей- Ала-Глн-Лей-Сер-Вал-Арг-Лиз-Лей-Лей-Глн-Асп-Иле-Лей-Асн-Арг-NH2 (в виде соли CF3COOH), проводится способом "шаг-за-шагом" по методике A. Масс-спектральный анализ (методом десорбции плазмы Cf-252), m/z для [M + H]+: наблюдавшийся 3454,9; теоретический 3452,1. Анализ аминокислот, теоретические значения даны в скобках: Асп 4,02 (4); Тре 0,93 (1); Сер 1,69 (2); Глу 2,04 (2); Ала 2,06 (2); Вал 1,86 (2); Иле 2,84 (3); Лей 5,10 (5); Тир 1,94 (2); Фен 0,94 (1); Лиз 1,98 (2); Арг 3,07 (3).
Способом "шаг-за-шагом" по методике A также можно получить следующие пептиды:
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH этил
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH этил
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH этил
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH этил
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH-H-пропил
Методика B
Помимо получения аналогов ФГР твердофазными способами эти аналоги можно получать при помощи рекомбинантной ДНК по методике, описанной для Лей27-бФГР (1-44)OH (Европейская патентная заявка 0212531), со следующими модификациями в сегменте ДНК, кодирующем бФГР (1-44)OH: кодоны Ала2, Асн8, Гли15 и Асн28 замещены кодонами, например, (АЦТ) Тре2 или (АТТ) Иле2, или (ГТТ) Вал2, (АГТ) Сер8, (ГЦТ) Ала15, (АГТ) Сер28 соответственно.
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30-бФГР(1-30)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH2
Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер44-бФГР (1-44)NH2
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH этил
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH этил
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер30-бФГР (1-30)NH этил
Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27 Сер28гомоСер33-бФГР (1-33)NH этил
Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27 Сер28гомоСер37-бФГР (1-37)NH-H-пропил
Методика B
Помимо получения аналогов ФГР твердофазными способами эти аналоги можно получать при помощи рекомбинантной ДНК по методике, описанной для Лей27-бФГР (1-44)OH (Европейская патентная заявка 0212531), со следующими модификациями в сегменте ДНК, кодирующем бФГР (1-44)OH: кодоны Ала2, Асн8, Гли15 и Асн28 замещены кодонами, например, (АЦТ) Тре2 или (АТТ) Иле2, или (ГТТ) Вал2, (АГТ) Сер8, (ГЦТ) Ала15, (АГТ) Сер28 соответственно.
Дополнительно, для аналогов ФГР, содержащих цистеиновую кислоту3, кодон ГАТ (Асп3) замещен на кодон ТГТ для Цис3. После экспрессии белка и отщепления цианогенбромидом в муравьиной кислоте, как описано в вышеуказанной европейской патентной заявке, при температуре около 0oC к раствору добавляется перекись водорода, чтобы окислить остаток Цис до цистеиновой кислоты. Затем пептид очищается описанными способами.
Дополнительно, для аналогов ФГР с удлиненным амино-концом, добавляются следующие сегменты ДНК, кодирующие удлинение амино-конца: (ТАТАЦТ) для Тир-Тре, (ТАТАЦТ)n для (Тир-Тре)n или (ТАТАГТ) для Тир-Сер, (ТАТАГТ)n для (Тир-Сер)n, или (ТАТАГТТАТАЦТ) для Тир-Сер-Тир-Тре или (ТАТАЦТТАТАГТ) для Тир-Тре-Тир-Сер, (ГАТГЦТ) для Асп-Ала и т.д. и т.п. Ген для белка предшественника встраивается в экспрессирующий вектор E. coli. После экспрессии изолята белка инклюзионных телец и последующего их расщепления цианогенбромидом в муравьиной кислоте, как описано в указанной европейской патентной заявке, муравьиная кислота удаляется в вакууме. Неочищенный пептид в последующем подвергается очистке описанными способами.
Получение соединений, являющихся предметом изобретения, при помощи известных методик с рекомбинантной ДНК возможно потому, что заявленные пептиды целиком состоят из аминокислот, встречающихся в природе. Это отличает их от известных аналогов, содержащих некодирующиеся ДНК компоненты, такие как D-Ала и/или дезаминированный Тир, которые требуют для промышленного производства дорогостоящего химического синтеза или сочетания методов генной инженерии с химическими реакциями.
Рекомбинантный микроорганизм-хозяин, использованный в этом изобретении, создан методами рекомбинантной ДНК, хорошо известными специалистам и изложенными, например, в Molecular Cloning, T. Maniatis et al. Cold Spring Horbor Laboratory (1982), B. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley & Sons (1984), ссылка на которые дана в этом тексте.
Аналоги с гомоСер (лактона, гомоСерOH и гомоСер N(Ra)(Rb) на C-конце можно получить способами, раскрытыми в Kempe et al. Biotechnology, vol. 4, pp. 565 - 568 (1986).
Методика C
Эта методика относится к получению N-алкилированных аналогов ФГР, описанных в предмете изобретения. Эти пептиды создаются при помощи либо химических, либо биотехнологических методов (методика A или методика B соответственно). После этого N-алкилирование можно производить известными способами, напр. Murphy W.A. and Coy D.H. Pаtent long-acting alkylated aralogs of growth hormone-releasing faсtor, Peptide Research 1, 36 - 41 (1988), V. Sythyamoorthy et al. Reductive methylation of botnlinum neurotoxin types A and B. Mol. Cell Biochem. 83, 65 - 72 (1988).
Эта методика относится к получению N-алкилированных аналогов ФГР, описанных в предмете изобретения. Эти пептиды создаются при помощи либо химических, либо биотехнологических методов (методика A или методика B соответственно). После этого N-алкилирование можно производить известными способами, напр. Murphy W.A. and Coy D.H. Pаtent long-acting alkylated aralogs of growth hormone-releasing faсtor, Peptide Research 1, 36 - 41 (1988), V. Sythyamoorthy et al. Reductive methylation of botnlinum neurotoxin types A and B. Mol. Cell Biochem. 83, 65 - 72 (1988).
По методике C можно получить также следующие пептиды:
N-(-iPr-Тир1Тре2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Вал15Иле19Лей27Сер28-бФГР (1-29)NH2
N -ε- iPr-Тир1Тре2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-40)NH2
N -ε- Bz1-Тир1Тре2Сер8N -ε- Bz1-Лиз12,21, Вал15Иле19Иле27Сер28 -бФГР (1-32)NH2
N -ε- iPr-Тир1Иле2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-40)NH2
N -ε- Bz1-Тир1Вал2Сер8N -ε- Bz1-Лиз12,21 Вал15Вал19Иле27Сер28 -бФГР (1-32)NH2
Все синтетические пептиды ФГР предмета изобретения, включая пептиды, приведенные в примерах, считаются биологически активными и применимыми для стимуляции секреции ГР гипофизом.
N-(-iPr-Тир1Тре2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Вал15Иле19Лей27Сер28-бФГР (1-29)NH2
N -ε- iPr-Тир1Тре2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-40)NH2
N -ε- Bz1-Тир1Тре2Сер8N -ε- Bz1-Лиз12,21, Вал15Иле19Иле27Сер28 -бФГР (1-32)NH2
N -ε- iPr-Тир1Иле2Сер8N -ε- iPr-Лиз12,21, Ала15Вал19Лей27-бФГР (1-40)NH2
N -ε- Bz1-Тир1Вал2Сер8N -ε- Bz1-Лиз12,21 Вал15Вал19Иле27Сер28 -бФГР (1-32)NH2
Все синтетические пептиды ФГР предмета изобретения, включая пептиды, приведенные в примерах, считаются биологически активными и применимыми для стимуляции секреции ГР гипофизом.
Дозировки в пределах от приблизительно 10 нанограммов до приблизительно 5 микрограммов этих пептидов на килограмм (кг) массы тела считаются особенно эффективными для того, чтобы вызвать секрецию ГР.
Стимуляция секреции ГР такими пептидами должна вызвать заметное увеличение роста у людей, быков и других животных с нормальным уровнем ГР. Более того, введение пептидов должно изменить содержание жира в теле и модифицировать другие метаболические, иммунологические процессы и ход развития организма. Например, эти аналоги могут оказаться полезными как средство стимуляции анаболических процессов у человека при некоторых состояниях, таких как после получения ожогов. В качестве другого примера, эти аналоги могут вводиться теплокровным животным, которых выращивают с коммерческой целью, таким как цыплята, индейки, свиньи, козы, крупный рогатый скот и овцы, и их можно применять в сельском хозяйстве для разведения рыбы и других холоднокровных морских животных, например морских черепах и угрей, и амфибий, для того, чтобы ускорить их рост и повысить соотношение белка к жиру, достигаемые путем скармливания эффективного количества этих пептидов. Эти аналоги можно использовать для стимуляции иммунных функций у человека и животных, для лечения диабета, возникшего в результате нарушения образования гормона роста, или для улучшения заживления переломов, ран или ожогов, или при остеопорозе. Эти аналоги можно применять для усиления роста волос.
Суточные дозировки в пределах от 10 нанограммов/кг до приблизительно 50 микрограммов/кг массы тела считаются особенно эффективными для повышения лактации, роста и стимуляции иммунных функций.
Для введения людям и животным эти синтетические пептиды должны быть очищены, по крайней мере, на 93% и предпочтительно на 98%.
Эти синтетические пептиды или их нетоксические соли, в сочетании с фармацевтически или ветеринарно-приемлемыми носителями для образования фармацевтической композиции предпочтительно в виде препаратов пролонгированного действия, могут вводиться животным, включая людей, внутривенно, подкожно, внутримышечно, чрезкожно, напр. интраназально. Врач может назначить введение этих пептидов для стимуляции секреции ГР, если больному требуется такое лечение. Необходимые дозировки будут варьировать в зависимости от особенностей состояния, по поводу которого назначено лечение, тяжести заболевания и необходимой продолжительности лечения.
Такие пептиды часто вводятся в виде нетоксических солей, таких как кислые сложные соли или комплексы с металлами, напр. с цинком, железом и т. п. (которые рассматриваются как соли в применении к этой заявке). Примерами таких кислых сложных солей являются гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, ацетат, цитрат, бензоат, сукцинат, малат, аскорбат, тартрат и т. п. Если активный ингредиент нужно вводить внутривенно в изотоническом солевом растворе, можно пользоваться фосфатным буфером или подобными растворами.
Эти пептиды должны вводиться людям по назначению врача, и фармацевтическая композиция обычно должна содержать пептид в сочетании с общепринятым, твердым или жидким фармацевтически приемлемым носителем. Обычно основная дозировка должна составлять от приблизительно 100 нанограммов до приблизительно 50 микрограммов на килограмм массы тела реципиента.
Хотя данное изобретение описано применительно к предпочтительным его воплощениям, необходимо понимать, что различные изменения и модификации, как должно быть очевидно любому специалисту, можно осуществить, не выходя за рамки этого изобретения, изложенные в пунктах формулы изобретения, данных в приложении. Например, модификации в цепи пептида, в частности удаление одного-двух остатков с C-конца пептида, можно произвести в соответствии с известными экспериментальными приемами, чтобы создать пептиды, сохраняющие значительную часть биологической активности этого пептида, и такие пептиды должны рассматриваться как находящиеся в рамках данного изобретения. Более того, можно включить добавки на C-конце и/или на амино-конце, и/или в принципе эквивалентными остатками можно заменить остатки, встречающиеся в природе, как известно из общих приемов химии пептидов, чтобы получить другие аналоги, обладающие повышенной резистентностью к протеолизу, например, и также сохраняющие, по крайней мере, значительную часть активности заявленного полипептида, не выходя за рамки этого изобретения, так, как это иллюстрируют соединения 1 - 15. Таким же образом известные замещения в карбоксильной части на C-конце, например, низшим алкиламидом также дают эквивалентные молекулы.
Таким же образом, как здесь описано, пептиды ФГР формулы
где 4 R' - (X-Y)-(X'-Y)n, где n - 0 - 20 предпочтительно 0 - 10, X - любая встречающаяся в природе аминокислота, Y - аланин, серин, треонин или пролин, и если n = 0, тогда Y выбирается из группы, состоящей из аланина, серина или треонина, X' - любая встречающаяся в природе аминокислота, кроме пролина или гидроксипролина, R1 - Тир или Гис, - Ала, Гли, Тре, Вал или Иле, R3 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, R8 - Асн или Сер, - Лиз или Арг, R13 - Вал или Иле, R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Глн, R18 - Сер или Тир, R19 - Вал или Иле, R21' - Лиз или Арг, R22 - Ала или Лей, R25 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, R27 - Мет, Иле или Лей, R28 - Асн или Сер, R34 - Сер или Арг, R35 - Асн или Сер, R38 - Арг или Глн, R39 - Глн или Арг, R40 - Ала или Сер, R42 - Ала, Вал или Фен, и
Z обозначает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом -COORa, -CRaO, -CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) или -CH2ORa, где Ra и Rb являются C1-C8-алкилом или водородом; или биологически активным фрагментом, распространяющимся от R на амино-конце к любому из остатков, занимающих положение 27 - 44 на C-конце или гомоСер(лактоном), гомоСерOH или гомоСер N(Ra)(Rb) вышеуказанного и/или нетоксическую соль вышеуказанного;
могут быть созданы в соответствии с известными на сегодняшний день экспериментальными приемами, чтобы образовать пептиды, сохраняющие самые существенные части биологической активности пептида, и такие пептиды рассматриваются как другой аспект раскрытого здесь изобретения.
где 4 R' - (X-Y)-(X'-Y)n, где n - 0 - 20 предпочтительно 0 - 10, X - любая встречающаяся в природе аминокислота, Y - аланин, серин, треонин или пролин, и если n = 0, тогда Y выбирается из группы, состоящей из аланина, серина или треонина, X' - любая встречающаяся в природе аминокислота, кроме пролина или гидроксипролина, R1 - Тир или Гис, - Ала, Гли, Тре, Вал или Иле, R3 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, R8 - Асн или Сер, - Лиз или Арг, R13 - Вал или Иле, R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Глн, R18 - Сер или Тир, R19 - Вал или Иле, R21' - Лиз или Арг, R22 - Ала или Лей, R25 - Асп, Глу или цистеиновая кислота, R27 - Мет, Иле или Лей, R28 - Асн или Сер, R34 - Сер или Арг, R35 - Асн или Сер, R38 - Арг или Глн, R39 - Глн или Арг, R40 - Ала или Сер, R42 - Ала, Вал или Фен, и
Z обозначает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом -COORa, -CRaO, -CONHNHRa, -CON(Ra)(Rb) или -CH2ORa, где Ra и Rb являются C1-C8-алкилом или водородом; или биологически активным фрагментом, распространяющимся от R на амино-конце к любому из остатков, занимающих положение 27 - 44 на C-конце или гомоСер(лактоном), гомоСерOH или гомоСер N(Ra)(Rb) вышеуказанного и/или нетоксическую соль вышеуказанного;
могут быть созданы в соответствии с известными на сегодняшний день экспериментальными приемами, чтобы образовать пептиды, сохраняющие самые существенные части биологической активности пептида, и такие пептиды рассматриваются как другой аспект раскрытого здесь изобретения.
Расширенная часть (R') пептида ФГР, соответствующего представленному изобретению, имеет аминокислотную последовательность, соответствующую формуле
(X-Y)-(X'-Y)n,
где n представляет количество последовательно связанных X'-Y групп, это количество представлено от 0 до 20 таких групп предпочтительно от 0 до 10 групп;
X избирается из группы, состоящей из любых аминокислот, встречающихся в природе;
Y избирается из группы, состоящей из пролина, аланина, серина и треонина, кроме случаев с n = 0, когда Y избирается из группы, состоящей из аланина, серина и треонина;
X' избирается из группы, состоящей из любых встречающихся в природе аминокислот, кроме пролина и гидроксипролина.
(X-Y)-(X'-Y)n,
где n представляет количество последовательно связанных X'-Y групп, это количество представлено от 0 до 20 таких групп предпочтительно от 0 до 10 групп;
X избирается из группы, состоящей из любых аминокислот, встречающихся в природе;
Y избирается из группы, состоящей из пролина, аланина, серина и треонина, кроме случаев с n = 0, когда Y избирается из группы, состоящей из аланина, серина и треонина;
X' избирается из группы, состоящей из любых встречающихся в природе аминокислот, кроме пролина и гидроксипролина.
Соответственно этой формуле, когда n=1, имеются два Y остатка. Далее, в одном воплощении может быть до двадцати одного Y остатка и двадцати X' остатков. Отдельные Y остатки и X' остатки соответственно могут быть любым остатком группы, из которой они избираются. То есть все эти отдельные Y остатки не должны быть одними и теми же в данном воплощении. Таким же образом в воплощении, содержащем более одного X' остатка, каждый отдельный остаток X' в молекуле может быть остатком любой аминокислоты, кроме пролина и гидроксипролина, безотносительно того, какими остатками могут быть другие X' остатки. Каждый отдельный остаток Y и X соответственно должен соответствовать правилам, установленным для этой частной группы, и необходимо только, чтобы различные отдельные остатки в конкретных положениях следовали правилам, оговоренным выше.
Рисунок 1
Действие аналогов Тре2Ала15Лей27-бФГР (1-29)NH2 на секрецию гормона роста (ГР) в культуре клеток гипофиза крысы in vitro. Анализ производили по методике Frohman and Downs, Methods Enzymol. 124, 371-389 (1986).
Действие аналогов Тре2Ала15Лей27-бФГР (1-29)NH2 на секрецию гормона роста (ГР) в культуре клеток гипофиза крысы in vitro. Анализ производили по методике Frohman and Downs, Methods Enzymol. 124, 371-389 (1986).
Отметьте, что замещение Лей19 снижает способность аналога стимулировать секрецию ГР, тогда как модификации Вал19 и Иле19 либо усиливают, либо оставляют неизменной биоактивность аналогов по сравнению с Тре2Ала15Лей27-бФГР (1-29)NH2, Лей27-бФГР (1-29)NH2 служил стандартом в этом анализе.
По оси абсцисс - концентрации аналогов в нМ.
По оси ординат - концентрация ГР крыс в нг/на лунку /за 4 часа.
Рисунок 2
Средняя концентрация гормона роста (ГР) в сыворотке у быков породы Голстейн на мучном вскармливании после внутривенной инъекции (10 пмоль/кг) аналогов ФГР. Анализ производился по методике, описанной Moseley et al. J. Endocrinol, 117, 252-9(1988).
Средняя концентрация гормона роста (ГР) в сыворотке у быков породы Голстейн на мучном вскармливании после внутривенной инъекции (10 пмоль/кг) аналогов ФГР. Анализ производился по методике, описанной Moseley et al. J. Endocrinol, 117, 252-9(1988).
Бычий ФГР (1-44) NH2 использовался в качестве стандарта для этого анализа.
По оси абсцисс - время в минутах.
По оси ординат - ГР сыворотки (нг/мл).
Справа от графика надпись: соединение.
Claims (16)
1. Аналог пептида фактора гормона роста (ФГР) на основе первичной аминокислотной последовательности естественного пептида ФГР, имеющий в положении 2 аминокислотный остаток Гли, Тре, Вал или Иле в положении 15 - Ала, Вал, Лей, Иле, а в положении 19 - Вал или Иле.
2. Аналог пептида ФГР по п. 1, имеющий в положении 2 - Тре, Вал, или Иле.
3. Аналог пептида ФГР по п. 1, имеющий формулу
R-R1-R2-R3 - Ала-Иле-Фен-Тре-R8 -Сер-Тир-Арг-R12-R13-Лей-R15-Глн-Лей-R18-R19-Арг- R21-R22-Лей-Глн-R25-Иле-R27-R28- Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-R34-R35-Глн-Глу-R38- R39-R40-Арг-R42-Арг-Лей-Z,
где
R - H, алкил C1-C5 или бензол;
R1 - Тир или Гис;
R2 - Гли, Тре, Вал или Иле;
R3 - Асп, Глу, или цистеиновая кислота;
R8 - Асн или Сер;
R12 - Лиз или Арг, или N -ε- алкил, или N- ε- бензил- Лиз, где R - алкил C1-C5 или бензол;
R13 - Вал или Иле;
R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Гли;
R18 - Сер или Тир;
R19 - Вал или Иле;
R21 - Лиз или Арг, или N -ε- алкил, или N -ε- бензил - Лиз,
где
R - алкил C1-C5 или бензол;
R22 - Ала или Лей;
R25 - Асп или Глу;
R27 - Мет, Иле или Лей;
R28 - Асп или Сер;
R34 - Сер или Арг;
R35 - Асн или Сер;
R38 - Арс или Слн;
R39 - Гли или Арг;
R40 - Ала или Сер;
R42 - Ала, Вал или Фен;
Z обозначает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом - COO Ra - CRaO - CONHNH Ra - CON(Ra)(Rb) или CH2ORa, где Ra и Rb являются алкилом C1-C8 или водородом, или биологически активным фрагментом, простирающимся от R на амино- конце до остатка в любом положении от 27 до 44 на C-конце, или гомоСер (лактон), гомоСерOH или гомоСерN (Ra)(Rb) вышеупомянутого и/или нетоксичную соль вышеупомянутого.
R-R1-R2-R3 - Ала-Иле-Фен-Тре-R8 -Сер-Тир-Арг-R12-R13-Лей-R15-Глн-Лей-R18-R19-Арг- R21-R22-Лей-Глн-R25-Иле-R27-R28- Арг-Глн-Глн-Гли-Глу-R34-R35-Глн-Глу-R38- R39-R40-Арг-R42-Арг-Лей-Z,
где
R - H, алкил C1-C5 или бензол;
R1 - Тир или Гис;
R2 - Гли, Тре, Вал или Иле;
R3 - Асп, Глу, или цистеиновая кислота;
R8 - Асн или Сер;
R12 - Лиз или Арг, или N -ε- алкил, или N- ε- бензил- Лиз, где R - алкил C1-C5 или бензол;
R13 - Вал или Иле;
R15 - Ала, Вал, Лей, Иле или Гли;
R18 - Сер или Тир;
R19 - Вал или Иле;
R21 - Лиз или Арг, или N -ε- алкил, или N -ε- бензил - Лиз,
где
R - алкил C1-C5 или бензол;
R22 - Ала или Лей;
R25 - Асп или Глу;
R27 - Мет, Иле или Лей;
R28 - Асп или Сер;
R34 - Сер или Арг;
R35 - Асн или Сер;
R38 - Арс или Слн;
R39 - Гли или Арг;
R40 - Ала или Сер;
R42 - Ала, Вал или Фен;
Z обозначает карбоксильную часть аминокислотного остатка на C-конце и является радикалом - COO Ra - CRaO - CONHNH Ra - CON(Ra)(Rb) или CH2ORa, где Ra и Rb являются алкилом C1-C8 или водородом, или биологически активным фрагментом, простирающимся от R на амино- конце до остатка в любом положении от 27 до 44 на C-конце, или гомоСер (лактон), гомоСерOH или гомоСерN (Ra)(Rb) вышеупомянутого и/или нетоксичную соль вышеупомянутого.
4. Аналог пептида ФГР по п. 3, в котором R2 является Тре, Вал или Иле.
5. Аналог пептид ФГР по п. 4, выбранный из группы, состоящей из: Тре2Ала15Вал19Лей27бФГР (1-29)NH2, Тре2Ала15Иле19Лей27бФГР (1-29)NH2,
Вал2Ала15Иле19Лей27бФГР (1-29)NH2, Иле2Ала15Иле19Иле27бФГР (1-29)NH2,
Вал2Ала15Вал19Лей27бФГР (1-29)NH2, Иле2Ала15Вал19Лей27бФГР (1-29)NH2,
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР (1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР (1-30)NHэтил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР (1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH-этил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР (1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Aла15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH-этил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH-этил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH-н-пропил или Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, или нетоксичная соль пептида.
Вал2Ала15Иле19Лей27бФГР (1-29)NH2, Иле2Ала15Иле19Иле27бФГР (1-29)NH2,
Вал2Ала15Вал19Лей27бФГР (1-29)NH2, Иле2Ала15Вал19Лей27бФГР (1-29)NH2,
Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР (1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР (1-30)NHэтил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР (1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH-этил, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР (1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Тре2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Aла15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH-этил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH-этил, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Вал19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Иле2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер30бФГР(1-30)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер33бФГР(1-33)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH2, Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер37бФГР(1-37)NH-н-пропил или Вал2Сер8Ала15Иле19Лей27Сер28 гомоСер44бФГР(1-44)NH2, или нетоксичная соль пептида.
6. Аналог пептида ФГР по п. 3, где R14 - Ала, Вал, Лей или Иле.
7. Аналог пептида ФГР по п. 6, где R - H и R15 - Ала.
8. Аналог пептида ФГР по п. 7, R1 - Тир.
9. Аналог пептида ФГР по п. 8, где R8 и R28 - Сер.
10. Аналог пептида ФГР по п. 6, где R2 - Вал.
11. Аналог пептида ФГР по п. 6, где R2 - Иле.
12. Аналог пептида ФГР по п. 6, где R19 - Вал.
13. Аналог пептида ФГР по п. 6, где R19 - Иле.
14. Способ стимулирования секреции гормона роста у животного, включающий введение животному эффективного количества пептида ФГР, отличающийся тем, что в качестве пептида используют аналог ФГР по п. 1.
15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что в качестве пептида используют аналог ФГР по п. 3.
16. Композиция для стимулирования секреции гормона роста у животного, содержащая пептид ФГР и общепринятый носитель, отличающаяся тем, что в качестве пептида содержит аналог ФГР по п. 3 в эффективном количестве в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US61417090A | 1990-11-14 | 1990-11-14 | |
US07/614,170 | 1990-11-14 | ||
US07/614170 | 1990-11-14 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU93032314A RU93032314A (ru) | 1995-11-20 |
RU2119800C1 true RU2119800C1 (ru) | 1998-10-10 |
Family
ID=24460133
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93032314A RU2119800C1 (ru) | 1990-11-14 | 1991-11-13 | Аналог пептида фактора гормона роста (фгр), способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP0565536A1 (ru) |
JP (1) | JPH06502650A (ru) |
AU (1) | AU655791B2 (ru) |
CA (1) | CA2092906A1 (ru) |
CZ (1) | CZ85393A3 (ru) |
FI (1) | FI932185A (ru) |
HU (1) | HUT63857A (ru) |
NO (1) | NO931745D0 (ru) |
RU (1) | RU2119800C1 (ru) |
SK (1) | SK49093A3 (ru) |
WO (1) | WO1992008481A1 (ru) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9906715D0 (en) * | 1999-03-23 | 1999-05-19 | Ferring Bv | Compositions for promoting growth |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4689318A (en) * | 1985-08-29 | 1987-08-25 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs |
DE69014115T2 (de) * | 1989-06-16 | 1995-05-24 | Upjohn Co | Stabilisierte, starke grf-analoga. |
-
1991
- 1991-11-13 RU RU93032314A patent/RU2119800C1/ru active
- 1991-11-13 JP JP4501877A patent/JPH06502650A/ja not_active Withdrawn
- 1991-11-13 CA CA002092906A patent/CA2092906A1/en not_active Abandoned
- 1991-11-13 EP EP92900732A patent/EP0565536A1/en not_active Withdrawn
- 1991-11-13 AU AU90551/91A patent/AU655791B2/en not_active Ceased
- 1991-11-13 WO PCT/US1991/008248 patent/WO1992008481A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-11-13 HU HU931385A patent/HUT63857A/hu unknown
- 1991-11-13 CZ CS93853A patent/CZ85393A3/cs unknown
- 1991-11-13 SK SK49093A patent/SK49093A3/sk unknown
-
1993
- 1993-05-13 NO NO931745A patent/NO931745D0/no unknown
- 1993-05-13 FI FI932185A patent/FI932185A/fi not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1992008481A1 (en) | 1992-05-29 |
AU9055191A (en) | 1992-06-11 |
FI932185A0 (fi) | 1993-05-13 |
HU9301385D0 (en) | 1993-09-28 |
NO931745L (no) | 1993-05-13 |
CA2092906A1 (en) | 1992-05-15 |
NO931745D0 (no) | 1993-05-13 |
JPH06502650A (ja) | 1994-03-24 |
SK49093A3 (en) | 1993-10-06 |
HUT63857A (en) | 1993-10-28 |
EP0565536A1 (en) | 1993-10-20 |
CZ85393A3 (en) | 1994-03-16 |
FI932185A (fi) | 1993-05-13 |
AU655791B2 (en) | 1995-01-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5861379A (en) | Chimeric fatty body-pro-GRF analogs with increased biological potency | |
US4956455A (en) | Bovine fibroblast growth factor | |
EP0177819B1 (en) | Growth hormone releasing factor analogs and process therefore | |
IL101452A (en) | Analogs of the factor that releases the growth hormone, their preparation and the pharmaceutical preparations that contain them | |
IL98638A (en) | Analogs of the factor that releases human growth hormone, their preparation and pharmaceutical preparations that contain them | |
CN112876552A (zh) | 长效肾上腺髓质素衍生物 | |
BG65137B1 (bg) | Антагонистични аналози на gh-rh инхибиращи igf-i и -ii | |
US5756458A (en) | Stabilized potent GRF analogs | |
EP0188214A2 (en) | Novel growth hormone-releasing peptides and method of treating mammals therewith | |
IE840537L (en) | Polypeptides containing growth hormone releasing factor | |
RU2096416C1 (ru) | Производные пептидов - аналоги grf или их нетоксичные соли | |
JP2715472B2 (ja) | 環式ペプチド | |
RU2119800C1 (ru) | Аналог пептида фактора гормона роста (фгр), способ стимулирования секреции гормона роста и композиция для стимулирования секреции | |
EP0397751A1 (en) | Grf analogs | |
EP0457786A1 (en) | Stabilized, potent grf analogs | |
US20030027753A1 (en) | Bone stimulating factor | |
HU205953B (en) | Process for producing new analogues of growth hormon secretion stimulating hormon and pharmaceutical and veterinaryc compositions containing them as active components | |
MXPA97009098A (en) | Chemical analogues of body grease-pro with biological power increment |