JPH11502205A - ｈＣＧ液体製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は多価アルコールまたは非還元糖で安定化されたヒト コリオゴナドトロピンを含有する液体医薬組成物に関する。好ましくは前記組成物はマンニットで安定化されている。好ましい態様では上記組成物はpH７のリン酸緩衝液中の水溶液である。上記組成物はすぐに注射でき、したがって、凍結乾燥された粉末を水で元に戻す段階を回避し、よってその使用法を簡単にする。

Description

【発明の詳細な説明】 hCG液体製剤 本発明は、ゴナドトロピン含有液体医薬組成物に関する。より詳細には、多価 アルコールまたは非還元糖で安定化されたhCG（ヒトコリオゴナドトロピン）の 液体製剤に関する。 高度に精製されたタンパク質は、空気中の試薬との接触によってさえ、容易に 分解することが公知である。この特徴は、組換え DNA技術によって産生したタン パク質についてさらにより明らかである。 このようなタンパク質は通常、糖類、たとえば、ラクトースで、またはマンニ ットで、または他のタンパク質もしくはアミノ酸、たとえば、アルブミン及びグ リシンで安定化される。 ゴナドトロピンの注射可能な安定化製剤は、常に乾燥粉末を得るための凍結乾 燥段階を包含する方法により得られ、このような方法で、安定化された製剤は室 温で貯蔵された場合ですら、より長いサイクル寿命を維持することができる。 国際特許出願公開第93／11788 号明細書は、ショ糖のみまたはそれと他の安定 剤との組合せで安定化された凍結乾燥されたゴナドトロピン含有医薬組成物を記 載している。上記特許出願では、研究中のショ糖により凍結乾燥組成物にもたら された安定性の方が、ラクトースまたはマンニットによりもたらされたものより も良いことが明らかにされている。 ゴナドトロピン液体安定化製剤については現在まで記載されていない。すぐに 注射できる組成物を有し、凍結乾燥された粉末を水で元に戻すことを回避し、し たがって使用法を簡単にするために、こ のような液体製剤を得ることは非常に望ましい。 我々は、驚くべきことに、そのような液体安定化製剤を得ることが可能である ことを見い出した。 本発明の主な目的は多価アルコールまたは非還元糖で安定化された hCGを含有 する液体医薬組成物を提供することである。多価アルコールは好ましくはマンニ ットで、非還元糖はショ糖である。より好ましくは本発明の液体製剤はマンニッ トで安定化されている。 溶液は好ましくは緩衝化水溶液で、本発明の緩衝液はリン酸(phosphate)、酢 酸(acetate)またはコハク酸(succinate)緩衝液からなる群から選択する。好まし い緩衝液はリン酸緩衝液で、pHは好ましくは7.00である。 hCGは好ましくは組換え体で、たとえばヨーロッパ特許第160699号明細書記載 の技術により、相当する DNAを形質転換した。CHO(チャイニーズ・ハムスター卵 巣)細胞における発現により調製することができる。 本発明のさらなる目的は、補形剤を含有する緩衝液に hCGバルク（bulk）溶液 を希釈することを含んでなる上記液体医薬組成物の調製方法を提供することであ る。 本発明のなお他の目的は、使用前の貯蔵に適当な容器中に無菌状態で密封して 閉じられた上記製剤を含む前記液体医薬組成物の提示型を提供することである。 本発明の hCG製剤の安定性を最適化するために、一連の予備実験を種々のpH、 イオン強度、誘電率及び組換え−hCG（r-hCG）の濃度の種々の緩衝液を用いて行 なった。 pHと緩衝液の影響を評価するために、リン酸、コハク酸または酢酸緩衝液の0. 01Ｍ溶液を注射のために水で調製した。NaOH １ＭでpHを6.0，7.0または 8.0に 調節した。組換え−hCG バルクの溶液を 緩衝液系に加えて、 5,000IU／mlの溶液を得た。次いでその溶液をろ過して３ml のガラスバイアルに注いだ。このようにして調製された製剤の組成を表１に報告 する。それらが室温で容器に貯蔵された時に、これらの製剤の安定性をより高温 でのデータの外挿により予期できるように、これらの製剤の加速した安定性を研 究した。この場合には、試料を40°及び50℃で貯蔵し、次の標準条件による HPS EC分析によりその純度を測定することにより、組換え−hCG の安定性を調べた。 Ａ段階 0.1Ｍ リン酸塩（pH 6.7）＋ 0.1Ｍ Na₂SO₄ 定組成(isocratic)条件 100％ Ａ段階 カラム TSK G 2000 SWXL 流 量 0.5ml／分 UV検出器 214nm 注入容量 20μｌ （10,000IU強度） 40μｌ （5,000IU強度） 表３は HPSECにより測定された組換え−hCG 単量体ピークの百分率を報告する 。その結果は、pH 6.0及び 8.0の溶液はpH 7.0の溶液と比較して不安定であり、 緩衝液の中では目立った安定性の相違はないことを示す。 イオン強度の影響を、0.01Ｍ リン酸及びコハク酸緩衝液（pH 7.0）で調製し 、NaClで次の価の浸透性、すなわち、15,300及び 400mOsmに調節した、組換え− hCG の 5,000IU／ml溶液について評価した。製剤の組成を表２に報告する。試料 を４℃、25℃、40℃及び50℃で貯蔵し、 HPSECにより組換え−hCG の安定性を試 験した。結果（表４に報告）は、イオン強度の増加は組換え−hCG に逆に影響を 与えることを示す。 誘電率の影響を５％、10％及び15％のプロピレングリコールを含有する、0.01 Ｍ リン酸及びコハク酸緩衝液（pH７）で調製した、組換え−hCG の 5,000IU／ ml溶液について評価した。製剤の組成を表２に報告する。試料を４℃、25℃、40 ℃及び50℃で貯蔵し、 HPSECにより組換え−hCG の安定性を試験した。結果（表 ４に報告）は、プロピレングリコールの百分率の増加は組換え−hCG の安定性に 逆に影響を与えることを示す。 組換え−hCG 濃度の影響を評価するために、それぞれ、2,500、 5,000、 7,50 0及び10,000IU／mlの組換え−hCG を含有する0.01Ｍ リン酸緩衝液（pH 7.0） 溶液の50℃での安定性を HPSECで２週間監視した。結果（表５に報告）は、濃縮 された溶液の方が安定性が高いことを示した。 種々の安定剤及び／または補形剤の組換え−hCG の安定性についての影響を比 較するために、10,000IU／mlの組換え−hCG を含有する0.01Ｍ リン酸緩衝液（ pH 7.0）中の６つの液体製剤を、第１段階として調製した。安定剤／補形剤とし て、ショ糖、グリシン、グルコース、マンニット、ラクトース及びNaClを用いた 。製剤の組成を表６に報告する。これらの製剤を、４℃、25℃、40℃及び50℃で 試料貯蔵することによる安定性試験を受けさせ、バイオアッセイ及び HPSECによ り試験した。続いて、第１段階の結果に基づき、２つの選択された液体製剤の４ ロットを安定剤としてショ糖及びマンニットを用いて調製した。表７は上記製剤 の組成を報告する。 バイオアッセイはヨーロッパ薬局方モノグラフに従って行った。 表８には、 HPSEC安定性データを報告し、表９には、生物活性値を報告する。 結果を次のように示す。 １．グルコース及びラクトースを含有する製剤の生物活性は50℃で１週間の貯蔵 後著るしく低下した。単量体ピークも、他の製剤にお いて測定したものに比較して低かった。 ２．グリシン及びNaClの存在で、ショ糖及びマンニットを含有する製剤に比較し て、より明白な生物活性及び純度の低下が測定された。この場合にも組換え−hC G 単量体ピークの百分率の低下は、凝集形の生成のためでなく、遊離のサブユニ ットの増加によった。 表10及び11はそれぞれ 5,000及び10,000IU強度について HPSECにより測定した 純度を報告する。データは50℃で３週間後でさえ、ショ糖を含有する製剤に比較 して、マンニットを含有する製剤の純度は高いことを示す。表12及び13は、ショ 糖及びマンニット製剤について50℃で１週間貯蔵後の逆相HPLCにより測定された α−サブユニットの純度を報告する。データはショ糖を含有するものと比較して 、マンニットを含有する製剤の安定性が良いことを確認する。 逆相HPLC分析は次の標準条件で行なった。 表14及び15に生物活性アッセイの結果を報告する。マンニット製剤中には４℃ 及び25℃で24時間後に明らかな生物活性の低下は認め られなかった。 本発明によると、液体医薬組成物は 1,000〜40,000IU／ml、好ましくは10,000 IU／mlの hCG及び10〜 180mg／ｌ、好ましくは54.6mg／ｌのマンニットを、0.01 Ｍ緩衝液溶液中に含有する。 医薬の製造例 材料：リン酸85％ RPE ACS（Carlo Erba）；マンニットDAB，PhEur BP，FU，U SP，FCC，E421(Merck)，NaOH １Ｍ(Merck)、注射のための水。 製剤化ガラスバイアルのための基本の容器は次のものからなる。すなわち、３ mlのガラスバイアル(DIN 2R)（ホウケイ酸ガラスＩ型）、ゴム閉塞器（Pharmagu mmi W1816V50）、アルミニウム環及びフリップオフキャップ(flip off cap)(Pha rma Metal GmbH)。 マンニットを含有する組換え−hCG 溶液の調製 注射用の水(600ml)にリン酸（0.98ｇ）を加える。必要なら、pHをNaOH １Ｍ で 7.0に調節する。マンニット（54.6ｇ）をリン酸溶液に加え、pHを再度調べ、 必要なら、NaOH １Ｍまたは１：５に希釈されたリン酸で7.00±0.2 に調節する 。次いで、組換え−hCG バルク（最終の所望強度がそれぞれ 5,000または10,000 IUなら、10MIU または20MIU)を補形剤溶液に加え、再度pHを調べ、必要なら、Na OH １Ｍまたは１：５に希釈されたリン酸で7.00±0.2 に調節する。 注射のために溶液を水で１ｌにする。次いで、上記溶液を0.22μｍ Millipak 20フィルターを通して、 1.5気圧より高くない圧力で、層流でろ過し、溶液をフ ラスコに収集し、約１分間静かに撹拌する。 次にバイアルに 0.5mlの組換え−hCG 溶液を満たす。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９７年５月１９日 【補正内容】 請求の範囲 １．組換えヒト コリオゴナドトロピン及び安定化量のマンニットを含む、安 定な液体医薬組成物。 ２．前記溶液が緩衝化水溶液である、請求項１に記載の医薬組成物。 ３．前記緩衝液が酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液及びリン酸緩衝液からなる群か ら選択したものである、請求項２に記載の液体医薬組成物。 ４．前記緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項３に記載の液体医薬組成物。 ５．前記緩衝液がpH7.00である、請求項２〜４いずれか１項に記載の液体医薬 組成物。 ６．前記緩衝液が0.01Ｍである、請求項２〜５のいずれか１項に記載の液体医 薬組成物。 ７． 1,000〜40,000IU／mlのヒト コリオゴナドトロピン及び10〜 180mg／ ｌのマンニットを0.01ＭのpH7.00のリン酸緩衝液中に含んでなる、請求項１に記 載の液体医薬組成物。 ８．ヒト コリオゴナドトロピンバルク溶液を補形剤を含有する緩衝液中に希 釈することを含んでなる、請求項１に記載の液体医薬製剤を調製する方法。 ９．使用前に貯蔵するのに適当な容器中に無菌状態で密封して閉じられている 請求項１に記載の液体医薬組成物の提示型。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヒト コリオゴナドトロピン及び安定化量の多価アルコールまたは非還元 糖を含む、液体医薬組成物。 ２．多価アルコールがマンニットである、請求項１に記載の液体医薬組成物。 ３．非還元糖がショ糖である、請求項１に記載の液体医薬組成物。 ４．ヒト コリオゴナドトロピンが組換え体である、請求項１に記載の液体医 薬組成物。 ５．前記溶液が緩衝化水溶液である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医 薬組成物。 ６．前記緩衝液が酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液及びリン酸緩衝液からなる群か ら選択したものである、請求項５に記載の液体医薬組成物。 ７．前記緩衝液がリン酸緩衝液である、請求項６に記載の液体医薬組成物。 ８．前記緩衝液がpH7.00である、請求項５〜７のいずれか１項に記載の液体医 薬組成物。 ９．前記緩衝液が0.01Ｍである、請求項５〜８のいずれか１項に記載の液体医 薬組成物。 10．1,000〜40,000IU／mlのヒト コリオゴナドトロピン及び10〜 180mg／ｌ のマンニットを0.01ＭのpH7.00のリン酸緩衝液中に含んでなる、請求項１に記載 の液体医薬組成物。 11．ヒト コリオゴナドトロピンバルク溶液を補形剤を含有する緩衝液中に希 釈することを含んでなる、請求項１に記載の液体医薬製剤を調製する方法。 12．使用前に貯蔵するのに適当な容器中に無菌状態で密封して閉じられている 請求項１に記載の液体医薬組成物の提示型。