JPH11318452A - ヒト脳からの新規ｇ蛋白質―結合レセプタ― - Google Patents
ヒト脳からの新規ｇ蛋白質―結合レセプタ―Info
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- JPH11318452A JPH11318452A JP11031497A JP3149799A JPH11318452A JP H11318452 A JPH11318452 A JP H11318452A JP 11031497 A JP11031497 A JP 11031497A JP 3149799 A JP3149799 A JP 3149799A JP H11318452 A JPH11318452 A JP H11318452A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒト脳からの新規Ｇ蛋白質−結合レセプター
【解決手段】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載のアミノ
酸配列を有するか又はこれから１個以上のアミノ酸残基
の置換、挿入又は欠失により得られる配列を有し、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２中に記載の蛋白質の主要生物学的特
性の少なくとも一つが保留されている、単離された蛋白
質。
酸配列を有するか又はこれから１個以上のアミノ酸残基
の置換、挿入又は欠失により得られる配列を有し、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２中に記載の蛋白質の主要生物学的特
性の少なくとも一つが保留されている、単離された蛋白
質。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト脳からの新規
Ｇ蛋白質−結合レセプター、その遺伝子及び使用に関す
る。
Ｇ蛋白質−結合レセプター、その遺伝子及び使用に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】Ｇ蛋白質−結合レセプターは、総合膜蛋
白質の超ファミリーである。ファミリー員は、全てのタ
イプの化学的メッセンジャーのレセプターでも光及び臭
いに対するセンサーでもある。Ｇ蛋白質−結合レセプタ
ーは、殆ど全ての生物体中に存在する。
白質の超ファミリーである。ファミリー員は、全てのタ
イプの化学的メッセンジャーのレセプターでも光及び臭
いに対するセンサーでもある。Ｇ蛋白質−結合レセプタ
ーは、殆ど全ての生物体中に存在する。
【０００３】このレセプターは、７つの突出疎水性範囲
を有するアミノ酸配列により特徴付けられている。これ
は、高い確率の膜位置ドメインであり、このファミリー
にはその第２の名称：７−トランスメンブラン−ドメイ
ンレセプターが与えられる。
を有するアミノ酸配列により特徴付けられている。これ
は、高い確率の膜位置ドメインであり、このファミリー
にはその第２の名称：７−トランスメンブラン−ドメイ
ンレセプターが与えられる。
【０００４】このレセプターファミリーのリガンドは、
生体アミン（例えばアドレナリン、セロトニン、ヒスタ
ミン）、ペプチドホルモン（例えばアンギオテンシン、
エンドテリン、ブラデイキニン）、神経伝達物質（例え
ばＮＰＹ、物質Ｐ、オピオイド）及び蛋白質（例えばケ
モカイン、トロンビン）と、非常に多様である。これら
の全てのメッセンジャーは、Ｇ蛋白質との相互作用によ
り細胞の内部への信号伝達に関与している。エフェクタ
ーとしては、アデニレートサイクラーゼ、ホスホリパー
ゼＣ、ホスホジエステラーゼが公知である。
生体アミン（例えばアドレナリン、セロトニン、ヒスタ
ミン）、ペプチドホルモン（例えばアンギオテンシン、
エンドテリン、ブラデイキニン）、神経伝達物質（例え
ばＮＰＹ、物質Ｐ、オピオイド）及び蛋白質（例えばケ
モカイン、トロンビン）と、非常に多様である。これら
の全てのメッセンジャーは、Ｇ蛋白質との相互作用によ
り細胞の内部への信号伝達に関与している。エフェクタ
ーとしては、アデニレートサイクラーゼ、ホスホリパー
ゼＣ、ホスホジエステラーゼが公知である。
【０００５】Ｇ蛋白質−結合レセプターは、３つのサブ
ファミリー：ロドプシン−サブファミリー、カルシトニ
ン−サブファミリー及びグルタメート／メタボトロープ
−サブファミリーに分けられる。
ファミリー：ロドプシン−サブファミリー、カルシトニ
ン−サブファミリー及びグルタメート／メタボトロープ
−サブファミリーに分けられる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的物は、Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で記載されるアミノ酸配列を有す
るか又はこれから１以上のアミノ酸残基の置換、挿入又
は欠失により得られる配列を有し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：２に記載の蛋白質の主要な生物学的特性の少なくと
も１つをなお保持している単離された蛋白質である。
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で記載されるアミノ酸配列を有す
るか又はこれから１以上のアミノ酸残基の置換、挿入又
は欠失により得られる配列を有し、ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：２に記載の蛋白質の主要な生物学的特性の少なくと
も１つをなお保持している単離された蛋白質である。
【０００７】主要な生物学的特性は、レセプター、殊に
Ｇ蛋白質結合レセプターとしての活性である。
Ｇ蛋白質結合レセプターとしての活性である。
【０００８】本発明のもう一つの目的物は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２で記載されるアミノ酸配列から出発して、
合目的変性により製造可能であるＧ蛋白質−結合レセプ
ター活性を有する蛋白質である。例えば特定のアミノ酸
を、類似の物理化学的特性（空間充填、塩基性）を有す
るもので置換することができる。しかしながら１個以上
のアミノ酸を追加することも除去することもできるか、
又はこれら手段の複数を相互に組み合わせることもでき
る。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対してこのように変性さ
れた蛋白質は、ピアソン（Pearson）及びリップマン（l
ipman）のアルゴリズム（Algorithmus)(Proc.Natl.Aca
d.Sci(USA)85、2444-2448）により計算されるＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも６０％、有利には少
なくとも７５％の相同性を有する。
Ｄ ＮＯ：２で記載されるアミノ酸配列から出発して、
合目的変性により製造可能であるＧ蛋白質−結合レセプ
ター活性を有する蛋白質である。例えば特定のアミノ酸
を、類似の物理化学的特性（空間充填、塩基性）を有す
るもので置換することができる。しかしながら１個以上
のアミノ酸を追加することも除去することもできるか、
又はこれら手段の複数を相互に組み合わせることもでき
る。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に対してこのように変性さ
れた蛋白質は、ピアソン（Pearson）及びリップマン（l
ipman）のアルゴリズム（Algorithmus)(Proc.Natl.Aca
d.Sci(USA)85、2444-2448）により計算されるＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２に対して少なくとも６０％、有利には少
なくとも７５％の相同性を有する。
【０００９】本発明のもう一つの目的物は、前記蛋白質
をコード化する核酸配列、殊にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
で記載されるプライマー構造を有するものである。
をコード化する核酸配列、殊にＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
で記載されるプライマー構造を有するものである。
【００１０】本発明のｃＤＮＡは、当業者に慣用のクロ
ーニング法及びトランスフェクシヨン法で種々の発現系
中に発現させることができる。これは、例えば原核性又
は真核性ベクター系、例えばＳＶ４０、ＣＭＶ、バクト
ロウイルス、アデノウイルス、プラスミド、ファージミ
ド（phagemides）、ファージである。
ーニング法及びトランスフェクシヨン法で種々の発現系
中に発現させることができる。これは、例えば原核性又
は真核性ベクター系、例えばＳＶ４０、ＣＭＶ、バクト
ロウイルス、アデノウイルス、プラスミド、ファージミ
ド（phagemides）、ファージである。
【００１１】このために、本発明による核酸配列に、通
常、遺伝子調節エレメント、例えば転写−及び翻訳信号
と機能的に結合させる。このようにして製造された組み
換え核酸構成体を用いて、引き続き宿主生物が形質転換
される。
常、遺伝子調節エレメント、例えば転写−及び翻訳信号
と機能的に結合させる。このようにして製造された組み
換え核酸構成体を用いて、引き続き宿主生物が形質転換
される。
【００１２】有利な１実施形は、本発明による核酸配列
とプロモーターとの連結であり、この際、プロモーター
は５’上流に存在する。更なる調節信号、例えばターミ
ネーター、ポリアデニル化信号、エンハンサーが、核酸
構成体中で使用することができる。
とプロモーターとの連結であり、この際、プロモーター
は５’上流に存在する。更なる調節信号、例えばターミ
ネーター、ポリアデニル化信号、エンハンサーが、核酸
構成体中で使用することができる。
【００１３】宿主細胞としては、細菌、例えば大腸菌
（Escherichia coli）、真核性微生物、例えばサッカ
ロミセス・セレビジアエ（Saccharomyces cerevisia
e）、動物又は植物からの高級真核性細胞、例えばＳｆ
９又はＣＨＯ−細胞が好適である。
（Escherichia coli）、真核性微生物、例えばサッカ
ロミセス・セレビジアエ（Saccharomyces cerevisia
e）、動物又は植物からの高級真核性細胞、例えばＳｆ
９又はＣＨＯ−細胞が好適である。
【００１４】所望の場合には、この遺伝子生成物を、ト
ランスジェニック生物体、例えばトランスジェニック動
物、例えばマウス、羊又はトランスジェニック植物中に
も発現させることができる。
ランスジェニック生物体、例えばトランスジェニック動
物、例えばマウス、羊又はトランスジェニック植物中に
も発現させることができる。
【００１５】本発明は、Ｇ蛋白質−結合レセプターファ
ミリーの新規メンバーをコード化するｃＤＮＡに関す
る。配列比較は、エンドテリンレセプター及びエンドテ
リンレセプター類似配列と類縁関係を示している。
ミリーの新規メンバーをコード化するｃＤＮＡに関す
る。配列比較は、エンドテリンレセプター及びエンドテ
リンレセプター類似配列と類縁関係を示している。
【００１６】本発明の核酸配列は、起源的に、ヒト脳及
び脊髄からの複数のｃＤＮＡ−ライブラリー中に同定さ
れた。５０の種々のヒト組織中の当該ｍＲＮＡの分布の
分析は、殆どもっぱら脳中での発現を示した。
び脊髄からの複数のｃＤＮＡ−ライブラリー中に同定さ
れた。５０の種々のヒト組織中の当該ｍＲＮＡの分布の
分析は、殆どもっぱら脳中での発現を示した。
【００１７】本発明のｃＤＮＡによりコード化されたポ
リポプチドは、疑いもなくＧ蛋白質−結合レセプターと
して同定できる。この蛋白質ファミリーの特徴である７
つのトランスメンブラン−ドメインは、容易に親水性−
プロット中に見出すことができる（Kyte,J.and R.F.Do
olittle,1982、J.Mol.Biol.157,105-132(1982)）。アミ
ノ酸レベルでの最大の類縁関係は、ヒト起源の推定のエ
ンドテリンレセプターＢ型類似蛋白質に対して５２％の
同一性を有して存在する（Genbank AccessionNummer
U87460,FastA-Programm,Pearson und Lipman,Proc.Na
tl.Acad.Sci(USA)85,2444-2448）。
リポプチドは、疑いもなくＧ蛋白質−結合レセプターと
して同定できる。この蛋白質ファミリーの特徴である７
つのトランスメンブラン−ドメインは、容易に親水性−
プロット中に見出すことができる（Kyte,J.and R.F.Do
olittle,1982、J.Mol.Biol.157,105-132(1982)）。アミ
ノ酸レベルでの最大の類縁関係は、ヒト起源の推定のエ
ンドテリンレセプターＢ型類似蛋白質に対して５２％の
同一性を有して存在する（Genbank AccessionNummer
U87460,FastA-Programm,Pearson und Lipman,Proc.Na
tl.Acad.Sci(USA)85,2444-2448）。
【００１８】特別の場合に、この遺伝子産物は、トラン
スジェニック動物、例えばマウス、羊又はトランスジェ
ニック植物中でも発現させることができる。同様に、相
応するＲＮＡを有する細胞不含の翻訳系をプログラムす
ることができる。
スジェニック動物、例えばマウス、羊又はトランスジェ
ニック植物中でも発現させることができる。同様に、相
応するＲＮＡを有する細胞不含の翻訳系をプログラムす
ることができる。
【００１９】更に、この遺伝子産物は、治療又は診断に
好適なフラグメントの形でも発現されうる。組み換え蛋
白質の単離のために、ｃＤＮＡを特定の核酸配列だけ延
長させ、これにより簡単な精製に役立つ変性されたポリ
ペプチドをコード化するベクターシステム又はオリゴヌ
クレオチドを使用することができる。このようなタグ
（Tags）として、文献中には、例えばヘキサ−ヒスチジ
ン−アンカーが公知であるか又は種々の抗体の抗原とし
て認識され得るエピトープがある（例えば、Harlow,E.a
nd Lane,D.(1988)Antibodies:A Laboratory Manual.
Cold Spring Harbor(N.Y.)Pressに記載）。
好適なフラグメントの形でも発現されうる。組み換え蛋
白質の単離のために、ｃＤＮＡを特定の核酸配列だけ延
長させ、これにより簡単な精製に役立つ変性されたポリ
ペプチドをコード化するベクターシステム又はオリゴヌ
クレオチドを使用することができる。このようなタグ
（Tags）として、文献中には、例えばヘキサ−ヒスチジ
ン−アンカーが公知であるか又は種々の抗体の抗原とし
て認識され得るエピトープがある（例えば、Harlow,E.a
nd Lane,D.(1988)Antibodies:A Laboratory Manual.
Cold Spring Harbor(N.Y.)Pressに記載）。
【００２０】ペプチド配列から出発して、抗体の生産の
ための抗原として使用される合成ペプチドを生成させる
ことができる。抗体の生成のために、ポリペプチド又は
そのフラグメントを使用することも可能である。
ための抗原として使用される合成ペプチドを生成させる
ことができる。抗体の生成のために、ポリペプチド又は
そのフラグメントを使用することも可能である。
【００２１】抗体の製造は、当業者に慣用の行動であ
る。抗体とは、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト
又はそのヒト適応化抗体又はそのフラグメント、単鎖抗
体又は合成抗体を意味する。
る。抗体とは、ポリクローナル、モノクローナル、ヒト
又はそのヒト適応化抗体又はそのフラグメント、単鎖抗
体又は合成抗体を意味する。
【００２２】本発明のｃＤＮＡは、更にこの新規Ｇ蛋白
質−結合レセプターのゲノム配列をクローニングする必
要条件を示す。これには、例えば、本発明のｃＤＡの
５’下流領域の配列決定により達成される関連調節又は
プロモーター配列も該当する。このｃＤＮＡの配列情報
は、アンチセンス分子又はリボチームの製造のための基
本でもある。
質−結合レセプターのゲノム配列をクローニングする必
要条件を示す。これには、例えば、本発明のｃＤＡの
５’下流領域の配列決定により達成される関連調節又は
プロモーター配列も該当する。このｃＤＮＡの配列情報
は、アンチセンス分子又はリボチームの製造のための基
本でもある。
【００２３】ヌクレオチド配列又はその一部分の使用の
もう一つの可能性は、トランスジェニック動物を得るこ
とである。適当な動物モデルにおける配列情報の変換遺
伝子過剰発現又は遺伝子的ノックアウトは、この新規Ｇ
蛋白質−結合レセプターの（病態生理学へのもう一つの
重要な情報を提供することができる。
もう一つの可能性は、トランスジェニック動物を得るこ
とである。適当な動物モデルにおける配列情報の変換遺
伝子過剰発現又は遺伝子的ノックアウトは、この新規Ｇ
蛋白質−結合レセプターの（病態生理学へのもう一つの
重要な情報を提供することができる。
【００２４】記載のレセプター（請求項１に記載の蛋白
質）の不足が支配する状況では、置換のために多くの方
法が使用できる。一つの方法では、この蛋白質を、天然
で又は組み換えて直接又は適当な手段により、そのコー
ド化性核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）の形で適用することが
できる。このために、ウイルス性ベヒクルも非ウイルス
性ベヒクルも使用することができる。
質）の不足が支配する状況では、置換のために多くの方
法が使用できる。一つの方法では、この蛋白質を、天然
で又は組み換えて直接又は適当な手段により、そのコー
ド化性核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）の形で適用することが
できる。このために、ウイルス性ベヒクルも非ウイルス
性ベヒクルも使用することができる。
【００２５】もう一つの方法では、適当な手段による内
因性の体特有の遺伝子の刺激により提供される。ターン
−オーバー又は失活も例えばレセプターキナーゼにより
ブロックすることができる。最後にこのレセプターの作
動薬を使用することができる。
因性の体特有の遺伝子の刺激により提供される。ターン
−オーバー又は失活も例えばレセプターキナーゼにより
ブロックすることができる。最後にこのレセプターの作
動薬を使用することができる。
【００２６】過剰なレセプターが存在する状況では、種
々の抑制剤を使用することができる。この抑制は、アン
チセンス分子又はリボチーム又は抗体及びオリゴヌクレ
オチドによっても、低分子量化合物によっても達成する
ことができる。更に、このレセプターは、拮抗剤により
ブロックされうることもありうる。
々の抑制剤を使用することができる。この抑制は、アン
チセンス分子又はリボチーム又は抗体及びオリゴヌクレ
オチドによっても、低分子量化合物によっても達成する
ことができる。更に、このレセプターは、拮抗剤により
ブロックされうることもありうる。
【００２７】更に、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プロモー
ターもポリペプチド及びその部分フラグメントも、組み
換え形又は非組み換え形で試験系の仕上げのために使用
することができる。この試験系は、試験物質の存在下に
プロモーター又は蛋白質の活性を測定するために好適で
ある。この際、多くの試験物質の迅速な測定を可能にす
る簡単な測定法（比色法、発光測定、蛍光測定、免疫学
的又は放射能測定法）が有利である。記載の試験系は、
記載すべき新規レセプターに関する試験物質の結合又は
アゴニスト又は拮抗作用を可能とする。
ターもポリペプチド及びその部分フラグメントも、組み
換え形又は非組み換え形で試験系の仕上げのために使用
することができる。この試験系は、試験物質の存在下に
プロモーター又は蛋白質の活性を測定するために好適で
ある。この際、多くの試験物質の迅速な測定を可能にす
る簡単な測定法（比色法、発光測定、蛍光測定、免疫学
的又は放射能測定法）が有利である。記載の試験系は、
記載すべき新規レセプターに関する試験物質の結合又は
アゴニスト又は拮抗作用を可能とする。
【００２８】人体中のレセプター又はその基礎になって
いるｍＲＮＡの量、活性及び分布の測定は、特定の疾病
の診断、素因証明及びモニターのために使用できる。同
様に、ｃＤＮＡの配列及びそのゲノム配列は、特定の疾
病の遺伝子学的原因及び素因を証明するために使用する
ことができる。このために、ＤＮＡ／ＲＮＡ−プローブ
及び非天然ＤＮＡ／ＲＮＡ−プローブも全ての種類の抗
体も利用できる。この場合に、記載のヌクレオチド配列
又はその一部分が、適当なプローブの形で、点突然変異
生成又は欠失／挿入の発現のために役立つ。
いるｍＲＮＡの量、活性及び分布の測定は、特定の疾病
の診断、素因証明及びモニターのために使用できる。同
様に、ｃＤＮＡの配列及びそのゲノム配列は、特定の疾
病の遺伝子学的原因及び素因を証明するために使用する
ことができる。このために、ＤＮＡ／ＲＮＡ−プローブ
及び非天然ＤＮＡ／ＲＮＡ−プローブも全ての種類の抗
体も利用できる。この場合に、記載のヌクレオチド配列
又はその一部分が、適当なプローブの形で、点突然変異
生成又は欠失／挿入の発現のために役立つ。
【００２９】更に、この記載の蛋白質を、その天然のリ
ガンドを測定し、単離するために利用することができ
る。従って、このレセプターを組み換えて細胞培養物中
に発現させ、その活性化状態を、例えばｃＡＭＰ−レベ
ルにより誘導することができる。このｃＡＭＰ−レベル
は、免疫学的に又はリポーター技術を用いて測定するこ
とができる。これにより、体液又は組織中のレセプター
リガンドのレベルを測定する診断学的方法も得られる。
ガンドを測定し、単離するために利用することができ
る。従って、このレセプターを組み換えて細胞培養物中
に発現させ、その活性化状態を、例えばｃＡＭＰ−レベ
ルにより誘導することができる。このｃＡＭＰ−レベル
は、免疫学的に又はリポーター技術を用いて測定するこ
とができる。これにより、体液又は組織中のレセプター
リガンドのレベルを測定する診断学的方法も得られる。
【００３０】本発明による核酸配列及びそれによりコー
ド化された蛋白質は、中枢神経又は末梢神経系の慢性又
は急性の疾病、例えばアルツハイマー病、抑鬱症、老年
性痴呆、運動機能障害、脳腫瘍、疼痛、精神分裂病、不
安症、卒中発作、睡眠障害、無呼吸発作、咳、精神異
常、パーキンソン病、癲癇、ＡＬＳ、薬品依存症、麻痺
及び脳保護及び神経要素を伴う疾病、例えば肥満症、食
欲不振、大食症の診断及び治療のための薬剤、作動薬及
び拮抗薬の開発のために使用することができる。
ド化された蛋白質は、中枢神経又は末梢神経系の慢性又
は急性の疾病、例えばアルツハイマー病、抑鬱症、老年
性痴呆、運動機能障害、脳腫瘍、疼痛、精神分裂病、不
安症、卒中発作、睡眠障害、無呼吸発作、咳、精神異
常、パーキンソン病、癲癇、ＡＬＳ、薬品依存症、麻痺
及び脳保護及び神経要素を伴う疾病、例えば肥満症、食
欲不振、大食症の診断及び治療のための薬剤、作動薬及
び拮抗薬の開発のために使用することができる。
【００３１】本発明のもう一つの目的は、次の工程より
なる、生物学的試料中の請求項３に記載の核酸の定性的
及び定量的検出法である： ａ）生物学的試料を請求項３に記載の核酸既知量と一緒
に、又は請求項３に記載の核酸の増幅のためのプライマ
ーとして好適であるオリゴヌクレオチド既知量と一緒に
恒温保持し、 ｂ）特異的なハイブリド化又はＰＣＲ−増幅により請求
項３に記載の核酸を検出し、 ｃ）請求項３に記載のハイブリド化性核酸又はＰＣＲ−
増幅により得られた請求項３による核酸の量を標準と比
較する。
なる、生物学的試料中の請求項３に記載の核酸の定性的
及び定量的検出法である： ａ）生物学的試料を請求項３に記載の核酸既知量と一緒
に、又は請求項３に記載の核酸の増幅のためのプライマ
ーとして好適であるオリゴヌクレオチド既知量と一緒に
恒温保持し、 ｂ）特異的なハイブリド化又はＰＣＲ−増幅により請求
項３に記載の核酸を検出し、 ｃ）請求項３に記載のハイブリド化性核酸又はＰＣＲ−
増幅により得られた請求項３による核酸の量を標準と比
較する。
【００３２】更に、本発明は、次の工程よりなる、生物
学的試料中の請求項１に記載の蛋白質を定性的及び定量
的に検出する方法を包含する： ａ）生物学的試料を請求項１に記載の蛋白質に対して特
異的に向いている抗体と一緒に恒温保持し、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体の量を標準と比較する。
学的試料中の請求項１に記載の蛋白質を定性的及び定量
的に検出する方法を包含する： ａ）生物学的試料を請求項１に記載の蛋白質に対して特
異的に向いている抗体と一緒に恒温保持し、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体の量を標準と比較する。
【００３３】標準としては、生物学的試料、例えば健康
な提供者から得られた組織片、血清又は血液を使用する
ことができる。
な提供者から得られた組織片、血清又は血液を使用する
ことができる。
【００３４】
【実施例】例１ レセプターｃＣＤＮＡのクローニング ヒト脳からのｃＤＮＡ−ライブラリーのｃＤＮＡ−クロ
ーンの配列分析時に、先ず、部分配列を同定した。この
部分クローンの配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中のヌ
クレオチド位置３５２〜２４１１の範囲を有する。
ーンの配列分析時に、先ず、部分配列を同定した。この
部分クローンの配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１中のヌ
クレオチド位置３５２〜２４１１の範囲を有する。
【００３５】ヒト脳からのｃＤＮＡ−ライブラリー（Hu
man Brain 5'Stretch Plus cDNA Library、#HL501
8t,Fa.Clontech,Jahr 1997）から、総配列ＳＥＱ Ｉ
ＤＮＯ：１をネステッドポリメラーゼ連鎖反応を用いて
増幅させた。このために、次のオリゴヌクレオチドプラ
イマーを使用した： ＰＣＲ１：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を使用 ＰＣＲ２：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を使用。
man Brain 5'Stretch Plus cDNA Library、#HL501
8t,Fa.Clontech,Jahr 1997）から、総配列ＳＥＱ Ｉ
ＤＮＯ：１をネステッドポリメラーゼ連鎖反応を用いて
増幅させた。このために、次のオリゴヌクレオチドプラ
イマーを使用した： ＰＣＲ１：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４を使用 ＰＣＲ２：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５を使用。
【００３６】例２ ヒト組織中の新規レセプターの発現 新規レセプターの発現を５０の種々のヒト組織中でＲＮ
Ａ−ドットプロット−分析を用いて試験した。このため
に、クロンテック社（Ｆｉｒｍａ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）
のブロット（＃７７７０−１）を、レセプタープローブ
とハイブリド化させた。このプローブはジゴキシゲニン
−標識されたヌクレオチドの存在下での相応するｃＤＮ
Ａのインビトロな転写により製造した。厳しい洗浄の後
に、この写しは、主として脳組織中で立証された。
Ａ−ドットプロット−分析を用いて試験した。このため
に、クロンテック社（Ｆｉｒｍａ Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）
のブロット（＃７７７０−１）を、レセプタープローブ
とハイブリド化させた。このプローブはジゴキシゲニン
−標識されたヌクレオチドの存在下での相応するｃＤＮ
Ａのインビトロな転写により製造した。厳しい洗浄の後
に、この写しは、主として脳組織中で立証された。
【００３７】配列リスト （１）一般的記載： （ｉ）出願人： （Ａ）名称：ＢＡＳＦ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃ
ｈａｆｔ （Ｂ）町番地：Ｃａｒｌ−Ｂｏｓｃｈ−Ｓｔｒａｓｓｅ
３８ （Ｃ）市名：Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ （Ｅ）国：ドイツ （Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：Ｄ−６７００ （Ｇ）電話：０６２１／６０４８５２６ （Ｈ）テレファックス：０６２１／６０４３１２３ （Ｉ）テレックス：１７６２１７５１７０ （ii）発明の名称：ヒト脳からの新規Ｇ蛋白質−結合レ
セプター （iii)配列の数：５ （iv）コンピュータ記録方式： （Ａ）記録媒体：フロッピイデイスク （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ ＰＣ コンパチブル （Ｃ）システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウエア：ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｒｅｌｅａｓ
ｅ＃１.０、Ｖｅｒｓｉｏｎ ＃１．２５（ＥＰＯ） （２）配列番号 １： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２４１１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ （iii)ハイポセテイカル： ＮＯ （iv）アンチセンス： ＮＯ （vi）起源： （Ａ）生物：ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ） （Ｂ）組織タイプ：脳 （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ５’ＵＴＲ （Ｂ）位置：１..１９ （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ＣＤＳ （Ｂ）位置：２０..１４６２ （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ３’ＵＴＲ （Ｂ）位置：１４６３..２４１１ （ｘｉ） 配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
ｈａｆｔ （Ｂ）町番地：Ｃａｒｌ−Ｂｏｓｃｈ−Ｓｔｒａｓｓｅ
３８ （Ｃ）市名：Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ （Ｅ）国：ドイツ （Ｆ）郵便番号（ＺＩＰ）：Ｄ−６７００ （Ｇ）電話：０６２１／６０４８５２６ （Ｈ）テレファックス：０６２１／６０４３１２３ （Ｉ）テレックス：１７６２１７５１７０ （ii）発明の名称：ヒト脳からの新規Ｇ蛋白質−結合レ
セプター （iii)配列の数：５ （iv）コンピュータ記録方式： （Ａ）記録媒体：フロッピイデイスク （Ｂ）コンピュータ：ＩＢＭ ＰＣ コンパチブル （Ｃ）システム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウエア：ＰａｔｅｎｔＩｎ Ｒｅｌｅａｓ
ｅ＃１.０、Ｖｅｒｓｉｏｎ ＃１．２５（ＥＰＯ） （２）配列番号 １： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２４１１塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡ （iii)ハイポセテイカル： ＮＯ （iv）アンチセンス： ＮＯ （vi）起源： （Ａ）生物：ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ） （Ｂ）組織タイプ：脳 （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ５’ＵＴＲ （Ｂ）位置：１..１９ （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ＣＤＳ （Ｂ）位置：２０..１４６２ （ix）特徴： （Ａ）名称／キイ： ３’ＵＴＲ （Ｂ）位置：１４６３..２４１１ （ｘｉ） 配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
【００３８】
【化１】
【００３９】
【化２】
【００４０】
【化３】
【００４１】
【化４】
【００４２】（２）配列番号 ２： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：４８１アミノ酸 （Ｂ）種類：アミノ酸 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）配列の種類：蛋白質 （ｘｉ）配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
【００４３】
【化５】
【００４４】
【化６】
【００４５】
【化７】 （２）配列番号 ３： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２６塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム） （iii)ハイポセテイカル： ＮＯ （iv）アンテイセンス： ＮＯ （xi）配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３： ＣＴＣＧＧＧＡＡＧＣ ＧＣＧＣＣＡＴＴＧＴ ＧＴＴＧＧＴ ２６ （２）配列番号 ４： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２６塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類：ＤＮＡ（ゲノム） （iii)ハイポセテイカル： ＮＯ （iv）アンテイセンス： ＮＯ （xi）配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４： ＧＡＧＣＣＣＡＣＣＣ ＡＧＡＴＧＡＣＡＧＣ ＣＡＡＣＴＴ ２６ （２）配列番号 ５： ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ：２６塩基対 （Ｂ）種類：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）配列の種類： ＤＮＡ（ゲノム） （iii)ハイポセテイカル： ＮＯ （iv）アンテイセンス： ＮＯ （xi）配列記載：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５： ＴＧＡＡＧＧＧＣＡＣ ＧＧＣＡＣＧＡＣＡＡ ＧＡＡＡＣＧ ２６
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 1/68 Ａ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/53 33/566 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (13)
- 【請求項１】 ＳＥＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載のアミ
ノ酸配列を有するか又はこれから１個以上のアミノ酸残
基の置換、挿入又は欠失により得られる配列を有し、こ
の際、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載の蛋白質の主要生
物学的特性の少なくとも一つが保留されている、単離さ
れた蛋白質。 - 【請求項２】 ヒト蛋白質である、請求項１に記載の蛋
白質。 - 【請求項３】 請求項１に記載の蛋白質をコード化する
核酸配列。 - 【請求項４】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載の配列に
対して少なくとも６０％の同一性を有する蛋白質をコー
ド化する、請求項３に記載の核酸配列。 - 【請求項５】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載の配列を
含有する、請求項４に記載の核酸配列。 - 【請求項６】 少なくとも１つの遺伝子調節エレメント
と機能的に結合している請求項３に記載の核酸配列を含
有する、組み換え核酸構成体。 - 【請求項７】 請求項３に記載の核酸配列を用いて形質
転換された宿主生物。 - 【請求項８】 請求項６に記載の組み換え核酸構成体を
用いて形質転換された宿主生物。 - 【請求項９】 請求項１に記載の蛋白質を特異的に認識
する抗体。 - 【請求項１０】 細胞表面上に請求項１に記載の蛋白質
を有する細胞を、多数の調査すべき物質（試験物質）と
一緒にし、次いで試験物質の存在及び不存在下でレセプ
ターの生物学的活性を比較することよりなる、請求項１
に記載の蛋白質の拮抗剤及び作働薬を同定する方法。 - 【請求項１１】 次の工程： ａ）請求項１に記載の蛋白質を真核性細胞中に発現さ
せ、 ｂ）この細胞を、有利に脳組織に由来する蛋白質エキス
と共に恒温保持し、 ｃ）調査すべき物質の請求項１に記載の蛋白質への結合
及び活性化を、細胞中のｃＡＭＰ濃度及びカルシウム流
の測定により検出する よりなる、物質を請求項１に記載の蛋白質のリガンドと
して機能するその特性に関して試験する方法。 - 【請求項１２】 次の工程： ａ）生物学的試料を、請求項３に記載の核酸既知量と一
緒に、又は請求項３に記載の核酸の増幅のためのプライ
マーとして好適であるオリゴヌクレオチド既知量と一緒
に恒温保持し、 ｂ）特異的ハイブリッド化又はＰＣＲ−増幅により請求
項３に記載の核酸を検出し、 ｃ）請求項３に記載のハイブリッド化性核酸又はＰＣＲ
−増幅により得られる請求項３に記載の核酸の量を標準
と比較する よりなる、生物学的試料中の請求項３に記載の核酸を定
性的及び定量的に検出する方法。 - 【請求項１３】 次の工程： ａ）生物学的試料を請求項１に記載の蛋白質に対して特
異的に向いている抗体と一緒に恒温保持し、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体の量を標準と比較する よりなる、生物学的試料中の請求項１に記載の蛋白質を
定性的及び定量的に検出する方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19805351.7 | 1998-02-11 | ||
| DE1998105351 DE19805351A1 (de) | 1998-02-11 | 1998-02-11 | Neuer G-Protein-gekoppelter Rezeptor aus menschlichem Gehirn |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11318452A true JPH11318452A (ja) | 1999-11-24 |
Family
ID=7857241
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11031497A Withdrawn JPH11318452A (ja) | 1998-02-11 | 1999-02-09 | ヒト脳からの新規ｇ蛋白質―結合レセプタ― |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0943685A3 (ja) |
| JP (1) | JPH11318452A (ja) |
| DE (1) | DE19805351A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002515259A (ja) * | 1998-05-21 | 2002-05-28 | メルク・アンド・カンパニー・インコーポレーテッド | 新規なｇタンパク質共役受容体 |
| US20030114407A1 (en) * | 2001-12-06 | 2003-06-19 | Monia Brett P. | Antisense modulation of G protein-coupled receptor ETBR-LP-2 expression |
| CA2382889A1 (en) * | 1999-08-27 | 2001-03-08 | Takuya Watanabe | Novel g protein-coupled receptor protein and dna thereof |
| US20020037850A1 (en) * | 2000-02-15 | 2002-03-28 | Vernet Corine A. M. | Novel polypeptides and nucleic acids encoding same |
| US20030190715A1 (en) * | 2000-10-12 | 2003-10-09 | Grosse William M. | Novel proteins and nucleic acids encoding same |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10127289A (ja) * | 1996-10-29 | 1998-05-19 | Takeda Chem Ind Ltd | 新規ｇ蛋白質共役型レセプター蛋白質およびそのｄｎａ |
-
1998
- 1998-02-11 DE DE1998105351 patent/DE19805351A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-01-22 EP EP99101164A patent/EP0943685A3/de not_active Withdrawn
- 1999-02-09 JP JP11031497A patent/JPH11318452A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0943685A3 (de) | 2000-08-16 |
| EP0943685A2 (de) | 1999-09-22 |
| DE19805351A1 (de) | 1999-08-12 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20060509 |