JP2000023678A - 前立腺からの新規セリンプロテア―ゼ - Google Patents
前立腺からの新規セリンプロテア―ゼInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 前立腺からの新規セリンプロテアーゼ、その
遺伝子およびその前立腺疾患に関しての使用。 【解決手段】 ｃＤＮＡライブラリーで同定されたＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のヌクレオチド配列を使用して、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２のタンパク質を当業者に公知の発現方
法によって発現させ、それを生物学的試料の定性的およ
び定量的な検出方法ならびに同定方法のための工程にお
いて使用することを提供する。
遺伝子およびその前立腺疾患に関しての使用。 【解決手段】 ｃＤＮＡライブラリーで同定されたＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のヌクレオチド配列を使用して、ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２のタンパク質を当業者に公知の発現方
法によって発現させ、それを生物学的試料の定性的およ
び定量的な検出方法ならびに同定方法のための工程にお
いて使用することを提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ヒトの前立腺から
の新規セリンプロテアーゼ、その遺伝子およびその使用
に関する。
の新規セリンプロテアーゼ、その遺伝子およびその使用
に関する。
【０００２】
【従来の技術】前立腺からのセリンプロテアーゼは既に
公知である。これらは、就中セメノゲリン（semenogeli
n）ＩおよびＩＩならびにフィブロネクチンのタンパク
質分解的消化によって精液を液化し、かつ精子活動力を
増大させる役割を果たす。また、インスリン様成長因子
／結合タンパク質−３の開裂および随伴する成長因子の
有糸分裂促進活性も、前立腺特異的プロテアーゼによる
ものである。
公知である。これらは、就中セメノゲリン（semenogeli
n）ＩおよびＩＩならびにフィブロネクチンのタンパク
質分解的消化によって精液を液化し、かつ精子活動力を
増大させる役割を果たす。また、インスリン様成長因子
／結合タンパク質−３の開裂および随伴する成長因子の
有糸分裂促進活性も、前立腺特異的プロテアーゼによる
ものである。
【０００３】最も顕著なメンバーは、ヒト組織カリクレ
インファミリーに属する前立腺特異抗原（ＰＳＡ）であ
る。近年、ＰＳＡは前立腺疾患の診断用マーカーとして
非常に重要なものとなった。しかしながら、ＰＳＡマー
カーの重要性は限られている。それというのも、ＰＳＡ
レベルは、前立腺肥大症と前立腺腫瘍とを明白に判別し
ないからである。更に、細菌性前立腺炎および他の疾患
も同様に血清ＰＳＡレベルを増加させることがある。更
に、血清ＰＳＡレベルは、前立腺切除後の結果を観察す
るために使用される。
インファミリーに属する前立腺特異抗原（ＰＳＡ）であ
る。近年、ＰＳＡは前立腺疾患の診断用マーカーとして
非常に重要なものとなった。しかしながら、ＰＳＡマー
カーの重要性は限られている。それというのも、ＰＳＡ
レベルは、前立腺肥大症と前立腺腫瘍とを明白に判別し
ないからである。更に、細菌性前立腺炎および他の疾患
も同様に血清ＰＳＡレベルを増加させることがある。更
に、血清ＰＳＡレベルは、前立腺切除後の結果を観察す
るために使用される。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：２に記載されるアミノ酸配列またはその１個
以上のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失によって得
られ、かつなおＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載されるタン
パク質の主要な生物学的特性を少なくとも１つ有する配
列を有する単離タンパク質に関する。
Ｄ ＮＯ：２に記載されるアミノ酸配列またはその１個
以上のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失によって得
られ、かつなおＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載されるタン
パク質の主要な生物学的特性を少なくとも１つ有する配
列を有する単離タンパク質に関する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に
よる新規タンパク質はセリンプロテアーゼである。これ
はセリンプロテアーゼファミリーＥＣ ３．４．２１の
新規のメンバーである。配列比較によって、キモトリプ
シノゲンおよび種々のカリクレインに対する高い類似性
が示される。
よる新規タンパク質はセリンプロテアーゼである。これ
はセリンプロテアーゼファミリーＥＣ ３．４．２１の
新規のメンバーである。配列比較によって、キモトリプ
シノゲンおよび種々のカリクレインに対する高い類似性
が示される。
【０００６】また、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に
記載されるアミノ酸配列から出発して選択的修飾によっ
て生産することができるセリンプロテアーゼ型のタンパ
ク質に関する。例えば、一定のアミノ酸を、類似の物理
化学的特性（嵩、塩基性度）を有するアミノ酸と置換す
ることが可能である。しかしながら、１個以上のアミノ
酸の添加もしくは除去、または幾つかのこれらの段階を
組み合わせることも可能である。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
に関して、かかる方法で修飾したタンパク質は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２に対して、ピアソンおよびリップマン
（Pearson and Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci（USA）85,
2444-2448）によるアルゴリズムを使用して計算して、
少なくとも６０％、有利には少なくとも７５％のホモロ
ジーを有する。
記載されるアミノ酸配列から出発して選択的修飾によっ
て生産することができるセリンプロテアーゼ型のタンパ
ク質に関する。例えば、一定のアミノ酸を、類似の物理
化学的特性（嵩、塩基性度）を有するアミノ酸と置換す
ることが可能である。しかしながら、１個以上のアミノ
酸の添加もしくは除去、または幾つかのこれらの段階を
組み合わせることも可能である。ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２
に関して、かかる方法で修飾したタンパク質は、ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２に対して、ピアソンおよびリップマン
（Pearson and Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci（USA）85,
2444-2448）によるアルゴリズムを使用して計算して、
少なくとも６０％、有利には少なくとも７５％のホモロ
ジーを有する。
【０００７】また、本発明は、前記のタンパク質、特に
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載される１次構造を有するタ
ンパク質をコードする核酸配列に関する。
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載される１次構造を有するタ
ンパク質をコードする核酸配列に関する。
【０００８】ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載される構造を
有するヌクレオチド配列は、当初幾つかのヒト前立腺の
ｃＤＮＡライブラリーで同定された。５０種の異なるヒ
トの組織中の相応のｍＲＮＡ分布の分析によって、ほぼ
前立腺で限定的に発現することが示された。しかしなが
ら、転写は腎臓、唾液腺、甲状腺および副腎においても
非常に少量検出することができる。
有するヌクレオチド配列は、当初幾つかのヒト前立腺の
ｃＤＮＡライブラリーで同定された。５０種の異なるヒ
トの組織中の相応のｍＲＮＡ分布の分析によって、ほぼ
前立腺で限定的に発現することが示された。しかしなが
ら、転写は腎臓、唾液腺、甲状腺および副腎においても
非常に少量検出することができる。
【０００９】本発明のｃＤＮＡによってコードされるポ
リペプチドは、明白にセリンプロテアーゼとして同定す
ることができる。該タンパク質ファミリーの特徴である
３個の触媒的構造は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２におけるヒ
スチジン ４８、アスパラギン酸 ９３およびセリン １
８４を有するアミノ酸配列領域であり、これら全ては高
度に保存されている。アミノ酸レベルでの最も高い類似
性は、角質層のヒトキモトリプシノゲンに対しての４
７．１％の同一性を有することである（FastA program,
Pearson and Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci（USA）85,
2444-2448）。
リペプチドは、明白にセリンプロテアーゼとして同定す
ることができる。該タンパク質ファミリーの特徴である
３個の触媒的構造は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２におけるヒ
スチジン ４８、アスパラギン酸 ９３およびセリン １
８４を有するアミノ酸配列領域であり、これら全ては高
度に保存されている。アミノ酸レベルでの最も高い類似
性は、角質層のヒトキモトリプシノゲンに対しての４
７．１％の同一性を有することである（FastA program,
Pearson and Lipman, Proc.Natl.Acad.Sci（USA）85,
2444-2448）。
【００１０】本発明の配列においては、Ｎ−末端をコー
ドしているｃＤＮＡ領域が欠損している。ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２と他のセリンプロテアーゼ、特に角質層からの
ヒトキモトリプシノゲンとの間の配列ホモロジーの観察
された共直線性からは、前記の欠損部分は少なくとも１
０個のアミノ酸を有するシグナルペプチドおよび１つの
プロタンパク質部分を包含すると推測することができ
る。
ドしているｃＤＮＡ領域が欠損している。ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２と他のセリンプロテアーゼ、特に角質層からの
ヒトキモトリプシノゲンとの間の配列ホモロジーの観察
された共直線性からは、前記の欠損部分は少なくとも１
０個のアミノ酸を有するシグナルペプチドおよび１つの
プロタンパク質部分を包含すると推測することができ
る。
【００１１】このプロテアーゼファミリーの多くの他の
代表的なもののように、不活性なプロタンパク質または
チモーゲンは細胞によって生産され、かつこれは成熟タ
ンパク質に活性化するために特異的プロテアーゼまたは
非特異的プロテアーゼによるＮ−末端アミノ酸のタンパ
ク質分解性消化を必要とする。この蛋白質分解段階のた
めの開裂部位は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２におけるアミノ
酸７および８の間（Ｇｌｎ ７の後）である。
代表的なもののように、不活性なプロタンパク質または
チモーゲンは細胞によって生産され、かつこれは成熟タ
ンパク質に活性化するために特異的プロテアーゼまたは
非特異的プロテアーゼによるＮ−末端アミノ酸のタンパ
ク質分解性消化を必要とする。この蛋白質分解段階のた
めの開裂部位は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２におけるアミノ
酸７および８の間（Ｇｌｎ ７の後）である。
【００１２】本発明のｃＤＮＡは、種々の発現系におい
て、当業者に公知のクローニングおよびトランスフェク
ション法によって発現させることができる。これらは、
例えば、原核または真核のベクター系、例えばＳＶ４
０、ＣＭＶ、バキュロウイルス、アデノウイルス、プラ
スミド、ファージミド、ファージである。
て、当業者に公知のクローニングおよびトランスフェク
ション法によって発現させることができる。これらは、
例えば、原核または真核のベクター系、例えばＳＶ４
０、ＣＭＶ、バキュロウイルス、アデノウイルス、プラ
スミド、ファージミド、ファージである。
【００１３】この目的のために、本発明による核酸配列
を、通常、遺伝調節エレメント、例えば転写および翻訳
シグナルに機能的に結合させる。次いで、この方法で作
成した組み換え核酸構成体を使用して、宿主生物を形質
転換する。
を、通常、遺伝調節エレメント、例えば転写および翻訳
シグナルに機能的に結合させる。次いで、この方法で作
成した組み換え核酸構成体を使用して、宿主生物を形質
転換する。
【００１４】有利な態様は、本発明による核酸配列とプ
ロモーターとを組み合わせることであり、該プロモータ
ーは結果として５’−上流になる。他の調節シグナル、
例えばターミネーター、ポリアデニル化シグナル、エン
ハンサーを前記の核酸構成体中で使用してもよい。
ロモーターとを組み合わせることであり、該プロモータ
ーは結果として５’−上流になる。他の調節シグナル、
例えばターミネーター、ポリアデニル化シグナル、エン
ハンサーを前記の核酸構成体中で使用してもよい。
【００１５】適当な宿主細胞は細菌、例えば大腸菌、真
核微生物、例えばサッカロミセスセレビジア（saccharo
myces cerevisiae）、および動物または植物の高度な真
核細胞、例えばＳｆ９またはＣＨＯ細胞である。
核微生物、例えばサッカロミセスセレビジア（saccharo
myces cerevisiae）、および動物または植物の高度な真
核細胞、例えばＳｆ９またはＣＨＯ細胞である。
【００１６】また、所望であれば、該遺伝子はトランス
ジェニック生物、例えばトランスジェニック動物、例え
ばマウスおよびヒツジ、またはトランスジェニック植物
中で発現させてもよい。
ジェニック生物、例えばトランスジェニック動物、例え
ばマウスおよびヒツジ、またはトランスジェニック植物
中で発現させてもよい。
【００１７】この目的のために、前記のセリンプロテア
ーゼを、プレプロタンパク質およびプロタンパク質（チ
モーゲン）として、また活性（成熟）プロテアーゼとし
ても発現させることができる。
ーゼを、プレプロタンパク質およびプロタンパク質（チ
モーゲン）として、また活性（成熟）プロテアーゼとし
ても発現させることができる。
【００１８】また更に、遺伝子産物を、治療上または診
断上有用な断片の形で発現させることもできる。組み換
えタンパク質を単離するためには、一定のヌクレオチド
配列によってｃＤＮＡを伸長させるベクター系またはオ
リゴヌクレオチドを使用し、これによって精製がより容
易な修飾ポリペプチドをコードさせることが可能であ
る。このような前記の刊行物から公知である、かかる”
タグ”は、例えば種々の抗体が抗原として認識すること
ができるヘキサヒスチジンアンカーまたはエピトープで
ある（例えば、Harlow, E. and Lane, D.（1988）Antib
odies：A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor（N.
Y.）Press に記載されている）。
断上有用な断片の形で発現させることもできる。組み換
えタンパク質を単離するためには、一定のヌクレオチド
配列によってｃＤＮＡを伸長させるベクター系またはオ
リゴヌクレオチドを使用し、これによって精製がより容
易な修飾ポリペプチドをコードさせることが可能であ
る。このような前記の刊行物から公知である、かかる”
タグ”は、例えば種々の抗体が抗原として認識すること
ができるヘキサヒスチジンアンカーまたはエピトープで
ある（例えば、Harlow, E. and Lane, D.（1988）Antib
odies：A Laboratory Manual.Cold Spring Harbor（N.
Y.）Press に記載されている）。
【００１９】ペプチド配列から出発して、抗体の製造の
ために抗原として使用される合成ペプチドを生ぜしめる
ことが可能である。また、該ポリペプチドまたはその断
片を使用して、抗体を生ぜしめることも可能である。
ために抗原として使用される合成ペプチドを生ぜしめる
ことが可能である。また、該ポリペプチドまたはその断
片を使用して、抗体を生ぜしめることも可能である。
【００２０】抗体の製造は、当業者に公知である。抗体
は、ポリクローナル、モノクローナル、ヒトのまたはヒ
ト化した（humanized）抗体またはその断片、単一鎖（s
ingle chain）抗体および合成抗体も包含する。
は、ポリクローナル、モノクローナル、ヒトのまたはヒ
ト化した（humanized）抗体またはその断片、単一鎖（s
ingle chain）抗体および合成抗体も包含する。
【００２１】また、本発明のｃＤＮＡは、新規セリンプ
ロテアーゼ遺伝子のゲノム配列をクローニングするため
のベースを提供する。これは、例えば本発明のｃＤＮＡ
の５’上流領域の配列決定によって理解することができ
る相応の調節配列またはプロモーター配列を包含する。
また、該ｃＤＮＡの配列情報は、アンチセンス分子また
はリボザイムの製造のためのベースでもある。
ロテアーゼ遺伝子のゲノム配列をクローニングするため
のベースを提供する。これは、例えば本発明のｃＤＮＡ
の５’上流領域の配列決定によって理解することができ
る相応の調節配列またはプロモーター配列を包含する。
また、該ｃＤＮＡの配列情報は、アンチセンス分子また
はリボザイムの製造のためのベースでもある。
【００２２】ヌクレオチド配列またはその部分の使用に
関する他の可能性は、トランスジェニック動物の生産で
ある。適当な動物モデル中の配列情報のトランスジェニ
ック過発現または遺伝子のノックアウトによって、新規
のセリンプロテアーゼの（病態）生理学上で有用な他の
情報を得ることができる。
関する他の可能性は、トランスジェニック動物の生産で
ある。適当な動物モデル中の配列情報のトランスジェニ
ック過発現または遺伝子のノックアウトによって、新規
のセリンプロテアーゼの（病態）生理学上で有用な他の
情報を得ることができる。
【００２３】該遺伝子の調節配列、特にプロモーター配
列またはプロモーターの部分配列は、該遺伝子および他
の遺伝子の組織特異的発現のために使用することができ
る。これは、前立腺特異遺伝子発現の実施の可能性をも
たらす。
列またはプロモーターの部分配列は、該遺伝子および他
の遺伝子の組織特異的発現のために使用することができ
る。これは、前立腺特異遺伝子発現の実施の可能性をも
たらす。
【００２４】前記のタンパク質活性が不全である場合に
は、多くの代用の方法を使用することが可能である。１
つには、天然または組み換えタンパク質を、直接また
は、適当な方法で、それをコードする核酸（すなわち、
ＤＮＡまたはＲＮＡ）の形において使用することが可能
である。この目的のために、ウイルスベクターおよび非
ウイルスベクターのいずれを使用することも可能であ
る。もう１つの可能性は、適当な物質による内在性遺伝
子の刺激である。該物質は、例えばセリンプロテアーゼ
遺伝子の転写因子に関するその活性を測定することで発
見することができる。
は、多くの代用の方法を使用することが可能である。１
つには、天然または組み換えタンパク質を、直接また
は、適当な方法で、それをコードする核酸（すなわち、
ＤＮＡまたはＲＮＡ）の形において使用することが可能
である。この目的のために、ウイルスベクターおよび非
ウイルスベクターのいずれを使用することも可能であ
る。もう１つの可能性は、適当な物質による内在性遺伝
子の刺激である。該物質は、例えばセリンプロテアーゼ
遺伝子の転写因子に関するその活性を測定することで発
見することができる。
【００２５】前記のプロテアーゼタンパク質活性が過剰
である場合には、該タンパク質活性の種々のインヒビタ
ーを使用することが可能である。この阻害は、アンチセ
ンス分子もしくはリボザイムまたは抗体およびオリゴヌ
クレオチドによっても、低分子（low molecular）化合
物によっても達成することができる。
である場合には、該タンパク質活性の種々のインヒビタ
ーを使用することが可能である。この阻害は、アンチセ
ンス分子もしくはリボザイムまたは抗体およびオリゴヌ
クレオチドによっても、低分子（low molecular）化合
物によっても達成することができる。
【００２６】更に、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プロモー
ター、またポリペプチドおよびその部分的な断片を、組
み換え形または非組み換え形で、試験系を作り上げるた
めに使用することができる。該試験系は、試験化合物の
存在下でプロモーターまたはタンパク質の活性を測定す
るのに適当である。有利には、この方法は、多くの試験
物質を迅速に試験することが可能な（比色、発光、蛍光
または放射能の種の）簡単な測定法である。記載した試
験系は、新規のプロテアーゼに関する試験物質の結合作
用またはアゴニスト作用もしくはアンタゴニスト作用の
評価を可能にする。
ター、またポリペプチドおよびその部分的な断片を、組
み換え形または非組み換え形で、試験系を作り上げるた
めに使用することができる。該試験系は、試験化合物の
存在下でプロモーターまたはタンパク質の活性を測定す
るのに適当である。有利には、この方法は、多くの試験
物質を迅速に試験することが可能な（比色、発光、蛍光
または放射能の種の）簡単な測定法である。記載した試
験系は、新規のプロテアーゼに関する試験物質の結合作
用またはアゴニスト作用もしくはアンタゴニスト作用の
評価を可能にする。
【００２７】ヒトの体内のプロテアーゼまたはｍＲＮＡ
の量、活性および分布の測定は、診断、疾病素因のた
め、かつ一定の疾患を観察するために使用することがで
きる。同様に、ｃＤＮＡ配列およびゲノム配列は、一定
の疾患の遺伝的原因および疾病素因に関する判定のため
に調べてもよい。この目的のために、ＤＮＡ／ＲＮＡの
両者の試料、また合成ＤＮＡ／ＲＮＡ試料、ならびに種
々の種類の抗体を使用してもよい。その際、記載したヌ
クレオチド配列またはその部分は、適当な試料の形で、
点突然変異または欠失／挿入の発明のために使用しても
よい。
の量、活性および分布の測定は、診断、疾病素因のた
め、かつ一定の疾患を観察するために使用することがで
きる。同様に、ｃＤＮＡ配列およびゲノム配列は、一定
の疾患の遺伝的原因および疾病素因に関する判定のため
に調べてもよい。この目的のために、ＤＮＡ／ＲＮＡの
両者の試料、また合成ＤＮＡ／ＲＮＡ試料、ならびに種
々の種類の抗体を使用してもよい。その際、記載したヌ
クレオチド配列またはその部分は、適当な試料の形で、
点突然変異または欠失／挿入の発明のために使用しても
よい。
【００２８】更に、記載したタンパク質活性は、天然の
基質を発見しかつ単離するために使用してもよい。この
手順のための適当な方法は、サイエンス（Kothakota,
S. etal., Science 278, 294-298（1997））に記載され
ている。
基質を発見しかつ単離するために使用してもよい。この
手順のための適当な方法は、サイエンス（Kothakota,
S. etal., Science 278, 294-298（1997））に記載され
ている。
【００２９】本発明の核酸配列およびそれによりコード
されるプロテアーゼならびにそれから誘導される試薬
（オリゴヌクレオチド、抗体）は、前立腺および“生殖
器系”の疾患の診断および治療、ならびに受精能疾患、
乳癌、前立腺炎、前立腺肥大症、前立腺癌およびその転
移の場合における診断および治療のために使用してもよ
い。
されるプロテアーゼならびにそれから誘導される試薬
（オリゴヌクレオチド、抗体）は、前立腺および“生殖
器系”の疾患の診断および治療、ならびに受精能疾患、
乳癌、前立腺炎、前立腺肥大症、前立腺癌およびその転
移の場合における診断および治療のために使用してもよ
い。
【００３０】更に、前記の疾患に関する遺伝的疾病素因
の診断および測定を可能にする。
の診断および測定を可能にする。
【００３１】更に、前記の疾患の治療および療法の観察
を実施することができる。
を実施することができる。
【００３２】また、本発明は、以下の工程を特徴とす
る、生物学的試料における請求項３記載の核酸の定性的
かつ定量的な検出法に関する： ａ）生物学的試料を請求項３記載の核酸の公知量または
請求項３記載の核酸の増幅のためのプライマーとして適
当なオリゴヌクレオチドの公知量とインキュベートし、 ｂ）請求項３記載の核酸を特異的ハイブリダイゼーショ
ンまたはＰＣＲ増幅によって検出し、 ｃ）ハイブリダイズした請求項３記載の核酸、またはＰ
ＣＲ増幅によって得られた請求項３記載の核酸の量とス
タンダードとを比較する。
る、生物学的試料における請求項３記載の核酸の定性的
かつ定量的な検出法に関する： ａ）生物学的試料を請求項３記載の核酸の公知量または
請求項３記載の核酸の増幅のためのプライマーとして適
当なオリゴヌクレオチドの公知量とインキュベートし、 ｂ）請求項３記載の核酸を特異的ハイブリダイゼーショ
ンまたはＰＣＲ増幅によって検出し、 ｃ）ハイブリダイズした請求項３記載の核酸、またはＰ
ＣＲ増幅によって得られた請求項３記載の核酸の量とス
タンダードとを比較する。
【００３３】更に、本発明は、以下の工程を特徴とす
る、生物学的試料における請求項１記載のタンパク質の
定性的かつ定量的な検出法に関する： ａ）生物学的試料を請求項１記載のタンパク質に対して
特異的に反応する抗体と一緒にインキュベートし、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体の量をスタンダードと比較する。
る、生物学的試料における請求項１記載のタンパク質の
定性的かつ定量的な検出法に関する： ａ）生物学的試料を請求項１記載のタンパク質に対して
特異的に反応する抗体と一緒にインキュベートし、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体の量をスタンダードと比較する。
【００３４】使用されるスタンダードは、通常、健康な
生物から採取した生物学的試料である。
生物から採取した生物学的試料である。
【００３５】本発明によるプロテアーゼのインヒビター
は、転移する腫瘍の治療に使用することができる。これ
らのインヒビターに関する他の分野での使用は、精子の
成熟の阻害による避妊である。
は、転移する腫瘍の治療に使用することができる。これ
らのインヒビターに関する他の分野での使用は、精子の
成熟の阻害による避妊である。
【００３６】
【実施例】例１ セリンプロテアーゼｃＤＮＡのクローニング ヒト前立腺からのｃＤＮＡライブラリーのｃＤＮＡクロ
ーン（例えば、ヒト前立腺の５’−伸長プラスｃＤＮＡ
（5’-stretch plus cDNA）, Clontech, #HL5026t）の
配列分析において、本発明の配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
を同定した。このクローンの配列は、アミノ酸１から停
止コドンまでのコドン領域を包含し、かつ更に、３’−
非翻訳領域はポリアデニル化シグナルおよびポリ（Ａ）
末端を包含する。
ーン（例えば、ヒト前立腺の５’−伸長プラスｃＤＮＡ
（5’-stretch plus cDNA）, Clontech, #HL5026t）の
配列分析において、本発明の配列ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１
を同定した。このクローンの配列は、アミノ酸１から停
止コドンまでのコドン領域を包含し、かつ更に、３’−
非翻訳領域はポリアデニル化シグナルおよびポリ（Ａ）
末端を包含する。
【００３７】例２ ヒト組織における新規セリンプロテアーゼの発現 新規のセリンプロテアーゼの発現は、５０種の異なるヒ
トの組織において、ＲＮＡ−ドットブロット分析を使用
して調査した。この目的のために、クロンテック（Clon
tech）（#7770-1）からのブロットを、試料としてＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のヌクレオチド配列、位置９２〜４６
６とハイブリダイズさせた。該試料は、ジゴキシゲニン
標識したヌクレオチドの存在下に相応のｃＤＮＡの試験
管内での転写によって、バイオテクニクス（BioTechniq
ues 13（4）, 604-610（1992））に記載のように製造し
た。
トの組織において、ＲＮＡ−ドットブロット分析を使用
して調査した。この目的のために、クロンテック（Clon
tech）（#7770-1）からのブロットを、試料としてＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１のヌクレオチド配列、位置９２〜４６
６とハイブリダイズさせた。該試料は、ジゴキシゲニン
標識したヌクレオチドの存在下に相応のｃＤＮＡの試験
管内での転写によって、バイオテクニクス（BioTechniq
ues 13（4）, 604-610（1992））に記載のように製造し
た。
【００３８】よく洗浄した後に、転写は主に前立腺組織
において検出された。
において検出された。
【００３９】配列表
【００４０】
【化１】
【００４１】
【化２】
【００４２】
【化３】
【００４３】
【化４】
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21 1/21 5/10 9/50 9/50 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｓ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ａ６１Ｋ 31/00 ６１５ // Ａ６１Ｋ 31/00 ６１５ ６３５ ６３５ ６３５Ｂ 39/395 Ｄ 38/55 Ｎ 39/395 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ Ａ６１Ｋ 37/64 (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (18)
- 【請求項１】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載されるアミ
ノ酸配列を有する単離タンパク質またはそれからの１個
以上のアミノ酸残基の置換、挿入または欠失によって得
られ、かつＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載されるタンパク
質の主要な生物学的特性をなお少なくとも１つ有する配
列。 - 【請求項２】 ヒトのタンパク質である請求項１記載の
タンパク質。 - 【請求項３】 請求項１記載のタンパク質をコードする
核酸配列。 - 【請求項４】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２に記載される配列
に少なくとも６０％の同一性を有するタンパク質をコー
ドする請求項３記載の核酸配列。 - 【請求項５】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載される構造
を有する請求項４記載の核酸配列。 - 【請求項６】 少なくとも１種の遺伝子調節エレメント
に機能的に組み合わせた請求項３記載の核酸配列を有す
る組み換え核酸構成体。 - 【請求項７】 請求項３記載の核酸配列で形質転換した
宿主生物。 - 【請求項８】 請求項６記載の組み換え核酸構成体で形
質転換した宿主生物。 - 【請求項９】 特異的な酵素インヒビターを同定するた
めの、請求項１記載のタンパク質の使用。 - 【請求項１０】 請求項１記載のタンパク質に対しての
特異抗体を形成させるための、請求項１記載のタンパク
質またはその免疫原ペプチド断片の、抗原としての使
用。 - 【請求項１１】 請求項１記載のタンパク質を特異的に
認識する抗体。 - 【請求項１２】 遺伝子治療のための請求項３記載の核
酸配列の使用。 - 【請求項１３】 遺伝子治療のための請求項３記載の配
列に相補的な核酸配列の使用。 - 【請求項１４】 請求項１記載のタンパク質を、阻害作
用を試験すべき物質（試験物質）の不在および存在下で
基質と一緒にインキュベートし、かつ引き続き、試験物
質の存在および不在下での該タンパク質の生物学的活性
を比較する、請求項１記載のタンパク質の特異的インヒ
ビターの同定方法。 - 【請求項１５】 以下の工程： ａ）請求項１記載のタンパク質を試験すべき物質と一緒
にインキュベートし、 ｂ）試験すべき物質の該タンパク質への結合を、タンパ
ク質構造の熱力学的安定性を測定することによって検出
するを包含する、請求項１記載のタンパク質への特異的
結合アフィニティーを有する物質の同定方法。 - 【請求項１６】 結合の検出を、試験すべき物質の存在
および不在下での、プロテアーゼによる分解に対するタ
ンパク質の耐性の測定によって実施する、請求項１５記
載の方法。 - 【請求項１７】 以下の工程： ａ）請求項３記載の核酸の公知量または請求項３記載の
核酸の増幅のためのプライマーとして適当なオリゴヌク
レオチドの公知量を有する生物学的試料をインキュベー
トし、 ｂ）請求項３記載の核酸を、特異的なハイブリダイゼー
ションまたはＰＣＲ増幅によって検出し、 ｃ）ハイブリダイズした請求項３記載の核酸またはＰＣ
Ｒ増幅によって得られた請求項３記載の核酸とスタンダ
ードとの量を比較することを包含する、生物学的試料に
おける請求項３記載の核酸の定性的および定量的な検出
のための方法。 - 【請求項１８】 以下の工程： ａ）生物学的試料を、請求項１記載のタンパク質に対し
て特異的な抗体と一緒にインキュベートし、 ｂ）抗体／抗原複合体を検出し、 ｃ）抗体／抗原複合体とスタンダードとの量を比較する
ことを包含する、生物学的試料における請求項１記載の
タンパク質の定性的かつ定量的な検出法。
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|---|---|---|---|
| DE19805633A DE19805633A1 (de) | 1998-02-12 | 1998-02-12 | Neue Serinprotease aus der Prostata |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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Family
ID=7857436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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| JP (1) | JP2000023678A (ja) |
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| TR199902053T2 (xx) | 1997-02-25 | 2000-04-21 | Corixa Corporation | Prostat kanserinin immunoterapisine y�nelik bile�ikler ve bunlar�n kullan�lmas�na matuf metodlar. |
| US6894146B1 (en) | 1997-02-25 | 2005-05-17 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US20030185830A1 (en) | 1997-02-25 | 2003-10-02 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
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| US6620922B1 (en) | 1997-02-25 | 2003-09-16 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| US6943236B2 (en) | 1997-02-25 | 2005-09-13 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
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| US6818751B1 (en) | 1997-08-01 | 2004-11-16 | Corixa Corporation | Compositions and methods for the therapy and diagnosis of prostate cancer |
| EP1724351A3 (en) * | 1999-03-11 | 2007-11-14 | Mount Sinai Hospital | Human Kallikrein-like genes |
| AU5416700A (en) * | 1999-05-20 | 2000-12-12 | Fahri Saatcioglu | Differentially expressed genes in prostate cancer |
| GB9922835D0 (en) * | 1999-09-25 | 1999-11-24 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| JP2003528584A (ja) * | 1999-10-07 | 2003-09-30 | シエーリング アクチエンゲゼルシャフト | Ｐｒｏｓｔ０７ポリペプチドをコードするｄｎａ |
| US7611892B2 (en) | 2000-03-24 | 2009-11-03 | President And Fellows Of Harvard College | Prostate-specific or testis-specific nucleic acid molecules, polypeptides, and diagnostic and therapeutic methods |
| GB0015736D0 (en) * | 2000-06-27 | 2000-08-16 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
-
1998
- 1998-02-12 DE DE19805633A patent/DE19805633A1/de not_active Withdrawn
-
1999
- 1999-02-06 EP EP99102357A patent/EP0936270A2/de not_active Withdrawn
- 1999-02-12 JP JP11034762A patent/JP2000023678A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
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|---|---|
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