JPH11276189A

JPH11276189A - 非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とする酵素によるオリゴ糖の製造方法

Info

Publication number: JPH11276189A
Application number: JP8369498A
Authority: JP
Inventors: Kimihiko Sato; 公彦佐藤; Shinichi Yoshida; 晋一吉田; Toru Otsuki; 徹大槻; Yoshimori Takamori; 吉守高森
Original assignee: Sanei Kogyo KK; Tottori Prefectural Government
Current assignee: Sanei Kogyo KK; Tottori Prefectural Government
Priority date: 1998-03-30
Filing date: 1998-03-30
Publication date: 1999-10-12

Abstract

(57)【要約】【課題】４量体以上の多量体のオリゴ糖が簡単に、し
かも効率良く得られると共に、コストダウンを図ること
ができる非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質
とする酵素によるオリゴ糖の製造方法を提供する。【解決手段】脱アセチル化度が５乃至９０％の非晶質
の水溶性部分脱アセチル化キチン２を基質とし、この水
溶性部分脱アセチル化キチン２を、リゾチーム３、キチ
ナーゼ４、又はキトサナーゼ５により加水分解する。前
記水溶性部分脱アセチル化キチン２を、リゾチーム３、
キチナーゼ４、又はキトサナーゼ５により加水分解した
後、Ｎ−アセチル化する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、脱アセチル化度
が５〜９０％、即ちＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンと
Ｄ−グルコサミンとを構成単位とし、Ｎ−アセチル−Ｄ
−グルコサミン単位の含量が１０〜９５％、Ｄ−グルコ
サミン単位の含量が９０〜５％である非晶質の水溶性部
分脱アセチル化キチンを基質とする酵素によるオリゴ糖
の製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のように、キチン又はキトサンの７
量体や８量体のオリゴ糖が抗ガン、抗エイズ作用がある
というラットを用いた研究が報告されてから、この分野
の研究が盛んに行われている。

【０００３】キチン又はキトサンのオリゴ糖を得るため
の従来のこの種の技術としては、例えば、(1) 図７の模
式図のように表されるキチン７を、図８に示すように、
キチナーゼ４又はリゾチーム３で加水分解する方法、
(2) 図７の模式図のように表されるキトサン９から、図
９に示すように、バチルス属に属する微生物により生産
されるキトサナーゼ５を用いてキトサンオリゴ糖を製造
する方法（特公昭６２−３０１０３号公報参照）、(3)
キトサン溶液をペクチナーゼを主成分とする酵素剤で処
理してキトサンオリゴ糖を製造する方法（特公平１−２
９１７９９号公報参照）、(4) 図１０に示すように、キ
チン７又はキトサン９を濃塩酸により加熱加水分解する
方法、(5) キトサン分解酵素（キトサナーゼ）をキトサ
ンに作用させる際、反応液のｐＨを酵素の至適ｐＨより
も低くすることにより特異的に高重合度のキトサンオリ
ゴ糖を得る方法（特公平４−１０８３９６号公報参
照）、(6) キトサン分解活性を有する酵素（キトサナー
ゼ）によるキトサン分解反応を、膜透過率が最大に調整
された限外濾過器内で行って高級キトサンオリゴ糖を含
むキトサンオリゴ糖混合物を生成させる方法（特開平５
−６８５８０号公報参照）等が知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記
(1) の方法においては、図８のように、基質となるキチ
ン７が強固な結晶構造を有し、しかも水に溶解しないた
め、キチナーゼ４又はリゾチーム３との親和性が低く、
キチンオリゴ糖の効率的な生産が困難であるという問題
点がある。

【０００５】上記(2) や(3) の方法においては、図９の
ように、キトサン９が２量体１０や３量体１１にまで分
解する又は分解すると考えられるため、多量体のオリゴ
糖を得るのが困難であるという問題点がある。

【０００６】上記(4) の方法においては、図１０のよう
に、キチン７とキトサン９のいずれをも分解できるが、
生成物のほとんどはグルコサミン（Ｄ−グルコサミン）
であり、オリゴ糖の収量が低いという問題点がある。ま
た、８０〜１００℃程度の高温にまで加熱の必要がある
と共に、排水処理にコストがかかるため、製造コストが
高いという問題点がある。

【０００７】上記(5) 及び(6) の方法においては、所定
段階で反応を止める必要があるために反応時間等の条件
を厳密に制御する必要があると共に、酵素として安価な
リゾチームを用いた場合、有効に反応できないためにコ
ストダウンを図りにくいという問題点がある。

【０００８】この発明は、以上のような事情や問題点に
鑑みてなされたものであり、４量体以上の多量体のオリ
ゴ糖が簡単に、しかも効率良く得られると共に、コスト
ダウンを図ることができる非晶質の水溶性部分脱アセチ
ル化キチンを基質とする酵素によるオリゴ糖の製造方法
を提供することを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
の手段とするところは、第１に、脱アセチル化度が５乃
至９０％の非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基
質とし、この水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチ
ーム、キチナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解す
ることにある。

【００１０】第２に、脱アセチル化度が５乃至９０％の
非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とし、こ
の水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチーム、キチ
ナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解した後、Ｎ−
アセチル化することにある。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、この発明の実施形態を図面
に基づいて説明する。図１(a) 乃至(d) に示すように、
この実施形態に係るキチンオリゴ糖１の製造方法は、脱
アセチル化度が５〜９０％の非晶質の水溶性部分脱アセ
チル化キチン２を基質とし、この水溶性部分脱アセチル
化キチン２を、加水分解酵素としてリゾチーム３、キチ
ナーゼ４、又はキトサナーゼ５により加水分解して部分
脱アセチル化キチンオリゴ糖６を生成させた後、Ｎ−ア
セチル化するものである。

【００１２】前記水溶性部分脱アセチル化キチン２は、
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位（図１(a) 中の
●）の含量が１０〜９５％、Ｄ−グルコサミン単位（図
１(a)中の○）の含量が９０〜５％であり、ランダムに
脱アセチル化された非晶質物質である。そのため、脱ア
セチル化度が５〜９０％とされたこの水溶性部分脱アセ
チル化キチン２は、冷水、氷水、水、及び希酸に膨潤し
易い。

【００１３】この水溶性部分脱アセチル化キチン２を調
製するには、例えば図１(a) に示すように、まず、キチ
ン７の粉末を所定濃度のアルカリ水溶液に分散させ、こ
れに氷を加えて攪拌するか、又は、分散液を直接凍結
し、次に解凍する操作を繰り返して、アルカリキチンド
ープ８を調製する。なお、このアルカリキチンドープ８
には、生成する水溶性部分脱アセチル化キチン２の分子
量低下を抑えるために、必要に応じてチオフェノールや
ＮａＢＨ₄等をあらかじめ添加しておいてもよい。

【００１４】前記アルカリ水溶液としては、アルカリ金
属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、炭酸アルカリ
金属塩等の水溶液を使用すればよいが、特にＮａＯＨ、
ＫＯＨの水溶液が望ましい。

【００１５】前記アルカリキチンドープ８を用いて均一
系反応で脱アセチル化度を５〜９０％とするには、必要
に応じて、このアルカリキチンドープ８を５０℃以下で
所定時間熟成させればよい。

【００１６】次いで、脱アセチル化度が５〜９０％とな
った水溶性部分脱アセチル化キチン２のアルカリ水溶液
を塩酸等の酸で中和するか、又は、アルコール類、イオ
ン交換樹脂等で脱アルカリする。その後、アセトン、メ
タノール等の有機溶媒中に滴下すれば水溶性部分脱アセ
チル化キチン２が沈殿してくるので、これを濾別し、水
−メタノール混合溶媒で充分に洗浄して脱塩等を行え
ば、精製品を得ることができる。

【００１７】なお、この水溶性部分脱アセチル化キチン
２の調製には、例えば、この出願の発明者らが過去の特
許出願（特願平９−１６１２２３号）で開示している製
造方法等を好適に利用することができる。

【００１８】即ち、タンパク質含量が０．１重量％以
下、無機物含量が０．０１重量％以下の高純度キチンを
５０℃以下で均一系においてアルカリ加水分解する際
に、アルカリキチンドープの粘度を４００cps 以下とし
て、キチンの脱アセチル化率が３５〜６５％となるよう
に部分脱アセチル化し、次いで酸で中和するか又はアル
コール類、イオン交換樹脂等で脱アルカリすることによ
って水溶性部分脱アセチル化キチン２を得る場合には、
キチン７粉末の粒度が５０メッシュより粗い場合でも効
率良くアルカリキチンドープ８を調製でき、そのため、
粉砕の手間や時間等をより節約できるという利点があ
る。また、アルカリキチンドープ８を調製した後におい
ては、濾過を行わないでそのまま熟成可能であるという
利点もある。

【００１９】そして、アルカリキチンドープ８の粘度を
４００cps 以下としているので、キチン７の脱アセチル
化度が３５〜６５％となるまでに要する熟成時間をより
短縮化できるという利点がある。ここで、脱アセチル化
度が５〜３５％、又は６５〜９０％の水溶性部分脱アセ
チル化キチン２を得るには、アルカリキチンドープ８の
粘度や熟成時間等を適宜に調整すればよい。

【００２０】図１(c) に示すように、前記キチナーゼ４
は、上記のようにして調製される水溶性部分脱アセチル
化キチン２の分子中に存在するＮ−アセチルグルコサミ
ニド結合の部分（図１(c) 中の●と●の間）をランダム
に加水分解する。図１(b) に示すように、前記リゾチー
ム３は、キチナーゼ４と同様の反応を触媒するが、Ｎ−
アセチル−Ｄ−グルコサミンが３分子以上連なった部分
に作用し易い点が異なる。一方、図１(d) に示すよう
に、前記キトサナーゼ５は、グルコサミニド結合の部分
（図１(d) 中の○と○の間）をランダムに加水分解す
る。

【００２１】前記加水分解を行うには、水溶性部分脱ア
セチル化キチン２を０．１〜数％程度の濃度で水に分散
させた後、適宜の加水分解酵素を添加し、３６〜３７℃
程度で数時間〜数十時間振とう等して反応させればよ
い。反応を停止するには、例えば数分間、沸騰水中で加
熱等して、加水分解酵素を失活させればよい。

【００２２】次いで、図１(b) 乃至(d) に示すように、
このようにして生成する部分脱アセチル化キチンオリゴ
糖６をＮ−アセチル化すれば、キチンオリゴ糖１を得る
ことができる。このＮ−アセチル化に用いるアセチル化
剤としては、例えば、塩化アセチル、無水酢酸、氷酢酸
等が挙げられる。なお、このようなアセチル化剤を作用
させて糖分子中のアミノ基と共に水酸基もアセチル化さ
れた場合には、アルカリ水溶液等で脱アセチル処理を行
って水酸基のアセチル基を脱離させておけばよい。

【００２３】ここで、前記加水分解酵素としては、リゾ
チーム３、キチナーゼ４、又はキトサナーゼ５をそれぞ
れ単独で作用させることが望ましい。また、リゾチーム
３又はキトサナーゼ５を作用させる場合においてより高
重合度の多量体の収量を増加させるには、水溶性部分脱
アセチル化キチン２の脱アセチル化度をリゾチーム３で
は好ましくは２０〜３０％程度、キトサナーゼ５では好
ましくは６０〜８０％程度としておくのが望ましい。

【００２４】このように、前記水溶性部分脱アセチル化
キチン２を基質とし、この水溶性部分脱アセチル化キチ
ン２を、リゾチーム３、キチナーゼ４、又はキトサナー
ゼ５により加水分解するので、２量体や３量体に加え、
４量体以上の多量体の部分脱アセチル化キチンオリゴ糖
６をも得ることができる。また、水溶性部分脱アセチル
化キチン２は水に膨潤すると共に、前記加水分解酵素と
の親和性も高いので、部分脱アセチル化キチンオリゴ糖
６の製造を効率良く行えるという利点がある。更に、加
水分解反応がある程度進行すれば反応速度が極めて遅く
なるため、反応時間等の条件を厳密に制御する必要はな
く、製造が簡単であるという利点がある。加えて、安価
なリゾチーム３を使用でき、しかも高温にまで加熱する
必要がないと共に、排水処理コストも安いため、コスト
ダウンを図ることができるという利点がある。

【００２５】更に、前記部分脱アセチル化キチンオリゴ
糖６をＮ−アセチル化するだけでよいので、キチンオリ
ゴ糖１の製造も簡単であるという利点がある。

【００２６】

【実施例】次に、この発明を実施例により更に詳細に説
明するが、この発明は係る実施例に限定されるものでは
ない。

【００２７】〔非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチン
の調製〕図２に示すように、５．０ｇ（絶乾重量）のキ
チンＴＣ−Ｌ（商品名，三栄工業社製）を強アルカリ
（ＮａＯＨ５０ｇ／蒸留水７５ｇ）になじませるように
浸漬し、室温で１２時間放置した。その後、３７５ｇの
砕いた氷を入れ、氷が完全に溶けるまで（約３時間）室
温で攪拌してアルカリキチンドープを調製した。

【００２８】このアルカリキチンドープを容器に入れた
まま３０℃の恒温器中に所定時間静置、熟成させて部分
脱アセチル化（均一系反応）した後、後処理を行った。
後処理は、中和熱を抑えるために３５０ｇの氷を入れ、
１１４ｇの濃塩酸で中和した。この際、塩酸酸性となっ
てキチンが塩酸塩にならないように、中和の終点をｐＨ
８．４にとどめた。

【００２９】なお、前記部分脱アセチル化の反応時間を
２４、４８、７２時間と変えることによって、脱アセチ
ル化度が３０．９％（ＤＡＣ３０）、４８．１％（ＤＡ
Ｃ５０）、６８．０％（ＤＡＣ７０）の水溶性部分脱ア
セチル化キチンをそれぞれ得た。

【００３０】〔酵素による加水分解〕図３に示すよう
に、１０ｍＬの水溶性部分脱アセチル化キチン（図３中
で「均一ＤＡＣ」と表す。）０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩
衝溶液（ｐＨ６．０）（濃度０．４４１％）に加水分解
酵素を６．６ｍｇ加え、３７℃で２４時間振とうした。
なお、加水分解酵素には、市販のリゾチーム、キチナー
ゼ、及びキトサナーゼ（いずれも和光純薬社製）を精製
せずにそのまま用いた。その後、反応液を３分間、沸騰
水中で加熱し、加水分解酵素を失活させて反応を停止し
た。この操作を水溶性部分脱アセチル化キチン及び加水
分解酵素の種類を変えてそれぞれ行った。また、加水分
解酵素を添加しない溶液についても同様の操作をそれぞ
れ行った。

【００３１】〔還元糖量の測定〕還元糖（部分脱アセチ
ル化キチンオリゴ糖）量は、Schales の変法により測定
した。その結果を表１に示す。即ち、反応液１．５ｍＬ
を試験管にとり、フェリシアン化カリウム溶液（フェリ
シアン化カリウム０．５ｇを０．５Ｍ炭酸ナトリウムに
溶解して１．０Ｌにしたもの）２．０ｍＬを加えてアル
ミホイルで蓋をした後、１５分間煮沸した。次いで、室
温まで冷却した後、４２０ｎｍにおける吸光度を測定し
た。なお、標品としてＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン
又はＤ−グルコサミンを用いて同様の反応を行い、検量
線を作成した。

【００３２】

【表１】

【００３３】〔分子量分布の測定〕加水分解酵素処理に
よって生成した反応液中の水溶性部分脱アセチル化キチ
ン分解物の分子量分布は、ＨＰＬＣ（高速液体クロマト
グラフィー）を用いたゲル浸透クロマトグラフィー〔カ
ラム：Shodex TSK-GEL GMPW_XL（4.5mm ×25cm；２本連
結），TSK guard column PW_XL，溶出液：（０．５Ｍ酢
酸＋０．５Ｍ酢酸ナトリウム）混合液，流速：１．０mL
/min，検出：示差屈折，分析温度：３０℃〕により測定
した。その結果を表２に示す。

【００３４】

【表２】

【００３５】表１及び表２から明らかなように、キチナ
ーゼの場合が最も分解が進行しており、リゾチーム、キ
トサナーゼの順で還元糖量が多くなった。但し、リゾチ
ーム及びキチナーゼでは脱アセチル化度が低い方が分解
が進行しており、キトサナーゼでは逆に脱アセチル化度
が高い方が分解が進行していた。このように、酵素特有
の基質特異性による分解の特徴が示されていた。また、
キチナーゼの場合は、分子量の低下が他の酵素の場合よ
りもかなり大きいという結果が得られた。なお、同様の
操作を、加水分解反応の時間を短縮又は延長して２４時
間以外の種々の反応時間でも行ったが、ほぼ同様の結果
が得られた。

【００３６】〔オリゴ糖組成の分析〕加水分解酵素処理
によって生成した部分脱アセチル化キチンオリゴ糖は、
図３に示すように、加水分解反応の後にＮ−アセチル化
を行って、キチンオリゴ糖として検出した。即ち、反応
液１．０ｍＬを凍結乾燥した後、ピリジン及び無水酢酸
を１．０ｍＬずつ加え、一昼夜攪拌した。その後、反応
液をｎ−ヘキサン中に注加し、遠心分離を行った。この
操作を繰り返して沈殿を集め、真空乾燥した。なお、糖
分子中の水酸基に結合したアセチル基を脱離させるた
め、固形分に５％ＮａＯＨを加え、９０分間攪拌した
後、塩酸で中和した。不溶分を０．４５μｍのフィルタ
ーで除去した後、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィ
ー）〔カラム：YMC-Pack PA 03（4.5mm ×25cm），溶出
液：アセトニトリル／水＝７０／３０，流速：１．０mL
/min，検出：２１０ｎｍ，分析温度：３０℃〕により分
析した。その結果を図４乃至図６にそれぞれ示す。

【００３７】上記ＨＰＬＣによる分析結果から、キチナ
ーゼでは５量体までのキチンオリゴ糖が生成していた。
キトサナーゼではＤＡＣ７０で７量体までの生成が認め
られ、リゾチームではＤＡＣ３０で７量体までの生成が
認められた。即ち、キトサナーゼとリゾチームでより高
重合度のオリゴ糖の生成が認められ、基質特異性に依存
したと考えられる結果が得られた。

【００３８】

【発明の効果】以上のように、請求項１の発明によれ
ば、前記水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチー
ム、キチナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解する
ので、２量体や３量体に加え、４量体以上の多量体の部
分脱アセチル化キチンオリゴ糖をも効率良く得ることが
できる。また、水溶性部分脱アセチル化キチンは水に膨
潤すると共に、前記加水分解酵素との親和性も高いの
で、部分脱アセチル化キチンオリゴ糖の製造を効率良く
行えるという利点がある。更に、加水分解反応がある程
度進行すれば反応速度が極めて遅くなるため、反応時間
等の条件を厳密に制御する必要はなく、製造が簡単であ
るという利点がある。加えて、安価なリゾチームを使用
でき、しかも高温にまで加熱する必要がないと共に、排
水処理コストも安いため、コストダウンを図ることがで
きるという利点がある。

【００３９】請求項２の発明によれば、前記加水分解酵
素により加水分解した後、生成する部分脱アセチル化キ
チンオリゴ糖をＮ−アセチル化するだけでよいので、キ
チンオリゴ糖の製造が簡単であるという利点がある。

【図面の簡単な説明】

【図１】(a) は非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチン
の調製方法を示す模式図、(b)はリゾチーム処理による
キチンオリゴ糖の製造方法を示す模式図、(c) はキチナ
ーゼ処理によるキチンオリゴ糖の製造方法を示す模式
図、(d) はキトサナーゼ処理によるキチンオリゴ糖の製
造方法を示す模式図。

【図２】均一系反応を用いた脱アセチル化度の異なる水
溶性部分脱アセチル化キチンの調製方法を示すフローチ
ャート。

【図３】酵素による水溶性部分脱アセチル化キチンの分
解及び反応生成物の分析方法を示すフローチャート。

【図４】リゾチーム処理により生成した低分子化物（部
分脱アセチル化キチンオリゴ糖）のＮ−アセチル化物
（キチンオリゴ糖）のＨＰＬＣチャート。

【図５】キチナーゼ処理により生成した低分子化物（部
分脱アセチル化キチンオリゴ糖）のＮ−アセチル化物
（キチンオリゴ糖）のＨＰＬＣチャート。

【図６】キトサナーゼ処理により生成した低分子化物
（部分脱アセチル化キチンオリゴ糖）のＮ−アセチル化
物（キチンオリゴ糖）のＨＰＬＣチャート。

【図７】キチン分子とキトサン分子の模式図。

【図８】従来例(1) を示す模式図。

【図９】従来例(2)（(3)）を示す模式図。

【図１０】従来例(4) を示す模式図。

【符号の説明】

１キチンオリゴ糖２水溶性部分脱アセチル化キチン３リゾチーム４キチナーゼ５キトサナーゼ６部分脱アセチル化キチンオリゴ糖

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【手続補正書】

【提出日】平成１１年３月１２日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正内容】

【特許請求の範囲】

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】０００９

【補正方法】変更

【補正内容】

【０００９】

【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
の手段とするところは、第１に、キチンを均一系反応に
よりランダムに脱アセチル化した脱アセチル化度が５乃
至９０％の非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基
質とし、この水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチ
ーム、キチナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解す
ることにある。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１０

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１０】第２に、キチンを均一系反応によりランダ
ムに脱アセチル化した脱アセチル化度が５乃至９０％の
非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とし、こ
の水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチーム、キチ
ナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解した後、Ｎ−
アセチル化することにある。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１２

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１２】前記水溶性部分脱アセチル化キチン２は、
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン単位（図１(a) 中の
●）の含量が１０〜９５％、Ｄ−グルコサミン単位（図
１(a)中の○）の含量が９０〜５％であり、キチン７を
均一系反応によりランダムに脱アセチル化した非晶質物
質である。そのため、脱アセチル化度が５〜９０％とさ
れたこの水溶性部分脱アセチル化キチン２は、希酸の
他、冷水、氷水、及び水にも膨潤し易い。

【手続補正５】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００２４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００２４】このように、前記水溶性部分脱アセチル化
キチン２を基質とし、この水溶性部分脱アセチル化キチ
ン２を、リゾチーム３、キチナーゼ４、又はキトサナー
ゼ５により加水分解するので、２量体や３量体に加え、
４量体以上の多量体の部分脱アセチル化キチンオリゴ糖
６をも得ることができる。また、キチン７を均一系反応
によりランダムに脱アセチル化した非晶質の水溶性部分
脱アセチル化キチン２は、希酸の他、水、冷水、氷水に
も膨潤するので、製造の自由度が高く、単なる水溶液を
使用すればコストダウンを図ることもできるという利点
がある。更に、前記加水分解酵素との親和性も高いの
で、部分脱アセチル化キチンオリゴ糖６の製造を効率良
く行えるという利点がある。また、加水分解反応がある
程度進行すれば反応速度が極めて遅くなるため、反応時
間等の条件を厳密に制御する必要はなく、製造が簡単で
あるという利点がある。加えて、安価なリゾチーム３を
使用でき、しかも高温にまで加熱する必要がないと共
に、排水処理コストも安いため、コストダウンを図るこ
とができるという利点がある。

【手続補正６】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３８

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３８】

【発明の効果】以上のように、請求項１の発明によれ
ば、前記水溶性部分脱アセチル化キチンを、リゾチー
ム、キチナーゼ、又はキトサナーゼにより加水分解する
ので、２量体や３量体に加え、４量体以上の多量体の部
分脱アセチル化キチンオリゴ糖をも効率良く得ることが
できる。また、キチンを均一系反応によりランダムに脱
アセチル化した非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチン
は、希酸の他、水、冷水、氷水にも膨潤するので、製造
の自由度が高く、単なる水溶液を使用すればコストダウ
ンを図ることもできるという利点がある。更に、前記加
水分解酵素との親和性も高いので、部分脱アセチル化キ
チンオリゴ糖６の製造を効率良く行えるという利点があ
る。また、加水分解反応がある程度進行すれば反応速度
が極めて遅くなるため、反応時間等の条件を厳密に制御
する必要はなく、製造が簡単であるという利点がある。
加えて、安価なリゾチームを使用でき、しかも高温にま
で加熱する必要がないと共に、排水処理コストも安いた
め、コストダウンを図ることができるという利点があ
る。

【手続補正７】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３９

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３９】請求項２の発明によれば、前記加水分解酵
素により加水分解した後、生成する部分脱アセチル化キ
チンオリゴ糖をＮ−アセチル化するだけでよいので、請
求項１の効果に加え、キチンオリゴ糖の製造が簡単であ
るという利点がある。

フロントページの続き (72)発明者高森吉守鳥取県米子市旗ケ崎４丁目６番35号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】脱アセチル化度が５乃至９０％の非晶質
の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とし、この水溶
性部分脱アセチル化キチンを、リゾチーム、キチナー
ゼ、又はキトサナーゼにより加水分解することを特徴と
する非晶質の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とす
る酵素によるオリゴ糖の製造方法
【請求項２】脱アセチル化度が５乃至９０％の非晶質
の水溶性部分脱アセチル化キチンを基質とし、この水溶
性部分脱アセチル化キチンを、リゾチーム、キチナー
ゼ、又はキトサナーゼにより加水分解した後、Ｎ−アセ
チル化することを特徴とする非晶質の水溶性部分脱アセ
チル化キチンを基質とする酵素によるオリゴ糖の製造方
法