JPH11193296A

JPH11193296A - 抗肥満剤及び脂質代謝改善剤

Info

Publication number: JPH11193296A
Application number: JP10238144A
Authority: JP
Inventors: Kunio Suzuki; 邦夫鈴木; Takeshi Shimizu; 猛清水; Tadashi Nakada; 忠中田
Original assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Current assignee: RIKEN Institute of Physical and Chemical Research
Priority date: 1997-11-06
Filing date: 1998-08-25
Publication date: 1999-07-21
Anticipated expiration: 2018-08-25
Also published as: JP3873097B2; CA2253130C; ATE252389T1; CA2253130A1; EP0916342B1; US6046184A; EP0916342A1; DE69819110T2; DE69819110D1

Abstract

(57)【要約】【課題】肥満及び脂質代謝異常の治療及び予防に有用
な医薬を提供する。【解決手段】 24-アルキルコレスタン-3-オン又は24-ア
ルキルコレステン-3-オン、好ましくは下記の一般式
(I): 【化１】（式中、R¹は低級アルキル基を示し；R²は水素原子、ハ
ロゲン原子、水酸基、又はオキソ基を示し；１、４、
５、６、７、８、8(14) 、9(11) 、11、14、15、16、2
2、23、24、25及び／又は25(27)位に１ないし４個の二
重結合を有していてもよい）で表される化合物（例えば
5-シトステン-3- オン）を有効成分として含む医薬。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は肥満の予防及び／又
は治療、並びに脂質代謝の改善に有用な医薬に関するも
のである。

【０００２】肥満は、運動不足や習慣的な過食、あるい
は遺伝的原因や内分泌疾患による代謝傷害などによって
引き起こされる。肥満は、心筋梗塞や動脈硬化など種々
の成人病を誘発するリスクファクターとなり、それらの
疾患を悪化させる要因ともなることから、早期の治療や
予防が非常に重要である。従来、軽度の肥満の治療には
食事療法や運動療法などが処方されており、重度の肥満
に対してはそれらの療法と組み合わせて薬物療法が用い
られる場合もある。

【０００３】肥満及び脂質代謝異常の薬物療法には、従
来、ホルモン剤や代謝促進剤などが用いられている。例
えば、デヒドロエピアンドロステロン、3-ケト−△⁹-19
-ノルステロイドなどの男性ホルモンが抗肥満作用を有
することが知られている（特開平2-275895号公報）。こ
れらの男性ホルモンは筋肉内同化作用を亢進させ、貯蔵
脂肪を消費させる作用を有していると考えられている。
また、4-コレステン-3-オン（特開平5-170651号公
報）、5-コレステン-3-オンなどの3-ケトステロイド類
（特開平7-165587号公報）などが血清脂質低下作用及び
抗肥満作用を有することが知られている。もっとも、コ
レステロールより誘導されたエノン構造をもつ上記のコ
レステノン類は体内に吸収及び蓄積される可能性があ
り、安全性の観点からはいまだ満足すべき医薬とはいえ
ない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は抗肥満
剤及び脂質代謝改善剤を提供することにある。より具体
的には、体内への吸収及び蓄積がなく、安全性の高い抗
肥満剤及び脂質代謝改善剤を提供することが本発明の課
題である。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく鋭意研究を行ったところ、植物ステロール
類（24-アルキルコレステロール）から誘導された24-ア
ルキルコレステノン及びその類縁体が極めて優れた血清
脂質低下作用及び体脂肪減少作用を有し、抗肥満剤及び
脂質代謝改善剤の有効成分として有用であることを見出
した。また、これらの物質が体内にはほとんど吸収され
ずに所望の生理活性を発揮できることを見出した。本発
明はこれらの知見を基にして完成されたものである。

【０００６】すなわち本発明は、24-アルキルコレスタ
ン-3-オン及び24-アルキルコレステン-3-オンからなる
群から選ばれる化合物を有効成分として含む医薬を提供
するものである。この発明の好ましい態様によれば、化
合物が24-アルキルコレスタン-3-オン、24-アルキルコ
レストモノエン-3-オン、24-アルキルコレストジエン-3
-オン、24-アルキルコレストトリエン-3-オン、及び24-
アルキルコレストテトラエン-3-オンからなる群から選
ばれる上記医薬；化合物が下記の一般式(I):

【化２】（式中、R¹は低級アルキル基を示し；R²は水素原子、ハ
ロゲン原子、水酸基、又はオキソ基を示し；１、４、
５、６、７、８、8(14) 、9(11) 、11、14、15、16、2
2、23、24、25及び／又は25(27)位に１ないし４個の二
重結合を有していてもよい）で表される化合物である上
記医薬；並びに、化合物が5-シトステン-3-オンである
上記医薬が提供される。これらの医薬は、ヒトを含む哺
乳類動物の肥満の予防及び／又は治療、あるいは脂質代
謝の異常を伴う疾患、例えば高脂血症などの予防及び／
又は治療に用いることができる。また、この医薬は、脂
質吸収阻害剤又は血清脂質低下剤として用いることもで
きる。

【０００７】別の観点からは、肥満の予防及び／又は治
療方法、並びに脂質代謝異常を伴う疾患の予防及び／又
は治療方法であって、上記化合物の有効量をヒトを含む
哺乳類動物に投与する工程を含む方法；並びに、上記抗
肥満剤の製造のための上記化合物の使用が提供される。
さらに別の観点からは、上記化合物を含む健康食品又は
健康飲料；上記化合物を含む家畜用飼料又は魚類用飼
料；肉質改善のために用いる上記の家畜用飼料又は魚類
用飼料；上記化合物を含むペットフード；並びに、これ
らの食品、飼料、又はペットフードの製造のための上記
化合物の使用が提供される。

【０００８】

【発明の実施の形態】本発明の医薬の有効成分は、24-
アルキルコレスタン-3-オン及び24-アルキルコレステン
-3-オンからなる群から選ばれる。24-アルキルコレステ
ン-3-オンに存在する二重結合の数は特に限定されない
が、好ましくは１ないし４個であり、好ましい化合物は
24-アルキルコレストモノエン-3-オン、24-アルキルコ
レストジエン-3-オン、24-アルキルコレストトリエン-3
-オン、及び24-アルキルコレストテトラエン-3-オンか
らなる群から選ばれる。さらに好ましい化合物は、１な
いし３個、より好ましくは１又は２個の二重結合を任意
の位置に含んでいてもよい。環内に存在する二重結合の
数は好ましくは１ないし３個、好ましくは１又は２個で
あり、２個以上の二重結合が存在する場合にはそれらは
共役していてもよい。

【０００９】より具体的には、24-アルキルコレスト-4-
エン-3-オン、24-アルキルコレスト-5-エン-3-オン、24
-アルキルコレスト-6-エン-3-オン、24-アルキルコレス
ト-7-エン-3-オン24-アルキルコレスト-8-エン-3-オ
ン、24-アルキルコレスト-8(14)-エン-3-オン、24-アル
キルコレスト-9(11)-エン-3-オン、24-アルキルコレス
ト-14-エン-3-オン、24-アルキルコレスト-4,6-ジエン-
3-オン、24-アルキルコレスト-5,7-ジエン-3-オン、24-
アルキルコレスト-5,8-ジエン-3-オン、24-アルキルコ
レスト-5,9(11)-ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-
8,14-ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-1,4,6-トリ
エン-3-オン、24-アルキルコレスト-4,22-ジエン-3-オ
ン、24-アルキルコレスト-5,22-ジエン-3-オン、24-ア
ルキルコレスト-7,22-ジエン-3-オン、24-アルキルコレ
スト-8,22-ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-8(1
4),22-ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-9(11),22-
ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-14,22-ジエン-3-
オン、24-アルキルコレスト-4,6,22-トリエン-3-オ
ン、24-アルキルコレスト-5,7,22-トリエン-3-オン、24
-アルキルコレスト-5,8,22-トリエン-3-オン、24-アル
キルコレスト-5,9(11),22-トリエン-3-オン、24-アルキ
ルコレスト-8,14,22-トリエン-3-オン、24-アルキルコ
レスト-1,4,6,22-テトラエン-3-オン、24-アルキルコレ
スト-5,25(27)-ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-
7,16,25-トリエン-3-オン、24-アルキルコレスト-8,24-
ジエン-3-オン、24-アルキルコレスト-9(11),24-ジエン
-3-オン、又は５β-24-アルキルコレスタン-3-オンなど
を用いることができる。

【００１０】さらに好ましい化合物としては、上記式
(I)の化合物を用いることができる。式(I)において、R¹
は低級アルキル基を示す。低級アルキル基としては、例
えば、炭素数１ないし４個、好ましくは炭素数１ないし
３個の直鎖又は分枝鎖のアルキル基を用いることができ
る。例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソ
プロピル基などを用いることができる。これらのうち、
エチル基が好ましい。R²は水素原子、ハロゲン原子、水
酸基、又はオキソ基(=O)を示す。ハロゲン原子として
は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子
のいずれを用いてもよいが、臭素原子を用いることが好
ましい。

【００１１】上記式(I) において、１、４、５、６、
７、８、8(14) 、9(11) 、11、14、15、16、22、23、2
4、25及び／又は25(27)位に１ないし４個の二重結合を
有していてもよい。もっとも、隣接した部位に二重結合
が存在することはなく、5-6 位の炭素原子間に二重結合
が存在する場合には4-5 位、及び6-7 位の炭素原子間に
二重結合が存在し得ないことは当業者に自明である。こ
れらのうち、5-6 位の結合が二重結合であることが好ま
しく、5-6 位の結合が二重結合であり、他の結合が単結
合であることが好ましく、5-6 位の結合が二重結合であ
り、R²が水素原子であり、かつ他の結合が単結合である
場合がより好ましい。最も好ましいのは、R¹がエチル基
であり、R²が水素原子であり、5-6 位の結合が二重結合
であり、かつ他の結合が単結合である場合である。

【００１２】24-アルキルコレスタン-3-オン又は24-ア
ルキルコレステン-3-オンには不斉炭素が存在している
が、そ（れら）の不斉炭素の立体配置は特に限定され
ず、S-又はR-配置（α位又はβ位と呼ぶ場合もある）の
いずれであってもよい。上記の式(I) において特に立体
が明記されている炭素原子についてはその立体配置であ
ることが好ましい。本発明の医薬の最も好適な有効成分
として下記の式で表される5-シトステン-3-オン（24-et
hylcholest-5-en-3-one) を挙げることができるが、本
発明の医薬の有効成分はこの化合物に限定されることは
ない。

【００１３】

【化３】

【００１４】24-アルキルコレスタン-3-オン又は24-ア
ルキルコレステン-3-オンは、例えばコレスタン-3-オン
又はコレステン-3-オンなどの公知の製造方法に準じ
て、当業者に容易に製造することができる。例えば、式
(I)で表される化合物の代表的化合物である5-シトステ
ン-3- オンの製造方法は Parish らの文献（Parish, E.
J.,et al., Synthetic Communications, 22(19), pp.28
39-2847, 1992) に具体的に説明されており、あるいは
β−シトステロールを出発原料として Chengらの方法(C
heng, Y.S., et al., Synthesis 1980, 223)に従って容
易に製造することもできる。従って、これらの刊行物に
記載された方法により、あるいはこれらの方法を参照し
つつ必要に応じて反応条件や反応試薬などに適宜の改変
又は修飾を加えることにより、24-アルキルコレスタン-
3-オン又は24-アルキルコレステン-3-オンを製造できる
ことは当業者に容易に理解されよう。なお、24-アルキ
ルコレスタン-3-オン又は24-アルキルコレステン-3-オ
ン、好ましくは式(I)で表される化合物の製造方法は化
学的な合成方法に限定されることはなく、微生物等を培
養することによって生物学的に製造してもよいし、ある
いは微生物由来の酵素を用いて製造してもよい。

【００１５】本発明の医薬は24-アルキルコレスタン-3-
オン及び24-アルキルコレステン-3-オンからなる群から
選ばれる化合物の１種又は２種以上を含むことを特徴と
しており、肥満の予防及び／又は治療、脂質代謝の異常
を伴う疾患の予防及び／又は治療に用いることができ
る。いかなる特定の理論に拘泥するわけではないが、本
発明の医薬の作用機序は、小腸粘膜細胞内で形成される
脂質輸送リポタンパク質のカイロミクロンの形成を抑え
る一種の脂質吸収阻害であると考えられる。不足した脂
質は体脂肪から動員されて消費され、結果的に増体重の
減少を引き起こすと考えられる。体内に輸送されず小腸
粘膜細胞内に残された食餌由来の脂質は、細胞の速い更
新に伴って細胞と一緒に徐々に腸管腔に排泄されるもの
と推定される。もっとも、本発明の範囲は、上記の作用
機序によってなんら限定されることはない。

【００１６】本発明の医薬の適用対象となる肥満の原因
は特に限定されず、例えば、運動不足や過食によるも
の、遺伝性のもの、摂食調節機構障害によるもの、内分
泌疾患による代謝障害によるもの、精神障害によるもの
などはいずれも本発明の医薬の適用対象である。脂質代
謝の異常を伴う疾患としては、脂質代謝の異常に起因す
る高脂血症や脂肪肝などの疾患のほか、動脈硬化、高血
圧症、糖尿病、通風などを挙げることができる。また、
本発明の医薬は、脂質吸収阻害剤又は血清脂質低下剤と
して用いることもできる。なお、本発明の医薬はヒトを
含む哺乳類動物に適用可能である。

【００１７】本発明の医薬としては、24-アルキルコレ
スタン-3-オン及び24-アルキルコレステン-3-オンから
なる群から選ばれる化合物自体を用いてもよいが、通常
は製剤学的に許容される製剤用添加物を用いて医薬組成
物の形態で用いることが好ましい。本発明の医薬は経口
的又は非経口的に投与することができる。経口投与に適
する医薬組成物としては、例えば、錠剤、顆粒剤、カプ
セル剤、散剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤などを挙げ
ることができ、非経口投与に適する医薬組成物として
は、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、経皮吸収剤などを
挙げることができるが、本発明の医薬の形態はこれらに
限定されることはない。本発明の医薬の投与量は患者の
年齢、症状、及び投与経路などの条件に応じて適宜増減
されるべきであるが、一般的には、成人一日あたり 1 m
g から 5,000 mg 程度の範囲である。

【００１８】本発明の医薬の製造に用いられる製剤用添
加物の種類は特に限定されず、当業者が適宜選択可能で
ある。例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、分散剤、懸濁
剤、乳化剤、緩衝剤、抗酸化剤、防腐剤、等張化剤、pH
調節剤、溶解剤、安定化剤などを用いることができ、こ
れらの目的で使用される個々の具体的成分は当業者に周
知されている。本発明の医薬の有効成分である24-アル
キルコレスタン-3-オン及び24-アルキルコレステン-3-
オンからなる群から選ばれる化合物は親油性であり、ゴ
マ油、ダイズ油、トウモロコシ油、オリーブ油、綿実油
などの天然食用油や、パナセートなどの中鎖脂肪酸トリ
グリセリドなどの油性媒体中に溶解して経口投与するこ
とが可能である。このような場合、有効成分を含む油性
溶液をカプセル内に封入して経口投与することが好まし
いが、この技術は当業者に周知であり、かつ慣用の技術
である。

【００１９】24-アルキルコレスタン-3-オン及び24-ア
ルキルコレステン-3-オンからなる群から選ばれる化合
物を含む健康食品又は健康飲料は健康飲料は、例えば、
体脂肪の蓄積を抑制して適正な体重を維持するなど、健
康管理の目的で用いることができる。健康食品又は健康
飲料の形態は特に限定されず、例えば、加工食品、調味
料、いわゆるドリンク剤、又は清涼飲料などの形態であ
ってもよい。これらの食品又は飲料には、24-アルキル
コレスタン-3-オン及び24-アルキルコレステン-3-オン
からなる群から選ばれる化合物の１種又は２種以上を配
合することができる。製造工程も特に限定されないが、
一般的には、加工食品の原料として用いられる油脂に予
め式(I)の化合物を添加するか、加工中に適宜の手段で
式(I)の化合物を添加して加工食品を製造することが可
能である。24- アルキルコレスタン-3-オン及び24-アル
キルコレステン-3-オンからなる群から選ばれる化合物
は、食品又は飲料 100 gあたり 1 mg から 5,000 mg 程
度の範囲で配合することができる。

【００２０】24-アルキルコレスタン-3-オン及び24-ア
ルキルコレステン-3-オンからなる群から選ばれる化合
物を含む家畜用飼料又は魚類用飼料は、例えば、ウシや
ブタなどの家畜、又はハマチやタイなどの養殖魚の体脂
肪の過剰蓄積を抑制し、肉質を改善する目的で使用する
ことができる。また、24-アルキルコレスタン-3-オン及
び24-アルキルコレステン-3-オンからなる群から選ばれ
る化合物を含むペットフードは、イヌやネコなどの愛玩
動物（伴侶動物とも呼ばれる）の肥満の抑制及び健康管
理の目的で用いることができる。上記の飼料やペットフ
ードの形態及びその製造方法は特に限定されず、当業者
に適宜選択可能である。一般的には、製造原料として用
いられる油脂に予め上記の化合物を添加したり、加工中
に適宜の手段で上記化合物を添加することにより目的の
飼料又はペットフードを容易に製造することができる。
なお、これらの飼料又はペットフードには、24-アルキ
ルコレスタン-3-オン及び24-アルキルコレステン-3-オ
ンからなる群から選ばれる化合物の１種又は２種以上を
配合することができる。

【００２１】

【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定される
ことはない。例１ (A) 材料と方法 5-シトステン-3-オンは、β-シトステロール（東京化成
工業株式会社）を出発原料としてParishらの方法(Paris
h, E.J., et al., Synthetic Communication, 22, pp.2
839-2847, 1992) に従って合成したものを用いた。な
お、合成物の24-エチルと24-メチルの比率は6.5：3.5で
あった。実験動物として、５週齡のCDF1雄マウス（日本
チャールス・リバー株式会社）を各実験群に６匹ずつ用
いた。動物はマウス用アルミケ−ジで飼育し、飼料と水
は自由摂取させた。温度24±１℃、相対湿度55±５%、
明暗12時間交替、ケ−ジ及び床敷（ホワイトフレーク）
の週２回交換の飼育条件で２週間飼育した。

【００２２】実験飼料として、改変AIN （オリエンタル
酵母工業株式会社）を基礎飼料とし、5-シトステン-3-
オンを 0.5% に混合して実験飼料とした。また、4-コレ
ステン-3-オン（特開平5-170651号公報）を基礎飼料に
0.5% 添加した飼料を調製して陽性対照として用い、無
処置対照は基礎飼料のみとした。基礎飼料の組成は粗蛋
白質 22.8%，炭水化物 54.1%，脂肪6.0%, 繊維4.9%，灰
分2.9%，水分8.7%であり、熱量は 1,523kJであった。飼
料は調製後４℃に保存し、毎日新しい飼料を給餌した。

【００２３】動物を経時的に体重を測定し、各群の平均
値と標準誤差を求めた。また、経時的に摂食量を測定
し、１匹１日当たりの平均値を求めた。動物の観察は毎
日行い、飼育終了後動物は炭酸ガス吸入により麻酔殺
し、腹部下大静脈より採血して血清を採取した。屠体は
剖検し、脳、肺、心臓、肝臓、脾臓、腎臓、精巣、副
腎、及び腹腔内脂肪について肉眼的観察と重量測定を行
った。血清中の脂質については、中性脂肪は酵素法によ
る臨床検査キット（トリグリセライド−E テスト、和光
純薬工業株式会社）を用い、総コレステロールとコレス
タノールは Kasama らの方法 (T.Kasama, et al., J. C
hromatogr., 400, 241, 1987) を改変した方法、すなわ
ちベンゾイルクロライドを10倍量とし、反応時間を２倍
にして高速液体クロマトグラフィー装置を用いて測定を
行った。体重及び血清脂質の値については無処置対照マ
ウスの値に対してt-検定により有意差を求めた。

【００２４】(B) 実験結果 (1) 体重の推移実験動物の体重の推移を図１に示す。5-シトステン-3-
オン(0.5%)添加飼料で飼育したマウスは、無処置対照マ
ウスに比べて体重増加が非常に抑制されており、その作
用は陽性対照の4-コレステン-3-オンに比べて顕著に強
かった。図中、アステリスク *, **, 及び*** はt-検定
によりそれぞれ 5% 以下、1%以下、及び0.1%以下の危険
率(p) で無処置対照マウスに対して有意に低いことを示
す。

【００２５】(2) 体脂肪量の変化 5-シトステン-3-オン(0.5%)添加飼料で２週間飼育した
マウスの体脂肪（皮下脂肪及び腹腔内脂肪）は著しく減
少していた。その減少の程度は陽性対照の4-コレステン
-3-オンよりも強く、腹腔内脂肪量は無処置対照マウス
の1/2 であった（図２）。図中、アステリスク* 及び**
* はt-検定によりそれぞれ 5% 以下及び 0.1% 以下の危
険率(p) で無処置対照マウスに対して有意に減少してい
ることを示す。

【００２６】(3) 外見及び剖検所見 5-シトステン-3-オンを投与したマウスの外見所見は、
対照マウスに比べて体躯が細いことを除いて、毛艶もよ
く、動作も活発であり、眼、粘膜、糞便、及び行動など
に異常は認められなかった。また摂食についても軽度の
抑制がみられた他は異常はなかった（表１）。飼育終了
後の剖検所見は、5-シトステン-3-オン投与群の腎臓に
軽度の重量低下がみられたが，毒性学的変化とは認めら
れなかった。そのほかの臓器及び組織にも異常は観察さ
れなかった。一方，陽性対照の4-コレステン-3-オン投
与群では脾臓の腫大が認められた。

【００２７】

【表１】

【００２８】5-シトステン-3-オン投与群の血清脂質
は、中性脂肪及び総コレステロールとも無処置対照マウ
スに比べてそれぞれ15% 及び51% にまで著しく低下した
（表２）。この血清脂質低下作用は、4-コレステン-3-
オン及びその他のコレステノン誘導体と比べて最も強い
ものであった（表２及び３）。

【００２９】陽性対照の4-コレステン-3-オン投与群マ
ウスは血清中に投与物質の代謝物であるコレスタノール
が検出された。同様に、コレステノン誘導体のコレスタ
-4,6-ジエン-3-オン、6β-ブロモ-4-コレステン-3-オ
ン、及び 5β-コレスタン-3-オン投与群では、血清中に
それらの代謝物であるコレスタノール又はコプロスタノ
ールが検出された（表３）。これらの物質は難代謝性物
質であるため，前駆物質を連続して与えるとそれらの代
謝物が臓器中に蓄積して障害を起こす可能性がある。一
方、5-シトステン-3-オン投与群ではコレスタノール及
びその他の代謝物は全く検出されなかった（表２）。

【００３０】また、コレステノン誘導体の5-コレステン
-3-オン及び 6β-ブロモ-4-コレステン-3-オンには強い
食欲抑制作用が認められたが、5-シトステン-3-オンの
食欲抑制作用は軽度であった（表１及び３）。以上の結
果から、本発明の医薬は毒性の極めて少ない安全な医薬
であり、高脂血症や肥満の治療及び／又は予防に有用で
あることが確認された。

【００３１】

【表２】

【００３２】

【表３】

【００３３】例２ (A) 材料と方法 24-アルキルコレステン-3-オンとしてβ-シトステロー
ル（東京化成工業株式会社）から以下の化合物：(1) 4-
シトステン-3-オン、(2) 6α-ヒドロキシ-4-シトステン
-3-オン、(3) 6-ヒドロキシ-4-シトステン-3-オン (α:
β=2.6:1) を合成した。なお、合成物の24-エチルと24-
メチルの比率は6.5：3.5であった。実験動物は５週齡の
CDF1雄マウス（チャールスリバー株式会社）を１群６匹
として使用した。飼料は精製飼料（改変AIN, オリエン
タル酵母工業株式会社製）を基礎飼料とし、試験化合物
を0.5%に添加して動物に14日間自由摂取させた。週２回
体重の測定と一般状態の観察を行い、飼育終了後剖検し
て血液を採取した。分離した血漿中の脂質濃度について
は酵素法による臨床検査キット（和光純薬工業株式会
社）を用いて分析した。得られた数値については分散分
析により有意性を検討した。その他の実験条件は例１と
同様である。

【００３４】(B) 実験結果 4-シトステン-3-オンには有意な体重抑制は認められな
かったが、６位に水酸基を導入した6-ヒドロキシ-4-シ
トステン-3-オンはα体及びα,β (2.6:1)体の混合体と
も強い体重抑制作用がみられ、特にα体では5-シトステ
ン-3-オンと同程度かさらに強い作用を示した（図
３）。6-ヒドロキシ-4-シトステン-3-オン投与群はα体
及びα,β混合体とも弱い摂食量の減少と強い飼料効率
の低下が観察されたが、4-シトステン-3-オン投与群の
それらの変化はわずかであった（表４）。

【００３５】

【表４】

【００３６】表５に示すように、腹腔内脂肪量は6α-ヒ
ドロキシ-4-シトステン-3-オン及び6-ヒドロキシ-4-シ
トステン-3-オン投与群で60%及び50%それぞれ減少した
が、4-シトステン-3-オン投与群の減少は有意ではなか
った。血漿中のトリグリセライド及び遊離脂肪酸濃度に
対する低下作用は３者の化合物とも強く、１＞３≧２の
順で低下がみられた。血漿総コレステロール及びリン脂
質濃度も6α-ヒドロキシ-4-シトステン-3-オン及び6-ヒ
ドロキシ-4-シトステン-3-オンによって有意な低下がみ
られたが、その程度は軽く、またHDL-コレステロールの
変動もみられなかった。表中のアステリスク*は分散分
析により5%以下の危険率(p)で無処置対照マウスに対し
有意に低いことを示す。動物の外見及び剖検所見からは
毒性学的な異常はみられなかった。

【００３７】

【表５】

【００３８】例３ (A) 材料と方法 5-シトステン-3-オンは東京化成工業株式会社のβ-シト
ステロールからParishらの方法 (Parish, E.J., et a
l., Synthetic Communication, 22, p.2839-2847,1992)
により合成し、シリカゲルカラム及び再結晶により精
製した。なお、合成物の24-エチルと24-メチルの比率は
6.5：3.5であった。動物はチャールスリバー株式会社よ
り入手したCDF1雄マウス、４週齡、30匹を用い、６匹ず
つ５群に分けた。試験化合物の投与は飼料添加とし、
(1)0.1%添加、(2)0.3%添加、(3)0.5%添加、(4)薬物無添
加無脂肪食、及び(5)薬物無添加対照群を設けた。精製
飼料の改変AIN-無脂肪（オリエンタル酵母工業株式会社
製）を基礎飼料とし、大豆油（和光純薬工業株式会社
製）を10%に加え、試験化合物をそれぞれの添加又は無
添加し固形飼料を作成した。無脂肪食はそのまま固形化
した。動物は無添加対照群の飼料で１週間の馴化期間の
後，それぞれの試験飼料を自由摂取させた。

【００３９】飼育は22×33×11(h)cmのアルミニウム製
ケ−ジに６匹/ケ−ジの群飼とし、温度24±1℃、相対湿
度 50±5%、及び明暗12時間交替の環境で行った。体
重、摂食量の測定及び一般状態の観察は週３回行い、試
験飼料を３週間投与後、動物を剖検し血液を採取した。
血中脂質分析はトリグリセライド、リン脂質、遊離脂肪
酸、総コレステロール及びHDL-コレステロールについて
臨床生化学検査キット（和光純薬工業株式会社製）を用
いて行った。得られたデーターは薬物投与群については
分散分析により，無脂肪食群についてはt-検定により有
意性を検定した。

【００４０】(B) 実験結果 (1) 体重の推移図４に示されるように5-シトステン-3-オンを投与した
マウスの体重はいずれも有意に低下し，0.1%、0.3%及び
0.5%の添加量に応じた用量効果が観察された。0.3%及び
0.5%添加群は投与開始直後の摂食量の減少による急激な
体重低下がみられた。それらの摂食量はその後回復した
が、体重の増加は緩やかで対照群との差は次第に拡大し
た。とくに0.5%添加群の体重ののびは低く、ほぼ横ばい
状態で推移した。無脂肪食群においても有意な体重抑制
がみられ，0.1%添加群と類似の曲線を示した。

【００４１】(2) 摂食量及び飼料効率 5-シトステン-3-オンの0.1%添加群の摂食量は変わら
ず，0.3%添加群はわずかに減少がみられたが，0.5%添加
群は３週間の合計で約13%減少した。無脂肪食群は反対
に摂食量の増加がみられた（表６）。飼料効率は薬物添
加群はいずれも添加量に応じて低下し、とくに0.5%添加
群で著しく対照群の約80%の低下がみられた。無脂肪食
は0.1%添加群と同程度の約20%の低下であった。このこ
とから、5-シトステン-3-オンによる体重抑制は、摂食
量の低下よりも飼料効率の低下が強く関係していること
が明らかである。

【００４２】

【表６】

【００４３】(3) 一般状態及び臓器重量各実験群の一般状態は体重の軽重を除いて外見、糞便性
状、呼吸及び行動に異常は認められなかった。臓器重量
は肝臓、膵臓及び腎臓に体重に変化と関連した変化がみ
られた。肝臓は0.5%添加群で絶対重量が15%、相対重量
が40%とともに有意に増加し、0.3%添加群においても相
対重量で17%の増加がみられたが0.1%添加群では有意で
な差は認められなかった。膵臓は薬物添加量に従って絶
対重量が減少したが、相対重量の変化は有意ではなかっ
た。腎臓においても薬物添加量に相関して減少し0.3%添
加群で絶対重量が17%及び相対重量が10%、0.5%添加群で
絶対重量が32%及び相対重量が17%減少した。0.5%添加群
にみられた肺及び脾臓の絶対重量の減少は相対重量では
対照群と変わらなかった。

【００４４】以上の薬物添加群にみられた肝臓、膵臓、
腎臓、肺の変化はその程度は異なるが無脂肪食群にも共
通してみられた。すなわち無脂肪食群の肝臓は絶対重量
が４%，相対重量が６%増加し、腎臓は絶対重量が12%、
相対重量が11%減少した。このことは5-シトステン-3-オ
ンを与えた動物の臓器には無脂肪食と同じ影響が強く現
れていることを示唆している。またFischer F344ラット
に0.5%飼料添加で４週間飼育してもこの変化はみられな
かったことからCDF1マウス特有の変化と思われる。な
お、この変化は病理組織学的変化を伴うものではなかっ
たことから、体重低下及び脂質代謝の変化に伴う生理的
なもの、又は毒性学的な影響としても軽微なものと判断
された。

【００４５】(4) 腹腔内脂肪量及び血中脂質濃度表７に示すように、腹腔内脂肪量は対照群に対し0.1%添
加群で83%、0.3%添加群で63%及び0.5%添加群では42%の
量であった。血漿中のトリグリセライド、総コレステロ
ール、リン脂質及び遊離脂肪酸の脂質関連項目の値はい
ずれも5-シトステン-3-オンの投与量に応じて低下し、
とくにトリグリセライドが著しく0.5%添加群で対照群の
26%まで低下した。しかしながらHDL-コレステロールは
有意な変動はみられなかった。無脂肪食群では腹腔内脂
肪量は対照群の80%まで減少し、血中総コレステロー
ル、リン脂質も有意な低下がみられたが、トリグリセラ
イド、HDL-コレステロール及び遊離脂肪酸は逆に増加し
ていた。表中のアステリスク*は薬物投与群については
分散分析により、また無脂肪食群についてはt-検定によ
り0.5%以下の危険率で有意差があることを示す。

【００４６】

【表７】

【００４７】(5) 用量反応関係図５に5-シトステン-3-オンの体重，体脂肪及び血中脂
質に対する用量反応関係を示す。5-シトステン-3-オン
の投与量に応じてCDF1マウスの腹腔内脂肪量の減少は直
線的な関係が得られた。5-シトステン-3-オンと血漿ト
リグリセライド及び総コレステロールの減少は対数的な
関係にあり，薬物投与量に応じて減少率の高さが減衰す
る曲線が得られた。一方，体重の減少率は薬物の0.3%添
加まで直線的な関係にあったが，0.5%添加では逆に対数
曲線的に舞い上がる傾向がみられた。このことから0.5%
以上に薬物を添加しても血中脂質の低下にはあまり効果
が期待できないことが推定される。一方、体重の抑制は
薬物添加量が多くなると主効果以外の作用が表れる可能
性が示唆される。

【００４８】（６）ヒトの投与量への外挿 5-シトステン-3-オンのCDF1マウスの増体重、体脂肪及
び血中脂質の抑制に十分な効果を示す投与量として0.3%
飼料添加量を採用し，これをもとにヒトの投与量を算出
した。マウス１匹あたりの３週間の総摂食量は58.79 g
（表６より）、及び試験飼料のカロリーは374 kcal/100
gであるので、以上の数値よりマウス１匹１日あたりの
摂取カロリーは10.47 kcal/匹/日となる。薬物の飼料添
加量0.3%からマウス１匹１日あたりの薬物摂取量は8.4
mgであるので、1,000 kcalあたりの薬物摂取量は802 mg
/1,000 kcalとなる。以上の数値と日本人の１日平均摂
取カロリー(2,500 kcal)からヒトに対する投与量は2.0
g/人/日と計算された。

【図面の簡単な説明】

【図１】 5-シトステン-3-オンを 0.5%に添加した飼料
で飼育したマウスの体重抑制効果を陽性対照の4-コレス
テン-3- オンと比較して示した図である。図中、アステ
リスク *, **, 及び*** はt-検定によりそれぞれ 5%以
下、1%以下、及び0.1%以下の危険率(p)で無処置対照マ
ウスに対して有意に低いことを示す。

【図２】 5-シトステン-3-オンを 0.5%に添加した飼料
で２週間飼育したマウスの体脂肪（腹腔内脂肪）の減少
量を示す図である。図中、アステリスク* 及び*** はt-
検定によりそれぞれ 5% 以下及び0.1%以下の危険率(p)
で無処置対照マウスに対して有意に減少していることを
示す。

【図３】 4-シトステン-3-オン，6α-ヒドロキシ-4-シ
トステン-3-オン及び6-ヒドロキシ-4-シトステン-3-オ
ン(α:β=2.6:1)を0.5%に添加した飼料で飼育したマウ
スの体重抑制効果を無処置対照群と比較した結果を示す
図である。図中の値は平均値±標準誤差を表す。

【図４】 5-シトステン-3-オンの飼料添加によるCDF1マ
ウスの体重抑制における用量効果を無処置対照及び無脂
肪食マウスと比較した結果を示した図である。体重の各
測定点は１群６匹の動物の平均値±標準誤差を表す。ア
ステリスク*，**及び***は分散分析によりそれぞれ5%以
下、1%以下及び0.1%以下の危険率(p)で無処置対照マウ
スに対して有意に低いことを示す。

【図５】 5-シトステン-3-オンの飼料添加量と体重、腹
腔内脂肪量、血中トリグリセライド及び血中総コレステ
ロール濃度の減少率との相関関係を示した図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/575 ＡＣＮＡ６１Ｋ 31/575 ＡＣＮＡＤＮＡＤＮ (72)発明者中田忠埼玉県和光市広沢２番１号理化学研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】 24-アルキルコレスタン-3-オン及び24-ア
ルキルコレステン-3-オンからなる群から選ばれる化合
物を有効成分として含む医薬。
【請求項２】化合物が24-アルキルコレスタン-3-オ
ン、24-アルキルコレストモノエン-3-オン、24-アルキ
ルコレストジエン-3-オン、24-アルキルコレストトリエ
ン-3-オン、及び24-アルキルコレストテトラエン-3-オ
ンからなる群から選ばれる請求項１に記載の医薬。
【請求項３】化合物が下記の一般式(I): 【化１】（式中、R¹は低級アルキル基を示し；R²は水素原子、ハ
ロゲン原子、水酸基、又はオキソ基を示し；１、４、
５、６、７、８、8(14) 、9(11) 、11、14、15、16、2
2、23、24、25及び／又は25(27)位に１ないし４個の二
重結合を有していてもよい）で表される化合物である請
求項１に記載の医薬。
【請求項４】化合物が5-シトステン-3-オンである請求
項１に記載の医薬。
【請求項５】化合物が6-ヒドロキシ-4-シトステン-3-
オンである請求項１に記載の医薬。
【請求項６】肥満の予防及び／又は治療に用いる請求
項１ないし５のいずれか１項に記載の医薬。
【請求項７】脂質代謝の異常を伴う疾患の予防及び／
又は治療に用いる請求項１ないし５のいずれか１項に記
載の医薬。
【請求項８】脂質代謝の異常を伴う疾患が高脂血症で
ある請求項７に記載の医薬。
【請求項９】請求項１ないし５のいずれか１項に記載
の化合物を含む健康食品又は健康飲料。
【請求項１０】請求項１ないし５のいずれか１項に記
載の化合物を含む家畜用飼料又は魚類用飼料。
【請求項１１】請求項１ないし５のいずれか１項に記
載の化合物を含むペットフード。