JPH11158076A - 特異的細胞除去材料 - Google Patents
特異的細胞除去材料Info
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- JPH11158076A JPH11158076A JP9343611A JP34361197A JPH11158076A JP H11158076 A JPH11158076 A JP H11158076A JP 9343611 A JP9343611 A JP 9343611A JP 34361197 A JP34361197 A JP 34361197A JP H11158076 A JPH11158076 A JP H11158076A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 長期間安定に保持できる、多孔質材料表面に
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドを有する細胞除去材料を提供する。 【解決手段】 多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有
するタンパク質及び／又はペプチドを有する細胞除去材
料であって、細胞除去材料表面にタンパク質安定化剤を
有することを特徴とする特異的細胞除去材料。 【効果】 本発明の特異的細胞除去材料はタンパク質及
び／又はペプチドの構造を室温及び低温保存でも長期間
安定に保持するので、血液等の細胞浮遊液から目的細胞
を特異的に除去することが実用的に行える様になった。
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドを有する細胞除去材料を提供する。 【解決手段】 多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有
するタンパク質及び／又はペプチドを有する細胞除去材
料であって、細胞除去材料表面にタンパク質安定化剤を
有することを特徴とする特異的細胞除去材料。 【効果】 本発明の特異的細胞除去材料はタンパク質及
び／又はペプチドの構造を室温及び低温保存でも長期間
安定に保持するので、血液等の細胞浮遊液から目的細胞
を特異的に除去することが実用的に行える様になった。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、多孔質材料表面に
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドを有する細胞除去材料に関する。本発明の細胞除去材
料は、血液等の細胞集団からの特定の細胞の除去・回収
に使用される。
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドを有する細胞除去材料に関する。本発明の細胞除去材
料は、血液等の細胞集団からの特定の細胞の除去・回収
に使用される。
【０００２】
【従来の技術】近年、全身性エリテマトーデス、悪性関
節リウマチ、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病
等の自己免疫性疾患、白血病、癌などの治療、或いは移
植前の免疫抑制の目的で白血病等を選択的に除去する技
術が進歩してきた。このように、細胞を選択的に分離、
除去等する目的で、ペプチド、タンパク質、合成物等を
固定した材料が開発されている。特に、抗体、ペプチド
等のタンパク質を固定した材料を用いて血液細胞を特異
的に除去する技術が進歩してきている。タンパク質及び
ペプチドはアミノ酸がペプチド結合によって結合した化
合物であり、アミノ酸は酸性であるカルボキシル基と塩
基性であるアミノ基を共有する電解質である。タンパク
質及びペプチドの立体構造は、ペプチド結合や−Ｓ−Ｓ
−結合のような共有結合の他に水素結合、疎水結合、フ
ァンデルワールス力のような弱い非共有結合により保持
されているため、構造上極めて不安定な物質である。よ
って、物理的、化学的、生物学的な要因によりタンパク
質及びペプチド固有の立体構造が破壊される変性が極め
て起こり易い。特に水溶液中では、室温で１日程度放置
しておくだけで、その固有の機能を発揮しなくなるのが
一般的である。更には、冷蔵保存によっても長期の保存
は不可能とされている。このようにタンパク質及びペプ
チドは安定性の面で問題があるため、機能を維持するた
めには特別の工夫をして立体構造を安定に保つ必要があ
る。多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有するタンパ
ク質及び／又はペプチドを有する細胞除去材料におい
て、溶液中でタンパク質及び／又はペプチドの立体構造
を安定に保持する方法はこれまでになく、タンパク質を
安定に保持する方法が強く望まれていた。
節リウマチ、多発性硬化症、潰瘍性大腸炎、クローン病
等の自己免疫性疾患、白血病、癌などの治療、或いは移
植前の免疫抑制の目的で白血病等を選択的に除去する技
術が進歩してきた。このように、細胞を選択的に分離、
除去等する目的で、ペプチド、タンパク質、合成物等を
固定した材料が開発されている。特に、抗体、ペプチド
等のタンパク質を固定した材料を用いて血液細胞を特異
的に除去する技術が進歩してきている。タンパク質及び
ペプチドはアミノ酸がペプチド結合によって結合した化
合物であり、アミノ酸は酸性であるカルボキシル基と塩
基性であるアミノ基を共有する電解質である。タンパク
質及びペプチドの立体構造は、ペプチド結合や−Ｓ−Ｓ
−結合のような共有結合の他に水素結合、疎水結合、フ
ァンデルワールス力のような弱い非共有結合により保持
されているため、構造上極めて不安定な物質である。よ
って、物理的、化学的、生物学的な要因によりタンパク
質及びペプチド固有の立体構造が破壊される変性が極め
て起こり易い。特に水溶液中では、室温で１日程度放置
しておくだけで、その固有の機能を発揮しなくなるのが
一般的である。更には、冷蔵保存によっても長期の保存
は不可能とされている。このようにタンパク質及びペプ
チドは安定性の面で問題があるため、機能を維持するた
めには特別の工夫をして立体構造を安定に保つ必要があ
る。多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有するタンパ
ク質及び／又はペプチドを有する細胞除去材料におい
て、溶液中でタンパク質及び／又はペプチドの立体構造
を安定に保持する方法はこれまでになく、タンパク質を
安定に保持する方法が強く望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記タンパ
ク質及び／又はペプチドの不安定性の問題点に鑑み、タ
ンパク質及び／又はペプチドの立体構造を安定に保持す
る特異的白血球除去材料を提供する事を目的とする。
ク質及び／又はペプチドの不安定性の問題点に鑑み、タ
ンパク質及び／又はペプチドの立体構造を安定に保持す
る特異的白血球除去材料を提供する事を目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記課題
を解決するために鋭意検討した結果、多孔質材料表面に
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドと共にタンパク質安定化剤を存在させることにより驚
くべき程、タンパク質及び／又はペプチドの立体構造を
安定に保持することができ、細胞特異性の保持に大きく
効果があることを見出した。即ち本発明は、多孔質材料
表面に細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又は
ペプチドを有する細胞除去材料であって、細胞除去材料
表面にタンパク質安定化剤を有することを特徴とする特
異的細胞除去材料である。
を解決するために鋭意検討した結果、多孔質材料表面に
細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又はペプチ
ドと共にタンパク質安定化剤を存在させることにより驚
くべき程、タンパク質及び／又はペプチドの立体構造を
安定に保持することができ、細胞特異性の保持に大きく
効果があることを見出した。即ち本発明は、多孔質材料
表面に細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／又は
ペプチドを有する細胞除去材料であって、細胞除去材料
表面にタンパク質安定化剤を有することを特徴とする特
異的細胞除去材料である。
【０００５】本発明で言う多孔質材料とは、細胞が通過
できるポアを持ち、細胞が接触できる表面を持つ多孔質
な材料の事を言う。形状は、液層で細胞が高頻度に接触
できるようにするため、表面積が大きいことが好まし
い。好ましい形状の例を挙げると、不織布状、繊維状、
綿状、糸状、束状、簾状、織布状等の繊維構造体、スポ
ンジ等の高分子多孔質体、ビーズ状、ゲル状等の形状が
挙げられる。特に血液成分のうち白血球を除去する場
合、除去効率の面より、織布、不織布がより好ましい。
中でも構造の安定性、制御のし易さ、表面積が大きい等
の点で不織布が最も好ましい。
できるポアを持ち、細胞が接触できる表面を持つ多孔質
な材料の事を言う。形状は、液層で細胞が高頻度に接触
できるようにするため、表面積が大きいことが好まし
い。好ましい形状の例を挙げると、不織布状、繊維状、
綿状、糸状、束状、簾状、織布状等の繊維構造体、スポ
ンジ等の高分子多孔質体、ビーズ状、ゲル状等の形状が
挙げられる。特に血液成分のうち白血球を除去する場
合、除去効率の面より、織布、不織布がより好ましい。
中でも構造の安定性、制御のし易さ、表面積が大きい等
の点で不織布が最も好ましい。
【０００６】本発明で言う細胞表面と親和性を有するタ
ンパク質及び／又はペプチドとは、細胞に特異的或いは
選択的に親和性を有する物質である。一般に細胞表面抗
原と相互作用を成すタンパク質或いはペプチド等が用い
られる。好ましくは、アミノ酸数３〜５０程度のペプチ
ド、アフィニティの高さより抗体等が挙げられる。更に
好ましくは細胞とのアフィニティの高さからモノクロー
ナル抗体或いはその一部からなるペプチドが良好に用い
られる。抗体をその機能により例示すると、抗ＣＤ４、
抗ＣＤ８、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２、抗ＣＤ１ａ，抗ＣＤ１
ｂ，抗ＣＤ５，抗ＣＤ３Ｒ、抗ＣＤ６、抗ＣＤ７、抗Ｃ
Ｄ９、抗ＣＤ１０、抗ＣＤｌｌａ，抗ＣＤ１８，抗ＣＤ
１９，抗ＣＤ２０，抗ＣＤ２１，抗ＣＤ２２，抗ＣＤ２
３，抗ＣＤ２４，抗ＣＤ３７，抗ＣＤ４０，抗ＣＤ７
２，抗ＣＤ７７，抗ＣＤｌ６，抗ＣＤ３２，抗ＣＤ３
３，抗ＣＤ３４，抗ＣＤ３５，抗ＣＤ６４、抗ＣＤ６
５，抗ＣＤｗ６５，抗ＣＤ６６ｂ、抗ＣＤ６６ｅ、抗Ｃ
Ｄ８９，抗ＣＤｗ９０，抗ＣＤ５６，抗ＣＤ５７，抗Ｃ
Ｄ９４，抗ＣＤ１０５，抗ＣＤ１０６，抗ＣＤ４６，抗
ＣＤ３１，抗ＣＤｗ３６，抗ＣＤ４１，抗ＣＤ４２ａ，
抗ＣＤ４２ｂ，抗ＣＤ６３，抗ＣＤ１１ａ，抗ＣＤ１１
ｂ，抗ＣＤ１１ｃ、抗ＣＤ１８，抗ＣＤ２９，抗ＣＤ４
４，抗ＣＤ４８，抗ＣＤ４９ａ，抗ＣＤ４９ｂ，抗ＣＤ
４９ｃ，抗ＣＤ４９ｄ，抗ＣＤ４９ｅ，抗ＣＤ４９ｆ，
抗ＣＤ５０，抗ＣＤ５１，、抗ＣＤ５４，抗ＣＤ５８，
抗ＣＤ６１，抗ＣＤ６２Ｅ、抗ＣＤ６２Ｌ、抗ＣＤ６２
Ｐ、抗ＣＤ１０３，抗ＣＤ２６，抗ＣＤ３０、抗ＣＤ６
９、抗ＣＤ７０、抗ＣＤ７１、抗ＣＤ９５、抗ＣＤ２
５、抗ＣＤ１１７、抗ＣＤ１２２、抗ＣＤｗ１２４，抗
ＣＤ１２６，抗ＣＤ１２７、抗ＩＬ−２Ｒ等の抗体が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。更にこ
れらの抗体は単独で用いることができるが、複数固定し
ても良い。更にこれらの抗体の一部よりなるペプチドも
良好に用いることができる。
ンパク質及び／又はペプチドとは、細胞に特異的或いは
選択的に親和性を有する物質である。一般に細胞表面抗
原と相互作用を成すタンパク質或いはペプチド等が用い
られる。好ましくは、アミノ酸数３〜５０程度のペプチ
ド、アフィニティの高さより抗体等が挙げられる。更に
好ましくは細胞とのアフィニティの高さからモノクロー
ナル抗体或いはその一部からなるペプチドが良好に用い
られる。抗体をその機能により例示すると、抗ＣＤ４、
抗ＣＤ８、抗ＣＤ３、抗ＣＤ２、抗ＣＤ１ａ，抗ＣＤ１
ｂ，抗ＣＤ５，抗ＣＤ３Ｒ、抗ＣＤ６、抗ＣＤ７、抗Ｃ
Ｄ９、抗ＣＤ１０、抗ＣＤｌｌａ，抗ＣＤ１８，抗ＣＤ
１９，抗ＣＤ２０，抗ＣＤ２１，抗ＣＤ２２，抗ＣＤ２
３，抗ＣＤ２４，抗ＣＤ３７，抗ＣＤ４０，抗ＣＤ７
２，抗ＣＤ７７，抗ＣＤｌ６，抗ＣＤ３２，抗ＣＤ３
３，抗ＣＤ３４，抗ＣＤ３５，抗ＣＤ６４、抗ＣＤ６
５，抗ＣＤｗ６５，抗ＣＤ６６ｂ、抗ＣＤ６６ｅ、抗Ｃ
Ｄ８９，抗ＣＤｗ９０，抗ＣＤ５６，抗ＣＤ５７，抗Ｃ
Ｄ９４，抗ＣＤ１０５，抗ＣＤ１０６，抗ＣＤ４６，抗
ＣＤ３１，抗ＣＤｗ３６，抗ＣＤ４１，抗ＣＤ４２ａ，
抗ＣＤ４２ｂ，抗ＣＤ６３，抗ＣＤ１１ａ，抗ＣＤ１１
ｂ，抗ＣＤ１１ｃ、抗ＣＤ１８，抗ＣＤ２９，抗ＣＤ４
４，抗ＣＤ４８，抗ＣＤ４９ａ，抗ＣＤ４９ｂ，抗ＣＤ
４９ｃ，抗ＣＤ４９ｄ，抗ＣＤ４９ｅ，抗ＣＤ４９ｆ，
抗ＣＤ５０，抗ＣＤ５１，、抗ＣＤ５４，抗ＣＤ５８，
抗ＣＤ６１，抗ＣＤ６２Ｅ、抗ＣＤ６２Ｌ、抗ＣＤ６２
Ｐ、抗ＣＤ１０３，抗ＣＤ２６，抗ＣＤ３０、抗ＣＤ６
９、抗ＣＤ７０、抗ＣＤ７１、抗ＣＤ９５、抗ＣＤ２
５、抗ＣＤ１１７、抗ＣＤ１２２、抗ＣＤｗ１２４，抗
ＣＤ１２６，抗ＣＤ１２７、抗ＩＬ−２Ｒ等の抗体が挙
げられるが、これらに限定されるものではない。更にこ
れらの抗体は単独で用いることができるが、複数固定し
ても良い。更にこれらの抗体の一部よりなるペプチドも
良好に用いることができる。
【０００７】本発明の特異的細胞除去材料には、タンパ
ク質及び／又はペプチドが多孔質材料表面に直接結合し
ていてもよいし、活性基を介して結合していてもよい。
固定時の結合方法はタンパク質及び／又はペプチドの活
性を維持できる方法であればいずれの反応も良好に用い
ることができるが、敢えて例示すると、置換反応、縮合
反応、開環反応等を用いることができる。前記活性基
は、タンパク質及び又はペプチドを結合できる構造であ
れば公知のいずれの官能基であってもよい。例示すれ
ば、Ｎ−ヒドロキシメチルヨードアセトアミド、Ｎ−ヒ
ドロキシメチルブロモアセトアミド、Ｎ−ヒドロキシメ
チルクロロアセトアミド等のＮ−ヒドロキシメチルハロ
アセトアミド等を用いて多孔質材料表面を活性化したα
−アセトアミノハロゲン基、Ｎ−ヒドロキシメチルジハ
ロプロピオンアミド等を用いて多孔質材料表面を活性化
したα、β−プロピオンアミノハロゲン基、Ｎ−ヒドロ
キシメチルジハロアセトアミド等を用いて多孔質材料表
面を活性化したα、α−アセトアミノジハロゲン基、Ｎ
−ヒドロキシメチルトリハロアセトアミド等を用いて多
孔質材料表面を活性化したα、α、α−アセトアミノト
リハロゲン基等のハロアセトアミノアルカン化剤を用い
た活性基、エピクロロヒドリン等を用いて多孔質材料を
活性化したエポキシ基等が挙げられる。他にイソシアネ
ート基、イソチアシアネート基、アミノ基、カルボキシ
ル基、水酸基、ビニル基、ブロモシアンによる活性基等
が挙げられるがこれらに限定されるものではない。特に
タンパク質及び／又はペプチドの活性を維持できる点、
穏和な条件で反応できる点より、好ましくは、ハロアセ
トアミノアルカン化剤を用いた活性基が良好に用いられ
る。
ク質及び／又はペプチドが多孔質材料表面に直接結合し
ていてもよいし、活性基を介して結合していてもよい。
固定時の結合方法はタンパク質及び／又はペプチドの活
性を維持できる方法であればいずれの反応も良好に用い
ることができるが、敢えて例示すると、置換反応、縮合
反応、開環反応等を用いることができる。前記活性基
は、タンパク質及び又はペプチドを結合できる構造であ
れば公知のいずれの官能基であってもよい。例示すれ
ば、Ｎ−ヒドロキシメチルヨードアセトアミド、Ｎ−ヒ
ドロキシメチルブロモアセトアミド、Ｎ−ヒドロキシメ
チルクロロアセトアミド等のＮ−ヒドロキシメチルハロ
アセトアミド等を用いて多孔質材料表面を活性化したα
−アセトアミノハロゲン基、Ｎ−ヒドロキシメチルジハ
ロプロピオンアミド等を用いて多孔質材料表面を活性化
したα、β−プロピオンアミノハロゲン基、Ｎ−ヒドロ
キシメチルジハロアセトアミド等を用いて多孔質材料表
面を活性化したα、α−アセトアミノジハロゲン基、Ｎ
−ヒドロキシメチルトリハロアセトアミド等を用いて多
孔質材料表面を活性化したα、α、α−アセトアミノト
リハロゲン基等のハロアセトアミノアルカン化剤を用い
た活性基、エピクロロヒドリン等を用いて多孔質材料を
活性化したエポキシ基等が挙げられる。他にイソシアネ
ート基、イソチアシアネート基、アミノ基、カルボキシ
ル基、水酸基、ビニル基、ブロモシアンによる活性基等
が挙げられるがこれらに限定されるものではない。特に
タンパク質及び／又はペプチドの活性を維持できる点、
穏和な条件で反応できる点より、好ましくは、ハロアセ
トアミノアルカン化剤を用いた活性基が良好に用いられ
る。
【０００８】本発明でいうタンパク質安定化剤とは、多
孔質材料表面の細胞表面と親和性を有するタンパク質及
び／又はペプチド近傍に存在し、タンパク質及び／又は
ペプチドを室温或いは低温状態で長期に安定に保つこと
ができる材料である。タンパク質安定化剤としては、疎
水基と親水基を共有する界面活性剤が良好に用いられ
る。疎水基を有することで多孔質材料表面或いはタンパ
ク質及び／又はペプチドの疎水部分に吸着され、親水基
を有することで材料表面を親水化することにより、タン
パク質及び／又はペプチドを安定に保持できるものと考
えられる。物質的に安定で、電気的に中性な界面活性剤
が好ましいことが判った。電気的に中性であることで、
不要な荷電を有さず物質的に安定化することができる。
非イオン性界面活性剤が、両イオン性界面活性剤よりも
物質的に安定しているため更に好ましく、親水性部分に
ポリオキシエチレン鎖を含む構造である非イオン性界面
活性剤が最も好ましい。界面活性剤の基本的構造は、１
分子の中に親水性部分と疎水性部分を共有している化合
物である。界面活性剤を水に溶解又は分散させた場合
に、その疎水性部分が一部解離した時に示すイオン性に
より大別して分類している。ポリオキシエチレンの構造
を含む非イオン性界面活性剤の例を挙げると、ポリオキ
シエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソ
ルビトールエステル、ポリオキシエチレンイソオクチル
フェニルエーテル、ポリオキシエチレンドデシルエーテ
ル、ポリオキシエチレンポリスチリルフェニルエーテ
ル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコー
ル、ポリオキシエチレングリセリンエステル、ポリオキ
シエチレンアルキルアミン、等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。最も好ましくは、ポリオキ
シエチレンソルビタンエステルに属するポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソ
ルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタン
トリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタントリオ
レエート等が挙げられる。但し例外として、膜タンパク
質可溶化作用を有する界面活性剤、例として非イオン性
であるオクチルβ−グルコシド、オクチルβ−Ｄ−グル
コピラノサイ、両イオン性である３−コールアミドプロ
ピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、３
−３−コールアミドプロピルジメチルアンモニオ−２−
ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸等は好ましくな
い。
孔質材料表面の細胞表面と親和性を有するタンパク質及
び／又はペプチド近傍に存在し、タンパク質及び／又は
ペプチドを室温或いは低温状態で長期に安定に保つこと
ができる材料である。タンパク質安定化剤としては、疎
水基と親水基を共有する界面活性剤が良好に用いられ
る。疎水基を有することで多孔質材料表面或いはタンパ
ク質及び／又はペプチドの疎水部分に吸着され、親水基
を有することで材料表面を親水化することにより、タン
パク質及び／又はペプチドを安定に保持できるものと考
えられる。物質的に安定で、電気的に中性な界面活性剤
が好ましいことが判った。電気的に中性であることで、
不要な荷電を有さず物質的に安定化することができる。
非イオン性界面活性剤が、両イオン性界面活性剤よりも
物質的に安定しているため更に好ましく、親水性部分に
ポリオキシエチレン鎖を含む構造である非イオン性界面
活性剤が最も好ましい。界面活性剤の基本的構造は、１
分子の中に親水性部分と疎水性部分を共有している化合
物である。界面活性剤を水に溶解又は分散させた場合
に、その疎水性部分が一部解離した時に示すイオン性に
より大別して分類している。ポリオキシエチレンの構造
を含む非イオン性界面活性剤の例を挙げると、ポリオキ
シエチレンソルビタンエステル、ポリオキシエチレンソ
ルビトールエステル、ポリオキシエチレンイソオクチル
フェニルエーテル、ポリオキシエチレンドデシルエーテ
ル、ポリオキシエチレンポリスチリルフェニルエーテ
ル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコー
ル、ポリオキシエチレングリセリンエステル、ポリオキ
シエチレンアルキルアミン、等が挙げられるが、これら
に限定されるものではない。最も好ましくは、ポリオキ
シエチレンソルビタンエステルに属するポリオキシエチ
レンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソ
ルビタンモノパルミテート、ポリオキシエチレンソルビ
タンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタン
トリオレエート、ポリオキシエチレンソルビタントリオ
レエート等が挙げられる。但し例外として、膜タンパク
質可溶化作用を有する界面活性剤、例として非イオン性
であるオクチルβ−グルコシド、オクチルβ−Ｄ−グル
コピラノサイ、両イオン性である３−コールアミドプロ
ピルジメチルアンモニオ−１−プロパンスルホン酸、３
−３−コールアミドプロピルジメチルアンモニオ−２−
ヒドロキシ−１−プロパンスルホン酸等は好ましくな
い。
【０００９】本発明の特異的細胞除去材料はそのままの
状態はもとより、少なくとも入口と出口を有する容器に
充填して、細胞の特異的除去或いは回収や、細胞特異除
去を目的とする体外循環用用途に有効に用いられる。こ
れらの特異的細胞除去材料を用いて、白血球、リンパ
球、単球、顆粒球等の各分画細胞の特異的分離又は吸
着、除去等に有効に活用できる。更に、血漿成分の特異
的除去及び回収にも良好に用いることができる。本発明
における細胞の状態は全血のみならず、リンパ球浮遊
液、単核球浮遊液、骨髄液、バフィーコート等に加え、
血小板濃厚液、赤血球濃厚液等の処理を施した血液も含
まれる。更に体外循環やＧ−ＣＳＦ等の造血因子を投与
した末梢血等についても良好に用いることができる。ま
た、これらに必要に応じて抗凝固剤や血液保存液等を加
えて良好に用いることができる。以下に、本発明の実施
例を比較例と共に示すが、本発明はこれらにより限定さ
れるものではない。
状態はもとより、少なくとも入口と出口を有する容器に
充填して、細胞の特異的除去或いは回収や、細胞特異除
去を目的とする体外循環用用途に有効に用いられる。こ
れらの特異的細胞除去材料を用いて、白血球、リンパ
球、単球、顆粒球等の各分画細胞の特異的分離又は吸
着、除去等に有効に活用できる。更に、血漿成分の特異
的除去及び回収にも良好に用いることができる。本発明
における細胞の状態は全血のみならず、リンパ球浮遊
液、単核球浮遊液、骨髄液、バフィーコート等に加え、
血小板濃厚液、赤血球濃厚液等の処理を施した血液も含
まれる。更に体外循環やＧ−ＣＳＦ等の造血因子を投与
した末梢血等についても良好に用いることができる。ま
た、これらに必要に応じて抗凝固剤や血液保存液等を加
えて良好に用いることができる。以下に、本発明の実施
例を比較例と共に示すが、本発明はこれらにより限定さ
れるものではない。
【００１０】
【実施例１】ガラス製のフラスコにＮ−ヒドロキシメチ
ルヨードアセトアミド０．６ｇ、濃硫酸５．７ｍＬ及び
ニトロベンゼン７．２ｍＬを加えて攪拌溶解し、更に氷
浴中でパラホルムアルデヒド０．０４ｇを加え、攪拌し
た。これにポリプロピレンからなる不織布（平均繊維直
径３．３μｍ）０．３ｇを入れ４時間反応した。４時間
反応後不織布を取り出し、エタノール及び純水にて洗浄
し、これを真空乾燥して、活性化不織布を得た。この活
性化不織布を直径０．６８ｃｍの円に切断したもの４枚
をカルシウム、マグネシウムを含まないリン酸緩衝生理
食塩液（以下ＰＢＳ（−））に溶解した抗ヒトＣＤ４モ
ノクローナル抗体液（以下抗ヒトＣＤ４液と略す）４０
０μＬ（１６μｇ／４００μＬ）に２．５時間浸し、モ
ノクローナル抗体（以下抗体と略す）を固定後、２．５
時間後ＰＢＳ（−）で洗浄した。次に０．２％ポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート／ＰＢＳ（−）溶
液（以下Ｔｗｅｅｎ２０溶液と略す）を加え２．５時間
固定した後、ＰＢＳ（−）で洗浄し、ＣＤ４陽性細胞
（以下ＣＤ４（＋）細胞と略す）を特異的に除去する特
異的細胞除去材料を得た。入口と出口を有する容量１ｍ
Ｌの容器に上記特異的細胞除去材料を４枚充填（充填密
度０．１ｇ／ｃｍ3）し、充填液としてＰＢＳ（−）を
充填し特異的細胞除去器を作成した。ＡＣＤ−Ａ加ヒト
新鮮血液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝８：１）をシリン
ジポンプにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送液し、カラムの入
口より流した。カラム出口より処理後の液を回収した。
更に残留した血液は、空気により圧をかけて回収した。
この時のＣＤ４（＋）細胞の除去率を、フローサイトメ
ーター（ＣＯＵＬＴＥＲ ＥＰＩＣＳ ＥＬＩＴＥ Ｅ
ＳＰ ＡＳＳＹ ＮＯ．６６０５６０７８）で測定し、
処理前後の細胞の存在率より求めたＣＤ４（＋）細胞の
除去率は９６％であった。また、この時ＣＤ８（＋）細
胞の除去率は３３％、Ｂリンパ球の除去率は４０％、血
小板の除去率は１５％であり、ＣＤ４（＋）細胞を特異
的に除去できた。
ルヨードアセトアミド０．６ｇ、濃硫酸５．７ｍＬ及び
ニトロベンゼン７．２ｍＬを加えて攪拌溶解し、更に氷
浴中でパラホルムアルデヒド０．０４ｇを加え、攪拌し
た。これにポリプロピレンからなる不織布（平均繊維直
径３．３μｍ）０．３ｇを入れ４時間反応した。４時間
反応後不織布を取り出し、エタノール及び純水にて洗浄
し、これを真空乾燥して、活性化不織布を得た。この活
性化不織布を直径０．６８ｃｍの円に切断したもの４枚
をカルシウム、マグネシウムを含まないリン酸緩衝生理
食塩液（以下ＰＢＳ（−））に溶解した抗ヒトＣＤ４モ
ノクローナル抗体液（以下抗ヒトＣＤ４液と略す）４０
０μＬ（１６μｇ／４００μＬ）に２．５時間浸し、モ
ノクローナル抗体（以下抗体と略す）を固定後、２．５
時間後ＰＢＳ（−）で洗浄した。次に０．２％ポリオキ
シエチレンソルビタンモノラウレート／ＰＢＳ（−）溶
液（以下Ｔｗｅｅｎ２０溶液と略す）を加え２．５時間
固定した後、ＰＢＳ（−）で洗浄し、ＣＤ４陽性細胞
（以下ＣＤ４（＋）細胞と略す）を特異的に除去する特
異的細胞除去材料を得た。入口と出口を有する容量１ｍ
Ｌの容器に上記特異的細胞除去材料を４枚充填（充填密
度０．１ｇ／ｃｍ3）し、充填液としてＰＢＳ（−）を
充填し特異的細胞除去器を作成した。ＡＣＤ−Ａ加ヒト
新鮮血液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝８：１）をシリン
ジポンプにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送液し、カラムの入
口より流した。カラム出口より処理後の液を回収した。
更に残留した血液は、空気により圧をかけて回収した。
この時のＣＤ４（＋）細胞の除去率を、フローサイトメ
ーター（ＣＯＵＬＴＥＲ ＥＰＩＣＳ ＥＬＩＴＥ Ｅ
ＳＰ ＡＳＳＹ ＮＯ．６６０５６０７８）で測定し、
処理前後の細胞の存在率より求めたＣＤ４（＋）細胞の
除去率は９６％であった。また、この時ＣＤ８（＋）細
胞の除去率は３３％、Ｂリンパ球の除去率は４０％、血
小板の除去率は１５％であり、ＣＤ４（＋）細胞を特異
的に除去できた。
【００１１】
【実施例２】実施例１と同様に作成した特異的細胞除去
器を５０℃で１時間加温後、ＰＢＳ（−）で洗浄した。
ＡＣＤ−Ａ加ヒト新鮮血液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝
８：１）をシリンジポンプにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送
液し、カラムの入口より流した。カラム出口より処理後
の液を回収した。更に残留した血液は、空気により圧を
かけて回収した。この時のＣＤ４（＋）細胞の除去率
を、フローサイトメーター（ＣＯＵＬＴＥＲ ＥＰＩＣ
Ｓ ＥＬＩＴＥ ＥＳＰ ＡＳＳＹ ＮＯ．６６０５６
０７８）で測定し、処理前後の細胞の存在率より求めた
ＣＤ４（＋）細胞の除去率は９６％であった。また、こ
の時ＣＤ８（＋）細胞の除去率は３３％、Ｂリンパ球の
除去率は２７％、血小板の除去率は１０％であり、ＣＤ
４（＋）細胞を特異的に除去できた。
器を５０℃で１時間加温後、ＰＢＳ（−）で洗浄した。
ＡＣＤ−Ａ加ヒト新鮮血液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝
８：１）をシリンジポンプにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送
液し、カラムの入口より流した。カラム出口より処理後
の液を回収した。更に残留した血液は、空気により圧を
かけて回収した。この時のＣＤ４（＋）細胞の除去率
を、フローサイトメーター（ＣＯＵＬＴＥＲ ＥＰＩＣ
Ｓ ＥＬＩＴＥ ＥＳＰ ＡＳＳＹ ＮＯ．６６０５６
０７８）で測定し、処理前後の細胞の存在率より求めた
ＣＤ４（＋）細胞の除去率は９６％であった。また、こ
の時ＣＤ８（＋）細胞の除去率は３３％、Ｂリンパ球の
除去率は２７％、血小板の除去率は１０％であり、ＣＤ
４（＋）細胞を特異的に除去できた。
【００１２】
【比較例１】０．２％Ｔｗｅｅｎ２０溶液を用いる代わ
りにＰＢＳ（−）溶液を用いた以外は実施例１と同様に
行い、特異的細胞除去材料を作成し、実施例２と同様の
実験操作を行ったところ、この時のＣＤ４（＋）細胞の
除去率は２３％であった。またこの時ＣＤ８（＋）細胞
の除去率は１０％、Ｂリンパ球の除去率は１０％、血小
板の除去率は３０％であり、加温によるタンパク質の変
性が起こったものと考えられた。
りにＰＢＳ（−）溶液を用いた以外は実施例１と同様に
行い、特異的細胞除去材料を作成し、実施例２と同様の
実験操作を行ったところ、この時のＣＤ４（＋）細胞の
除去率は２３％であった。またこの時ＣＤ８（＋）細胞
の除去率は１０％、Ｂリンパ球の除去率は１０％、血小
板の除去率は３０％であり、加温によるタンパク質の変
性が起こったものと考えられた。
【００１３】
【実施例３】充填液としてＰＢＳ（−）を用いる代わり
に１％キトサン／ＰＢＳ（−）（以下キトサン溶液と略
す）を用いた以外は全く実施例１と同様に行い、特異的
細胞除去器を作成した。この特異的細胞除去器にγ線５
０ｋＧｙを照射して滅菌した後、５０℃で１時間加温
し、ＰＢＳ（−）で洗浄した。ＡＣＤ−Ａ加ヒト新鮮血
液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝８：１）をシリンジポン
プにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送液し、カラムの入口より
流した。カラム出口より処理後の液を回収した。更に残
留した血液は、空気により圧をかけて回収した。この時
のＣＤ４（＋）細胞の除去率を、フローサイトメーター
法で測定し、処理前後の細胞の存在率より求めたＣＤ４
（＋）細胞の除去率は９７％であった。また、この時Ｃ
Ｄ８（＋）細胞の除去率は２４％、Ｂリンパ球の除去率
は３０％、血小板の除去率は１６％であり、ＣＤ４
（＋）細胞を特異的に除去できた。
に１％キトサン／ＰＢＳ（−）（以下キトサン溶液と略
す）を用いた以外は全く実施例１と同様に行い、特異的
細胞除去器を作成した。この特異的細胞除去器にγ線５
０ｋＧｙを照射して滅菌した後、５０℃で１時間加温
し、ＰＢＳ（−）で洗浄した。ＡＣＤ−Ａ加ヒト新鮮血
液５ｍＬ（血液：ＡＣＤ−Ａ＝８：１）をシリンジポン
プにて流速１ｍＬ／ｍｉｎで送液し、カラムの入口より
流した。カラム出口より処理後の液を回収した。更に残
留した血液は、空気により圧をかけて回収した。この時
のＣＤ４（＋）細胞の除去率を、フローサイトメーター
法で測定し、処理前後の細胞の存在率より求めたＣＤ４
（＋）細胞の除去率は９７％であった。また、この時Ｃ
Ｄ８（＋）細胞の除去率は２４％、Ｂリンパ球の除去率
は３０％、血小板の除去率は１６％であり、ＣＤ４
（＋）細胞を特異的に除去できた。
【００１４】
【比較例２】０．２％Ｔｗｅｅｎ２０溶液を用いる代わ
りにキトサン溶液を用いた以外は実施例１と同様に行
い、特異的細胞除去材料を作成し、充填液としてＰＢＳ
（−）液を用いる代わりにキトサン溶液を用いた以外は
実施例１と同様に行い、特異的細胞除去器を作成した。
この後、実施例３と同様の実験操作を行ったところ、こ
の時のＣＤ４（＋）細胞の除去率は５０％であった。ま
たこの時ＣＤ８（＋）細胞の除去率は３５％、Ｂリンパ
球の除去率は３８％、血小板の除去率は３０％であっ
た。
りにキトサン溶液を用いた以外は実施例１と同様に行
い、特異的細胞除去材料を作成し、充填液としてＰＢＳ
（−）液を用いる代わりにキトサン溶液を用いた以外は
実施例１と同様に行い、特異的細胞除去器を作成した。
この後、実施例３と同様の実験操作を行ったところ、こ
の時のＣＤ４（＋）細胞の除去率は５０％であった。ま
たこの時ＣＤ８（＋）細胞の除去率は３５％、Ｂリンパ
球の除去率は３８％、血小板の除去率は３０％であっ
た。
【００１５】
【発明の効果】本発明の特異的細胞除去材料は、多孔質
材料表面に細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／
又はペプチドを有する細胞除去材料表面にタンパク質安
定化剤を保有させたことにより、タンパク質の立体構造
を安定に保持することができ、タンパク質及び／又はペ
プチドの細胞特異性の保存安定性が大幅に改善された。
更に滅菌保護剤と組合せることにより、滅菌保護剤との
親和性も上がり、細胞特異性の保存安定性が更に向上し
た。本発明の特異的細胞除去材料はタンパク質及び／又
はペプチドの構造を室温及び低温保存でも長期間安定に
保持するので、血液等の細胞浮遊液から目的細胞を特異
的に除去することが実用的に行える様になった。
材料表面に細胞表面と親和性を有するタンパク質及び／
又はペプチドを有する細胞除去材料表面にタンパク質安
定化剤を保有させたことにより、タンパク質の立体構造
を安定に保持することができ、タンパク質及び／又はペ
プチドの細胞特異性の保存安定性が大幅に改善された。
更に滅菌保護剤と組合せることにより、滅菌保護剤との
親和性も上がり、細胞特異性の保存安定性が更に向上し
た。本発明の特異的細胞除去材料はタンパク質及び／又
はペプチドの構造を室温及び低温保存でも長期間安定に
保持するので、血液等の細胞浮遊液から目的細胞を特異
的に除去することが実用的に行える様になった。
Claims (5)
- 【請求項１】 多孔質材料表面に細胞表面と親和性を有
するタンパク質及び／又はペプチドを有する細胞除去材
料であって、細胞除去材料表面にタンパク質安定化剤を
有することを特徴とする特異的細胞除去材料。 - 【請求項２】 タンパク質安定化剤が界面活性剤である
請求項１記載の特異的細胞除去材料。 - 【請求項３】 界面活性剤が非イオン性界面活性剤であ
る請求項２記載の特異的細胞除去材料。 - 【請求項４】 非イオン性界面活性剤が親水性部分にポ
リオキシエチレン鎖を含む構造である請求項３記載の特
異的細胞除去材料。 - 【請求項５】 細胞表面と親和性を有するタンパク質及
び／又はペプチドが、細胞表面抗原に対する抗体及び／
又はその一部である請求項１記載の特異的細胞除去材
料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34361197A JP4197545B2 (ja) | 1997-12-01 | 1997-12-01 | 特異的細胞除去材料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34361197A JP4197545B2 (ja) | 1997-12-01 | 1997-12-01 | 特異的細胞除去材料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11158076A true JPH11158076A (ja) | 1999-06-15 |
| JP4197545B2 JP4197545B2 (ja) | 2008-12-17 |
Family
ID=18362881
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34361197A Expired - Lifetime JP4197545B2 (ja) | 1997-12-01 | 1997-12-01 | 特異的細胞除去材料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4197545B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009536944A (ja) * | 2006-05-12 | 2009-10-22 | アイビーデー コラム セラピーズ インターナショナル エービー | 炎症性腸疾患を治療するための方法及び手段 |
| US8877177B2 (en) | 2008-09-10 | 2014-11-04 | Ith Immune Therapy Holdings Ab | Chemokine containing apheresis column and methods of use |
| JP2017080400A (ja) * | 2007-08-31 | 2017-05-18 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン | 選択的細胞吸着除去装置およびその関連方法 |
| WO2017104567A1 (ja) * | 2015-12-15 | 2017-06-22 | 協和メデックス株式会社 | 線維芽細胞増殖因子－２３の安定化剤 |
-
1997
- 1997-12-01 JP JP34361197A patent/JP4197545B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009536944A (ja) * | 2006-05-12 | 2009-10-22 | アイビーデー コラム セラピーズ インターナショナル エービー | 炎症性腸疾患を治療するための方法及び手段 |
| US8449489B2 (en) | 2006-05-12 | 2013-05-28 | Ith Immune Therapy Holdings Ab | Method and means for treating inflammatory bowel disease |
| JP2017080400A (ja) * | 2007-08-31 | 2017-05-18 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニヴァシティ オブ ミシガン | 選択的細胞吸着除去装置およびその関連方法 |
| US8877177B2 (en) | 2008-09-10 | 2014-11-04 | Ith Immune Therapy Holdings Ab | Chemokine containing apheresis column and methods of use |
| WO2017104567A1 (ja) * | 2015-12-15 | 2017-06-22 | 協和メデックス株式会社 | 線維芽細胞増殖因子－２３の安定化剤 |
| JPWO2017104567A1 (ja) * | 2015-12-15 | 2018-10-04 | 協和メデックス株式会社 | 線維芽細胞増殖因子−２３の安定化剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4197545B2 (ja) | 2008-12-17 |
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