JPH11155574A

JPH11155574A - Ｍｄｃ遺伝子ファミリーに属する新規蛋白質およびそれをコードするｄｎａ

Info

Publication number: JPH11155574A
Application number: JP9330020A
Authority: JP
Inventors: Yasushi Aine; 康司相根
Original assignee: Eisai Co Ltd
Current assignee: Eisai Co Ltd
Priority date: 1997-12-01
Filing date: 1997-12-01
Publication date: 1999-06-15

Abstract

(57)【要約】【課題】新規のＭＤＣ遺伝子ファミリーに属する蛋白
質、それをコードする遺伝子ＤＮＡおよび該ＤＮＡを用
いる遺伝子解析法を提供する。【解決手段】ヒトＭＤＣ遺伝子をもとに設計した合成Ｄ
ＮＡプライマーを用いたＰＣＲ法により、ヒト脳ｍＲＮ
Ａから新規のＭＤＣ類似蛋白質をコードするｃＤＮＡを
単離し、その構造を決定した。さらにこのＤＮＡ断片を
プローブとして、ヒト脳ｃＤＮＡライブラリーから上記
蛋白質の全長をコードするｃＤＮＡを得た。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はメタロプロテイナー
ゼ様ディスインテグリン様システインリッチ蛋白(Metal
loproteinase like−disintegrin like−cyctein rich
protein、以下ＭＤＣ)遺伝子ファミリーに属する新規蛋
白質、それをコードする遺伝子ＤＮＡおよび該ＤＮＡを
用いる遺伝子解析法に関し、医療、診断等の分野で利用
される。

【０００２】

【従来の技術】ＭＤＣ遺伝子ファミリーに属する蛋白質
の多くは、メタロプロテアーゼドメイン、ディスインテ
グリンドメイン、システインリッチドメイン、膜貫通ド
メイン、細胞内ドメインなどのマルチドメイン構造を有
する膜結合型の蛋白質である。そして、そのディスイン
テグリンドメインを介して特定のリガンドを認識し、細
胞間の認識、接着、に深く関与していることが明らかと
なってきている。この遺伝子ファミリーに属するものと
しては、ファーティリン(Fertilin)、メルトリン(Meltr
in)をはじめとして、ADAM3からADAM15まで約20種類が知
られており、このうちファーティリンは受精時の、メル
トリンは筋管形成時のそれぞれ細胞融合に関する因子で
あると報告されている(Huovilia, A.-P., J., et al.,
Current Opinion in Cell Biology, 8, 692-699, 199
6)。神経細胞の分化には、隣接する細胞の認識が重要な
役割を果たす。また、接着分子を介する情報伝達は、細
胞の生存維持にも働いている。中枢神経は胎生期までに
分化が完了すると、その後再び分化することはなく、生
涯を通じて次第に減少していく。何らかの原因によって
神経細胞の細胞間認識機構に障害が起きると、神経細胞
の変性や死滅をきたし、痴呆や運動障害などの重篤な疾
病へと進行する場合が多い。ＭＤＣ２α、２βおよび３
遺伝子の発現はヒト脳の神経細胞において強く認めら
れ、他の臓器ではほとんど発現が認められないことか
ら、神経細胞の分化および生存維持に関わっていること
が予想される。したがって、ＭＤＣ２α、２βおよび３
遺伝子に変異が生じた場合には、アルツハイマー型痴呆
症、脳血管生痴呆症、脳梗塞後の後遺症、先天性神経疾
患等の重篤な神経疾患が引き起こされると考えられる。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的はＭＤＣ
遺伝子ファミリーに属する新規蛋白質と、それをコード
する遺伝子、さらにそれらを用いた検査方法、診断方法
等を提供することにある。

【０００４】

【課題を解決するための手段】ＭＤＣファミリー蛋白質
は、最近、江見ら(Emi, M., et al., Nature Genet.,5,
151-157, 1993)によって報告された。本発明者らは、
この蛋白質のＤＮＡを元に設計した合成ＤＮＡプライマ
ーを用いたＰＣＲにより、ヒト脳ｍＲＮＡから新規のＭ
ＤＣ類似蛋白質をコードするｃＤＮＡを単離し、その部
分的な構造を決定することに成功した。さらにこのＤＮ
Ａ断片をプローブに用いて、ヒト脳ｃＤＮＡライブラリ
ーから全長をコードするｃＤＮＡを獲得し、構造を解析
した結果、ＭＤＣ遺伝子ファミリーに属する新規蛋白質
をコードするＤＮＡであることが判明し本発明を完成し
た。

【０００５】すなわち本発明は、1)配列番号１、２また
は３に示されたＤＮＡ配列によってコードされる蛋白
質、2)配列番号１、２または３に示された塩基配列を有
するＤＮＡ、3)配列番号１、２または３に示された塩基
配列を有するＤＮＡを組み込んだプラスミド、4)該プラ
スミドで形質転換された宿主細胞および該宿主細胞培養
物より発現産物を回収することを含む蛋白質の製造方
法、5)配列番号１、２または３に示されたＤＮＡによっ
てコードされる蛋白質を抗原とする抗体、6)配列番号
１、２または３で表されるＤＮＡ配列の一部を含むもの
からなるプライマー、プローブまたはマーカー、および
これらを使用することを特徴とする遺伝子解析方法であ
る。本発明は、例えば本蛋白質の欠損や異常の有無ある
いはそれをコードする遺伝子の欠失や変異の有無を調べ
ることによって、神経疾患についてのリスク診断、早期
発見、経過観察、治療方針の決定、予後の推定などの困
難な問題に対する解決方法と材料を提供し、この分野の
技術を飛躍的に進歩させ得るという点できわめて重要で
ある。なお、本発明に係るＭＤＣ２α蛋白質をコードす
るＤＮＡを含有するプラスミドを有する大腸菌pBS-hMFP
13-109は、1997年11月20日に工業技術院生命工学工業技
術研究所(ＦＥＲＭ)に寄託されており、その寄託番号は
FERM BP-6178である。

【０００６】

【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。 (１)ｃＤＮＡクローンの単離本発明に係るＭＤＣ類似蛋白質をコードする遺伝子のＤ
ＮＡ断片は、例えば次のような方法によって得られる。
ヒト脳ｍＲＮＡから常法に従い逆転写酵素を用いてファ
ーストストランドｃＤＮＡを合成する。次に得られたｃ
ＤＮＡをテンプレートとしてＰＣＲ法により本発明のＭ
ＤＣ類似遺伝子を分離することができる。この際に用い
るプライマーはＭＤＣ類似遺伝子ファミリーにおいて高
度に保存された配列を用いる。さらに得られたＰＣＲ断
片をプローブに用いてヒト脳ｃＤＮＡライブラリをスク
リーニングして本発明のＭＤＣ類似遺伝子を得ることが
できる。ＤＮＡの操作は通常行なわれる方法により実施
すればよく、例えば、マニティスの著書(Molecular clo
ning, A laboratory manual, Manitis, T., Cold Sprin
g Harbor Laboratory, 1989)に従えばよい。

【０００７】(２)遺伝子の全構造の確認上記の方法により得られたｃＤＮＡは、配列番号１〜３
に示された新規のＤＮＡ配列であることが確認された。
本発明者らは、これらのＤＮＡ配列によってコードされ
る蛋白質を、それぞれＭＤＣ２α、ＭＤＣ２β、ＭＤＣ
３蛋白質(以下まとめてＭＤＣ類似蛋白質と表記する)と
命名した。本発明のＤＮＡは、その一部をプライマーま
たはプローブとして用いることにより、遺伝子解析、診
断に利用することができる。その際少なくとも６個、好
ましくは10〜12個、さらに好ましくは15〜25個の塩基配
列に対応するポリヌクレオチドを使用することができ
る。

【０００８】(３)組換え発現ベクターとその形質転換体上記記載の方法により得られたヒトＭＤＣ類似蛋白質を
コードする遺伝子ＤＮＡ、あるいはその断片を適切なベ
クターに組み込み、該ベクターを適切な宿主細胞に移入
することにより形質転換体を得ることができる。これを
常法により培養し、培養細胞よりヒトＭＤＣ類似蛋白質
を大量に生産することができる。さらに具体的には、ヒ
トＭＤＣ類似蛋白質をコードするＤＮＡまたはその断片
を、その発現に適したベクターのプロモーター下流に、
制限酵素とＤＮＡリガーゼを用いて再結合して、組換え
発現ベクターを作成することができる。使用できるベク
ターとしては、例えば大腸菌由来のプラスミドｐＲＢ３
２２、ｐＵＣ１８、枯草菌由来のプラスミドｐＵＢ１１
０、酵母菌由来のプラスミドｐＲＢ１５、ファージベク
タ−λｇｔ１０、λｇｔ１１あるいは動物ウイルス由来
のベクタ−ＳＶ４０などが挙げられるが宿主内で複製、
増幅可能なベクターであれば特に限定されない。プロモ
ーターおよびターミネーターとしては、ヒトＭＤＣ類似
蛋白質をコードするＤＮＡ塩基配列の発現に用いられる
宿主に対応したものであれば特に限定されず、宿主に応
じて適切な組み合わせも可能である。用いるＤＮＡは化
学合成によって合成されたものでも良い。このようにし
て得られた組換え発現ベクターは、コンピテント細胞法
(J. Mol.Biol., 53, 154, 1970)、プロトプラスト法(Hi
nnen, A., et al., Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 75, 1
929, 1978)、リン酸カルシウム法(Science, 221, 551,1
983)、インビトロパッケージング法(Proc. Natl, Acad.
Sci. USA, 72, 581, 1975)、ウイルスベクター法(Cel
l, 37, 1053, 1984)などにより宿主に導入し、形質転換
体が作製される。宿主としては大腸菌、枯草菌、酵母お
よび動物細胞などが用いられ、得られた形質転換体はそ
の宿主に応じた適切な培地中で培養される。培養は通常
20〜45℃、pH５〜８の範囲で行われ、必要に応じて通
気、攪拌が行われる。培養物からのＭＤＣ蛋白質の分離
・精製は公知の分離・精製法を適宜組み合わせて実施す
れば良い。これらの公知の方法としては塩析、溶媒沈殿
法、透析ゲルろ過法、電気泳動法、イオン交換クロマト
グラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相高
速液体クロマトグラフィーなどが挙げられる。

【０００９】(４)抗体の作成抗体はＭＤＣ類似蛋白質の全部あるいは一部分を抗原と
して、通常の方法で作成することができる。例えば、ポ
リクローナル抗体はマウス、モルモット、ウサギ等の動
物の皮下、筋肉内、腹腔内、静脈に複数回接種し十分に
免疫した後、採血、血清分離して作製する。なお、市販
のアジュバントも使用できる。モノクローナル抗体は、
例えば、ＭＤＣ類似蛋白質で免疫したマウスの脾細胞と
市販のマウスミエローマ細胞との細胞融合により得られ
るハイブリドーマを作成後、該ハイブリドーマ培養上
清、または該ハイブリドーマ投与マウス腹水から調製す
ることができる。抗原とするＭＤＣ類似蛋白質は必ずし
も全アミノ酸構造を有する必要はなく、部分構造を有す
るペプチド、その変異体、誘導体、あるいは他のペプチ
ドとの融合ペプチドであってもよく、調製法は生物学的
手法、化学合成手法いずれでもよい。これら抗体はヒト
生体試料中のＭＤＣ類似蛋白質の同定や定量を可能と
し、診断試薬などに使用できる。ＭＤＣ類似蛋白質の免
疫学的測定法は、公知の方法によればよく、たとえば蛍
光抗体法、受身凝集反応法、酵素抗体法などいずれの方
法においても実施できる。

【００１０】(５)ヒト組織の遺伝子解析遺伝子解析される生体試料はヒト正常組織をはじめヒト
血液、体液、分泌液、胎盤などを用いることができる。
ＤＮＡの抽出・調製は、たとえば(Sato, T., et al., C
ancer Res., 50, 7184, 1990)の方法で行う。本発明に
より提供されるヒトＭＤＣ類似蛋白質をコードする遺伝
子ＤＮＡの制限酵素断片をプローブとして、または該遺
伝子ＤＮＡの中から適切な位置の塩基配列を適宜選択
し、その合成オリゴヌクレオチドをプライマーとして用
いることにより該遺伝子の変異の有無を解析することが
できる。また、試料中の該遺伝子における挿入、欠失な
どの異常もこれらの解析により検知することができる。
選択する塩基配列の部位は該遺伝子のエクソン部分、イ
ントロン部分あるいは両部分の結合部分など、いずれも
選択し得る。また用いる塩基配列を人為的に改変したも
のを用いることもでき、これにより対応する遺伝子変異
を検出することができる。解析の方法としては、例えば
選ばれた２種の配列のプライマーによりＰＣＲ法で部分
配列を増幅させ、増幅産物の塩基配列を直接解析する
か、あるいはこの増幅産物を前記と同様にプラスミドに
組み込み、宿主細胞を形質転換させて培養し、得られる
クローンの塩基配列を解析することができる。あるいは
また、リガーゼチェインリアクション(Ligase Chain Re
action)法(Wu. R., et al., Genomics, 4, 560-569, 19
89)、さらに、変異配列特異的ＰＣＲ法(Ruano and Kid
d, Nucleic Acid Research, 17, 8392, 1989、Newton,
C. R. et al., Nucleic Acid Research, 17, 2503-251
7, 1989)を利用することにより、試料中の該遺伝子の特
定の変異の有無を直接検出することができる。また同様
に、選ばれたＤＮＡ配列あるいはこれに由来するＲＮＡ
配列を含むプローブを用いて、ＳＳＣＰ法、RNase-Prot
ection法により点突然変異の検出を行うことができる。
またこれらのプローブを用いることにより、サザンハイ
ブリダイゼーション法での試料中の該遺伝子の変異の検
出、ノーザンハイブリダイゼーション法での試料中の該
遺伝子の発現量の異常を検出することができる。

【００１１】

【実施例】以下に実施例により本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。実施例１ｃＤＮＡの単離と構造決定(1) ＭＤＣ遺伝子ファミリーにおいて高度に保存されている
プライマーＭＲＰ００１およびＭＲＰ００２を用いたＲ
Ｔ−ＰＣＲ法により、ヒト脳ｍＲＮＡから330bpのｃＤ
ＮＡ断片が増幅された。プライマーの配列は以下の通り
であり、これらはそれぞれ配列番号３の塩基番号1687〜
1707、1993〜2014に相当する。ＭＲＰ００１５'-TGGAGCCTGCCTTTCCAACAG-３' (セン
ス鎖) ＭＲＰ００２５'-GCCCTGATTTTGATTGCATGCA-３' (アン
チセンス鎖) 得られたｃＤＮＡ断片の情報をもとに作成したプライマ
ーを用いて、３'ＲＡＣＥ法をおこない、約1.3kbの増幅
配列を得ることができた。また、同様に５'ＲＡＣＥ法
により、約1.6kbの増幅配列を得た。この1.6kbの増幅配
列をプローブとしてヒト脳ｃＤＮＡライブラリーをスク
リーニングした。20個以上のポジティブプラークの塩基
配列を解析した結果、No.21のクローンが開始コドンを
含む上流の配列を含有していることが判明した。これら
のＤＮＡ配列を遺伝子解析ソフト(ＤＮＡＳＩＳ／ＭＡ
Ｃ)により統合することにより、ＭＤＣに非常に相同性
の高い蛋白質をコードしているｃＤＮＡの存在が明らか
となった。このｃＤＮＡの塩基配列を解析した結果、30
54bpよりなり、223bpの５'非翻訳領域、2496bpのコーデ
ィング領域、335bpの３'非翻訳領域を含む新規なＤＮＡ
塩基配列であることを確認した(配列番号３)。このｃＤ
ＮＡ配列に含まれるオープンリーディングフレームは、
832アミノ酸よりなる新規な蛋白質をコードしており、
これをＭＤＣ３蛋白質と命名した。ＭＤＣ３蛋白質のア
ミノ酸配列は、ＭＤＣ／ＡＤＡＭファミリーの蛋白質お
よび蛇毒のクラス３メタロプロテアーゼと高いホモロジ
ーを有していた。ＭＤＣ３蛋白質、配列番号３(832アミ
ノ酸)とのホモロジーの一致％／対象領域アミノ酸数は
次のとおりであった。 1 gene MDC protein−human(S38539)50.6％／498 2 meltrin alpha−mouse (S60257) 33.2％／630 3 androgen-regulated epididymal protein precursor
−crab-eating macaque(S28258)28.5％／642 4 androgen-regulated epididymal protein precursor
−rat(S28259)29.1％／635 5 jararhagin(EC 3.4.24.-)−jararaca(S24789)31.0％
／525 6 PUTATIVE VENOM METALLOPROTEINASE(P30431)31.0％／
525 7 jararhagin(EC 3.4.24.-)precursor−jararaca(fragm
ent)(A44463)31.0％／525 8 fertilin alpha-II−crab-eating macaque(S55060)2
8.8％／685 9 metalloprotease−Echis pyramidum leakeyi(S48160)
30.6％／555 10 fertilin alpha-I−crab-eating macaque(S55059)2
9.8％／627

【００１２】実施例２遺伝子発現の組織特異性(1) 実施例１で得られたｃＤＮＡをプローブとして、種々の
ヒト組織(脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵臓、胎盤、骨
格筋、大腸、末梢血リンパ球、卵巣、小腸、脾臓、精
巣、胸腺)由来のｍＲＮＡについてノーザンブロット解
析を行った結果、脳に最も強い発現が認められた。

【００１３】実施例３形質転換体の作製ＭＤＣ３蛋白質をコードするＤＮＡ(配列番号３)を基質
として、プライマーＭＲＰ００９とＭＲＰ０１０を用い
て、ＭＤＣ３蛋白質の一部をコードするＤＮＡ断片をＰ
ＣＲで増幅した。用いたプライマーの配列は以下の通り
であり、これらはそれぞれ配列番号３の塩基番号の1718
〜1739、2580〜2596に相当する。ＭＲＰ００９５'-CTATTTGAGCCCACGGAATGTG-３'（セン
ス鎖）ＭＲＰ０１０５'-GGGTGGCACTAGGACCCT-３' （アン
チセンス鎖）ベクター構築用に、プライマーの５'端にはそれぞれBgl
II、Hind IIIの切断部位配列を付加してある。ＰＣＲ
増幅産物をアガロースゲル電気泳動によって分取し、Bg
l IIとHind IIIで切断した。こうして得られたＭＤＣ３
蛋白質の一部をコードするＤＮＡ断片を、予めBamHIとH
ind IIIで切断しておいたpMAL-c2(New England Biolabs
社製)ベクターに結合してプラスミドpMAL-MRP(A6)を構
築した。このpMAL-MRP(A6)を用いてE.coli JM109をトラ
ンスフォームし、アンピシリン耐性で選択してそれぞれ
の形質転換体を得た。

【００１４】実施例４組換えＭＤＣ３蛋白質の発現と
精製実施例３で得られたそれぞれの形質転換体を培養し、培
養物より組換えＭＤＣ３融合蛋白質を抽出、精製した。
なお、pMAL-c2ベクターに組み込んだ断片は、Ｎ末端側
にマルトース結合蛋白質(ＭＢＰ)を有する融合蛋白質と
して発現されるので、その融合蛋白質はアミロースカラ
ムによってアフィニティー精製した。すなわち、各形質
転換体を100mlのＬＢ培地(１％ポリペプトン、0.5％酵
母抽出物、１％NaCl)で37℃下で一夜振とう培養した。
培養液を予め37℃に加温したＬＢ培地で10倍に希釈した
うえ、さらに30分〜90分培養して、対数増殖期の培養物
を得た。培養物１リットルにＩＰＴＧ(Isopropyl-beta-
D-thiogalactopyranoside)を終濃度１mMとなるように添
加して４時間培養した。培養物を遠心分離して菌体を集
めた。プラスミドpMAL-MRP(A6)による形質転換体の場合
は、菌体に10mlのカラムバッファー(20mM Tris-HCl、pH
7.4、200mM NaCl)を加え超音波によって破砕した。組換
えＭＤＣ３融合蛋白質は、破砕液の可溶性画分に存在し
たので、集めた可溶性画分をアミロースカラム(New Eng
land Biolabs 社製)にかけ、カラムバッファーで洗浄
後、10mMマルトースを含むカラムバッファーで溶出し
た。溶出画分は、280nmの吸光度およびＳＤＳポリアク
リルアミド電気泳動法(クマシーブルー染色)で解析して
分画した。この結果、プラスミド pMAL-MRP(A6)による
形質転換体は、期待される約70KdのＭＢＰ融合蛋白質が
主要バンドとして検出され、20mg以上の融合蛋白質が回
収された。以下、この融合蛋白質をMBP-RPと称する。

【００１５】実施例５ニワトリポリクローナル抗体の
作製実施例４で得られた組換え融合蛋白質MBP-RPを、免疫抗
原、抗体精製・スクリーニング用抗原として用いた。抗
ＭＤＣ３蛋白特異的ポリクローナル抗体は、融合蛋白質
MBP-RPをニワトリに免疫して作製した。すなわち、融合
蛋白質 MBP-RP／PBS溶液(１mg/ml)をフロイントの完全
アジュバントと１：１の割合で混合し、ニワトリに0.25
〜0.5mg／匹の割合で２週間隔で４回免疫を行った。免
疫終了後、抗血清を得、実施例５で得た融合蛋白質MBP-
RPと特異的に反応することをウエスタンブロット法によ
り確認した。

【００１６】実施例６ｃＤＮＡの単離と構造決定(2) ＭＤＣ２α、βタンパクをコードするＤＮＡ断片は、ヒ
ト脳cDNAライブラリーからハイブリダイズ法によって得
られた。なお、その際に使用したプローブは、ＭＤＣ遺
伝子ファミリーにおいて高度に保存されているＭＤＣ３
タンパクのディスインテグリンドメインをコードするｃ
ＤＮＡ断片、すなわち配列番号３の塩基番号547〜2171
を用いた。その結果、約１ｋｂのＭＤＣ２α、β共通の
ｃＤＮＡ断片を含有するクローンが獲得された。このｃ
ＤＮＡ断片の情報をもとに作成したプライマーを用い
て、３'ＲＡＣＥ法をおこない、約1.2kbおよび、約1.1k
bの２種類の増幅配列を得ることができた。前者をαタ
イプ、後者をβタイプとして比較したところ、βタイプ
はαタイプからコーディング領域内の108bpのＤＮＡ配
列を欠失したものであることが判明した。その108bpを
除いては終止コドンに至るまで両者で全く同一の配列を
有していた。α、βで異なる領域をヒトゲノムＤＮＡを
テンプレートに用いたＰＣＲにより獲得し、塩基配列を
決定し解析したところ、βタイプで欠失していた108bp
の配列は、１個のエクソンに相当することが確認され、
αタイプ、βタイプは、同一の遺伝子からオルタナティ
ブスプライシングによって合成されることが判明した。
また、５'ＲＡＣＥ法を繰り返し行なうことにより、上
流のｃＤＮＡ配列を得ることができた。獲得したｃＤＮ
Ａをアミノ酸に翻訳すると、開始メチオニンから約20個
の疎水性アミノ酸のクラスターが存在することが判明
し、このクラスターは分泌シグナルであると予想され
た。これらのＤＮＡ配列を遺伝子解析ソフト（ＤＮＡＳ
ＩＳ／ＭＡＣ）により統合することにより、ＭＤＣに非
常に相同性の高い蛋白質をコードしている２種類のｃＤ
ＮＡ、ＭＤＣ２αおよびβの存在が明らかとなった。Ｍ
ＤＣ２αのｃＤＮＡの塩基配列を解析した結果、2805bp
よりなり、121bpの５'非翻訳領域、2577bpのコーディン
グ領域、107bpの３'非翻訳領域を含む新規なＤＮＡ塩基
配列であることが確認された(配列番号１)。このｃＤＮ
Ａ配列に含まれるオープンリーディングフレームは、85
9アミノ酸よりなる新規な蛋白質(ＭＤＣ２α蛋白質)を
コードしていた。また、ＭＤＣ２βでは、ＭＤＣ２αの
2418bpから2525bpまでの108bpを欠失した配列からな
り、2469bpのコーディング領域を有していた(配列番号
２)。このｃＤＮＡ配列に含まれるオープンリーディン
グフレームは、欠失している36アミノ酸以外をＭＤＣ２
αと共有する823アミノ酸よりなる蛋白質(ＭＤＣ２β蛋
白質)をコードしていた。ＭＤＣ２α蛋白質のアミノ酸
配列は、ＭＤＣ／ＡＤＡＭファミリーの蛋白質および蛇
毒のクラス３メタロプロテアーゼと高いホモロジーを有
していた。ＭＤＣ２α蛋白質、配列番号１(859アミノ
酸)とのホモロジーの一致％／対象領域アミノ酸数は次
のとおりであった。 1 gene MDC protein−human(S38539) 57.1％／496 1694 > 2 meltrin alpha−mouse(S60257) 32.6％／675 3 fertilin alpha-II−crab-eating macaque(S55060) 27.5％／639 4 fertilin alpha-I−crab-eating macaque(S55059) 28.9％／592 5 androgen-regulated epididymal protein precursor−crab-eating macaque( S28258) 28.5％／632 6 androgen-regulated epididymal protein precursor−rat(S28259) 28.7％／ 624 7 monocyte surface antigen MS2 precursor−mouse(A60385) 28.2％／695 8 metalloprotease−Echis pyramidum leakeyi(S48160) 30.1％／548 9 jararhagin(EC 3.4.24.-)precursor−jararaca(A44463) 30.5％／547

【００１７】実施例７遺伝子発現の組織特異性(2) 実施例６で得られたＭＤＣ２αのｃＤＮＡをプローブと
して、種々のヒト組織(脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、膵
臓、胎盤、骨格筋、大腸、末梢血リンパ球、卵巣、小
腸、脾臓、精巣、胸腺)由来のｍＲＮＡについてノーザ
ンブロット解析を行った結果、脳に強い発現が認められ
た。

【００１８】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：２８０５配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ホモサピエンス直接の起源ライブラリー名：ヒト脳ｃＤＮＡライブラリー配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：１２２．．２６９８特徴を決定した方法：Ｅ配列 AGCGGGTTCC GGGAGGCGCC CGGTGAGCCC ACGTCTGTTG CGGCGGAGCG AGGGAAACGG 60 ACTCGGCGGC GCCGGCATGA GGAGCTGAGC GTCTCGGGCG AGGCGGGCTG ACGGCAGCAC 120 C ATG CAG GCG GCA GTG GCT GTG TCC GTG CCC TTC TTG CTG CTC TGT 166 Met Gln Ala Ala Val Ala Val Ser Val Pro Phe Leu Leu Leu Cys 5 10 15 GTC CTG GGG ACC TGC CCT CCG GCG CGC TGC GGC CAG GCA GGA GAC GCC 214 Val Leu Gly Thr Cys Pro Pro Ala Arg Cys Gly Gln Ala Gly Asp Ala 20 25 30 TCA TTG ATG GAG CTA GAG AAG AGG AAG GAA AAC CGC TTC GTG GAG CGC 262 Ser Leu Met Glu Leu Glu Lys Arg Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Arg 35 40 45 CAG AGC ATC GTG CCA CTG CGC CTC ATC TAC CGC TCG GGC GGC GAA GAC 310 Gln Ser Ile Val Pro Leu Arg Leu Ile Tyr Arg Ser Gly Gly Glu Asp 50 55 60 GAA AGT CGG CAC GAC GCG CTC GAC ACG CGG GTG CGG GGC GAC CTC GGT 358 Glu Ser Arg His Asp Ala Leu Asp Thr Arg Val Arg Gly Asp Leu Gly 65 70 75 GGC CCG CAG TTG ACT CAT GTT GAC CAA GCA AGC TTC CAG GTT GAT GCC 406 Gly Pro Gln Leu Thr His Val Asp Gln Ala Ser Phe Gln Val Asp Ala 80 85 90 95 TTT GGA ACG TCA TTC ATT CTC GAT GTC GTG CTA AAT CAT GAT TTG CTG 454 Phe Gly Thr Ser Phe Ile Leu Asp Val Val Leu Asn His Asp Leu Leu 100 105 110 TCC TCT GAA TAC ATA GAG AGA CAC ATT GAA CAT GGA GGC AAG ACT GTG 502 Ser Ser Glu Tyr Ile Glu Arg His Ile Glu His Gly Gly Lys Thr Val 115 120 125 GAA GTT AAA GGA GGA GAG CAC TGT TAC TAC CAG GGC CAT ATC CGA GGA 550 Glu Val Lys Gly Gly Glu His Cys Tyr Tyr Gln Gly His Ile Arg Gly 130 135 140 AAC CCT GAC TCA TTT GTT GCA TTG TCA ACA TGC CAC GGA CTT CAT GGG 598 Asn Pro Asp Ser Phe Val Ala Leu Ser Thr Cys His Gly Leu His Gly 145 150 155 ATG TTC TAT GAC GGG AAC CAC ACA TAT CTC ATT GAG CCA GAA GAA AAT 646 Met Phe Tyr Asp Gly Asn His Thr Tyr Leu Ile Glu Pro Glu Glu Asn 160 165 170 175 GAC ACT ACT CAA GAG GAT TTC CAT TTT CAT TCA GTT TAC AAA TCC AGA 694 Asp Thr Thr Gln Glu Asp Phe His Phe His Ser Val Tyr Lys Ser Arg 180 185 190 CTG TTT GAA TTT TCC TTG GAT GAT CTT CCA TCT GAA TTT CAG CAA GTA 742 Leu Phe Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Pro Ser Glu Phe Gln Gln Val 195 200 205 AAC ATT ACT CCA TCA AAA TTT ATT TTG AAG CCA AGA CCA AAA AGG AGT 790 Asn Ile Thr Pro Ser Lys Phe Ile Leu Lys Pro Arg Pro Lys Arg Ser 210 215 220 AAA CGG CAG CTT CGT CGA TAT CCT CGT AAT GTA GAA GAA GAA ACC AAA 838 Lys Arg Gln Leu Arg Arg Tyr Pro Arg Asn Val Glu Glu Glu Thr Lys 225 230 235 TAC ATT GAA CTG ATG ATT GTG AAT GAT CAC CTT ATG TTT AAA AAA CAT 886 Tyr Ile Glu Leu Met Ile Val Asn Asp His Leu Met Phe Lys Lys His 240 245 250 255 CGG CTT TCC GTT GTA CAT ACC AAT ACC TAT GCG AAA TCT GTG GTG AAC 934 Arg Leu Ser Val Val His Thr Asn Thr Tyr Ala Lys Ser Val Val Asn 260 265 270 ATG GCA GAT TTA ATA TAT AAA GAC CAA CTT AAG ACC AGG ATA GTA TTG 982 Met Ala Asp Leu Ile Tyr Lys Asp Gln Leu Lys Thr Arg Ile Val Leu 275 280 285 GTT GCT ATG GAA ACC TGG GCG ACT GAC AAC AAG TTT GCC ATA TCT GAA 1030 Val Ala Met Glu Thr Trp Ala Thr Asp Asn Lys Phe Ala Ile Ser Glu 290 295 300 AAT CCA TTG ATC ACC CTA CGT GAG TTT ATG AAA TAC AGG AGG GAT TTT 1078 Asn Pro Leu Ile Thr Leu Arg Glu Phe Met Lys Tyr Arg Arg Asp Phe 305 310 315 ATC AAA GAG AAA AGT GAT GCA GTT CAC CTT TTT TCG GGA AGT CAA TTT 1126 Ile Lys Glu Lys Ser Asp Ala Val His Leu Phe Ser Gly Ser Gln Phe 320 325 330 335 GAG AGT AGC CGG AGC GGG GCA GCT TAT ATT GGT GGG ATT TGC TCG TTG 1174 Glu Ser Ser Arg Ser Gly Ala Ala Tyr Ile Gly Gly Ile Cys Ser Leu 340 345 350 CTG AAA GGA GGA GGC GTG AAT GAA TTT GGG AAA ACT GAT TTA ATG GCT 1222 Leu Lys Gly Gly Gly Val Asn Glu Phe Gly Lys Thr Asp Leu Met Ala 355 360 365 GTT ACA CTT GCC CAG TCA TTA GCC CAT AAT ATT GGT ATT ATC TCA GAC 1270 Val Thr Leu Ala Gln Ser Leu Ala His Asn Ile Gly Ile Ile Ser Asp 370 375 380 AAA AGA AAG TTA GCA AGT GGT GAA TGT AAA TGC GAG GAC ACG TGG TCC 1318 Lys Arg Lys Leu Ala Ser Gly Glu Cys Lys Cys Glu Asp Thr Trp Ser 385 390 395 GGG TGC ATA ATG GGA GAC ACT GGC TAT TAT CTT CCT AAA AAG TTC ACC 1366 Gly Cys Ile Met Gly Asp Thr Gly Tyr Tyr Leu Pro Lys Lys Phe Thr 400 405 410 415 CAG TGT AAT ATT GAA GAG TAT CAT GAC TTC CTG AAT AGT GGA GGT GGT 1414 Gln Cys Asn Ile Glu Glu Tyr His Asp Phe Leu Asn Ser Gly Gly Gly 420 425 430 GCC TGC CTT TTC AAC AAA CCT TCT AAG CTT CTT GAT CCT CCT GAG TGT 1462 Ala Cys Leu Phe Asn Lys Pro Ser Lys Leu Leu Asp Pro Pro Glu Cys 435 440 445 GGC AAT GGC TTC ATT GAA ACT GGA GAG GAG TGT GAT TGT GGA ACC CCG 1510 Gly Asn Gly Phe Ile Glu Thr Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Thr Pro 450 455 460 GCC GAA TGT GTC CTT GAA GGA GCA GAG TGT TGT AAG AAA TGC ACC TTG 1558 Ala Glu Cys Val Leu Glu Gly Ala Glu Cys Cys Lys Lys Cys Thr Leu 465 470 475 ACT CAA GAC TCT CAA TGC AGT GAC GGT CTT TGC TGT AAA AAG TGC AAG 1606 Thr Gln Asp Ser Gln Cys Ser Asp Gly Leu Cys Cys Lys Lys Cys Lys 480 485 490 495 TTT CAG CCT ATG GGC ACT GTG TGC CGA GAA GCA GTA AAT GAT TGT GAT 1654 Phe Gln Pro Met Gly Thr Val Cys Arg Glu Ala Val Asn Asp Cys Asp 500 505 510 ATT CGT GAA ACG TGC TCA GGA AAT TCA AGC CAG TGT GCC CCT AAT ATT 1702 Ile Arg Glu Thr Cys Ser Gly Asn Ser Ser Gln Cys Ala Pro Asn Ile 515 520 525 CAT AAA ATG GAT GGA TAT TCA TGT GAT GGT GTT CAG GGA ATT TGC TTT 1750 His Lys Met Asp Gly Tyr Ser Cys Asp Gly Val Gln Gly Ile Cys Phe 530 535 540 GGA GGA AGA TGC AAA ACC AGA GAT AGA CAA TGC AAA TAC ATT TGG GGG 1798 Gly Gly Arg Cys Lys Thr Arg Asp Arg Gln Cys Lys Tyr Ile Trp Gly 545 550 555 CAA AAG GTG ACA GCA TCA GAC AAA TAT TGC TAT GAG AAA CTG AAT ATT 1846 Gln Lys Val Thr Ala Ser Asp Lys Tyr Cys Tyr Glu Lys Leu Asn Ile 560 565 570 575 GAA GGG ACG GAG AAG GGT AAC TGT GGG AAA GAC AAA GAC ACA TGG ATA 1894 Glu Gly Thr Glu Lys Gly Asn Cys Gly Lys Asp Lys Asp Thr Trp Ile 580 585 590 CAG TGC AAC AAA CGG GAT GTG CTT TGT GGT TAC CTT TTG TGT ACC AAT 1942 Gln Cys Asn Lys Arg Asp Val Leu Cys Gly Tyr Leu Leu Cys Thr Asn 595 600 605 ATT GGC AAT ATC CCA AGG CTT GGA GAA CTC GAT GGT GAA ATC ACA TCT 1990 Ile Gly Asn Ile Pro Arg Leu Gly Glu Leu Asp Gly Glu Ile Thr Ser 610 615 620 ACT TTA GTT GTG CAG CAA GGA AGA ACA TTA AAC TGC AGT GGT GGG CAT 2038 Thr Leu Val Val Gln Gln Gly Arg Thr Leu Asn Cys Ser Gly Gly His 625 630 635 GTT AAG CTT GAA GAA GAT GTA GAT CTT GGC TAT GTG GAA GAT GGG ACA 2086 Val Lys Leu Glu Glu Asp Val Asp Leu Gly Tyr Val Glu Asp Gly Thr 640 645 650 655 CCT TGT GGT CCC CAA ATG ATG TGC TTA GAA CAC AGG TGT CTT CCT GTG 2134 Pro Cys Gly Pro Gln Met Met Cys Leu Glu His Arg Cys Leu Pro Val 660 665 670 GCT TCT TTC AAC TTT AGT ACT TGC TTG AGC AGT AAA GAA GGC ACT ATT 2182 Ala Ser Phe Asn Phe Ser Thr Cys Leu Ser Ser Lys Glu Gly Thr Ile 675 680 685 TGC TCA GGA AAT GGA GTT TGC AGT AAT GAG CTG AAG TGT GTG TGT AAC 2230 Cys Ser Gly Asn Gly Val Cys Ser Asn Glu Leu Lys Cys Val Cys Asn 690 695 700 AGA CAC TGG ATA GGT TCT GAT TGC AAC ACT TAC TTC CCT CAC AAT GAT 2278 Arg His Trp Ile Gly Ser Asp Cys Asn Thr Tyr Phe Pro His Asn Asp 705 710 715 GAT GCA AAG ACT GGT ATC ACT CTG TCT GGC AAT GGT GTT GCT GGC ACC 2326 Asp Ala Lys Thr Gly Ile Thr Leu Ser Gly Asn Gly Val Ala Gly Thr 720 725 730 735 AAT ATC ATA ATA GGC ATA ATT GCT GGC ACC ATT TTA GTG CTG GCC CTC 2374 Asn Ile Ile Ile Gly Ile Ile Ala Gly Thr Ile Leu Val Leu Ala Leu 740 745 750 ATA TTA GGA ATA ACT GCG TGG GGT TAT AAA AAC TAT CGA GAA CAG AGA 2422 Ile Leu Gly Ile Thr Ala Trp Gly Tyr Lys Asn Tyr Arg Glu Gln Arg 755 760 765 CAG TTA CCC CAG GGA GAT TAT GTA AAA AAG CCT GGA GAT GGT GAC TCT 2470 Gln Leu Pro Gln Gly Asp Tyr Val Lys Lys Pro Gly Asp Gly Asp Ser 770 775 780 TTT TAT AGC GAC ATT CCT CCC GGA GTC AGC ACA AAC TCA GCA TCT AGT 2518 Phe Tyr Ser Asp Ile Pro Pro Gly Val Ser Thr Asn Ser Ala Ser Ser 785 790 795 TCT AAG AAG AGG TCA AAT GGG CTC TCT CAT TCT TGG AGT GAA AGG ATT 2566 Ser Lys Lys Arg Ser Asn Gly Leu Ser His Ser Trp Ser Glu Arg Ile 800 805 810 815 CCA GAC ACA AAA CAT ATT TCA GAC ATC TGT GAA AAT GGG CGA CCT CGA 2614 Pro Asp Thr Lys His Ile Ser Asp Ile Cys Glu Asn Gly Arg Pro Arg 820 825 830 AGT AAC TCT TGG CAA GGT AAC CTG GGA GGC AAC AAA AAG AAA ATC AGA 2662 Ser Asn Ser Trp Gln Gly Asn Leu Gly Gly Asn Lys Lys Lys Ile Arg 835 840 845 GGC AAA AGA TTT AGA CCT CGG TCT AAT TCA ACT GAG TAA GTCTGAACCT CT 2713 Gly Lys Arg Phe Arg Pro Arg Ser Asn Ser Thr Glu Stop 850 855 860 AATGGAAAAA GGCACTCCAA GGTCCTGTGC AAATAGTGTC AAAAGTAAAT TAAGCAGATA 2773 GTCAAAGAAC TGTAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 2805

【００１９】配列番号：２配列の長さ：２６９７配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ホモサピエンス直接の起源ライブラリー名：ヒト脳ｃＤＮＡライブラリー配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：１２２．．２５９０特徴を決定した方法：Ｅ配列 AGCGGGTTCC GGGAGGCGCC CGGTGAGCCC ACGTCTGTTG CGGCGGAGCG AGGGAAACGG 60 ACTCGGCGGC GCCGGCATGA GGAGCTGAGC GTCTCGGGCG AGGCGGGCTG ACGGCAGCAC 120 C ATG CAG GCG GCA GTG GCT GTG TCC GTG CCC TTC TTG CTG CTC TGT 166 Met Gln Ala Ala Val Ala Val Ser Val Pro Phe Leu Leu Leu Cys 5 10 15 GTC CTG GGG ACC TGC CCT CCG GCG CGC TGC GGC CAG GCA GGA GAC GCC 214 Val Leu Gly Thr Cys Pro Pro Ala Arg Cys Gly Gln Ala Gly Asp Ala 20 25 30 TCA TTG ATG GAG CTA GAG AAG AGG AAG GAA AAC CGC TTC GTG GAG CGC 262 Ser Leu Met Glu Leu Glu Lys Arg Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Arg 35 40 45 CAG AGC ATC GTG CCA CTG CGC CTC ATC TAC CGC TCG GGC GGC GAA GAC 310 Gln Ser Ile Val Pro Leu Arg Leu Ile Tyr Arg Ser Gly Gly Glu Asp 50 55 60 GAA AGT CGG CAC GAC GCG CTC GAC ACG CGG GTG CGG GGC GAC CTC GGT 358 Glu Ser Arg His Asp Ala Leu Asp Thr Arg Val Arg Gly Asp Leu Gly 65 70 75 GGC CCG CAG TTG ACT CAT GTT GAC CAA GCA AGC TTC CAG GTT GAT GCC 406 Gly Pro Gln Leu Thr His Val Asp Gln Ala Ser Phe Gln Val Asp Ala 80 85 90 95 TTT GGA ACG TCA TTC ATT CTC GAT GTC GTG CTA AAT CAT GAT TTG CTG 454 Phe Gly Thr Ser Phe Ile Leu Asp Val Val Leu Asn His Asp Leu Leu 100 105 110 TCC TCT GAA TAC ATA GAG AGA CAC ATT GAA CAT GGA GGC AAG ACT GTG 502 Ser Ser Glu Tyr Ile Glu Arg His Ile Glu His Gly Gly Lys Thr Val 115 120 125 GAA GTT AAA GGA GGA GAG CAC TGT TAC TAC CAG GGC CAT ATC CGA GGA 550 Glu Val Lys Gly Gly Glu His Cys Tyr Tyr Gln Gly His Ile Arg Gly 130 135 140 AAC CCT GAC TCA TTT GTT GCA TTG TCA ACA TGC CAC GGA CTT CAT GGG 598 Asn Pro Asp Ser Phe Val Ala Leu Ser Thr Cys His Gly Leu His Gly 145 150 155 ATG TTC TAT GAC GGG AAC CAC ACA TAT CTC ATT GAG CCA GAA GAA AAT 646 Met Phe Tyr Asp Gly Asn His Thr Tyr Leu Ile Glu Pro Glu Glu Asn 160 165 170 175 GAC ACT ACT CAA GAG GAT TTC CAT TTT CAT TCA GTT TAC AAA TCC AGA 694 Asp Thr Thr Gln Glu Asp Phe His Phe His Ser Val Tyr Lys Ser Arg 180 185 190 CTG TTT GAA TTT TCC TTG GAT GAT CTT CCA TCT GAA TTT CAG CAA GTA 742 Leu Phe Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Pro Ser Glu Phe Gln Gln Val 195 200 205 AAC ATT ACT CCA TCA AAA TTT ATT TTG AAG CCA AGA CCA AAA AGG AGT 790 Asn Ile Thr Pro Ser Lys Phe Ile Leu Lys Pro Arg Pro Lys Arg Ser 210 215 220 AAA CGG CAG CTT CGT CGA TAT CCT CGT AAT GTA GAA GAA GAA ACC AAA 838 Lys Arg Gln Leu Arg Arg Tyr Pro Arg Asn Val Glu Glu Glu Thr Lys 225 230 235 TAC ATT GAA CTG ATG ATT GTG AAT GAT CAC CTT ATG TTT AAA AAA CAT 886 Tyr Ile Glu Leu Met Ile Val Asn Asp His Leu Met Phe Lys Lys His 240 245 250 255 CGG CTT TCC GTT GTA CAT ACC AAT ACC TAT GCG AAA TCT GTG GTG AAC 934 Arg Leu Ser Val Val His Thr Asn Thr Tyr Ala Lys Ser Val Val Asn 260 265 270 ATG GCA GAT TTA ATA TAT AAA GAC CAA CTT AAG ACC AGG ATA GTA TTG 982 Met Ala Asp Leu Ile Tyr Lys Asp Gln Leu Lys Thr Arg Ile Val Leu 275 280 285 GTT GCT ATG GAA ACC TGG GCG ACT GAC AAC AAG TTT GCC ATA TCT GAA 1030 Val Ala Met Glu Thr Trp Ala Thr Asp Asn Lys Phe Ala Ile Ser Glu 290 295 300 AAT CCA TTG ATC ACC CTA CGT GAG TTT ATG AAA TAC AGG AGG GAT TTT 1078 Asn Pro Leu Ile Thr Leu Arg Glu Phe Met Lys Tyr Arg Arg Asp Phe 305 310 315 ATC AAA GAG AAA AGT GAT GCA GTT CAC CTT TTT TCG GGA AGT CAA TTT 1126 Ile Lys Glu Lys Ser Asp Ala Val His Leu Phe Ser Gly Ser Gln Phe 320 325 330 335 GAG AGT AGC CGG AGC GGG GCA GCT TAT ATT GGT GGG ATT TGC TCG TTG 1174 Glu Ser Ser Arg Ser Gly Ala Ala Tyr Ile Gly Gly Ile Cys Ser Leu 340 345 350 CTG AAA GGA GGA GGC GTG AAT GAA TTT GGG AAA ACT GAT TTA ATG GCT 1222 Leu Lys Gly Gly Gly Val Asn Glu Phe Gly Lys Thr Asp Leu Met Ala 355 360 365 GTT ACA CTT GCC CAG TCA TTA GCC CAT AAT ATT GGT ATT ATC TCA GAC 1270 Val Thr Leu Ala Gln Ser Leu Ala His Asn Ile Gly Ile Ile Ser Asp 370 375 380 AAA AGA AAG TTA GCA AGT GGT GAA TGT AAA TGC GAG GAC ACG TGG TCC 1318 Lys Arg Lys Leu Ala Ser Gly Glu Cys Lys Cys Glu Asp Thr Trp Ser 385 390 395 GGG TGC ATA ATG GGA GAC ACT GGC TAT TAT CTT CCT AAA AAG TTC ACC 1366 Gly Cys Ile Met Gly Asp Thr Gly Tyr Tyr Leu Pro Lys Lys Phe Thr 400 405 410 415 CAG TGT AAT ATT GAA GAG TAT CAT GAC TTC CTG AAT AGT GGA GGT GGT 1414 Gln Cys Asn Ile Glu Glu Tyr His Asp Phe Leu Asn Ser Gly Gly Gly 420 425 430 GCC TGC CTT TTC AAC AAA CCT TCT AAG CTT CTT GAT CCT CCT GAG TGT 1462 Ala Cys Leu Phe Asn Lys Pro Ser Lys Leu Leu Asp Pro Pro Glu Cys 435 440 445 GGC AAT GGC TTC ATT GAA ACT GGA GAG GAG TGT GAT TGT GGA ACC CCG 1510 Gly Asn Gly Phe Ile Glu Thr Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Thr Pro 450 455 460 GCC GAA TGT GTC CTT GAA GGA GCA GAG TGT TGT AAG AAA TGC ACC TTG 1558 Ala Glu Cys Val Leu Glu Gly Ala Glu Cys Cys Lys Lys Cys Thr Leu 465 470 475 ACT CAA GAC TCT CAA TGC AGT GAC GGT CTT TGC TGT AAA AAG TGC AAG 1606 Thr Gln Asp Ser Gln Cys Ser Asp Gly Leu Cys Cys Lys Lys Cys Lys 480 485 490 495 TTT CAG CCT ATG GGC ACT GTG TGC CGA GAA GCA GTA AAT GAT TGT GAT 1654 Phe Gln Pro Met Gly Thr Val Cys Arg Glu Ala Val Asn Asp Cys Asp 500 505 510 ATT CGT GAA ACG TGC TCA GGA AAT TCA AGC CAG TGT GCC CCT AAT ATT 1702 Ile Arg Glu Thr Cys Ser Gly Asn Ser Ser Gln Cys Ala Pro Asn Ile 515 520 525 CAT AAA ATG GAT GGA TAT TCA TGT GAT GGT GTT CAG GGA ATT TGC TTT 1750 His Lys Met Asp Gly Tyr Ser Cys Asp Gly Val Gln Gly Ile Cys Phe 530 535 540 GGA GGA AGA TGC AAA ACC AGA GAT AGA CAA TGC AAA TAC ATT TGG GGG 1798 Gly Gly Arg Cys Lys Thr Arg Asp Arg Gln Cys Lys Tyr Ile Trp Gly 545 550 555 CAA AAG GTG ACA GCA TCA GAC AAA TAT TGC TAT GAG AAA CTG AAT ATT 1846 Gln Lys Val Thr Ala Ser Asp Lys Tyr Cys Tyr Glu Lys Leu Asn Ile 560 565 570 575 GAA GGG ACG GAG AAG GGT AAC TGT GGG AAA GAC AAA GAC ACA TGG ATA 1894 Glu Gly Thr Glu Lys Gly Asn Cys Gly Lys Asp Lys Asp Thr Trp Ile 580 585 590 CAG TGC AAC AAA CGG GAT GTG CTT TGT GGT TAC CTT TTG TGT ACC AAT 1942 Gln Cys Asn Lys Arg Asp Val Leu Cys Gly Tyr Leu Leu Cys Thr Asn 595 600 605 ATT GGC AAT ATC CCA AGG CTT GGA GAA CTC GAT GGT GAA ATC ACA TCT 1990 Ile Gly Asn Ile Pro Arg Leu Gly Glu Leu Asp Gly Glu Ile Thr Ser 610 615 620 ACT TTA GTT GTG CAG CAA GGA AGA ACA TTA AAC TGC AGT GGT GGG CAT 2038 Thr Leu Val Val Gln Gln Gly Arg Thr Leu Asn Cys Ser Gly Gly His 625 630 635 GTT AAG CTT GAA GAA GAT GTA GAT CTT GGC TAT GTG GAA GAT GGG ACA 2086 Val Lys Leu Glu Glu Asp Val Asp Leu Gly Tyr Val Glu Asp Gly Thr 640 645 650 655 CCT TGT GGT CCC CAA ATG ATG TGC TTA GAA CAC AGG TGT CTT CCT GTG 2134 Pro Cys Gly Pro Gln Met Met Cys Leu Glu His Arg Cys Leu Pro Val 660 665 670 GCT TCT TTC AAC TTT AGT ACT TGC TTG AGC AGT AAA GAA GGC ACT ATT 2182 Ala Ser Phe Asn Phe Ser Thr Cys Leu Ser Ser Lys Glu Gly Thr Ile 675 680 685 TGC TCA GGA AAT GGA GTT TGC AGT AAT GAG CTG AAG TGT GTG TGT AAC 2230 Cys Ser Gly Asn Gly Val Cys Ser Asn Glu Leu Lys Cys Val Cys Asn 690 695 700 AGA CAC TGG ATA GGT TCT GAT TGC AAC ACT TAC TTC CCT CAC AAT GAT 2278 Arg His Trp Ile Gly Ser Asp Cys Asn Thr Tyr Phe Pro His Asn Asp 705 710 715 GAT GCA AAG ACT GGT ATC ACT CTG TCT GGC AAT GGT GTT GCT GGC ACC 2326 Asp Ala Lys Thr Gly Ile Thr Leu Ser Gly Asn Gly Val Ala Gly Thr 720 725 730 735 AAT ATC ATA ATA GGC ATA ATT GCT GGC ACC ATT TTA 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【００２０】配列番号：３配列の長さ：３０５４配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：ホモサピエンス直接の起源ライブラリー名：ヒト脳ｃＤＮＡライブラリー配列の特徴特徴を表す記号：ＣＤＳ存在位置：２２４．．２７１９特徴を決定した方法：Ｅ配列 TCCTCTGCGT CCCGCCCCGG GAGTGGCTGC GAGGCTAGGC GAGCCGGGAA AGGGGGCGCC 60 GCCCAGCCCC GAGCCCCGCG CCCCGTGCCC CGAGCCCGGA GCCCCCTGCC CGCGGCGGCA 120 CCATGCGCGC CGAGCCGGCG TGACCGGCTC CGCCCGCGGC CGCCCCGCAG CTAGCCCGGC 180 GCTCTCGCCG GCCACACGGA GCGGCGCCCG GGAGCTATGA GCC ATG AAG CCG CCC 235 Met Lys Pro Pro 1 GGC AGC AGC TCG CGG CAG CCG CCC CTG GCG GGC TGC AGC CTT GCC GGC 283 Gly Ser Ser Ser Arg Gln Pro Pro Leu Ala Gly Cys Ser Leu Ala Gly 5 10 15 20 GCT TCC TGC GGC CCC CAA CGC GGC CCC GCC GGC TCG GTG CCT GCC AGC 331 Ala Ser Cys Gly Pro Gln Arg Gly Pro Ala Gly Ser Val Pro Ala Ser 25 30 35 GCC CCG GCC CGC ACG CCG CCC TGC CGC CTG CTT CTC GTC CTT CTC CTG 379 Ala Pro Ala Arg Thr Pro Pro Cys Arg Leu Leu Leu Val Leu Leu Leu 40 45 50 CTG CCT CCG CTC GCC GCC TCG TCC CGG CCC CGC GCC TGG GGG GCT GCT 427 Leu Pro Pro Leu Ala Ala Ser Ser Arg Pro Arg Ala Trp Gly Ala Ala 55 60 65 GCG CCC AGC GCT CCG CAT TGG AAT GAA ACT GCA GAA AAA AAT TTG GGA 475 Ala Pro Ser Ala Pro His Trp Asn Glu Thr Ala Glu Lys Asn Leu Gly 70 75 80 GTC CTG GCA GAT GAA GAC AAT ACA TTG CAA CAG AAT AGC AGC AGT AAT 523 Val Leu Ala Asp Glu Asp Asn Thr Leu Gln Gln Asn Ser Ser Ser Asn 85 90 95 100 ATC AGT TAC AGC AAT GCA ATG CAG AAA GAA ATC ACA CTG CCT TCA AGA 571 Ile Ser Tyr Ser Asn Ala Met Gln Lys Glu Ile Thr Leu Pro Ser Arg 105 110 115 CTC ATA TAT TAC ATC AAC CAA GAC TCG GAA AGC CCT TAT CAC GTT CTT 619 Leu Ile Tyr Tyr Ile Asn Gln Asp Ser Glu Ser Pro Tyr His Val Leu 120 125 130 GAC ACA AAG GCA AGA CAC CAG CAA AAA CAT AAT AAG GCT GTC CAT CTG 667 Asp Thr Lys Ala Arg His Gln Gln Lys His Asn Lys Ala Val His Leu 135 140 145 GCC CAG GCA AGC TTC CAG ATT GAA GCC TTC GGC TCC AAA TTC ATT CTT 715 Ala Gln Ala Ser Phe Gln Ile Glu Ala Phe Gly Ser Lys Phe Ile Leu 150 155 160 GAC CTC ATA CTG AAC AAT GGT TTG TTG TCT TCT GAT TAT GTG GAG ATT 763 Asp Leu Ile Leu Asn Asn Gly Leu Leu Ser Ser Asp Tyr Val Glu Ile 165 170 175 180 CAC TAC GAA AAT GGG AAA CCA CAG TAC TCT AAG GGT GGA GAG CAC TGT 811 His Tyr Glu Asn Gly Lys Pro Gln Tyr Ser Lys Gly Gly Glu His Cys 185 190 195 TAC TAC CAT GGA AGC ATC AGA GGC GTC AAA GAC TCC AAG GTG GCT CTG 859 Tyr Tyr His Gly Ser Ile Arg Gly Val Lys Asp Ser Lys Val Ala Leu 200 205 210 TCA ACC TGC AAT GGA CTT CAT GGC ATG TTT GAA GAT GAT ACC TTC GTG 907 Ser Thr Cys Asn Gly Leu His Gly Met Phe Glu Asp Asp Thr Phe Val 215 220 225 TAT ATG ATA GAG CCA CTA GAG CTG GTT CAT GAT GAG AAA AGC ACA GGT 955 Tyr Met Ile Glu Pro Leu Glu Leu Val His Asp Glu Lys Ser Thr Gly 230 235 240 CGA CCA CAT ATA ATC CAG AAA ACC TTG GCA GGA CAG TAT TCT AAG CAA 1003 Arg Pro His Ile Ile Gln Lys Thr Leu Ala Gly Gln Tyr Ser Lys Gln 245 250 255 260 ATG AAG AAT CTC ACT ATG GAA AGA GGT GAC CAG TGG CCC TTT CTC TCT 1051 Met Lys Asn Leu Thr Met Glu Arg Gly Asp Gln Trp Pro Phe Leu Ser 265 270 275 GAA TTA CAG TGG TTG AAA AGA AGG AAG AGA GCA GTG AAT CCA TCA CGT 1099 Glu Leu Gln Trp Leu Lys Arg Arg Lys Arg Ala Val Asn Pro Ser Arg 280 285 290 GGT ATA TTT GAA GAA ATG AAA TAT TTG GAA CTT ATG ATT GTT AAT GAT 1147 Gly Ile Phe Glu Glu Met Lys Tyr Leu Glu Leu Met Ile Val Asn Asp 295 300 305 CAC AAA ACG TAT AAG AAG CAT CGC TCT TCT CAT GCA CAT ACC AAC AAC 1195 His Lys Thr Tyr Lys Lys His Arg Ser Ser His Ala His Thr Asn Asn 310 315 320 TTT GCA AAG TCC GTG GTC AAC CTT GTG GAT TCT ATT TAC AAG GAG CAG 1243 Phe Ala Lys Ser Val Val Asn Leu Val Asp Ser Ile Tyr Lys Glu Gln 325 330 335 340 CTC AAC ACC AGG GTT GTC CTG GTG GCT GTA GAG ACC TGG ACT GAG AAG 1291 Leu Asn Thr Arg Val Val Leu Val Ala Val Glu Thr Trp Thr Glu Lys 345 350 355 GAT CAG ATT GAC ATC ACC ACC AAC CCT GTG CAG ATG CTC CAT GAG TTC 1339 Asp Gln Ile Asp Ile Thr Thr Asn Pro Val Gln Met Leu His Glu Phe 360 365 370 TCA AAA TAC CGG CAG CGC ATT AAG CAG CAT GCT GAT GCT GTG CAC CTC 1387 Ser Lys Tyr Arg Gln Arg Ile Lys Gln His Ala Asp Ala Val His Leu 375 380 385 ATC TCG CGG GTG ACA TTT CAC TAT AAG AGA AGC AGT CTG AGT TAC TTT 1435 Ile Ser Arg Val Thr Phe His Tyr Lys Arg Ser Ser Leu Ser Tyr Phe 390 395 400 GGA GGT GTC TGT TCT CGC ACA AGA GGA GTT GGT GTG AAT GAG TAT GGT 1483 Gly Gly Val Cys Ser Arg Thr Arg Gly Val Gly Val Asn Glu Tyr Gly 405 410 415 420 CTT CCA ATG GCA GTG GCA CAA GTA TTA TCG CAG AGC CTG GCT CAA AAC 1531 Leu Pro Met Ala Val Ala Gln Val Leu Ser Gln Ser Leu Ala Gln Asn 425 430 435 CTT GGA ATC CAA TGG GAA CCT TCT AGC AGA AAG CCA AAA TGT GAC TGC 1579 Leu Gly Ile Gln Trp Glu Pro Ser Ser Arg Lys Pro Lys Cys Asp Cys 440 445 450 ACA GAA TCC TGG GGT GGC TGC ATC ATG GAG GAA ACA GGG GTG TCC CAT 1627 Thr Glu Ser Trp Gly Gly Cys Ile Met Glu Glu Thr Gly Val Ser His 455 460 465 TCT CGA AAA TTT TCA AAG TGC AGC ATT TTG GAG TAT AGA GAC TTT TTA 1675 Ser Arg Lys Phe Ser Lys Cys Ser Ile Leu Glu Tyr Arg Asp Phe Leu 470 475 480 CAG AGA GGA GGT GGA GCC TGC CTT TTC AAC AGG CCA ACA AAG CTA TTT 1723 Gln Arg Gly Gly Gly Ala Cys Leu Phe Asn Arg Pro Thr Lys Leu Phe 485 490 495 500 GAG CCC ACG GAA TGT GGA AAT GGA TAC GTG GAA GCT GGG GAG GAG TGT 1771 Glu Pro Thr Glu Cys Gly Asn Gly Tyr Val Glu Ala Gly Glu Glu Cys 505 510 515 GAT TGT GGT TTT CAT GTG GAA TGC TAT GGA TTA TGC TGT AAG AAA TGT 1819 Asp Cys Gly Phe His Val Glu Cys Tyr Gly Leu Cys Cys Lys Lys Cys 520 525 530 TCC CTC TCC AAC GGG GCT CAC TGC AGC GAC GGG CCC TGC TGT AAC AAT 1867 Ser Leu Ser Asn Gly Ala His Cys Ser Asp Gly Pro Cys Cys Asn Asn 535 540 545 ACC TCA TGT CTT TTT CAG CCA CGA GGG TAT GAA TGC CGG GAT GCT GTG 1915 Thr Ser Cys Leu Phe Gln Pro Arg Gly Tyr Glu Cys Arg Asp Ala Val 550 555 560 AAC GAG TGT GAT ATT ACT GAA TAT TGT ACT GGA GAC TCT GGT CAG TGC 1963 Asn Glu Cys Asp Ile Thr Glu Tyr Cys Thr Gly Asp Ser Gly Gln Cys 565 570 575 580 CCA CCA AAT CTT CAT AAG CAA GAC GGA TAT GCA TGC AAT CAA AAT CAG 2011 Pro Pro Asn Leu His Lys Gln Asp Gly Tyr Ala Cys Asn Gln Asn Gln 585 590 595 GGC CGC TGC TAC AAT GGC GAG TGC AAG ACC AGA GAC AAC CAG TGT CAG 2059 Gly Arg Cys Tyr Asn Gly Glu Cys Lys Thr Arg Asp Asn Gln Cys Gln 600 605 610 TAC ATC TGG GGA ACA AAG GCT GCA GGG TCT GAC AAG TTC TGC TAT GAA 2107 Tyr Ile Trp Gly Thr Lys Ala Ala Gly Ser Asp Lys Phe Cys Tyr Glu 615 620 625 AAG CTG AAT ACA GAA GGC ACT GAG AAG GGA AAC TGC GGG AAG GAT GGA 2155 Lys Leu Asn Thr Glu Gly Thr Glu Lys Gly Asn Cys Gly Lys Asp Gly 630 635 640 GAC CGG TGG ATT CAG TGC AGC AAA CAT GAT GTG TTC TGT GGA TTC TTA 2203 Asp Arg Trp Ile Gln Cys Ser Lys His Asp Val Phe Cys Gly Phe Leu 645 650 655 660 CTC TGT ACC AAT CTT ACT CGA GCT CCA CGT ATT GGT CAA CTT CAG GGT 2251 Leu Cys Thr Asn Leu Thr Arg Ala Pro Arg Ile Gly Gln Leu Gln Gly 665 670 675 GAG ATC ATT CCA ACT TCC TTC TAC CAT CAA GGC CGG GTG ATT GAC TGC 2299 Glu Ile Ile Pro Thr Ser Phe Tyr His Gln Gly Arg Val Ile Asp Cys 680 685 690 AGT GGT GCC CAT GTA GTT TTA GAT GAT GAT ACG GAT GTG GGC TAT GTA 2347 Ser Gly Ala His Val Val Leu Asp Asp Asp Thr Asp Val Gly Tyr Val 695 700 705 GAA GAT GGA ACG CCA TGT GGC CCG TCT ATG ATG TGT TTA GAT CGG AAG 2395 Glu Asp Gly Thr Pro Cys Gly Pro Ser Met Met Cys Leu Asp Arg Lys 710 715 720 TGC CTA CAA ATT CAA GCC CTA AAT ATG AGC AGC TGT CCA CTC GAT TCC 2443 Cys Leu Gln Ile Gln Ala Leu Asn Met Ser Ser Cys Pro Leu Asp Ser 725 730 735 740 AAG GGT AAA GTC TGT TCG GGC CAT GGG GTG TGT AGT AAT GAA GCC ACC 2491 Lys Gly Lys Val Cys Ser Gly His Gly Val Cys Ser Asn Glu Ala Thr 745 750 755 TGC ATT TGT GAT TTC ACC TGG GCA GGG ACA GAT TGC AGT ATC CGG GAT 2539 Cys Ile Cys Asp Phe Thr Trp Ala Gly Thr Asp Cys Ser Ile Arg Asp 760 765 770 CCA GTT AGG AAC CTT CAC CCC CCC AAG GAT GAA GGA CCC AAG GGT CCT 2587 Pro Val Arg Asn Leu His Pro Pro Lys Asp Glu Gly Pro Lys Gly Pro 775 780 785 AGT GCC ACC AAT CTC ATA ATA GGC TCC ATC GCT GGT GCC ATC CTG GTA 2635 Ser Ala Thr Asn Leu Ile Ile Gly Ser Ile Ala Gly Ala Ile Leu Val 790 795 800 GCA GCT ATT GTC CTT GGG GGC ACA GGC TGG GGA TTT AAA AAT GTC AAG 2683 Ala Ala Ile Val Leu Gly Gly Thr Gly Trp Gly Phe Lys Asn Val Lys 805 810 815 820 AAG AGA AGG TTC GAT CCT ACT CAG CAA GGC CCC ATC TGA ATCAGCTGCG CT 2734 Lys Arg Arg Phe Asp Pro Thr Gln Gln Gly Pro Ile Stop 825 830 GGATGGACAC CGCCTTGCAC TGTTGGATTC TGGGTATGAC ATACTCGCAG CAGTGTTACT 2794 GGAACTATTA AGTTTGTAAA CAAAACCTTT GGGTGGTAAT GACTACGGAG CTAAAGTTGG 2854 GGTGACAAGG ATGGGGTAAA AGAAAACTGT CTCTTTTGGA AATAATGTCA AAGAACACCT 2914 TTCACCACCT GTCAGTAAAC GGGGGAGGGG GCAAAAGACC ATGCTATAAA AAGAACTGTT 2974 CCAGAATCTT TTTTTTTCCC TAATGGACGA AGGAACAACA CACACACAAA AATTAAATGC 3034 AATAAAGGAA TCATTAAAAA 3054

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１に記載のＤＮＡによりコードさ
れるＭＤＣ２α蛋白質。
【請求項２】配列番号１に記載のＭＤＣ２α蛋白質をコ
ードするＤＮＡ。
【請求項３】請求項２に記載のＤＮＡを含むプラスミ
ド。
【請求項４】請求項３に記載のプラスミドを保持する形
質転換体。
【請求項５】請求項４に記載の形質転換体を培養し、発
現産物を回収することからなる請求項１に記載のＭＤＣ
２α蛋白質の製造方法。
【請求項６】請求項１に記載のＭＤＣ２α蛋白質と結合
する抗体。
【請求項７】請求項２に記載のＤＮＡ配列の一部を含む
ものからなるプライマーまたはプローブ。
【請求項８】請求項７記載のプライマ−またはプロ−ブ
を被検ＤＮＡとハイブリダイズさせることからなるＭＤ
Ｃ２α遺伝子解析方法。
【請求項９】配列番号２に記載のＤＮＡによりコードさ
れるＭＤＣ２β蛋白質。
【請求項１０】配列番号２に記載のＭＤＣ２β蛋白質を
コードするＤＮＡ。
【請求項１１】請求項１０に記載のＤＮＡを含むプラス
ミド。
【請求項１２】請求項１１に記載のプラスミドを保持す
る形質転換体。
【請求項１３】請求項１２に記載の形質転換体を培養
し、発現産物を回収することからなる請求項９に記載の
ＭＤＣ２β蛋白質の製造方法。
【請求項１４】請求項９に記載のＭＤＣ２β蛋白質と結
合する抗体。
【請求項１５】請求項１０に記載のＤＮＡ配列の一部を
含むものからなるプライマーまたはプローブ。
【請求項１６】請求項１５記載のプライマ−またはプロ
−ブを被検ＤＮＡとハイブリダイズさせることからなる
ＭＤＣ２β遺伝子解析方法。
【請求項１７】配列番号３に記載のＤＮＡによりコード
されるＭＤＣ３蛋白質。
【請求項１８】配列番号３に記載のＭＤＣ３蛋白質をコ
ードするＤＮＡ。
【請求項１９】請求項１８に記載のＤＮＡを含むプラス
ミド。
【請求項２０】請求項１９に記載のプラスミドを保持す
る形質転換体。
【請求項２１】請求項２０に記載の形質転換体を培養
し、発現産物を回収することからなる請求項１７に記載
のＭＤＣ３蛋白質の製造方法。
【請求項２２】請求項１７に記載のＭＤＣ３蛋白質と結
合する抗体。
【請求項２３】請求項１８に記載のＤＮＡ配列の一部を
含むものからなるプライマーまたはプローブ。
【請求項２４】請求項２３記載のプライマ−またはプロ
−ブを被検ＤＮＡとハイブリダイズさせることからなる
ＭＤＣ３遺伝子解析方法。