JP2002526075A5

JP2002526075A5 -

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Publication number: JP2002526075A5
Application number: JP2000574252A
Authority: JP
Filing date: 1999-09-15
Publication date: 2009-12-03
Anticipated expiration: 2019-09-15

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】（ａ）配列番号：１に示すアミノ酸残基１〜３２３の配列を含むＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなり；該ＤＮＡによりコードされるポリペプチドが哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させる単離された核酸分子。
【請求項２】配列番号：２に示す４０〜１０１１のヌクレオチド配列を含む請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項３】配列番号：２に示すヌクレオチド配列を含む請求項１に記載の単離された核酸分子。
【請求項４】ＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡを含んでなり、配列番号：２に示す４０〜１０１１のヌクレオチドを含む核酸の相補鎖にハイブリッド形成し；コードされたＵＣＰ４ポリペプチドが哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させる単離された核酸分子。
【請求項５】（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３１３４のｃＤＮＡ（ＤＮＡ７７５６８−１６２６）にコードされるのと同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなり；該ＤＮＡによりコードされるポリペプチドが哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させる単離された核酸分子。
【請求項６】（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３１３４のｃＤＮＡ（ＤＮＡ７７５６８−１６２６）にコードされるのと同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む請求項５に記載の単離された核酸分子。
【請求項７】（ａ）配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡであって、該ポリペプチドが哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させるＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項８】（ａ）配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基の配列を含むポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる請求項７に記載の単離された核酸分子。
【請求項９】請求項１に記載の核酸を含んでなるベクター。
【請求項１０】当該ベクターで形質転換された宿主細胞に認識されるコントロール配列に作用可能に結合した請求項９に記載のベクター。
【請求項１１】請求項１０に記載のベクターを含んでなる宿主細胞。
【請求項１２】前記細胞がＣＨＯ細胞である請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１３】前記細胞が大腸菌細胞である請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１４】前記細胞が酵母菌細胞である請求項１１に記載の宿主細胞。
【請求項１５】請求項１１に記載の宿主細胞を、前記ＵＣＰ４ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、細胞培地から前記ＵＣＰ４ポリペプチドを回収することを含んでなるＵＣＰ４ポリペプチドの製造方法。
【請求項１６】請求項１に記載のＤＮＡによってコードされる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項１７】配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基の配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドを含んでなり；該ポリペプチドが哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項１８】配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基を含んでなる請求項１７に記載の単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項１９】配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基の配列を含んでなる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項２０】ＡＴＣＣ寄託番号２０３１３４として寄託されたベクターのｃＤＮＡ挿入物（ＤＮＡ７７５６８−１６２６）にコードされる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項２１】（ｉ）試験ＤＮＡ分子を、緊縮性条件下で、（ａ）配列番号：１に示す１〜３２３のアミノ酸残基の配列を含むＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖にハイブリッド形成させ、前記試験ＤＮＡ分子が（ａ）又は（ｂ）と少なくとも９０％の配列同一性を有する場合、（ｉｉ）前記試験ＤＮＡ分子を含む宿主細胞を前記ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、（ｉｉｉ）前記ポリペプチドを細胞培地から回収することにより製造され；哺乳動物におけるミトコンドリア膜電位を変調させる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項２２】配列番号：１に示すアミノ酸残基１〜３２３からなる単離されたＵＣＰ４ポリペプチド。
【請求項２３】異種アミノ酸配列に融合した請求項１６ないし２２の何れか一項に記載のポリペプチドを含んでなるキメラ分子。
【請求項２４】前記異種アミノ酸配列がエピトープタグ配列である請求項２３に記載のキメラ分子。
【請求項２５】前記異種アミノ酸配列が免疫グロブリンのＦｃ領域である請求項２３に記載のキメラ分子。
【請求項２６】請求項１６ないし２２の何れか一項に記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体。
【請求項２７】前記抗体がモノクローナル抗体である請求項２６に記載の抗体。
【請求項２８】請求項９に記載のベクター、または、請求項１ないし８の何れか一項に記載の核酸に対するアンチセンスを含む、哺乳動物における代謝速度を変調させるための薬剤。
【請求項２９】前記ベクターが肥満哺乳動物における代謝速度の増加を刺激する請求項２８に記載の薬剤。
【請求項３０】請求項１ないし８の何れか一項に記載の核酸分子または請求項１６ないし２２の何れか一項に記載のポリペプチドを含む哺乳動物細胞又は組織試料を候補分子と接触させ、続いて前記試料における前記核酸分子またはポリペプチドの発現を分析することを含んでなる、前記核酸分子またはポリペプチドの発現を促進又はアップレギュレートする分子を同定するためのスクリーニングアッセイの実施方法。
【請求項３１】前記試料におけるミトコンドリア膜電位を分析することをさらに含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】前記ポリペプチドが、配列番号：１に示すアミノ酸残基１〜３２３を含むポリペプチドである請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】前記試料がヒト脳組織を含む請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】前記候補分子が、合成有機又は無機化合物を含む小分子である請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】請求項１ないし８の何れか一項に記載の核酸分子または請求項１６ないし２２の何れか一項に記載のポリペプチドを含む哺乳動物細胞又は組織試料を候補分子と接触させ、続いて前記試料における前記核酸分子またはポリペプチドの発現を分析することを含んでなる、前記核酸分子またはポリペプチドの発現を低下又はダウンレギュレートする分子を同定するためのスクリーニングアッセイの実施方法。
【請求項３６】前記試料におけるミトコンドリア膜電位を分析することをさらに含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】前記ポリペプチドが、配列番号：１に示すアミノ酸残基１〜３２３を含むポリペプチドである請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】前記試料がヒト脳組織を含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】哺乳動物細胞又は組織試料をＤＮＡプローブと接触させ、続いて前記試料における請求項１６ないし２２の何れか一項に記載のポリペプチドのｍＲＮＡ転写物の発現を分析することを含んでなる、哺乳動物細胞又は組織試料中の前記ポリペプチドの発現を検出する方法。
【請求項４０】前記試料がヒト脳組織である請求項３９に記載の方法。

（発明の概要）
本出願で「ＵＣＰ４」と命名される新規なポリペプチドをコードし、幾つか公知の脱共役タンパク質と所定の相同性を持つｃＤＮＡクローン（ＤＮＡ７７５６８−１６２６）が同定された。
一実施態様では、本発明はＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡを含む単離された核酸分子を提供する。
一態様では、単離された核酸分子は、（ａ）Ｆｉｇ１（配列番号：１）のアミノ酸残基約１〜約３２３の配列を含むＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも約８０％配列同一性、好ましくは少なくとも約８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を有するＤＮＡを含む。
他の態様では、本発明は、Ｆｉｇ２（配列番号：２）の約４０〜約１０１１のヌクレオチドを含む核酸の相補鎖にハイブリッド形成するＤＮＡを含むＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡ単離された核酸分子に関する。好ましくは、ハイブリッド形成は緊縮性ハイブリッド形成及び洗浄条件下で起こる。

さらなる態様では、本発明は、（ａ）ＡＴＣＣ寄託番号２０３１３４のｃＤＮＡにコードされるのと同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖に対して少なくとも約８０％配列同一性、好ましくは少なくとも約８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を有するＤＮＡを含んでなる単離された核酸分子に関する。好ましい実施態様では、核酸はＡＴＣＣ寄託番号２０３１３４のｃＤＮＡにコードされるのと同じ成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子を含む。
またさらなる態様では、本発明は、（ａ）Ｆｉｇ１（配列番号：１）の約１〜約３２３のアミノ酸残基の配列と少なくとも約８０％配列同一性、好ましくは少なくとも約８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。
他の態様では、本発明は、Ｆｉｇ１（配列番号：１）の約１〜３２３の残基のアミノ酸配列と比較したとき少なくとも約８０％ポジティブ、好ましくは少なくとも約８５％ポジティブ、より好ましくは少なくとも約９０％ポジティブ、最も好ましくは少なくとも約９５％ポジティブのスコアをつけられるポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖を含んでなる単離された核酸分子に関する。

さらなる態様では、本発明は、Ｆｉｇ１（配列番号：１）の残基１〜３２３のアミノ酸配列と比較したとき少なくとも約８０％ポジティブ、好ましくは少なくとも約８５％ポジティブ、より好ましくは少なくとも約９０％ポジティブ、最も好ましくは少なくとも約９５％ポジティブのスコアをつけられるアミノ酸配列を含んでなる単離されたＵＣＰ４ポリペプチドに関する。
さらに他の態様では、本発明は、Ｆｉｇ１（配列番号：１）のアミノ酸残基１〜約３２３の配列、又は抗-ＵＣＰ４抗体に対する結合部位を提供するのに十分なその断片を含んでなる単離されたＵＣＰ４ポリペプチドに関する。好ましくは、ＵＣＰ４断片は天然ＵＣＰ４ポリペプチドの生物学的活性の少なくとも１つを保持している。
またさらなる態様では、本発明は、（ｉ）試験ＤＮＡ分子を、緊縮性条件下で、（ａ）Ｆｉｇ１（配列番号：１）の約１〜約３２３のアミノ酸残基の配列含むＵＣＰ４ポリペプチドをコードするＤＮＡ、又は（ｂ）（ａ）のＤＮＡ分子の相補鎖にハイブリッド形成させ、前記試験ＤＮＡ分子が（ａ）又は（ｂ）と少なくとも約８０％配列同一性、好ましくは少なくとも約８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも約９０％の配列同一性、最も好ましくは少なくとも約９５％の配列同一性を有する場合、（ｉｉ）前記ＤＮＡ分子を含む宿主細胞を当該ポリペプチドの発現に適した条件下で培養し、（ｉｉｉ）当該ポリペプチドを細胞培地から回収することにより製造されるポリペプチドを提供する。
他の実施態様では、本発明は、異種ポリペプチド又はアミノ酸配列に融合したＵＣＰ４ポリペプチドを含んでなるキメラ分子を提供する。このようなキメラ分子の例は、エピトープタグ配列又は免疫グロブリンのＦｃ領域に融合したＵＣＰ４ポリペプチドを含む。

Ｅ．ＵＣＰ４の用途
ＵＣＰ４をコードする核酸配列（又はそれらの相補鎖）は、ハイブリッド形成プローブとしての使用を含む分子生物学の分野において、染色体及び遺伝子マッピングにおいて、及びアンチセンスＲＮＡ及びＤＮＡの生成において種々の用途を有している。また、ＵＣＰ４核酸は、ここに記載される組み換え技術によるＵＣＰ４ポリペプチドの調製にも有用であろう。
全長天然配列ＵＣＰ４遺伝子（実施例１に記載；配列番号：２）、又はその断片は、その他のものの中で、全長ＵＣＰ４遺伝子の単離又はＦｉｇ１（配列番号：１）に開示されたＵＣＰ４配列に対して所望の配列同一性を持つ更に他の遺伝子（例えば、ＵＣＰ４の天然発生変異体又は他の種からのＵＣＰ４をコードするもの）の単離のためのｃＤＮＡライブラリ用のハイブリッド形成プローブとして使用できる。
場合によっては、プローブの長さは約２０〜約８０塩基である。ハイブリッド形成プローブは、Ｆｉｇ２のヌクレオチド配列から、又は天然配列ＵＣＰ４コード化ＤＮＡのプロモーター、エンハンサー成分及びイントロンを含むゲノム配列から誘導され得る。例えば、スクリーニング法は、ＵＣＰ４遺伝子のコード化領域を周知のＤＮＡ配列を用いて単離して約４０塩基の選択されたプローブを合成することを含む。ハイブリッド形成プローブは、^３２Ｐ又は^３５Ｓ等の放射性ヌクレオチド、又はアビジン／ビオチン結合系を介してプローブに結合したアルカリホスファターゼ等の酵素標識を含む種々の標識で標識されうる。本発明のＵＣＰ４遺伝子に相補的な配列を有する標識されたプローブは、ヒトｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｍＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、そのライブラリーの何れのメンバーがプローブにハイブッド形成するかを決定するのに使用できる。ハイブリッド形成技術は、以下の実施例において更に詳細に記載する。