JPH111495A - アマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方法 - Google Patents
アマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方法Info
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- JPH111495A JPH111495A JP9168169A JP16816997A JPH111495A JP H111495 A JPH111495 A JP H111495A JP 9168169 A JP9168169 A JP 9168169A JP 16816997 A JP16816997 A JP 16816997A JP H111495 A JPH111495 A JP H111495A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 海苔などに代表されるアマノリ属海藻から血
糖降下能を有する新規なポリペプチドを製造する。 【解決手段】 アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを水を用いて抽出
し、この抽出物を分画精製してポリペプチドを得る。
糖降下能を有する新規なポリペプチドを製造する。 【解決手段】 アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを水を用いて抽出
し、この抽出物を分画精製してポリペプチドを得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、例えば海苔などに
代表されるアマノリ属海藻から血糖降下能を有する新規
なポリペプチドの製造方法に関するものである。
代表されるアマノリ属海藻から血糖降下能を有する新規
なポリペプチドの製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】アマノリ属海藻は世界的に広範囲に繁殖
しており、我が国においても養殖スサビノリが食用海苔
として大量に消費されている。
しており、我が国においても養殖スサビノリが食用海苔
として大量に消費されている。
【０００３】ところが、近年、養殖技術の向上などに伴
って海苔の供給が過剰となり、他の用途への開発が進め
られている。
って海苔の供給が過剰となり、他の用途への開発が進め
られている。
【０００４】一方、従来からアマノリ属海藻は健康食品
であると云われ、その理由の一つとして血糖降下能を有
することが指摘されている。
であると云われ、その理由の一つとして血糖降下能を有
することが指摘されている。
【０００５】しかしながら、アマノリ属海藻が有する血
糖降下能は、一般に糖尿病の治療薬として用いられてい
るインシュリンなどのように強力なものではなく、全体
に対する含有成分の割合も低い。
糖降下能は、一般に糖尿病の治療薬として用いられてい
るインシュリンなどのように強力なものではなく、全体
に対する含有成分の割合も低い。
【０００６】そのため、アマノリ属海藻の葉状体をその
まま摂取して血糖降下効果を挙げるには、きわめて多量
の葉状体を食べる必要があり、実際には不可能である。
まま摂取して血糖降下効果を挙げるには、きわめて多量
の葉状体を食べる必要があり、実際には不可能である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明は前記事情に鑑
みてなされたものであって、アマノリ属海藻の有効利用
を図るとともに、アマノリ属海藻から血糖効果能を有す
るポリペプチドを得ることを課題とするものである。
みてなされたものであって、アマノリ属海藻の有効利用
を図るとともに、アマノリ属海藻から血糖効果能を有す
るポリペプチドを得ることを課題とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するた
め、本発明は、アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを水もしくは弱アル
カリ性水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物を分画精
製してポリペプチドを得ることを特徴とする。
め、本発明は、アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを水もしくは弱アル
カリ性水溶液を用いて抽出し、得られた抽出物を分画精
製してポリペプチドを得ることを特徴とする。
【０００９】また、前記解決手段において、抽出物を分
画精製する前に有機溶剤を用いて抽出物中に含まれる色
素を除去することにより脱色度の高いポリペプチドを得
ることができる。
画精製する前に有機溶剤を用いて抽出物中に含まれる色
素を除去することにより脱色度の高いポリペプチドを得
ることができる。
【００１０】
【発明の実施の形態】次に本発明についての好ましい実
施の形態の一つを図１を参照して説明する。
施の形態の一つを図１を参照して説明する。
【００１１】初めに原料である乾燥した海苔の粉末（１
０〜５０メッシュ）２０ｇを水もしくは稀アルカリ液
０．４Ｌの割合に加えて攪き混ぜ室温にて２４時間放置
し海苔の粉末を膨潤させる。
０〜５０メッシュ）２０ｇを水もしくは稀アルカリ液
０．４Ｌの割合に加えて攪き混ぜ室温にて２４時間放置
し海苔の粉末を膨潤させる。
【００１２】次いで、遠心分離機を用いて分離操作を行
い（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０分）、沈殿と上澄液と
を分離する。
い（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０分）、沈殿と上澄液と
を分離する。
【００１３】得られた上澄液に酸を添加してｐＨ１．５
に調整するとともにアルカリ土類金属塩の水溶液を３％
になるように加えて室温で一晩放置して抽出を行い、更
に遠心分離機を用いて分離操作を行い（３０００ｒ．
ｐ．ｍ．，２０分）沈殿と上澄液とに分離する。
に調整するとともにアルカリ土類金属塩の水溶液を３％
になるように加えて室温で一晩放置して抽出を行い、更
に遠心分離機を用いて分離操作を行い（３０００ｒ．
ｐ．ｍ．，２０分）沈殿と上澄液とに分離する。
【００１４】一方、得られた金属塩の沈殿は稀アルカリ
液２００ｍｌを用いて数回に分けて洗浄し、これを遠心
分離機を用いて分離する（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０
分）。得られた上澄液（洗浄液）は前記抽出操作に戻
す。
液２００ｍｌを用いて数回に分けて洗浄し、これを遠心
分離機を用いて分離する（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０
分）。得られた上澄液（洗浄液）は前記抽出操作に戻
す。
【００１５】そして、前記抽出後の金属塩の沈殿を、例
えばアセトンやアルコールなどの有機溶剤で洗浄して脱
色し、１％炭酸塩溶液３０ｍｌを加えて沈殿を溶解し、
必要であれば超音波による処理を施した後、遠心分離機
を用いて分別し（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０分）、得
られた上澄液に稀酸を加えて中和し、ロータリーエバポ
レータ（６０℃）を用いて１６０ｍｌになるまで濃縮す
る。
えばアセトンやアルコールなどの有機溶剤で洗浄して脱
色し、１％炭酸塩溶液３０ｍｌを加えて沈殿を溶解し、
必要であれば超音波による処理を施した後、遠心分離機
を用いて分別し（３０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０分）、得
られた上澄液に稀酸を加えて中和し、ロータリーエバポ
レータ（６０℃）を用いて１６０ｍｌになるまで濃縮す
る。
【００１６】次に、前記濃縮物を透析膜チュープ中で流
水に対して塩が流出しなくなるまで透析して脱塩濃縮物
を得る。
水に対して塩が流出しなくなるまで透析して脱塩濃縮物
を得る。
【００１７】前記脱塩酸濃縮物をロータリーエバポレー
タ（６０℃）を用いて７５ｍｌになるまで濃縮し、これ
を適当なサイズのカラムクロマトグラフィーを用いて分
画した。
タ（６０℃）を用いて７５ｍｌになるまで濃縮し、これ
を適当なサイズのカラムクロマトグラフィーを用いて分
画した。
【００１８】図２はカラムクロマトグラフィー（商品
名：セファデックス）を用いて分画した場合の１例を示
すものであり、４つの成分（Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３，Ｆ４）
が確認された。この内、本発明では後述の通りＦ３の成
分が有効であり、このＦ３成分を集めて精製して目的の
ポリペプチド（以下『ポリペプチドＦ３』という）を得
た。
名：セファデックス）を用いて分画した場合の１例を示
すものであり、４つの成分（Ｆ１，Ｆ２，Ｆ３，Ｆ４）
が確認された。この内、本発明では後述の通りＦ３の成
分が有効であり、このＦ３成分を集めて精製して目的の
ポリペプチド（以下『ポリペプチドＦ３』という）を得
た。
【００１９】精製手段としては、例えば脱色剤により大
部分の着色物を除いた後、遠心分離して僅かに存在する
不溶性物を除き、得られたほぼ２０ｍｌの溶液に１０倍
以上の容積の有機溶剤を加え、生じさせた沈殿を再び遠
心分離して白色の粉末であるポリペプチド約１００ｍｇ
を得た。
部分の着色物を除いた後、遠心分離して僅かに存在する
不溶性物を除き、得られたほぼ２０ｍｌの溶液に１０倍
以上の容積の有機溶剤を加え、生じさせた沈殿を再び遠
心分離して白色の粉末であるポリペプチド約１００ｍｇ
を得た。
【００２０】次に、前記の実施の形態によって得られた
ポリペプチドの血糖降下能について説明する。
ポリペプチドの血糖降下能について説明する。
【００２１】正常マウスとして５周令のｄｄＹ系雄性マ
ウスを市販の飼料（オリエンタル固形飼料ＭＦ）で飼育
したものを用い、試験マウス（人為糖尿病マウス）とし
ては前記正常マウスに体重１ｋｇに対して７５ｍｇの割
合でアロキサンを０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．２）に
溶かして投与し、３日後に高血糖になっていることを確
認し、前記正常マウスと同様に飼育し、更に１ヶ月後に
自由摂取状態のまま早期採血により１８０ｍｇ／ｄｌ以
上の血糖値を示すものを選んで使用した。
ウスを市販の飼料（オリエンタル固形飼料ＭＦ）で飼育
したものを用い、試験マウス（人為糖尿病マウス）とし
ては前記正常マウスに体重１ｋｇに対して７５ｍｇの割
合でアロキサンを０．２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．２）に
溶かして投与し、３日後に高血糖になっていることを確
認し、前記正常マウスと同様に飼育し、更に１ヶ月後に
自由摂取状態のまま早期採血により１８０ｍｇ／ｄｌ以
上の血糖値を示すものを選んで使用した。
【００２２】尚、採血はマウスの興奮を避けるため予め
ネンブタール注射による麻酔下で行った。また、血糖値
の定量は、採血した血液を常法に従って処理を行い、グ
ルコース酸化酵素であるペルオキシダーゼ法により行っ
た。
ネンブタール注射による麻酔下で行った。また、血糖値
の定量は、採血した血液を常法に従って処理を行い、グ
ルコース酸化酵素であるペルオキシダーゼ法により行っ
た。
【００２３】グルコース負荷試験は、グルコース負荷以
前１７時間に亘って給餌を中止して水だけを与え、翌日
午前９時以降に採血した後、グルコース溶液（２００ｍ
ｇ／ｍｌ）をマウスの体重１０ｇ当り０．１ｍｌ量（グ
ルコース１００ｍｇ／５０ｋｇ体重負荷に相当）を経口
投与した。
前１７時間に亘って給餌を中止して水だけを与え、翌日
午前９時以降に採血した後、グルコース溶液（２００ｍ
ｇ／ｍｌ）をマウスの体重１０ｇ当り０．１ｍｌ量（グ
ルコース１００ｍｇ／５０ｋｇ体重負荷に相当）を経口
投与した。
【００２４】その後３０分，６０分，１２０分の間隔を
有して眼窩より採血して血糖値測定を行った。また、被
検物質（ポリペプチドＦ３）を腹腔投与する場合にはグ
ルコース負荷の直前に注射法により投与し、経口投与の
場合には負荷するグルコース溶液中に一緒に入れて投与
した。
有して眼窩より採血して血糖値測定を行った。また、被
検物質（ポリペプチドＦ３）を腹腔投与する場合にはグ
ルコース負荷の直前に注射法により投与し、経口投与の
場合には負荷するグルコース溶液中に一緒に入れて投与
した。
【００２５】次に、試験マウスと正常マウスについての
グルコース負荷後のポリペプチドＦ３投与についての経
時変化を図３乃至図６に示す。
グルコース負荷後のポリペプチドＦ３投与についての経
時変化を図３乃至図６に示す。
【００２６】尚、図３は試験マウスに対してポリペプチ
ドＦ３を経口投与した場合の血糖値の経時的変化を投与
しない比較例とともに示したもの、図４は正常マウスに
対してポリペプチドＦ３を経口投与した場合の血糖値の
経時的変化を投与しない比較例とともに示したもの、図
５は試験マウスに対してポリペプチドＦ３を腹腔内注射
によって投与した場合の血糖値の経時的変化を投与しな
い比較例とともに示したもの、図６は正常マウスに対し
てポリペプチドＦ３を腹腔内注射によって投与した場合
の血糖値の経時的変化を投与しない比較例とともに示し
たものである。
ドＦ３を経口投与した場合の血糖値の経時的変化を投与
しない比較例とともに示したもの、図４は正常マウスに
対してポリペプチドＦ３を経口投与した場合の血糖値の
経時的変化を投与しない比較例とともに示したもの、図
５は試験マウスに対してポリペプチドＦ３を腹腔内注射
によって投与した場合の血糖値の経時的変化を投与しな
い比較例とともに示したもの、図６は正常マウスに対し
てポリペプチドＦ３を腹腔内注射によって投与した場合
の血糖値の経時的変化を投与しない比較例とともに示し
たものである。
【００２７】図２乃至図５から本発明によるポリペプチ
ドＦ３を正常マウスに経口または腹腔投与した場合には
血糖降下作用は殆ど見受けられないが、人為的に糖尿病
とした試験マウスに投与した場合には著しい血糖降下作
用が確認された。
ドＦ３を正常マウスに経口または腹腔投与した場合には
血糖降下作用は殆ど見受けられないが、人為的に糖尿病
とした試験マウスに投与した場合には著しい血糖降下作
用が確認された。
【００２８】また、前記ポリペプチドＦ３を核磁気共鳴
を用いて解析したところ、プロトンＮＭＲスペクトル・
パターンにおいて、１．１６８〜１．２８４，１．９０
６，２．１２０，３．３７９〜３．６８１ＰＰＭのシグ
ナル郡が確認された。従って、ポリペプチドＦ３がアミ
ノ酸の縮合体であることが同定された。
を用いて解析したところ、プロトンＮＭＲスペクトル・
パターンにおいて、１．１６８〜１．２８４，１．９０
６，２．１２０，３．３７９〜３．６８１ＰＰＭのシグ
ナル郡が確認された。従って、ポリペプチドＦ３がアミ
ノ酸の縮合体であることが同定された。
【００２９】そこで、ポリペプチドＦ３を強塩酸中で加
水分解した後、常法に従ってアミノ酸分析器により血漿
からの試料を基準として加水分解物中のアミノ酸の同定
ならびに定量を行った。その結果を表１に示す。
水分解した後、常法に従ってアミノ酸分析器により血漿
からの試料を基準として加水分解物中のアミノ酸の同定
ならびに定量を行った。その結果を表１に示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】表１から、ポリペプチドＦ３を構成するア
ミノ酸は、クリシン＞アスパラギン酸＞グルタミン酸＞
アラニン＞セリン＞リジンなどの順に３０μモル以上、
ロイシン＞アルギニンの順で２０μモル代、バリン＞プ
ロリン＝スレオニン＞チロシン＝イソロイシン＞フェニ
ルアラニンなどの１０μモル代およびヒスチジン，メチ
オニン，シスチンなどの１０μモル以下のモル比から構
成されていることが判明した。
ミノ酸は、クリシン＞アスパラギン酸＞グルタミン酸＞
アラニン＞セリン＞リジンなどの順に３０μモル以上、
ロイシン＞アルギニンの順で２０μモル代、バリン＞プ
ロリン＝スレオニン＞チロシン＝イソロイシン＞フェニ
ルアラニンなどの１０μモル代およびヒスチジン，メチ
オニン，シスチンなどの１０μモル以下のモル比から構
成されていることが判明した。
【００３２】尚、本実施の形態では、得られた抽出物を
カラムクロマトグラフィーを用いて分画した場合を示し
たが、抽出物の分画として従来周知の化学的および物理
的分画手段を採ることができることは云うまでもない。
カラムクロマトグラフィーを用いて分画した場合を示し
たが、抽出物の分画として従来周知の化学的および物理
的分画手段を採ることができることは云うまでもない。
【００３３】
【発明の効果】以上のように、本発明によって製造され
るアマノリ属海藻から得られるポリペプチドは、アマノ
リ属海藻をそのまま或いは加工品を食用した場合に比較
して、きわめて少量で血糖値を降下させることができ
る。
るアマノリ属海藻から得られるポリペプチドは、アマノ
リ属海藻をそのまま或いは加工品を食用した場合に比較
して、きわめて少量で血糖値を降下させることができ
る。
【００３４】また、本発明は従来医療用として用いられ
ている血糖降下剤の製造方法のように複雑な分画精製過
程を必要としないため製造コストが安くて済み、更に原
料がアマノリ属の海藻であるため、動物の臓器などを原
料とする場合に比べて保管，取扱いならびに後処理など
の点においても優れている。
ている血糖降下剤の製造方法のように複雑な分画精製過
程を必要としないため製造コストが安くて済み、更に原
料がアマノリ属の海藻であるため、動物の臓器などを原
料とする場合に比べて保管，取扱いならびに後処理など
の点においても優れている。
【００３５】このように本発明は従来医療用の血糖降下
剤として用いられているインシュリンのように強力な血
糖降下能を有していないが、例えばドリンク剤，菓子，
飴などに混入させるなどして健康食品として日頃から手
軽に利用することにより血糖値を降下させ、或いは血糖
値の上昇を防ぐことができるものであり、また、過剰生
産ぎみのアマノリ属の利用を有効に図ることができるも
のである。
剤として用いられているインシュリンのように強力な血
糖降下能を有していないが、例えばドリンク剤，菓子，
飴などに混入させるなどして健康食品として日頃から手
軽に利用することにより血糖値を降下させ、或いは血糖
値の上昇を防ぐことができるものであり、また、過剰生
産ぎみのアマノリ属の利用を有効に図ることができるも
のである。
【図１】本発明の一実施の形態における製造工程を示す
ブロック図である。
ブロック図である。
【図２】図１に示した実施の形態によって得られた製品
のカラムクロマトグラフィーによる溶出パターンであ
る。
のカラムクロマトグラフィーによる溶出パターンであ
る。
【図３】図１に示した実施の形態により得られた製品を
試験マウスに経口投与した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
試験マウスに経口投与した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
【図４】図１に示した実施の形態により得られた製品を
正常マウスに経口投与した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
正常マウスに経口投与した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
【図５】図１に示した実施の形態により得られた製品を
試験マウスに腹腔注射した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
試験マウスに腹腔注射した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
【図６】図１に示した実施の形態により得られた製品を
正常マウスに腹腔注射した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
正常マウスに腹腔注射した場合の血糖降下能を示す状態
図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 木坂 俊介 埼玉県朝霞市浜崎551番地１−103号
Claims (3)
- 【請求項１】 アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを水を用いて抽出
し、この抽出物を分画精製してポリペプチドを得ること
を特徴とするアマノリ属海藻からのポリペプチドの製造
方法。 - 【請求項２】 アマノリ属海藻の葉状体またはその加工
品の乾燥細粒化物を膨潤させ、これを弱アルカリ性水溶
液を用いて抽出し、この抽出物を分画精製してポリペプ
チドを得ることを特徴とするアマノリ属海藻からのポリ
ペプチドの製造方法。 - 【請求項３】 抽出物を分画精製する前に有機溶剤を用
いて抽出物中に含まれる色素を除去する請求項１または
２に記載のアマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9168169A JPH111495A (ja) | 1997-06-10 | 1997-06-10 | アマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9168169A JPH111495A (ja) | 1997-06-10 | 1997-06-10 | アマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH111495A true JPH111495A (ja) | 1999-01-06 |
Family
ID=15863089
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9168169A Withdrawn JPH111495A (ja) | 1997-06-10 | 1997-06-10 | アマノリ属海藻からのポリペプチドの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH111495A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100358903B1 (ko) * | 2000-03-31 | 2002-10-31 | 학교법인고려중앙학원 | 돌김으로부터 분리한 대식세포 활성화능을 갖는 다당류 및그 제조방법 |
| JP2010195772A (ja) * | 2009-01-29 | 2010-09-09 | Tsuho Nori Kk | 海苔を用いた血中インスリン値上昇抑制剤、脂肪分解抑制剤、高インスリン血症治療薬、糖尿病治療薬、および、機能性飲食品 |
-
1997
- 1997-06-10 JP JP9168169A patent/JPH111495A/ja not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100358903B1 (ko) * | 2000-03-31 | 2002-10-31 | 학교법인고려중앙학원 | 돌김으로부터 분리한 대식세포 활성화능을 갖는 다당류 및그 제조방법 |
| JP2010195772A (ja) * | 2009-01-29 | 2010-09-09 | Tsuho Nori Kk | 海苔を用いた血中インスリン値上昇抑制剤、脂肪分解抑制剤、高インスリン血症治療薬、糖尿病治療薬、および、機能性飲食品 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20040907 |