JPH11106398A - ペプチド誘導体および抗真菌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 抗真菌活性に優れ、安全である新規な抗真菌
性ペプチド誘導体と、これを有効成分とする抗真菌剤を
提供する。 【解決手段】 特定の６アミノ酸残基からなるアミノ酸
配列を有し、その配列の一部に非天然型のアミノ酸残基
を有する抗真菌性ペプチド誘導体、並びにこの誘導体を
有効成分として含有する抗真菌剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この出願の発明は、新規なペ
プチド誘導体またはそれらの薬理学的に許容される塩
類、およびそれらの用途に関するものである。さらに詳
しくは、この出願の発明は、医薬品、特に抗真菌剤とし
て使用し得る安全なペプチド誘導体に関するものであ
る。

【０００２】

【従来の技術】侵襲性カンジダ症等の重篤な深在性真菌
症はしばしば致死的疾患となり、その発症率は全世界的
に上昇の傾向にある。本来、カンジダ等の真菌に対する
宿主生体側の主要な防御機構は、好中球による非特異免
疫によると考えられており、この防御機構が正常に機能
している場合には真菌に感染する危険性は少ない。しか
しながら、近年、この生体の免疫機能の低下をもたらす
悪性腫瘍（特に、急性白血病、悪性リンパ腫等の造血器
系悪性腫瘍）、ＡＩＤＳ等の基礎疾患の患者数が増加し
つつあり、このことが深在性真菌症の発症率上昇の一因
とされている。また、制癌剤、免疫抑制剤等の医療処置
の繁用等も真菌感染を容易にしている要因の一つである
と考えられている。さらに、抗菌抗生物質、ステロイド
ホルモンの多用、長期にわたる中心静脈栄養、静脈カテ
ーテルの使用等も深在性真菌症に罹患する危険因子とさ
れている（例えば、臨床と微生物、第17巻、第 265ペー
ジ、1990年）。

【０００３】このような深在性真菌症の治療に最も有効
な手段は抗真菌剤による化学療法であるが、現在、深在
性真菌症治療薬として実用化されている薬剤は、抗菌剤
と比較してはるかに少なく、アンホテリシン、フルシト
シン、ミコナゾール、フルコナゾール、イトラコナゾー
ル、およびケトコナゾールの６種類にすぎない。一方、
種々の微生物に対して抗菌作用、抗真菌作用等を有する
ペプチドまたはその誘導体については、多数の報告がな
されており［例えば、ビオキミカ・エト・ビオフィジカ
・アクタ（Biochimica et Biophysica Acta ）、第1197
巻、第109 ページ、1994年］、その中の一つにラクトフ
ェリンがある。

【０００４】ラクトフェリンは、涙、唾液、末梢血、乳
汁等に含まれている天然の鉄結合性蛋白質であり、大腸
菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に
対して抗菌作用および抗真菌作用を示すことが知られて
いる［例えば、ジャーナル・オブ・ペディアトリクス
（Journal of Pediatrics ）、第94巻、第１ページ、19
79年；アーカイブズ・オブ・ディジーズ・イン・チャイ
ルドフッド（ Archivesof Disease in Childhood ）、
第67巻、第 657ページ、1992年］。

【０００５】また、ラクトフェリンの分解物、ラクトフ
ェリンに由来するペプチド類、これらとホモロジーを有
するペプチド類にも抗菌作用、抗真菌作用等のあること
が知られている。例えば、ラクトフェリン分解物を有効
成分とする抗菌剤（特開平５−３２００６８号公報）、
少なくとも２０個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチ
ド（特開平５−９２９９４号公報）、５個のアミノ酸残
基からなる抗菌性ペプチド（特開平５−１４８２９６号
公報）、３〜６個のアミノ酸残基からなる抗菌性ペプチ
ド（特開平５−１４８２９７号公報）、ラクトフェリン
類の分解物、ラクトフェリン類の分解物から単離される
ペプチド、ラクトフェリン類の分解物から単離されるペ
プチドと同一のアミノ酸配列を有する合成されたペプチ
ドを有効成分とする抗酸化剤（特開平６−１９９６８７
号公報）、ペプチド誘導体と、その用途（特開平８−１
７６１９０号公報）等が知られている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】前記のとおり、深在性
真菌症の治療に用いられる抗真菌剤は僅かに６種類のみ
であり、様々な種類の真菌感染に対して有効に対処する
ためには、新しい機序に基づく新規な抗真菌剤が待望さ
れていた。この発明は、以上のとおりの現状に鑑みてな
されたものであり、抗真菌活性に優れ、安全であり、か
つ全く新しい機序に基づく新規な抗真菌性ペプチド誘導
体と、この抗菌性ペプチド誘導体を有効成分とする新規
な抗真菌剤を提供することを目的としている。

【０００７】

【課題を解決するための手段】この出願の発明者らは、
前記従来技術の発明に開示されているラクトフェリンに
由来するペプチド類およびその誘導体の抗真菌作用につ
いて詳細に検討した結果、ウシラクトフェリンを構成す
るアミノ酸配列のうちの特定の６アミノ酸残基（Ａｒｇ
−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ）と同一の
アミノ酸配列を有し、Ｃ末端がアミド化された誘導体
が、強い抗真菌作用を有することを見い出した。

【０００８】さらに、この出願の発明者らは、この事実
を基礎としてより強力な抗真菌活性を発現するペプチド
誘導体を追及した結果、その配列の一部に、従来にない
非天然型のアミノ酸残基を組み込むことにより、顕著な
抗真菌活性を示す一連のペプチド誘導体の創製に成功し
た。すなわちこの出願は、前記の課題を解決する第１の
発明として、次の式（１）

【０００９】

【化７】

【００１０】［ただし、式中Ｘａａは次式（２）

【００１１】

【化８】

【００１２】｛ただし、式中ｎは整数１〜３を示し、Ａ
は次式（３）

【００１３】

【化９】

【００１４】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。）のうちのいずれかで
示されるヘテロアリール基を示す。｝で示されるアミノ
酸残基を示す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のアミノ
酸配列を有するペプチド誘導体またはそれらの薬理学的
に許容される塩類を提供する。

【００１５】この出願はまた、第２の発明として、次の
式（１）

【００１６】

【化１０】

【００１７】［ただし、式中Ｘａａは次式（２）

【００１８】

【化１１】

【００１９】｛ただし、式中ｎは整数１〜３を示し、Ａ
は次式（３）

【００２０】

【化１２】

【００２１】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。）のうちのいずれかで
示されるヘテロアリール基を示す。｝で示されるアミノ
酸残基を示す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のアミノ
酸配列を有するペプチド誘導体またはそれらの薬理学的
に許容される塩類からなる群より選択される化合物の１
種または２種以上の混合物を有効成分として含有する抗
真菌剤を提供する。

【００２２】

【発明の実施の形態】この出願の第１の発明に係るペプ
チド誘導体は、固相法、液相法等の公知の方法によって
合成することができる。固相法による場合は、ペプチド
合成用固相樹脂を用いて、各アミノ酸ブロックを順次縮
合させ、ペプチド鎖を延長する。各アミノ酸ブロックは
Ｎ末端および側鎖の反応性基を適当な保護基で保護した
該アミノ酸誘導体を用い、Ｃ端側から縮合反応、Ｎ末端
脱保護基反応を反復して目的のペプチド鎖を構築する。
次いで、Ｎ末端および側鎖の反応性基が保護されたまま
のペプチドを樹脂から切断して取出し、Ｃ末端のアミド
化を行い、更に脱保護反応を行うことにより、目的とす
るペプチド誘導体を得ることができる。

【００２３】この発明のペプチド誘導体は、全てＣ末端
がアミド化された誘導体であるので、通常の固相樹脂の
代わりに、Ｃ末端アミドペプチド合成用固相樹脂を用い
ることもできる。この場合は、工程を簡略化できる上
に、保護基の選び方によっては脱樹脂、脱保護を同時に
行うこともできるので便利である。以上の操作を機械化
または自動化した、いわゆるペプチド自動合成装置を利
用することもできる。

【００２４】液相法による場合も、通常の公知のペプチ
ド合成法により、基本的にはＮ末端、またはＣ末端およ
び側鎖の反応性基を適当な保護基で保護したアミノ酸誘
導体を各アミノ酸ブロックとし、これを用いて縮合反
応、Ｎ末端またはＣ末端の脱保護基反応を反復しなが
ら、目的のペプチド鎖を構築することができる。液相法
においては、Ｃ末端側またはＮ末端側から順次ペプチド
鎖の延長を行う逐次鎖長延長法に加えて、目的のペプチ
ド鎖を適当なフラグメントに分けて、各々のフラグメン
ト鎖を合成し、各々を縮合させて最終的なペプチド鎖を
構築する、いわゆるフラグメント縮合法を適用すること
もできる。

【００２５】この発明のペプチド誘導体は、非天然型の
アミノ酸残基を含むことを特徴としているが、このアミ
ノ酸残基部分に相当するアミノ酸、またはその保護化さ
れた誘導体は、いずれも公知の方法により合成すること
ができる。そのいくつかを例示すれば次のとおりであ
る。次の反応式により、エタノール等の有機溶媒中で、
ナトリウムエトキサイド等の塩基の存在下に、アセトア
ミドマロン酸ジエチル（Ａ）とヘテロアリールアルキル
ハライド（Ｂ）とを反応させ、ヘテロアリールアルキル
アセトアミドマロン酸ジエチル（Ｃ）を合成し、エステ
ルの加水分解、脱炭酸、脱アセチル化を、塩酸中、臭化
水素酸中等の酸性条件下で一挙に行うか、または一旦水
酸化ナトリウム等の塩基性条件下で、エステルの加水分
解を行い、のち酸性条件下で脱炭酸、脱アセチル化を行
うことにより、一般式（Ｄ）で示される型のアミノ酸を
合成することができる。

【００２６】

【化１３】

【００２７】［ただし、式中ｎは整数１〜３を示し、Ａ
は次式（３）

【００２８】

【化１４】

【００２９】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。）のいずれかで示され
るヘテロアリール基を示す。］ また、次に示す反応式により、酢酸等の有機溶媒中アセ
トアミドアクリル酸（Ｅ）にピラゾール、トリアゾー
ル、インダゾール、ベンゾトリアゾール、あるいはそれ
らの置換誘導体（Ｆ）を共役付加させ、ヘテロアリール
アラニン、あるいはそれらの置換誘導体（Ｇ）を合成
し、これを塩酸中で加熱するなどして脱アセチル化を行
うことにより、一般式（Ｈ）で示される型のアミノ酸を
合成することができる。

【００３０】

【化１５】

【００３１】［ただし、式中ＢＨは、次式

【００３２】

【化１６】

【００３３】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。）のうちのいずれかで
示されるヘテロ環化合物を示す。］ また、Ｎ末端またはＣ末端保護体としてはＢｏｃ体、Ｆ
ｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル基）体、
各種エステル誘導体等が考えられるが、これらへの変換
は通常用いられている反応試材、反応条件により、問題
無く達成される。

【００３４】この発明のペプチド誘導体は、液体クロマ
トグラフィー、カラムクロマトグラフィー、再結晶等の
公知の方法によって精製することができる。また、この
発明のペプチド誘導体の製造に使用する合成中間体、合
成原料等も同様の方法により精製することができる。ま
た、この発明のペプチド誘導体を構成する各アミノ酸残
基は、Ｌ体のみならずＤ体を含むものである。すなわ
ち、この発明のペプチド誘導体の抗真菌作用は、ペプチ
ドを構成するアミノ酸残基がＬ体であるか、またはＤ体
であるかには影響されない。

【００３５】なお、後記の実施例では、ペプチド誘導体
は、ペプチド合成機を用いて、９−フルオレニルメトキ
シカルボニル基（Ｆｍｏｃ）を結合したアミノ酸を合成
原料として合成しているが、個々のＦｍｏｃアミノ酸は
合成目的に応じて、Ｌ体、Ｄ体またはＤＬ体のものを用
いているので、これらの区別を明示する必要がある場合
にはＬ、ＤまたはＤＬの記号をアミノ酸を示す記号の前
に記載している。

【００３６】また、不斉中心が１つあるアミノ酸残基を
もう１個結合している化合物に対してアミノ酸残基のＤ
Ｌとしての表示を使用するのは本来適切ではないが、原
料として用いた個々のＦｍｏｃアミノ酸に対応して得ら
れる実施例のペプチド誘導体について、これを特定表示
する手段として、例えば、次式に例示するとおり表示す
る。

【００３７】

【化１７】

【００３８】この例の場合は、Ｘａａ部分についてはＤ
Ｌ体のＦｍｏｃアミノ酸を、他の５つのアミノ酸残基相
当部分についてはＤ体のＦｍｏｃアミノ酸を用いて合成
されたペプチド誘導体であることを示し、このペプチド
誘導体は、具体的には、次式に示す２つのペプチド誘導
体の等量混合物である。

【００３９】

【化１８】

【００４０】この発明のペプチド誘導体は、非天然型の
アミノ酸残基を含有することを特徴としているが、これ
らのアミノ酸残基は形式的には天然型アミノ酸残基の一
つであるアラニンの側鎖末端原子上の水素原子が含窒素
ヘテロアリール基で置換されたものと考えることができ
るので、例えば、次式にそれぞれ例示するとおりの略記
法を用いて表示する。

【００４１】

【化１９】

【００４２】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。） また、これらの具体的な構造式を例示すれば、各々、次
式のとおりである。

【００４３】

【化２０】

【００４４】（ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキ
ル基またはハロゲン原子を示す。） なお、上記のアミノ酸残基の中で、アラニンの側鎖末端
原子上の水素原子がイミダゾール−４−イル基で置換さ
れたもので、置換基Ｒが水素原子であるものは、天然に
産するアミノ酸の１つであるヒスチジン残基であり、通
常Ｈｉｓで表示されるが、便宜上、次式に示すとおり表
示する。

【００４５】

【化２１】

【００４６】この発明のペプチド誘導体の薬理学的に許
容される塩類についてさらに説明すると、無毒性の塩、
例えば、酸付加塩または金属錯体、例えば亜鉛、鉄、カ
ルシウム、マグネシウムもしくはアルミニウム等の錯体
である。酸付加塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫
酸塩、リン酸塩、タンニン酸塩、シュウ酸塩、フマール
酸塩、グルコン酸塩、アルギン酸塩、マレイン酸塩、酢
酸塩、トリフルオロ酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、
コハク酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒石酸塩
等を例示することができる。さらに、カルボン酸塩、例
えばアルカリ金属とのナトリウム塩、カリウム塩等、ア
ルカリ土類金属とのカルシウム塩、マグネシウム塩等、
アンモニウム塩であってもよい。

【００４７】次にこの発明の第２の発明に係る抗真菌剤
について説明する。この発明の抗真菌剤は、前記のペプ
チド誘導体およびそれらの薬理学的に許容される塩類か
らなる群より選択された任意の１種の化合物または２種
以上の混合物を有効成分として含有している。また、こ
の発明の抗真菌剤は、前記の有効成分の他に、公知の抗
真菌剤を含有させることも可能である。

【００４８】この発明の抗真菌剤は、常法により例え
ば、軟膏、ゲル、ペースト、クリーム、噴霧剤、懸濁
剤、乳剤、シロップ剤、錠剤、糖剤、カプセル剤、粒
剤、粉剤等として加工することもできる。この発明の抗
真菌剤の投与量は、治療対象、症状、年齢等により異な
るが、好適には通常１回につき、約０．１〜５０ｍｇを
１日１〜３回程度投与する。表在性真菌症を対象とする
場合には、０．０１〜５％（重量。以下特に断りのない
限り同じ。）含有軟膏として１日１〜３回程度局所に塗
布することもできる。

【００４９】なお、この出願の明細書においては、抗菌
活性（抗菌剤）と、抗真菌活性（抗真菌剤）の意味を区
別して使用している。次に、試験例を示し、この発明の
抗真菌性ペプチド誘導体の作用効果についてさらに詳し
く説明する。 試験例１ この試験は、この発明のペプチド誘導体の真菌に対する
感受性を調べるために行った。 （１）試験菌株 試験菌株として次の４菌株を使用した。

【００５０】 Candida albicans ATCC 90028 Candida tropicalis ATCC 750 Candida parapsilosis ATCC 90018 Candida glabrata ATCC 90030 なお、これらの菌株は、いずれもアメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から容易に入手
することができる。 （２）試験方法 １）培地の調製 バクト・ペプトン（ディフコ社製）２ｇおよびＤ−グル
コース（和光純薬工業社製）４ｇを注射用蒸留水（大塚
製薬工場社製）に溶解して全量を２００ｍｌに調整し、
１２１℃で１５分間オートクレーブ滅菌し、使用するま
で４℃に保存した。 ２）被検物質の調製 実施例１ないし実施例８と同一の方法により製造したこ
の発明のペプチド誘導体、ならびに比較例１および比較
例２と同一の方法により製造した化合物は、全て注射用
蒸留水（以下、蒸留水と略記する。）に溶解し、１ｍｇ
／ｍｌ濃度の溶液を調製し、これを基準液とした。この
基準液は使用するまで−２０℃以下で凍結して保存し
た。 ３）陽性対照薬の調製 陽性対照薬として用いたアンホテリシンＢ（シグマ社
製）、ミコナゾール（シグマ社製）、およびフルコナゾ
ール（ファイザー社製。ジフルカンカプセルの内容物を
エタノール抽出し、その減圧濃縮残渣を酢酸エチル−ヘ
キサンから再結晶して得た）は、ジメチルスルホキシド
（シグマ社製；細胞培養用に溶解し、１０ｍｇ／ｍｌ濃
度の溶液を調製し、これを保存液とした。この保存液は
使用するまで−２０℃以下で凍結して保存し、使用時に
蒸留水で１０倍希釈（１ｍｇ／ｍｌ）し、これを基準液
とした。 ４）接種菌液の調製 培養液中の菌数の算定 スラントからの一かきを前記培地（２ｍｌ）に接種し、
３５℃で１９時間培養し、分光光度計を用いて、波長６
６０ｎｍのＯＤ値を測定した。一方、培地の一部（５０
μｌ）を新しい前記培地（５ｍｌ）に植え継ぎ、３５℃
で６時間培養し、菌液のＯＤ値と生菌数の測定を行っ
た。生菌数の測定は、菌液を１０³ 、１０⁴ 、１０⁵ お
よび１０⁶ 倍希釈し、各々の０．１ｍｌをＳＤＡ寒天培
地に塗抹して培養し、翌日出現したコロニー数を測定
し、ＯＤ値／菌数濃度の検量線を求め、菌液１ｍｌ当た
りの菌数を算出した。

【００５１】接種菌液の調製 スラントからの一かきを前記培地（２ｍｌ）に接種し、
３５℃にて１９時間培養し、その一部を無菌的に採取
し、分光光度計で波長６６０ｎｍのＯＤ値を測定した
（ＯＤ値が約１．０で、菌数は約１×１０⁷ 個／ｍｌで
あった。）。

【００５２】この菌液の１／１００量の菌液を、新しい
前記培地（１０〜１５ｍｌ）に接種し、３５℃にて６時
間培養し、波長６６０ｎｍのＯＤ値を測定した結果、
０．１〜０．２で、菌数が約１×１０⁶ 個／ｍｌと算定
された。この培養物を前記培地を用いて初め５０倍希
釈、次いで１０倍希釈して接種菌液（２×１０³ 個／ｍ
ｌ）を調製した。調製後１５分以内に使用できない場合
は、４℃で保存し、２時間以内に使用した。 ５）薬剤希釈液の調製 培地を９６穴平底マイクロプレートに、マルチピペッ
トを用いて、１列目には１６０μｌを、２列目から１０
列目までは１００μｌずつ分注した。１１列目の上４段
（発育対照）には１００μｌずつ、また下４段（陰性対
照）には２００μｌずつ分注した。

【００５３】前記２）および３）において調製した被
検物質および対照薬物の希釈液（濃度：１ｍｇ／ｍｌ）
４０μｌを１列目に添加して混合し、そのうち１００μ
ｌを２列目に添加した。この操作を順次１０列目まで実
施して２倍系列希釈した。なお、最後の１０列目は１０
０μｌを分取して廃棄した。 ６）菌接種と培養 前記４）において調製した接種菌液を１列目から１０列
目および１１列目上４段の全穴に１００μｌずつ分注
し、３５℃で２日間培養した。 ７）判定 終末点は、マイクロプレートビュアーで肉眼的に発育が
完全阻止されている濃度を最小生育阻止濃度（以下、Ｍ
ＩＣ値と記載する。）とした。 （２）試験結果 この試験の結果は表１に示すとおりである。表中の各実
施例と同一の方法により製造された試料はこの発明のペ
プチド誘導体であり、比較例と同一の方法により製造さ
れた試料は前記のウシラクトフェリンを構成するアミノ
酸配列のうちの特定の６アミノ酸残基（Ａｒｇ−Ａｒｇ
−Ｔｒｐ−Ｇｌｎ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ）と同一のアミノ酸
配列を有し、Ｃ末端がアミド化された誘導体であり、か
つ抗菌作用または抗真菌作用を有するペプチド誘導体と
して公知の化合物である。

【００５４】比較例１の化合物は６つのアミノ酸残基が
すべてＬ体のものからなっており、LArg-LArg-LTrp-LGl
n-LTrp-LArg-NH2で示される化合物である。比較例２の
化合物は前記比較例１の鏡像体であり、６つのアミノ酸
残基がすべてＤ体のものからなり、DArg- DArg-DTrp-DG
ln-DTrp-DArg-NH2で示される化合物である。

【００５５】比較例１の化合物および比較例２の化合物
の抗真菌作用の差、すなわち、Ｌ体およびＤ体間での差
は、いずれの真菌に対しても認められなかった。Candid
a albicans ATCC 90028 に対しては、比較例の化合物
は、いずれもＭＩＣ値が１２．５μｇ／ｍｌであった。
これに対して、この発明のペプチド誘導体は、実施例２
の化合物のＭＩＣ値が２５μｇ／ｍｌであったのを除い
て、全て１２．５μｇ／ｍｌであり、比較例の化合物と
同等の抗真菌作用が認められた。

【００５６】Candida tropicalis ATCC 750 に対して
は、比較例の化合物は、いずれもＭＩＣ値が３．１３μ
ｇ／ｍｌであった。これに対して、この発明のペプチド
誘導体は、実施例２、実施例３および実施例８の化合物
のＭＩＣ値が、比較例の化合物と同じ３．１３μｇ／ｍ
ｌであったのを除いて、全て１．５６μｇ／ｍｌであ
り、比較例の化合物に比べて倍の抗真菌作用が認められ
た。

【００５７】Candida parapsilosis ATCC 90018 に対し
ては、比較例の化合物は、いずれもＭＩＣ値が５０μｇ
／ｍｌであった。これに対して、この発明のペプチド誘
導体は、いずれもＭＩＣ値が１２．５〜２５μｇ／ｍｌ
であり、比較例の化合物に比べて２倍〜４倍の抗真菌作
用が認められた。Candida glabrata ATCC 90030 に対し
ては、比較例の化合物は、いずれもＭＩＣ値が５０μｇ
／ｍｌであった。これに対して、この発明のペプチド誘
導体は、実施例２の化合物のＭＩＣ値が１００μｇ／ｍ
ｌであったのを除いて、全て２５〜５０μｇ／ｍｌであ
り、比較例の化合物に比べて同等ないし２倍の抗真菌作
用が認められた。

【００５８】この試験結果から明らかなとおり、総じて
この発明のペプチド誘導体にはいずれも公知のペプチド
類を上回る抗真菌作用が認められた。なお、他のペプチ
ド誘導体についても同様の試験を実施したが、ほぼ同等
の結果が得られた。

【００５９】

【表１】

【００６０】試験例２ この試験は、この発明のペプチド誘導体の急性毒性を調
べる目的で行った。 （１）試験動物 ４週齢のｄｄＹ系雄性マウス（日本ＳＬＣより購入）を
１週間以上馴化し、のち４群（１群５匹）に分けて使用
した。 （２）試験方法 実施例１と同一の方法により製造したこの発明のペプチ
ド誘導体を体重１ｋｇ当り１００ｍｇまたは５００ｍｇ
の割合で注射用水（大塚製薬社製）に溶解し、単回強制
経口投与し、急性毒性を試験した。 （３）試験結果 １００ｍｇ／ｋｇ体重、および５００ｍｇ／ｋｇ体重の
割合で投与した群に死亡例は認められなかった。従っ
て、この発明のペプチド誘導体のＬＤ₅₀値は５００ｍｇ
／ｋｇ体重以上であり、毒性は極めて低いことが判明し
た。なお、他のペプチド誘導体についても同様の試験を
行ったが、ほぼ同様の結果が得られた。

【００６１】次に、実施例を示してこの発明をさらに詳
細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の実施例に
限定されるものではない。

【００６２】

【実施例】

実施例１ ペプチド合成装置（パーキン・エルマー社アプライド・
バイオシステムズ事業部製。４３３Ａ型。以下、ＰＥ社
製と略記する）を使用し、同装置の使用説明書およびシ
ェパード等による固相ペプチド合成法［ジャーナル・オ
ブ・ケミカル・ソサイエティー・パーキンＩ（Journal
of Chemical Society Perkin Ｉ）、第538 ページ、19
81年］に基づいて次のようにして合成した。

【００６３】まず、Ｃ末端アミドペプチド合成用固相樹
脂であるＦｍｏｃアミドレジン（ＰＥ社製）３９７ｍｇ
（０．２５ｍｍｏｌ）を用いて、前記ペプチド合成装置
の合成プログラムにより脱保護基反応および縮合反応を
反復してペプチド鎖を延長した。つまり、最初に２０％
ピペリジン含有Ｎ−メチルピロリドン（ＰＥ社製。以
下、Ｎ−メチルピロリドンをＮＭＰと略記する。）によ
り、前記固相樹脂のアミノ基の保護基であるＦｍｏｃを
切断除去し、ＮＭＰで洗浄した。次いで、Ｆｍｏｃアミ
ノ酸［Fmoc-D-Arg(Pmc)-OH（渡辺化学工業社製）］をFa
stMoc （登録商標）リージェントキット（ＰＥ社製）を
用いて縮合させ、ＮＭＰで洗浄した。以下、前記Ｆｍｏ
ｃ基の切断からＦｍｏｃアミノ酸の縮合洗浄までの操作
を反復した。

【００６４】ただし、次工程以降、Ｆｍｏｃアミノ酸は
工程順に、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH（渡辺化学工業社製）、
Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OH（後記参考例２と同一の
方法により合成）、Fmoc-D-Trp(Boc)-OH（渡辺化学工業
社製）およびFmoc-D-Arg(Pmc)-OH（渡辺化学工業社製）
を用いた。いずれのＦｍｏｃアミノ酸も１．０ｍｍｏｌ
に相当する量を専用カートリッジに詰めて使用した。縮
合反応の条件および脱保護条件は、同装置に付随するフ
ィードバックモニタリングシステムにより自動的に制御
させた。ペプチド鎖の伸張反応が全て終了した後、２０
％ピペリジン含有ＮＭＰによりＮ末端のＦｍｏｃ基を切
断し、ＮＭＰおよびジクロロメタン（ＰＥ社製）で洗浄
し、真空乾燥し、保護ペプチド樹脂７８１ｍｇ（収率９
９％）を得た。

【００６５】前記保護ペプチド樹脂３３６ｍｇ（０．１
ｍｍｏｌ）にエタンジチオール（渡辺化学工業社製）
１．２ｍｌ、メタクレゾール（渡辺化学工業社製）０．
４ｍｌおよびチオアニソール（渡辺化学工業社製）２．
４ｍｌを、室温でアルゴン気流下１５分間撹拌し、氷冷
し、更に１０分間撹拌した。これにトリフルオロ酢酸
（渡辺化学工業社製）１５ｍｌを添加し、１０分間撹拌
し、トリメチルシリルブロミド（渡辺化学工業社製）
２．７ｍｌを添加して５０分間撹拌した。のちグラスフ
ィルターで樹脂を濾別し、濾液を手早く減圧濃縮した。
残渣にあらかじめ冷却した無水ジエチルエーテル（国産
化学製）を添加し、ペプチドを白色粉末化した。

【００６６】次いで遠沈管に移し、遠心分離（２５００
ｒｐｍ、１０分間）し、上清を廃棄し、冷ジエチルエー
テルを新たに添加し、充分撹拌して再び遠心分離する操
作を４回反復した。のち、ペプチド沈殿物を真空乾燥
し、水に溶解して凍結乾燥し、目的とする粗製ペプチド
誘導体約４２ｍｇを得た。前記粗製ペプチド誘導体の全
量を水に溶解し、遠心分離（１５０００ｒｐｍ、５分
間）し、上清を０．４５μｍフィルターで濾過し、次の
条件により高速液体クロマトグラフィーにより精製し
た。カラムは、逆相系の Lichrospher 100 RP-18(e) ２
５０×１０ｍｍ（メルク社製）を用い、溶離液は０．１
％ＴＦＡ／水をＡ液、８０％アセトニトリル／Ａ液をＢ
液として、Ａ液からＢ液への濃度直線勾配により溶出し
た。クロマトグラムのピークは、アミノ酸ブロックとし
て一箇所のみＤＬ体を用いたことに由来する２つの立体
異性体の混合物であることを反映して、２つのピークか
ら成っていたが、この２つを分離することは困難であっ
たので、合わせて分取し、再度凍結乾燥し、次式

【００６７】

【化２２】

【００６８】により示される白色粉末のこの発明のペプ
チド誘導体約２１．０ｍｇ（収率約２１％）を得た。 実施例２ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、後記の参考
例４と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(1H-1,2,4
-Triazol-1-yl)-OH ３７８ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用
いたことを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００６９】

【化２３】

【００７０】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２５．０ｍｇ（収率約２５％）を得た。 実施例３ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、後記参考例
６と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(1H-1,2,3-T
riazol-1-yl)-OH ３７８ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用い
たことを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００７１】

【化２４】

【００７２】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２１．６ｍｇ（収率約２２％）を得た。 実施例４ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、後記参考例
８と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(3Me-Pyrazo
l-1-yl)-OHおよびFmoc-DL-Ala(5Me-Pyrazol-1-yl)-OHの
混合物３９１ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除
き、実施例１と同一の方法により、次式

【００７３】

【化２５】

【００７４】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約３１．０ｍｇ（収率約３１％）を得た。 実施例５ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、後記参考例
１０と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(4Me-Pyra
zol-1-yl)-OH３９１ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたこ
とを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００７５】

【化２６】

【００７６】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２８．０ｍｇ（収率約２８％）を得た。 実施例６ Fmoc-DL-Ala(Pyrazo-1-yl)-OH の代わりに、後記参考例
１２と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(4Br-Pyra
zol-1-yl)-OH４５６ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いたこ
とを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００７７】

【化２７】

【００７８】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２３．０ｍｇ（収率約２１％）を得た。 実施例７ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、後記参考例
１４と同一の方法により製造したFmoc-DL-Ala(Benzotri
azol-1-yl)-OH ４２８ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用いた
ことを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００７９】

【化２８】

【００８０】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２２．４ｍｇ（収率約２１％）を得た。 実施例８ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりに、Fmoc-D-His
(Trt)-OH（アドバンストケムテック社製）６２０ｍｇ
（１．０ｍｍｏｌ）を用いたことを除き、実施例１と同
一の方法により、次式

【００８１】

【化２９】

【００８２】により示される白色粉末状のこの発明のペ
プチド誘導体約２２．７ｍｇ（収率約２３％）を得た。 実施例９ 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体約１０
ｍｇを、０．０２ｍｏｌ／ｌの塩酸５ｍｌに溶解させ、
さらに水で２０ｍｌに希釈し、そのまま凍結乾燥し、白
色粉末状の実施例１の化合物の塩酸塩約１０ｍｇ得た。 実施例１０ 実施例２と同一の方法により得たペプチド誘導体約１０
ｍｇを、０．０２ｍｏｌ／ｌの塩酸５ｍｌに溶解し、さ
らに水で２０ｍｌに希釈し、そのまま凍結乾燥し、白色
粉末状の実施例２の化合物の塩酸塩を約１０ｍｇ得た。 実施例１１ 常法により、次の組成の錠剤を製造した。

【００８３】 乳糖（和光純薬工業社製） ７８．２（％） 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体 １．２ ステアリン酸マグネシウム（和光純薬工業社製） ２０．０ 実施例１２ 常法により、次の組成の注射剤を製造した。実施例１と
同一の方法により製造したペプチド誘導体を生理食塩水
（大塚製薬社製）に６．０ｍｇ／ｍｌの割合で溶解し、
滅菌濾過フィルターにより濾過し、注射剤を製造した。 実施例１３ 常法により、次の組成の軟膏を製造した。なお、ペプチ
ド誘導体を除き、全て市販品を使用した。

【００８４】 ワセリン ２６．３（％） パラフィン ５．３ セトステアリルアルコール ２．１ プロピレングリコール １０．５ ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレン グリコールエーテル ３．２ 実施例１と同一の方法により得たペプチド誘導体 ０．５ 精製水 ５２．１ 実施例１４ 常法により、次の組成の皮膚外用剤を製造した。なお、
ペプチド誘導体を除き、全て市販品を使用した。

【００８５】 パラオキシ安息香酸エチル ０．１（％） パラオキシ安息香酸ブチル ０．１ ラウロマクロゴール ０．５ セタノール ２０．０ 白色ワセリン ４０．０ 精製水 ３４．３ 実施例２と同一の方法により得たペプチド誘導体 ５．０ 次に、この発明のペプチド誘導体と比較するための化合
物の製造例を比較例として示す。 比較例１ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりにFmoc-L-Gln(T
rt)-OH（ＰＥ社製）５９７ｍｇ（１．０ｍｍｏｌ）を用
いたこと、およびその他のアミノ酸ブロックを全てＤ体
のものの代わりにＬ体のもの（全てＰＥ社製）を用いた
ことを除き、実施例１と同一の方法により、次式

【００８６】

【化３０】

【００８７】により示される白色粉末状の化合物約４
３．２ｍｇ（収率約４４％）を得た。 比較例２ Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの代わりにFmoc-D-Gln(T
rt)-OH（渡辺化学工業社製）５９７ｍｇ（１．０ｍｍｏ
ｌ）を用いたことを除き、実施例１と同一の方法によ
り、次式

【００８８】

【化３１】

【００８９】により示される白色粉末状の化合物約４
９．０ｍｇ（収率約５０％）を得た。次に、この発明の
ペプチド誘導体を製造するための中間体の製造例を参考
例として示す。なお、以下に記載する１Ｈ−ＮＭＲ（核
磁気共鳴）スペクトル（５００ＭＨｚ）のデータは、全
て重ジメチルスルホキシド溶媒中で、テトラメチルシラ
ン（ＴＭＳ）を内部標準として常法により測定した結果
である。 参考例１［Ac-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの製造］ Ac-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHを、公知の方法［ケミカル
・アンド・ファーマシューティカル・ブレティン(Chemi
cal and Pharmaceutical Bulletin)、第20巻、第３号、
第 609ページ、1972年］により次のとおり製造した。

【００９０】２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッ
チ社製）１．９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、ピラゾール
（東京化成工業社製）２．０４ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）
および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物をア
ルゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、１．５時間加
熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣の粘稠な
油状物をクロロホルム７５ｍｌに溶解させ、室温下で一
夜撹拌した。析出した結晶を濾取し、クロロホルムで洗
浄し、乾燥し、次式

【００９１】

【化３２】

【００９２】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(Pyra
zol-1-yl)-OH約１．５４ｇ（収率約５１．９％）を得
た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭＲスペクト
ルは、次のとおりであった。 融点 １５７℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．７９（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８
Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．４７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈ
ｚ，１４Ｈｚ），４．５９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，
８Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），７．
６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），７．９３（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝８Ｈｚ） 参考例２［Fmoc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OHの製造］ 参考例１のAc-DL-Ala(Pyrazol-1-yl)-OH７９３ｍｇ
（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添加し、
アルゴンガス雰囲気下、１０５℃の油浴で、２時間加熱
還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減圧下に
濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意しなが
ら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和し、さ
らに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加して溶
解し、室温で撹拌しながら、Ｎ−（９−フルオレニルメ
トキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（以下、Fmoc
ONSuと略記する。渡辺化学工業社製）２．０２ｇ（６．
０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業社製）
３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で一夜撹
拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、エーテルで
２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加して酸性
とし、酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。減圧下に溶媒留去し、残渣結晶を酢酸エチル
−ヘキサンから再結晶して、次式

【００９３】

【化３３】

【００９４】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(Py
razol-1-yl)-OH約８２６ｍｇ（収率約５４．７％）を得
た。得られた化合物の融点は、１３４〜１３７℃であっ
た。 参考例３［Ac-DL-Ala(1H-1,2,4-Triazol-1-yl)-OH の製
造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、１，２，４−トリアゾー
ル（東京化成工業社製）２．０７ｇ（３０．０ｍｍｏ
ｌ）および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物
をアルゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、２時間加
熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣の粘稠な
油状物をクロロホルム７５ｍｌに溶解させ、室温下で一
夜撹拌した。析出した結晶を濾取し、クロロホルムで洗
浄し、乾燥し、次式

【００９５】

【化３４】

【００９６】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(1H-
1,2,4-Triazol-1-yl)-OH 約１．７４ｇ（収率約５８．
６％）を得た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルは、次のとおりであった。 融点 ２１１〜２１２℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．８０（３Ｈ，ｓ），４．４４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８
Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．５５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈ
ｚ，１４Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，
８Ｈｚ），７．９６（１Ｈ，ｓ），８．２４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），８．４１（１Ｈ，ｓ） 参考例４［Fmoc-DL-Ala(1H-1,2,4-Triazol-1-yl)-OH の
製造］ 参考例３のAc-DL-Ala(1H-1,2,4-Triazol-1-yl)-OH ７９
３ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添
加し、アルゴンガス雰囲気下、１０５℃の油浴で、２時
間加熱還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減
圧下に濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意
しながら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和
し、さらに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加
して溶解し、室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ
（６．０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業
社製）３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で
一夜撹拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、エー
テルで２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加し
て酸性とし、酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。減圧下に溶媒留去し、残渣結晶を酢酸
エチル−ヘキサンから再結晶して、次式

【００９７】

【化３５】

【００９８】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(1H
-1,2,4-Triazol-1-yl)-OH 約１．０９ｇ（収率約７２．
３％）を得た。得られた化合物の融点は、２０２〜２０
３℃であった。 参考例５［Ac-DL-Ala(1H-1,2,3-Triazol-1-yl)-OH の製
造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、１Ｈ−１，２，３−トリ
アゾール（アルドリッチ社製）２．０７ｇ（３０．０ｍ
ｍｏｌ）および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混
合物をアルゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、１．
５時間加熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣
の粘稠な油状物を酢酸エチル４５ｍｌに溶解させ、室温
下で一夜撹拌した。析出した結晶を濾取し、洗浄し、酢
酸エチルで洗浄し、乾燥し、次式

【００９９】

【化３６】

【０１００】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(1H-
1,2,3-Triazol-1-yl)-OH 約１．７４ｇ（収率約５８．
６％）を得た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルは、次のとおりであった。 融点 １３２〜１３３℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．７９（３Ｈ，ｓ），４．６１−４．７０（２Ｈ，
ｍ），４．７６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４Ｈｚ，１３Ｈ
ｚ），７．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．７６Ｈｚ），８．
０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．７６Ｈｚ），８．２９（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ） 参考例６［Fmoc-DL-Ala(1H-1,2,3-Triazol-1-yl)-OH の
製造］ 参考例５のAc-DL-Ala(1H-1,2,3-Triazol-1-yl)-OH ７９
３ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添
加し、アルゴンガス雰囲気下、１０５℃の油浴で、２時
間加熱還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減
圧下に濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意
しながら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和
し、さらに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加
して溶解し、室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ
（６．０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業
社製）３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で
一夜撹拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、エー
テルで２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加し
て酸性とし、酢酸エチルで３回抽出し、無水硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。減圧下に溶媒留去し、残渣結晶を酢酸
エチル−ヘキサンから再結晶し、次式

【０１０１】

【化３７】

【０１０２】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(1H
-1,2,3-Triazol-1-yl)-OH 約１．３６ｇ（収率約８９．
７％）を得た。得られた化合物の融点は、１７９〜１８
０℃であった。 参考例７［Ac-DL-Ala(3Me-Pyrazol-1-yl)-OHおよびAc-D
L-Ala(5Me-Pyrazol-1-yl)-OH混合物の製造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、３−メチルピラゾール
（東京化成工業社製）２．４６ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）
および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物をア
ルゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、１．５時間加
熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣の粘稠な
油状物をエーテル４５ｍｌに溶解させ、室温下で一夜撹
拌した。析出した結晶を濾取し、エーテルで洗浄し、乾
燥し、次式

【０１０３】

【化３８】

【０１０４】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(3Me-
Pyrazol-1-yl)-OHおよびAc-DL-Ala(5Me-Pyrazol-1-yl)-
OHの混合物約１．８０ｇ（収率約５６．８％）を得た。
得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭＲスペクトル
は、次のとおりであった。 融点 １３８〜１４２℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．８０（３Ｈ，ｓ），２．１３（０．６３Ｈ，ｓ），
２．２１（０．３７Ｈ，ｓ），４．２３（０．６３Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．２７（０．３７
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．３４（０．６
３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．３７（０．
３７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．５４
（０．６３Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈｚ），４．６２
（０．３７Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈｚ），５．９６
８（０．３７Ｈ，ｄ），５．９７２（０．６３Ｈ，
ｄ），７．３０（０．３７Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），７．
３０（０．６３Ｈ，ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ），７．９４（１
Ｈ，ｓ） 参考例８［Fmoc-DL-Ala(3Me-Pyrazol-1-yl)-OHおよびFm
oc-DL-Ala(5Me-Pyrazol-1-yl)-OH混合物の製造］ 参考例７のAc-DL-Ala(3Me-Pyrazol-1-yl)-OHおよびAc-D
L-Ala(5Me-Pyrazol-1-yl)-OHの混合物８４５ｍｇ（４．
０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添加し、アルゴ
ンガス雰囲気下で、１０５℃の油浴で２時間加熱還流
し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減圧下に濃縮
乾固した。残渣を水に溶解し、発泡に注意しながら炭酸
ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和し、さらに１
０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加して溶解し、
室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ（６．０ｍｍ
ｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業社製）３０ｍ
ｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で一夜撹拌し
た。反応混合物に水を添加して希釈し、エーテルで２回
洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加して酸性と
し、室温下で撹拌し、析出した結晶を濾取し、水で３回
洗浄し、乾燥した。得られた結晶をエタノール−ヘキサ
ンから再結晶して、次式

【０１０５】

【化３９】

【０１０６】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(3M
e-Pyrazol-1-yl)-OHおよびFmoc-DL-Ala(5Me-Pyrazol-1-
yl)-OHの混合物約１．４１ｇ（収率約９０．０％）を得
た。得られた化合物の融点は、１５０〜１５４℃であっ
た。 参考例９［Ac-DL-Ala(4Me-Pyrazol-1-yl)-OHの製造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、４−メチルピラゾール
（アルドリッチ社製）２．４６ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）
および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物をア
ルゴンガス雰囲気下で、１４０℃の油浴で、１．５時間
加熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣の粘稠
な油状物をエーテル４５ｍｌに溶解させ、室温下で一夜
撹拌した。析出した結晶を濾取し、エーテルで洗浄し、
乾燥し、次式

【０１０７】

【化４０】

【０１０８】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(4Me-
Pyrazol-1-yl)-OH約１．９４ｇ（収率約６１．１％）を
得た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭＲスペク
トルは、次のとおりであった。 融点 １６８〜１６９℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．８０（３Ｈ，ｓ），１．９８（３Ｈ，ｓ），４．２
６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．３８
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．５５（１
Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，
ｓ），７．３９（１Ｈ，ｓ），８．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８Ｈｚ） 参考例１０［Fmoc-DL-Ala(4Me-Pyrazol-1-yl)-OHの製
造］ 参考例９のAc-DL-Ala(4Me-Pyrazol-1-yl)-OH８４５ｍｇ
（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添加し、
アルゴンガス雰囲気下で、１０５℃の油浴で、２時間加
熱還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減圧下
に濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意しな
がら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和し、
さらに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加して
溶解し、室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ
（６．０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業
社製）３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で
一夜撹拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、エー
テルで２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加し
て酸性とし、室温下で撹拌し，析出した結晶を濾取し、
水で３回洗浄し、乾燥した。得られた結晶をエタノール
−ヘキサンから再結晶して、次式

【０１０９】

【化４１】

【０１１０】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(4M
e-Pyrazol-1-yl)-OH約１．４２ｇ（収率約９０．４％）
を得た。得られた化合物の融点は、１６７．５〜１６
８．５℃であった。 参考例１１［Ac-DL-Ala(4Br-Pyrazol-1-yl)-OHの製造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、４−ブロモピラゾール
（アルドリッチ社製）４．４１ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）
および酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物をア
ルゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、１．５時間加
熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣固体をエ
ーテルを添加して良く粉砕し、室温下で一夜撹拌した。
結晶を濾取し、エーテルで洗浄し、乾燥し、次式

【０１１１】

【化４２】

【０１１２】により示される白色結晶のAc-DL-Ala(4Br-
Pyrazol-1-yl)-OH約２．６５ｇ（収率約６４．１％）を
得た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭＲスペク
トルは、次のとおりであった。 融点 １６８〜１６９℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．８０（３Ｈ，ｓ），４．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８
Ｈｚ，１４Ｈｚ），４．４６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈ
ｚ，１４Ｈｚ），４．６０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５Ｈｚ，
８Ｈｚ），７．５５（１Ｈ，ｓ），７．８８（１Ｈ，
ｓ），８．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） 参考例１２［Fmoc-DL-Ala(4Br-Pyrazol-1-yl)-OHの製
造］ 参考例１１のAc-DL-Ala(4Br-Pyrazol-1-yl)-OH１８２５
ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添加
し、アルゴンガス雰囲気下で、１０５℃の油浴で、２時
間加熱還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減
圧下に濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意
しながら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和
し、さらに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加
して溶解し、室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ
（６．０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業
社製）３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で
一夜撹拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、エー
テルで２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸を添加し
て酸性とし、エーテルで３回抽出し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、溶媒を留去した。残渣油状物をヘキサンと
処理して結晶化させた。得られた結晶をイソプロピルエ
ーテル−ヘキサンから再結晶して、次式

【０１１３】

【化４３】

【０１１４】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(4B
r-Pyrazol-1-yl)-OH約１．７０ｇ（収率約９３．４％）
を得た。得られた化合物の融点は、１６８〜１６９℃で
あった。 参考例１３［Ac-DL-Ala(Benzotriazol-1-yl)-OH の製
造］ ２−アセトアミドアクリル酸（アルドリッチ社製）１．
９４ｇ（１５．０ｍｍｏｌ）、ベンゾトリアゾール（東
京化成工業社製）３．５７１ｇ（３０．０ｍｍｏｌ）お
よび酢酸（和光純薬工業社製）４５ｍｌの混合物をアル
ゴンガス雰囲気下、１４０℃の油浴で、１．７５時間加
熱還流した。空冷後、酢酸を減圧留去し、残渣にエーテ
ルを添加して処理し、結晶化させた。このものを粉砕
し、減圧乾燥し、炭酸ナトリウム水溶液に溶解させてエ
ーテルで洗浄した。水層を塩酸で酸性とし、室温下で一
夜撹拌した。結晶を濾取し、水で３回、次いでエーテル
で２回洗浄し、乾燥し、次式

【０１１５】

【化４４】

【０１１６】により示される白色結晶のAc-DL -Ala(Ben
zotriazol-1-yl)-OH約１．３７ｇ（収率約３６．８％）
を得た。得られた化合物の融点および１Ｈ−ＮＭＲスペ
クトルは、次のとおりであった。 融点 １８７〜１８８℃ １Ｈ−ＮＭＲ δ（ｐｐｍ） １．６８（３Ｈ，ｓ），４．７８（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５
Ｈｚ，８Ｈｚ），４．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，
１４Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，８Ｈ
ｚ），７．４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．５６
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８Ｈｚ），８．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ） 参考例１４［Fmoc-DL-Ala(Benzotriazol-1-yl)-OH の製
造］ 参考例１３のAc-DL-Ala(Benzotriazol-1-yl)-OH ９９３
ｍｇ（４．０ｍｍｏｌ）に、１０％塩酸３０ｍｌを添加
し、アルゴンガス雰囲気下で、１０５℃の油浴で、２時
間加熱還流し、得られた反応液を綿栓濾過し、濾液を減
圧下に濃縮乾固した。残渣を水に溶解させ、発泡に注意
しながら炭酸ナトリウムの粉末を少しずつ添加して中和
し、さらに１０％炭酸ナトリウム水溶液３０ｍｌを添加
して溶解し、室温で撹拌しながら、FmocONSu２．０２ｇ
（６．０ｍｍｏｌ）のジメトキシエタン（東京化成工業
社製）３０ｍｌ溶液を滴下した。滴下完了後、室温下で
一夜撹拌した。反応混合物に水を添加して希釈し、すば
やくエーテルで２回洗浄した。水層に、撹拌下で濃塩酸
を添加して酸性とし、室温下で撹拌し，析出した結晶を
濾取し、水で３回洗浄した。このものを酢酸エチルに加
熱溶解させて無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下に溶
媒を留去した。残渣結晶を酢酸エチル−ヘキサンから再
結晶して、次式

【０１１７】

【化４５】

【０１１８】により示される白色結晶のFmoc-DL-Ala(Be
nzotriazol-1-yl)-OH 約１．３０ｇ（収率約７６．１
％）を得た。得られた化合物は１６０℃付近で一旦湿潤
し、変性固化した後、１９９〜２０２℃で融解した。

【０１１９】

【発明の効果】以上、詳しく説明したとおり、この出願
の発明によって、抗真菌活性に優れ、しかも安全である
新規ペプチド誘導体と、これを有効成分とする抗真菌剤
が提供される。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 次の式（１） 【化１】 ［ただし、式中Ｘａａは次式（２） 【化２】 ｛ただし、式中ｎは整数１〜３を示し、Ａは次式（３） 【化３】 （ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキル基またはハ
   ロゲン原子を示す。）のうちのいずれかで示されるヘテ
   ロアリール基を示す。｝で示されるアミノ酸残基を示
   す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のアミノ酸配列を有
   するペプチド誘導体またはそれらの薬理学的に許容され
   る塩類。
2. 【請求項２】 次の式（１） 【化４】 ［ただし、式中Ｘａａは次式（２） 【化５】 ｛ただし、式中ｎは整数１〜３を示し、Ａは次式（３） 【化６】 （ただし、式中Ｒは水素原子、低級アルキル基またはハ
   ロゲン原子を示す。）のうちのいずれかで示されるヘテ
   ロアリール基を示す。｝で示されるアミノ酸残基を示
   す。］で示されるＤ体もしくはＬ体のアミノ酸配列を有
   するペプチド誘導体またはそれらの薬理学的に許容され
   る塩類からなる群より選択される化合物の１種または２
   種以上の混合物を有効成分として含有する抗真菌剤。