JPH11103870A - 新規化合物 - Google Patents
新規化合物Info
- Publication number
- JPH11103870A JPH11103870A JP10193551A JP19355198A JPH11103870A JP H11103870 A JPH11103870 A JP H11103870A JP 10193551 A JP10193551 A JP 10193551A JP 19355198 A JP19355198 A JP 19355198A JP H11103870 A JPH11103870 A JP H11103870A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polypeptide
- polynucleotide
- rnc
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 182
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 177
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 173
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 134
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 134
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 134
- 101150079036 rnc gene Proteins 0.000 claims abstract description 88
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 39
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 47
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 43
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 37
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 31
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 29
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 24
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 22
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 21
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 13
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 64
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 abstract description 30
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 abstract description 29
- 239000000523 sample Substances 0.000 abstract description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 abstract description 4
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 43
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 22
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 10
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 10
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 10
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 8
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 7
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 6
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 6
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 5
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 description 5
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 206010014665 endocarditis Diseases 0.000 description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 5
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 description 5
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 229920000140 heteropolymer Polymers 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- 206010014568 Empyema Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 3
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000005730 ADP ribosylation Effects 0.000 description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 206010071699 Infectious pleural effusion Diseases 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 206010068796 Wound contamination Diseases 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 230000006251 gamma-carboxylation Effects 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 2
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Chemical group 0.000 description 2
- 239000002184 metal Chemical group 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 2
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DFUSDJMZWQVQSF-XLGIIRLISA-N (2r)-2-methyl-2-[(4r,8r)-4,8,12-trimethyltridecyl]-3,4-dihydrochromen-6-ol Chemical class OC1=CC=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 DFUSDJMZWQVQSF-XLGIIRLISA-N 0.000 description 1
- ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N (9Z)-octadecen-1-ol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCO ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BGNLUHXLSAQYRQ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O BGNLUHXLSAQYRQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N Ala-Gly-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QHASENCZLDHBGX-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N Ala-Lys-Val Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(C)N)CCCCN MDNAVFBZPROEHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N RCAUJZASOAFTAJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HOIFSHOLNKQCSA-FXQIFTODSA-N Asn-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HOIFSHOLNKQCSA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PPMTUXJSQDNUDE-CIUDSAMLSA-N Asn-Glu-Arg Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PPMTUXJSQDNUDE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- OGMDXNFGPOPZTK-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OGMDXNFGPOPZTK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JGIAYNNXZKKKOW-KKUMJFAQSA-N Asn-His-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N JGIAYNNXZKKKOW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O GLWFAWNYGWBMOC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OEUQMKNNOWJREN-AVGNSLFASA-N Asp-Gln-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N OEUQMKNNOWJREN-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- XWKBWZXGNXTDKY-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XWKBWZXGNXTDKY-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- ICRKQMRFXYDYMK-LAEOZQHASA-N Gln-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O ICRKQMRFXYDYMK-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- SDSMVVSHLAAOJL-UKJIMTQDSA-N Gln-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N SDSMVVSHLAAOJL-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 1
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N Glu-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UTKUTMJSWKKHEM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N Glu-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LGYZYFFDELZWRS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MTAOBYXRYJZRGQ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N Glu-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O OCJRHJZKGGSPRW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N Glu-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JZJGEKDPWVJOLD-QEWYBTABSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N Glu-Thr-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HZISRJBYZAODRV-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N Glu-Tyr-Leu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 UUTGYDAKPISJAO-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ser Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GWCRIHNSVMOBEQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- KQDMENMTYNBWMR-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KQDMENMTYNBWMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N Gly-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CN TZOVVRJYUDETQG-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N Gly-Gln-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O BYYNJRSNDARRBX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)CN GGLIDLCEPDHEJO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 1
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- BDHUXUFYNUOUIT-SRVKXCTJSA-N His-Asp-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BDHUXUFYNUOUIT-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N His-Leu-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 UROVZOUMHNXPLZ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- CWJQMCPYXNVMBS-STECZYCISA-N Ile-Arg-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N CWJQMCPYXNVMBS-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N Ile-Lys-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- SHVFUCSSACPBTF-VGDYDELISA-N Ile-Ser-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N SHVFUCSSACPBTF-VGDYDELISA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PVMPDMIKUVNOBD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CIVKXGPFXDIQBV-WDCWCFNPSA-N Leu-Gln-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CIVKXGPFXDIQBV-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- LAGPXKYZCCTSGQ-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O LAGPXKYZCCTSGQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O LAPSXOAUPNOINL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HRTRLSRYZZKPCO-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N Leu-Ser-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N AMSSKPUHBUQBOQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- DGAAQRAUOFHBFJ-CIUDSAMLSA-N Lys-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DGAAQRAUOFHBFJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N Lys-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YXPJCVNIDDKGOE-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N Lys-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JOSAKOKSPXROGQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N Lys-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NYTDJEZBAAFLLG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- HWROAFGWPQUPTE-OSUNSFLBSA-N Met-Ile-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N HWROAFGWPQUPTE-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- WPTHAGXMYDRPFD-SRVKXCTJSA-N Met-Lys-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WPTHAGXMYDRPFD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000087624 Monoclona Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N Phe-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FRPVPGRXUKFEQE-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- MGBRZXXGQBAULP-DRZSPHRISA-N Phe-Glu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 MGBRZXXGQBAULP-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- CXMSESHALPOLRE-MEYUZBJRSA-N Phe-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)O CXMSESHALPOLRE-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O WOIFYRZPIORBRY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N Ser-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N Ser-Gly-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O YMTLKLXDFCSCNX-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- ADPHPKGWVDHWML-PPCPHDFISA-N Thr-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N ADPHPKGWVDHWML-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N Thr-Ser-Tyr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 HUPLKEHTTQBXSC-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N Tyr-Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 SINRIKQYQJRGDQ-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N Val-Arg-Glu Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KKHRWGYHBZORMQ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N Val-Glu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N Val-Leu-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N HGJRMXOWUWVUOA-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MGVYZTPLGXPVQB-CYDGBPFRSA-N Val-Met-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](C(C)C)N MGVYZTPLGXPVQB-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010011559 alanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000010516 arginylation Effects 0.000 description 1
- 230000010065 bacterial adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000008952 bacterial invasion Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004709 cell invasion Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012050 conventional carrier Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003413 degradative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 1
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003221 ear drop Substances 0.000 description 1
- 229940047652 ear drops Drugs 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 239000003885 eye ointment Substances 0.000 description 1
- 230000022244 formylation Effects 0.000 description 1
- 238000006170 formylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical group 0.000 description 1
- 210000003709 heart valve Anatomy 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 239000002324 mouth wash Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000007498 myristoylation Effects 0.000 description 1
- 239000003883 ointment base Substances 0.000 description 1
- XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N oleyl alcohol Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCCCCO XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055577 oleyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010024607 phenylalanylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000013823 prenylation Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940043131 pyroglutamate Drugs 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003685 thermal hair damage Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 化合物を抗生物質活性についてスクリーニン
グするために用いることができ、感染、機能障害および
疾患の発生病理にてその役割を決定するのに用いること
もできる因子の解明が望まれている。 【解決手段】 本発明は、上記課題を解決するのに用い
ることができる、配列番号２のアミノ酸を含むポリペプ
チドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なく
とも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、および
ｒｎｃポリペプチドおよびｒｎｃポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドおよび組換え技法により該ポリペ
プチドの製法を提供するものである。さらには、抗菌化
合物についてスクリーニングするのにｒｎｃポリペプチ
ドを利用する方法を提供する。
グするために用いることができ、感染、機能障害および
疾患の発生病理にてその役割を決定するのに用いること
もできる因子の解明が望まれている。 【解決手段】 本発明は、上記課題を解決するのに用い
ることができる、配列番号２のアミノ酸を含むポリペプ
チドをコードしているポリヌクレオチドに対して少なく
とも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、および
ｒｎｃポリペプチドおよびｒｎｃポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドおよび組換え技法により該ポリペ
プチドの製法を提供するものである。さらには、抗菌化
合物についてスクリーニングするのにｒｎｃポリペプチ
ドを利用する方法を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および、それらの製
造および使用、ならびにそれらの変種、アゴニストおよ
びアンタゴニスト、ならびにそれらの使用に関する。特
に、これらの点および他の点に関して、本発明は、リボ
ヌクレアーゼIIIファミリー（以下、「ｒｎｃ」とい
う）の新規ポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関す
る。
ポリヌクレオチド、ポリペプチド、および、それらの製
造および使用、ならびにそれらの変種、アゴニストおよ
びアンタゴニスト、ならびにそれらの使用に関する。特
に、これらの点および他の点に関して、本発明は、リボ
ヌクレアーゼIIIファミリー（以下、「ｒｎｃ」とい
う）の新規ポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関す
る。
【０００２】
【従来の技術】ストレプトコッカス属（Streptococci）
は医学的に重要な微生物属を形成しており、ヒトに，例
えば中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎を包含する、いくつかの型の疾患を引き起
こすことが知られている。ストレプトコッカス属の単離
から１００年以上も経過しているため、ストレプトコッ
カス・ニューモニアエ（Streptococcus pneumoniae）
は、より詳細な研究が為された微生物の一つである。例
えば、事実、ＤＮＡが遺伝物質であるという我々の初期
の理解の大部分は、この微生物を用いたGriffithならび
に、Avery、MacleodおよびMcCartyの研究にて断言され
た。エス・ニューモニアエに関する研究は膨大であるに
もかかわらず、この微生物の毒性に関しては多くの疑問
が残されている。抗生物質の開発のための標的としてス
トレプトコッカス属の遺伝子および遺伝子産物を用いる
のはとりわけ好ましいことである。
は医学的に重要な微生物属を形成しており、ヒトに，例
えば中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎を包含する、いくつかの型の疾患を引き起
こすことが知られている。ストレプトコッカス属の単離
から１００年以上も経過しているため、ストレプトコッ
カス・ニューモニアエ（Streptococcus pneumoniae）
は、より詳細な研究が為された微生物の一つである。例
えば、事実、ＤＮＡが遺伝物質であるという我々の初期
の理解の大部分は、この微生物を用いたGriffithならび
に、Avery、MacleodおよびMcCartyの研究にて断言され
た。エス・ニューモニアエに関する研究は膨大であるに
もかかわらず、この微生物の毒性に関しては多くの疑問
が残されている。抗生物質の開発のための標的としてス
トレプトコッカス属の遺伝子および遺伝子産物を用いる
のはとりわけ好ましいことである。
【０００３】ストレプトコッカス・ニューモニアエ感染
の頻度は、過去２０年において劇的に増加している。こ
れは、多抗生物質耐性菌の出現および免疫系の弱いヒト
の数の増加に起因している。標準的な抗生物質のいくら
かまたはすべてに対して耐性であるストレプトコッカス
・ニューモニアエ株を単離することは、いまや珍しいこ
とではない。これにより、この微生物に対する新しい抗
微生物剤および診断方法の両方が必要とされている。
の頻度は、過去２０年において劇的に増加している。こ
れは、多抗生物質耐性菌の出現および免疫系の弱いヒト
の数の増加に起因している。標準的な抗生物質のいくら
かまたはすべてに対して耐性であるストレプトコッカス
・ニューモニアエ株を単離することは、いまや珍しいこ
とではない。これにより、この微生物に対する新しい抗
微生物剤および診断方法の両方が必要とされている。
【０００４】リボヌクレアーゼIII（ＲＮＡｓｅIII）は
高温における生存（イー・コリ(E.coli),４５℃）に必
要であり、多くの安定なＲＮＡおよびｍＲＮＡ種のプロ
セシングに関与する。イー・コリから解析された該酵素
は、１６Ｓおよび２３ＳｒＲＮＡ間の保存部位で二本鎖
ＲＮＡを開裂し、ポリシストロン性ファージＴ７ｍＲＮ
Ａを多数のモノシストロン性ｍＲＮＡに開裂する。ＲＮ
ＡｓｅIII開裂は、ｍＲＮＡ安定性制御において関与し
ており、それゆえ、多くのイー・コリ遺伝子の遺伝子発
現に作用する可能性がある。さらに、イー・コリにおい
て、推定されるＲＮＡｓｅIIIモジュレーターＳｈｕＢ
の非存在下、野生型ＲＮＡｓｅIIIは致死的である。
高温における生存（イー・コリ(E.coli),４５℃）に必
要であり、多くの安定なＲＮＡおよびｍＲＮＡ種のプロ
セシングに関与する。イー・コリから解析された該酵素
は、１６Ｓおよび２３ＳｒＲＮＡ間の保存部位で二本鎖
ＲＮＡを開裂し、ポリシストロン性ファージＴ７ｍＲＮ
Ａを多数のモノシストロン性ｍＲＮＡに開裂する。ＲＮ
ＡｓｅIII開裂は、ｍＲＮＡ安定性制御において関与し
ており、それゆえ、多くのイー・コリ遺伝子の遺伝子発
現に作用する可能性がある。さらに、イー・コリにおい
て、推定されるＲＮＡｓｅIIIモジュレーターＳｈｕＢ
の非存在下、野生型ＲＮＡｓｅIIIは致死的である。
【０００５】明らかに、本発明の新規化合物などの抗生
物質活性について化合物をスクリーンするのに有用であ
る現今の利益を有する因子が必要とされている。かかる
因子はまた、感染、機能不全および疾患の病因における
それらの役割を決定するのにも有用である。感染、機能
不全または疾患の防御、改善または治療において役割を
担う該因子およびそれらのアンタゴニストおよびアゴニ
ストの同定および解析もまた必要とされている。本発明
のポリペプチドは、公知のバシラス・サチリスのｒｎｃ
タンパク質に相同的なアミノ酸配列を有する。
物質活性について化合物をスクリーンするのに有用であ
る現今の利益を有する因子が必要とされている。かかる
因子はまた、感染、機能不全および疾患の病因における
それらの役割を決定するのにも有用である。感染、機能
不全または疾患の防御、改善または治療において役割を
担う該因子およびそれらのアンタゴニストおよびアゴニ
ストの同定および解析もまた必要とされている。本発明
のポリペプチドは、公知のバシラス・サチリスのｒｎｃ
タンパク質に相同的なアミノ酸配列を有する。
【０００６】
【発明の要約】表1（配列番号２）に示されるアミノ酸
配列およびバシラス・サチリスのｒｎｃタンパク質など
の公知のアミノ酸配列または他のタンパク質の配列間の
相同性により新規なｒｎｃポリペプチドであると同定さ
れているポリペプチドを提供することが、本発明の一つ
の目的である。さらに、ｒｎｃポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチド、特に本明細書においてｒｎｃと称
するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供
することも本発明の目的である。本発明の特に好ましい
具体例において、ポリヌクレオチドは完全長遺伝子また
はその変種を含む表1（配列番号１）に示される配列を
含むｒｎｃポリペプチドをコードする領域を含む。
配列およびバシラス・サチリスのｒｎｃタンパク質など
の公知のアミノ酸配列または他のタンパク質の配列間の
相同性により新規なｒｎｃポリペプチドであると同定さ
れているポリペプチドを提供することが、本発明の一つ
の目的である。さらに、ｒｎｃポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチド、特に本明細書においてｒｎｃと称
するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供
することも本発明の目的である。本発明の特に好ましい
具体例において、ポリヌクレオチドは完全長遺伝子また
はその変種を含む表1（配列番号１）に示される配列を
含むｒｎｃポリペプチドをコードする領域を含む。
【０００７】本発明の別の特に好ましい具体例には、表
1（配列番号２）のアミノ酸配列またはその変種を含む
ストレプトコッカス・ニューモニアエ由来の新規なｒｎ
ｃタンパク質がある。本発明の別の態様によれば、寄託
株中に含まれるストレプトコッカス・ニューモニアエ０
１００９９３株より発現可能な成熟ポリペプチドをコー
ドする単離された核酸分子が提供される。本発明のさら
なる態様として、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを
含む、ｒｎｃ、特にストレプトコッカス・ニューモニア
エのｒｎｃをコードする単離された核酸分子が提供され
る。さらに本発明の具体例には、生物学的に、診断的
に、予防的に、臨床的にまたは治療的に有用なそれらの
変種、および、それらを含む組成物が含まれる。
1（配列番号２）のアミノ酸配列またはその変種を含む
ストレプトコッカス・ニューモニアエ由来の新規なｒｎ
ｃタンパク質がある。本発明の別の態様によれば、寄託
株中に含まれるストレプトコッカス・ニューモニアエ０
１００９９３株より発現可能な成熟ポリペプチドをコー
ドする単離された核酸分子が提供される。本発明のさら
なる態様として、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡを
含む、ｒｎｃ、特にストレプトコッカス・ニューモニア
エのｒｎｃをコードする単離された核酸分子が提供され
る。さらに本発明の具体例には、生物学的に、診断的
に、予防的に、臨床的にまたは治療的に有用なそれらの
変種、および、それらを含む組成物が含まれる。
【０００８】本発明の他の態様によれば、本発明のポリ
ヌクレオチドの治療的または予防的目的、特に、遺伝学
的免疫化における使用が提供される。本発明の特に好ま
しい具体例には、ｒｎｃの自然に生じる対立遺伝子変種
およびそれによりコードされるポリペプチドがある。本
発明の別の態様として、本明細書においてｒｎｃと称さ
れるストレプトコッカス・ニューモニアエの新規ポリペ
プチド、ならびに、生物学的に、診断的に、予防的に、
臨床的にまたは治療的に有用なそれらの変種および同じ
物を含む組成物が提供される。本発明の特に好ましい具
体例には、ｒｎｃ遺伝子の自然に生じる対立遺伝子によ
りコードされるｒｎｃポリペプチドの変種がある。本発
明の好ましい具体例において、上述したｒｎｃポリペプ
チドを製造する方法が提供される。
ヌクレオチドの治療的または予防的目的、特に、遺伝学
的免疫化における使用が提供される。本発明の特に好ま
しい具体例には、ｒｎｃの自然に生じる対立遺伝子変種
およびそれによりコードされるポリペプチドがある。本
発明の別の態様として、本明細書においてｒｎｃと称さ
れるストレプトコッカス・ニューモニアエの新規ポリペ
プチド、ならびに、生物学的に、診断的に、予防的に、
臨床的にまたは治療的に有用なそれらの変種および同じ
物を含む組成物が提供される。本発明の特に好ましい具
体例には、ｒｎｃ遺伝子の自然に生じる対立遺伝子によ
りコードされるｒｎｃポリペプチドの変種がある。本発
明の好ましい具体例において、上述したｒｎｃポリペプ
チドを製造する方法が提供される。
【０００９】本発明のさらに別の態様によれば、たとえ
ば抗生物質を含む抗細菌剤として有用な該ポリペプチド
に対する阻害剤が提供される。本発明の特定の好ましい
具体例によれば、ｒｎｃの発現の評価、たとえば、中耳
炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸お
よび心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜
炎などの疾患の治療、遺伝的変化のアッセイ、および、
細菌、特にストレプトコッカス・ニューモニアエ細菌に
対する免疫学的応答を引き起こすための生物へのｒｎｃ
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与のための製
造物、組成物および方法が提供される。
ば抗生物質を含む抗細菌剤として有用な該ポリペプチド
に対する阻害剤が提供される。本発明の特定の好ましい
具体例によれば、ｒｎｃの発現の評価、たとえば、中耳
炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸お
よび心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜
炎などの疾患の治療、遺伝的変化のアッセイ、および、
細菌、特にストレプトコッカス・ニューモニアエ細菌に
対する免疫学的応答を引き起こすための生物へのｒｎｃ
ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与のための製
造物、組成物および方法が提供される。
【００１０】本発明のこの態様および他の態様の特定の
好ましい具体例によれば、ｒｎｃポリヌクレオチド配列
と特にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ポリヌクレオチドが提供される。本発明の特定の好まし
い具体例によれば、ｒｎｃポリペプチドに対する抗体が
提供される。本発明の他の具体例において、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドと結合しまたはさも
なければ相互作用し、その活性を阻害または活性化する
化合物を同定する方法であって：本発明のポリペプチド
またはポリヌクレオチドとスクリーニングすべき化合物
とを、化合物およびポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ドの結合またはそれらの間の相互作用を可能とする条件
下で接触させ、化合物との結合または相互作用を評価し
（該結合または相互作用は、ポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドと化合物の結合または相互作用に応答する検
出可能なシグナルを提供できる二番目の成分と関連して
いる）：化合物とポリペプチドまたはポリヌクレオチド
との結合または相互作用により生じるシグナルの存在ま
たは非存在を検出することにより、化合物がポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドと結合しまたはさもなければ
相互作用し、その活性を活性化するかもしくは阻害する
かどうかを調べることを含む方法を提供する。
好ましい具体例によれば、ｒｎｃポリヌクレオチド配列
と特にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ポリヌクレオチドが提供される。本発明の特定の好まし
い具体例によれば、ｒｎｃポリペプチドに対する抗体が
提供される。本発明の他の具体例において、本発明のポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドと結合しまたはさも
なければ相互作用し、その活性を阻害または活性化する
化合物を同定する方法であって：本発明のポリペプチド
またはポリヌクレオチドとスクリーニングすべき化合物
とを、化合物およびポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ドの結合またはそれらの間の相互作用を可能とする条件
下で接触させ、化合物との結合または相互作用を評価し
（該結合または相互作用は、ポリペプチドまたはポリヌ
クレオチドと化合物の結合または相互作用に応答する検
出可能なシグナルを提供できる二番目の成分と関連して
いる）：化合物とポリペプチドまたはポリヌクレオチド
との結合または相互作用により生じるシグナルの存在ま
たは非存在を検出することにより、化合物がポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドと結合しまたはさもなければ
相互作用し、その活性を活性化するかもしくは阻害する
かどうかを調べることを含む方法を提供する。
【００１１】本発明のさらに別の態様によれば、好まし
くは、静菌性または殺菌性のアゴニストおよびアンタゴ
ニストである、ｒｎｃアゴニストおよびアンタゴニスト
が提供される。本発明のさらなる態様によれば、細胞ま
たは多細胞生物に投与するための、ｒｎｃポリヌクレオ
チドまたはｒｎｃポリペプチドを含む組成物が提供され
る。以下の記載を読むことおよび本発明の開示の他の部
分を読むことにより、開示される発明の精神および範囲
内の様々な変更および修飾が当業者に明らかとなるであ
ろう。
くは、静菌性または殺菌性のアゴニストおよびアンタゴ
ニストである、ｒｎｃアゴニストおよびアンタゴニスト
が提供される。本発明のさらなる態様によれば、細胞ま
たは多細胞生物に投与するための、ｒｎｃポリヌクレオ
チドまたはｒｎｃポリペプチドを含む組成物が提供され
る。以下の記載を読むことおよび本発明の開示の他の部
分を読むことにより、開示される発明の精神および範囲
内の様々な変更および修飾が当業者に明らかとなるであ
ろう。
【００１２】
定義 以下の説明は、本明細書において汎用される特定の用語
の理解を容易にするために示すものである。「宿主細
胞」は外来ポリヌクレオチド配列によりトランスフォー
メーションまたはトランスフェクションされた細胞であ
るか、またはトランスフォーメーションまたはトランス
フェクションすることのできる細胞である。
の理解を容易にするために示すものである。「宿主細
胞」は外来ポリヌクレオチド配列によりトランスフォー
メーションまたはトランスフェクションされた細胞であ
るか、またはトランスフォーメーションまたはトランス
フェクションすることのできる細胞である。
【００１３】「同一性」は、当該分野で公知であり、配
列の比較で調べられるような、２またはそれ以上のポリ
ペプチド配列あるいは２またはそれ以上のポリヌクレオ
チド配列の間の関係である。また、当該分野では、「同
一性」は、場合によっては、配列の鎖間の対合によって
調べられるような、ポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ド配列間の配列の関連性の度合を意味する。「同一性」
および「類似性」は、これに限定されるものではない
が、Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., e
d., Oxford University Press, New York, 1988; Bioco
mputing: Informatics and Genome Projects, Smith,
D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.
M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jer
sey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology,
von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequenc
e Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J.,
eds., M Stockton Press, New York, 1991; and Carill
o, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48:
1073 (1988）に記載されるような公知の方法により容易
に算出することができる。同一性を調べる好ましい方法
は、試験される配列間の最大の対合を与えるように設計
される。同一性および類似性を決定するための方法は公
的に利用できるコンピュータープログラムに集成されて
いる。二つの配列間の同一性および類似性を調べるため
の好ましいコンピュータープログラム法は、ＧＣＧプロ
グラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nucleic Acids Res
earch 12（1）：387（1984））、BLASTP、BLASTNおよび
FASTA（Atschul, S. F.ら、J. Molec. Biol. 215：403
（1990））を包含するが、これらに限定されるものでは
ない。ＢＬＡＳＴ Ｘプログラムは、ＮＣＢＩおよび他
の供給源から公的に利用可能である（BLAST Manual,Alt
schul, S.ら、NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Alts
chul, S.ら、J. Mol.Biol., 215:403-410(1990))。一例
として、配列番号１の対照ヌクレオチド配列に対して少
なくとも、例えば９５％の「同一性」を有するヌクレオ
チド配列を有するポリヌクレオチドは、そのポリヌクレ
オチド配列が配列番号１の対照ヌクレオチド配列のヌク
レオチド各１００個当たり５個までの点突然変異を含ん
でいてもよいことを除き、ポリヌクレオチドのヌクレオ
チド配列が対照配列と同一であることを意図とする。言
い換えれば、対照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％
同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
を得るためには、その対照配列におけるヌクレオチドの
５％までが欠失または別のヌクレオチドで置換されてい
てもよく、または対照配列における全ヌクレオチドの５
％までの数のヌクレオチドが対照配列中に挿入されてい
てもよい。対照配列のこれらの変異は、対照ヌクレオチ
ド配列の５’または３’末端位置で、またはそれら末端
位置の間のどこで起こってもよく、対照配列中のヌクレ
オチド間に個々に、または対照配列内の一またはそれ以
上の隣接する基において点在してもよい。同様に、配列
番号２の対照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば
９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプ
チドは、そのポリペプチド配列が配列番号２の対照アミ
ノ酸のアミノ酸各１００個当たり５個までのアミノ酸変
異を含んでいてもよいことを除き、そのポリペプチドの
アミノ酸配列が、対照配列と同一であることを意図とす
る。言い換えれば、対照アミノ酸配列に対して少なくと
も９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド
を得るためには、その対照配列におけるアミノ酸残基の
５％までが欠失または別のアミノ酸で置換されていても
よく、または対照配列における全アミノ酸残基の５％ま
での数のアミノ酸が対照配列中に挿入されていてもよ
い。対照配列のこれらの変化は対照アミノ酸配列のアミ
ノまたはカルボキシ末端位置で、またはそれら末端位置
の間のどこで起こってもよく、対照配列中の残基間に個
々に、または対照配列内の一またはそれ以上の隣接する
基において点在してもよい。
列の比較で調べられるような、２またはそれ以上のポリ
ペプチド配列あるいは２またはそれ以上のポリヌクレオ
チド配列の間の関係である。また、当該分野では、「同
一性」は、場合によっては、配列の鎖間の対合によって
調べられるような、ポリペプチドまたはポリヌクレオチ
ド配列間の配列の関連性の度合を意味する。「同一性」
および「類似性」は、これに限定されるものではない
が、Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., e
d., Oxford University Press, New York, 1988; Bioco
mputing: Informatics and Genome Projects, Smith,
D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Compute
r Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.
M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jer
sey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology,
von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequenc
e Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J.,
eds., M Stockton Press, New York, 1991; and Carill
o, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48:
1073 (1988）に記載されるような公知の方法により容易
に算出することができる。同一性を調べる好ましい方法
は、試験される配列間の最大の対合を与えるように設計
される。同一性および類似性を決定するための方法は公
的に利用できるコンピュータープログラムに集成されて
いる。二つの配列間の同一性および類似性を調べるため
の好ましいコンピュータープログラム法は、ＧＣＧプロ
グラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nucleic Acids Res
earch 12（1）：387（1984））、BLASTP、BLASTNおよび
FASTA（Atschul, S. F.ら、J. Molec. Biol. 215：403
（1990））を包含するが、これらに限定されるものでは
ない。ＢＬＡＳＴ Ｘプログラムは、ＮＣＢＩおよび他
の供給源から公的に利用可能である（BLAST Manual,Alt
schul, S.ら、NCBI NLM NIH Bethesda, MD 20894; Alts
chul, S.ら、J. Mol.Biol., 215:403-410(1990))。一例
として、配列番号１の対照ヌクレオチド配列に対して少
なくとも、例えば９５％の「同一性」を有するヌクレオ
チド配列を有するポリヌクレオチドは、そのポリヌクレ
オチド配列が配列番号１の対照ヌクレオチド配列のヌク
レオチド各１００個当たり５個までの点突然変異を含ん
でいてもよいことを除き、ポリヌクレオチドのヌクレオ
チド配列が対照配列と同一であることを意図とする。言
い換えれば、対照ヌクレオチド配列と少なくとも９５％
同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
を得るためには、その対照配列におけるヌクレオチドの
５％までが欠失または別のヌクレオチドで置換されてい
てもよく、または対照配列における全ヌクレオチドの５
％までの数のヌクレオチドが対照配列中に挿入されてい
てもよい。対照配列のこれらの変異は、対照ヌクレオチ
ド配列の５’または３’末端位置で、またはそれら末端
位置の間のどこで起こってもよく、対照配列中のヌクレ
オチド間に個々に、または対照配列内の一またはそれ以
上の隣接する基において点在してもよい。同様に、配列
番号２の対照アミノ酸配列に対して少なくとも、例えば
９５％の同一性を有するアミノ酸配列を有するポリペプ
チドは、そのポリペプチド配列が配列番号２の対照アミ
ノ酸のアミノ酸各１００個当たり５個までのアミノ酸変
異を含んでいてもよいことを除き、そのポリペプチドの
アミノ酸配列が、対照配列と同一であることを意図とす
る。言い換えれば、対照アミノ酸配列に対して少なくと
も９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチド
を得るためには、その対照配列におけるアミノ酸残基の
５％までが欠失または別のアミノ酸で置換されていても
よく、または対照配列における全アミノ酸残基の５％ま
での数のアミノ酸が対照配列中に挿入されていてもよ
い。対照配列のこれらの変化は対照アミノ酸配列のアミ
ノまたはカルボキシ末端位置で、またはそれら末端位置
の間のどこで起こってもよく、対照配列中の残基間に個
々に、または対照配列内の一またはそれ以上の隣接する
基において点在してもよい。
【００１４】「単離された」とは、「ヒトの手によ
り」、その天然の状態から変えられること、すなわち、
天然物の場合、その本来的な環境から変化または除去あ
るいは両方されたことを意味する。例えば、生体に天然
に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単
離された」ものではないが、その天然状態で共存する物
質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは、本明細書で用いる用語としての「単離された」
ものである。
り」、その天然の状態から変えられること、すなわち、
天然物の場合、その本来的な環境から変化または除去あ
るいは両方されたことを意味する。例えば、生体に天然
に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単
離された」ものではないが、その天然状態で共存する物
質から分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは、本明細書で用いる用語としての「単離された」
ものである。
【００１５】「ポリヌクレオチド（複数でも可）」は、
一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボ
ヌクレオチドのいずれをもいい、それらは非修飾ＲＮＡ
またはＤＮＡ、あるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであっ
てもよい。「ポリヌクレオチド」は、単鎖および二本鎖
ＤＮＡ、単鎖および二本鎖領域または単鎖、二本鎖およ
び三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、単鎖および二本鎖
ＲＮＡ、単鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、
および単鎖またはより典型的には二本鎖または三本鎖領
域または一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよ
いＤＮＡおよびＲＮＡを含有してなるハイブリッド分子
を包含するが、これに限定されない。加えて、本明細書
にて用いる「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮ
Ａ、あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方からなる三本鎖
領域をいう。これらの領域の鎖は同じ分子からのもので
も、異なる分子からのものでもよい。該領域は、これら
分子の一またはそれ以上の全てを含んでもよいが、より
典型的には、分子の幾つかの領域のみを含む。三本ヘリ
ックス領域の分子の一つは、しばしば、オリゴヌクレオ
チドである。本明細書にて用いる場合、「ポリヌクレオ
チド（複数でも可）」なる用語は、一つまたはそれ以上
の修飾された塩基を含有する上記ＤＮＡまたはＲＮＡを
包含する。すなわち、安定性または他の理由で修飾され
た骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも該用語が本明細書
で意図するところの「ポリヌクレオチド（複数でも
可）」である。さらに、イノシンなどの通常でない塩
基、またはトリチル化された塩基などの修飾塩基を含む
ＤＮＡまたはＲＮＡ（２つの例だけを示す）も、その用
語を本明細書で用いる場合のポリヌクレオチドである。
多種の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡになされており、当業
者に公知のように多くの有用な目的に使用されている。
本明細書で用いる「ポリヌクレオチド」なる語は、ポリ
ヌクレオチドのこのような化学的、酵素的または代謝的
に修飾された形態、ならびにウイルスおよび、例えば、
単純型細胞および複雑型細胞などの細胞に特徴的なＤＮ
ＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレ
オチド（複数でも可）」はしばしばオリゴヌクレオチド
（複数でも可）と称される比較的短いポリヌクレオチド
も包含する。
一般に、ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボ
ヌクレオチドのいずれをもいい、それらは非修飾ＲＮＡ
またはＤＮＡ、あるいは修飾ＲＮＡまたはＤＮＡであっ
てもよい。「ポリヌクレオチド」は、単鎖および二本鎖
ＤＮＡ、単鎖および二本鎖領域または単鎖、二本鎖およ
び三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、単鎖および二本鎖
ＲＮＡ、単鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、
および単鎖またはより典型的には二本鎖または三本鎖領
域または一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよ
いＤＮＡおよびＲＮＡを含有してなるハイブリッド分子
を包含するが、これに限定されない。加えて、本明細書
にて用いる「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡまたはＤＮ
Ａ、あるいはＲＮＡおよびＤＮＡの両方からなる三本鎖
領域をいう。これらの領域の鎖は同じ分子からのもので
も、異なる分子からのものでもよい。該領域は、これら
分子の一またはそれ以上の全てを含んでもよいが、より
典型的には、分子の幾つかの領域のみを含む。三本ヘリ
ックス領域の分子の一つは、しばしば、オリゴヌクレオ
チドである。本明細書にて用いる場合、「ポリヌクレオ
チド（複数でも可）」なる用語は、一つまたはそれ以上
の修飾された塩基を含有する上記ＤＮＡまたはＲＮＡを
包含する。すなわち、安定性または他の理由で修飾され
た骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡも該用語が本明細書
で意図するところの「ポリヌクレオチド（複数でも
可）」である。さらに、イノシンなどの通常でない塩
基、またはトリチル化された塩基などの修飾塩基を含む
ＤＮＡまたはＲＮＡ（２つの例だけを示す）も、その用
語を本明細書で用いる場合のポリヌクレオチドである。
多種の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡになされており、当業
者に公知のように多くの有用な目的に使用されている。
本明細書で用いる「ポリヌクレオチド」なる語は、ポリ
ヌクレオチドのこのような化学的、酵素的または代謝的
に修飾された形態、ならびにウイルスおよび、例えば、
単純型細胞および複雑型細胞などの細胞に特徴的なＤＮ
ＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。「ポリヌクレ
オチド（複数でも可）」はしばしばオリゴヌクレオチド
（複数でも可）と称される比較的短いポリヌクレオチド
も包含する。
【００１６】「ポリペプチド（複数でも可）」は、ペプ
チド結合または修飾ペプチド結合で互いに結合した２つ
またはそれ以上のアミノ酸を含有してなるいずれのペプ
チドまたはタンパク質をもいう。「ポリペプチド（複数
でも可）」は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーと称される短い鎖、および一般にタンパク質
と称される長い鎖の両方をいう。ポリペプチドは、遺伝
子コードされている２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を
含有してもよい。「ポリペプチド（複数でも可）」は、
プロセッシングおよび他の翻訳後の修飾のごとき自然の
工程、または当該分野において周知の化学修飾技法のい
ずれかによって修飾されたものを包含する。かかる修飾
は、基本テキストにて、およびより詳細な研究論文に
て、ならびに膨大な研究文献にて詳しく記載されてお
り、それらは当業者に周知である。同じ型の修飾が、所
定のポリペプチド中、いくつかの部位で、同じまたは異
なる程度にて存在してもよいことは明らかであろう。ま
た、所定のペプチドは多くの型の修飾を有していてもよ
い。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまた
はカルボキシル末端を含め、ポリペプチドのどこででも
起こりうる。修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−
リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分
の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の
共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチ
ジルイノシトールの共有結合、交差結合、環化、ジスル
フィド結合形成、脱メチル化、共有交差結合の形成、シ
ステインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル
化、ガンマーカルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカ
ー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリス
トイル化、酸化、蛋白分解的プロセッシング、リン酸
化、プレニル化、ラセミ化、糖鎖形成、リピド付加、硫
酸化、グルタミン酸残基のガンマーカルボキシル化、ヒ
ドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル
化、硫酸化、アルギニル化などの転移ＲＮＡ媒介の蛋白
質へのアミノ酸付加、およびユビキチン化を包含する。
例えば、PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERT
IES, 2nd Ed., T. E.Creighton, W. H. Freeman and Co
mpany, New York (1993) および Wold, F., Posttransl
ational Protein Modifications: Perspectives and Pr
ospects, pgs.1-12 in POSTTRANSLATIONAL COVALENT MO
DIFICATION OF PROTEINS, B. C. Johnson, Ed., Academ
ic Press, New York (1983); Seifter ら、Meth. Enzym
ol. 182:626-646 (1990) およびRattan ら、Protein Sy
nthesis: Posttranslational Modifications and Agin
g, Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1992)を参照の
こと。ポリペプチドは、分枝してもよく、分枝と共にま
たはなしで環状であってもよい。環状、分枝化および分
枝化環状ポリペプチドは、翻訳後の天然の工程の結果で
あり、同様に全く合成的な方法で合成できる。
チド結合または修飾ペプチド結合で互いに結合した２つ
またはそれ以上のアミノ酸を含有してなるいずれのペプ
チドまたはタンパク質をもいう。「ポリペプチド（複数
でも可）」は、通常、ペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーと称される短い鎖、および一般にタンパク質
と称される長い鎖の両方をいう。ポリペプチドは、遺伝
子コードされている２０個のアミノ酸以外のアミノ酸を
含有してもよい。「ポリペプチド（複数でも可）」は、
プロセッシングおよび他の翻訳後の修飾のごとき自然の
工程、または当該分野において周知の化学修飾技法のい
ずれかによって修飾されたものを包含する。かかる修飾
は、基本テキストにて、およびより詳細な研究論文に
て、ならびに膨大な研究文献にて詳しく記載されてお
り、それらは当業者に周知である。同じ型の修飾が、所
定のポリペプチド中、いくつかの部位で、同じまたは異
なる程度にて存在してもよいことは明らかであろう。ま
た、所定のペプチドは多くの型の修飾を有していてもよ
い。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖、アミノまた
はカルボキシル末端を含め、ポリペプチドのどこででも
起こりうる。修飾は、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−
リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分
の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の
共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチ
ジルイノシトールの共有結合、交差結合、環化、ジスル
フィド結合形成、脱メチル化、共有交差結合の形成、シ
ステインの形成、ピログルタメートの形成、ホルミル
化、ガンマーカルボキシル化、糖鎖形成、ＧＰＩアンカ
ー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリス
トイル化、酸化、蛋白分解的プロセッシング、リン酸
化、プレニル化、ラセミ化、糖鎖形成、リピド付加、硫
酸化、グルタミン酸残基のガンマーカルボキシル化、ヒ
ドロキシル化およびＡＤＰ−リボシル化、セレノイル
化、硫酸化、アルギニル化などの転移ＲＮＡ媒介の蛋白
質へのアミノ酸付加、およびユビキチン化を包含する。
例えば、PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERT
IES, 2nd Ed., T. E.Creighton, W. H. Freeman and Co
mpany, New York (1993) および Wold, F., Posttransl
ational Protein Modifications: Perspectives and Pr
ospects, pgs.1-12 in POSTTRANSLATIONAL COVALENT MO
DIFICATION OF PROTEINS, B. C. Johnson, Ed., Academ
ic Press, New York (1983); Seifter ら、Meth. Enzym
ol. 182:626-646 (1990) およびRattan ら、Protein Sy
nthesis: Posttranslational Modifications and Agin
g, Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1992)を参照の
こと。ポリペプチドは、分枝してもよく、分枝と共にま
たはなしで環状であってもよい。環状、分枝化および分
枝化環状ポリペプチドは、翻訳後の天然の工程の結果で
あり、同様に全く合成的な方法で合成できる。
【００１７】本明細書中で使用される「変種」なる語
は、各々、対照標準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、本質的な特性を保持しているポリヌク
レオチドまたはポリペプチドである。ポリヌクレオチド
の典型的な変種は、別の対照標準のポリヌクレオチドと
ヌクレオチド配列において異なっている。変種のヌクレ
オチド配列における変化は、対照標準のポリヌクレオチ
ドによってコードされたポリペプチドのアミノ酸配列を
変化させてもよいしさせなくてもよい。ヌクレオチドの
変化は、後記するように、対照標準の配列によってコー
ドされたポリペプチドにおいて、アミノ酸置換、付加、
欠失、融合および末端切断をもたらしうる。ポリペプチ
ドの典型的な変種は、別の対照標準のポリペプチドとは
アミノ酸配列において異なっている。一般に、差異は、
対照標準のポリペプチドとその変種の配列が全体的に非
常に類似しており、多くの領域においては同一であるよ
うに限定される。変種および対照標準のポリペプチド
は、一またはそれ以上の置換、付加、欠失のいずれかの
組み合わせによって、アミノ酸配列において異なっても
よい。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝コー
ドによってコードされたものであってもなくてもよい。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は、対立遺
伝子変種のような自然に起こるものであってもよく、ま
たは自然に起こることが知られていない変種であっても
よい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの自然に起
こらない変種は、変異誘発法または直接合成あるいは当
業者に公知の他の組換え法によって作られてもよい。
は、各々、対照標準のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドと異なるが、本質的な特性を保持しているポリヌク
レオチドまたはポリペプチドである。ポリヌクレオチド
の典型的な変種は、別の対照標準のポリヌクレオチドと
ヌクレオチド配列において異なっている。変種のヌクレ
オチド配列における変化は、対照標準のポリヌクレオチ
ドによってコードされたポリペプチドのアミノ酸配列を
変化させてもよいしさせなくてもよい。ヌクレオチドの
変化は、後記するように、対照標準の配列によってコー
ドされたポリペプチドにおいて、アミノ酸置換、付加、
欠失、融合および末端切断をもたらしうる。ポリペプチ
ドの典型的な変種は、別の対照標準のポリペプチドとは
アミノ酸配列において異なっている。一般に、差異は、
対照標準のポリペプチドとその変種の配列が全体的に非
常に類似しており、多くの領域においては同一であるよ
うに限定される。変種および対照標準のポリペプチド
は、一またはそれ以上の置換、付加、欠失のいずれかの
組み合わせによって、アミノ酸配列において異なっても
よい。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝コー
ドによってコードされたものであってもなくてもよい。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は、対立遺
伝子変種のような自然に起こるものであってもよく、ま
たは自然に起こることが知られていない変種であっても
よい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの自然に起
こらない変種は、変異誘発法または直接合成あるいは当
業者に公知の他の組換え法によって作られてもよい。
【００１８】本発明は、以下にさらに詳しく記載するよ
うな新規なｒｎｃポリペプチドおよびポリヌクレオチド
に関する。詳細には、本発明は、バシラス・サチリスの
ｒｎｃポリペプチドにアミノ酸配列の相同性により関連
する、ストレプトコッカス・ニューモニアエの新規なｒ
ｎｃのポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。
本発明は、本質的に、それぞれ表１（配列番号１）およ
び表１（配列番号２）に示されるヌクレオチドおよびア
ミノ酸配列を有するｒｎｃ、および寄託株中のＤＮＡの
ｒｎｃヌクレオチド配列およびそれによりコードされる
アミノ酸配列に関する。
うな新規なｒｎｃポリペプチドおよびポリヌクレオチド
に関する。詳細には、本発明は、バシラス・サチリスの
ｒｎｃポリペプチドにアミノ酸配列の相同性により関連
する、ストレプトコッカス・ニューモニアエの新規なｒ
ｎｃのポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。
本発明は、本質的に、それぞれ表１（配列番号１）およ
び表１（配列番号２）に示されるヌクレオチドおよびア
ミノ酸配列を有するｒｎｃ、および寄託株中のＤＮＡの
ｒｎｃヌクレオチド配列およびそれによりコードされる
アミノ酸配列に関する。
【００１９】表１ ｒｎｃポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列 （Ａ）ストレプトコッカス・ニューモニアエｒｎｃポリ
ヌクレオチド配列由来の配列（配列番号１） 5'-ATGAAAGAATTACAAACTGTACTAAAGAATCATTTTGCAATCGAATT
TGCAGACAAAAATTTACTGGAAACTGCCTTTACTCATACGAGTTATGCCA
ATGAGCACCGCCTCTTAAAAATTTCACACAATGAACGCTTGGAATTTTTA
GGAGACGCTGTTCTACAGTTATTGATTTCAGAATATCTATATAAAAAATA
TCCTAAAAAGCCTGAAGGTGACCTATCAAAACTCCGTGCTATGATTGTCC
GTGAGGAGAGTTTAGCTGGTTTTGCGCGTGATTGCCAGTTTGACCAGTTT
ATCAAGTTGGGTAAAGGGGAAGAAAAATCTGGTGGTCGCAATCGTGACAC
CATTCTTGGTGATGCCTTTGAAGCCTTTCTTGGTGCCCTTCTTTTGGATA
AGGATGTGGCCAAGGTCAAGGAATTTATCTATCAAGTCATGATTCCTAAG
GTTGAAGCAGGCGAGTTTGAGATGATTACAGACTATAAAACCCATCTCCA
AGAGTTGCTTCAGGTCAATGGTGATGTGGCTATTCGTTATCAGGTGATTT
CTGAAACAGGGCCTGCTCACGATAAGGTCTTTGATGTAGAAGTTCTTGTT
GAAGGTAAGAGCATCGGTCAAGGCCAAGGTCGTTCTAAGAAATTAGCAGA
GCAGGAAGCTGCCAAAAATGCCGTTGAGAAGGGGCTGGATTCATGTATTT
AA-3'
ヌクレオチド配列由来の配列（配列番号１） 5'-ATGAAAGAATTACAAACTGTACTAAAGAATCATTTTGCAATCGAATT
TGCAGACAAAAATTTACTGGAAACTGCCTTTACTCATACGAGTTATGCCA
ATGAGCACCGCCTCTTAAAAATTTCACACAATGAACGCTTGGAATTTTTA
GGAGACGCTGTTCTACAGTTATTGATTTCAGAATATCTATATAAAAAATA
TCCTAAAAAGCCTGAAGGTGACCTATCAAAACTCCGTGCTATGATTGTCC
GTGAGGAGAGTTTAGCTGGTTTTGCGCGTGATTGCCAGTTTGACCAGTTT
ATCAAGTTGGGTAAAGGGGAAGAAAAATCTGGTGGTCGCAATCGTGACAC
CATTCTTGGTGATGCCTTTGAAGCCTTTCTTGGTGCCCTTCTTTTGGATA
AGGATGTGGCCAAGGTCAAGGAATTTATCTATCAAGTCATGATTCCTAAG
GTTGAAGCAGGCGAGTTTGAGATGATTACAGACTATAAAACCCATCTCCA
AGAGTTGCTTCAGGTCAATGGTGATGTGGCTATTCGTTATCAGGTGATTT
CTGAAACAGGGCCTGCTCACGATAAGGTCTTTGATGTAGAAGTTCTTGTT
GAAGGTAAGAGCATCGGTCAAGGCCAAGGTCGTTCTAAGAAATTAGCAGA
GCAGGAAGCTGCCAAAAATGCCGTTGAGAAGGGGCTGGATTCATGTATTT
AA-3'
【００２０】（Ｂ）この表におけるポリヌクレオチド配
列から推定されるｒｎｃポリペプチド配列（配列番号
２） NH2-MKELQTVLKNHFAIEFADKNLLETAFTHTSYANEHRLLKISHNERL
EFLGDAVLQLLISEYLYKKYPKKPEGDLSKLRAMIVREESLAGFARDCQF
DQFIKLGKGEEKSGGRNRDTILGDAFEAFLGALLLDKDVAKVKEFIYQVM
IPKVEAGEFEMITDYKTHLQELLQVNGDVAIRYQVISETGPAHDKVFDVE
VLVEGKSIGQGQGRSKKLAEQEAAKNAVEKGLDSCI-COOH
列から推定されるｒｎｃポリペプチド配列（配列番号
２） NH2-MKELQTVLKNHFAIEFADKNLLETAFTHTSYANEHRLLKISHNERL
EFLGDAVLQLLISEYLYKKYPKKPEGDLSKLRAMIVREESLAGFARDCQF
DQFIKLGKGEEKSGGRNRDTILGDAFEAFLGALLLDKDVAKVKEFIYQVM
IPKVEAGEFEMITDYKTHLQELLQVNGDVAIRYQVISETGPAHDKVFDVE
VLVEGKSIGQGQGRSKKLAEQEAAKNAVEKGLDSCI-COOH
【００２１】（Ｃ）ポリヌクレオチド配列の具体化（配
列番号１） X-(R1)n-ATGAAAGAATTACAAACTGTACTAAAGAATCATTTTGCAATC
GAATTTGCAGACAAAAATTTACTGGAAACTGCCTTTACTCATACGAGTTA
TGCCAATGAGCACCGCCTCTTAAAAATTTCACACAATGAACGCTTGGAAT
TTTTAGGAGACGCTGTTCTACAGTTATTGATTTCAGAATATCTATATAAA
AAATATCCTAAAAAGCCTGAAGGTGACCTATCAAAACTCCGTGCTATGAT
TGTCCGTGAGGAGAGTTTAGCTGGTTTTGCGCGTGATTGCCAGTTTGACC
AGTTTATCAAGTTGGGTAAAGGGGAAGAAAAATCTGGTGGTCGCAATCGT
GACACCATTCTTGGTGATGCCTTTGAAGCCTTTCTTGGTGCCCTTCTTTT
GGATAAGGATGTGGCCAAGGTCAAGGAATTTATCTATCAAGTCATGATTC
CTAAGGTTGAAGCAGGCGAGTTTGAGATGATTACAGACTATAAAACCCAT
CTCCAAGAGTTGCTTCAGGTCAATGGTGATGTGGCTATTCGTTATCAGGT
GATTTCTGAAACAGGGCCTGCTCACGATAAGGTCTTTGATGTAGAAGTTC
TTGTTGAAGGTAAGAGCATCGGTCAAGGCCAAGGTCGTTCTAAGAAATTA
GCAGAGCAGGAAGCTGCCAAAAATGCCGTTGAGAAGGGGCTGGATTCATG
TATTTAA-(R2)n-Y
列番号１） X-(R1)n-ATGAAAGAATTACAAACTGTACTAAAGAATCATTTTGCAATC
GAATTTGCAGACAAAAATTTACTGGAAACTGCCTTTACTCATACGAGTTA
TGCCAATGAGCACCGCCTCTTAAAAATTTCACACAATGAACGCTTGGAAT
TTTTAGGAGACGCTGTTCTACAGTTATTGATTTCAGAATATCTATATAAA
AAATATCCTAAAAAGCCTGAAGGTGACCTATCAAAACTCCGTGCTATGAT
TGTCCGTGAGGAGAGTTTAGCTGGTTTTGCGCGTGATTGCCAGTTTGACC
AGTTTATCAAGTTGGGTAAAGGGGAAGAAAAATCTGGTGGTCGCAATCGT
GACACCATTCTTGGTGATGCCTTTGAAGCCTTTCTTGGTGCCCTTCTTTT
GGATAAGGATGTGGCCAAGGTCAAGGAATTTATCTATCAAGTCATGATTC
CTAAGGTTGAAGCAGGCGAGTTTGAGATGATTACAGACTATAAAACCCAT
CTCCAAGAGTTGCTTCAGGTCAATGGTGATGTGGCTATTCGTTATCAGGT
GATTTCTGAAACAGGGCCTGCTCACGATAAGGTCTTTGATGTAGAAGTTC
TTGTTGAAGGTAAGAGCATCGGTCAAGGCCAAGGTCGTTCTAAGAAATTA
GCAGAGCAGGAAGCTGCCAAAAATGCCGTTGAGAAGGGGCTGGATTCATG
TATTTAA-(R2)n-Y
【００２２】（Ｄ）ポリペプチド配列の具体化（配列番
号２） X-(R1)n-MKELQTVLKNHFAIEFADKNLLETAFTHTSYANEHRLLKISH
NERLEFLGDAVLQLLISEYLYKKYPKKPEGDLSKLRAMIVREESLAGFAR
DCQFDQFIKLGKGEEKSGGRNRDTILGDAFEAFLGALLLDKDVAKVKEFI
YQVMIPKVEAGEFEMITDYKTHLQELLQVNGDVAIRYQVISETGPAHDKV
FDVEVLVEGKSIGQGQGRSKKLAEQEAAKNAVEKGLDSCI-(R2)n-Y
号２） X-(R1)n-MKELQTVLKNHFAIEFADKNLLETAFTHTSYANEHRLLKISH
NERLEFLGDAVLQLLISEYLYKKYPKKPEGDLSKLRAMIVREESLAGFAR
DCQFDQFIKLGKGEEKSGGRNRDTILGDAFEAFLGALLLDKDVAKVKEFI
YQVMIPKVEAGEFEMITDYKTHLQELLQVNGDVAIRYQVISETGPAHDKV
FDVEVLVEGKSIGQGQGRSKKLAEQEAAKNAVEKGLDSCI-(R2)n-Y
【００２３】寄託材料 ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３株
を含む寄託株を、１９９６年４月１１日に、National C
ollections of Industrial and Marine Bacteria Ltd.
（本明細書にて「ＮＣＩＭＢ」という）、23 St. Macha
r Drive, Aberdeen, AB2 1RY Aberdeen, Scotlandに、
受託番号４０７９４として寄託した。寄託上、寄託株を
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３と
称する。同様に１９９６年４月１７日にイー・コリ中の
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３Ｄ
ＮＡライブラリをＮＣＩＭＢに寄託し、受託番号は４０
８００とされた。寄託上、ストレプトコッカス・ニュー
モニアエ０１００９９３である。そのストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ寄託株を、本明細書中、「寄託株」
または「寄託株のＤＮＡ」と称する。
を含む寄託株を、１９９６年４月１１日に、National C
ollections of Industrial and Marine Bacteria Ltd.
（本明細書にて「ＮＣＩＭＢ」という）、23 St. Macha
r Drive, Aberdeen, AB2 1RY Aberdeen, Scotlandに、
受託番号４０７９４として寄託した。寄託上、寄託株を
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３と
称する。同様に１９９６年４月１７日にイー・コリ中の
ストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００９９３Ｄ
ＮＡライブラリをＮＣＩＭＢに寄託し、受託番号は４０
８００とされた。寄託上、ストレプトコッカス・ニュー
モニアエ０１００９９３である。そのストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ寄託株を、本明細書中、「寄託株」
または「寄託株のＤＮＡ」と称する。
【００２４】寄託材料は完全長ｒｎｃ遺伝子を含有す
る。寄託株に含まれるポリヌクレオチドの配列ならびに
それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列
は、本明細書における配列の記載とのいずれの不一致に
対しても支配的である。寄託は、特許手続きの目的で微
生物寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件下で
行われている。特許が発行されると何ら制限または条件
もなく、最終的に株は分譲される。寄託株は当業者の便
宜のためにのみ提供され、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１２条の
もとに要求されるような、寄託が実施可能要件であるこ
とを承認するものではない。寄託材料を製造、使用また
は販売するには、ライセンスが必要であるが、そのよう
なライセンスはここで付与されるものではない。
る。寄託株に含まれるポリヌクレオチドの配列ならびに
それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列
は、本明細書における配列の記載とのいずれの不一致に
対しても支配的である。寄託は、特許手続きの目的で微
生物寄託の国際承認に関するブタペスト条約の条件下で
行われている。特許が発行されると何ら制限または条件
もなく、最終的に株は分譲される。寄託株は当業者の便
宜のためにのみ提供され、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１２条の
もとに要求されるような、寄託が実施可能要件であるこ
とを承認するものではない。寄託材料を製造、使用また
は販売するには、ライセンスが必要であるが、そのよう
なライセンスはここで付与されるものではない。
【００２５】ポリペプチド本発明のポリペプチドは、表
１（配列番号２）のポリペプチド（とりわけ成熟ポリペ
プチド）ならびに、特に、ｒｎｃの生物活性を有し、表
1（配列番号２）のポリペプチドまたはその該当部分と
少なくとも７０％の同一性、好ましくは表1（配列番号
２）のポリペプチドに対して少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは表1（配列番号２）のポリペプチド
に対して少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少
なくとも９０％の同一性）、さらにより好ましくは表1
（配列番号２）のポリペプチドに対して少なくとも９５
％の類似性（さらにより好ましくは少なくとも９５％の
同一性）を有するポリペプチドおよびフラグメントを包
含し、さらに、一般に、少なくとも３０個のアミノ酸、
より好ましくは、少なくとも５０個のアミノ酸を含むポ
リペプチドの部分を有するかかるポリペプチドの部分も
包含する。
１（配列番号２）のポリペプチド（とりわけ成熟ポリペ
プチド）ならびに、特に、ｒｎｃの生物活性を有し、表
1（配列番号２）のポリペプチドまたはその該当部分と
少なくとも７０％の同一性、好ましくは表1（配列番号
２）のポリペプチドに対して少なくとも８０％の同一
性、より好ましくは表1（配列番号２）のポリペプチド
に対して少なくとも９０％の類似性（より好ましくは少
なくとも９０％の同一性）、さらにより好ましくは表1
（配列番号２）のポリペプチドに対して少なくとも９５
％の類似性（さらにより好ましくは少なくとも９５％の
同一性）を有するポリペプチドおよびフラグメントを包
含し、さらに、一般に、少なくとも３０個のアミノ酸、
より好ましくは、少なくとも５０個のアミノ酸を含むポ
リペプチドの部分を有するかかるポリペプチドの部分も
包含する。
【００２６】本発明はまた、表1（Ｄ）に示される式
（式中、アミノ末端においてＸは水素、およびカルボキ
シ末端においてＹは水素または金属、Ｒ1およびＲ2はア
ミノ酸残基、およびｎは１および１０００の間の整数で
ある）のポリペプチドを包含する。Ｒ基によって示され
るアミノ酸残基の伸長は、Ｒが１より大きいとき、ヘテ
ロポリマーまたはホモポリマーであってもよく、好まし
くはヘテロポリマーである。
（式中、アミノ末端においてＸは水素、およびカルボキ
シ末端においてＹは水素または金属、Ｒ1およびＲ2はア
ミノ酸残基、およびｎは１および１０００の間の整数で
ある）のポリペプチドを包含する。Ｒ基によって示され
るアミノ酸残基の伸長は、Ｒが１より大きいとき、ヘテ
ロポリマーまたはホモポリマーであってもよく、好まし
くはヘテロポリマーである。
【００２７】フラグメントは、その全体が、上記したポ
リペプチドのアミノ酸配列の全部ではないが、一部と同
じであるアミノ酸配列を有する変種ポリペプチドであ
る。ｒｎｃポリペプチドと同様、フラグメントは「独立
している」であるか、またはそれらが一の部分または領
域、最も好ましくは単一の連続した領域、単一のより大
きなポリペプチドを形成するより大きなポリペプチドの
中に含まれていてもよい。
リペプチドのアミノ酸配列の全部ではないが、一部と同
じであるアミノ酸配列を有する変種ポリペプチドであ
る。ｒｎｃポリペプチドと同様、フラグメントは「独立
している」であるか、またはそれらが一の部分または領
域、最も好ましくは単一の連続した領域、単一のより大
きなポリペプチドを形成するより大きなポリペプチドの
中に含まれていてもよい。
【００２８】好ましいフラグメントは、例えば、アミノ
末端を含む連続した一連の残基またはカルボキシル末端
を含む連続した一連の残基の欠失あるいはアミノ末端を
含む残基とカルボキシル末端を含む残基の２つの連続し
た一連の残基の欠失を除く、表1（配列番号２）のアミ
ノ酸配列またはその変種の一部を有する切断ポリペプチ
ドを包含する。宿主細胞、特に、ストレプトコッカス・
ニューモニアエ中の本発明のポリペプチドの分解型も好
ましい。アルファヘリックスおよびアルファヘリックス
形成領域、ベータシートおよびベータシート形成領域、
ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル形成
領域、親水領域、疎水領域、アルファ両親媒性領域、ベ
ータ両親媒性領域、可変領域、界面形成領域、基質結合
領域、および高抗原指数領域を含んでなるフラグメント
のような、構造的または機能的属性によって特徴づけら
れるフラグメントもまた好ましいフラグメントである。
末端を含む連続した一連の残基またはカルボキシル末端
を含む連続した一連の残基の欠失あるいはアミノ末端を
含む残基とカルボキシル末端を含む残基の２つの連続し
た一連の残基の欠失を除く、表1（配列番号２）のアミ
ノ酸配列またはその変種の一部を有する切断ポリペプチ
ドを包含する。宿主細胞、特に、ストレプトコッカス・
ニューモニアエ中の本発明のポリペプチドの分解型も好
ましい。アルファヘリックスおよびアルファヘリックス
形成領域、ベータシートおよびベータシート形成領域、
ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル形成
領域、親水領域、疎水領域、アルファ両親媒性領域、ベ
ータ両親媒性領域、可変領域、界面形成領域、基質結合
領域、および高抗原指数領域を含んでなるフラグメント
のような、構造的または機能的属性によって特徴づけら
れるフラグメントもまた好ましいフラグメントである。
【００２９】類似活性または改良活性を有するもの、ま
たは望ましくない活性が減少したフラグメントを含め、
ｒｎｃの活性を媒介するフラグメントである生物学的に
活性なフラグメントも好ましいフラグメントである。さ
らに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫原性で
あるフラグメントも含まれる。特に好ましいフラグメン
トは、ストレプトコッカス・ニューモニアエの生存に必
須な機能、または、個体、特にヒトにおいて原因となる
疾患を開始しまたは維持する能力を提供する酵素のレセ
プターまたはドメインを含むものである。本発明のポリ
ペプチドのフラグメントである変種は、ペプチド合成に
よる関連する完全長ポリペプチドの製造に適用できる：
それゆえ、これらの変種は本発明の完全長ポリペプチド
を製造するための中間体として適用できる。
たは望ましくない活性が減少したフラグメントを含め、
ｒｎｃの活性を媒介するフラグメントである生物学的に
活性なフラグメントも好ましいフラグメントである。さ
らに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫原性で
あるフラグメントも含まれる。特に好ましいフラグメン
トは、ストレプトコッカス・ニューモニアエの生存に必
須な機能、または、個体、特にヒトにおいて原因となる
疾患を開始しまたは維持する能力を提供する酵素のレセ
プターまたはドメインを含むものである。本発明のポリ
ペプチドのフラグメントである変種は、ペプチド合成に
よる関連する完全長ポリペプチドの製造に適用できる：
それゆえ、これらの変種は本発明の完全長ポリペプチド
を製造するための中間体として適用できる。
【００３０】ポリヌクレオチド 本発明の別の態様は、表１（配列番号２）の推定アミノ
酸配列を有するｒｎｃポリペプチドをコードする完全長
遺伝子を含む単離ポリヌクレオチド、それに密接に関連
するポリヌクレオチドおよびそれらの変種に関する。表
１（配列番号１）に示すポリヌクレオチド配列のような
本明細書の情報を使用し、出発材料としてストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ０１００９９３細胞を用いる細
菌由来の染色体ＤＮＡフラグメントをクローニングし、
配列決定し、つづいて完全長クローンを得るような、標
準的クローニングおよびスクリーニング方法を使用し
て、ｒｎｃポリペプチドをコードする本発明のポリヌク
レオチドを得ることができる。例えば、表１（配列番号
１）に示す配列のような本発明のポリヌクレオチド配列
を得るには、典型的には、イー・コリまたは他の適当な
宿主中のストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３の染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを、部
分配列から由来する放射標識したオリゴヌクレオチド、
好ましくは１７倍量以上の長さのオリゴヌクレオチドで
プローブする。ついで、該プローブと同じＤＮＡを有す
るクローンをストリンジェントな条件を使用して区別で
きる。該オリジナル配列から設計された配列決定プライ
マーで同定された個々のクローンを配列決定することに
より、該配列を両方の方向に伸長し、完全長を決定する
ことが可能である。都合よくは、プラスミド・クローン
から調製された変性二本鎖ＤＮＡを用いてかかる配列決
定を行う。適当な技法は、Maniatis,T.，Fritsch,E.F.
およびSambrookら、MOLECULAR CLONING：A LABORATORY
MANUAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss, Cold Spring Hａｒbor, New York（1989）（特に、
Screening By Hybridization 1.90および Sequencing D
enatured Double-stranded DNA Templates 13.70 を参
照のこと）により記載されている。例えば、表１（配列
番号１）に示すポリヌクレオチドは、ストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ０１００９９３に由来するＤＮＡラ
イブラリー中で見いだしたものである。
酸配列を有するｒｎｃポリペプチドをコードする完全長
遺伝子を含む単離ポリヌクレオチド、それに密接に関連
するポリヌクレオチドおよびそれらの変種に関する。表
１（配列番号１）に示すポリヌクレオチド配列のような
本明細書の情報を使用し、出発材料としてストレプトコ
ッカス・ニューモニアエ０１００９９３細胞を用いる細
菌由来の染色体ＤＮＡフラグメントをクローニングし、
配列決定し、つづいて完全長クローンを得るような、標
準的クローニングおよびスクリーニング方法を使用し
て、ｒｎｃポリペプチドをコードする本発明のポリヌク
レオチドを得ることができる。例えば、表１（配列番号
１）に示す配列のような本発明のポリヌクレオチド配列
を得るには、典型的には、イー・コリまたは他の適当な
宿主中のストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３の染色体ＤＮＡのクローンのライブラリーを、部
分配列から由来する放射標識したオリゴヌクレオチド、
好ましくは１７倍量以上の長さのオリゴヌクレオチドで
プローブする。ついで、該プローブと同じＤＮＡを有す
るクローンをストリンジェントな条件を使用して区別で
きる。該オリジナル配列から設計された配列決定プライ
マーで同定された個々のクローンを配列決定することに
より、該配列を両方の方向に伸長し、完全長を決定する
ことが可能である。都合よくは、プラスミド・クローン
から調製された変性二本鎖ＤＮＡを用いてかかる配列決
定を行う。適当な技法は、Maniatis,T.，Fritsch,E.F.
およびSambrookら、MOLECULAR CLONING：A LABORATORY
MANUAL，2nd Ed.；Cold Spring Harbor Laboratory Pre
ss, Cold Spring Hａｒbor, New York（1989）（特に、
Screening By Hybridization 1.90および Sequencing D
enatured Double-stranded DNA Templates 13.70 を参
照のこと）により記載されている。例えば、表１（配列
番号１）に示すポリヌクレオチドは、ストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ０１００９９３に由来するＤＮＡラ
イブラリー中で見いだしたものである。
【００３１】表１（配列番号１）に示すＤＮＡ配列は、
表１（配列番号２）に示すのとほぼ同数のアミノ酸残基
を有し、当該分野にて周知のアミノ酸残基の分子量を用
いて計算できる推定分子量を有するタンパク質をコード
するオープンリーディングフレームを有する。配列番号
１、ヌクレオチド番号１から６９９のポリヌクレオチド
は、配列番号２のポリペプチドをコードする。終止コド
ンは、配列番号１のヌクレオチド番号６９７において始
まる。
表１（配列番号２）に示すのとほぼ同数のアミノ酸残基
を有し、当該分野にて周知のアミノ酸残基の分子量を用
いて計算できる推定分子量を有するタンパク質をコード
するオープンリーディングフレームを有する。配列番号
１、ヌクレオチド番号１から６９９のポリヌクレオチド
は、配列番号２のポリペプチドをコードする。終止コド
ンは、配列番号１のヌクレオチド番号６９７において始
まる。
【００３２】本発明のｒｎｃは、構造的に、寄託株のｒ
ｎｃをコードするＤＮＡを配列決定した結果に示される
ように、リボヌクレアーゼIIIファミリーの他のタンパ
ク質に関連付けられる。そのタンパク質は、公知タンパ
ク質の中でも、バシラス・サチリスのｒｎｃのタンパク
質に対して最大の相同性を示す。表１（配列番号２）の
ｒｎｃは、バシラス・サチリスのｒｎｃポリペプチドの
アミノ酸配列とその全長にわたり約４５％の同一性およ
びその全長にわたり約５３％の類似性を有する。
ｎｃをコードするＤＮＡを配列決定した結果に示される
ように、リボヌクレアーゼIIIファミリーの他のタンパ
ク質に関連付けられる。そのタンパク質は、公知タンパ
ク質の中でも、バシラス・サチリスのｒｎｃのタンパク
質に対して最大の相同性を示す。表１（配列番号２）の
ｒｎｃは、バシラス・サチリスのｒｎｃポリペプチドの
アミノ酸配列とその全長にわたり約４５％の同一性およ
びその全長にわたり約５３％の類似性を有する。
【００３３】本発明の配列はまた、表１（配列番号１）
のコーディング配列と、その全長にわたり同一であるポ
リヌクレオチド配列を提供する。また、本発明は、成熟
ポリペプチドまたはそのフラグメント用のコーディング
配列自体ならびにリーダーまたは分泌配列、プレ、プロ
またはプレプロタンパク質配列をコードするコーディン
グ配列のような他のコーディング配列を有するリーディ
ング・フレーム中の成熟ポリペプチドまたはフラグメン
トのコーディング配列を提供する。ポリヌクレオチドは
また、例えば、転写配列、非翻訳配列、終止シグナル、
リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列、イン
トロン、ポリアデニル化シグナルおよび別のアミノ酸を
コードする付加コード配列のような非コーディング５’
および３’配列を含む、非コーディング配列を含むが、
これに限定するものではない。例えば、融合ポリペプチ
ドの精製を促進するマーカー配列をコードすることがで
きる。本発明のある種の具体例において、マーカー配列
は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）に入れて提供さ
れ、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1989）86：821
-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド
であるか、またはＨＡタグである（Wilsoｎら，Cell，3
7:767(1984)）。本発明のポリヌクレオチドは、限定す
るものではないが、構造遺伝子および遺伝子の発現を調
節する本来的に結合している配列からなるポリヌクレオ
チドを包含する。
のコーディング配列と、その全長にわたり同一であるポ
リヌクレオチド配列を提供する。また、本発明は、成熟
ポリペプチドまたはそのフラグメント用のコーディング
配列自体ならびにリーダーまたは分泌配列、プレ、プロ
またはプレプロタンパク質配列をコードするコーディン
グ配列のような他のコーディング配列を有するリーディ
ング・フレーム中の成熟ポリペプチドまたはフラグメン
トのコーディング配列を提供する。ポリヌクレオチドは
また、例えば、転写配列、非翻訳配列、終止シグナル、
リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列、イン
トロン、ポリアデニル化シグナルおよび別のアミノ酸を
コードする付加コード配列のような非コーディング５’
および３’配列を含む、非コーディング配列を含むが、
これに限定するものではない。例えば、融合ポリペプチ
ドの精製を促進するマーカー配列をコードすることがで
きる。本発明のある種の具体例において、マーカー配列
は、ｐＱＥベクター（Qiagen,Inc.）に入れて提供さ
れ、Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1989）86：821
-824に記載されるような、ヘキサ−ヒスチジンペプチド
であるか、またはＨＡタグである（Wilsoｎら，Cell，3
7:767(1984)）。本発明のポリヌクレオチドは、限定す
るものではないが、構造遺伝子および遺伝子の発現を調
節する本来的に結合している配列からなるポリヌクレオ
チドを包含する。
【００３４】本発明の好ましい具体例は、ｒｎｃポリペ
プチドをコードする表１の配列番号１に示されるヌクレ
オチド１ないし６９９を含むポリヌクレオチドである。
本発明はまた、表１（Ｃ）に示される式のポリヌクレオ
チド（式中、分子の５’末端においてＸは水素、および
分子の３’末端においてＹが水素または金属、Ｒ1およ
びＲ2がいずれかの核酸残基、ｎが１および１０００の
間の整数を意味する）を含む。Ｒ基によって示されるア
ミノ酸残基の伸長は、Ｒが１より大きいとき、ヘテロポ
リマーまたはホモポリマーであってもよく、好ましくは
ヘテロポリマーである。
プチドをコードする表１の配列番号１に示されるヌクレ
オチド１ないし６９９を含むポリヌクレオチドである。
本発明はまた、表１（Ｃ）に示される式のポリヌクレオ
チド（式中、分子の５’末端においてＸは水素、および
分子の３’末端においてＹが水素または金属、Ｒ1およ
びＲ2がいずれかの核酸残基、ｎが１および１０００の
間の整数を意味する）を含む。Ｒ基によって示されるア
ミノ酸残基の伸長は、Ｒが１より大きいとき、ヘテロポ
リマーまたはホモポリマーであってもよく、好ましくは
ヘテロポリマーである。
【００３５】本明細書で使用する「ポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチド」なる用語は、本発明のポリペ
プチド、詳細には、細菌性ポリペプチド、より詳細に
は、表１（配列番号２）に示されるアミノ酸配列を有す
るストレプトコッカス・ニューモニアエｒｎｃのポリペ
プチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを包含
する。この用語はコードおよび／非コード配列を含んで
もよいさらなる領域と共に、該ポリペプチドをコードす
る単一の連続領域または非連続領域（例えば、組み込ま
れたファージまたは挿入された配列またはエデティング
（editing）により中断されている）を含むポリヌクレ
オチドを包含する。
ドするポリヌクレオチド」なる用語は、本発明のポリペ
プチド、詳細には、細菌性ポリペプチド、より詳細に
は、表１（配列番号２）に示されるアミノ酸配列を有す
るストレプトコッカス・ニューモニアエｒｎｃのポリペ
プチドをコードする配列を含むポリヌクレオチドを包含
する。この用語はコードおよび／非コード配列を含んで
もよいさらなる領域と共に、該ポリペプチドをコードす
る単一の連続領域または非連続領域（例えば、組み込ま
れたファージまたは挿入された配列またはエデティング
（editing）により中断されている）を含むポリヌクレ
オチドを包含する。
【００３６】本発明はさらに、表１（配列番号２）の推
定アミノ酸配列を有するポリペプチドの変種をコードす
る、本明細書にて記載したポリヌクレオチドの変種に関
する。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントである
変種は、本発明の完全長ポリヌクレオチドを合成するの
に用いることもできる。さらに好ましい具体例は、数
個、わずかな、５〜１０、１〜５、１〜３、２または１
個あるいは０個のアミノ酸残基が、いずれかの組み合わ
せで置換、欠失または付加された表１（配列番号２）の
ｒｎｃポリペプチドのアミノ酸配列を有する、ｒｎｃ変
種をコードするポリヌクレオチドである。これらのうち
特に好ましくは、ｒｎｃの特性および活性を変化させな
いサイレント置換、付加および欠失である。
定アミノ酸配列を有するポリペプチドの変種をコードす
る、本明細書にて記載したポリヌクレオチドの変種に関
する。本発明のポリヌクレオチドのフラグメントである
変種は、本発明の完全長ポリヌクレオチドを合成するの
に用いることもできる。さらに好ましい具体例は、数
個、わずかな、５〜１０、１〜５、１〜３、２または１
個あるいは０個のアミノ酸残基が、いずれかの組み合わ
せで置換、欠失または付加された表１（配列番号２）の
ｒｎｃポリペプチドのアミノ酸配列を有する、ｒｎｃ変
種をコードするポリヌクレオチドである。これらのうち
特に好ましくは、ｒｎｃの特性および活性を変化させな
いサイレント置換、付加および欠失である。
【００３７】本発明のさらに好ましい具体例は、表１
（配列番号２）に示すアミノ酸配列を有するｒｎｃポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対し完全長に
わたって少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレ
オチドおよびそのようなポリヌクレオチドに相補性のポ
リヌクレオチドである。また、最も好ましいものは、寄
託株のｒｎｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドに対し完全長にわたって少なくとも８０％の同一性を
有する領域を含むポリヌクレオチドおよびそれと相補性
のポリヌクレオチドである。この点で、その同じものと
完全長にわたって少なくとも９０％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが特に好ましく、中でも少なくとも９５
％の同一性を有するものが特に好ましい。さらには、少
なくとも９５％の同一性を有するものの中で少なくとも
９７％の同一性を有するものがより好ましく、中でも少
なくとも９８％および少なくとも９９％の同一性を有す
るものが特に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有
するものがより好ましい。好ましい具体例は、表１（配
列番号１）のＤＮＡによってコードされている成熟ポリ
ペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持
するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであ
る。
（配列番号２）に示すアミノ酸配列を有するｒｎｃポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドに対し完全長に
わたって少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレ
オチドおよびそのようなポリヌクレオチドに相補性のポ
リヌクレオチドである。また、最も好ましいものは、寄
託株のｒｎｃポリペプチドをコードするポリヌクレオチ
ドに対し完全長にわたって少なくとも８０％の同一性を
有する領域を含むポリヌクレオチドおよびそれと相補性
のポリヌクレオチドである。この点で、その同じものと
完全長にわたって少なくとも９０％の同一性を有するポ
リヌクレオチドが特に好ましく、中でも少なくとも９５
％の同一性を有するものが特に好ましい。さらには、少
なくとも９５％の同一性を有するものの中で少なくとも
９７％の同一性を有するものがより好ましく、中でも少
なくとも９８％および少なくとも９９％の同一性を有す
るものが特に好ましく、少なくとも９９％の同一性を有
するものがより好ましい。好ましい具体例は、表１（配
列番号１）のＤＮＡによってコードされている成熟ポリ
ペプチドと実質的に同じ生物学的機能または活性を保持
するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドであ
る。
【００３８】さらに本発明は、本明細書にて上記した配
列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関
する。この点において、本発明は特に、本明細書にて上
記したポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下で
ハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書で用いる場合、「ストリンジェントな条
件」および「ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件」という語は、ハイブリダイゼーションが、配列
間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の
同一性がある場合にのみ起こることを意味する。ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件の一例とし
て、５０％ホルムアルデヒド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ
ＮaＣl、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ
リン酸ナトリウム（pＨ７.６）、５ｘデンハート（Denh
ardt’s）溶液、１０％硫酸デキストランおよび２０μ
ｇ／ｍｌ変性切断サケ精子ＤＮＡを含んでなる溶液中、
４２℃で一晩インキュベーションし、ついでそのフィル
ターを０.１ｘＳＳＣ（約６５℃）で洗浄することが挙
げられる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件は公
知であり、Sambrookら、Molecular Cloning: A Laborat
ory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.
Y., (1989)、特に、第11章に例示されている。
列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関
する。この点において、本発明は特に、本明細書にて上
記したポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下で
ハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書で用いる場合、「ストリンジェントな条
件」および「ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件」という語は、ハイブリダイゼーションが、配列
間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の
同一性がある場合にのみ起こることを意味する。ストリ
ンジェントなハイブリダイゼーション条件の一例とし
て、５０％ホルムアルデヒド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ
ＮaＣl、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭ
リン酸ナトリウム（pＨ７.６）、５ｘデンハート（Denh
ardt’s）溶液、１０％硫酸デキストランおよび２０μ
ｇ／ｍｌ変性切断サケ精子ＤＮＡを含んでなる溶液中、
４２℃で一晩インキュベーションし、ついでそのフィル
ターを０.１ｘＳＳＣ（約６５℃）で洗浄することが挙
げられる。ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件は公
知であり、Sambrookら、Molecular Cloning: A Laborat
ory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, N.
Y., (1989)、特に、第11章に例示されている。
【００３９】本発明は、実質的に、配列番号１に示した
ポリヌクレオチド配列の完全遺伝子を含む適当なライブ
ラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下、配列番号１に示す該ポリヌクレオチド配列の配
列を有するプローブまたはそのフラグメントでスクリー
ニングし、該ＤＮＡ配列を単離することにより得ること
ができるポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド
を提供する。そのようなポリヌクレオチドを得るのに有
用なフラグメントには、例えば、本明細書に記載するプ
ローブおよびプライマーが包含される。
ポリヌクレオチド配列の完全遺伝子を含む適当なライブ
ラリーを、ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件下、配列番号１に示す該ポリヌクレオチド配列の配
列を有するプローブまたはそのフラグメントでスクリー
ニングし、該ＤＮＡ配列を単離することにより得ること
ができるポリヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド
を提供する。そのようなポリヌクレオチドを得るのに有
用なフラグメントには、例えば、本明細書に記載するプ
ローブおよびプライマーが包含される。
【００４０】本明細書において本発明のポリヌクレオチ
ドのアッセイについてさらに説明するように、例えば、
上記したような本発明のポリヌクレオチドを、ＲＮＡ、
ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡに対するハイブリダイゼー
ションプローブとして使用し、ｒｎｃをコードする完全
長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、ｒｎｃ遺伝
子に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離することができる。その
ようなプローブは、一般に、少なくとも１５塩基を含む
であろう。好ましくは、そのようなプローブは少なくと
も３０塩基を有し、少なくとも５０塩基を有してもよ
い。特に好ましいプローブは、少なくとも３０塩基を有
し、５０以下の塩基を有する。例えば、ｒｎｃ遺伝子の
コーディング領域は、表１に提供されるＤＮＡ配列を使
用してスクリーニングしてオリゴヌクレオチドプローブ
を合成することにより単離できる。ついで、本発明の遺
伝子の配列と相補性の配列を有する標識したオリゴヌク
レオチドを用いてｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮ
Ａのライブラリーをスクリーニングし、ライブラリーの
どのメンバーがプローブとハイブリダイズするか調べ
る。
ドのアッセイについてさらに説明するように、例えば、
上記したような本発明のポリヌクレオチドを、ＲＮＡ、
ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡに対するハイブリダイゼー
ションプローブとして使用し、ｒｎｃをコードする完全
長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離し、ｒｎｃ遺伝
子に対して高い配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離することができる。その
ようなプローブは、一般に、少なくとも１５塩基を含む
であろう。好ましくは、そのようなプローブは少なくと
も３０塩基を有し、少なくとも５０塩基を有してもよ
い。特に好ましいプローブは、少なくとも３０塩基を有
し、５０以下の塩基を有する。例えば、ｒｎｃ遺伝子の
コーディング領域は、表１に提供されるＤＮＡ配列を使
用してスクリーニングしてオリゴヌクレオチドプローブ
を合成することにより単離できる。ついで、本発明の遺
伝子の配列と相補性の配列を有する標識したオリゴヌク
レオチドを用いてｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはｍＲＮ
Ａのライブラリーをスクリーニングし、ライブラリーの
どのメンバーがプローブとハイブリダイズするか調べ
る。
【００４１】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、とりわけ、本明細書においてポリヌクレオチド
アッセイに関してさらに説明するように、疾患、特にヒ
トの疾患に対する治療および診断の発見のための研究試
薬および研究材料として用いることができる。配列番号
１および／または２の配列由来のオリゴヌクレオチドで
ある本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の方
法に使用できるが、好ましくはＰＣＲに使用し、本明細
書で同定したポリヌクレオチドが全体として、または部
分的に感染組織中の細菌において転写されるか否か調べ
る。そのような配列はまた、病原体が達成した感染の段
階およびタイプの診断においても有用性がある。
チドは、とりわけ、本明細書においてポリヌクレオチド
アッセイに関してさらに説明するように、疾患、特にヒ
トの疾患に対する治療および診断の発見のための研究試
薬および研究材料として用いることができる。配列番号
１および／または２の配列由来のオリゴヌクレオチドで
ある本発明のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の方
法に使用できるが、好ましくはＰＣＲに使用し、本明細
書で同定したポリヌクレオチドが全体として、または部
分的に感染組織中の細菌において転写されるか否か調べ
る。そのような配列はまた、病原体が達成した感染の段
階およびタイプの診断においても有用性がある。
【００４２】本発明はまた、成熟蛋白にさらなるアミノ
またはカルボキシ末端アミノ酸が加わるか、成熟ポリペ
プチドの内部にアミノ酸が加わった（例えば、成熟形態
が一つ以上のポリペプチド鎖を有する場合）ポリペプチ
ドをコードしうるポリヌクレオチドを提供する。このよ
うな配列は、とりわけ、前駆体から成熟形態へのタンパ
ク質のプロセッシングにおいて役割を果たし、タンパク
質を輸送し、タンパク質の半減期を長くしたり、短くし
たり、あるいはアッセイまたは生産のためのタンパク質
の操作を容易にすることができる。in vivoでよくある
ように、付加アミノ酸は細胞酵素により成熟タンパク質
からプロセッシングにより除かれる。一またはそれ以上
のプロ配列に融合したポリペプチドの成熟形態を有する
前駆体タンパク質は該ポリペプチドの不活性形でもよ
い。プロ配列がそのような不活性前駆体から除かれる
と、一般に活性化される。プロ配列の幾らかまたは全体
を、活性化の前に除去できる。一般に、そのような前駆
体はプロタンパク質と称される。
またはカルボキシ末端アミノ酸が加わるか、成熟ポリペ
プチドの内部にアミノ酸が加わった（例えば、成熟形態
が一つ以上のポリペプチド鎖を有する場合）ポリペプチ
ドをコードしうるポリヌクレオチドを提供する。このよ
うな配列は、とりわけ、前駆体から成熟形態へのタンパ
ク質のプロセッシングにおいて役割を果たし、タンパク
質を輸送し、タンパク質の半減期を長くしたり、短くし
たり、あるいはアッセイまたは生産のためのタンパク質
の操作を容易にすることができる。in vivoでよくある
ように、付加アミノ酸は細胞酵素により成熟タンパク質
からプロセッシングにより除かれる。一またはそれ以上
のプロ配列に融合したポリペプチドの成熟形態を有する
前駆体タンパク質は該ポリペプチドの不活性形でもよ
い。プロ配列がそのような不活性前駆体から除かれる
と、一般に活性化される。プロ配列の幾らかまたは全体
を、活性化の前に除去できる。一般に、そのような前駆
体はプロタンパク質と称される。
【００４３】総じて、本発明のポリヌクレオチドは成熟
タンパク質、リーダー配列の加わった成熟タンパク質
（プレタンパク質とも称される）、プレタンパク質のリ
ーダー配列ではない１またはそれ以上のプロ配列を有す
る成熟タンパク質の前駆体、またはリーダー配列と、一
般に、ポリペプチドの活性な成熟形態を生成するプロセ
ッシング工程の間に除去される１またはそれ以上のプロ
配列を有するプロタンパク質の前駆体であるプレプロタ
ンパク質をコードする。
タンパク質、リーダー配列の加わった成熟タンパク質
（プレタンパク質とも称される）、プレタンパク質のリ
ーダー配列ではない１またはそれ以上のプロ配列を有す
る成熟タンパク質の前駆体、またはリーダー配列と、一
般に、ポリペプチドの活性な成熟形態を生成するプロセ
ッシング工程の間に除去される１またはそれ以上のプロ
配列を有するプロタンパク質の前駆体であるプレプロタ
ンパク質をコードする。
【００４４】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドまたはポリヌ
クレオチドを含んでなるベクター、本発明のベクターで
遺伝子操作される宿主細胞および組換え技術による本発
明のポリペプチドの製造に関する。さらに無細胞翻訳系
を用い、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを使用して
かかるタンパク質を製造することができる。組換え体産
生のために、宿主細胞を遺伝子操作し、発現系もしくは
それらの一部、または本発明のポリヌクレオチドを取り
込むことができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導
入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランス
ベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質
媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、
トランスダクション、スクレープ・ローディング、弾道
導入および感染のような、Davisら、BASIC METHODS IN
MOLECULＡＲ BIOLOGY（1986）およびSambrookら、MOLEC
ULＡＲ CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd Ed. Cold
Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,
N.Y.（1989）のごとき複数の標準的研究室マニュアルに
記載されている方法によって行うことができる。
クレオチドを含んでなるベクター、本発明のベクターで
遺伝子操作される宿主細胞および組換え技術による本発
明のポリペプチドの製造に関する。さらに無細胞翻訳系
を用い、本発明のＤＮＡ構築物由来のＲＮＡを使用して
かかるタンパク質を製造することができる。組換え体産
生のために、宿主細胞を遺伝子操作し、発現系もしくは
それらの一部、または本発明のポリヌクレオチドを取り
込むことができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導
入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランス
ベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質
媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、
トランスダクション、スクレープ・ローディング、弾道
導入および感染のような、Davisら、BASIC METHODS IN
MOLECULＡＲ BIOLOGY（1986）およびSambrookら、MOLEC
ULＡＲ CLONING：A LABORATORY MANUAL，2nd Ed. Cold
Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,
N.Y.（1989）のごとき複数の標準的研究室マニュアルに
記載されている方法によって行うことができる。
【００４５】適当な宿主の代表例は、レンサ球菌（stre
ptococci）、ブドウ球菌（staphylococci）、エンテロ
コッカス（enterococci）大腸菌（E.coli）、ストレプ
トマイセス（streptomyces）および枯草菌（Bacillus s
ubtilis）細胞のごとき細菌細胞；酵母細胞およびアス
ペルギルス（Aspergillus）細胞のごとき真菌細胞；ド
ロソフィラ（Drosophila）Ｓ２およびスポドプテラ（Sp
odoptera）Ｓｆ９細胞のごとき昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯ
Ｓ、ＨeＬa、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３および
ボーウェス（Bowes）メラノーマ細胞のごとき動物細
胞；および植物細胞を包含する。
ptococci）、ブドウ球菌（staphylococci）、エンテロ
コッカス（enterococci）大腸菌（E.coli）、ストレプ
トマイセス（streptomyces）および枯草菌（Bacillus s
ubtilis）細胞のごとき細菌細胞；酵母細胞およびアス
ペルギルス（Aspergillus）細胞のごとき真菌細胞；ド
ロソフィラ（Drosophila）Ｓ２およびスポドプテラ（Sp
odoptera）Ｓｆ９細胞のごとき昆虫細胞；ＣＨＯ、ＣＯ
Ｓ、ＨeＬa、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３および
ボーウェス（Bowes）メラノーマ細胞のごとき動物細
胞；および植物細胞を包含する。
【００４６】本発明のポリペプチド産生のために非常に
多様な発現系を使用することができる。かかる系は、と
りわけ、染色体、エピソームおよびウイルス由来の系、
例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入因
子由来、酵母染色体因子由来、バキュロウイルス、ＳＶ
４０のごときパポーバウイルス、ワクシニアウイルス、
アデノウイルス、ニワトリポックスウイルス、偽狂犬病
ウイルスおよびレトロウイルスのようなウイルス由来の
ベクター、およびコスミドおよびファージミドなどのプ
ラスミドおよびバクテリオファージの遺伝因子由来のベ
クターのごとき、それらの組み合わせに由来するベクタ
ーを包含する。発現系構築物は、発現を制御ならびに引
き起こす調節領域を有していてもよい。一般に、宿主に
おいてポリヌクレオチドを維持、増幅または発現し、お
よび／またはポリペプチドを発現するのに適した系また
はベクターを、この点にて発現に使用してもよい。適当
なＤＮＡ配列を、例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLON
ING，A LABORATORY MANUAL（前掲）に示されている技術
のごとき、種々のよく知られた慣用的技術のいずれかに
よって、発現系に挿入してもよい。
多様な発現系を使用することができる。かかる系は、と
りわけ、染色体、エピソームおよびウイルス由来の系、
例えば、細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由
来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入因
子由来、酵母染色体因子由来、バキュロウイルス、ＳＶ
４０のごときパポーバウイルス、ワクシニアウイルス、
アデノウイルス、ニワトリポックスウイルス、偽狂犬病
ウイルスおよびレトロウイルスのようなウイルス由来の
ベクター、およびコスミドおよびファージミドなどのプ
ラスミドおよびバクテリオファージの遺伝因子由来のベ
クターのごとき、それらの組み合わせに由来するベクタ
ーを包含する。発現系構築物は、発現を制御ならびに引
き起こす調節領域を有していてもよい。一般に、宿主に
おいてポリヌクレオチドを維持、増幅または発現し、お
よび／またはポリペプチドを発現するのに適した系また
はベクターを、この点にて発現に使用してもよい。適当
なＤＮＡ配列を、例えば、Sambrookら、MOLECULAR CLON
ING，A LABORATORY MANUAL（前掲）に示されている技術
のごとき、種々のよく知られた慣用的技術のいずれかに
よって、発現系に挿入してもよい。
【００４７】翻訳されたタンパク質を、小胞体内腔、周
辺腔または細胞外環境に分泌するために、適当な分泌シ
グナルを発現されるポリペプチドに挿入してもよい。こ
れらのシグナルは、ポリペプチドに固有のものであって
もよく、または異種のシグナルであってもよい。本発明
のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール
沈澱、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグ
ラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水
相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ
ーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含する、周知
の方法によって組換え細胞培養物から回収および精製で
きる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィーが
精製に使用される。ポリペプチドが単離および／または
精製の間に変性する場合、タンパク質を再生するための
周知の方法を用いて、活性コンホメーションを再生して
もよい。
辺腔または細胞外環境に分泌するために、適当な分泌シ
グナルを発現されるポリペプチドに挿入してもよい。こ
れらのシグナルは、ポリペプチドに固有のものであって
もよく、または異種のシグナルであってもよい。本発明
のポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール
沈澱、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグ
ラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水
相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ
ーおよびレクチンクロマトグラフィーを包含する、周知
の方法によって組換え細胞培養物から回収および精製で
きる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィーが
精製に使用される。ポリペプチドが単離および／または
精製の間に変性する場合、タンパク質を再生するための
周知の方法を用いて、活性コンホメーションを再生して
もよい。
【００４８】診断アッセイ 本発明はまた診断試薬として使用するための本発明のｒ
ｎｃポリヌクレオチドの使用にも関連する。真核生物、
とりわけ哺乳動物、特にヒトにおけるｒｎｃの検出は、
疾患の診断のための診断方法を提供する。ｒｎｃ遺伝子
を含む生物に感染した真核生物（本明細書において「個
体」とも称する）、とりわけ哺乳動物、特にヒトを、種
々の方法により核酸レベルで検出できる。
ｎｃポリヌクレオチドの使用にも関連する。真核生物、
とりわけ哺乳動物、特にヒトにおけるｒｎｃの検出は、
疾患の診断のための診断方法を提供する。ｒｎｃ遺伝子
を含む生物に感染した真核生物（本明細書において「個
体」とも称する）、とりわけ哺乳動物、特にヒトを、種
々の方法により核酸レベルで検出できる。
【００４９】診断のための核酸は、感染した個体の細胞
および組織、例えば骨、血液、筋肉、軟骨および皮膚よ
り得ることができる。ゲノムＤＮＡは直接的に検出する
のに使用できるか、または分析に付す前にＰＣＲもしく
はその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅でき
る。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同じ方法にて使用できる。
増幅を用いて、個体中に存在する原核生物の種および株
を原核細胞遺伝子の遺伝子型の分析により特徴づけする
ことができる。対照配列の遺伝子型と比較した増幅生成
物の大きさの変化により、欠失および挿入を検出でき
る。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識したｒｎｃポリヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションすることによ
り同定できる。完全に対合した配列は、Rnase消化によ
り、または融解温度の差により、誤対合二重らせんと区
別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変性剤と共にまたは
無しでのゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動
度の変化により、または直接的なＤＮＡの配列決定によ
り検出できる。例えば、Myersら、Science, 230:1242
（1985）を参照のこと。特異的な位置での配列の変化は
また、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えば、ＲＮaseお
よびＳ１保護または化学的切断法によっても明らかにす
ることができる。例えば、Cottonら、Proc. Natl. Aca
d. Sci., USA, 85:4397-4401（1985）を参照のこと。
および組織、例えば骨、血液、筋肉、軟骨および皮膚よ
り得ることができる。ゲノムＤＮＡは直接的に検出する
のに使用できるか、または分析に付す前にＰＣＲもしく
はその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅でき
る。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同じ方法にて使用できる。
増幅を用いて、個体中に存在する原核生物の種および株
を原核細胞遺伝子の遺伝子型の分析により特徴づけする
ことができる。対照配列の遺伝子型と比較した増幅生成
物の大きさの変化により、欠失および挿入を検出でき
る。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識したｒｎｃポリヌ
クレオチド配列にハイブリダイゼーションすることによ
り同定できる。完全に対合した配列は、Rnase消化によ
り、または融解温度の差により、誤対合二重らせんと区
別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変性剤と共にまたは
無しでのゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動
度の変化により、または直接的なＤＮＡの配列決定によ
り検出できる。例えば、Myersら、Science, 230:1242
（1985）を参照のこと。特異的な位置での配列の変化は
また、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えば、ＲＮaseお
よびＳ１保護または化学的切断法によっても明らかにす
ることができる。例えば、Cottonら、Proc. Natl. Aca
d. Sci., USA, 85:4397-4401（1985）を参照のこと。
【００５０】本発明の遺伝子の突然変異または多型性を
担持する細胞はまた、種々の技術により、ＤＮＡレベル
で、例えばセロタイピングすることにより検出できる。
例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出すること
ができる。ＲＴ−ＰＣＲを自動検出系、例えばＧeneＳc
an等と組み合わせて用いるのが特に好ましい。ＲＮＡま
たはｃＤＮＡもまた同じ目的でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣ
Ｒに用いることができる。一例として、ｒｎｃをコード
する核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用いて突然変異
を同定および分析することができる。代表的なプライマ
ーの例を表２に示す。
担持する細胞はまた、種々の技術により、ＤＮＡレベル
で、例えばセロタイピングすることにより検出できる。
例えば、ＲＴ−ＰＣＲを用いて突然変異を検出すること
ができる。ＲＴ−ＰＣＲを自動検出系、例えばＧeneＳc
an等と組み合わせて用いるのが特に好ましい。ＲＮＡま
たはｃＤＮＡもまた同じ目的でＰＣＲまたはＲＴ−ＰＣ
Ｒに用いることができる。一例として、ｒｎｃをコード
する核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用いて突然変異
を同定および分析することができる。代表的なプライマ
ーの例を表２に示す。
【００５１】 表２ ｒｎｃポリヌクレオチドを増幅するためのプライマー 配列番号 プライマー配列 ３ 5'-GGAAACTGCCTTTACTCATAC -3' ４ 5'-TCTTCCCCTTTACCCAAC-3'
【００５２】本発明はさらに５’および／または３’末
端より１、２、３または４個のヌクレオチドが除去され
たこれらのプライマーを提供する。これらのプライマー
をとりわけ個体由来のサンプルから単離したｒｎｃＤＮ
Ａを増幅するのに用いることもできる。該プライマーを
用いて、感染した個体から単離した遺伝子を増幅しても
よく、ついで、該遺伝子をＤＮＡ配列を調べるための種
々の技法に供することができる。このように、ＤＮＡ配
列における突然変異を検出し、これを用いて感染を診断
し、感染性物質をセロタイプまたは分類することができ
る。
端より１、２、３または４個のヌクレオチドが除去され
たこれらのプライマーを提供する。これらのプライマー
をとりわけ個体由来のサンプルから単離したｒｎｃＤＮ
Ａを増幅するのに用いることもできる。該プライマーを
用いて、感染した個体から単離した遺伝子を増幅しても
よく、ついで、該遺伝子をＤＮＡ配列を調べるための種
々の技法に供することができる。このように、ＤＮＡ配
列における突然変異を検出し、これを用いて感染を診断
し、感染性物質をセロタイプまたは分類することができ
る。
【００５３】本発明は、疾患、好ましくは細菌感染、よ
り好ましくはストレプトコッカス・ニューモニアエによ
る感染、および最も好ましくは中耳炎、結膜炎、肺炎、
菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内膜炎、特に
例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜炎などの疾患の診断
方法であって、表１（配列番号１）の配列を有するポリ
ヌクレオチドの発現レベルの上昇を、個体由来のサンプ
ルから決定することを特徴とする方法を提供する。ｒｎ
ｃポリヌクレオチドの発現の増加または低下は、ポリヌ
クレオチドの定量法として当該分野で周知の方法である
任意の方法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮ
ase保護、ノーザンブロッティングおよびその他のハイ
ブリダイゼーション法を用いて測定できる。
り好ましくはストレプトコッカス・ニューモニアエによ
る感染、および最も好ましくは中耳炎、結膜炎、肺炎、
菌血症、髄膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内膜炎、特に
例えば脳脊髄液の感染のごとき髄膜炎などの疾患の診断
方法であって、表１（配列番号１）の配列を有するポリ
ヌクレオチドの発現レベルの上昇を、個体由来のサンプ
ルから決定することを特徴とする方法を提供する。ｒｎ
ｃポリヌクレオチドの発現の増加または低下は、ポリヌ
クレオチドの定量法として当該分野で周知の方法である
任意の方法、例えば増幅、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮ
ase保護、ノーザンブロッティングおよびその他のハイ
ブリダイゼーション法を用いて測定できる。
【００５４】加えて、正常対照組織サンプルと比較して
ｒｎｃタンパク質の過剰発現を検出するための本発明に
よる診断アッセイを用いて、例えば感染の存在を検出す
ることができる。宿主由来のサンプル中のｒｎｃタンパ
ク質のレベルを決定するために用いることができるアッ
セイ技法は、当業者に周知である。このようなアッセイ
法は、ラジオイムノアッセイ、競合的結合アッセイ、ウ
ェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含
する。
ｒｎｃタンパク質の過剰発現を検出するための本発明に
よる診断アッセイを用いて、例えば感染の存在を検出す
ることができる。宿主由来のサンプル中のｒｎｃタンパ
ク質のレベルを決定するために用いることができるアッ
セイ技法は、当業者に周知である。このようなアッセイ
法は、ラジオイムノアッセイ、競合的結合アッセイ、ウ
ェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイを包含
する。
【００５５】抗体 本発明のポリペプチドもしくはその変種、またはそれら
を発現する細胞は、このようなポリペプチドに免疫特異
的な抗体を産生する免疫原として用いることができる。
本明細書で用いる「抗体」は、モノクローナルおよびポ
リクローナル抗体、キメラ、一本鎖、サル化抗体および
ヒト化抗体、ならびにＦａｂ免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの生成物を包含するＦａｂフラグメントを包含す
る。本発明のポリペプチドに対して生じる抗体は、ポリ
ペプチドまたはエピトープが付いたフラグメント、アナ
ログまたは細胞を、好ましくはヒト以外の動物に、慣用
的プロトコルを用いて投与することにより得ることがで
きる。モノクローナル抗体を調製する場合、連続的細胞
系培養により産生される抗体を提供する当業者周知の技
術を用いることができる。例えば、Kohler, G.およびMi
lstein, C.,Nature 256: 495-497（1975）；Kozborら、
Immunology Today, 4: 72（1983）；Coleら、Monoclona
l Antibodies and Cancer Therapy, Alan R Liss, In
c., pg.77-96（1985）に記載されるような種々の技法が
挙げられる。
を発現する細胞は、このようなポリペプチドに免疫特異
的な抗体を産生する免疫原として用いることができる。
本明細書で用いる「抗体」は、モノクローナルおよびポ
リクローナル抗体、キメラ、一本鎖、サル化抗体および
ヒト化抗体、ならびにＦａｂ免疫グロブリン発現ライブ
ラリーの生成物を包含するＦａｂフラグメントを包含す
る。本発明のポリペプチドに対して生じる抗体は、ポリ
ペプチドまたはエピトープが付いたフラグメント、アナ
ログまたは細胞を、好ましくはヒト以外の動物に、慣用
的プロトコルを用いて投与することにより得ることがで
きる。モノクローナル抗体を調製する場合、連続的細胞
系培養により産生される抗体を提供する当業者周知の技
術を用いることができる。例えば、Kohler, G.およびMi
lstein, C.,Nature 256: 495-497（1975）；Kozborら、
Immunology Today, 4: 72（1983）；Coleら、Monoclona
l Antibodies and Cancer Therapy, Alan R Liss, In
c., pg.77-96（1985）に記載されるような種々の技法が
挙げられる。
【００５６】一本鎖抗体を製造するための技術（米国特
許第４９４６７７８号）を用いて、本発明のポリペプチ
ドに対する一本鎖抗体を産生することができる。また、
トランスジェニックマウスまたは他の生物、例えば他の
哺乳動物を用いて、ヒト化抗体を発現させることができ
る。別法として、ファージディスプレイ（phage displa
y）技法を利用して、抗−ｒｎｃを保持することについ
てスクリーニングしたヒト由来のリンパ球のＰＣＲ増幅
したｖ遺伝子のレパートリー由来の、または無処理のラ
イブラリー由来のポリペプチドに対する結合活性を有す
る抗体遺伝子を選択してもよい（McCafferty, J.ら、Na
ture 348, 552-554（1990）；Marks, J.ら、Biotechnol
ogy 10, 779-783(1992)）。これらの抗体の親和性はチ
ェインシャフリング（chain shuffling）により改善す
ることもできる（Clackson,T. ら、Nature 352, 624-62
8（1991））。二つの抗原結合ドメインが存在する場
合、各ドメインは異なるエピトープに向けることがで
き、それを「二特異性」抗体と称する。前記の抗体を用
いてポリペプチドを発現するクローンを単離または同定
することができ、アフィニティークロマトグラフィーに
より該ポリペプチドを精製することができる。
許第４９４６７７８号）を用いて、本発明のポリペプチ
ドに対する一本鎖抗体を産生することができる。また、
トランスジェニックマウスまたは他の生物、例えば他の
哺乳動物を用いて、ヒト化抗体を発現させることができ
る。別法として、ファージディスプレイ（phage displa
y）技法を利用して、抗−ｒｎｃを保持することについ
てスクリーニングしたヒト由来のリンパ球のＰＣＲ増幅
したｖ遺伝子のレパートリー由来の、または無処理のラ
イブラリー由来のポリペプチドに対する結合活性を有す
る抗体遺伝子を選択してもよい（McCafferty, J.ら、Na
ture 348, 552-554（1990）；Marks, J.ら、Biotechnol
ogy 10, 779-783(1992)）。これらの抗体の親和性はチ
ェインシャフリング（chain shuffling）により改善す
ることもできる（Clackson,T. ら、Nature 352, 624-62
8（1991））。二つの抗原結合ドメインが存在する場
合、各ドメインは異なるエピトープに向けることがで
き、それを「二特異性」抗体と称する。前記の抗体を用
いてポリペプチドを発現するクローンを単離または同定
することができ、アフィニティークロマトグラフィーに
より該ポリペプチドを精製することができる。
【００５７】したがって、とりわけ、ｒｎｃ−ポリペプ
チドに対する抗体を用いて、感染、とりわけ細菌感染、
特に中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎などの疾患を治療することができる。ポリ
ペプチド変種は、本発明の特定の態様を形成する、抗原
的、エピトープ的または免疫学的に等価な変種を包含す
る。本明細書で用いる「抗原的に等価な誘導体」なる用
語は、本発明のタンパク質またはポリペプチドに対して
誘起された場合、病原体および哺乳動物宿主間での即時
的な身体的相互作用を妨害する、ある種の抗体により特
異的に認識されるポリペプチドまたはその同等物を包含
する。本明細書で用いる「免疫学的に等価な誘導体」な
る用語は、脊椎動物において抗体を誘起させるのに適し
た処方を用いた場合、抗体が病原体および哺乳動物宿主
間での即時的な身体的相互作用を妨害するように作用す
るペプチドまたはその等価物を包含する。
チドに対する抗体を用いて、感染、とりわけ細菌感染、
特に中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄膜炎、静脈洞
炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊髄液の感染の
ごとき髄膜炎などの疾患を治療することができる。ポリ
ペプチド変種は、本発明の特定の態様を形成する、抗原
的、エピトープ的または免疫学的に等価な変種を包含す
る。本明細書で用いる「抗原的に等価な誘導体」なる用
語は、本発明のタンパク質またはポリペプチドに対して
誘起された場合、病原体および哺乳動物宿主間での即時
的な身体的相互作用を妨害する、ある種の抗体により特
異的に認識されるポリペプチドまたはその同等物を包含
する。本明細書で用いる「免疫学的に等価な誘導体」な
る用語は、脊椎動物において抗体を誘起させるのに適し
た処方を用いた場合、抗体が病原体および哺乳動物宿主
間での即時的な身体的相互作用を妨害するように作用す
るペプチドまたはその等価物を包含する。
【００５８】抗原的、免疫学的に等価な誘導体、または
その融合タンパク質などのポリペプチドは、マウスまた
は他の動物、例えばラットもしくはニワトリを免疫する
ための抗原として使用される。融合タンパク質はポリペ
プチドに安定性を付与できる。抗原は、例えば抱合する
ことにより、免疫原性キャリヤタンパク質、例えばウシ
血清アルブミン（ＢＳＡ）またはキーホール・リムペッ
ト・ヘモシアニン（keyhole limpet haemocyanin：ＫＬ
Ｈ）に結合させることができる。別法として、タンパク
質もしくはポリペプチド、またはその抗原的もしくは免
疫学的に等価なポリペプチドの多重コピーを含む多重抗
原性ペプチドは、免疫原性を改良するのに十分な抗原性
を有しており、キャリヤを使用しなくてすむ。
その融合タンパク質などのポリペプチドは、マウスまた
は他の動物、例えばラットもしくはニワトリを免疫する
ための抗原として使用される。融合タンパク質はポリペ
プチドに安定性を付与できる。抗原は、例えば抱合する
ことにより、免疫原性キャリヤタンパク質、例えばウシ
血清アルブミン（ＢＳＡ）またはキーホール・リムペッ
ト・ヘモシアニン（keyhole limpet haemocyanin：ＫＬ
Ｈ）に結合させることができる。別法として、タンパク
質もしくはポリペプチド、またはその抗原的もしくは免
疫学的に等価なポリペプチドの多重コピーを含む多重抗
原性ペプチドは、免疫原性を改良するのに十分な抗原性
を有しており、キャリヤを使用しなくてすむ。
【００５９】抗体またはその変種を修飾し、個体におけ
る免疫原性を減少させることが好ましい。例えば、個体
がヒトである場合、抗体は最も好ましくは「ヒト化」さ
れており；例えばJones, P. ら、Nature 321, 522-525
（1986）またはTempestら、Biotechnology 9, 266-273
（1991）に記載されているように、ハイブリドーマ由来
の抗体の相補性決定領域がヒトモノクローナル抗体に移
植されている。本発明のポリヌクレオチドの遺伝学的免
疫における使用は、好ましくは、プラスミドＤＮＡの筋
肉への直接注射（Wolffら、Hum. Mol Genet 1:363（199
2）, Manthorpeら、Hum. Gene Ther. 4, 419（196
3））、特異的タンパク質キャリヤを複合させたＤＮＡ
の送達（Wuら、J Biol Chem. 264, 16985（1989））、
リン酸カルシウムを用いるＤＮＡ共沈（Benvenisty & R
eshef, PNAS USA, 83, 9551（1986））、種々の形態の
リポソーム中へのＤＮＡ封入（Kanedaら、Science 243,
375（1989））、微粒子爆撃（Tangら、Nature 356, 152
（1992）, Eisenbraunら、DNA Cell Biol.12:791（199
3））およびクローン化レトロウイルスベクターを用い
たインビボ感染（Seegerら、PNAS USA 81, 5849（198
4））などの適当な送達方法を用いる。
る免疫原性を減少させることが好ましい。例えば、個体
がヒトである場合、抗体は最も好ましくは「ヒト化」さ
れており；例えばJones, P. ら、Nature 321, 522-525
（1986）またはTempestら、Biotechnology 9, 266-273
（1991）に記載されているように、ハイブリドーマ由来
の抗体の相補性決定領域がヒトモノクローナル抗体に移
植されている。本発明のポリヌクレオチドの遺伝学的免
疫における使用は、好ましくは、プラスミドＤＮＡの筋
肉への直接注射（Wolffら、Hum. Mol Genet 1:363（199
2）, Manthorpeら、Hum. Gene Ther. 4, 419（196
3））、特異的タンパク質キャリヤを複合させたＤＮＡ
の送達（Wuら、J Biol Chem. 264, 16985（1989））、
リン酸カルシウムを用いるＤＮＡ共沈（Benvenisty & R
eshef, PNAS USA, 83, 9551（1986））、種々の形態の
リポソーム中へのＤＮＡ封入（Kanedaら、Science 243,
375（1989））、微粒子爆撃（Tangら、Nature 356, 152
（1992）, Eisenbraunら、DNA Cell Biol.12:791（199
3））およびクローン化レトロウイルスベクターを用い
たインビボ感染（Seegerら、PNAS USA 81, 5849（198
4））などの適当な送達方法を用いる。
【００６０】アンタゴニストおよびアゴニスト−アッセ
イおよび分子 また、本発明のポリペプチドを用いて、例えば、細胞、
無細胞調製物、化学的ライブラリー、および天然産物の
混合物中の、小分子基質とリガンドとの結合を評価する
こともできる。これらの基質およびリガンドは天然の基
質およびリガンドでよく、または構造上もしくは機能上
の擬似物質でもよい。例えば、Coliganら、Current Pro
tocols in Immunology 1(2):Chapter 5（1991）を参照
のこと。
イおよび分子 また、本発明のポリペプチドを用いて、例えば、細胞、
無細胞調製物、化学的ライブラリー、および天然産物の
混合物中の、小分子基質とリガンドとの結合を評価する
こともできる。これらの基質およびリガンドは天然の基
質およびリガンドでよく、または構造上もしくは機能上
の擬似物質でもよい。例えば、Coliganら、Current Pro
tocols in Immunology 1(2):Chapter 5（1991）を参照
のこと。
【００６１】本発明はまた、ｒｎｃポリペプチドまたは
ポリヌクレオチドの作用を活性化（アゴニスト）または
遮断（アンタゴニスト）する化合物、特に静菌性または
殺菌性の化合物を同定するために化合物をスクリーニン
グする方法を提供する。スクリーニング方法には、高処
理手法が包含される。例えば、アゴニストまたはアンタ
ゴニストをスクリーニングするために、ｒｎｃポリペプ
チドおよびかかるポリペプチドの標識基質またはリガン
ドを含んでなる合成反応混合物、膜、細胞エンベロープ
もしくは細胞壁のごとき細胞コンパートメント、または
それらのいずれかの調製物を、ｒｎｃアゴニストまたは
アンタゴニストであるかもしれない候補分子の存在下ま
たは不在下でインキュベーションする。候補分子がｒｎ
ｃポリペプチドに作動または拮抗する能力は、標識リガ
ンドの結合の低下またはかかる基質からの生成物の生成
低下に反映される。結合しても影響を及ぼさない分子、
すなわちｒｎｃの効果を誘起しない分子は、ほとんどの
場合、良好なアンタゴニストであろう。よく結合し、基
質からの生成物の生成速度を高める分子はアゴニストで
ある。基質からの生成物の生成速度またはレベルの検出
はリポーターシステムを用いることにより増強できる。
この点に関して有用なリポーターシステムは、生成物に
転換される比色標識基質、ｒｎｃポリヌクレオチドまた
はポリペプチド活性の変化に応答するリポーター遺伝
子、および当該分野で公知の結合アッセイを包含する
が、これらに限定するものではない。
ポリヌクレオチドの作用を活性化（アゴニスト）または
遮断（アンタゴニスト）する化合物、特に静菌性または
殺菌性の化合物を同定するために化合物をスクリーニン
グする方法を提供する。スクリーニング方法には、高処
理手法が包含される。例えば、アゴニストまたはアンタ
ゴニストをスクリーニングするために、ｒｎｃポリペプ
チドおよびかかるポリペプチドの標識基質またはリガン
ドを含んでなる合成反応混合物、膜、細胞エンベロープ
もしくは細胞壁のごとき細胞コンパートメント、または
それらのいずれかの調製物を、ｒｎｃアゴニストまたは
アンタゴニストであるかもしれない候補分子の存在下ま
たは不在下でインキュベーションする。候補分子がｒｎ
ｃポリペプチドに作動または拮抗する能力は、標識リガ
ンドの結合の低下またはかかる基質からの生成物の生成
低下に反映される。結合しても影響を及ぼさない分子、
すなわちｒｎｃの効果を誘起しない分子は、ほとんどの
場合、良好なアンタゴニストであろう。よく結合し、基
質からの生成物の生成速度を高める分子はアゴニストで
ある。基質からの生成物の生成速度またはレベルの検出
はリポーターシステムを用いることにより増強できる。
この点に関して有用なリポーターシステムは、生成物に
転換される比色標識基質、ｒｎｃポリヌクレオチドまた
はポリペプチド活性の変化に応答するリポーター遺伝
子、および当該分野で公知の結合アッセイを包含する
が、これらに限定するものではない。
【００６２】ｒｎｃアンタゴニストのアッセイの別の例
は、競争阻害アッセイに適した条件下で、ｒｎｃおよび
潜在的なアンタゴニストを、ｒｎｃ結合分子、組換えｒ
ｎｃ結合分子、天然基質もしくはリガンド、または基質
もしくはリガンド擬似物質と混合する、競合アッセイで
ある。ｒｎｃ分子を例えば放射活性または比色化合物に
より標識し、結合分子に結合した、または生成物に変換
したｒｎｃ分子の数を正確に決定して、潜在的なアンタ
ゴニストの効果を評価できる。
は、競争阻害アッセイに適した条件下で、ｒｎｃおよび
潜在的なアンタゴニストを、ｒｎｃ結合分子、組換えｒ
ｎｃ結合分子、天然基質もしくはリガンド、または基質
もしくはリガンド擬似物質と混合する、競合アッセイで
ある。ｒｎｃ分子を例えば放射活性または比色化合物に
より標識し、結合分子に結合した、または生成物に変換
したｒｎｃ分子の数を正確に決定して、潜在的なアンタ
ゴニストの効果を評価できる。
【００６３】潜在的なアンタゴニストは、本発明のポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドに結合し、それにより
その活性を阻害しまたは消滅させる小有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチドおよび抗体を包含する。潜在的アンタ
ゴニストはまた、ｒｎｃ誘発活性を誘導しない結合分子
のような、結合分子の同一部位に結合し、ｒｎｃを結合
より排除することによりｒｎｃの作用を妨げる、密接に
関連したタンパク質または抗体のような小有機分子、ペ
プチド、ポリペプチドであるかもしれない。
ヌクレオチドまたはポリペプチドに結合し、それにより
その活性を阻害しまたは消滅させる小有機分子、ペプチ
ド、ポリペプチドおよび抗体を包含する。潜在的アンタ
ゴニストはまた、ｒｎｃ誘発活性を誘導しない結合分子
のような、結合分子の同一部位に結合し、ｒｎｃを結合
より排除することによりｒｎｃの作用を妨げる、密接に
関連したタンパク質または抗体のような小有機分子、ペ
プチド、ポリペプチドであるかもしれない。
【００６４】潜在的なアンタゴニストは、ポリペプチド
の結合部位に結合して占領し、それにより細胞性結合分
子への結合を防御して、正常な生物学的活性を防御する
小分子を包含する。小分子の例は、小有機分子、ペプチ
ド、ペプチド様分子を包含するが、これらに限定するも
のではない。その他の潜在的なアンタゴニストはアンチ
センス分子を包含する（これらの分子についての記載に
関しては、Okano, J.,Neurochem. 56:560（1991）；OLI
GODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GENE
EXPRESSION, CRC Press, Boca Raton, FL (1988) を参
照のこと）。好ましい潜在的アンタゴニストは、ｒｎｃ
に関連する化合物およびその変種を包含する。
の結合部位に結合して占領し、それにより細胞性結合分
子への結合を防御して、正常な生物学的活性を防御する
小分子を包含する。小分子の例は、小有機分子、ペプチ
ド、ペプチド様分子を包含するが、これらに限定するも
のではない。その他の潜在的なアンタゴニストはアンチ
センス分子を包含する（これらの分子についての記載に
関しては、Okano, J.,Neurochem. 56:560（1991）；OLI
GODEOXYNUCLEOTIDES AS ANTISENSE INHIBITORS OF GENE
EXPRESSION, CRC Press, Boca Raton, FL (1988) を参
照のこと）。好ましい潜在的アンタゴニストは、ｒｎｃ
に関連する化合物およびその変種を包含する。
【００６５】本明細書で提供されるＤＮＡ配列は、各
々、抗細菌化合物の発見および開発に用いることができ
る。発現時に、コードされたタンパク質は、抗細菌薬物
をスクリーニングするための標的として用いることがで
きる。加えて、コードされたタンパク質もしくはShine-
Delgarnoまたは他の個々のｍＲＮＡの翻訳容易化配列の
アミノ末端領域をコードするＤＮＡ配列を用いて、目的
とするコーディング配列の発現を調節するアンチセンス
配列を構築することができる。
々、抗細菌化合物の発見および開発に用いることができ
る。発現時に、コードされたタンパク質は、抗細菌薬物
をスクリーニングするための標的として用いることがで
きる。加えて、コードされたタンパク質もしくはShine-
Delgarnoまたは他の個々のｍＲＮＡの翻訳容易化配列の
アミノ末端領域をコードするＤＮＡ配列を用いて、目的
とするコーディング配列の発現を調節するアンチセンス
配列を構築することができる。
【００６６】本発明は、本発明のポリペプチド、ポリヌ
クレオチドまたは阻害剤の使用であって、感染の続発症
に関与する、病因および哺乳動物宿主間の最初の物理的
相互作用を妨害するための使用を提供する。特に本発明
の分子を、：細菌、特にグラム陽性細菌の内在装置上の
哺乳動物細胞外マトリックスタンパク質、または創傷部
の細胞外マトリックスタンパク質への付着の妨げ；例え
ば、哺乳動物性チロシンキナーゼのリン酸化の開始によ
る、ｒｎｃタンパク質媒介の哺乳動物細胞侵入の遮断
（Rosenshineら、Infect. Immun.60: 2211(1992))；哺
乳動物細胞外マトリックスタンパク質と組織損傷を媒介
する細菌性ｒｎｃタンパク質との間の細菌付着の遮断；
および、内在装置の埋め込みまたはその他の手術以外に
より開始した感染における病因の正常な進行の遮断に使
用することができる。
クレオチドまたは阻害剤の使用であって、感染の続発症
に関与する、病因および哺乳動物宿主間の最初の物理的
相互作用を妨害するための使用を提供する。特に本発明
の分子を、：細菌、特にグラム陽性細菌の内在装置上の
哺乳動物細胞外マトリックスタンパク質、または創傷部
の細胞外マトリックスタンパク質への付着の妨げ；例え
ば、哺乳動物性チロシンキナーゼのリン酸化の開始によ
る、ｒｎｃタンパク質媒介の哺乳動物細胞侵入の遮断
（Rosenshineら、Infect. Immun.60: 2211(1992))；哺
乳動物細胞外マトリックスタンパク質と組織損傷を媒介
する細菌性ｒｎｃタンパク質との間の細菌付着の遮断；
および、内在装置の埋め込みまたはその他の手術以外に
より開始した感染における病因の正常な進行の遮断に使
用することができる。
【００６７】本発明のアンタゴニストおよびアゴニスト
を用いて、例えば、中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄
膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊
髄液の感染のごとき髄膜炎などの疾患を阻害および治療
することができる。
を用いて、例えば、中耳炎、結膜炎、肺炎、菌血症、髄
膜炎、静脈洞炎、膿胸および心内膜炎、特に例えば脳脊
髄液の感染のごとき髄膜炎などの疾患を阻害および治療
することができる。
【００６８】ワクチン 本発明の別の態様は、個体、特に哺乳動物における免疫
学的応答を誘発する方法であって、抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生成するのに適当なｒｎｃ、またはそ
のフラグメントもしくは変種を個体に接種し、該個体を
感染、特に細菌感染、最も好ましくはストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ感染から防御することを含む方法に
関する。またかかる免疫学的応答が細菌複製を遅くする
方法も提供する。本発明のさらにもう一つ別の態様は、
個体における免疫学的応答を誘発する方法であって、in
vivoでｒｎｃまたはそのフラグメントまたは変種を発
現するために、該ｒｎｃまたはそのフラグメントまたは
変種をコードする遺伝子をデリバリーし、例えば、サイ
トカイン産生Ｔ細胞または細胞毒性Ｔ細胞を含め、抗体
および／またはＴ細胞免疫応答を生じさせるように免疫
学的応答を誘発し、該個体にて疾患が既に確立されてい
るか、否かにかかわらず該個体を疾患から保護すること
を含む方法に関する。遺伝子を投与する一の方法は、粒
子等のコーティングとして遺伝子を所望の細胞に投与す
ることによるものである。このような核酸ベクターはＤ
ＮＡ、ＲＮＡ、修飾核酸またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリ
ッドからなっていてもよい。
学的応答を誘発する方法であって、抗体および／または
Ｔ細胞免疫応答を生成するのに適当なｒｎｃ、またはそ
のフラグメントもしくは変種を個体に接種し、該個体を
感染、特に細菌感染、最も好ましくはストレプトコッカ
ス・ニューモニアエ感染から防御することを含む方法に
関する。またかかる免疫学的応答が細菌複製を遅くする
方法も提供する。本発明のさらにもう一つ別の態様は、
個体における免疫学的応答を誘発する方法であって、in
vivoでｒｎｃまたはそのフラグメントまたは変種を発
現するために、該ｒｎｃまたはそのフラグメントまたは
変種をコードする遺伝子をデリバリーし、例えば、サイ
トカイン産生Ｔ細胞または細胞毒性Ｔ細胞を含め、抗体
および／またはＴ細胞免疫応答を生じさせるように免疫
学的応答を誘発し、該個体にて疾患が既に確立されてい
るか、否かにかかわらず該個体を疾患から保護すること
を含む方法に関する。遺伝子を投与する一の方法は、粒
子等のコーティングとして遺伝子を所望の細胞に投与す
ることによるものである。このような核酸ベクターはＤ
ＮＡ、ＲＮＡ、修飾核酸またはＤＮＡ／ＲＮＡハイブリ
ッドからなっていてもよい。
【００６９】本発明のさらなる態様は、その中に免疫学
的応答を誘発する能力を有するか、または誘発している
宿主に導入されると、その宿主においてｒｎｃまたはそ
れからコードされるタンパク質に対する免疫学的応答を
誘発する免疫学的組成物であって、該ｒｎｃまたはそれ
からコードされるタンパク質の抗原をコードし、発現す
るＤＮＡを含む組換えｒｎｃまたはそれからコードされ
るタンパク質からなる組成物に関する。免疫学的応答
は、治療的および予防的に使用でき、抗体免疫またはＣ
ＴＬまたはＣＤ４＋Ｔ細胞から生ずるような細胞性免疫
から得ることができる。
的応答を誘発する能力を有するか、または誘発している
宿主に導入されると、その宿主においてｒｎｃまたはそ
れからコードされるタンパク質に対する免疫学的応答を
誘発する免疫学的組成物であって、該ｒｎｃまたはそれ
からコードされるタンパク質の抗原をコードし、発現す
るＤＮＡを含む組換えｒｎｃまたはそれからコードされ
るタンパク質からなる組成物に関する。免疫学的応答
は、治療的および予防的に使用でき、抗体免疫またはＣ
ＴＬまたはＣＤ４＋Ｔ細胞から生ずるような細胞性免疫
から得ることができる。
【００７０】ｒｎｃまたはそのフラグメントは、それ自
体抗体を産生しないが、第一タンパク質の安定化ならび
に免疫原性および保護特性を有するであろう融合タンパ
ク質の産生能を有する補タンパク質（co−Protein）と
融合させることができる。このような融合組換えタンパ
ク質は、好ましくは、さらに、ヘモフィラス・インフル
エンザ（Hemophilus influenzae）由来のリポプロテイ
ンＤ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳ
Ｔ）またはベータガラクトシダーゼのような抗原性補タ
ンパク質、タンパク質を可溶化し、その産生および精製
を容易にするような比較的大きい補タンパク質を含む。
さらに、補タンパク質は、免疫系の全身的な刺激を与え
る上で、アジュバントとして作用できる。補タンパク質
は第一タンパク質のアミノまたはカルボキシ末端のいず
れかに結合してもよい。本発明は、本発明のポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドおよび、Sato，Y.ら，Scienc
e, 273: 352(1996) に記載されるような免疫刺激ＤＮＡ
配列を含む組成物、特にワクチン組成物および方法を提
供する。
体抗体を産生しないが、第一タンパク質の安定化ならび
に免疫原性および保護特性を有するであろう融合タンパ
ク質の産生能を有する補タンパク質（co−Protein）と
融合させることができる。このような融合組換えタンパ
ク質は、好ましくは、さらに、ヘモフィラス・インフル
エンザ（Hemophilus influenzae）由来のリポプロテイ
ンＤ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳ
Ｔ）またはベータガラクトシダーゼのような抗原性補タ
ンパク質、タンパク質を可溶化し、その産生および精製
を容易にするような比較的大きい補タンパク質を含む。
さらに、補タンパク質は、免疫系の全身的な刺激を与え
る上で、アジュバントとして作用できる。補タンパク質
は第一タンパク質のアミノまたはカルボキシ末端のいず
れかに結合してもよい。本発明は、本発明のポリペプチ
ドまたはポリヌクレオチドおよび、Sato，Y.ら，Scienc
e, 273: 352(1996) に記載されるような免疫刺激ＤＮＡ
配列を含む組成物、特にワクチン組成物および方法を提
供する。
【００７１】また、本発明は、ストレプトコッカス・ニ
ューモニアエ感染の動物モデルにおけるそのような遺伝
的免疫実験において使用したＤＮＡ構築物中で細菌細胞
表面タンパク質の非可変領域をコードすることが明らか
にされた記載のポリヌクレオチドまたはその特定のフラ
グメントを使用する方法も提供するもので、予防的また
は治療的免疫応答を起こさせることのできるタンパク質
エピトープの同定に特に有用である。この方法により、
動物、とりわけヒトにおける細菌感染、特にストレプト
コッカス・ニューモニアエ感染の予防剤または治療剤の
開発のために、動物の必要な器官から感染の抵抗または
除去に特に有用なモノクローナル抗体を産生させること
ができる。
ューモニアエ感染の動物モデルにおけるそのような遺伝
的免疫実験において使用したＤＮＡ構築物中で細菌細胞
表面タンパク質の非可変領域をコードすることが明らか
にされた記載のポリヌクレオチドまたはその特定のフラ
グメントを使用する方法も提供するもので、予防的また
は治療的免疫応答を起こさせることのできるタンパク質
エピトープの同定に特に有用である。この方法により、
動物、とりわけヒトにおける細菌感染、特にストレプト
コッカス・ニューモニアエ感染の予防剤または治療剤の
開発のために、動物の必要な器官から感染の抵抗または
除去に特に有用なモノクローナル抗体を産生させること
ができる。
【００７２】該ポリペプチドを宿主を免疫化するための
抗原として用い、例えば、損傷組織への細菌の付着を遮
断することにより、細菌の侵入を妨げる特異抗体を生じ
させることができる。組織損傷の例としては、例えば、
機械的、化学的または熱的損傷による、または内在装置
の埋め込みによる皮膚や結合組織の傷、あるいは口、乳
腺、子宮または膣のような粘膜における傷が挙げられ
る。
抗原として用い、例えば、損傷組織への細菌の付着を遮
断することにより、細菌の侵入を妨げる特異抗体を生じ
させることができる。組織損傷の例としては、例えば、
機械的、化学的または熱的損傷による、または内在装置
の埋め込みによる皮膚や結合組織の傷、あるいは口、乳
腺、子宮または膣のような粘膜における傷が挙げられ
る。
【００７３】本発明はまた、免疫原性組換えタンパク質
と、適当な担体を含むワクチン処方も包含する。タンパ
ク質は胃で分解されうるので、非経口的投与（例えば、
皮下、筋肉内、静脈内、皮内等の投与を包含する）が望
ましい。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝
剤、抗菌剤、およびその処方を個体の体液、好ましくは
血液と等張にする溶質を含有してもよい、水性および非
水性滅菌注射溶液；懸濁化剤または増粘剤を含有しても
よい、水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。処方
は、単位投与または複数投与用容器、例えば、密封され
たアンプルおよびバイアルにて提供され、使用直前に滅
菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵す
ることができる。ワクチン処方はまた、水中油系のごと
き処方の免疫原性を高めるアジュバント系および当該分
野において知られている他の系を有してもよい。投与量
はワクチンの比活性に依存し、慣用的実験操作によって
容易に決定できる。本発明をある種のｒｎｃタンパク質
について記載したが、この記載は自然に起こるタンパク
質のフラグメントおよび組換えタンパク質の免疫原性を
実質的に変化させない付加、欠失、置換を有する同様な
タンパク質も包含することが理解されるであろう。
と、適当な担体を含むワクチン処方も包含する。タンパ
ク質は胃で分解されうるので、非経口的投与（例えば、
皮下、筋肉内、静脈内、皮内等の投与を包含する）が望
ましい。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、緩衝
剤、抗菌剤、およびその処方を個体の体液、好ましくは
血液と等張にする溶質を含有してもよい、水性および非
水性滅菌注射溶液；懸濁化剤または増粘剤を含有しても
よい、水性および非水性滅菌懸濁液を包含する。処方
は、単位投与または複数投与用容器、例えば、密封され
たアンプルおよびバイアルにて提供され、使用直前に滅
菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で貯蔵す
ることができる。ワクチン処方はまた、水中油系のごと
き処方の免疫原性を高めるアジュバント系および当該分
野において知られている他の系を有してもよい。投与量
はワクチンの比活性に依存し、慣用的実験操作によって
容易に決定できる。本発明をある種のｒｎｃタンパク質
について記載したが、この記載は自然に起こるタンパク
質のフラグメントおよび組換えタンパク質の免疫原性を
実質的に変化させない付加、欠失、置換を有する同様な
タンパク質も包含することが理解されるであろう。
【００７４】組成物、キットおよび投与 本発明はまた、上記したポリヌクレオチドまたはポリペ
プチドあるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニス
トを含む組成物に関する。本発明のポリペプチドは、対
象への投与に適した医薬担体のような細胞、組織または
器官用の非滅菌または滅菌担体と組み合わせて使用でき
る。かかる組成物は、例えば、媒体添加または治療上有
効量の本発明のポリペプチドと、医薬上許容される担体
または賦形剤を含む。かかる担体は、限定するものでは
ないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グ
リセロール、エタノールおよびその組み合わせを包含す
る。処方は投与方法に適していなければならない。本発
明は、さらには、上記した本発明の組成物の一またはそ
れ以上の成分を充填した、一またはそれ以上の容器を有
してなる診断および医薬用パックおよびキットに関す
る。
プチドあるいはそれらのアゴニストまたはアンタゴニス
トを含む組成物に関する。本発明のポリペプチドは、対
象への投与に適した医薬担体のような細胞、組織または
器官用の非滅菌または滅菌担体と組み合わせて使用でき
る。かかる組成物は、例えば、媒体添加または治療上有
効量の本発明のポリペプチドと、医薬上許容される担体
または賦形剤を含む。かかる担体は、限定するものでは
ないが、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グ
リセロール、エタノールおよびその組み合わせを包含す
る。処方は投与方法に適していなければならない。本発
明は、さらには、上記した本発明の組成物の一またはそ
れ以上の成分を充填した、一またはそれ以上の容器を有
してなる診断および医薬用パックおよびキットに関す
る。
【００７５】本発明のポリペプチドおよび他の化合物
を、単独で、または、治療用化合物などの他の化合物と
組み合わせて用いてもよい。該医薬組成物は、例えば、
局所、経口、経肛門、経膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、
皮下、経鼻、経皮等を含む、いずれかの有効な、都合の
よい方法で投与される。治療および予防において、活性
成分は個体に注射用組成物、例えば、滅菌水性分散液、
好ましくは等張の水性分散液として投与される。また、
組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟
膏、点眼剤、点耳剤、洗口剤、含浸包帯および縫合糸な
らびにエアゾルの形態の局所用処方とすることができ、
適当な通常の添加剤、例えば、保存料、薬剤浸透を助け
る溶媒、軟膏やクリームにおけるエモリエント等を含む
ことができる。そのような局所用処方はまた、適合する
通常の担体、例えば、クリームまたは軟膏基剤、ローシ
ョン用のエタノールまたはオレイルアルコールも含有す
ることができる。このような担体は、処方全量に対して
約１〜約９８重量％、通常、約８０重量％まで含有でき
る。
を、単独で、または、治療用化合物などの他の化合物と
組み合わせて用いてもよい。該医薬組成物は、例えば、
局所、経口、経肛門、経膣、静脈内、腹腔内、筋肉内、
皮下、経鼻、経皮等を含む、いずれかの有効な、都合の
よい方法で投与される。治療および予防において、活性
成分は個体に注射用組成物、例えば、滅菌水性分散液、
好ましくは等張の水性分散液として投与される。また、
組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、眼軟
膏、点眼剤、点耳剤、洗口剤、含浸包帯および縫合糸な
らびにエアゾルの形態の局所用処方とすることができ、
適当な通常の添加剤、例えば、保存料、薬剤浸透を助け
る溶媒、軟膏やクリームにおけるエモリエント等を含む
ことができる。そのような局所用処方はまた、適合する
通常の担体、例えば、クリームまたは軟膏基剤、ローシ
ョン用のエタノールまたはオレイルアルコールも含有す
ることができる。このような担体は、処方全量に対して
約１〜約９８重量％、通常、約８０重量％まで含有でき
る。
【００７６】哺乳動物、特にヒトに投与するには、１日
の活性薬剤の用量は、０.０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／
ｋｇ、典型的には約１ｍｇ／ｋｇである。いずれにして
も、個体に最も適した実際の用量は医者により決定さ
れ、個体の年齢、体重および応答により変化する。上記
の用量は、平均的な場合の例示である。もちろん、より
高いまたは低い用量範囲が適当な個体もあり、それらも
本発明の範囲内である。内在装置には外科移植、補綴お
よびカテーテル、すなわち、個体の体内に導入され、そ
の位置に長時間止まる装置が包含される。例えば、その
ような装置としては、人工関節、心臓弁、ペースメーカ
ー、血管グラフト、血管カテーテル、脊髄液シャント、
尿カテーテル、連続歩行腹膜透析（continuous ambulat
ory peritoneal dialysis：ＣＡＰＤ）カテーテルが挙
げられる。
の活性薬剤の用量は、０.０１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／
ｋｇ、典型的には約１ｍｇ／ｋｇである。いずれにして
も、個体に最も適した実際の用量は医者により決定さ
れ、個体の年齢、体重および応答により変化する。上記
の用量は、平均的な場合の例示である。もちろん、より
高いまたは低い用量範囲が適当な個体もあり、それらも
本発明の範囲内である。内在装置には外科移植、補綴お
よびカテーテル、すなわち、個体の体内に導入され、そ
の位置に長時間止まる装置が包含される。例えば、その
ような装置としては、人工関節、心臓弁、ペースメーカ
ー、血管グラフト、血管カテーテル、脊髄液シャント、
尿カテーテル、連続歩行腹膜透析（continuous ambulat
ory peritoneal dialysis：ＣＡＰＤ）カテーテルが挙
げられる。
【００７７】本発明の組成物は、内在装置の挿入の直前
に関連する細菌に対する全身的効果を達成するために注
射で投与できる。治療は、手術の後、装置が体内にある
間継続できる。加えて、組成物は、細菌の傷汚染、特
に、ストレプトコッカス・ニューモニアエの傷汚染を防
止するために、いずれの手術用の手術周辺カバーの拡張
にも使用できる。多くの整形外科医は、補綴関節を有す
るヒトは、菌血症を生じ得る歯の治療前に抗生物質によ
る予防を考慮すべきと考えている。後の重い感染は、重
篤な合併症となり、時に、補綴関節の損失および著しい
罹病率、致死率を伴う。したがって、該活性物質を、こ
の状況の予防的抗生物質の代替品として使用することに
まで拡張することができる。
に関連する細菌に対する全身的効果を達成するために注
射で投与できる。治療は、手術の後、装置が体内にある
間継続できる。加えて、組成物は、細菌の傷汚染、特
に、ストレプトコッカス・ニューモニアエの傷汚染を防
止するために、いずれの手術用の手術周辺カバーの拡張
にも使用できる。多くの整形外科医は、補綴関節を有す
るヒトは、菌血症を生じ得る歯の治療前に抗生物質によ
る予防を考慮すべきと考えている。後の重い感染は、重
篤な合併症となり、時に、補綴関節の損失および著しい
罹病率、致死率を伴う。したがって、該活性物質を、こ
の状況の予防的抗生物質の代替品として使用することに
まで拡張することができる。
【００７８】上記した治療に加えて、本発明の組成物
は、一般に、傷組織に露出したマトリックス・タンパク
質への細菌付着を予防するための傷治療剤、抗生物質予
防に代え、あるいは共に、歯の治療における予防的用途
に使用できる。別法として、本発明の組成物は挿入直前
に内在装置を浸すのに使用できる。該活性物質は、傷ま
たは内在装置を浸する場合、１μｇ／ｍｌ〜１０μｇ／
ｍｌの濃度で使用できる。ワクチン組成物は、都合よく
は、注射剤の形態である。通常のアジュバントを使用し
て免疫応答を促進できる。ワクチン用の適当な単位投与
量は抗体０.５〜５μｇ／ｋｇであり、この用量を、好
ましくは１〜３週間の間隔で１〜３回投与する。指示し
た用量範囲で、本発明の化合物では、その化合物の適当
な個体への投与を妨げる、有害な毒作用は何も観察され
ない。本明細書において示された各々の参考文献は、出
典明示によりその内容を本明細書中に含める。本願出願
が優先権を主張するいずれの特許出願においてもその内
容を出典明示によりその内容をその中に含まる。
は、一般に、傷組織に露出したマトリックス・タンパク
質への細菌付着を予防するための傷治療剤、抗生物質予
防に代え、あるいは共に、歯の治療における予防的用途
に使用できる。別法として、本発明の組成物は挿入直前
に内在装置を浸すのに使用できる。該活性物質は、傷ま
たは内在装置を浸する場合、１μｇ／ｍｌ〜１０μｇ／
ｍｌの濃度で使用できる。ワクチン組成物は、都合よく
は、注射剤の形態である。通常のアジュバントを使用し
て免疫応答を促進できる。ワクチン用の適当な単位投与
量は抗体０.５〜５μｇ／ｋｇであり、この用量を、好
ましくは１〜３週間の間隔で１〜３回投与する。指示し
た用量範囲で、本発明の化合物では、その化合物の適当
な個体への投与を妨げる、有害な毒作用は何も観察され
ない。本明細書において示された各々の参考文献は、出
典明示によりその内容を本明細書中に含める。本願出願
が優先権を主張するいずれの特許出願においてもその内
容を出典明示によりその内容をその中に含まる。
【００７９】
【実施例】以下の実施例は、別に詳細に記載したこと以
外は、当業者に周知で慣用的な標準的な技法を用いて実
施する。実施例は例示であって、本発明を限定するもの
ではない。
外は、当業者に周知で慣用的な標準的な技法を用いて実
施する。実施例は例示であって、本発明を限定するもの
ではない。
【００８０】実施例１ 株の選択、ライブラリーの製
造および配列決定 配列番号１に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチド
は、イー・コリにおけるストレプトコッカス・ニューモ
ニアエの染色体ＤＮＡのクローンライブラリーより得
た。ある場合には、重複するストレプトコッカス・ニュ
ーモニアエＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のクロ
ーンからの配列データを用いて、配列番号１の連続した
ＤＮＡ配列を構築した。ライブラリーは常套手段、例え
ば以下の方法１および２により製造してもよい。全細胞
ＤＮＡをストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３より、標準法に従って単離し、二つの方法のいず
れかによりサイズ分画する。
造および配列決定 配列番号１に示すＤＮＡ配列を有するポリヌクレオチド
は、イー・コリにおけるストレプトコッカス・ニューモ
ニアエの染色体ＤＮＡのクローンライブラリーより得
た。ある場合には、重複するストレプトコッカス・ニュ
ーモニアエＤＮＡを含有する２個またはそれ以上のクロ
ーンからの配列データを用いて、配列番号１の連続した
ＤＮＡ配列を構築した。ライブラリーは常套手段、例え
ば以下の方法１および２により製造してもよい。全細胞
ＤＮＡをストレプトコッカス・ニューモニアエ０１００
９９３より、標準法に従って単離し、二つの方法のいず
れかによりサイズ分画する。
【００８１】方法１ 標準的方法に従ってサイズ分画するために、全細胞ＤＮ
Ａを注射針に通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまで
の大きさのＤＮＡフラグメントをエキソヌクレアーゼお
よびＤＮＡポリメラーゼで処理することによって平滑末
端とし、ＥｃｏＲＩリンカーを付加する。フラグメント
を、ＥｃｏＲＩで切断したベクター、ラムダＺａｐＩＩ
に連結し、標準的方法によりライブラリーをパッケージ
ングし、次いでパッケージングしたライブラリーでイー
・コリを感染させる。ライブラリーを標準方法により増
幅させる。
Ａを注射針に通して機械的に剪断する。１１ｋｂｐまで
の大きさのＤＮＡフラグメントをエキソヌクレアーゼお
よびＤＮＡポリメラーゼで処理することによって平滑末
端とし、ＥｃｏＲＩリンカーを付加する。フラグメント
を、ＥｃｏＲＩで切断したベクター、ラムダＺａｐＩＩ
に連結し、標準的方法によりライブラリーをパッケージ
ングし、次いでパッケージングしたライブラリーでイー
・コリを感染させる。ライブラリーを標準方法により増
幅させる。
【００８２】方法２ 全細胞ＤＮＡをライブラリーベクターにクローニングす
るための一連のフラグメントを得るのに適当な１つの制
限酵素（例えば、ＲｓａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓ
ｈｌ２３５Ｉ）またはその組み合わせで部分的に加水分
解し、かかるフラグメントを標準的方法に従ってサイズ
分画する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡに連結し、次い
でそのフラグメントをＥｃｏＲＩで切断したベクター、
ラムダＺａｐＩＩに連結し、標準的方法によりライブラ
リーをパッケージングし、パッケージングしたライブラ
リーでイー・コリを感染させる。ライブラリーを標準方
法により増幅させる。
るための一連のフラグメントを得るのに適当な１つの制
限酵素（例えば、ＲｓａＩ、ＰａｌＩ、ＡｌｕＩ、Ｂｓ
ｈｌ２３５Ｉ）またはその組み合わせで部分的に加水分
解し、かかるフラグメントを標準的方法に従ってサイズ
分画する。ＥｃｏＲＩリンカーをＤＮＡに連結し、次い
でそのフラグメントをＥｃｏＲＩで切断したベクター、
ラムダＺａｐＩＩに連結し、標準的方法によりライブラ
リーをパッケージングし、パッケージングしたライブラ
リーでイー・コリを感染させる。ライブラリーを標準方
法により増幅させる。
【００８３】
（１）一般的情報： （ｉ）出願人：ロネット，マイケル・エイ ローゼンバーグ，マーティン （ｉｉ）発明の名称： 新規化合物 （ｉｉｉ）配列の数：４ （ｉｖ）連絡先： （Ａ）宛名： デチャート・プライス＆ローズ （Ｂ）通り名： ９９７レノックスドライブ，ビルディ
ング３，スィート２１０ （Ｃ）都市名： ローレンスビル （Ｄ）州名： ニュージャージィ州 （Ｅ）国名： アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号： ０８５４３ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体形態：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ コンパチブル （Ｃ）オペレーティングシステム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ウィンドウズ・バージョン２.０
用のＦａｓｔＳＥＱ （ｖｉ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：ブルーン，アレン （Ｂ）登録番号：２９１３５ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＭ１００１３ （ｉｘ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６０９−５２０−３２１４ （Ｂ）テレファックス番号：６０９−５２０−３２５９ （Ｃ）テレックス：
ング３，スィート２１０ （Ｃ）都市名： ローレンスビル （Ｄ）州名： ニュージャージィ州 （Ｅ）国名： アメリカ合衆国 （Ｆ）郵便番号： ０８５４３ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体形態：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭ コンパチブル （Ｃ）オペレーティングシステム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ウィンドウズ・バージョン２.０
用のＦａｓｔＳＥＱ （ｖｉ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：ブルーン，アレン （Ｂ）登録番号：２９１３５ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＭ１００１３ （ｉｘ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６０９−５２０−３２１４ （Ｂ）テレファックス番号：６０９−５２０−３２５９ （Ｃ）テレックス：
【００８４】（２） 配列番号１の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：６９９塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号１： ATGAAAGAAT TACAAACTGT ACTAAAGAAT CATTTTGCAA TCGAATTTGC AGACAAAAAT 60 TTACTGGAAA CTGCCTTTAC TCATACGAGT TATGCCAATG AGCACCGCCT CTTAAAAATT 120 TCACACAATG AACGCTTGGA ATTTTTAGGA GACGCTGTTC TACAGTTATT GATTTCAGAA 180 TATCTATATA AAAAATATCC TAAAAAGCCT GAAGGTGACC TATCAAAACT CCGTGCTATG 240 ATTGTCCGTG AGGAGAGTTT AGCTGGTTTT GCGCGTGATT GCCAGTTTGA CCAGTTTATC 300 AAGTTGGGTA AAGGGGAAGA AAAATCTGGT GGTCGCAATC GTGACACCAT TCTTGGTGAT 360 GCCTTTGAAG CCTTTCTTGG TGCCCTTCTT TTGGATAAGG ATGTGGCCAA GGTCAAGGAA 420 TTTATCTATC AAGTCATGAT TCCTAAGGTT GAAGCAGGCG AGTTTGAGAT GATTACAGAC 480 TATAAAACCC ATCTCCAAGA GTTGCTTCAG GTCAATGGTG ATGTGGCTAT TCGTTATCAG 540 GTGATTTCTG AAACAGGGCC TGCTCACGAT AAGGTCTTTG ATGTAGAAGT TCTTGTTGAA 600 GGTAAGAGCA TCGGTCAAGG CCAAGGTCGT TCTAAGAAAT TAGCAGAGCA GGAAGCTGCC 660 AAAAATGCCG TTGAGAAGGG GCTGGATTCA TGTATTTAA 699
【００８５】（２） 配列番号２の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２３２アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号２： Met Lys Glu Leu Gln Thr Val Leu Lys Asn His Phe Ala Ile Glu Phe 1 5 10 15 Ala Asp Lys Asn Leu Leu Glu Thr Ala Phe Thr His Thr Ser Tyr Ala 20 25 30 Asn Glu His Arg Leu Leu Lys Ile Ser His Asn Glu Arg Leu Glu Phe 35 40 45 Leu Gly Asp Ala Val Leu Gln Leu Leu Ile Ser Glu Tyr Leu Tyr Lys 50 55 60 Lys Tyr Pro Lys Lys Pro Glu Gly Asp Leu Ser Lys Leu Arg Ala Met 65 70 75 80 Ile Val Arg Glu Glu Ser Leu Ala Gly Phe Ala Arg Asp Cys Gln Phe 85 90 95 Asp Gln Phe Ile Lys Leu Gly Lys Gly Glu Glu Lys Ser Gly Gly Arg 100 105 110 Asn Arg Asp Thr Ile Leu Gly Asp Ala Phe Glu Ala Phe Leu Gly Ala 115 120 125 Leu Leu Leu Asp Lys Asp Val Ala Lys Val Lys Glu Phe Ile Tyr Gln 130 135 140 Val Met Ile Pro Lys Val Glu Ala Gly Glu Phe Glu Met Ile Thr Asp 145 150 155 160 Tyr Lys Thr His Leu Gln Glu Leu Leu Gln Val Asn Gly Asp Val Ala 165 170 175 Ile Arg Tyr Gln Val Ile Ser Glu Thr Gly Pro Ala His Asp Lys Val 180 185 190 Phe Asp Val Glu Val Leu Val Glu Gly Lys Ser Ile Gly Gln Gly Gln 195 200 205 Gly Arg Ser Lys Lys Leu Ala Glu Gln Glu Ala Ala Lys Asn Ala Val 210 215 220 Glu Lys Gly Leu Asp Ser Cys Ile 225 230
【００８６】（２） 配列番号３の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２１塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 GGAAACTGCC TTTACTCATA C 21
【００８７】（２） 配列番号４の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１８塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号４： TCTTCCCCTT TACCCAAC 18
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ１２Ｎ 9/00 Ｃ１２Ｎ 9/00 Ｃ１２Ｑ 1/00 Ｃ１２Ｑ 1/00 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 33/566 33/566 (71)出願人 595047190 スミスクライン・ビーチャム・パブリッ ク・リミテッド・カンパニー ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ｐ．ｌ．ｃ. イギリス国ミドルセックス・ティーダブリ ュ８・９イーピー、ブレンフォード、ニュ ー・ホライズンズ・コート（番地の表示な し) (72)発明者 マイケル・アーサー・ロネット アメリカ合衆国19426ペンシルベニア州カ レッジビル、ビクトリア・サークル18番 (72)発明者 マーティン・ローゼンバーグ アメリカ合衆国19468ペンシルベニア州ロ イヤーズフォード、ミンゴ・ロード241番
Claims (20)
- 【請求項１】 （ａ）配列番号２のアミノ酸を含むポリ
ペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して少
なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチド、 （ｂ）寄託株のストレプトコッカス・ニューモニアエ中
に含まれるｒｎｃ遺伝子により発現されるのと同じ成熟
ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対し
て少なくとも７０％の同一性を有するポリヌクレオチ
ド、 （ｃ）配列番号２のアミノ酸配列に対して少なくとも７
０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチド
をコードしているポリヌクレオチド、 （ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチド
に対して相捕的なポリヌクレオチド、および、 （ｅ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチド
の少なくとも１５個の連続した塩基を含むポリヌクレオ
チドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を
含む単離ポリヌクレオチド。 - 【請求項２】 ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項
１記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項３】 ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項
１記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項４】 配列番号１に示される核酸配列を含む請
求項２記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項５】 配列番号１に示されるヌクレオチド１な
いし６９９を含む請求項２記載のポリヌクレオチド。 - 【請求項６】 配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペ
プチドをコードしている請求項２記載のポリヌクレオチ
ド。 - 【請求項７】 請求項１記載のポリヌクレオチドを含む
ベクター。 - 【請求項８】 請求項７記載のベクターを含む宿主細
胞。 - 【請求項９】 請求項８記載の宿主細胞から該ＤＮＡに
よりコードされているポリペプチドを発現させることを
含む、ポリペプチドの製造方法。 - 【請求項１０】 ｒｎｃのポリペプチドまたはフラグメ
ントを製造する方法であって、請求項８記載の宿主細胞
を該ポリペプチドまたはフラグメントの産生に十分な条
件下で培養することを含む方法。 - 【請求項１１】 配列番号２のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポ
リペプチド。 - 【請求項１２】 配列番号２に示されるアミノ酸配列を
含むポリペプチド。 - 【請求項１３】 請求項１１記載のポリペプチドに対す
る抗体。 - 【請求項１４】 請求項１１記載のポリペプチドの活性
または発現を阻害するアンタゴニスト。 - 【請求項１５】 治療上有効量の請求項１１記載のポリ
ペプチドを個体に投与することを含む、ｒｎｃのポリペ
プチドを必要とする個体の治療方法。 - 【請求項１６】 治療上有効量の請求項１４記載のアン
タゴニストを個体に投与することを含む、ｒｎｃのポリ
ペプチドを阻害する必要のある個体の治療方法。 - 【請求項１７】 請求項１１記載のポリペプチドの発現
または活性に関連する疾患を診断する方法であって、 （ａ）該ポリペプチドをコードしている核酸配列を決定
し、および／または、 （ｂ）個体由来のサンプル中における該ポリペプチドの
存在または量を解析することからなる方法。 - 【請求項１８】 請求項１１記載のポリペプチドと相互
作用し、その活性を阻害または活性化する化合物の同定
方法であって、 化合物とポリペプチドとの相互作用を可能にする条件下
にて、ポリペプチドを含む組成物とスクリーニングすべ
き化合物とを接触させ、化合物の相互作用を評価し（該
相互作用は、、ポリペプチドと化合物の相互作用に応答
して検出可能シグナルを提供しうる第２の成分に関連し
ているものである）、 ついで、化合物とポリペプチドとの相互作用により生じ
るシグナルの存在または不存在を検出することにより、
化合物がポリペプチドと相互作用し、その活性を活性化
するかまたは阻害するかどうかを調べることを含む方
法。 - 【請求項１９】 哺乳動物における免疫学的応答を誘導
する方法であって、哺乳動物に、該動物を疾患から防御
する抗体および／またはＴ細胞免疫応答を産生するため
に十分な請求項１１記載のｒｎｃのポリペプチド、また
はそのフラグメントまたは変種を接種することを含む方
法。 - 【請求項２０】 哺乳動物における免疫学的応答を誘導
する方法であって、請求項１１記載のｒｎｃのポリペプ
チド、またはそのフラグメントまたは変種を発現させる
ために、請求項１１記載のｒｎｃのポリペプチド、その
フラグメントもしくは変種の発現を制御する核酸ベクタ
ーをインビボで送達して、該動物を疾病から防御する抗
体および／またはＴ細胞免疫応答を産生させる免疫学的
応答を誘導することを含む方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/869,674 US5866365A (en) | 1997-06-05 | 1997-06-05 | RNC polynucleotides |
| US08/869674 | 1997-06-05 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11103870A true JPH11103870A (ja) | 1999-04-20 |
Family
ID=25354050
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10193551A Withdrawn JPH11103870A (ja) | 1997-06-05 | 1998-06-03 | 新規化合物 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5866365A (ja) |
| EP (1) | EP0882796A3 (ja) |
| JP (1) | JPH11103870A (ja) |
| CA (1) | CA2233591A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5866365A (en) * | 1997-06-05 | 1999-02-02 | Smithkline Beecham Corporation | RNC polynucleotides |
| CA2365424A1 (en) * | 1999-04-21 | 2000-10-26 | Boston Medical Center Corporation | Prevention, diagnosis and treatment of lyme disease |
| EP1947177A4 (en) * | 2005-09-21 | 2008-11-19 | Takara Bio Inc | INNOVATIVE ENDORIBONUCLEASE |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0914330A4 (en) * | 1996-05-14 | 2002-01-09 | Smithkline Beecham Corp | NEW TYPE COMPOUNDS |
| WO1998006734A1 (en) * | 1996-08-16 | 1998-02-19 | Smithkline Beecham Corporation | Novel prokaryotic polynucleotides, polypeptides and their uses |
| EP1400592A1 (en) * | 1996-10-31 | 2004-03-24 | Human Genome Sciences, Inc. | Streptococcus pneumoniae polynucleotides and sequences |
| US5866365A (en) * | 1997-06-05 | 1999-02-02 | Smithkline Beecham Corporation | RNC polynucleotides |
-
1997
- 1997-06-05 US US08/869,674 patent/US5866365A/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-06-01 EP EP98304320A patent/EP0882796A3/en not_active Withdrawn
- 1998-06-02 CA CA002233591A patent/CA2233591A1/en not_active Abandoned
- 1998-06-03 JP JP10193551A patent/JPH11103870A/ja not_active Withdrawn
- 1998-12-16 US US09/213,011 patent/US6444208B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-12-16 US US09/213,010 patent/US6251630B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0882796A3 (en) | 2001-04-25 |
| US5866365A (en) | 1999-02-02 |
| US6251630B1 (en) | 2001-06-26 |
| US6444208B1 (en) | 2002-09-03 |
| EP0882796A2 (en) | 1998-12-09 |
| CA2233591A1 (en) | 1998-12-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2008029344A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11137267A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH1175861A (ja) | 新規糖キナーゼ | |
| JPH11253179A (ja) | 新規グルコサミニダ―ゼ | |
| JPH10191987A (ja) | 新規３−デヒドロキナ酸シンターゼ | |
| JPH11103871A (ja) | 新規化合物 | |
| JP2000512485A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH1189585A (ja) | 新規Ｄｅｆ１ | |
| JPH10215882A (ja) | 新規トリプトファニルｔＲＮＡシンセターゼ | |
| JPH1198993A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11266880A (ja) | 新規ｄｂｐＡ | |
| JPH10201484A (ja) | 新規ＦｔｓＬ | |
| JPH11103870A (ja) | 新規化合物 | |
| JP2000000098A (ja) | 新規ｅｒａ | |
| JP2001504682A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11123089A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11123088A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11253173A (ja) | 新規ヒスチジンキナーゼ | |
| JP2000509984A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH1198991A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH10313877A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11137263A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11137274A (ja) | 新規ＴａｒＦ | |
| JPH11146792A (ja) | 新規化合物 | |
| JPH11103873A (ja) | 新規化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20050906 |