JPH1057087A - Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 - Google Patents
Ｌ−アスパラギン酸の製造方法Info
- Publication number
- JPH1057087A JPH1057087A JP21456996A JP21456996A JPH1057087A JP H1057087 A JPH1057087 A JP H1057087A JP 21456996 A JP21456996 A JP 21456996A JP 21456996 A JP21456996 A JP 21456996A JP H1057087 A JPH1057087 A JP H1057087A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- enzyme
- maleic acid
- reaction
- activity
- aspartic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 酵素の安定な状態でマレイン酸からＬ−アス
パラギン酸を効率よく製造する方法の提供。 【解決手段】 マレイン酸とアンモニア、及び／又はマ
レイン酸アンモニウムを含有する基質媒体を、反応器に
充填されたマレイン酸イソメラーゼ活性とアスパルター
ゼ活性を有する酵素含有物、又はマレイン酸イソメラー
ゼ活性を有する酵素含有物とアスパルターゼ活性を有す
る酵素含有物に作用せしめることによりＬ−アスパラギ
ン酸を連続的に製造する方法において、１０〜２４℃の
反応温度において反応を行うことを特徴とする方法。
パラギン酸を効率よく製造する方法の提供。 【解決手段】 マレイン酸とアンモニア、及び／又はマ
レイン酸アンモニウムを含有する基質媒体を、反応器に
充填されたマレイン酸イソメラーゼ活性とアスパルター
ゼ活性を有する酵素含有物、又はマレイン酸イソメラー
ゼ活性を有する酵素含有物とアスパルターゼ活性を有す
る酵素含有物に作用せしめることによりＬ−アスパラギ
ン酸を連続的に製造する方法において、１０〜２４℃の
反応温度において反応を行うことを特徴とする方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、マレイン酸とアン
モニア又はマレイン酸アンモニウムからＬ−アスパラギ
ン酸を生産する際に、低い反応温度を用いることによ
り、反応に用いる酵素の寿命を延ばすことを特徴とする
Ｌ−アスパラギン酸の製造に関するものである。
モニア又はマレイン酸アンモニウムからＬ−アスパラギ
ン酸を生産する際に、低い反応温度を用いることによ
り、反応に用いる酵素の寿命を延ばすことを特徴とする
Ｌ−アスパラギン酸の製造に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、マレイン酸とアンモニア、又はマ
レイン酸アンモニウムからＬ−アスパラギン酸を製造す
る方法としては、マレイン酸イソメラーゼ活性とアスパ
ルターゼ活性を用いる方法が知られている。酵素を用い
た反応においては、長時間の使用により酵素活性が低下
することにより、ある一定期間反応を行った後、酵素の
交換を行わざるを得ないのが現状である。特に、マレイ
ン酸イソメラーゼは不安定であり、熱により不活性化さ
れやすく、酵素の交換も煩雑に行わなければならない。
このような方式で連続反応を行うと設備的な負担あるい
は人件費の負担が大きくなってしまう。
レイン酸アンモニウムからＬ−アスパラギン酸を製造す
る方法としては、マレイン酸イソメラーゼ活性とアスパ
ルターゼ活性を用いる方法が知られている。酵素を用い
た反応においては、長時間の使用により酵素活性が低下
することにより、ある一定期間反応を行った後、酵素の
交換を行わざるを得ないのが現状である。特に、マレイ
ン酸イソメラーゼは不安定であり、熱により不活性化さ
れやすく、酵素の交換も煩雑に行わなければならない。
このような方式で連続反応を行うと設備的な負担あるい
は人件費の負担が大きくなってしまう。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、特に
マレイン酸イソメラーゼ活性を長時間維持することによ
り長時間にわたり安定に連続的にＬ−アスパラギン酸を
製造する方法を提供しようとするものである。
マレイン酸イソメラーゼ活性を長時間維持することによ
り長時間にわたり安定に連続的にＬ−アスパラギン酸を
製造する方法を提供しようとするものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、連続生体
触媒反応において酵素反応学的見地から、鋭意検討を行
った結果、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、マレイン酸とアンモニア、及び／またはマレイン
酸アンモニウムを含有する基質媒体に、反応器に充填さ
れたマレイン酸イソメラーゼ活性とアスパルターゼ活性
を有する酵素含有物又はマレイン酸イソメラーゼ活性を
有する酵素含有物とアスパルターゼ活性を有する酵素含
有物とを作用せしめることにより、Ｌ−アスパラギン酸
を連続的に製造する方法において、１０〜２４℃の反応
温度において反応を行うことを特徴とするＬ−アスパラ
ギン酸の製造方法に関するものである。
触媒反応において酵素反応学的見地から、鋭意検討を行
った結果、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、マレイン酸とアンモニア、及び／またはマレイン
酸アンモニウムを含有する基質媒体に、反応器に充填さ
れたマレイン酸イソメラーゼ活性とアスパルターゼ活性
を有する酵素含有物又はマレイン酸イソメラーゼ活性を
有する酵素含有物とアスパルターゼ活性を有する酵素含
有物とを作用せしめることにより、Ｌ−アスパラギン酸
を連続的に製造する方法において、１０〜２４℃の反応
温度において反応を行うことを特徴とするＬ−アスパラ
ギン酸の製造方法に関するものである。
【０００５】
【発明の効果】本発明によると、高濃度のマレイン酸と
アンモニア、及び／またはマレイン酸アンモニウムを含
有する基質媒体からＬ−アスパラギン酸を製造するにあ
たり反応温度を１０〜２４℃にすることにより、酵素の
寿命を延ばし、効率よくＬ−アスパラギン酸を製造でき
る。
アンモニア、及び／またはマレイン酸アンモニウムを含
有する基質媒体からＬ−アスパラギン酸を製造するにあ
たり反応温度を１０〜２４℃にすることにより、酵素の
寿命を延ばし、効率よくＬ−アスパラギン酸を製造でき
る。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下に本発明の実施実態を説明す
るが本発明はかかる実施実態のみに限定されるものでは
ない。本発明に使用するアスパルターゼ活性を提供する
微生物としてはアスパルターゼ活性を有する微生物であ
れば特に限定されないが例えば、エッシェリシア（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属に属する微生物（エッシェリシ
ア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ））ＡＴ
ＣＣ １１３０３，ＡＴＣＣ ９６３７及びＡＴＣＣ
２７３２５等、並びにブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を用いることが
できる。
るが本発明はかかる実施実態のみに限定されるものでは
ない。本発明に使用するアスパルターゼ活性を提供する
微生物としてはアスパルターゼ活性を有する微生物であ
れば特に限定されないが例えば、エッシェリシア（Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ）属に属する微生物（エッシェリシ
ア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ））ＡＴ
ＣＣ １１３０３，ＡＴＣＣ ９６３７及びＡＴＣＣ
２７３２５等、並びにブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を用いることが
できる。
【０００７】本発明に使用するマレイン酸イソメラーゼ
活性を提供する微生物としては、マレイン酸イソメラー
ゼ活性を有する微生物であれば特に限定されず、マレイ
ン酸イソメラーゼ活性を有することが知られている任意
の微生物を用いることができるが、例えば、本願発明者
らにより分離された新菌株シュードモナス・フルオレセ
ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｕｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎ
ｓ）ＮＳＭ−４（ＦＥＲＭ ｐ−１５５６０）を用いる
のが好ましい。この微生物は、下記の性質を有する。
活性を提供する微生物としては、マレイン酸イソメラー
ゼ活性を有する微生物であれば特に限定されず、マレイ
ン酸イソメラーゼ活性を有することが知られている任意
の微生物を用いることができるが、例えば、本願発明者
らにより分離された新菌株シュードモナス・フルオレセ
ンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｕｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎ
ｓ）ＮＳＭ−４（ＦＥＲＭ ｐ−１５５６０）を用いる
のが好ましい。この微生物は、下記の性質を有する。
【０００８】
【表１】
【０００９】本発明の方法に用いられる上記微生物菌体
の調製に使用する培地は特に限定されるものではなく、
一般の微生物に使用される培地でよい。培養して得られ
た微生物菌体は遠心または濾過により集め、水または適
当な緩衝液を用いて洗浄し、本発明の反応に使用する。
微生物は更に、超音波、摩砕、凍結融解、界面活性剤処
理などにより物理的または生化学的に処理して破砕した
菌体破砕物、さらに、硫酸アンモニウム塩析、アセトン
沈殿等定法により得られる酵素に精製することができ
る。本発明の反応に用いる酵素含有物としては、微生物
菌体または菌体破砕物もしくは酵素をセルロース、アル
ギン酸、κ−カラギーナンなどの適当な天然高分子、あ
るいはイオン交換樹脂やポリアクリルアミド等の適当な
合成高分子を担体として定法により固定化して用いる。
の調製に使用する培地は特に限定されるものではなく、
一般の微生物に使用される培地でよい。培養して得られ
た微生物菌体は遠心または濾過により集め、水または適
当な緩衝液を用いて洗浄し、本発明の反応に使用する。
微生物は更に、超音波、摩砕、凍結融解、界面活性剤処
理などにより物理的または生化学的に処理して破砕した
菌体破砕物、さらに、硫酸アンモニウム塩析、アセトン
沈殿等定法により得られる酵素に精製することができ
る。本発明の反応に用いる酵素含有物としては、微生物
菌体または菌体破砕物もしくは酵素をセルロース、アル
ギン酸、κ−カラギーナンなどの適当な天然高分子、あ
るいはイオン交換樹脂やポリアクリルアミド等の適当な
合成高分子を担体として定法により固定化して用いる。
【００１０】本発明に用いる基質となるカルボン酸はマ
レイン酸あるいはマレイン酸塩から選ばれる少なくとも
１つである。また本発明に用いられるアンモニアとして
は液体アンモニア、アンモニア水溶液等がある。使用さ
れるアンモニア量は、フマル酸に対して、１．０倍モル
以上３倍モル以下が好ましい。また必要に応じて上記ア
ンモニア量の範囲で水酸化ナトリウムあるいは水酸化カ
リウムなどのアルカリ金属水酸化物を併用することもで
きる。
レイン酸あるいはマレイン酸塩から選ばれる少なくとも
１つである。また本発明に用いられるアンモニアとして
は液体アンモニア、アンモニア水溶液等がある。使用さ
れるアンモニア量は、フマル酸に対して、１．０倍モル
以上３倍モル以下が好ましい。また必要に応じて上記ア
ンモニア量の範囲で水酸化ナトリウムあるいは水酸化カ
リウムなどのアルカリ金属水酸化物を併用することもで
きる。
【００１１】なお、基質媒体のｐＨは５から１０の範
囲、好ましくは７．０から９．０の範囲がより好まし
い。マレイン酸とアンモニアとの反応はそれらを溶解し
た水性媒体、例えば水または緩衝液中で行う。緩衝液と
してはリン酸緩衝液等、常用の緩衝液を用いることがで
きる。反応の際の原料のマレイン酸の濃度は５〜４０重
量％が好ましいが、マレイン酸塩の溶解性と生体触媒の
反応性を考えると特に１０から３０重量％の範囲の水溶
液で反応させるのが効果的であり、より好ましくは１０
〜２５重量％の範囲の水溶液で反応させるのが効果的で
ある。
囲、好ましくは７．０から９．０の範囲がより好まし
い。マレイン酸とアンモニアとの反応はそれらを溶解し
た水性媒体、例えば水または緩衝液中で行う。緩衝液と
してはリン酸緩衝液等、常用の緩衝液を用いることがで
きる。反応の際の原料のマレイン酸の濃度は５〜４０重
量％が好ましいが、マレイン酸塩の溶解性と生体触媒の
反応性を考えると特に１０から３０重量％の範囲の水溶
液で反応させるのが効果的であり、より好ましくは１０
〜２５重量％の範囲の水溶液で反応させるのが効果的で
ある。
【００１２】また、基質媒体には、更に塩化マンガン、
硫酸マンガン等のマンガン塩、または塩化マグネシウ
ム、硫酸マグネシウムなどのマグネシウム塩、または亜
鉛塩、カルシウム塩、ニッケル塩、コバルト塩、鉄塩等
の金属塩を０．１〜５０mM、好ましくは１〜１０mMの濃
度で添加することが好ましい。反応温度は低くするに従
って、酵素、特にマレイン酸イソメラーゼの不活性化は
防止され、半減期は延長されるが、他方、反応速度が低
下する。本発明者らは種々検討した結果、反応温度を１
０〜２４℃にすることにより酵素、特にマレイン酸イソ
メラーゼの半減期が十分に延長され、且つ十分な反応速
度が確保できることを見出した。
硫酸マンガン等のマンガン塩、または塩化マグネシウ
ム、硫酸マグネシウムなどのマグネシウム塩、または亜
鉛塩、カルシウム塩、ニッケル塩、コバルト塩、鉄塩等
の金属塩を０．１〜５０mM、好ましくは１〜１０mMの濃
度で添加することが好ましい。反応温度は低くするに従
って、酵素、特にマレイン酸イソメラーゼの不活性化は
防止され、半減期は延長されるが、他方、反応速度が低
下する。本発明者らは種々検討した結果、反応温度を１
０〜２４℃にすることにより酵素、特にマレイン酸イソ
メラーゼの半減期が十分に延長され、且つ十分な反応速
度が確保できることを見出した。
【００１３】マレイン酸イソメラーゼ及びアスパルター
ゼはＳＨ酵素として知られているが、基質溶液中の酸素
濃度を低減化することを行ったところ、酵素の寿命を延
ばすことができることが判明した。酸素濃度は通常の濃
度で２０℃で８．８ppm であるが、これを１ppm 好まし
くは０．１ppm 、更に好ましくは０．０１ppm 以下に保
つことにより酵素の寿命を延ばすことができる。基質媒
体中の酸素を除去する方法は、（１）脱酸素剤を基質媒
体に添加する方法、（２）不活性ガスにより酸素を除去
する方法がある。
ゼはＳＨ酵素として知られているが、基質溶液中の酸素
濃度を低減化することを行ったところ、酵素の寿命を延
ばすことができることが判明した。酸素濃度は通常の濃
度で２０℃で８．８ppm であるが、これを１ppm 好まし
くは０．１ppm 、更に好ましくは０．０１ppm 以下に保
つことにより酵素の寿命を延ばすことができる。基質媒
体中の酸素を除去する方法は、（１）脱酸素剤を基質媒
体に添加する方法、（２）不活性ガスにより酸素を除去
する方法がある。
【００１４】脱酸素剤としては、亜硫酸イオンを用いる
ことができる。亜硫酸イオン源としては、亜硫酸ナトリ
ウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸ア
ンモニウム等の塩または亜硫酸を用いることができる。
亜硫酸イオンとしては、２０ppm 以上１％以下、好まし
くは１００ppm 以上０．５％以下の濃度で添加すること
が好ましい。亜硫酸又は亜硫酸塩を添加して酸素を除去
する効率は、基質媒体の温度に依存する。４０℃より低
温では、酸素の除去速度は遅く、酸素除去率も悪いが、
４５℃以上に基質媒体を昇温することにより極めて効率
よく酸素を除去できる。また８０℃より高温ではアンモ
ニアの発散が多くなる。従って、脱酸素処理は４０℃〜
８０℃において行うのが好ましい。脱酸素剤の基質媒体
への添加は、基質媒体調整時に調製タンクに添加しても
よいし、基質媒体保存容器へ、または反応器への導入ラ
インで添加してもよい。
ことができる。亜硫酸イオン源としては、亜硫酸ナトリ
ウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸ア
ンモニウム等の塩または亜硫酸を用いることができる。
亜硫酸イオンとしては、２０ppm 以上１％以下、好まし
くは１００ppm 以上０．５％以下の濃度で添加すること
が好ましい。亜硫酸又は亜硫酸塩を添加して酸素を除去
する効率は、基質媒体の温度に依存する。４０℃より低
温では、酸素の除去速度は遅く、酸素除去率も悪いが、
４５℃以上に基質媒体を昇温することにより極めて効率
よく酸素を除去できる。また８０℃より高温ではアンモ
ニアの発散が多くなる。従って、脱酸素処理は４０℃〜
８０℃において行うのが好ましい。脱酸素剤の基質媒体
への添加は、基質媒体調整時に調製タンクに添加しても
よいし、基質媒体保存容器へ、または反応器への導入ラ
インで添加してもよい。
【００１５】不活性ガスにより基質媒体中の酸素濃度を
低減化する方法では、不活性ガスとして窒素、アルゴ
ン、ヘリウム等が用いられる。不活性ガスの投入方法と
しては、基質媒体を調製した後、保存容器に入れ、気相
部を不活性ガスで置換し、気相部中の酸素濃度を下げる
方法、また、基質媒体に不活性ガスを導入し溶存酸素を
除去する方法等特に方法は限定しない。保存容器の気相
部を不活性ガスで置換するとき気相部の酸素濃度は５％
以下、好ましくは３％以下更に好ましくは１％以下であ
る。
低減化する方法では、不活性ガスとして窒素、アルゴ
ン、ヘリウム等が用いられる。不活性ガスの投入方法と
しては、基質媒体を調製した後、保存容器に入れ、気相
部を不活性ガスで置換し、気相部中の酸素濃度を下げる
方法、また、基質媒体に不活性ガスを導入し溶存酸素を
除去する方法等特に方法は限定しない。保存容器の気相
部を不活性ガスで置換するとき気相部の酸素濃度は５％
以下、好ましくは３％以下更に好ましくは１％以下であ
る。
【００１６】基質媒体を保存する容器は、材質は特に限
定しないが、ステンレス、鉄、プラスティック、ガラス
等を用いることができる。形状は特に限定しないが、蓋
付きで密閉できるか、不活性ガスで気相部を保つことが
できる構造が好ましい。基質媒体中の酸素を除去する方
法は、上記の脱酸素剤を基質媒体に添加する方法と不活
性ガスにより酸素を除去する方法があるが、これらを組
み合わせることもでき、組み合わせることにより、更に
効果的となる。
定しないが、ステンレス、鉄、プラスティック、ガラス
等を用いることができる。形状は特に限定しないが、蓋
付きで密閉できるか、不活性ガスで気相部を保つことが
できる構造が好ましい。基質媒体中の酸素を除去する方
法は、上記の脱酸素剤を基質媒体に添加する方法と不活
性ガスにより酸素を除去する方法があるが、これらを組
み合わせることもでき、組み合わせることにより、更に
効果的となる。
【００１７】基質媒体を保存する容器は、材質は特に限
定しないが、ステンレス、鉄、プラスティック、ガラス
等を用いることができる。形状は特に限定しないが、蓋
付きで密閉できるか、不活性ガスで気相部を保つことが
できる構造が好ましい。基質媒体を調製した後、保存容
器に入れ、気相部を不活性ガスで置換し、気相部中の酸
素濃度を下げることが望ましい。不活性ガスとしては、
窒素、アルゴン等を用いることができ、気相部の酸素濃
度は５％以下、好ましくは３％以下、更に好ましくは１
％以下である。
定しないが、ステンレス、鉄、プラスティック、ガラス
等を用いることができる。形状は特に限定しないが、蓋
付きで密閉できるか、不活性ガスで気相部を保つことが
できる構造が好ましい。基質媒体を調製した後、保存容
器に入れ、気相部を不活性ガスで置換し、気相部中の酸
素濃度を下げることが望ましい。不活性ガスとしては、
窒素、アルゴン等を用いることができ、気相部の酸素濃
度は５％以下、好ましくは３％以下、更に好ましくは１
％以下である。
【００１８】以上のように、マレイン酸とアンモニア、
及び／またはマレイン酸アンモニウムを含有する基質媒
体にマレイン酸イソメラーゼ活性及びアスパルターゼ活
性を作用させて連続的酵素反応によりＬ−アスパラギン
酸を製造する方法において、反応温度を１０〜２４℃と
し、さらに所望により脱酸素剤や不活性ガスにより基質
媒体中の溶存酸素濃度を下げて、反応器に連続的に基質
媒体を導入しながらＬ−アスパラギン酸を製造すること
により、酵素の寿命を延ばし、効率のよいＬ−アスパラ
ギン酸の製造方法が提供される。
及び／またはマレイン酸アンモニウムを含有する基質媒
体にマレイン酸イソメラーゼ活性及びアスパルターゼ活
性を作用させて連続的酵素反応によりＬ−アスパラギン
酸を製造する方法において、反応温度を１０〜２４℃と
し、さらに所望により脱酸素剤や不活性ガスにより基質
媒体中の溶存酸素濃度を下げて、反応器に連続的に基質
媒体を導入しながらＬ−アスパラギン酸を製造すること
により、酵素の寿命を延ばし、効率のよいＬ−アスパラ
ギン酸の製造方法が提供される。
【００１９】
【実施例】以下に本発明を実施例により詳細に説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。なお反応
生成物は、液体クロマトグラフィーにより分析した。酵素含有物の調製 蒸留水１Ｌ当り１０ｇのマレイン酸、５ｇの（ＮＨ4)2
ＳＯ4 ，１ｇのＫＨ2ＰＯ4 ，３ｇのＫ2 ＨＰＯ4 ，
０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ，５．５ｇのＮａＯ
Ｈ、及び２０ｇの酵母エキスの組成からなる培地（ｐＨ
６．３）３Ｌを全容５Ｌのジャーファーメンターに仕込
み、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＮＳＭ−４ｋ株
（ＦＥＲＭＰ−１５５６０）を接種し３０℃で通気攪拌
培養を行った。培養２０時間目に培養を終了し菌体を遠
心分離によって集めた。
が、本発明はこれに限定されるものではない。なお反応
生成物は、液体クロマトグラフィーにより分析した。酵素含有物の調製 蒸留水１Ｌ当り１０ｇのマレイン酸、５ｇの（ＮＨ4)2
ＳＯ4 ，１ｇのＫＨ2ＰＯ4 ，３ｇのＫ2 ＨＰＯ4 ，
０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ，５．５ｇのＮａＯ
Ｈ、及び２０ｇの酵母エキスの組成からなる培地（ｐＨ
６．３）３Ｌを全容５Ｌのジャーファーメンターに仕込
み、シュードモナス・フルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍ
ｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）ＮＳＭ−４ｋ株
（ＦＥＲＭＰ−１５５６０）を接種し３０℃で通気攪拌
培養を行った。培養２０時間目に培養を終了し菌体を遠
心分離によって集めた。
【００２０】蒸留水１Ｌ当り１０ｇのフマル酸、５ｇの
（ＮＨ4)2 ＳＯ4 ，１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 ，３ｇのＫ2 Ｈ
ＰＯ4 ，０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ，５．５ｇの
ＮａＯＨ及び２０ｇの酵母エキスの組成からなる培地３
Ｌを５Ｌジャーファーメンターに仕込み、Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ１１３０３株を接種し
３７℃で通気攪拌培養を行った。培養２０時間目に培養
を終了し、菌体を遠心分離によって集めた。
（ＮＨ4)2 ＳＯ4 ，１ｇのＫＨ2 ＰＯ4 ，３ｇのＫ2 Ｈ
ＰＯ4 ，０．５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ，５．５ｇの
ＮａＯＨ及び２０ｇの酵母エキスの組成からなる培地３
Ｌを５Ｌジャーファーメンターに仕込み、Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ１１３０３株を接種し
３７℃で通気攪拌培養を行った。培養２０時間目に培養
を終了し、菌体を遠心分離によって集めた。
【００２１】この２種の微生物の菌体を混合してポリキ
ャップ１７２（ハーキュレス社製）１２０ｇ及び脱イオ
ン水２４０ｇに均一に分散させた。６Ｌ容のナス型フラ
スコにイオン交換樹脂（アンバーライトＩＲＡ−９４Ｓ
Ｃｌ型 オルガノ社製）３００mlと０．５インチのテ
フロン球２００個を入れ、ここに先の分散液の１／６を
入れ、３０℃で回転させながらエバポレーターで１時間
減圧乾燥し、菌体をイオン交換樹脂に被覆させた。この
操作を６回行い、テフロン球を除去して固定化生体触媒
とした。
ャップ１７２（ハーキュレス社製）１２０ｇ及び脱イオ
ン水２４０ｇに均一に分散させた。６Ｌ容のナス型フラ
スコにイオン交換樹脂（アンバーライトＩＲＡ−９４Ｓ
Ｃｌ型 オルガノ社製）３００mlと０．５インチのテ
フロン球２００個を入れ、ここに先の分散液の１／６を
入れ、３０℃で回転させながらエバポレーターで１時間
減圧乾燥し、菌体をイオン交換樹脂に被覆させた。この
操作を６回行い、テフロン球を除去して固定化生体触媒
とした。
【００２２】比較例１．（半減期測定法） 前記において調製した固定化生体触媒を、２０％マレイ
ン酸アンモニウム溶液（ｐＨ８．５）に４℃で一晩浸漬
したのち、その５０mlをジャケット付きカラムに充填
し、ジャケットに３０℃の温水を循環させて反応器の温
度を３０℃に設定した。
ン酸アンモニウム溶液（ｐＨ８．５）に４℃で一晩浸漬
したのち、その５０mlをジャケット付きカラムに充填
し、ジャケットに３０℃の温水を循環させて反応器の温
度を３０℃に設定した。
【００２３】ふた付きビンに入れた基質液（１Ｌ中に２
００ｇのマレイン酸、２００ｇの２５％アンモニア水、
０．２５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ及び０．７８ｇのメ
ルカプトエタノール、アンモニアでｐＨ８．３に調整）
をテフロンチューブを通して、毎時５mlの速度でカラム
に流通させ連続反応を行った。反応開始後１２時間目に
反応液の分析を行ったところ、反応生成物として、消費
マレイン酸と等量のＬ−アスパラギン酸が生成してい
た。転化率が９０％以下になった時から、転化率をＨＰ
ＬＣで分析し、転化率の時間変化を追跡した。この転化
率の対数値を反応時間に対してプロットした傾きから、
マレイン酸をＬ−アスパラギン酸に変換する酵素活性の
半減期を計算したところ３１時間であった。この結果を
表２に示す。
００ｇのマレイン酸、２００ｇの２５％アンモニア水、
０．２５ｇのＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ及び０．７８ｇのメ
ルカプトエタノール、アンモニアでｐＨ８．３に調整）
をテフロンチューブを通して、毎時５mlの速度でカラム
に流通させ連続反応を行った。反応開始後１２時間目に
反応液の分析を行ったところ、反応生成物として、消費
マレイン酸と等量のＬ−アスパラギン酸が生成してい
た。転化率が９０％以下になった時から、転化率をＨＰ
ＬＣで分析し、転化率の時間変化を追跡した。この転化
率の対数値を反応時間に対してプロットした傾きから、
マレイン酸をＬ−アスパラギン酸に変換する酵素活性の
半減期を計算したところ３１時間であった。この結果を
表２に示す。
【００２４】
【表２】
【００２５】実施例１．反応器の温度２０℃にした以外
は比較例１と同様にして活性半減期を計算したところ６
３時間であった。基質液中の酸素濃度は８．８ppm であ
った。実施例２． 反応器の温度１０℃にした以外は比較例１と
同様にして活性半減期を計算したところ１２４時間であ
った。
は比較例１と同様にして活性半減期を計算したところ６
３時間であった。基質液中の酸素濃度は８．８ppm であ
った。実施例２． 反応器の温度１０℃にした以外は比較例１と
同様にして活性半減期を計算したところ１２４時間であ
った。
【００２６】比較例２．ふた付きビンに入れた表３の基
質液に窒素を吹き込んで窒素置換し、窒素バブリングを
継続したまま基質液をカラムに導入した以外は比較例１
と同様にして活性半減期を計算したところ５３時間であ
った。実施例３． 反応器の温度を２０℃にした以外は実施例１
と同様にして活性半減期を計算したところ１１６時間で
あった。基質液中の酸素濃度は０．０１ppm 以下であっ
た。
質液に窒素を吹き込んで窒素置換し、窒素バブリングを
継続したまま基質液をカラムに導入した以外は比較例１
と同様にして活性半減期を計算したところ５３時間であ
った。実施例３． 反応器の温度を２０℃にした以外は実施例１
と同様にして活性半減期を計算したところ１１６時間で
あった。基質液中の酸素濃度は０．０１ppm 以下であっ
た。
【００２７】実施例４．反応器の温度を１０℃にした以
外は実施例１と同様にして活性半減期を計算したところ
２４６時間であった。実施例１〜４及び比較例１〜２の
結果を表３にまとめて示した。
外は実施例１と同様にして活性半減期を計算したところ
２４６時間であった。実施例１〜４及び比較例１〜２の
結果を表３にまとめて示した。
【００２８】
【表３】
Claims (2)
- 【請求項１】 マレイン酸とアンモニア、及び／又はマ
レイン酸アンモニウムを含有する基質媒体を、反応器に
充填されたマレイン酸イソメラーゼ活性とアスパルター
ゼ活性を有する酵素含有物、又はマレイン酸イソメラー
ゼ活性を有する酵素含有物とアスパルターゼ活性を有す
る酵素含有物に作用せしめることによりＬ−アスパラギ
ン酸を連続的に製造する方法において、１０〜２４℃の
反応温度において反応を行うことを特徴とする方法。 - 【請求項２】 不活性ガスにより、反応器内の反応液の
溶存酸素濃度を１ppm 以下に維持することを特徴とする
請求項１に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21456996A JPH1057087A (ja) | 1996-08-14 | 1996-08-14 | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21456996A JPH1057087A (ja) | 1996-08-14 | 1996-08-14 | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1057087A true JPH1057087A (ja) | 1998-03-03 |
Family
ID=16657894
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21456996A Pending JPH1057087A (ja) | 1996-08-14 | 1996-08-14 | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1057087A (ja) |
-
1996
- 1996-08-14 JP JP21456996A patent/JPH1057087A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2664648B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| Nabe et al. | Conversion of glycerol to dihydroxyacetone by immobilized whole cells of Acetobacter xylinum | |
| Chibata et al. | Continuous production of L-malic acid by immobilized cells | |
| JPH067157A (ja) | シュードグルコノバクター属酸化菌 | |
| JPH11113588A (ja) | 含酸素化合物の製造方法 | |
| US4758518A (en) | D-2-haloalkanoic acid halidohydrolase | |
| US4542098A (en) | Production of glucose dehydrogenase and use of the resultant enzyme in the enzymatic synthesis of L-carnitine | |
| US5939296A (en) | Process for producing L-aspartic acid | |
| EP0386476B1 (en) | Process for producing L-alanine | |
| EP0032987B1 (en) | Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and l-aspartic acid preparation process using the same | |
| JPH1057087A (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JP3204924B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸、ならびにフマル酸及び／またはｌ−リンゴ酸の製造方法 | |
| JP3233878B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JP2872178B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JPH0514556B2 (ja) | ||
| JP3165040B2 (ja) | 新規微生物及びｌ−アスパラギン酸、フマル酸及び／またはｌ−リンゴ酸の製造方法 | |
| JP3709007B2 (ja) | フマル酸の製造法 | |
| JPS60120983A (ja) | ブレビバクテリウム属に属する菌体の培養法 | |
| JPH02242690A (ja) | Ｌ―アラニンの製造法 | |
| JPH0851989A (ja) | マレイン酸の異性化方法 | |
| JPH0347084A (ja) | Ｌ―アラニンの製造法 | |
| JP2830029B2 (ja) | フマラーゼ活性の除去方法 | |
| JPH1057088A (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JPS6142555B2 (ja) | ||
| JPH0630572B2 (ja) | Ｌ−フエニルアラニン脱水素酵素 |