JPH1057073A - イネ品種識別用マイクロサテライトマーカーおよび植物種子の純度検査方法 - Google Patents
イネ品種識別用マイクロサテライトマーカーおよび植物種子の純度検査方法Info
- Publication number
- JPH1057073A JPH1057073A JP9040226A JP4022697A JPH1057073A JP H1057073 A JPH1057073 A JP H1057073A JP 9040226 A JP9040226 A JP 9040226A JP 4022697 A JP4022697 A JP 4022697A JP H1057073 A JPH1057073 A JP H1057073A
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- Japan
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 イネの品種を簡便かつ確実に識別・特定でき
る方法を提供する。またイネ種子の純度を検査する方法
を提供する。 【解決手段】 イネの近縁品種間で大きな多型性を示す
マイクロサテライトマーカーを特定し、このマーカーを
ＰＣＲで特異的に増幅させ、増幅ＤＮＡ断片の長さの違
いを検出することによって、イネ品種を識別・特定す
る。同様の方法でイネ種子の純度を検査する。 【効果】 ＤＮＡレベルで近縁品種の識別・特定が可能
となり、イネの新品種の育成を省力化できると共に、イ
ネ種子の純度管理や流通しているコメの品質保証が可能
になる。
る方法を提供する。またイネ種子の純度を検査する方法
を提供する。 【解決手段】 イネの近縁品種間で大きな多型性を示す
マイクロサテライトマーカーを特定し、このマーカーを
ＰＣＲで特異的に増幅させ、増幅ＤＮＡ断片の長さの違
いを検出することによって、イネ品種を識別・特定す
る。同様の方法でイネ種子の純度を検査する。 【効果】 ＤＮＡレベルで近縁品種の識別・特定が可能
となり、イネの新品種の育成を省力化できると共に、イ
ネ種子の純度管理や流通しているコメの品質保証が可能
になる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、イネの品種育成、
育成されたイネの種子生産におけるイネおよび種子純度
の管理、さらに流通するコメの純度の管理に利用され
る、イネ品種の特定に関する。また、本発明は、植物種
子の純度検査に利用される。
育成されたイネの種子生産におけるイネおよび種子純度
の管理、さらに流通するコメの純度の管理に利用され
る、イネ品種の特定に関する。また、本発明は、植物種
子の純度検査に利用される。
【０００２】
【従来の技術】イネは四大穀物の一つでアジアを中心に
広範な地域で栽培されている。栽培イネのほとんどはサ
ティバ種に属し、さらに、サティバ種はインディカ、ジ
ャバニカ、ジャポニカの３つの亜種に分類されている。
これらの亜種は形態特性、アイソザイム、制限酵素断片
長多型（ＲＦＬＰ）などによって識別できるが、亜種
内、特にジャポニカ内での個々の品種の識別は容易では
なく、品種を特定する有効な方法は知られていない。そ
の理由は、日本において栽培されているジャポニカに分
類される極めて多数の品種は、数種の在来品種をベース
とした極近縁種間の交配によって育成されてきたもので
あるため、これらの類縁度は極めて高いためである。
広範な地域で栽培されている。栽培イネのほとんどはサ
ティバ種に属し、さらに、サティバ種はインディカ、ジ
ャバニカ、ジャポニカの３つの亜種に分類されている。
これらの亜種は形態特性、アイソザイム、制限酵素断片
長多型（ＲＦＬＰ）などによって識別できるが、亜種
内、特にジャポニカ内での個々の品種の識別は容易では
なく、品種を特定する有効な方法は知られていない。そ
の理由は、日本において栽培されているジャポニカに分
類される極めて多数の品種は、数種の在来品種をベース
とした極近縁種間の交配によって育成されてきたもので
あるため、これらの類縁度は極めて高いためである。
【０００３】ところで、マイクロサテライトと呼ばれ
る、単純な１〜数塩基の配列の繰り返し配列を有するＤ
ＮＡが真核生物のゲノム中に多数散在し、それらは極め
て多型性に富むことが知られている。マイクロサテライ
トは、植物ゲノム中にも存在し、近年、イネゲノム中か
らもわずかなではあるがマイクロサテライトが同定され
ている。そして、該マイクロサテライト両側に位置する
特異的な塩基配列を利用したマイクロサテライトマーカ
ーが開発された。これらのマイクロサテライトマーカー
によって、イネの野生種と栽培種であるサティバ種およ
びグラベリマ種が識別できるのみならず、サティバ種の
インディカとジャポニカの亜種も識別できることが示さ
れた。しかしながら、ジャポニカ亜種内での多型性は小
さく、これまで知られている限り、多型性の極めて大き
いとされるマイクロサテライトマーカーといえども、前
述のとおり日本で栽培されている極近縁な品種を識別す
ることはできなかった。マイクロサテライトマーカーは
その種類によって多型の程度は大きく異なり、どのマイ
クロサテライトマーカーが多型を示すかは全く不明であ
る。さらに、日本で栽培されている極近縁な品種間で多
型性を示し、それら品種の識別・特定に有効なマイクロ
サテライトマーカーが存在するか否かについては全く不
明であった。
る、単純な１〜数塩基の配列の繰り返し配列を有するＤ
ＮＡが真核生物のゲノム中に多数散在し、それらは極め
て多型性に富むことが知られている。マイクロサテライ
トは、植物ゲノム中にも存在し、近年、イネゲノム中か
らもわずかなではあるがマイクロサテライトが同定され
ている。そして、該マイクロサテライト両側に位置する
特異的な塩基配列を利用したマイクロサテライトマーカ
ーが開発された。これらのマイクロサテライトマーカー
によって、イネの野生種と栽培種であるサティバ種およ
びグラベリマ種が識別できるのみならず、サティバ種の
インディカとジャポニカの亜種も識別できることが示さ
れた。しかしながら、ジャポニカ亜種内での多型性は小
さく、これまで知られている限り、多型性の極めて大き
いとされるマイクロサテライトマーカーといえども、前
述のとおり日本で栽培されている極近縁な品種を識別す
ることはできなかった。マイクロサテライトマーカーは
その種類によって多型の程度は大きく異なり、どのマイ
クロサテライトマーカーが多型を示すかは全く不明であ
る。さらに、日本で栽培されている極近縁な品種間で多
型性を示し、それら品種の識別・特定に有効なマイクロ
サテライトマーカーが存在するか否かについては全く不
明であった。
【０００４】一般に、植物種子の純度を検査する方法と
して、栽培試験が行われている。近年、アイソザイムに
よる実験室レベルでの検査方法も用いられる用になって
きている。しかしながら、植物種子の純度検査に、マイ
クロサテライトを含むマイクロサテライトマーカーが用
いられた例はない。
して、栽培試験が行われている。近年、アイソザイムに
よる実験室レベルでの検査方法も用いられる用になって
きている。しかしながら、植物種子の純度検査に、マイ
クロサテライトを含むマイクロサテライトマーカーが用
いられた例はない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、イネ
の品種、それも極近縁品種でも識別可能なマイクロサテ
ライトマーカーを提供し、このマーカーを用いてイネ品
種を特定する方法を提供することにある。また本発明の
もう一つの課題は、マイクロサテライトマーカーを用い
て植物種子の純度を検査する方法を提供することにあ
る。
の品種、それも極近縁品種でも識別可能なマイクロサテ
ライトマーカーを提供し、このマーカーを用いてイネ品
種を特定する方法を提供することにある。また本発明の
もう一つの課題は、マイクロサテライトマーカーを用い
て植物種子の純度を検査する方法を提供することにあ
る。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、２〜数塩
基の短いヌクレオチドの単位の繰り返し配列よりなるマ
イクロサテライトに着目し、データベースに登録された
塩基配列を解析し、非常に多数の塩基配列が完全な繰り
返し配列を含むことを見い出した。さらに、マイクロサ
テライト両側の塩基配列を利用することで、それぞれの
マイクロサテライトを特異的に増幅できるマイクロサテ
ライトマーカーに転換することに成功した。さらに、こ
れら多数のマイクロサテライトについて多型性を解析し
た結果、ＡＴの繰り返し配列を含むマイクロサテライト
が最も多型性に富むことを見い出した。これら、マイク
ロサテライト含むマイクロサテライトマーカーを用いる
ことで、近縁種でも識別可能であることを見い出した。
これらのマイクロサテライトマーカーをＰＣＲによって
増幅し、増幅されたマイクロサテライトマーカーのサイ
ズによってイネ品種を特定できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
基の短いヌクレオチドの単位の繰り返し配列よりなるマ
イクロサテライトに着目し、データベースに登録された
塩基配列を解析し、非常に多数の塩基配列が完全な繰り
返し配列を含むことを見い出した。さらに、マイクロサ
テライト両側の塩基配列を利用することで、それぞれの
マイクロサテライトを特異的に増幅できるマイクロサテ
ライトマーカーに転換することに成功した。さらに、こ
れら多数のマイクロサテライトについて多型性を解析し
た結果、ＡＴの繰り返し配列を含むマイクロサテライト
が最も多型性に富むことを見い出した。これら、マイク
ロサテライト含むマイクロサテライトマーカーを用いる
ことで、近縁種でも識別可能であることを見い出した。
これらのマイクロサテライトマーカーをＰＣＲによって
増幅し、増幅されたマイクロサテライトマーカーのサイ
ズによってイネ品種を特定できることを見出し、本発明
を完成するに至った。
【０００７】すなわち、本発明は、以下の工程よりな
り、ＡＴまたはＴＡが５回以上繰り返された配列を有す
るマイクロサテライトを含むマイクロサテライトマーカ
ーを用いるイネ品種を特定する方法およびマイクロサテ
ライトマーカーを提供するものである。
り、ＡＴまたはＴＡが５回以上繰り返された配列を有す
るマイクロサテライトを含むマイクロサテライトマーカ
ーを用いるイネ品種を特定する方法およびマイクロサテ
ライトマーカーを提供するものである。
【０００８】ａ） イネのＤＮＡを鋳型とし、該マイク
ロサテライトマーカーの該マイクロサテライトの両側に
位置するマイクロサテライトマーカーに特異的な塩基配
列にそれぞれ由来する２種類のＤＮＡプライマーを用い
てＰＣＲを行い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の識別結果よりイネ品種を特定する。
ロサテライトマーカーの該マイクロサテライトの両側に
位置するマイクロサテライトマーカーに特異的な塩基配
列にそれぞれ由来する２種類のＤＮＡプライマーを用い
てＰＣＲを行い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の識別結果よりイネ品種を特定する。
【０００９】また、マイクロサテライトマーカーを用い
ることで雑種種子を含め植物種子を判別でき、さらに、
この判別結果を基に植物種子の純度を検定できることを
見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、以下の工程よりなるマイクロサテライトマーカー
を用いて植物種子を識別し、植物種子の純度を検査する
方法を提供するものである。 ａ） 植物種子または実生のより抽出したＤＮＡを鋳型
とし、該マイクロサテライトマーカーの該マイクロサテ
ライトの両側に位置するマイクロサテライトマーカーに
特異的な塩基配列にそれぞれ由来する２種類のＤＮＡプ
ライマーを用いてＰＣＲを行い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の長さの違いによって植物種子を分類し、ま
た、２種類の異なる長さのＤＮＡ断片が増幅された場合
には植物種子が雑種種子であると判定し、 ｄ） ｃ）の分類および判定結果を基に植物種子の純度
を判定する。
ることで雑種種子を含め植物種子を判別でき、さらに、
この判別結果を基に植物種子の純度を検定できることを
見いだし、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、以下の工程よりなるマイクロサテライトマーカー
を用いて植物種子を識別し、植物種子の純度を検査する
方法を提供するものである。 ａ） 植物種子または実生のより抽出したＤＮＡを鋳型
とし、該マイクロサテライトマーカーの該マイクロサテ
ライトの両側に位置するマイクロサテライトマーカーに
特異的な塩基配列にそれぞれ由来する２種類のＤＮＡプ
ライマーを用いてＰＣＲを行い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の長さの違いによって植物種子を分類し、ま
た、２種類の異なる長さのＤＮＡ断片が増幅された場合
には植物種子が雑種種子であると判定し、 ｄ） ｃ）の分類および判定結果を基に植物種子の純度
を判定する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明で言うマイクロサテライト
マーカーとは、２〜１０塩基好ましくは２〜４塩基の単
純な配列の繰り返しからなるマイクロサテライトと、そ
のマイクロサテライトの両側に位置する特異的な塩基配
列を有するＤＮＡを言う。従って、マイクロサテライト
マーカーはＰＣＲによって容易に増幅することが可能で
ある。この様な、マイクロサテライトを単離するため、
データベースに登録された塩基配列を対象として、考え
得る全ての２〜４塩基の繰り返し配列を用いて相同性を
解析した。その解析結果から、５回以上の完全な繰り返
し配列を含む配列のみを抽出し、マイクロサテライトマ
ーカーに転換した。さらに、配列番号１から配列番号３
１で示される、高度多型性を示すマイクロサテライトマ
ーカーを選抜した。
マーカーとは、２〜１０塩基好ましくは２〜４塩基の単
純な配列の繰り返しからなるマイクロサテライトと、そ
のマイクロサテライトの両側に位置する特異的な塩基配
列を有するＤＮＡを言う。従って、マイクロサテライト
マーカーはＰＣＲによって容易に増幅することが可能で
ある。この様な、マイクロサテライトを単離するため、
データベースに登録された塩基配列を対象として、考え
得る全ての２〜４塩基の繰り返し配列を用いて相同性を
解析した。その解析結果から、５回以上の完全な繰り返
し配列を含む配列のみを抽出し、マイクロサテライトマ
ーカーに転換した。さらに、配列番号１から配列番号３
１で示される、高度多型性を示すマイクロサテライトマ
ーカーを選抜した。
【００１１】本発明のイネ品種を識別・特定する方法に
用いられるマイクロサテライトマーカーとしては、含ま
れるマイクロサテライトがＡＴまたはＴＡの繰り返し配
列を有するものが最も好ましい。例えば、配列番号１か
ら配列番号７で示されるマイクロサテライトマーカーが
挙げられる。また、ＡＴまたはＴＡ以外の繰り返し配列
を有する含むマイクロサテライトマーカーもＡＴまたは
ＴＡの繰り返し配列を有するマイクロサテライトを含む
マイクロサテライトマーカーと共に使用することで品種
の識別・特定に用いることができる。この様なＡＴまた
はＴＡ以外の繰り返し配列からなるマイクロサテライト
マーカーとして配列番号８から配列番号３１が挙げられ
る。
用いられるマイクロサテライトマーカーとしては、含ま
れるマイクロサテライトがＡＴまたはＴＡの繰り返し配
列を有するものが最も好ましい。例えば、配列番号１か
ら配列番号７で示されるマイクロサテライトマーカーが
挙げられる。また、ＡＴまたはＴＡ以外の繰り返し配列
を有する含むマイクロサテライトマーカーもＡＴまたは
ＴＡの繰り返し配列を有するマイクロサテライトを含む
マイクロサテライトマーカーと共に使用することで品種
の識別・特定に用いることができる。この様なＡＴまた
はＴＡ以外の繰り返し配列からなるマイクロサテライト
マーカーとして配列番号８から配列番号３１が挙げられ
る。
【００１２】本発明に係るマイクロサテライトマーカー
のマイクロサテライト中の単純な塩基配列の繰り返しの
数としては５回以上のものが利用できる。さらに、好ま
しくは１０回以上の繰り返し数を持つマイクロサテライ
トが望ましい。一方、繰り返し数の上限としては５００
回であり、現在の塩基配列の決定精度から５００回以上
のものについては繰り返し数が特定できないため不適当
である。また、ＰＣＲにおけるスリッピングから、実用
的には１００回以下好ましくは５０回以下の繰り返し数
のものを用いることが望ましい。
のマイクロサテライト中の単純な塩基配列の繰り返しの
数としては５回以上のものが利用できる。さらに、好ま
しくは１０回以上の繰り返し数を持つマイクロサテライ
トが望ましい。一方、繰り返し数の上限としては５００
回であり、現在の塩基配列の決定精度から５００回以上
のものについては繰り返し数が特定できないため不適当
である。また、ＰＣＲにおけるスリッピングから、実用
的には１００回以下好ましくは５０回以下の繰り返し数
のものを用いることが望ましい。
【００１３】本発明のイネ品種を特定する方法には、マ
イクロサテライトマーカーのマイクロサテライトの両側
に位置するマイクロサテライトマーカーに特異的な塩基
配列にそれぞれ由来する２種類の合成オリゴヌクレオチ
ドをＤＮＡプライマーとしてＰＣＲに使用する。マイク
ロサテライトマーカーに特異的な塩基配列とは、マイク
ロサテライトマーカー内に存在し、マイクロサテライト
を夾み、且つ、互いに向かい合う塩基配列を指してい
る。ＤＮＡプライマーはそれら塩基配列の相補的な、１
５〜４０ｂｐ好ましくは２０〜２５ｂｐの連続したオリ
ゴヌクレオチドとして合成される。
イクロサテライトマーカーのマイクロサテライトの両側
に位置するマイクロサテライトマーカーに特異的な塩基
配列にそれぞれ由来する２種類の合成オリゴヌクレオチ
ドをＤＮＡプライマーとしてＰＣＲに使用する。マイク
ロサテライトマーカーに特異的な塩基配列とは、マイク
ロサテライトマーカー内に存在し、マイクロサテライト
を夾み、且つ、互いに向かい合う塩基配列を指してい
る。ＤＮＡプライマーはそれら塩基配列の相補的な、１
５〜４０ｂｐ好ましくは２０〜２５ｂｐの連続したオリ
ゴヌクレオチドとして合成される。
【００１４】合成されたオリゴヌクレオチドをＤＮＡプ
ライマーとして用いることによって、ＤＮＡプライマー
に相補的な繰り返し配列を有する種々のＤＮＡ断片をＰ
ＣＲによって特異的に増幅させることができ、該ＤＮＡ
断片中の繰り返し配列の長さの違いを検出できる。
ライマーとして用いることによって、ＤＮＡプライマー
に相補的な繰り返し配列を有する種々のＤＮＡ断片をＰ
ＣＲによって特異的に増幅させることができ、該ＤＮＡ
断片中の繰り返し配列の長さの違いを検出できる。
【００１５】次に、マイクロサテライトマーカーを用い
たイネ品種の特定方法について以下に説明する。まず、
イネからＤＮＡを抽出するが、抽出するための組織とし
ては根、葉、種子など植物体のあらゆる部分を利用で
き、また精米も用いることができる。ＤＮＡの抽出方法
としてはそれ自体公知のどの様な方法も用いることがで
き、粗精製のＤＮＡを用いることもできる。次に、抽出
されたＤＮＡを鋳型としてマイクロサテライトマーカー
をＰＣＲ法によって増幅する。ＰＣＲの方法は公知の方
法が採用できる。さらに、増幅されたＤＮＡ断片の分子
サイズを電気泳動等によって測定し、その分子サイズに
よってイネ品種を識別・特定する。このとき、分子サイ
ズを測定する電気泳動方法として、アガロースゲル、変
性および非変性のアクリルアミドゲルを用いる方法が行
える。また、蛍光色素を利用する方法も用いることがで
きる。さらに、マイクロサテライトを用いた品種の特定
方法の特徴として、次のことが挙げられる。すなわち、
マイクロサテライトマーカーは共優性のマーカーである
ので、２種類のイネが掛け合わされたヘテロな遺伝子構
成のイネ（例えば、ハイブリッドライス）も用いられた
親品種と共に、特定することができる。このマイクロサ
テライトマーカーによる品種の識別・特定方法を用いた
場合、例えば、５から５０の繰り返し配列を含むマイク
ロサテライトマーカーで識別可能な複対立座は４５とな
り、この様な繰り返し配列で識別できるイネ品種は４５
品種となる。従って、別の５から５０の繰り返し配列を
含むマイクロサテライトマーカーとを組み合わせて用い
ることで、２０２５品種を識別できる。
たイネ品種の特定方法について以下に説明する。まず、
イネからＤＮＡを抽出するが、抽出するための組織とし
ては根、葉、種子など植物体のあらゆる部分を利用で
き、また精米も用いることができる。ＤＮＡの抽出方法
としてはそれ自体公知のどの様な方法も用いることがで
き、粗精製のＤＮＡを用いることもできる。次に、抽出
されたＤＮＡを鋳型としてマイクロサテライトマーカー
をＰＣＲ法によって増幅する。ＰＣＲの方法は公知の方
法が採用できる。さらに、増幅されたＤＮＡ断片の分子
サイズを電気泳動等によって測定し、その分子サイズに
よってイネ品種を識別・特定する。このとき、分子サイ
ズを測定する電気泳動方法として、アガロースゲル、変
性および非変性のアクリルアミドゲルを用いる方法が行
える。また、蛍光色素を利用する方法も用いることがで
きる。さらに、マイクロサテライトを用いた品種の特定
方法の特徴として、次のことが挙げられる。すなわち、
マイクロサテライトマーカーは共優性のマーカーである
ので、２種類のイネが掛け合わされたヘテロな遺伝子構
成のイネ（例えば、ハイブリッドライス）も用いられた
親品種と共に、特定することができる。このマイクロサ
テライトマーカーによる品種の識別・特定方法を用いた
場合、例えば、５から５０の繰り返し配列を含むマイク
ロサテライトマーカーで識別可能な複対立座は４５とな
り、この様な繰り返し配列で識別できるイネ品種は４５
品種となる。従って、別の５から５０の繰り返し配列を
含むマイクロサテライトマーカーとを組み合わせて用い
ることで、２０２５品種を識別できる。
【００１６】本発明の植物種子の純度を検定する方法に
は、ＧＡ、ＡＧ、ＧＴ、ＴＧ、ＣＡ、ＡＣ、ＴＣ、ＣＴ
などの配列が５回以上繰り返されたマイクロサテライト
を含むマイクロサテライトマーカーを用いるが、マイク
ロサテライトとしてはいかなるものでも用いることが可
能である。マイクロサテライトマーカーを用いた植物種
子の純度検査の方法は、上記のイネの品種識別の方法と
同じであるが、鋳型とするＤＮＡは種子もしくは実生よ
り抽出したものを用いる。ＰＣＲによって増幅されたＤ
ＮＡ断片の分子サイズによって植物種子を分類し、その
結果を基に植物種子の純度を判定する。さらに、マイク
ロサテライトマーカーを用いた植物種子の純度検査にお
いて雑種種子を容易に識別でる特徴が挙げられる。すな
わち、雑種種子は２種類の品種を交配して得られること
から、必ず、両親由来の分子サイズの異なる２種類のＤ
ＮＡ断片が増幅されることになる。従って、増幅される
バンドの分子サイズと本数から雑種種子と雑種以外の種
子を容易に識別できる。この分析結果を基に、雑種種子
の集団に対する雑種以外の種子の混入率を検査すること
ができる。
は、ＧＡ、ＡＧ、ＧＴ、ＴＧ、ＣＡ、ＡＣ、ＴＣ、ＣＴ
などの配列が５回以上繰り返されたマイクロサテライト
を含むマイクロサテライトマーカーを用いるが、マイク
ロサテライトとしてはいかなるものでも用いることが可
能である。マイクロサテライトマーカーを用いた植物種
子の純度検査の方法は、上記のイネの品種識別の方法と
同じであるが、鋳型とするＤＮＡは種子もしくは実生よ
り抽出したものを用いる。ＰＣＲによって増幅されたＤ
ＮＡ断片の分子サイズによって植物種子を分類し、その
結果を基に植物種子の純度を判定する。さらに、マイク
ロサテライトマーカーを用いた植物種子の純度検査にお
いて雑種種子を容易に識別でる特徴が挙げられる。すな
わち、雑種種子は２種類の品種を交配して得られること
から、必ず、両親由来の分子サイズの異なる２種類のＤ
ＮＡ断片が増幅されることになる。従って、増幅される
バンドの分子サイズと本数から雑種種子と雑種以外の種
子を容易に識別できる。この分析結果を基に、雑種種子
の集団に対する雑種以外の種子の混入率を検査すること
ができる。
【００１７】
【実施例】以下に本発明を実施例に基づき詳細に説明す
る。 ［実施例１］日本で栽培されいる５９品種を用いた。す
なわち、愛国、アオカゼ、あきたこまち、アキヒカリ、
アケノホシ、旭、あそみのり、うこん錦、大空、雄町、
亀の尾、キヌヒカリ、クジュウ、コガネマサリ、コシヒ
カリ、ササニシキ、サチミノリ、サトホナミ、サトミノ
リ、新山吹、神力、月の光、短銀坊主、つがるおとめ、
トドロキワセ、トヨサト、トヨニシキ、新潟早生、ニシ
ホマレ、日本晴、ニホンマサリ、農林２２号、能登ひか
り、初星、ヒノヒカリ、ホウヨク、北陸１００号、ミナ
ミニシキ、ミネニシキ、むさしこがね、山形２２号、レ
イホウ、越路早生、ヤマセニシキ、ホウネンワセ、ハツ
ニシキ、アキニシキ、マンリョウ、農林２９号、近畿３
３号、農林１号、農林６号、農林８号、森田早生、陸羽
１２２号、銀坊主、上州、撰一、大場を材料として用
い、これらの幼植物体より、Ｅｄｗａｒｄｓらの方法
（（１９９２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓａ
ｒｃｈ１９：１３４９）に従ってＤＮＡを粗抽出した。
マイクロサテライトマーカーとして配列番号１から配列
番号３を用いた。これらのマーカーを増幅するためのプ
ライマーとして、各マイクロサテライトマーカーの両端
の２０から２５塩基をプライマーとして用いた。ＰＣＲ
はＧｅｎｅＡｍｐ９６００システム（ＡＢＩ社）を使用
し、２０μｌの反応量で行った。反応液２０μｌ中には
１０ｎｇ ＤＮＡ，０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔ
ａｑ（ＴＡＫＡＲＡ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１
０ｐｍｏｌｅ ｐｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ８．３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ2が含まれる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間
のディネーチャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２
℃で３０秒間の伸長反応を１サイクルとし、３５サイク
ル反応させた。反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒ
ｏｓｅ（ＦＭＣ社）で分画した。供試した５９品種は、
配列番号１のマイクロサテライトマーカーでは７つに、
配列番号２では１０に、配列番号３では５つに分類され
た。さらに、これらのデータを組み合わせることで５９
品種の全てが識別・特定できた。
る。 ［実施例１］日本で栽培されいる５９品種を用いた。す
なわち、愛国、アオカゼ、あきたこまち、アキヒカリ、
アケノホシ、旭、あそみのり、うこん錦、大空、雄町、
亀の尾、キヌヒカリ、クジュウ、コガネマサリ、コシヒ
カリ、ササニシキ、サチミノリ、サトホナミ、サトミノ
リ、新山吹、神力、月の光、短銀坊主、つがるおとめ、
トドロキワセ、トヨサト、トヨニシキ、新潟早生、ニシ
ホマレ、日本晴、ニホンマサリ、農林２２号、能登ひか
り、初星、ヒノヒカリ、ホウヨク、北陸１００号、ミナ
ミニシキ、ミネニシキ、むさしこがね、山形２２号、レ
イホウ、越路早生、ヤマセニシキ、ホウネンワセ、ハツ
ニシキ、アキニシキ、マンリョウ、農林２９号、近畿３
３号、農林１号、農林６号、農林８号、森田早生、陸羽
１２２号、銀坊主、上州、撰一、大場を材料として用
い、これらの幼植物体より、Ｅｄｗａｒｄｓらの方法
（（１９９２） Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓａ
ｒｃｈ１９：１３４９）に従ってＤＮＡを粗抽出した。
マイクロサテライトマーカーとして配列番号１から配列
番号３を用いた。これらのマーカーを増幅するためのプ
ライマーとして、各マイクロサテライトマーカーの両端
の２０から２５塩基をプライマーとして用いた。ＰＣＲ
はＧｅｎｅＡｍｐ９６００システム（ＡＢＩ社）を使用
し、２０μｌの反応量で行った。反応液２０μｌ中には
１０ｎｇ ＤＮＡ，０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔ
ａｑ（ＴＡＫＡＲＡ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１
０ｐｍｏｌｅ ｐｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ８．３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ Ｍ
ｇＣｌ2が含まれる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間
のディネーチャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２
℃で３０秒間の伸長反応を１サイクルとし、３５サイク
ル反応させた。反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒ
ｏｓｅ（ＦＭＣ社）で分画した。供試した５９品種は、
配列番号１のマイクロサテライトマーカーでは７つに、
配列番号２では１０に、配列番号３では５つに分類され
た。さらに、これらのデータを組み合わせることで５９
品種の全てが識別・特定できた。
【００１８】［実施例２］実施例１に示した、５９品種
の内、越路早生、ヤマセニシキ、ホウネンワセ、ハツニ
シキ、アキニシキ、マンリョウ、農林２９号、近畿３３
号、農林１号、農林６号、農林８号、森田早生、陸羽１
２２号、銀坊主、上州、撰一、大場を除く４２品種を用
いた。ＰＣＲには実施例１で示した祖抽出のＤＮＡを鋳
型として用いた。マイクロサテライトマーカーとして配
列番号８を用い、それぞれの両端の２０塩基をプライマ
ーとして用いた。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６００シス
テム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量で行っ
た。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，０．５ｕ
ｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ社），
４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐｒｉｍｅ
ｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３），５０
ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含まれる。さら
に、ＰＣＲによる増幅産物を蛍光ラベルするため、［Ｒ
１１０］ｄＵＴＰまたは［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭ
ＲＡ］ｄＵＴＰ（ＡＢＩ社）を１２ｎｍｏｌもしくは５
０ｎｍｏｌ添加した。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間
のディネーチャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２
℃で３０秒間の伸長反応を１サイクルとし、３５サイク
ル反応させた。反応後、ＳＵＰＲＥＣＴＭ−０２（ＴＡ
ＫＡＲＡ社）を用いて蛍光ｄＵＴＰを除去した。増幅さ
れたマイクロサテライトマーカーは６％変成アクリルア
ミドゲルで３７３ＡＤＮＡシークエンサー（ＡＢＩ社）
によって分画した。マイクロサテライトマーカーの分子
サイズは同時に泳動した蛍光分子マーカーを指標とし
て、ＧＥＮＥＳＣＡＮ解析ソフト（ＡＢＩ社）を用いて
測定した。増幅されたＤＮＡ断片の長さは１７６ｂｐか
ら２０８ｂｐで、供試した４２品種は９種類に分類され
た。
の内、越路早生、ヤマセニシキ、ホウネンワセ、ハツニ
シキ、アキニシキ、マンリョウ、農林２９号、近畿３３
号、農林１号、農林６号、農林８号、森田早生、陸羽１
２２号、銀坊主、上州、撰一、大場を除く４２品種を用
いた。ＰＣＲには実施例１で示した祖抽出のＤＮＡを鋳
型として用いた。マイクロサテライトマーカーとして配
列番号８を用い、それぞれの両端の２０塩基をプライマ
ーとして用いた。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６００シス
テム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量で行っ
た。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，０．５ｕ
ｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ社），
４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐｒｉｍｅ
ｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．３），５０
ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含まれる。さら
に、ＰＣＲによる増幅産物を蛍光ラベルするため、［Ｒ
１１０］ｄＵＴＰまたは［Ｒ６Ｇ］ｄＵＴＰ、［ＴＡＭ
ＲＡ］ｄＵＴＰ（ＡＢＩ社）を１２ｎｍｏｌもしくは５
０ｎｍｏｌ添加した。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間
のディネーチャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２
℃で３０秒間の伸長反応を１サイクルとし、３５サイク
ル反応させた。反応後、ＳＵＰＲＥＣＴＭ−０２（ＴＡ
ＫＡＲＡ社）を用いて蛍光ｄＵＴＰを除去した。増幅さ
れたマイクロサテライトマーカーは６％変成アクリルア
ミドゲルで３７３ＡＤＮＡシークエンサー（ＡＢＩ社）
によって分画した。マイクロサテライトマーカーの分子
サイズは同時に泳動した蛍光分子マーカーを指標とし
て、ＧＥＮＥＳＣＡＮ解析ソフト（ＡＢＩ社）を用いて
測定した。増幅されたＤＮＡ断片の長さは１７６ｂｐか
ら２０８ｂｐで、供試した４２品種は９種類に分類され
た。
【００１９】［実施例３］２品種のハイブリッドライス
とそれらの親品種を用いた。それぞれの、精米１粒を２
ｍｌのエッペンドル フチューブに入れ、金属棒とハン
マーで破砕した。これに４００μｌのＥｄｗａｒｄｓら
の抽出液（（１９９２） ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ Ｒ
ｅｓａｒｃｈ １９：１３４９）を加え、１００゜Cで１
０分間処理した。処理後、遠心によって上澄を回収し、
等量の２ープロパノールを添加して、遠心によってＤＮ
Ａを沈殿・回収した。このＤＮＡを鋳型として、配列番
号２と配列番号８のマイクロサテライトマーカーをＰＣ
Ｒによって増幅した。プライマーとしては、それぞれの
両端の２０塩基を用いた。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６
００システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量
で行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，
０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲ
Ａ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐ
ｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含ま
れる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネーチャ
ー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒間の
伸長反応を１サイクルとし、３５サイクル反応させた。
反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（ＦＭＣ
社）で分画した。それぞれのハイブリッドの親品種が特
定された。また、ハイブリッドライスはそれぞれの親に
特有のサイズのマイクロサテライトマーカーを合わせ持
つことから、これらの親品種のハイブリッドであること
が特定された。
とそれらの親品種を用いた。それぞれの、精米１粒を２
ｍｌのエッペンドル フチューブに入れ、金属棒とハン
マーで破砕した。これに４００μｌのＥｄｗａｒｄｓら
の抽出液（（１９９２） ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ Ｒ
ｅｓａｒｃｈ １９：１３４９）を加え、１００゜Cで１
０分間処理した。処理後、遠心によって上澄を回収し、
等量の２ープロパノールを添加して、遠心によってＤＮ
Ａを沈殿・回収した。このＤＮＡを鋳型として、配列番
号２と配列番号８のマイクロサテライトマーカーをＰＣ
Ｒによって増幅した。プライマーとしては、それぞれの
両端の２０塩基を用いた。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６
００システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量
で行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，
０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲ
Ａ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐ
ｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含ま
れる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネーチャ
ー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒間の
伸長反応を１サイクルとし、３５サイクル反応させた。
反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（ＦＭＣ
社）で分画した。それぞれのハイブリッドの親品種が特
定された。また、ハイブリッドライスはそれぞれの親に
特有のサイズのマイクロサテライトマーカーを合わせ持
つことから、これらの親品種のハイブリッドであること
が特定された。
【００２０】［実施例４］ハイブリッドライスＭＨ２０
０５とその親品種であるＭＨＡ２５およびＭＨＲ１８を
用いた。それぞれの、玄米を適当に混合し１９２粒をラ
ンダムに選んだ。選んだ玄米１粒ごとに、金属棒とハン
マーで破砕した。破砕した玄米粒を１．５ｍｌのエッペ
ンドルフチューブに入れ、実施例３の方法に従って、Ｄ
ＮＡを抽出した。このＤＮＡを鋳型として、配列番号３
２と配列番号３３の配列を有するＤＮＡをプライマーと
して用いＰＣＲによってＣＴの繰り返し配列からなるマ
イクロサテライトを増幅した。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ
９６００システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反
応量で行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮ
Ａ，０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫ
ＡＲＡ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ
ｐｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
８．３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が
含まれる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネー
チャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒
間の伸長反応を１サイクルとし、４０サイクル反応させ
た。反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（Ｆ
ＭＣ社）で分画した。１９２粒の内、１３０粒で分子サ
イズの異なる２本のＤＮＡ断片が検出され、２６粒では
高分子のＤＮＡ断片のみが、３６粒では低分子のＤＮＡ
断片のみが増幅された。従って、ランダムに選んだ１９
２粒中のハイブリッドライスＭＨ２００５の純度は６
７．７％であると判定された。また、ＭＨＡ２５の割合
は１３．５％、ＭＨＲ１８の割合は１８．８％であるこ
とが検査結果から明らかとなった。
０５とその親品種であるＭＨＡ２５およびＭＨＲ１８を
用いた。それぞれの、玄米を適当に混合し１９２粒をラ
ンダムに選んだ。選んだ玄米１粒ごとに、金属棒とハン
マーで破砕した。破砕した玄米粒を１．５ｍｌのエッペ
ンドルフチューブに入れ、実施例３の方法に従って、Ｄ
ＮＡを抽出した。このＤＮＡを鋳型として、配列番号３
２と配列番号３３の配列を有するＤＮＡをプライマーと
して用いＰＣＲによってＣＴの繰り返し配列からなるマ
イクロサテライトを増幅した。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ
９６００システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反
応量で行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮ
Ａ，０．５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫ
ＡＲＡ社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ
ｐｒｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
８．３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が
含まれる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネー
チャー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒
間の伸長反応を１サイクルとし、４０サイクル反応させ
た。反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（Ｆ
ＭＣ社）で分画した。１９２粒の内、１３０粒で分子サ
イズの異なる２本のＤＮＡ断片が検出され、２６粒では
高分子のＤＮＡ断片のみが、３６粒では低分子のＤＮＡ
断片のみが増幅された。従って、ランダムに選んだ１９
２粒中のハイブリッドライスＭＨ２００５の純度は６
７．７％であると判定された。また、ＭＨＡ２５の割合
は１３．５％、ＭＨＲ１８の割合は１８．８％であるこ
とが検査結果から明らかとなった。
【００２１】［実施例５］ハイブリッドライスＭＨ２０
０３の種子１ｋｇからランダムに２０００粒を選んだ。
９６穴プレートを用い、１粒ずつからＤＮＡを抽出し
た。１粒あたり２００μｌの１／１０希釈した実施例３
の抽出バッファーを加え、１００℃で加熱し、ＤＮＡを
抽出した。このＤＮＡを鋳型として、配列番号３４と配
列番号３５の配列を有するＤＮＡをプライマーとして用
いＰＣＲによってＧＡの繰り返し配列からなるマイクロ
サテライトを増幅した。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６０
０システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量で
行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，０．
５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ
社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐｒ
ｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含ま
れる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネーチャ
ー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒間の
伸長反応を１サイクルとし、４０サイクル反応させた。
反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（ＦＭＣ
社）で分画した。調べた２０００粒の内、１９９６粒か
らは分子サイズの異なる２本のＤＮＡ断片が検出され
た。残り４粒の内３粒からは低分子のＤＮＡ断片のみが
増幅され、１粒からはＤＮＡ断片が増幅されなかった。
この結果から、検査したＭＨ２００３の種子純度は１９
９６／１９９９×１００＝９９．８％であると判定し
た。
０３の種子１ｋｇからランダムに２０００粒を選んだ。
９６穴プレートを用い、１粒ずつからＤＮＡを抽出し
た。１粒あたり２００μｌの１／１０希釈した実施例３
の抽出バッファーを加え、１００℃で加熱し、ＤＮＡを
抽出した。このＤＮＡを鋳型として、配列番号３４と配
列番号３５の配列を有するＤＮＡをプライマーとして用
いＰＣＲによってＧＡの繰り返し配列からなるマイクロ
サテライトを増幅した。ＰＣＲはＧｅｎｅＡｍｐ９６０
０システム（ＡＢＩ社）を使用し、２０μｌの反応量で
行った。反応液２０μｌ中には１０ｎｇ ＤＮＡ，０．
５ｕｎｉｔｓ ＴＡＫＡＲＡ Ｔａｑ（ＴＡＫＡＲＡ
社），４ｎｍｏｌｅ ｄＮＴＰ，１０ｐｍｏｌｅ ｐｒ
ｉｍｅｒ，１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．
３），５０ｍＭＫＣｌ，１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2が含ま
れる。ＰＣＲ条件は、９５℃で１０秒間のディネーチャ
ー、５５℃で３０秒間のアニール、７２℃で３０秒間の
伸長反応を１サイクルとし、４０サイクル反応させた。
反応後、３％ＭｅｔａＰｈｏｒＡｇａｒｏｓｅ（ＦＭＣ
社）で分画した。調べた２０００粒の内、１９９６粒か
らは分子サイズの異なる２本のＤＮＡ断片が検出され
た。残り４粒の内３粒からは低分子のＤＮＡ断片のみが
増幅され、１粒からはＤＮＡ断片が増幅されなかった。
この結果から、検査したＭＨ２００３の種子純度は１９
９６／１９９９×１００＝９９．８％であると判定し
た。
【００２２】
【発明の効果】本発明により、イネの品種を識別・特定
するためのマイクロサテライトマーカーが提供され、単
独又は複数のマイクロサテライトマーカーをＰＣＲによ
って増幅し、そのサイズを調べることで、イネの品種の
特定を簡便にしかも精度高く行うことが出来る。また、
本発明によりマイクロサテライトマーカーを利用したＰ
ＣＲによって植物種子の純度を簡便かつ精度高く検定す
ることができる。この本発明の方法によりイネ品種を特
定することが可能となり、イネ品種の育成が効率化され
る。さらに、イネの種子の純度管理が可能となり、さら
に、流通しているコメの純度を調べることも可能とな
る。また、本発明のもう一つの方法によって植物種子の
純度管理が可能となる。
するためのマイクロサテライトマーカーが提供され、単
独又は複数のマイクロサテライトマーカーをＰＣＲによ
って増幅し、そのサイズを調べることで、イネの品種の
特定を簡便にしかも精度高く行うことが出来る。また、
本発明によりマイクロサテライトマーカーを利用したＰ
ＣＲによって植物種子の純度を簡便かつ精度高く検定す
ることができる。この本発明の方法によりイネ品種を特
定することが可能となり、イネ品種の育成が効率化され
る。さらに、イネの種子の純度管理が可能となり、さら
に、流通しているコメの純度を調べることも可能とな
る。また、本発明のもう一つの方法によって植物種子の
純度管理が可能となる。
【００２３】
配列番号：１ 配列の長さ：２２２ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： ACCATGGATG GTACCAACTC CTCCTATACT CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT CTCTATATAT 60 ATATATATAT ATATATATAT ATATATATAT ATTTCACCTA CCTACTTCTA TTGCACACCT 120 ACCAAATTAA TGCTCTGAAA CCAATTAATT AGTTAGAAAC TAAAAAAGTT TTGCTTTACC 180 ACACGCGCGG CACACGGCAA AAGCATAGTA GATGCAAGCG AA 222
【００２４】配列番号：２ 配列の長さ：２０５ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AGCATGCATT GCAAGCTAGC GTTTGTGGCT GCTCATCAGC TGCATGCGTA ATTGCGTACG 60 TGCACAAATT AAACAGACCT TGCTACCATT GTGCCATATT GTGTGTGTTG TATGATATAT 120 ATATATATAT ATATATATAT ATATATATAT ATATATATAT AAACAGCACG TTTGTGCTCT 180 GATTCGTGTA ACTGATCAGC AGATC 205
【００２５】配列番号：３ 配列の長さ：２７４ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AGCTAAGGTC TGGGAGAAAC CATGGATGGA CTTCAAGGAG CTCCAGGAGT TCAAGCCTGT 60 CGATGCCAGT GCAAATGCCT AAGGTCTAGA CATGTTTGGT TTAGATACCC GCCAAACAAA 120 ATTTTCACCT GTTCCATGCA TTGACCATGT ATAATATATA TATATATATA TATATATATA 180 TATATATATA TATATATATA TATATATATA TATATATATA TATATATATG TCCTTTTCTC 240 ATTAGAAAAC CAGAGCTTGT GCCCCATCCT ACTT 274
【００２６】配列番号：４ 配列の長さ：２３０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GAGTGCAGTT GGCAATCAAA GTAAGTATCA TGCTAAAGAT CTCGGCGAAT TATAGTATAT 60 AATTTTGAAG ACTTCAATGA TTTCAAATTA GACTAGAGGC TAGATGAATA GGCAACATAT 120 ATATATATAT ATATATATAT ATATATATGT TCCATTAATT GTTGAATCTA GAACATAAAT 180 GACACATGCT CCAATGTTTG CTGGCAGATC TCCGGCATTC ATTGGTGGTA 230
【００２７】配列番号：５ 配列の長さ：２１３ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCTATCCCAT TAGCCAAACA TTGCTTTAGT CATAGGTGAA TAGATCCCAC TACAAGAAAC 60 TCAATCAGTT GATCTACGTT TATTTTACAT GTTTTCTAAA TTTTGCTCTT CGTATTATAT 120 ATATATATAT ATATATATAT ATATATATAT ATATATATCC CCCTAGGTTA ATTATTGGCG 180 GTAATTAACT CCAGGTTGGC GTCGAGGTAA ATC 213
【００２８】配列番号：６ 配列の長さ：１４５ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCAAGGGAAA GATGCGACAA TTGCCCTGGT ATATATATAT ATATATATAT ATATATATAT 60 ATATATATAT ATATATATAT ATATATATGT GTGTGTGTGT GTAACTAATC TATTACTCCC 120 TCCATCCCAT AATATAAAGC GTCCAC 145
【００２９】配列番号：７ 配列の長さ：１４０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AACTCATTTG TCACACGCAC ATTTCTCAAA CTATCAAACG TAATTTGTTT CTATGAAGTT 60 TGATAAAAAT ATTGTTTTAA AAATCATATT AATATGTATA TATATATATA TATATATAAG 120 TTTTTTAATT GATACTTAAT 140
【００３０】配列番号：８ 配列の長さ：２０６ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： TGGTCAAGTG ACTTAGGTGG CTTTTTCTAC ATTATTTAAC TTGTTTCCTA CTCTCTCTCT 60 CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT CTCTCTCTCT 120 CTCTCAATAA TTGAAAGTAT TGACTAAACG ATACACACTT CGACCACTAC TTTTTCAACA 180 ATAAACTTGT AAAGAGTTGG AGCTCT 206
【００３１】配列番号：９ 配列の長さ：１７８ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCAACATCTC CGTCAGAATC AAGCGAGATC GGGGATCCCA ATGAGAGAGA GAGAGAGAGA 60 GAGAGAGAGA GAGAGAGAGA GAGAGAGAGA GAGAGAGAGA GAGACGTACG ACGCCGACGT 120 TGACTTTGTT AATCGTGTCA ATAGGTTGTT TTGTTTTGCG TGTTACGAGG AAAGGCTT 178
【００３２】配列番号：１０ 配列の長さ：１４０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCCCTTCCTC TCGCGTCGAC CCCTTGCTTT GCTCCTCCTT CAACCTTCTT CTTTCTTGGA 60 GTTTCTTGAG AGAGAGAGAG AGAGAGAGAG AGAGAGAGAG AGAGAGAGAG GGGGGAGCGG 120 TCGCAGGAGG AGGAGGACGG 140
【００３３】配列番号：１１ 配列の長さ：１２６ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CGTCTTCCCC AACGCTAAAA ATAAACAAAT CTTCTGAGAA AAAGAAAAAA GAGAGAGAGA 60 GAGAGAGAGA GGGAGGAGAG CTGAACTGAA GTGCGCGGCG CCGCCGCGGA GAAGCGAAGC 120 CCGGCG 126
【００３４】配列番号：１２ 配列の長さ：９９ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CATTTGTGCG TCACGGAGTA GGCAGTGTAC ATACGTTACT AGCTCAAGGC TGCAGCGGAG 60 AGAGAGAGAG AGAGAGAGAG AGAGATGGGC GCTGTGGCT 99
【００３５】配列番号：１３ 配列の長さ：２０２ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AAATCCACGC ACACTTTGCG TGCGAGGCGA GGCGGTTCGA TTCGAGAGGA GAGAGAGAGA 60 GAGAGAGAGA GAGAGAGATG GACGCCTTCT ACTCGACCTC GTCGGCGTAC GGAGCGGCGG 120 CGAGCGGCTG GGGCTACGAC TCGCTGAAGA ACTTCCGCCA GATCTCCCCC GCCGTCCAGT 180 CCCACCTCAA GCTCGTTTAC CT 202
【００３６】配列番号：１４ 配列の長さ：１２０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CAACCAACGC CAAAAGCTAC TGCTGCTTGC ACAGGAGAGG GCAGAGAGAG AGAGAGAGAG 60 AGAGAGAGAA GAGGGGGGCT GCGGCGGCGG CGCGCTTCGC TCATGCAGGG CGAGTACCAC 120
【００３７】配列番号：１５ 配列の長さ：１１８ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AAAAACTAGC TTGCAAAGGG GATAGAGTAG TAGAGAGAGA GAGAGAGGAG AGGAGGAGGA 60 AGAAGATGGG GAGGGGGAAG GTGGAGCTGA AGCGGATCGA GAACAAGATC AGCCGGCA 118
【００３８】配列番号：１６ 配列の長さ：１６０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCCCAAGGAT AATATCAGGA GACCCCTACA AACACCATAA GAGGCAACCC CCATTGCAAA 60 CACACACACA CACACACACA CACACACACA CACACACACA CACACTACCC ACGATACCGC 120 AAGCCGCACA AGACCTTGAA CTTGGGAACA AACATACGCA 160
【００３９】配列番号：１７ 配列の長さ：１７９ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CTCTCTCACC ATTCCTTCAG TTCTTTGTCT ATCTCAAGAC ACAAATAACT GCAGTCTCTC 60 TCTCTCTCTC TCTCTCTGCT TCACTTCTCT GCTTGTGTTG TTCTGTTGTT CATCAGGAAG 120 AACATCTGCA AGGTATACAT ATATGTTTAT AATTCTTTGT TTCCCCTCTT ATTCAGATC 179
【００４０】配列番号：１８ 配列の長さ：１３９ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： TCTTCTTTCT CTACTCACCT GCATCTGTAG AGAGAGAGAG AGAGAGAGAG AGAGAGATGG 60 CAGGAGGTGA CAACAACTCC CAGACCACCA ATGGCGGCTC AGGTCACGAG CAGAGAGCCA 120 TGGAGGAAGG CAGGAAGCA 139
【００４１】配列番号：１９ 配列の長さ：２０７ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： ATTTCTTTGG CCACAGGCGA CAGCCCCAAA ACCCCGACAC CCCACCGCCG ACCACCTCGC 60 CGCCGGCCAC CGCTCCCCTT TGCCGCCGTC GGCTCTACCT CCTTCCCACT CTCCCGTCCT 120 TCTCCTAGCC TCCCTCCTCT CTCTCTCTCT CTCAATACTT TTTTCTACCT TTCATACTAC 180 CTTCCATGTT CTTGTTCCGA ATCTGGG 207
【００４２】配列番号：２０ 配列の長さ：１１３ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CTGAGTCTCC TGTCCTCATC TCCATTTTGT TTTCTCCTCC TCCTCCTCTC TCTCTCTCTC 60 TCTCTCTCTC TCTCTCTCTG TCTCTCTGGT GGAGTGCAGT GCAGAGATTC AAG 113
【００４３】配列番号：２１ 配列の長さ：１８３ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： TCCGGCTCCC TCTCCCCCCC TCTCTCTCTC TCTCTCTCTC TCTCTCTCTC TCTCTCTCTC 60 TCTTTGCAGC CGCCGCCGCC GCCGCCGCCG CCGCCGCCGC GTCCGCTTCG ACTCCCGCCG 120 GCAGGTTCTC TCTCTCCAGC GCGCAGGCAC CATGGCCGAA GCCGAGGTTA AGGACAACGA 180 GGT 183
【００４４】配列番号：２２ 配列の長さ：１８６ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CCAACAGAAA CCACACACCA CCCGCACGAA AAAAACCGAA CCGAACCGCA CGTGCGCGCG 60 CGCTCCACGC ACACCCCAAA CAGACGGCAC GGCGGGAGCG CGCGCGCGCG CACGCGAGCC 120 GAGGAGAAAA CAAACGGGGG AAACAAGCTG GAAAAGCAAA AGGGGAAAAG AACGGAGCGG 180 AGGCTT 186
【００４５】配列番号：２３ 配列の長さ：１３５ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GACAGAGCTT TGGATGTCTG TATTGTGGGT GCAAGAGGAG AGGTTGTTCC TGTGTGTTTC 60 TCTGTCTGTG TGTGTGTGTG TGTGTGTGTG TGTGTAATCT GTATCCAGTT CCATAGCGTC 120 AAAGGCAGCT TCTTT 135
【００４６】配列番号：２４ 配列の長さ：１２８ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GGGTGATTTC TTGGAAGCGA AGAGTGAGGG GAGAAGAAGA AGAAGAAGAA GAAGAAGAGG 60 GGGGAGGAGG AGGAGCAGCA TGGCTGAGCA CAAGGAGGAG CAGTCGGTGA TGGAGAAGCT 120 CTCCGAGA 128
【００４７】配列番号：２５ 配列の長さ：１８０ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： AGCAGCTATA GCTTAGCTGG AGATCGATCG AGAGGTAGAA GAAGAAGAAG AAGAAGAAGA 60 AGAAGAAGAA GAAGAAGAAG AAGAAGAAGA AGAAGAAGAA GAAGAGAGGC CTCGCATGGC 120 GATGAGAGCT CGCATCTGGT AGCCAAGGAT GACTTGCCTG TGTCTCTGCT CATGTGCAGT 180
【００４８】配列番号：２６ 配列の長さ：２３７ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GCTAGCAGCT ATAGCTTAGC TGGAGATCGA TCGAGAGGTA GAAGAAGAAG AAGAAGAAGA 60 AGAAGAAGAA GAAGAAGAAG AAGAAGAAGA AGAAGAAGAA GAAGAAGAGA GGCCTCGCAT 120 GGCGATGAGA GCTCGCATCT GGTAGCCAAG GATGACTTGC CTGTGTCTCT GCTCATGTGC 180 AGTAGAAGAA GATGCATTTC TAGCTGCTTT CTGCATATGT GATCTCACAG GCAGTCT 237
【００４９】配列番号：２７ 配列の長さ：１１９ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： TCACCGTCGA ATCGAATCCA AGGCGGCGGC GGCGGCGGCG GCGGCGGCGG CGATGGGGAT 60 CCACGAGCAC GTCGAGGGGA TCAAGGCGCA CTGGGCGAAG AACTTCTCCT TCCTCGACT 119
【００５０】配列番号：２８ 配列の長さ：１３１ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： TCGCTTCTAC TGGAGGAGAG CAGAGGTGGT GGTTGGTGAG AGAGGATGCG CGGCGGCGGC 60 GGCGGCGGCG GCGGCGGCGG CGAGGAGGCC GGCCAGAAGC TGAAGAGCAT GGACGTCGAC 120 AAGCTGGAGA A 131
【００５１】配列番号：２９ 配列の長さ：１６７ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： CTCCAGCTTC GGCAACGTCA GCATGGCGGC AGGATCAGGT GCATGCAGGT AATTACCTAC 60 TGATCCAACA CACATTCTTC TTCTTCTTCT TCTTCTTAAC CAACATTAAC CAACAACTCA 120 ATTATCGTTT ATTCATTGAG GTGTGGCCGA TTGAGGGCAT CAAGAAG 167
【００５２】配列番号：３０ 配列の長さ：１５２ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GAAACCACCA CACCTCACCG TCGAATCGAA TCCAAGGCGG CGGCGGCGGC GGCGGCGGCG 60 GCGGCGATGG GGATCCACGA GCACGTCGAG GGGATCAAGG CGCACTGGGC GAAGAACTTC 120 TCCTTCCTCG ACTACTTCAA GAAGGTCTAC GG 152
【００５３】配列番号：３１ 配列の長さ：２０１ 配列の形：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジ−：直鎖状 起源： 生物名：Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ 配列： GCCTCGAGCA TCATCATCAG TAGGAAGAAG AAGAAGAAGA AGAAGAAGAA GAGCAACAGG 60 AAGAAGCAAG CAAGAAGAGG AAGAAGAAGA AAGCAAGGAG AAGAAGATGC AGGACTGGGG 120 TCCGGTGCTG ATATCTTGGG TGCTGTTCAT CCTGCTGTGG CCGGGGCTTC TGTTCCAGAT 180 ACCAGGCAAG TGCAGGTTGA T 201
【００５４】配列番号：３２ 配列の長さ：２０ 配列の形：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列： ATTTCTTTGG CCACAGGCGA 20
【００５５】配列番号：３３ 配列の長さ：２３ 配列の形：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列： CCCAGATTCG GAACAAGAAG AAC 23
【００５６】配列番号：３４ 配列の長さ：２０ 配列の形：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列： GCGAAAACAC AATGCAAAAA 20
【００５７】配列番号：３５ 配列の長さ：１７ 配列の形：核酸 鎖の数：１本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列： GCGTTGGTTG GACTGAC 17
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 稲垣 明子 千葉県茂原市東郷1144番地 三井東圧化学 株式会社内
Claims (18)
- 【請求項１】 以下の工程よりなり、ＡＴまたはＴＡが
５回以上繰り返された配列を有するマイクロサテライト
を含むマイクロサテライトマーカーを用いるイネ品種を
特定する方法。 ａ） イネのＤＮＡを鋳型とし、該マイクロサテライト
マーカーの該マイクロサテライトの両側に位置するマイ
クロサテライトマーカーに特異的な塩基配列にそれぞれ
由来する２種類のＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲを行
い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の識別結果よりイネ品種を特定する。 - 【請求項２】 ＡＴまたはＴＡの繰り返しの数が５回〜
５００回であることを特徴とするマイクロサテライトマ
ーカーを用いる請求項１のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項３】 ＡＴまたはＴＡの繰り返しの数が１０回
〜５０回であることを特徴とするマイクロサテライトマ
ーカーを用いる請求項１のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項４】 マイクロサテライトマーカーが配列表の
配列番号１〜７に記載の配列を有するものであることを
特徴とする請求項１のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項５】 異なるマイクロサテライトマーカーを少
なくとも２種類以上用いることを特徴とする、請求項１
〜４の何れか一項に記載のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項６】 ＡＴまたはＴＡが５回以上繰り返された
配列を有するマイクロサテライトを含むマイクロサテラ
イトマーカーの他に、ＡＴまたはＴＡでない２塩基又は
３塩基からなる配列が５回以上繰り返された配列を有す
るマイクロサテライトを含むマイクロサテライトマーカ
ーを少なくとも１種用いることを特徴とする請求項１〜
５の何れか一項に記載のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項７】 ＡＴまたはＴＡでない２塩基又は３塩基
からなる配列が５回以上繰り返された配列を有するマイ
クロサテライトを含むマイクロサテライトマーカーが配
列番号８の配列を有するものであることを特徴とする請
求項６記載のイネ品種を特定する方法。 - 【請求項８】 ＡＴまたはＴＡでない２塩基又は３塩基
からなる配列が５回以上繰り返された配列を有するマイ
クロサテライトを含むマイクロサテライトマーカーが配
列番号９から配列番号３１のいずれか一つの配列を有す
るものであることを特徴とする請求項６記載のイネ品種
を特定する方法。 - 【請求項９】 配列番号１から配列番号７のいずれか一
つの配列を有するマイクロサテライトマーカー。 - 【請求項１０】 配列番号８から配列番号３１のいずれ
か一つの配列を有するマイクロサテライトマーカー。 - 【請求項１１】 以下の工程よりなる、マイクロサテラ
イトを含むマイクロサテライトマーカーを用いて、植物
種子の純度を検定する方法。 ａ） 植物種子または実生のより抽出したＤＮＡを鋳型
とし、該マイクロサテライトマーカーの該マイクロサテ
ライトの両側に位置するマイクロサテライトマーカーに
特異的な塩基配列にそれぞれ由来する２種類のＤＮＡプ
ライマーを用いてＰＣＲを行い、 ｂ） ａ）で増幅されたＤＮＡ断片の長さを測定し、そ
の測定結果より増幅されたＤＮＡ断片中の繰り返し配列
を識別し、 ｃ） ｂ）の長さの違いによって植物種子を分類し、ま
た、２種類の異なる長さのＤＮＡ断片が増幅された場合
には植物種子が雑種種子であると判定し、 ｄ） ｃ）の分類および判定結果を基に植物種子の純度
を判定する。 - 【請求項１２】 植物種子がイネであることを特徴とす
る請求項１１に記載の植物種子の純度を検査する方法。 - 【請求項１３】 植物種子が雑種種子であることを特徴
とする請求項１１に記載の植物種子の純度を検査する方
法。 - 【請求項１４】 植物種子がハイブリッドライスである
ことを特徴とする請求項１２に記載の植物種子の純度を
検査する方法。 - 【請求項１５】 ＧＡまたはＡＧの配列が５回以上繰り
返された配列を有するマイクロサテライトを含むマイク
ロサテライトマーカーを用いることを特徴とする請求項
１１に記載の植物種子の純度を検査する方法。 - 【請求項１６】 ＧＴまたはＴＧの配列が５回以上繰り
返された配列を有するマイクロサテライトを含むマイク
ロサテライトマーカーを用いることを特徴とする請求項
１１に記載の植物種子の純度を検査する方法。 - 【請求項１７】 ＣＴまたはＴＣの配列が５回以上繰り
返された配列を有するマイクロサテライトを含むマイク
ロサテライトマーカーを用いることを特徴とする請求項
１１に記載の植物種子の純度を検査する方法。 - 【請求項１８】 ＣＡまたはＡＣの配列が５回以上繰り
返された配列を有するマイクロサテライトを含むマイク
ロサテライトマーカーを用いることを特徴とする請求項
１１に記載の植物種子の純度を検査する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9040226A JPH1057073A (ja) | 1996-06-13 | 1997-02-25 | イネ品種識別用マイクロサテライトマーカーおよび植物種子の純度検査方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15265796 | 1996-06-13 | ||
| JP8-152657 | 1996-06-13 | ||
| JP9040226A JPH1057073A (ja) | 1996-06-13 | 1997-02-25 | イネ品種識別用マイクロサテライトマーカーおよび植物種子の純度検査方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1057073A true JPH1057073A (ja) | 1998-03-03 |
Family
ID=26379667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9040226A Pending JPH1057073A (ja) | 1996-06-13 | 1997-02-25 | イネ品種識別用マイクロサテライトマーカーおよび植物種子の純度検査方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1057073A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077277A3 (en) * | 2001-03-26 | 2003-05-15 | Council Scient Ind Res | Dna markers for assessing seed purity and a method of using dna sequences for assessing seed purity |
| JP2004065251A (ja) * | 2002-06-13 | 2004-03-04 | Mitsubishi Kagaku Bio-Clinical Laboratories Inc | マイクロサテライトマーカーを用いるイネ品種の識別法 |
| JP2006141368A (ja) * | 2004-11-25 | 2006-06-08 | Univ Of Tokyo | モルッカネムの個体識別用プライマーセットおよびそれを用いた個体識別方法 |
| CN111304353A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-19 | 江西省农业科学院水稻研究所 | 利用异交亲和基因连锁标记选育水稻东野型三系保持系的方法 |
-
1997
- 1997-02-25 JP JP9040226A patent/JPH1057073A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002077277A3 (en) * | 2001-03-26 | 2003-05-15 | Council Scient Ind Res | Dna markers for assessing seed purity and a method of using dna sequences for assessing seed purity |
| JP2004065251A (ja) * | 2002-06-13 | 2004-03-04 | Mitsubishi Kagaku Bio-Clinical Laboratories Inc | マイクロサテライトマーカーを用いるイネ品種の識別法 |
| JP2006141368A (ja) * | 2004-11-25 | 2006-06-08 | Univ Of Tokyo | モルッカネムの個体識別用プライマーセットおよびそれを用いた個体識別方法 |
| CN111304353A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-19 | 江西省农业科学院水稻研究所 | 利用异交亲和基因连锁标记选育水稻东野型三系保持系的方法 |
| CN111304353B (zh) * | 2020-03-26 | 2023-05-16 | 江西省农业科学院水稻研究所 | 利用异交亲和基因连锁标记选育水稻东野型三系保持系的方法 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060418 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060822 |