JPH10510844A

JPH10510844A - テキサフィリンを用いるｒｎａの光切断

Info

Publication number: JPH10510844A
Application number: JP9501740A
Authority: JP
Inventors: ダレンマグダ，; ジョナサンエル．セスラー，
Original assignee: University of Texas System
Current assignee: University of Texas System
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-05-31
Publication date: 1998-10-20
Also published as: KR100355251B1; AU6159096A; WO1996040253A3; JP2001316270A; NO975312D0; ATE177951T1; NO975312L; ES2130826T3; DK0810878T3; EP0810878A2; NZ310739A; EP0810878B1; GR3030257T3; KR19980701473A; CA2218477C; AU694051B2; WO1996040253A2; DE69601865D1; DE69601865T2; US5714328A

Abstract

(57)【要約】光感受性テキサフィリンを用いる、リボ核酸のポリマーの光切断方法を提供する。好適な使用方法は、リボ核酸のポリマーの部位特異的切断であり、そして好適な光感受性テキサフィリンは、結合特異性を有する誘導体化されたテキサフィリン、特に、部位指向性分子、好ましくはオリゴヌクレオチドに共有結合したテキサフィリンである。光切断の可能な基質は、メッセンジャー、リボソーマル、トランスファー、核内低分子、細胞質内低分子のリボ核酸、そしてリボ核酸の共同因子を包含する。従って、これらのリボ核酸を不活化し、良性もしくは悪性ガン細胞、または所望でない細胞もしくは組織の処置への多方面からのアプローチを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】テキサフィリンを用いるRNAの光切断発明の背景光力学的療法（PDT）は、光増感色素を使用する処置技術である。光増感色素は、処置部位またはその近傍に局在し、そして酸素の存在下で照射した場合に、穏和な前駆体（例えば、(O₂(³Σ_g-))）から一重項酸素（O₂(¹Δ_g)）のような細胞傷害性物質を生じるように作用する。スーパーオキシド、ヒドロペルオキシル、またはヒドロキシルラジカルのような他の反応種が含まれ得る。使用量において、光または薬品のいずれもが、標的疾患に対し何ら独立的な活性を有さない。 PDTの効果は３つの主要因に基づく：i)PDTで使用される光感受性色素は、周辺組織に対峙する処置部位に局在化する能力を有さなければならない。ii)活性酸素の高反応性および短存続性は、活性酸素が非常に短い期間を有し、そしてそれが生成される細胞から漏出しそうにないことを意味する；従って、細胞傷害性は光を吸収する組織のまさにその領域（おそらく細胞レベルまで）に限定される。 iii)レーザーおよび光ファイバーの進歩により、強い光線を体の多くの部分へ正確に送達することが可能となる。光力学的療法の総説については、米国特許第5,252,720号（本明細書中で参考として援用される）；Sindelarら、(1991)；Grossweiner(1991)；HendersonおよびDougherty(1992)；ならびにMoanおよびBerg(1992)を参照のこと。近年において、かなりの労力が新規な光増感剤の合成および研究に費やされている（総説が BrownおよびTruscott(1993)中に見出される）。より効果的な光化学的治療剤の開発は、生組織が比較的透過性で（すなわち、700〜1000nm）、高収量の三重項量子を有し、そして毒性が最少であるスペクトル領域において吸収する化合物の合成が必要である。本発明のテキサフィリン分子は、組織透過性である730〜770 nmの範囲で強く吸収し；反磁性錯体は、¹O₂の生成物に増感性を高い量子収量で与える；完全な合成物である本発明のテキサフィリンは、望ましい特性を組み込むように調節され得る。 DNAの光力学的切断は公知である。Praseuthら(1986)は、酸素の存在下での合成水溶性ポルフィリンと可視光とによるプラスミドDNAの切断を報告した。Fiel( 1989)もまた、鉄ポルフィリンによる光増感性のDNA鎖切断および酸化還元性のDN A鎖切断を報告した。別の例によれば、Kobayashiら（1993）は、酸素の存在下でのフェオホルビド（pheophorbide）ナトリウム（クロロフィルの誘導体）と可視光とによるプラスミドDNAの切断を報告した。ポルフィリン-オリゴヌクレオチド誘導体を使用して、DNA基質の配列特異的修飾、それに続く熱ピペリジンを用いる切断を行うことが報告された（Vlassovら、1991；Le Doanら、1990）。これらのポルフィリン結合体の吸収波長は700nm未満であり、より長い波長の光と同じように組織を有効に透過しない範囲である。WO96/09315は、テキサフィリンを用いたDNAの光切断に関している。乾癬を処置するために紫外光と薬品８-メトキシソラレンとを使用することが詳細に確立されている。Leeら（1988）の報告は、ソラレン誘導化オリゴデオキシリボヌクレオシドメチルホスホネートと一本鎖DNAとの相互作用に関する。ピリミジンとソラレンとの間で架橋された光付加物が形成するようである。この処置は、ガン細胞の発生をもたらし得る。さらに、約365nmの短波長の照射は体を透過せず、それゆえ体表面においてのみ有効である。ソラレンに基づいた処置は、患者が可視光に曝されるかまたは反応が皮膚表面上で継続する前に、薬品を体から取り除くことが可能でなければならない。 DNAの配列特異的切断はまた、金属錯体で誘導化されたオリゴヌクレオチドを使用する暗反応として報告されている。いくつかの例としては、オリゴヌクレオチド-EDTA-鉄錯体（StrobelおよびDervan、1989；Linら、1989；DreyerおよびDe rvan、1985）、オリゴヌクレオチド-金属結合付加物を有する三価カチオンポルフィリン（GrovesおよびFarrell，1989）、オリゴヌクレオチド-フェナントロリン-銅錯体（ChenおよびSigman，1988）、オリゴヌクレオチド-マンガン-ポルフィリン（Meunierら、1993）、およびオリゴヌクレオチドに結合した鉄-ポルフィリン（Le Doanら、1986，1987）が挙げられる。現在の光感受性分子は良好な腫瘍選択性を欠き、そして光増感に必須である光励起をもたらすために波長の短い光を必要とする。本発明はRNAの光切断、特に、生物学的系におけるRNAの光誘導性光切断の活性を有する光感受性分子に関する。PDTおよびRNAの光切断に有効な光感受性分子は以下の特性を有する；容易に入手可能、低い内毒性、長波長吸収、一重項酸素生成に有効な光増感剤、良好な水溶性、アテロームまたは腫瘍組織のような脂肪親和性組織での選択的な取り込み、エンベロープウィルスに対する高親和性、使用後の迅速な分解および／または排出、化学的に純粋および安定、合成的改変への容易な適用、生理学的温度およびpHでの有効性、特定の生物学的基質に対する特異性、生物学的系への簡便な投与、ならびに感受性の高い部位指向性キャリア分子への結合。本発明はこれらの問題に関し、そして本明細書中でRNAを切断する能力を有する光増感剤を提供する。従って、光力学的療法に対して全く新しい範囲の標的を提供する。これらの光増感剤は、腫瘍局在性、約800nmまでのより長波長範囲における吸収、ならびに、無毒性、皮膚感受性の欠失、および純粋な形態での容易な生成を示す。略語の一覧表 DCC ：ジシクロヘキシルカルボジイミド DMF ：ジメチルホルムアミド EDTA ：エチレンジアミン四酢酸 NHS ： N-ヒドロキシスクシンイミド NM ：ナノメートル RNA ：リボ核酸 TEA ：トリエチルアミン THF ：テトラヒドロフラン Txp(txph)(Tx) ：テキサフィリン発明の要旨本発明は、リボ核酸のポリマーの光誘導性光切断方法を提供する。本方法は、リボ核酸のポリマーと光感受性テキサフィリンとを接触する工程、およびポリマーを切断するために十分な時間光感受性テキサフィリンを光に曝す工程を含包する。本明細書中で用いられるテキサフィリンは、付加された官能基を有するポルフィリンアナログを拡張した芳香族ペンタデンテートである。この付加基は溶解性または生物学的局在性を増強し得るか、またはオリゴヌクレオチドのような部位指向性分子のカップリング部位を提供し得る。リボ核酸のポリマーは、RNAの溶液もしくは懸濁液であり得るか、またはインビトロ、インビボ、もしくはエクスビボで細胞RNAであり得る。特異的にRNAを光切断する能力は、種々の疾患の処置；レトロウィルスRNA、メッセンジャーRNA、腫瘍形成ｍRNA、リボソームRNA、RNA共同因子、トランスファーRNA、核内低分子 RNA、または細胞質内低分子RNAの破壊に重要な密接な関係を有する。従って、疾患の、癌の、または他の所望でない細胞または組織排除に対する多方面からのアプローチを提供する。所望の光切断の部位は、宿主に有害な産物をコードするRN Aであり得るか、または何らかの形で有害な正常RNAであり得る。本明細書中に記載のRNAの光切断は、光分解的切断である。切断は、加水分解（水分子が結合を破壊するように結合をはさんで添加される）ではないと考えられており、また光切断は、単独の酸化（光の非存在下で酸化反応が結合の破壊を引き起こす）ではないとも考えられている。このRNAの部位特異的光切断の方法は、少なくとも２つの特異性の供給源を包含する。相補的なオリゴヌクレオチドが標的化基質と塩基対を形成するように設計されて第１の特異性の供給源を提供し、そしてインビトロまたはインビボ適用のための第２の特異性の供給源としてレーザー光線が適切に配置される。手動または機械的手段のいずれかによるこのようなレーザー光線の適切な配置は、このオリゴヌクレオチド光切断反応が特定の生物学的位置（例えば、深部腫瘍部位）において効果的である場合に、特に有益である。本明細書のテキサフィリンが、体組織が比較的透過性である波長（700〜900nm）において光を吸収するという事実は特に有益である。この手順は、テキサフィリン結合体が局在しない他の組織の比較的有害性の少ない光に基づく光増感とともに、体内深部での光に基づくオリゴヌクレオチドストラテジーの効果的な実施を可能にする。良性または悪性腫瘍細胞を有する宿主の処置方法は、本発明のさらなる実施態様である。本方法は、宿主に有効量の光感受性テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体を投与する工程（このオリゴヌクレオチドは、良性または悪性腫瘍細胞のRNA分子と相補的な配列を有する）、および腫瘍細胞の近傍で光感受性テキサフィリンに光を照射する工程を包含する。本方法はさらに、テキサフィリンを参照することによって、宿主における光感受性テキサフィリンの局在化部位を決定する工程を包含し得る。本発明のさらなる実施態様は、標的化細胞内RNA光切断のための方法である。本方法は、標的化RNAに相補的な結合親和性を有するオリゴヌクレオチドと結合するテキサフィリンが細胞内へ導入され、それにより標的化RNAの光切断がテキサフィリンによって触媒されることを包含する。メッセンジャーRNAの破壊、そしてそれによる動物における遺伝子発現の阻害の方法は、本発明のさらなる実施態様である、テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体を動物へ投与する工程を包含する。オリゴヌクレオチドはメッセンジャーRNA分子の領域またはメッセンジャーRNAのスプライシング反応に関与する核内低分子RNAに相補的な結合親和性を有する。本発明のさらなる実施態様は、組織特異性を有するテキサフィリンを動物へ投与する工程を包含する、動物の組織特異的メッセンジャーRNAを阻害する方法である。テキサフィリンは標的メッセンジャーRNAと相補的なオリゴヌクレオチドを付加し得る。本発明のさらなる実施態様は、２つ以上の分離したテキサフィリン錯体がオリゴヌクレオチドに３'末端、５'末端、および／または1つ以上の内部残基で結合している、テキサフィリン結合体である。テキサフィリンは、金属非含有であり得るかまたは金属配位され得る。テキサフィリン錯体のそれぞれの金属イオンは同じであり得るかまたは異なり得る。同様に、テキサフィリンそれぞれが異なり得る。２重テキサフィリン錯体-結合体の使用は、金属錯体の協同的な活性により、効率の高いRNAの光切断をもたらす。診断および処置の目的で、一方が反磁性金属種を有するテキサフィリン錯体であり他方が常磁性金属種を有するこのような結合体の投与は、結合、イメージング（imaging）、および光切断（すべてが1つの結合体により達成される）を可能にする。この場合、結合はオリゴヌクレオチドにより達成され、イメージングは常磁性金属イオンの存在によりMRIによって達成され、そして光切断は反磁性金属カチオンを含む光感受性テキサフィリンにより達成される。従って、結合体の生物分布性および細胞貫通性が決定され得る。本発明のさらなる局面は、リボ核酸のポリマーの光切断に用いる薬学的組成物の調製における光感受性テキサフィリンの使用である。好ましい実施態様によれば、リボ核酸のポリマーはメッセンジャーRNAであり、そして光感受性テキサフィリンは本明細書中で提供される構造IまたはIIを有する。好適な実施態様の詳細な説明本発明は、リボ核酸のポリマーの光誘導性切断のための光感受性テキサフィリンの使用を提供する。光感受性テキサフィリンはフリーの塩基性テキサフィリンでもよく、あるいは反磁性金属で金属配位(metallated)されていてもよい。好ましい反磁性金属は、Lu(III)、La（III）、In（III）、Y(III)、Zn(II)、またはC d(II)、そして最も好ましい反磁性金属はLu(III)またはY(III)である。本明細書中で使用される用語「光感受性」は、照射時にテキサフィリンが細胞傷害性酸素生成物の生成をもたらすことを言う。この酸素生成物は、例えば、ヒドロキシルラジカル、スーパーオキシド、またはヒドロペルオキシルラジカルのような一重項酸素である。それゆえ、光感受性分子の近傍で、標的化光誘導性治療効果を達成する。本明細書中で概説したように、鎖の破壊は光化学的に引き起こされた損傷の範囲を測定するのに有用であるが、その一方で、それ自身によるこの損傷（例えばヌクレオチドの修飾）は、核酸の生物学的機能（例えば、RNAの翻訳、ファージの伝染力）を阻害することが知られている。本発明の光誘導性光切断において、光の波長は、約650〜900nmの範囲であり得、好ましくは約700〜800nmであり、そして最も好ましくは約730〜770nmであり得る。リボ核酸のポリマーの光誘導性光切断に用いるためのテキサフィリンまたはテキサフィリン金属錯体は、構造IまたはIIを有し得る。Ｍは、Ｈまたは反磁性金属カチオンである。Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈は、独立して、水素、ハロゲン化物、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロアルキル、ニトロ、ホルミル、アシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、サッカライド、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、部位指向性分子、触媒基、あるいは部位指向性分子または触媒基に結合しているカップルである。Ｒ₆およびＲ₉は、独立して、Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈の群から選択される。ただし、ハロゲン化物はヨウ化物以外であり、そしてハロアルキルはヨードアルキル以外である。Ｒ₅およびＲ₁₀〜Ｒ₁₂は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、あるいはサッカライド、部位指向性分子または触媒基に結合しているカップルである；そしてｎは５以下の整数値である。Ｒ₁₃は約３個までの炭素原子を有し、そして最初に結合した炭素原子の周囲で回転自由性を有するアルキル、アルケニル、オキシアルキル、またはヒドロキシアルキルである。回転自由性は、残りの基をテキサフィリンの平面の外側に位置することを可能にする。従って、好ましいアルケニルは、例えば、ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ₂である。ピロール窒素置換基は最も好ましいメチル基である。本発明のテキサフィリンは、金属フリーであり得るか、または金属との錯体であり得る。上記の構造Iで、ｎは代表的には５以下の整数である。２価または３価の金属カチオンを有する基本的な大員環(macrocycle)に関して、ｎは１または２である；しかし、当業者は、本発明の開示を考慮すると、ｎの値が置換基Ｒ₁ 〜Ｒ₁₂に存在する電荷および共有結合した部位指向性分子に存在する電荷によって変化するということを認識する。当業者により、本発明に記載される錯体が、金属イオンの電荷中和および／または配位飽和を提供する、１つ以上の付加的なリガンドを有することが理解される。このようなリガンドは、例えば、塩化物、硝酸塩、酢酸塩、および水酸化物を含む。本発明のアルキル基置換基として有用なアルカンの代表例は、メタン、エタン、ならびにプロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、およびデカンの直鎖状、分岐状または環状異性体であり、好ましくは、メタン、エタン、およびプロパンである。アルキル基は本発明では、約３０個まで、または約５０個までの炭素原子を有することを意味する。置換されたアルキルの代表例は、本明細書中に記載されるように、２個以上の官能基によって置換されたアルキルを包含する。アルケニル基置換基として有用なアルケンの代表例は、エテン、ならびにプロペン、ブテン、ペンテン、ヘキセン、ヘプテン、オクテン、ノネン、およびデセンの直鎖状、分岐状または環状異性体であり、好ましくは、エテンおよびプロペンである。アルケニル基は本発明では、約３０個まで、または約５０個までの炭素原子を有し、そして約５個までの二重結合を有し、あるいはより好ましくは約３個までの二重結合を有することを意味する。アルキニル基として有用なアルキンの代表例は、エチン、ならびにプロピン、ブチン、ペンチン、ヘキシン、ヘプチン、オクチン、ノニン、そしてデシンの直鎖状、分岐状または環状異性体であり、好ましくは、エチンおよびプロピンである。アルキニル基は、本発明では、約３０個まで、または約５０個までの炭素原子を有し、そして約５個までまたは約３個までの三重重結合を有することを意味する。アリールは、ベンゼン、ナフタレン、フェナントレン、アントラセンなど、即ち、ベンゼンの６炭素環または他の芳香族誘導体の縮合６炭素環のいずれかに特徴的な環構造を有する分子の化合物であり得る。例えば、アリール基はニトロ、カルボキシ、スルホン酸、ヒドロキシ、オキシアルキル、またはハロゲン化物置換基で置換されていないか、または置換されたフェニルまたはナフチルであり得る。この場合、フェニルまたはナフチルでの置換は、大員環を形成する縮合工程の後、合成工程に加えられ得る。ハロゲン化物置換基において、塩化物、臭化物、フッ化物およびヨウ化物は、本発明の実施によれば、ヨウ化物を除いて、Ｒ₆およびＲ₉であることを意味する。Ｒ₆およびＲ₉は塩化物、臭化物、またはフッ化物置換基を有し得る。本発明で用いられるハロアルキルの代表例は、メタン、エタン、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、およびデカンのハロゲン化合物を包含し、メタン、エタン、およびプロパンの塩化物、または臭化物であるハロゲン化物が好ましい。「ヒドロキシアルキル」はアルキルアルコール基を意味する。１〜20、より好ましくは１〜10のヒドロキシルを有するヒドロキシアルキル基が好ましい。「ヒドロキシアルキル」は、グリコールおよびポリグリコール；アルキルのジオール (Ｃ_1-10アルキルのジオールが好ましく、そしてＣ_1-3アルキルのジオールがより好ましい)；ならびに、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびポリブチレングリコール、ならびにエチレン、プロピレン、およびブチレンの組み合わせを含むポリアルキレングリコールを含むことを意味する。オキシアルキルの代表例は、本明細書中で記載されるように、いずれも結合を有するアルキル基を含む。「オキシアルキル」は、一つ以上の官能基を有するポリエーテルを包含すること意味する。置換基中のオキシアルキルの繰り返しの数は、200まで、好ましくは１〜20、より好ましくは１〜７であり得、そして最も好ましくは２〜３である。好ましいオキシアルキルはＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)_xＣＨ₃であり、ここでｘは１〜120、好ましくは１〜10、そして最も好ましくは１〜５である。オキシヒドロキシアルキルは、エーテル結合またはエステル結合を有するアルキル基、置換ヒドロキシル基、ヒドロキシル基、カルボキシル基、置換カルボキシル基などを意味する。チオアルキルの代表例は、エタンのチオール、プロパン、ブタン、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、およびデカンの直鎖状、分岐状または環状異性体のチオールを含み、好ましくはエタンのチオール（エタンチオール、Ｃ₂Ｈ₅ＳＨ）またはプロパンのチオール（プロパンチオールＣ₃Ｈ₇ＳＨ）である。硫酸置換アルキルは、上記のように、１つ以上の硫酸基によって置換されたアルキルを包含し、代表例はジエチル硫酸（（Ｃ₂Ｈ₅）₂ＳＯ₄）である。ホスフェートの代表例は、ホスフェート基またはポリホスフェート基を含む。ホスフェート置換アルキルの代表例は、上記のように、１つ以上のホスフェートまたはポリホスフェート基で置換されたアルキルを含む。ホスフェート置換アルキルの代表例は、上記のように、１つ以上のホスフェート基で置換されたアルキルを含む。カルボキシ基の代表例は、上記にアルキルのカルボン酸、および安息香酸のようなアリールカルボン酸を含む。カルボキシアミドの代表例は、１級カルボキシアミド(CONH₂)、２級(CONHR')カルボキシアミドおよび３級(CONR'R")カルボキシアミドを含む。ここで、R'およびR”のそれぞれは、本明細書に記載の官能基である。有用なアミンの代表例は、本明細書において上記のアルキルの１級、２級または３級アミンを含む。「カルボキシアミドアルキル」は、２級または３級アミド結合などを有するアルキル基を意味する。「カルボキシアルキル」は、ヒドロキシル基、カルボキシル置換エーテルまたはアミド置換エーテル、エステル結合、エーテルから取り出された３級アミド結合などを有するアルキル基を意味する。用語「サッカライド」は、酸化、還元、または置換されたサッカライド；Ｄ-グルコース、Ｄ-マンノース、またはＤ-ガラクトースのようなヘキソース；Ｄ-リボースまたはＤ-アラビノースのようなペントース；Ｄ-リブロースまたはＤ-フルクトースのようなケトース；スクロース、ラクトース、またはマルトースのようなジサッカライド、アセタール、アミン、およびホスフェート化糖のような誘導体；オリゴサッカライド；ならびに開鎖形態の種々の糖などを含む。アミン誘導体化糖の例は、ガラクトサミン、グルコサミン、シアル酸、および1-アミノ-1 -デオキシソルビトールのようなＤ-グルカミン誘導体である。本発明の実施態様において、テキサフィリンは部位指向性分子とさらに結合され、標的化インビボ送達のための結合体を形成する。「部位指向性」は、標的化部位に対する特異性を有することを意味する。「標的部位への特異性」は、テキサフィリン結合体が標的化部位と接触する際に、例えば、イオン強度、温度、ｐＨなどの生理的条件下で、特異的結合が起こることを意味する。相互作用は、相互作用を促進するのに効果的な条件下で安定な錯体を形成するために、特異的な静電作用、疎水作用、熱力学作用、または、結合体の特定の残基と標的の特定な残基との他の相互作用によって起こり得る。部位指向性分子は、処置部位への局在化のための結合特異性を有し得る。本発明で意図する代表的な部位指向性分子は、以下を含むがこれらに限定されるわけではない；ポリデオキシリボヌクレオチド、オリゴデオキシリボヌクレオチド、ポリリボヌクレオチド、オリゴリボヌクレオチド、そおよびこれらのアナログ；生物学的レセプターに親和性を有するペプチドを含むポリアミド；抗体のようなタンパク質；ステロイドおよびステロイド誘導体；エストラジオールまたはヒスタミンのようなホルモン；モルヒネのようなホルモン類似物；ならびにサプフィリンおよびルビリンのようなさらなる大員環である。本発明の好適な実施態様において、本発明は、光感受性テキサフィリン−部位指向性分子結合体を用いるリボ核酸のポリマーの部位特異的光切断を包含する。この部位指向性分子は切断されるRNAの一部と相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドである。実証例５のデータでは、反磁性金属−テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体が、RNAアンチセンス試薬の中で形成され得ることを示す。このアンチセンスストラテジーは、新薬のデザインのための明確かつ合理的な方法を提供する。なぜなら、１つの必要条件、即ちアンチセンスプローブがその標的分子とハイブリダイズすることが存在するからである。ハイブリダイゼーションに必要な条件は、相補的なワトソン−クリックの塩基対形成によることが周知である。何千もの化合物のスクリーニング、およびＸ線結晶構造解析を必要とする当該分野の現存する方法と異なり、アンチセンス技術に必要な情報は、標的の配列である。テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体での天然RNAの処置は、付加オリゴヌクレオチドを介した、結合体への相補的なRNA配列の結合をもたらす。反磁性金属−テキサフィリン錯体は、次いでこの特異的部位の近傍でRNAを切断する。２個のテキサフィリン分子は、結合したオリゴヌクレオチドに付加され得、光切断活性を増強する。また、オリゴヌクレオチドに付加されたより多くのテキサフィリンは、アンチセンス剤に、腫瘍での選択的局在化のような、テキサフィリンの薬力学的および生物学的分布特性をさらに獲得させる。テキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体は、抗ウィルスおよび抗菌療法、ならびにガン（例えば、ガン形成型メッセンジャーRNAと相補的なオリゴヌクレオチド）および特定のタンパク質の過剰発現による炎症反応に対する即時的適用を有する。アンチセンス技術は、米国特許第5,194,428号,同第5,110,802号,および同第5,216,141号で論議されており、これら全てが本明細書中で参考として援用される。オリゴヌクレオチドは、従来の薬品におけるいくつかの利点、特に標的部位への高い特異性、およびデザインの容易性を有す。オリゴヌクレオチドは、インビボでの安定性を促進するために骨格の塩基、糖、鎖の末端、またはホスフェート基で誘導体化され得る。ＣｐＧ配列は分解を最小化するように誘導体化され得る；誘導体化は、アルキル化であり得、好ましくはメチル化である。ホスフェート基の修飾は、ホスフェート結合がヌクレアーゼ活性に感受性であるため、本発明の１つの実施態様において好ましい。好ましい誘導体はメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロチオエート、およびホスホルアミデートである。誘導体はまた、改変ホスホロチオエートおよび未修飾結合、改変メチルホスホネートおよび未修飾結合、または改変ホスホロチオエートおよびメチルホスホネート結合を含み得る。さらに、ホスフェート結合は、アミド結合のような非ホスフェート結合で完全に置換され得る。オリゴヌクレオチド鎖の末端の付加物はまた、エキソヌクレアーゼ耐性を提供する。５’末端または３’末端は、ホスホルアミデート結合、３'-３'結合でオリゴヌクレオチドに結合された逆位ヌクレオチド、アミノアクリジン残基、またはポリL-リジンで誘導体化され得るか、または「キャップ」され得る。糖の修飾は、リボヌクレオチドのリボースの部分の酸素に結合される、ハロ、アルキル、アルケニル、またはアルコキシのような基を含み得る。好適な実施態様において、この基はリボースの２’酸素に結合される。特に、フルオロのようなハロゲン部分が用いられ得る。アルコキシ基はメトキシ、エトキシ、またはプロポキシであり得る。アルケニル基は好ましくはアリルである。アルキル基は好ましくはメチル基でありそしてメチル基はリボースの２’酸素に結合される。他のアルキル基はエチルまたはプロピルであり得る。Ｏ-メチル化誘導体化は、リボヌクレオチドが分解するのを防ぐために用いられる。用語「ヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌクレオチド」は、本明細書中および添付の請求の範囲において使用されるように、天然に存在する、および合成のヌクレオチド、ポリヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチド、ならびにこれらのアナログおよび誘導体（メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロチオエート、およびホスホルアミデートなど）ということが理解される。用語「テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体」は、オリゴヌクレオチドが、テキサフィリンが結合体の内部残基であることを可能にする、５’結合、３ ’結合、または両方のタイプの結合でテキサフィリンに結合していることを意味する。用語はまた、オリゴヌクレオチドの内部塩基に結合しているテキサフィリンを言い得る。オリゴヌクレオチドまたは他の部位指向性分子は、テキサフィリンに直接結合され得るか、または種々の長さのリンカーまたはカップルを介してテキサフィリンに結合され得る。例えば、触媒反応の間、テキサフィリン金属錯体-オリゴヌクレオチド結合体のテキサフィリンの部分は、標的化核酸基質とのオリゴヌクレオチドの結合の際に、RNA基質の近傍に位置される。「サプフィリン−オリゴヌクレオチド結合体」は、テキサフィリン分子がサプフィリン分子で置換されることを除き、上記同様にテキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体をいう。テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体を細胞内に送達する代表的な方法は、標的化配列に特異的なオリゴヌクレオチドを送達するための糖結合体の使用である。両末端を保護され、そして糖結合体にジスルフィド結合を介して結合しているオリゴヌクレオチドは、対応する遊離オリゴヌクレオチドよりも標的部位への送達に有意に効果的である。ポリ-Ｌ-リジンは３つの成分によって置換され得る；認識シグナルとしての糖、治療的オリゴヌクレオチドエレメント、中和および溶解剤としてのグルコン酸である。このタイプの中性で高い水溶性のグリコシル化されたポリマーは、ポリマーに結合される糖の性質により、細胞内に薬品を送達するに有効なキャリアーである。有用なステロイドの代表例は、以下の５つの分類のステロイドホルモンのいずれかを含む；プロゲステロンのようなプロゲスタゲン、コルチゾルのようなグルココルチコイド、アルドステロンのような電解質コルチコイド、テストステロンまたはアンドロステンジオンのようなアンドロゲン、エストロンまたはエストラジオールのようなエストロゲンである。用語「生物学的レセプターに親和性を有するペプチド」は、例えば、生物学的レセプターとのペプチドの接触において、イオン強度、温度、ｐＨなどの適切な条件下で、特異的結合が起こることを意味する。相互作用は、相互作用を促進するに効果的な条件下で安定な錯体を形成するために、特異な静電作用、疎水作用、熱力学的作用、またはペプチドの特定のアミノ酸または糖分解残基とレセプターの特定のアミノ酸または糖分解残基との他の相互作用により生じ得る。相互作用は、相互作用に関与するペプチドおよびレセプターのいずれかまたは両方の三次元配置および作用または活性を変化させ得る。生物学的レセプターに親和性を有するペプチドは、天然に存在および合成のペプチド（エンドルフィン、エンケファリン、上皮成長因子などの成長因子、ポリ-Ｌ-リジン、ホルモン、蛋白質のペプチド領域など）を含み得る。特異な例として、例えば、インシュリン、リボヌクレアーゼ、またはβ-エンドルフィンを含む。テキサフィリン錯体またはテキサフィリン錯体一部位指向性結合体に付加される「触媒基」は一般的な酸、ブレンステッド酸、一般的な塩基、ブレンステッド塩基、求核基または反応に対する活性化の障壁を低くするか、基質の基底状態エネルギーを増加する他のいずれかの手段として作用し得る化学的官能基を意味する。意図される例示的な触媒基は、以下を包含するが、これらに限定されない；イミダゾール；グアニジン；Ｄ−グルコサミン、Ｄ−マンノサミン、Ｄ−ガラクトサミン、Ｄ−グルカミンなどのような置換サッカライド；Ｌ-ヒスチジンおよびＬ-アルギニンなどのアミノ酸；ヒスタミンのようなアミノ酸の誘導体；ポリ- Ｌ-リジン、(LysAla)_n、(LysLeuAla)_n(nは１〜30、好ましくは１〜10、またはさらに好ましくは２〜７など)のようなアミノ酸ポリマー；それらの誘導体；およびテキサフィリン金属錯体である。用語テキサフィリンまたはテキサフィリン結合体に「付加された」は、触媒基がテキサフィリンに直接結合されるか、または種々の長さのリンカーもしくはカップルを介して結合体に結合していることを意味する。カップルはリンカー、すなわちテキサフィリンの大員環から所定の距離の別の分子と共有結合するよう設計された反応基の反応によって形成される共有結合の生成物と記載され得る。代表的なリンカーまたはカップルは、アミド、アミン、ジスルフィド、チオエーテル、エーテル、エステル、またはホスフェート共有結合である。もっとも好ましい実施態様において、結合体と付加基は、炭素−炭素、炭素−窒素、炭素−硫黄、または炭素−酸素結合を介してテキサフィリンに共有結合され、より好ましくは、炭素−酸素または炭素−窒素結合である。好ましい官能基化は：Ｒ₆およびＲ₉が水素以外のときは、Ｒ₅およびＲ₁₀は水素またはメチル基であり；Ｒ₅およびＲ₁₀が水素以外のときは、Ｒ₆およびＲ₉が水素、ヒドロキシル、またはヨウ化物以外のハロゲン化物である。他の好ましい官能化は、Ｒ₆およびＲ₉が水素である場合は、Ｒ₅、Ｒ₁₀、Ｒ₁₁、およびＲ₁₂は低級アルキルまたは低級ヒドロキシアルキルである。低級アルキルは好ましくはメチルまたはエチル、より好ましくはメチルである。低級ヒドロキシアルキルは好ましくは１個から６個の炭素および１個から４個のヒドロキシ基を有し、より好ましくは３−ヒドロキシプロピルである。本発明の好ましい実施態様において、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇、およびＲ₈の少なくとも１つは、部位指向性分子または部位指向性分子に結合しているカップルである。より好ましい実施態様において、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇、およびＲ₈の少なくとも１つは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルである。本発明の好ましいテキサフィリンによれば、Ｒ₁は(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨ、Ｒ₂およびＲ₃はＣＨ₂ＣＨ₃、Ｒ₄はＣＨ₃、Ｒ₈が部位指向性分子または部位指向性分子に結合しているカップル、およびＲ₇はＨである。別の好ましいテキサフィリンによれば、置換基Ｒ₁は(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨ；Ｒ₂ およびＲ₃はＣＨ₂ＣＨ₃；Ｒ₄はＣＨ₃；Ｒ₇はＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃、Ｈ、またはＯＣＨ₃；および、Ｒ₈は部位指向性分子または部位指向性分子に結合しているカップルである。オリゴヌクレオチドに結合しているカップルは、さらにＯ(ＣＨ₂)_nＣＯ-オリゴヌクレオチドとして記載され得、ここでｎは１〜７、そして好ましくは１〜３である。さらに本発明の好ましい実施態様において、Ｒ₁は(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨ、Ｒ₂およびＲ₃はＣＨ₂ＣＨ₃、Ｒ₄はＣＨ₃、ならびにＲ₇およびＲ₈はＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₂ ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃である。本発明の好ましいテキサフィリンの化合物によれば、Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇、およびＲ₈は表１のテキサフィリンのＡ１〜Ａ２２、Ｒ₅、Ｒ₆、およびＲ₉〜Ｒ₁₂はＨ、そしてＭは本明細書中で上記した定義どおりである。しかし、上記のテキサフィリンは、本発明での使用に好ましい化合物であるが、本発明はこれらに限定されず、そしてすべての光感受性テキサフィリンは本発明の実施に有用であり得る。テキサフィリン金属錯体は、米国特許第5,252,720号に記載されるように、例えば、肝臓、腎臓、腫瘍やアテロームのような脂質に富む領域で局在化する固有の生物局在化特異性を有する。重要なことは、水酸化テキサフィリンは、親油性領域への局在化に最適な脂質−水分配係数を有するが、十分に水溶性であり、容易な取り扱いを可能にする。「水溶性」は、水性の液体で約１ｍＭかそれ以上に可溶であることを意味する。「親油性領域への局在化」は、周囲の非脂質に富む組織または物質よりも、脂質に富む組織または物質に高い親和性を有することを意味する。そして、懸濁液中のウィルスの場合、この用語は、ウィルスの膜外皮の親和性を有することを意味する。「脂質に富む」とは、より多くのトリグリセリド、コレステロール、脂肪酸などを有することを意味する。本明細書中で使用される「テキサフィリンを参照することにより」テキサフィリンの局在化部位を決定するということは、テキサフィリンが常磁性の金属を含んでいれば、磁気共鳴イメージング、金属がガンマ放出性であればガンマ線の検出のような局在化により、または、単色性のＸ線光子源もしくは蛍光分光法の使用によって、その位置を見出し得ることを意味する。放射免疫診断法に用いるガンマ放出性金属は、本明細書中で参考として援用される米国特許第5,252,720号に記載される。好ましいガンマ放出性金属は、¹¹¹In(III)である。テキサフィリンの非金属化形態が、特に蛍光性がテキサフィリンの検出に好ましい手段である場合、用いられ得る。金属を含まないテキサフィリン化合物および反磁性金属化テキサフィリン化合物、それらを製造する方法およびそれらを使用する方法は、米国特許第4,935,49 8号;同第5,162,509号;同第5,252,720号;同第5,256,399号;同第5,272,142号;同第 5,292,414号;同第5,369,101号;同第5,432,171号;同第5,439,570号;同第5,451,57 6号;同第5,457,183号;および同第5,475,104号;ならびに係属中の米国出願第08/0 98,514号、同第08/196,964号、同第08/227,370号、および同第08/207,845号に記載されている。各特許および各出願は本明細書中で参考として援用される。サプフィリン化合物が、米国特許第第5,041,078号;同第5,159,065号;同第5,120,411 号;同第5,302,714号;および同第5,457,195号に開示される。各特許は、本明細書中で参考として援用される。有機合成の当業者は、本開示および参考として援用される特許、出願、および出版物の開示を参照して、様々な置換基を有する光感受性テキサフィリンを生成するために、上記の基本的な合成化学を拡大し、そして改善し得る。例えば、ポリエーテル結合されたポリヒドロキシル化基、サッカライドがアセタール様グリコシド結合を介して結合しているサッカライド置換基、オリゴサッカライド、またはポリサッカライドは、テキサフィリンに同様に結合し得る。カルボキシル基がアリールエーテルまたは官能基化されたアルキル置換基を介してテキサフィリンコアに結合する２重にカルボキシル化されたテキサフィリンは、様々のエステル化生成物に変換され得る。ここで、エステル結合は、さらにヒドロキシル基を含む置換基を結合するのに役立つ。ポリヒドロキシル化されたテキサフィリン誘導体は、第２級アミド結合の使用を介して合成され得る。サッカライド部分はアミド結合を介して結合し得る。分岐したポリヒドロキシル（ポリオール）サブユニットを含むポリヒドロキシル化テキサフィリン誘導体は、アリールエーテルまたはエステル結合を介してテキサフィリンコアに結合し得る。カルボキシル化テキサフィリンのチオニルクロライドまたはp-ニトロフェノールアセテートでの処理は、目的のモノクローナル抗体または他の生体分子への結合に適する活性化されたアシル種を生成する。標準的なインサイチュカップリング(例えば、1,1'-カルボニルジイミダゾール)法は、結合体を生じさせるために用いられ得る。下記の構造は、本発明のＲ基の位置と、大員環の周囲の原子位置についてのＩＵＰＡＣ命名法との相関を示す。大員環のＢ（ベンゼン環）部分のＲ₆位およびＲ₉位での置換基は、分子の３位および６位でオルト−フェニレンジアミンへの結合によって大員環に組み込まれる。大員環のＴ（トリピラン(tripyrrane)）部分のＲ₅位およびＲ₁₀位での置換基は、置換されたオルト−フェニレンジアミンとの縮合前の合成行程で、トリピランの５位のカルボキシル基の適切な官能基化によって組み込まれる。非芳香族テキサフィリンは、構造Ａを有するトリピランアルデヒドまたはトリピランケトン；および構造Ｂを有する置換オルト−フェニレンジアミンの縮合によって都合よく得られる。置換基Ｒ₁〜Ｒ₁₂は、本明細書中に記載される通りである。好適な合成方法では、ブレンステッド塩基は、トリエチルアミンまたはN,N,N',N'-テトラメチル-1 ,8-ジアミノナフタレン（「プロトンスポンジ」）であり、酸化剤は空気飽和の有機溶媒、酸素、酸化白金、O-クロラニル、または2,3-ジクロロ-5,6-ジシアノ- 1,4-ベンゾキノンである。還流の工程での攪拌または加熱は、少なくとも２４時間の還流時に混合物を攪拌し、加熱することを包含し得る。有機溶媒は、メタノール、またはエタノールとクロロホルム、またはメタノールとベンゼン、またはメタノールとジメチルホルムアミドを含む。 PCT公報WO94/29316は、テキサフィリンオリゴヌクレオチド結合体、特に、置換基Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇、またはＲ₈が、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合される結合であるテキサフィリン分子の合成に関して、本明細書中で参考として援用される。アミド、エーテル、およびチオエーテルは、本目的のために用いられ得る結合の代表例である。５’末端、３’末端、または内部の糖もしくは塩基残基でアミンにより官能基化されたオリゴヌクレオチドは、テキサフィリン錯体の活性化カルボン酸エステル誘導体で合成後に修飾され得る。あるいは、１つ以上のチオホスフェートまたはチオール基を含むオリゴヌクレオチドアナログは、イオウ原子でテキサフィリン錯体のハロゲン化アルキル誘導体を用いて選択的にアルキル化され得る。得られるオリゴヌクレオチド錯体の結合体は、標的核酸と結合テキサフィリンとの最適な触媒相互反応を提供するように設計され得る。オリゴヌクレオチドは、おそらく少なくとも約８ヌクレオチドの相補的な核酸に結合するのに十分な長さであり得る。 DNA、RNA、およびそれらのアナログの合成の一般的な総説に関しては以下を参照のこと：Oligonucleotides and Analogues,F.Eckstein編,1991,IRL Press,New York;Oligonucleotide Synthesis,M.J.Gait編,1984,IRL Press Oxford,England ; Caraccioloら(1989);Bioconjugate Chemistry,Goodchild,J.(1990);またはホスホネート合成に関しては、Matteucci,MD.ら、Nucleic Acids Res.14:5399(198 6)（これらの参考文献は、本明細書中で参考として援用される）。一般的には、従来の5'-3'結合を含むオリゴヌクレオチド合成のために、３つの日常的に用いられる固相に基づいたアプローチがある。これらは、ホスホルアミデート法、ホスホネート法、およびトリエステル法である。オリゴマーDNAを合成するために商業的に用いられている現在の方法の概要は以下の通りである：約１００残基までの長さのオリゴマーは、ホスホルアミデート化学を用いる市販の合成機、例えばApplied Biosystems Inc.(ABI)model 392 で調製される。DNAは、ホスホルアミデートと呼ばれる高い反応性のリン(III)試薬の連続的な付加を介して３’から５’の方向に合成される。最初の３’残基は、制御された有孔性シリカ固体支持体に共有結合している。その支持体は、ポリマーの操作を大いに容易にする。各残基が成長ポリマー鎖に結合された後、リン (III)は、ヨウ素溶液による短い処理によってより安定な状態であるリン(V)に酸化される。未反応残基は無水酢酸でキャップされ、５’保護基は弱酸で除去され、そして、所望のDNAポリマーが合成されるまで、さらに残基を付加するためにこのサイクルが繰り返され得る。十分な長さのポリマーが、塩基にさらすことによって、残っている保護基の除去とともに固体支持体から放出される。一般的なプロトコルでは、飽和したエタノール性アンモニアが用いられる。ホスホネートに基づく合成は、酸に対して安定なホスホネートエステル結合を得るのに適切な活性化剤の存在下、フリーの水酸基を有する固相誘導されたヌクレオチド鎖を用いて結合されるべき位置でホスホネート部分を含む適切に保護されたヌクレオチドの反応によって行われる。従って、ホスフェートまたはチオホスフェートへの酸化は、オリゴヌクレオチドの合成時、またはオリゴヌクレオチドの合成が完了した後の任意の時点で行われ得る。ホスホネートはまた、四塩化炭素の存在下で第１級アミンまたは第２級アミンとの反応によって、ホスホルアミデート誘導体に変換され得る。トリエステル合成において、保護されたホスホジエステルヌクレオチドは、カップリング剤の存在下、固体支持体に誘導体化された成長ヌクレオチド鎖のフリーの水酸基と縮合する。この反応は、未保護のオリゴヌクレオチドを形成するためにオキシム溶液で処置され得る保護されたホスフェート結合をもたらす。一般的にこれらの３つのアプローチを示すと、次に来るヌクレオチドは、「活性化」ホスファイト／ホスフェート基を有すると見なされる。一般的に用いられる固相合成技術を用いることに加えて、オリゴヌクレオチドはまた、ジエステル合成のような溶液相法を用いて合成され得る。その方法は実行可能であるが、一般的に、任意の実質的な長さのオリゴヌクレオチドにはほとんど効果がない。インビボでの加水分解に抵抗性の好ましいオリゴヌクレオチドは、各塩基にホスホロチオエート置換を含む(J.Org.Chem.,55:4693-4699,(1990)およびAgrawal, (1990))。オリゴデオキシヌクレオチドまたはそれらのホスホロチオエートアナログは、Applied Biosystem 380B DNA 合成機(Applied Biosystems,Inc.,Foster City,CA)を用いて合成され得る。上記に示した使用法で、テキサフィリンは薬学的調製物として提供される。テキサフィリンの薬学的調製物は、単独または薬学的に受容可能なキャリアとともに、単回用量または複数用量のいずれかで投与され得る。適切な薬学的キャリアは、不活性な固体の希釈剤または添加剤、無菌の水性溶液、および様々の有機溶媒を含む。本発明のテキサフィリンと薬学的に受容可能なキャリアとの組合わせで形成された薬学的組成物は、次いで、様々な投薬形態で容易に投与され得る。投与は、静脈内、腹腔内、非経口的、筋肉内、皮下、経口、または局所であり得、好ましくは局所または静脈内投与、そしてさらに好ましくは静脈内投与である。ゴマ油もしくはピーナツ油、水性のプロピレングリコール中の、または無菌の水溶液中のテキサフィリンの溶液が用いられ得る。このような、水溶液は必要であれば、適切に緩衝化され、そして液体希釈剤はまず、十分な食塩水またはグルコースで等張にされる。これらの特定の水溶液は、特に、静脈内、筋肉内、皮下、および腹腔内投与に適している。これに関して、使用され得る無菌の水性媒体は、本明細書の開示に照らして当業者には公知である。局所用クリーム、乳液、溶液などが、身体の表面領域への適用に意図される。局所的適用はまた、イオン浸透療法によってなされ得る。アンチセンスの適用には、オリゴヌクレオチドの安定性を保つための賦形剤および保存剤が選択される。オリゴヌクレオチド骨格の高度に負に帯電したホスフェート基やイオウ基は、上皮または他の表面細胞を刺激し得る。対イオンは、刺激を防止する処方目的のため用いられ得る。薬学的形態は、注射可能な無菌溶液または分散剤の即時の調製のための無菌の水溶液または散剤、および無菌の粉剤を含む。すべての場合において、形態は無菌でなければならず、シリンジでの使用に容易な程度に流体でなければならない。製造および保存条件下で安定でなければならず、そして、細菌および真菌などの微生物による汚染作用に対して保護されなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液体のポリエチレングリコールなど）を含む溶媒または分散媒体、それらの適切な混合物、および植物油であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用、分散剤の場合、必要とされる粒子サイズを維持すること、および、界面活性剤の使用によって保持され得る。微生物の活動防止には、様々な抗生物質や抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより得られ得る。多くの場合、例えば、マンニトールまたはデキストロースの糖あるいは、塩化ナトリウムの等張剤を含むことが望ましい。より好ましい等張剤は、約２〜８％の濃度のマンニトール溶液であり、最も好ましくは約５％の濃度である。注射可能な組成物の吸収は、組成物において、吸収を遅らせる薬物、たとえばアルミニウムモノステアレートおよびゼラチンの使用によって長くされ得る。無菌溶液は、要求される量で、適切な溶媒中で、要求される上記の様々な他の成分とともに活性化合物を取り込むことによって調製され、その後濾過滅菌される。一般的に、分散剤は、様々な無菌の活性成分を、基礎的な分散媒体および上記の成分からの必要な他の成分を含む無菌ビヒクル内に取り込むことで調製される。無菌の注射可能な溶液の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術である。これらは、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を、その前もって濾過滅菌された溶液から生産する。本明細書中で使用する、「薬学的に受容可能なキャリア」とは、任意のそしてすべての溶媒、分散媒体、コーティング剤、透過性増加剤、抗生物質および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを含む。薬学的活性物質のための、このような媒体および薬剤の使用は当該分野で周知である。いずれかの従来の媒体または薬剤が活性成分と適合しないことを除いて、治療組成物でのその使用は意図される。補足的な活性成分はまた、組成物内に組み込まれ得る。テキサフィリンオリゴヌクレオチド結合体のRNA光切断能力に対する信頼できるアッセイは、実施例５で示す、相補的なリボ核酸の光切断に関するアッセイである。結合体による光切断は、結合体が意図された能力および活性を有することを実証する。１μＭのLuB2T2でRNAを処理すると、光の存在下と同様に、光がないときでも加水分解生成物が生じる(本明細書中で参考として援用されるPCT公報WO/94/2931 6を参照)。従って、RNAとのこの反応は、光誘導によるものではなく、そして本発明の光切断と異なる生成物を生成する。光酸化による損傷の生成物は、グアニンの９位での反応を含む。この反応は、一般に、脱プリン化、鎖破壊、および両方がホスフェート化末端を含む２個のより小さな断片の形成を導く。一方、加水分解は、２つの生じる断片の一方ではフリーのリボース、他方ではホスフェート末端をもたらす。下記の実施例は、本発明の好ましい実施態様を示すために包含する。当業者には、添付の実施例において開示される技術は、本発明の実施において十分に機能するために、本発明者らによって発見された技術を表わしており、従ってその実施のための好適な様式を構成していると見なされ得ると理解されるべきである。しかし、当業者は、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本発明の開示に照らし、多くの変化が開示された特定の実施態様においてなされ得、そしてさらに同様のまたは類似の結果が得られ得ることを理解する。実施例１ルテチウムテキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体の合成本実施例は、相補的なRNAの部位指向性光切断に有用な、ルテチウムテキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体の合成を提供する（スキームＡを参照のこと）。 4-アミノ-1-[1-(エチルオキシ)アセチル-2-オキシ]-3-ニトロベンゼン１_B(n=1 )。炭酸カリウム（14.0g、101mmol）および4-アミノ-3-ニトロフェノール１_A（1 0.0g、64.9mmol）を150mLの乾燥アセトニトリル中に懸濁した。エチル-2-ヨードアセテート（10mL、84.5mmol）（またはエチルヨードブチレートを使用し得、この場合、n=3である）をシリンジにより添加し、そして懸濁液を室温にて約21時間撹拌した。クロロホルム（約375mL）を添加し、懸濁液を分液漏斗に移し、そこでこれを水（２×約100mL）で洗浄した。水洗浄液を次いでCHCl₃（約100mL ）で洗浄し、そして合わせたCHCl₃抽出液を水（約100mL）で洗浄した。溶媒をロータリーエバポレーターにより除去し、そして残渣をCHCl₃（約500mL）で再び溶解し、そしてヘキサン（1.5L）中に沈澱させた。２日間放置した後、粗フリット（coarse fritted）漏斗を用いて沈澱を濾過し、そして真空中で乾燥して14.67g の化合物１_B(n=1)（94.1％）を得た。TLC：Rf＝0.43、CHCl₃。 4-アミノ-1-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-3-ニトロベンゼン１_c(n=1) 。4-アミノ-1-[1-(エチルオキシ)アセチル-2-オキシ]-3-ニトロベンゼン１_B(n=1 )、（10.00g、37.3mmol）をテトラヒドロフラン（100mL）中に溶解し、水酸化ナトリウム水溶液（1M溶液、50mL）を添加し、そして溶液を室温で約21時間撹拌した。テトラヒドロフランをロータリーエバポレーターにより除去し、そして水（ 100mL）を添加した。溶液をCHCl₃（約200mL）で洗浄し、次いで、塩酸（1M溶液、50mL）の添加により中和した。数分間放置した後、形成した沈澱を濾過し、水で洗浄し、そして真空中で乾燥して8.913gの化合物１_c(n=1)（99.5％）を得た。 TLC：Rf＝0.65、10％メタノール／CHCl₃。 16-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-9,24-ビス(3-ヒドロキシプロピル)-4 ,5-ジエチル-10,23-ジメチル-13,20,25,26,27-ペンタアザペンタ-シクロ-[20.2. 1.1^3,6.1^8,11.0^14,19]ヘプタコサ-3,5,8,10,12,14(19),15,17,20,22,24-ウンデカエン１_E(n=1)。4-アミノ-1-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-3-ニトロベンゼン１_c(n=1)（1.800g、8.49mmol）を、1Lフラスコ中のメタノール（100mL）に溶解した。カーボン上のパラジウム（10％、180mg）を添加し、フラスコ内の雰囲気を、大気圧の水素で置換した。灰色の沈澱が、約３時間後に形成され、そして上清は透明であった。メタノールを真空下で除去し、酸素に曝さないように注意しながら、化合物を真空下で一晩乾燥した。イソプロピルアルコール（500m L）およびHCl（12M、400μL）を添加し、そして懸濁液を約15分間撹拌した。 2,5-ビス[(3-ヒドロキシプロピル-5-ホルミル-4-メチルピロール-2-イル)メチル ]-3,4-ジエチルピロール１_D(n=1)（4.084g、8.49mmol）を添加し、そして反応物を室温で、アルゴン雰囲気下で３時間撹拌した。塩酸（12M、400μL）を再び添加し、そして反応物を再度さらに3.5時間撹拌した。得られた赤い溶液を、セライトを通して濾過し、そして濾過ケークをイソプロピルアルコールを用いて濾液が無色になるまで洗浄した。ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を約50mLの容積まで減らし、そして溶液を、急速撹拌中のEt₂O（約700mL）に沈澱させた。濾過して、真空下での乾燥の後、化合物１_E（n=1）を、赤色の固体（5.550g、98 .4％）として得た。TLC：R_f＝0.69、20％メタノール／CHCl₃（条痕、プレート上でI₂により緑色に変化する）。 16-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-9,24-ビス(3-ヒドロキシプロピル)-4 ,5-ジエチル-10,23-ジメチル-13,20,25,26,27-ペンタアザペンタシクロ-[20.2.1 .1^3,6.1^8,11.0^14,19]ヘプタコサ-1,3,5,7,9,11(27),12,14(19),15,17,20,22(25) ,23-トリデカエン１_Fのルテチウム錯体(M=Lu、n=1)。ほぼ等モル量の大員環のプロトン化体、16-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-9,24-ビス(3-ヒドロキシプロピル)-4,5-ジエチル-10,23-ジメチル-13,20,25,26,27-ペンタアザペンタシクロ-[20.2.1.1^3,6.1^8,11.0^14,19]ヘプタコサ-3,5,8,10,12,14(19),15,17,20,22 ,24-ウンデカエン塩酸塩１_E(n=1)、および酢酸ルテチウム５水和物を、メタノール中のトリエチルアミンと合わせ、そして加熱して、空気中で5.5時間還流した。反応物を室温まで冷却し、そして-20℃にて一晩保存した。溶媒をロータリーエバポレーターにより除去し、アセトンを添加し、そして懸濁液をロータリーエバポレーターにより２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、そして沈澱を真空下で短時間乾燥させ、そしてメタノール（約250mL）および水（25mL）中で溶液を形成させた。HCl（1M）を用いてpHを4.0に調整し、HClで洗浄したゼオライトLZY54（約5g）を添加して、懸濁液をロータリーエバポレーターにより約６時間撹拌した。Amberlite^TMIRA-900イオン交換樹脂（NaF処理、約5g）を添加し、そして懸濁液をさらに１時間撹拌した。懸濁液を濾過し、樹脂をメタノール（約100mL）で洗浄し、そしてHCl（1M）を用いて濾液をpH 4.0に調整した。ロータリーエバポレーターにより溶媒を除去し、エタノール（無水）を用いて微量の水を除去した。真空下で乾燥した後、化合物をメタノール（25mL）に溶解し、そして急速撹拌中のEt₂O(300mL)中に沈澱させた。濾過および真空下で乾燥した後に、化合物１_F(M =Luおよびn=1)を沈澱物として得た。分析サンプルを、50mgの1_F(n=1)を酢酸で洗浄したゼオライトとともにメタノール（25mL）中に溶解し、次いで約１時間、酢酸で洗浄したAmberlite^TMで処理することにより調製した。メタノールを最少容量に減少させた後、溶液を急速撹拌中のEt₂O（70mL）中に沈澱させ、濾過し、そして真空下で乾燥させた。オリゴデオキシヌクレオチド-アミン1_Gとルテチウム-テキサフィリン結合体１_F (ｎ＝１)との合成後の修飾。16-[1-(ヒドロキシ)アセチル-2-オキシ]-9,24-ビス(3-ヒドロキシプロピル)-4,5-ジエチル-10,23-ジメチル-13,20,25,26,27-ペンタアザペンタシクロ-[20.2.1.1^3,61^8,110^14,19]ヘプタコサ-1,3,5,7,9,11(27),1 2,14(19),15,17,20,22(25),23-トリデカエンのルテチウム錯体１_F(Ｍ=Lu,n=1)（約30μmol）、およびN-ヒドロキシスクシンイミド（43μmol）を、共に真空下で一晩乾燥させた。化合物をジメチルホルムアミド（無水、500μL）中に溶解させ、そしてジシクロヘキシルカルボジイミド（10mg、48μmol）を添加した。得られた溶液を、遮光しながら、８時間、アルゴン下で撹拌した。ここで、1.6mLのE ppendorfチューブにおいて350μLの容量の0.4M重炭酸ナトリウム緩衝液中のオリゴヌクレオチド１_G（87nmol）の溶液に110μLのアリコートを添加した。短時間撹拌した後に、遮光しながら23時間溶液を放置した。0.45μmナイロンの微量遠心用濾過（microfilterfuge）チューブを通して懸濁液を濾過し、そしてEppendo rfチューブを150μLの滅菌水で洗浄した。合わせた濾液を２つのEppendorfチューブに分け、そしてグリコーゲン（20mg／mL、２μL）および酢酸ナトリウム（3 M、pH 5.4、30μL）をそれぞれのチューブに加えた。ボルテックスした後に、エタノール（無水、1mL）を各チューブに添加してDNAを沈澱させた。遠心分離の後にエタノールを静かに除き、DNAをさらに1mLのエタノールのアリコートで洗浄し、そして風乾した。ペレットを50％ホルムアミドゲル積載緩衝液（20μL）に溶解し、90℃で約２分間変性し、そして20％変性ポリアクリルアミドゲルに載せた。結合体１_H(M=Lu,n=1)に対応するバンドをゲルから切り出し、つぶし、そして1 ×TBE緩衝液（約7mL）中に１〜２日間浸した。ナイロンフィルター（0.4 5μM）を通して懸濁液を濾過し、Sep-pak^TM逆相カートリッジを用いて脱塩した。40％アセトニトリルを用いてカートリッジから結合体を溶出して、一晩凍結乾燥して、そして1mM HEPES緩衝液、pH 7.0（500μL）に溶解した。UV／vis分光器を用いて溶液濃度を決定した。実施例２テキサフィリンまたはアミン、チオール、もしくはヒドロキシ結合オリゴヌクレオチドとのテキサフィリン金属錯体の合成アミド、エーテル、およびチオエーテルは、テキサフィリンまたはテキサフィリン金属錯体に対してオリゴヌクレオチドのような部位指向性分子を結合するために用いられ得る代表的な結合である。PCT公報WO 94/29316は、これらのタイプの結合およびカップルを有するテキサフィリンオリゴヌクレオチド結合体の合成を提供するものとして本明細書中で参考として援用される。アミン官能基性、あるいは５’末端、３’末端、または糖もしくは塩基の残基で内在的に官能基化されたオリゴヌクレオチドを有する部位指向性分子は、合成後、テキサフィリンまたはテキサフィリン金属錯体の活性化されたカルボキシルエステル誘導体で修飾される。FeBr₃のようなルイス酸の存在下、臭化物誘導体化されたテキサフィリンは、オリゴヌクレオチドの水酸基と反応して、テキサフィリンリンカーとオリゴヌクレオチドとの間でエーテル結合を形成する。あるいは、一つまたはそれ以上のチオホスフェート基またはチオール基を含むオリゴヌクレオチドアナログは、アルキルハロゲン化物誘導体によりテキサフィリン錯体のイオウ原子で選択的にアルキル化される。オリゴヌクレオチド錯体結合体は、標的化RNAホスホジエステル骨格とテキサフィリンとの最適な触媒的相互作用を提供するために設計される。本発明では、オリゴヌクレオチドを、実質的に相補的な配列を含む相補的なリボヌクレオチド、またはオリゴリボヌクレオチド、またはポリリボヌクレオチドを含む化合物を選択的に結合するために用いる。本明細書中で使用される、実質的に相補的な配列は、ヌクレオチドが一般的に相補的なヌクレオチドと塩基対を形成し、そして、塩基対のミスマッチがほとんどない配列である。オリゴヌクレオチドは、おそらく少なくとも９ヌクレオチドの相補的核酸と結合するのに十分な大きさであり得る。本発明者らは、本発明のテキサフィリンオリゴヌクレオチド結合体を、たとえば、アンチセンス能力において、化学療法剤であるとして意図する。実施例３オリゴヌクレオチドの３'末端に結合されるテキサフィリンを有するテキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体の合成 12塩基の２つのオリゴデオキシリボヌクレオチドの各々を、アルキルアミン基を３'末端ホスフェートで含有させるために合成した（Keystone Labs、Menlo Pa rk、California）。オリゴヌクレオチドをHPLCで精製し、そして使用前に、LiCl を用いて沈澱させた。Lu(III)テキサフィリン錯体（M=Luおよびn=1の１_F）のようなカルボン酸官能基化金属テキサフィリン錯体と、カルボジイミドおよびN-ヒドロキシスクシンイミドとの反応により、対応する活性化エステルが得られた。これを、選択したオリゴデオキシヌクレオチドアミンの溶液に直接添加した。得られたテキサフィリン金属錯体-オリゴヌクレオチド結合体を、電気泳動により精製した。これらの３'結合体は、本発明の特定の実施態様において特に重要であり得る。なぜなら、大きな基（例えば、本発明のテキサフィリン錯体）のオリゴヌクレオチドの３'末端への結合は、オリゴヌクレオチドを細胞エクソヌクレアーゼに対して耐性にさせるからである。同様に、本発明の１つの実施態様は、その５'末端がテキサフィリンに結合しているオリゴヌクレオチドの３'末端へ、特定のリガンドを付加することである。３'リガンドの機能は、結合体の細胞内への取り込みを補助することである。このようなリガンドは、当該分野で公知であり、コレステロールおよびポリリジンが挙げられるが、これらに限定されない。テキサフィリンまたはテキサフィリン金属錯体-オリゴヌクレオチド結合体を用いるRNAの光切断における本発明のさらなる実施態様は、２つの結合体のセットの使用である。結合体の一方は、オリゴマーの５'末端に結合したテキサフィリンを有し、もう一方は、オリゴマーの３'末端に結合したテキサフィリンを有し、そして、これらのオリゴマーは、同一のRNA基質に相補的である。両方のテキサフィリンが標的の光切断部位の近傍に位置するように、一方は、他方のちょうど上流にある。２つの触媒基を分ける距離は、長さが変化したオリゴマー５' 結合体のネストされた（nested）セットの調製、およびRNAテンプレートに対する２つの結合体の同時の結合により生じる光切断効率の比較により変化し得る。実施例４テキサフィリン-オリゴヌクレオチドの２重結合体の合成 12塩基を有するオリゴデオキシリボヌクレオチドを、アルキルアミン基を３' 末端および５'末端の両方で含有させるために合成した（Keystone Labs、Menlo Park、California）。このオリゴマーを、過剰のカルボン酸官能基化金属テキサフィリン錯体と反応させ、実施例３の手順に従い、12マーの３'と５'末端の両方にテキサフィリン-金属錯体を有する２重結合体を得た。同一のオリゴヌクレオチドに結合した２つのテキサフィリン（末端各々に１つ）の使用は、金属錯体の協調した活性により、効率が増大して、RNAの光切断を達成するはずである。この実施態様において、テキサフィリンが金属化される場合、両方のテキサフィリン錯体が、同一の金属、好ましくは、反磁性の金属カチオン、そしてより好ましくは、ルテチウム（III）を含有することが好ましい。さらに、２重結合体は、この１つの分子により達成され得る機能の多様性を提供する。例えば、オリゴヌクレオチドは結合特異性を提供し、一方のテキサフィリン金属錯体（例えば、金属イオンとしてGd(III)を有する）は、イメージ化（i maging）を提供し得、他方はRNA光切断を提供する。このような２重結合体は、２つの機能、イメージ化および光切断を１つの分子により果たし得る。実施例５ LuTxp-オリゴヌクレオチド結合体による RNAの部位特異的光依存性切断本実施例は、４つの異なるルテチウムテキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体によるRNAの部位特異的光依存性光切断を提供する。テキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体による対応するDNA基質の光切断は、対照研究として役立ち、そして、RNAおよびDNAの基質を用いてグアニン残基で光切断が起こるということを実証する。反応混合物は、ルテチウムテキサフィリンオリゴヌクレオチド結合体（スキームBおよびCに示すように）、４×緩衝液（５μL）、キャリアDNA(１μL)、および最終容量を20μLとするための水から作製された溶液に、約100,000cpmの５'-³ ² Ｐ-標識RNA36マーまたはDNA36マーの基質を添加することにより調製した。最終の結合体濃度は50nMであった。４×緩衝液は、400mM NaCl、200mM HEPES、pH7.5 、100μM EDTAである。すべてのサンプルは、室温で、150mW/cm²の出力密度を用いて732nmに調節された色素レーザー(Coherent,Palo Alto,CA)を用いて15分間照射した。照射後、RNAまたはDNAは標準法によりエタノールで沈殿させた。放射性標識されたDNAを含むサンプルを、10％ピペリジン水溶液(50μL)中に溶解し、90℃で30分間加熱した。放射性標識されたRNAを含むサンプルを、1:1:8のアニリン/酢酸/水(50μL)中に溶解し、58℃で30分加熱した。水(500μL)をすべてのサンプルに添加し、次いでスピードバック（Speedvac）で乾燥した。すべてのサンプルを、50％ホルムアミド積載緩衝液中に再懸濁し、60℃で5分間変性し、20％変性ポリアクリルアミドゲル上で電気泳動して分析した。オートラジオグラフは、適切な相補的な15マーLuTx結合を含むレーンでのみ実質的な光切断を示した。非相補的オリゴヌクレオチドと結合したテキサフィリンは、基質の光切断を行わなかった。スキームBおよびスキームCで、矢印は、光切断が観察された部位を示す。グアニン特異的配列決定レーンでジメチルスルフェートによって生じたバンドと同時に移動するLu-Tx-媒介光切断バンドを、対照とする。光切断の強度は、LuTx錯体の予想される位置に隣接する部位でより高かった。これらの測定は、RNAまたはDNAの相補的配列へのLuTx結合体のハイブリダイゼーションがグアニン残基での部位特異的な光修飾を生じ、そしてその結果、塩基性の条件下の研究で部位特異的光切断を行う、というモデルと一致する。 2'-O-メチルRNAおよびDNAオリゴヌクレオチド結合体の比較において、より大きな程度の光切断がゲルの低位で生じているのが見出された。これは、アンチセンス結合体と標的との間に形成された２本鎖の主要溝に沿い、そして横切る部位での光修飾に対応する。光切断パターンにおけるこれらの差異は、2'-O-メチルR NA-とDNA-由来の２本鎖間の配座の差異と明らかに関連し、2'-O-メチルRNA結合体は全体的な光切断の効率をさらに高める。光切断の効率は、DNA基質について70％〜90％の範囲であった。RNA基質の光切断のパターンは、収率は低いが、そのDNAアナログの光切断パターンと平行していた。このことは、より穏やかなアニリンの処理によって光誘導された損傷のほとんど有効でない暴露を反映するようである。（RNAは、アルカリ条件下でのより高度な不安定性により、ピペリジン処理に供されなかった。）基質(配列番号４)とテキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体標識の基質(配列番号２)との組み合わせは、相補的な結合体を含む他のレーンと比較して、相対的にほとんど光切断が見られなかった。このことは、このRNA配列に対するDNA-LuTx結合体の結合がより弱いものであることを示し得、そして、さらに本適用で用いた2'-O-メチルRNA結合体が優れていることを明らかにする。本発明者らは、DNAポリマーの光切断活性を有するテキサフィリンに気がついていたが(WO 96/09315)、RNAもまた光切断されることは明らかでなかった。2'部位は、RNAにおいては水酸基によって保護されており、そのポリマーの配座はDNA と異なり、そして、グアニンのC９位からの電子的影響がDNAと異なる。本実施例で実証された光切断は、オリゴヌクレオチドに結合したテキサフィリンによるものだとしても、本発明者らは、本明細書中で用いられた濃度よりも高い濃度ではあるが、非結合テキサフィリンもまた光切断に効果的であることを予想する。実施例６真核生物細胞内におけるテキサフィリン- オリゴヌクレオチド結合体の蛍光局在性本発明者らは、テキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体が、蛍光局在性により観測されるように、真核細胞により取り込まれることを示した。 HL-60細胞（ヒト骨髄性白血病細胞株）をY(III)金属イオンまたはLu(III)金属イオンのいずれかで錯体化したテキサフィリン-オリゴヌクレオチド結合体（オリゴヌクレオチドは15塩基を有するホスホロチオエートである）の溶液（最終濃度15μmol）でインキュベートした。細胞を最少10分〜約60分までの間インキュベートし、その後細胞を洗浄した。蛍光を、共焦点のアルゴンレーザー（488nm で励起する）で測定した。テキサフィリンにより生じた蛍光を可視化するために、700nm未満の波長を除くためのカットオフフィルターを用いた。得られた蛍光像は、蛍光が集中する明らかな局所的な「ホットスポット」を有する、散乱した細胞質の蛍光を示した。本明細書中で開示し、そして請求の範囲に記載するすべての組成物および方法は、本開示に照らし、過度な実験を行うことなく、製造されそして実行され得る。本発明の組成物および方法は、好ましい実施態様の見地から記載されているが、改変が、本発明の概念、精神、および範囲から逸脱することなく、組成物、方法に対して、そして本明細書中に記述される方法の工程または一連の工程において、適応され得ることは、当業者に明らかである。さらに詳細には、同様のまたは類似した結果が得られる場合、化学的および生理学的にともに関連する特定の薬剤は本明細書中に記載される薬剤に置換され得ることが明らかである。当業者に明らかなすべてのこれらの類似の置換および修飾は、添付した請求の範囲により定義されるように、本発明の精神、範囲、および概念の範囲に入ると考えられる。以下の参考文献は、本明細書で引用するために、適切な部分で本明細書中で参考として援用される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者マグダ，ダレンアメリカ合衆国カリフォルニア 95014, クパーティノ，ユニバーシティウェイ 10234 (72)発明者セスラー，ジョナサンエル. アメリカ合衆国テキサス 78731，オースティン，クレストウェイドライブ 5005

Claims

【特許請求の範囲】１．リボ核酸のポリマーの光誘導性光切断の方法であって、該方法が：該リボ核酸のポリマーと光感受性テキサフィリンとを接触させる工程；および該ポリマーを光切断するに十分な時間、該光感受性テキサフィリンを光に曝す工程、を包含する、方法。２．前記光感受性テキサフィリンが以下の構造ＩまたはIIを有する、請求項1に記載の方法：ここで、ＭがＨまたは反磁性金属カチオンであり；Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈が、独立して、水素、ハロゲン化物、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロアルキル、ニトロ、ホルミル、アシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、サッカライド、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、部位指向性分子、触媒基、または部位指向性分子もしくは触媒基に結合しているカップルであり；Ｒ₆およびＲ₉が、Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈からなる群より独立して選択され、ただし、ハロゲン化物はヨウ化物以外であり、そしてハロアルキルはヨードアルキル以外であり；Ｒ₅およびＲ₁₀〜Ｒ₁₂が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、またはサッカライド、部位指向性分子、もしくは触媒基に結合しているカップルであり；Ｒ₁₃が約３個までの炭素原子を有し、そして最初に結合した炭素原子の周囲で回転自由性を有するアルキル、アルケニル、オキシアルキル、またはヒドロキシアルキルであり；そして、ｎが５以下の整数値である。３．前記部位指向性分子が、オリゴヌクレオチド、抗体、ホルモン、生物学的レセプターに親和性を有するペプチド、またはサプフィリン分子である、請求項２に記載の方法。４．Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇、およびＲ₈の少なくとも１つが、部位指向性分子、または部位指向性分子に結合しているカップルである、請求項２に記載の方法。５．Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇およびＲ₈の少なくとも１つが、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルである、請求項２に記載の方法。６．Ｒ₁が(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨであり、Ｒ₂およびＲ₃がＣＨ₂ＣＨ₃であり、Ｒ₄がＣＨ₃であり、Ｒ₈が部位指向性分子または部位指向性分子に結合しているカップルであり、そしてＲ₇がＨである、請求項２に記載の方法。７．Ｒ₁が(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨ；Ｒ₂およびＲ₃がＣＨ₂ＣＨ₃；Ｒ₄がＣＨ₃；Ｒ₇がＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃であり、ＨまたはＯＣＨ₃；およびＲ₈が部位指向性分子または部位指向性分子に結合しているカップルである、請求項２に記載の方法。８．前記部位指向性分子がオリゴヌクレオチドである、請求項７に記載の方法。９．Ｒ₁が(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨであり、Ｒ₂およびＲ₃がＣＨ₂ＣＨ₃であり、Ｒ₄がＣＨ₃であり、そしてＲ₇およびＲ₈がＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃である、請求項２に記載の方法。１０．Ｒ₁〜Ｒ₄，Ｒ₇およびＲ₈が表１に示されるテキサフィリンA1〜A22である、請求項２に記載の方法。１１．Ｍが反磁性金属カチオンであり、そして該反磁性金属カチオンがLu(III) 、La(III)、In(III)、Y(III)、Zn(II)、またはCd(II)である、請求項２に記載の方法。１２．Ｍが反磁性金属カチオンであり、そして該反磁性金属カチオンがLu(III) である、請求項２に記載の方法。１３．前記光が約700〜800ナノメートルの範囲の波長を有する、請求項１に記載の方法。１４．前記リボ核酸のポリマーが処置の標的にされる細胞のメッセンジャーリボ核酸であり、そして該光感受性テキサフィリンが該メッセンジャーリボ核酸と相補的な配列を有するオリゴヌクレオチドに結合している、請求項１に記載の方法。１５．良性または悪性の腫瘍細胞を有する宿主の処置方法であって：該宿主に有効な量の光感受性テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体を投与する工程、ここで、オリゴヌクレオチドは良性または悪性の腫瘍細胞のRNA分子と相補的な配列を有する；および、腫瘍細胞の近傍で該光感受性テキサフィリンに光照射する工程を包含する、方法。１６．前記テキサフィリンを参照することによって前記宿主内の前記光感受性テキサフィリンの局在化部位を決定する工程をさらに包含する、請求項１５に記載の方法。１７．前記宿主に、光感受性テキサフィリン反磁性金属錯体を投与する工程をさらに包含する、請求項１５に記載の方法。１８．前記光感受性テキサフィリン−オリゴヌクレオチド結合体が以下の構造ＩまたはIIを有する、請求項１５に記載の方法：ここで、ＭがＨまたは反磁性金属カチオンであり；Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈が、独立して、水素、ハロゲン化物、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロアルキル、ニトロ、ホルミル、アシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、サッカライド、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；Ｒ₆およびＲ₉が、Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈からなる群より独立して選択され、ただし、ハロゲン化物はヨウ化物以外であり、そしてハロアルキルはヨードアルキル以外であり；Ｒ₅およびＲ₁₀〜Ｒ₁₂が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；Ｒ₁₃が約３個までの炭素原子を有し、そして最初に結合した炭素原子の周囲で回転自由性を有するアルキル、アルケニル、オキシアルキル、またはヒドロキシアルキルであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇およびＲ₈の少なくとも１つがオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；そしてｎが５以下の整数値である。１９．Ｒ₁が(ＣＨ₂)₂ＣＨ₂ＯＨ；Ｒ₂およびＲ₃がＣＨ₂ＣＨ₃；Ｒ₄がＣＨ₃；Ｒ₇ がＯ(ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ)₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₃、ＨまたはＯＣＨ₃；そしてＲ₈がオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルである、請求項１８に記載の方法。２０．Ｍが反磁性金属カチオンであり、そして該反磁性金属カチオンがLu(III) 、La(III)、In(III)、Y(III)、Zn(II)、またはCd(II)である、請求項１９に記載の方法。２１．リボ核酸のポリマーを光切断する工程で使用するための薬学的組成物の調製における光感受性テキサフィリンの使用。２２．前記リボ核酸のポリマーがメッセンジャーRNAである、請求項２１に記載の使用。２３．前記光感受性テキサフィリンが以下の構造ＩまたはIIを有する、請求項２２に記載の使用：ここで、ＭがＨまたは反磁性金属カチオンであり；Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈が、独立して、水素、ハロゲン化物、ヒドロキシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ハロアルキル、ニトロ、ホルミル、アシル、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、サッカライド、カルボキシ、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、オリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；Ｒ₆およびＲ₉が、Ｒ₁〜Ｒ₄、Ｒ₇およびＲ₈からなる群より独立して選択され、ただし、ハロゲン化物はヨウ化物以外であり、そしてハロアルキルはヨードアルキル以外であり；Ｒ₅およびＲ₁₀〜Ｒ₁₂が、独立して、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、ヒドロキシアルケニル、ヒドロキシアルキニル、カルボキシアルキル、カルボキシアミド、カルボキシアミドアルキル、アミノ、アミノアルキル、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；Ｒ₁₃が約３個までの炭素原子を有し、そして最初に結合した炭素原子の周囲で回転自由性を有する、アルキル、アルケニル、オキシアルキル、またはヒドロキシアルキルであり；Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₇およびＲ₈の少なくとも１つがオリゴヌクレオチド、またはオリゴヌクレオチドに結合しているカップルであり；そしてｎが５以下の整数値である。