JPH10332692A - ヒトｍｃｐ−３の免疫学的測定法 - Google Patents
ヒトｍｃｐ−３の免疫学的測定法Info
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- JPH10332692A JPH10332692A JP14003097A JP14003097A JPH10332692A JP H10332692 A JPH10332692 A JP H10332692A JP 14003097 A JP14003097 A JP 14003097A JP 14003097 A JP14003097 A JP 14003097A JP H10332692 A JPH10332692 A JP H10332692A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】高感度なヒトＭＣＰ−３の免疫学的測定法を提
供する。 【解決手段】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗
ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を組み合わせて用い
ることを特徴とする高感度なヒトＭＣＰ−３の免疫学的
測定法。
供する。 【解決手段】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗
ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を組み合わせて用い
ることを特徴とする高感度なヒトＭＣＰ−３の免疫学的
測定法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒトＭＣＰ−３を測定
するための方法、さらに詳しくは、ヒトＭＣＰ−３に対
するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を用
いた免疫学的測定法、および測定を行うためのキットに
関する。
するための方法、さらに詳しくは、ヒトＭＣＰ−３に対
するポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を用
いた免疫学的測定法、および測定を行うためのキットに
関する。
【０００２】
【従来の技術】ＭＣＰ−３（Monocyte Chemotactic Pro
tein 3）は、いわゆるＣＣケモカインファミリーに分類
される分子量約８５００のポリペプチドであり、単球／
マクロファ−ジ、好酸球、好塩基球に対する強力な遊走
活性を示し、炎症反応のメディエーターとして重要なサ
イトカインであると考えられている（Sun,Y.et al., J.
Exp.Med., 181 p2153(1995) など）。その一次構造は、
ＭＣＰ−１（Monocyte Chemotactic Protein 1）、ＭＣ
Ｐ−２（Monocyte Chemotactic Protein 2）などと相同
性が高く、またそれら以外のCCケモカインファミリーと
も若干のホモロジーを有することが知られている。ＭＣ
Ｐ−３に関する研究は１９９２年に骨肉腫細胞株培養上
清中より単離精製され、一次構造が決定されて以来、種
々の炎症細胞への作用が明らかとなったほか、その受容
体も同定されるなど、急速に進展している。また、アト
ピー性皮膚炎、気管支喘息などのいくつかのアレルギー
疾患においてその病態との関連性が注目されつつある。
tein 3）は、いわゆるＣＣケモカインファミリーに分類
される分子量約８５００のポリペプチドであり、単球／
マクロファ−ジ、好酸球、好塩基球に対する強力な遊走
活性を示し、炎症反応のメディエーターとして重要なサ
イトカインであると考えられている（Sun,Y.et al., J.
Exp.Med., 181 p2153(1995) など）。その一次構造は、
ＭＣＰ−１（Monocyte Chemotactic Protein 1）、ＭＣ
Ｐ−２（Monocyte Chemotactic Protein 2）などと相同
性が高く、またそれら以外のCCケモカインファミリーと
も若干のホモロジーを有することが知られている。ＭＣ
Ｐ−３に関する研究は１９９２年に骨肉腫細胞株培養上
清中より単離精製され、一次構造が決定されて以来、種
々の炎症細胞への作用が明らかとなったほか、その受容
体も同定されるなど、急速に進展している。また、アト
ピー性皮膚炎、気管支喘息などのいくつかのアレルギー
疾患においてその病態との関連性が注目されつつある。
【０００３】現在までに、血清その他の体液中、あるい
は細胞培養上清中におけるＭＣＰ−３を測定／定量する
手段というものは知られていない。
は細胞培養上清中におけるＭＣＰ−３を測定／定量する
手段というものは知られていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
のように各種疾患との関連性が報告されているＭＣＰ−
３を体液中、あるいは細胞培養上清中において精度良く
定量するため、低濃度のヒトＭＣＰ−３を検出可能な免
疫学的測定法を提供することにある。
のように各種疾患との関連性が報告されているＭＣＰ−
３を体液中、あるいは細胞培養上清中において精度良く
定量するため、低濃度のヒトＭＣＰ−３を検出可能な免
疫学的測定法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】上記本発明の課題を解決
するために、本発明は以下の構成を有する。すなわち、
本発明は、抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗ヒ
トＭＣＰ−３ポリクローナル抗体とを組み合わせて用
い、ヒトＭＣＰ−３の最低検出感度が２００ｐｇ／ｍｌ
以下であることを特徴とする高感度なヒトＭＣＰ−３の
免疫学的測定法である。
するために、本発明は以下の構成を有する。すなわち、
本発明は、抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗ヒ
トＭＣＰ−３ポリクローナル抗体とを組み合わせて用
い、ヒトＭＣＰ−３の最低検出感度が２００ｐｇ／ｍｌ
以下であることを特徴とする高感度なヒトＭＣＰ−３の
免疫学的測定法である。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明に用いる抗体は、哺乳動物
をヒトＭＣＰ−３で免疫して得られる抗血清から精製さ
れるポリクローナル抗体、およびヒトＭＣＰ−３で免疫
された哺乳動物から取り出した抗体産生細胞をミエロー
マ細胞と融合し、得られたハイブリドーマから産生され
るモノクローナル抗体のいずれもが利用できる。この様
にして得られる各種抗体の中から、抗原に対する親和性
の高いものを選択することにより、２００ｐｇ／ｍｌと
いった低濃度のＭＣＰ−３を測定することができる。
をヒトＭＣＰ−３で免疫して得られる抗血清から精製さ
れるポリクローナル抗体、およびヒトＭＣＰ−３で免疫
された哺乳動物から取り出した抗体産生細胞をミエロー
マ細胞と融合し、得られたハイブリドーマから産生され
るモノクローナル抗体のいずれもが利用できる。この様
にして得られる各種抗体の中から、抗原に対する親和性
の高いものを選択することにより、２００ｐｇ／ｍｌと
いった低濃度のＭＣＰ−３を測定することができる。
【０００７】本発明で用いるＭＣＰー３に対するポリク
ローナル抗体は、ウサギ、ヤギ、ヒツジなど種々の生物
にＭＣＰー３を感作して得られる抗血清を材料とし、塩
析、イオン交換アフィニティークロマトグラフィーなど
種々の手段で精製することにより得ることができる。な
お、親和性の高い抗体を得るためには、抗原固定化カラ
ムによるアフィニティークロマトグラフィーを用いて抗
原と結合する抗体のみを選択的に精製することが望まし
い。
ローナル抗体は、ウサギ、ヤギ、ヒツジなど種々の生物
にＭＣＰー３を感作して得られる抗血清を材料とし、塩
析、イオン交換アフィニティークロマトグラフィーなど
種々の手段で精製することにより得ることができる。な
お、親和性の高い抗体を得るためには、抗原固定化カラ
ムによるアフィニティークロマトグラフィーを用いて抗
原と結合する抗体のみを選択的に精製することが望まし
い。
【０００８】本発明で用いるＭＣＰー３に対するモノク
ローナル抗体は、定法に従って作製することができる。
すなわち、マウスなど適当な動物をＭＣＰー３で免疫し
た後、脾細胞をミエローマ細胞と融合し、得られたハイ
ブリドーマの中からＭＣＰー３と特異的に結合する抗体
を産生するクローンを酵素免疫測定法等の手法を用いて
選択する。高感度な測定系を確立するためには、この段
階でできるだけ抗原との親和性の高い抗体を選ぶことが
重要である。次に、得られたハイブリドーマを培養し、
その培養上清またはハイブリドーマを適当な動物に接種
して得られる腹水を材料として、モノクローナル抗体を
精製することができる。
ローナル抗体は、定法に従って作製することができる。
すなわち、マウスなど適当な動物をＭＣＰー３で免疫し
た後、脾細胞をミエローマ細胞と融合し、得られたハイ
ブリドーマの中からＭＣＰー３と特異的に結合する抗体
を産生するクローンを酵素免疫測定法等の手法を用いて
選択する。高感度な測定系を確立するためには、この段
階でできるだけ抗原との親和性の高い抗体を選ぶことが
重要である。次に、得られたハイブリドーマを培養し、
その培養上清またはハイブリドーマを適当な動物に接種
して得られる腹水を材料として、モノクローナル抗体を
精製することができる。
【０００９】免疫学的測定法としては、サンドイッチ
法、競合法など種々の測定原理を用いることができる
が、本発明では標識抗ヒトＭＣＰー３抗体、または無標
識抗ヒトＭＣＰー３抗体にさらに結合させる標識二次抗
体を用いたサンドイッチ法が好ましく用いられる。サン
ドイッチ法とは、 ａ）抗原を含む試料と、測定対象抗原と特異的に反応し
得る抗体を固体担体に固定させた固定化抗体と、測定対
象抗原と特異的に反応し得る標識抗体を反応させる過
程、 ｂ）過程ａ）で生じた三者のサンドイッチ複合体より、
未反応の標識抗体を分離する過程、および ｃ）固体担体に固定された複合体を、該複合体の一部に
含まれる標識抗体の標識物質の量を測定することにより
定量する過程 を含むことを特徴とする免疫学測定法である。また、測
定対象に対する無標識抗体を反応させた上で、さらに標
識二次抗体を反応させることにより固相上に４者のサン
ドイッチ複合体を形成させることもできる。
法、競合法など種々の測定原理を用いることができる
が、本発明では標識抗ヒトＭＣＰー３抗体、または無標
識抗ヒトＭＣＰー３抗体にさらに結合させる標識二次抗
体を用いたサンドイッチ法が好ましく用いられる。サン
ドイッチ法とは、 ａ）抗原を含む試料と、測定対象抗原と特異的に反応し
得る抗体を固体担体に固定させた固定化抗体と、測定対
象抗原と特異的に反応し得る標識抗体を反応させる過
程、 ｂ）過程ａ）で生じた三者のサンドイッチ複合体より、
未反応の標識抗体を分離する過程、および ｃ）固体担体に固定された複合体を、該複合体の一部に
含まれる標識抗体の標識物質の量を測定することにより
定量する過程 を含むことを特徴とする免疫学測定法である。また、測
定対象に対する無標識抗体を反応させた上で、さらに標
識二次抗体を反応させることにより固相上に４者のサン
ドイッチ複合体を形成させることもできる。
【００１０】本発明の免疫学的測定法は、いわゆる１ス
テップサンドイッチ法、２ステップサンドイッチ法のど
ちらにも使用できる。
テップサンドイッチ法、２ステップサンドイッチ法のど
ちらにも使用できる。
【００１１】標識抗体の標識物質としては、酵素、ビオ
チンなどのハプテン、ラジオアイソトープなどが用いら
れるが、高感度かつ測定の簡便な系とするためには抗体
を酵素標識する方法が好ましい。標識として使用する酵
素は特に限定されないが、アルカリフォスファターゼ、
パーオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ等が用いられ、
特にアルカリフォスファターゼが好ましく用いられる。
チンなどのハプテン、ラジオアイソトープなどが用いら
れるが、高感度かつ測定の簡便な系とするためには抗体
を酵素標識する方法が好ましい。標識として使用する酵
素は特に限定されないが、アルカリフォスファターゼ、
パーオキシダーゼ、βガラクトシダーゼ等が用いられ、
特にアルカリフォスファターゼが好ましく用いられる。
【００１２】標識酵素としてアルカリフォスファターゼ
を用いる場合の基質としては、ｐーニトロフェニルリン
酸が通常用いられるが、検出感度を増大させる上で、Ｎ
ＡＤＰＨを基質として反応させ、生成したＮＡＤＰＨか
らさらにジアホラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼに
よる二次的な回転反応でINT-VioletからFormazanを生成
させることによりアルカリフォスファターゼによるシグ
ナルを増幅する方法（Stanley, C.J. et al., J. Immun
ol. Method, 83, p89(1985))を用いることがより望まし
い。
を用いる場合の基質としては、ｐーニトロフェニルリン
酸が通常用いられるが、検出感度を増大させる上で、Ｎ
ＡＤＰＨを基質として反応させ、生成したＮＡＤＰＨか
らさらにジアホラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼに
よる二次的な回転反応でINT-VioletからFormazanを生成
させることによりアルカリフォスファターゼによるシグ
ナルを増幅する方法（Stanley, C.J. et al., J. Immun
ol. Method, 83, p89(1985))を用いることがより望まし
い。
【００１３】抗体を固定する固相担体としては、特に限
定されないがプラスチック試験管、マイクロタイタープ
レート、ガラスビーズ、プラスチックビーズ、メンブレ
ン、磁気ビーズ等が用いられ、特に９６穴のマイクロタ
イタープレートが好ましく用いられる。抗体を固相に固
定する方法は、常法に従って行なうことができる。
定されないがプラスチック試験管、マイクロタイタープ
レート、ガラスビーズ、プラスチックビーズ、メンブレ
ン、磁気ビーズ等が用いられ、特に９６穴のマイクロタ
イタープレートが好ましく用いられる。抗体を固相に固
定する方法は、常法に従って行なうことができる。
【００１４】本発明の抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル
抗体および抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体は、ど
ちらを固相化抗体または標識抗体にしても構わないが、
抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体を固相化抗体とし
て、抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を標識抗体と
して用いる方が好ましい。さらに好ましくは、抗ヒトＭ
ＣＰ−３モノクローナル抗体を固相化抗体として、抗ヒ
トＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を検出抗体として用
い、さらに抗ヒトＭＣＰ−３ポリクロ−ナル抗体に対す
る酵素標識抗体を用いて定量を行う方法である。
抗体および抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体は、ど
ちらを固相化抗体または標識抗体にしても構わないが、
抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体を固相化抗体とし
て、抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を標識抗体と
して用いる方が好ましい。さらに好ましくは、抗ヒトＭ
ＣＰ−３モノクローナル抗体を固相化抗体として、抗ヒ
トＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を検出抗体として用
い、さらに抗ヒトＭＣＰ−３ポリクロ−ナル抗体に対す
る酵素標識抗体を用いて定量を行う方法である。
【００１５】本発明のヒトＭＣＰ−３測定キットは、抗
ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗ヒトＭＣＰ−３
ポリクローナル抗体を組み合わせることにより構成され
るが、必要に応じ、９６穴マイクロタイタープレートな
ど適当な担体に固相化した抗体、標識抗体および標準と
なる既知濃度のＭＣＰ−３などを組み合わせてキットを
構成することができる。
ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗ヒトＭＣＰ−３
ポリクローナル抗体を組み合わせることにより構成され
るが、必要に応じ、９６穴マイクロタイタープレートな
ど適当な担体に固相化した抗体、標識抗体および標準と
なる既知濃度のＭＣＰ−３などを組み合わせてキットを
構成することができる。
【００１６】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に
説明する。
説明する。
【００１７】実施例１酵素免疫測定（ＥＬＩＳＡ）系の確立およびその基本性
能評価 ９６穴マイクロプレートの各ウェルに１０μｇ／ｍｌの
マウス抗ＭＣＰ−３モノクローナル抗体（Pepro Tech
製）／炭酸ナトリウム緩衝液（pH9.6 ）溶液１００μｌ
を入れ、４℃で一晩固相化を行った。０．２％ＢＳＡ／
炭酸ナトリウム緩衝液（pH9.6 ）でブロッキング後、各
ウェルをＴＢＳＴ（０．５％Tween20 を含むTris-buffe
rd saline)で洗浄し、ＴＢＳＴで２倍希釈した検体１０
０μｌを入れ、３７℃で９０分反応を行った。各ウェル
を洗浄後、１μｇ／ｍｌのヤギ抗ＭＣＰ−３ポリクロ−
ナル抗体（R&D SYSTEM製）／ＴＢＳＴＢ（０．１％ＢＳ
Ａを含むＴＢＳＴ）溶液１００μｌを入れ３７℃で９０
分反応を行い、さらに各ウェルを洗浄後、アルカリフォ
スファターゼ標識マウス抗ヤギＩｇＧモノクローナル抗
体（SYGMA 製）／ＴＢＳＴ溶液を１００μｌ加え、３７
℃で９０分反応を行った。その後、ＧＩＢＣＯのELISA
Amplification Systemによる検出を添付の説明書に従っ
て行った。すなわち各ウェルを洗浄し、ＮＡＤＰＨ溶液
５０μｌを入れ室温で１５分反応させた後、Diaphorase
／アルコールデヒドロゲナーゼ／INT-Violet／エタノー
ル混合液を５０μｌ入れ２５℃で５分発色反応を行っ
た。最後に５０μｌの０．３Ｍ硫酸を入れて反応を停止
し、４９０ｎｍの吹光度を測定した。
能評価 ９６穴マイクロプレートの各ウェルに１０μｇ／ｍｌの
マウス抗ＭＣＰ−３モノクローナル抗体（Pepro Tech
製）／炭酸ナトリウム緩衝液（pH9.6 ）溶液１００μｌ
を入れ、４℃で一晩固相化を行った。０．２％ＢＳＡ／
炭酸ナトリウム緩衝液（pH9.6 ）でブロッキング後、各
ウェルをＴＢＳＴ（０．５％Tween20 を含むTris-buffe
rd saline)で洗浄し、ＴＢＳＴで２倍希釈した検体１０
０μｌを入れ、３７℃で９０分反応を行った。各ウェル
を洗浄後、１μｇ／ｍｌのヤギ抗ＭＣＰ−３ポリクロ−
ナル抗体（R&D SYSTEM製）／ＴＢＳＴＢ（０．１％ＢＳ
Ａを含むＴＢＳＴ）溶液１００μｌを入れ３７℃で９０
分反応を行い、さらに各ウェルを洗浄後、アルカリフォ
スファターゼ標識マウス抗ヤギＩｇＧモノクローナル抗
体（SYGMA 製）／ＴＢＳＴ溶液を１００μｌ加え、３７
℃で９０分反応を行った。その後、ＧＩＢＣＯのELISA
Amplification Systemによる検出を添付の説明書に従っ
て行った。すなわち各ウェルを洗浄し、ＮＡＤＰＨ溶液
５０μｌを入れ室温で１５分反応させた後、Diaphorase
／アルコールデヒドロゲナーゼ／INT-Violet／エタノー
ル混合液を５０μｌ入れ２５℃で５分発色反応を行っ
た。最後に５０μｌの０．３Ｍ硫酸を入れて反応を停止
し、４９０ｎｍの吹光度を測定した。
【００１８】この方法によって測定を行い、得られた標
準曲線を図１に示す。標準曲線は０−１６００ｐｇ／ｍ
ｌの範囲で良好な直線性を示し、またバックグラウンド
レベル（０ｐｇ／ｍｌでの発色）も０．２２５と低く、
良好な結果であった。
準曲線を図１に示す。標準曲線は０−１６００ｐｇ／ｍ
ｌの範囲で良好な直線性を示し、またバックグラウンド
レベル（０ｐｇ／ｍｌでの発色）も０．２２５と低く、
良好な結果であった。
【００１９】実施例２ＭＣＰ−３の酵素免疫測定系におけるウシ胎児血清（Ｆ
ＣＳ）の影響 実施例１において示すＭＣＰー３の酵素免疫測定法にお
いて、検体をＴＢＳＴで２倍希釈して得られる通常の標
準曲線と、検体をＦＣＳで２倍希釈した場合に得られる
標準曲線を比較することによって本測定系におけるサン
プル中の血清成分の与える影響について検討を行った。
ＣＳ）の影響 実施例１において示すＭＣＰー３の酵素免疫測定法にお
いて、検体をＴＢＳＴで２倍希釈して得られる通常の標
準曲線と、検体をＦＣＳで２倍希釈した場合に得られる
標準曲線を比較することによって本測定系におけるサン
プル中の血清成分の与える影響について検討を行った。
【００２０】本測定系における通常の標準曲線と、検体
にＦＣＳを５０％混入させた場合に得られる標準曲線を
図２に示す。検体中に５０％のＦＣＳが存在することに
よる吸光度の変動は最大で０．０６であり、本測定系に
おける血清成分の影響は小さいものと考えられる。
にＦＣＳを５０％混入させた場合に得られる標準曲線を
図２に示す。検体中に５０％のＦＣＳが存在することに
よる吸光度の変動は最大で０．０６であり、本測定系に
おける血清成分の影響は小さいものと考えられる。
【００２１】実施例３他のケモカインとの交差反応 実施例１において示すＭＣＰー３の酵素免疫測定系にお
いて、ＭＣＰー３と一次構造上の相同性が認められる
ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１
β、ＲＡＮＴＥＳ、ｅｏｔａｘｉｎ（いずれもヒト由
来）の各ケモカインを１．６ｎｇ／ｍｌ、および１００
０ｎｇ／ｍｌの濃度で含む緩衝液をサンプルとして測定
を行なうことにより、本測定系において他のケモカイン
が示す交差反応性について検討を行った。
いて、ＭＣＰー３と一次構造上の相同性が認められる
ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１
β、ＲＡＮＴＥＳ、ｅｏｔａｘｉｎ（いずれもヒト由
来）の各ケモカインを１．６ｎｇ／ｍｌ、および１００
０ｎｇ／ｍｌの濃度で含む緩衝液をサンプルとして測定
を行なうことにより、本測定系において他のケモカイン
が示す交差反応性について検討を行った。
【００２２】本測定系における通常の標準曲線と、上記
の他種ケモカイン（1.6ng/ml、および1000ng/ml)をサン
プルとして測定を行った時に示す吸光度を図３に示す。
いずれのケモカインに関してもその１０００ｎｇ／ｍｌ
濃度における吸光度はＭＣＰ−３の検出限界（０．２ｎ
ｇ／ｍｌ）における吸光度を下回るものであり、たとえ
サンプルに他種のケモカインが高濃度で存在していたと
しても、本測定系によるＭＣＰ−３の定量に与える影響
は小さいものと考えられる。
の他種ケモカイン（1.6ng/ml、および1000ng/ml)をサン
プルとして測定を行った時に示す吸光度を図３に示す。
いずれのケモカインに関してもその１０００ｎｇ／ｍｌ
濃度における吸光度はＭＣＰ−３の検出限界（０．２ｎ
ｇ／ｍｌ）における吸光度を下回るものであり、たとえ
サンプルに他種のケモカインが高濃度で存在していたと
しても、本測定系によるＭＣＰ−３の定量に与える影響
は小さいものと考えられる。
【００２３】
【発明の効果】本発明により、血清中、あるいは細胞倍
養上清中のＭＣＰ−３を簡便に、なおかつ低濃度（２０
０ｐｇ／ｍｌ）から測定することが可能となった。この
方法は、各種疾患とＭＣＰ−３との関連性を解明する上
において有効な手段となる。また、ＭＣＰ−３と特定の
疾患との関連性が明らかになれば、その診断のために有
効な手段となるものと考えられる。
養上清中のＭＣＰ−３を簡便に、なおかつ低濃度（２０
０ｐｇ／ｍｌ）から測定することが可能となった。この
方法は、各種疾患とＭＣＰ−３との関連性を解明する上
において有効な手段となる。また、ＭＣＰ−３と特定の
疾患との関連性が明らかになれば、その診断のために有
効な手段となるものと考えられる。
【図１】 本発明によるＭＣＰ−３の酵素免疫測定法に
おける検量線を示す。
おける検量線を示す。
【図２】 本発明によるＭＣＰ−３の酵素免疫測定法に
おけるウシ胎児血清の影響を示す。
おけるウシ胎児血清の影響を示す。
【図３】 本発明によるＭＣＰ−３の酵素免疫測定法に
おける他種のＣＣケモカインの影響を示す。
おける他種のＣＣケモカインの影響を示す。
Claims (5)
- 【請求項１】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と抗
ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体を組み合わせて用い
ることを特徴とする高感度なヒトＭＣＰ−３の免疫学的
測定法。 - 【請求項２】ヒトＭＣＰ−３の最低検出感度が２００ｐ
ｇ／ｍｌである請求項１記載のヒトＭＣＰ−３の免疫学
的測定法。 - 【請求項３】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体を固
相化抗体として、抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体
を標識抗体として用いることを特徴とする請求項１また
は２記載のヒトＭＣＰ−３の免疫学的測定法。 - 【請求項４】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体を固
相化抗体として、抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体
を検出抗体として用い、さらに抗ヒトＭＣＰ−３ポリク
ロ−ナル抗体に対する酵素標識抗体を用いて定量を行う
ことを特徴とする請求項１〜３記載のヒトＭＣＰ−３の
免疫学的測定法。 - 【請求項５】抗ヒトＭＣＰ−３モノクローナル抗体と、
抗ヒトＭＣＰ−３ポリクローナル抗体とを組み合わせて
用いることを特徴とする高感度免疫学的ヒトＭＣＰ−３
測定キット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14003097A JPH10332692A (ja) | 1997-05-29 | 1997-05-29 | ヒトｍｃｐ−３の免疫学的測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14003097A JPH10332692A (ja) | 1997-05-29 | 1997-05-29 | ヒトｍｃｐ−３の免疫学的測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10332692A true JPH10332692A (ja) | 1998-12-18 |
Family
ID=15259332
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14003097A Pending JPH10332692A (ja) | 1997-05-29 | 1997-05-29 | ヒトｍｃｐ−３の免疫学的測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10332692A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011505008A (ja) * | 2007-11-27 | 2011-02-17 | イムノヴィア・アクチエボラーグ | 診断方法及び診断に使用するためのアレイ |
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1997
- 1997-05-29 JP JP14003097A patent/JPH10332692A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011505008A (ja) * | 2007-11-27 | 2011-02-17 | イムノヴィア・アクチエボラーグ | 診断方法及び診断に使用するためのアレイ |
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