JPH10146196A - Ｈｒ−１レセプター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 種々の疾患および機能障害の予防、治療等に
有用なサイトカインを同定および特性化する必要があ
る。 【解決手段】 本発明は、前記のサイトカインレセプタ
ーを含む、ａ；配列番号：２のアミノ酸１から３８０を
有してなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
と少なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレオチ
ド、ｂ；配列番号：２のアミノ酸２２から３８０を有し
てなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少
なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレオチド、
ｃ；ａまたはｂのポリヌクレオチドに相補的なポリヌク
レオチド、およびｄ；ａ、ｂまたはｃのポリヌクレオチ
ドの少なくとも１５塩基を有してなるポリヌクレオチド
からなる群から選択される構成ポリヌクレオチドを有し
てなる単離されたポリヌクレオチドを提供するものであ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する分野】本発明は一つの態様として、新規
に同定されたポリヌクレオチドおよびポリペプチド；ポ
リヌクレオチドおよびポリペプチドの変異型および誘導
体；ポリヌクレオチドおよびポリペプチド、およびそれ
らの変異型および誘導体の製造方法；ポリペプチドのア
ゴニストおよびアンタゴニスト；並びにポリヌクレオチ
ド、ポリペプチド、変異型、誘導体、アゴニストおよび
アンタゴニストの使用に関するものである。特に、これ
らのおよびその他の点に関して、本発明は本明細書で
「ＨＲ−１レセプター」と称する、ヒト新規サイトカイ
ン／ペプチドホルモンレセプターのポリヌクレオチドお
よびポリヌクレオチドに関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】免疫
系の細胞が情報伝達する主要な方法は、可溶性因子の働
きを介したものである。これらの成長および分化因子
は、本質的には免疫系細胞により作られるホルモンであ
る。これらの因子はサイトカインと称せられる。（本明
細書で用いるサイトカインには、通常リンパ液と称する
ものも含まれる）。サイトカインは、実際に造血系の細
胞全てに作用し、それらの成長および分化を制御し、同
様に多くの非造血細胞にも作用し、生態生理学的な役割
を果たしている。表１にはこの群からの代表的な分子を
列挙する。

【０００３】

【表１】サイトカインおよびそれらのレセプター インターロイキン−４ファミリー ＩＬ−４ ＩＬ−５ ＧＭ−ＣＳＦ ＩＬ−３インターロイキン−６関連のサイトカイン ＩＬ−６ 顆粒球コロニー刺激因子 オンコスタインＭ 白血病阻止因子 毛様体神経栄養性因子（siliary neurotrophic facto
r）その他のサイトカイン ＥＰＯ ＩＬ−２ ＩＬ−７ ＩＬ−１２ ＧＨ プロラクチン インターフェロン−α インターフェロン−β インターフェロン−γ免疫グロブリン様レセプターを用いるサイトカイン ＩＬ−１ マクロファージコロニー刺激因子 血小板由来成長因子 幹細胞因子、スティール因子（steel factor）、または
ｃ−キットリガンド神経成長因子関連レセプターを用いるサイトカイン 腫瘍壊死因子−α リンフォトキシン非特性化レセプターのサイトトキシン ＩＬ−９ ＩＬ−１０ ＩＬ−１１

【０００４】サイトカインは新しい種が発見され、サイ
トカインリストは絶えず増大している。各サイトカイン
の生理学的役割の簡単な要旨はImmunology，A Synthesi
s，E.S.GolubおよびD.R.Green、第２版、シナウワー・
アソカイテス・インコーポレーティッド、サンダーラン
ド、マサチュウセッツ、446-448頁（1991）に示されて
いる。コロニー刺激因子（ＣＳＦ'ｓ）の機能から、種
々サイトカインの役割の生理学的重要性の一部を認める
ことができる。ＣＳＦ'ｓは、骨髄細胞の半固体培養中
の顆粒球およびマクロファージのコロニー形成刺激能力
により発見された。ＣＳＦ'ｓは、繊維芽細胞、内皮細
胞、間質細胞、およびリンパ球等、広く体中に分布す
る、多様な細胞型で産生される。ＣＳＦ産生物のレベル
は正常では低いが、感染の発生等の緊急時に対応して急
速に産生を上昇させることができる。ＧＭ−ＣＳＦおよ
びＧ−ＣＳＦに関する臨床試験では、これらは主な毒性
もなく、血液および骨髄の顆粒球−マクロファージ群で
上昇させることができることが示された。これらの結果
は、ＧＭ−ＣＳＦおよびＧ−ＣＳＦまたはそれらの類似
体が、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、再生不良性
貧血、先天性もしくは周期性好中球減少症等の疾患の結
果として、または癌、リンパ腫もしくは白血病の細胞毒
治療の結果としてもたらされる、造血異常の治療に有用
である可能性のあることを意味する。例えば、骨髄移植
後のような細胞毒治療の後に、ＣＳＦ'ｓまたはそれら
の類似体により誘起される造血細胞を急速に再生させる
と、結果的に集中看護および入院期間を短縮できる。Ｃ
ＳＦ'ｓは顆粒球および単球を活性化するので、個体の
感染に対する抵抗性を強めることもできる；このような
個体には外傷または熱傷のあるもの、または２次感染の
危険性のある手術の計画のあるもの等がある。ＣＳＦ治
療を受ける個体では、一度の反応で血中の先祖細胞（pr
ogenitor cells）が１００倍まで上昇することが知られ
ている。これは骨髄中の濃度と比較できる濃度に達し、
自己移植に用いる骨髄細胞の代わりにまたはそれに加え
て血液細胞を使用する可能性が高まる。ＣＳＦまたはそ
の類似体の他の主要な適用は、白血球がＣＳＦにより再
生されるだけでなく、血小板もＣＳＦにより再生される
ことを示す臨床試験に由来する。血小板減少症およびそ
の結果として生じる血小板の注入（transfection）は癌
の化学療法を受けている個体にて主要な臨床問題を残し
ているので、この観察は非常に現実的で重要なものとな
る。サイトカインまたはそれらの類似体のその他の医学
的適用は膨大で、種々のアレルギー性障害および喘息等
の領域も含まれる。というのもサイトカインは広範なこ
れらの疾患の病因に直接的または間接的に関係している
からである。

【０００５】従って、外傷または熱傷を有するこのよう
な個体における感染の抵抗性のレベルを上げ、および喘
息、アレルギー障害または例えばＡＩＤＳ、再生不良性
貧血、先天性もしくは周期性好中球減少症により、また
は癌、リンパ腫、白血病、および／または骨髄移植の細
胞毒治療の結果誘起される造血障害の予防、改善、処
置、診断、および／または素因決定に重要な医学的価値
のある、新規なサイトカインおよびそれらの類似体の同
定および特性化が必要である。アレルギー、喘息およ
び、例えばＡＩＤＳ、再生不良性貧血、先天性もしくは
周期性好中球減少症により、または癌、リンパ腫、白血
病、骨髄移植、外傷および／または熱傷の細胞毒治療の
結果誘起される種々造血障害に関連する機能障害および
疾患に、重要な役割を果たす新規サイトカインを同定す
る因子が必要であることも明らかである。（サイトカイ
ンに関する一般的な文献としては、J.L.BoulayおよびW.
E.Paul，The Interleukin-4-related Lymphokines and
Their Binding to Hematopoietin Receptors，The Jour
nal of Biological Chemistry，267：20525-20528（199
2）；並びにJ.F.Bazan，Structural Design and Molecu
lar evolution of a Cytokine Receptor Superfamily，
Proc.Natl.Acad.Sci.，87：6934-6938（1990）を参照の
こと）。

【０００６】サイトカインが細胞の成長過程および独特
な分化に影響を及ぼす能力は、特異的レセプターの認識
および特異的レセプターへの結合に依存する；これらの
細胞表面分子は、メッセンジャーサイトカインとの結合
を、細胞内の発育段階の過程の引き金となるサイトプラ
スミックシグナルに変換する。造血系のサイトカインの
配列は関連性がないようである；対照的に同種レセプタ
ーのファミリーは結合領域と際立って類似している。イ
ンターロイキン（ＩＬ）２、３、４、５、６および７、
Ｃ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦ、ＴＰＯ（トロンボポイ
エチン）、レプチン並びにエリスロポイエチン（ＥＰ
Ｏ）レセプターの細胞外セグメントは、Ｎ端側半分にお
けるの４個のシステイン残基の特徴的な保存およびＣ末
端近くの「ＷＳｘＷＳ」ボックス（一字のアミノ酸コー
ド；ｘは非保存残基）を示す約２００個のアミノ酸モジ
ュールが共通している。同様のモチーフが成長ホルモン
（ＧＲＨ）およびプロラクチン（ＰＲＬ）レセプターの
相同領域で認められる。

【０００７】本発明のポリペプチドは既知ＧＭ−ＣＳＦ
レセプター、プロラクチンレセプター、ＩＬ−３レセプ
ターに相同なアミノ酸配列を有する。さらに、サイトカ
インレセプター1型モチーフは、本発明のポリペプチド
において保存され、この事は本発明のポリペプチドが新
規サイトカイン／ペプチドホルモンレセプター（ＨＲ−
１レセプター）であることを示している。とりわけ、本
発明のＨＲ−１レセプターは既知ヒトＩＬ−５レセプタ
ーとアミノ酸配列で２７％の同等性、および５２％の類
似性を有する。

【０００８】インターロイキン５（ＩＬ−５）は好酸球
の増殖および活性化に重要な役割を果たす造血性成長因
子タンパク質である。例えば肺等の部位での好酸球のレ
ベルの上昇および不適切な蓄積は、例えば喘息等の炎症
性疾患におけるこれらの細胞と関連している。ＩＬ−５
は、細胞表面レセプターを介して、好酸球および先祖細
胞に作用するので、好酸球に及ぼすｈＩＬ−５の系統特
異的効果は、ｈＩＬ−５レセプターの特性化およびこの
過程に対するアンタゴニストの同定が非常に重要とな
る。D.Bennettら，Journal of Molecular Recognitio
n，8：52-58（1995）およびそこに引用されている参考
文献を参照されたい。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、ポリペ
プチドとりわけ図１（配列番号：[２]）に示すアミノ酸
配列を有する、新規ＨＲ−１レセプターとして同定され
たポリペプチドを提供することである。本発明の更なる
目的は、ＨＲ−１レセプターをコードするポリヌクレオ
チド、特に本明細書においてＨＲ−１レセプターと称す
るポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを提供す
ることである。本発明のとりわけ好ましい態様におい
て、ポリヌクレオチドは、図１（配列番号：［２］）に
示す配列におけるヒトＨＲ−１レセプターをコードする
領域を包含する。

【００１０】本発明のこの態様によれば、ＡＴＣＣ寄託
番号９８０６９、大腸菌（E.coli）ＪＭ１０１株のベク
ターpBluescriptＳＫ⁺，プラスミドＡＴＧ−５３１に含
まれるヒトｃＤＮＡにより発現される成熟ポリペプチド
をコードする単離核酸分子が提供される。

【００１１】本発明のこの態様によれば、ヒトＨＲ−１
レセプターをコードする単離核酸分子、本発明のさらな
る態様において、生物学的、診断学的、臨床的または治
療的に有用なそれらの変異型、類似体もしくは誘導体、
または変異型、類似体または誘導体の断片等のそれらの
断片をコードする単離核酸分子、例えばｍＲＮＡ、ｃＤ
ＮＡ、ゲノムＤＮＡ等が提供される。本発明の特に好ま
しい態様は、ヒトＨＲ−１レセプターの天然発生のアレ
ル変異型である。

【００１２】本発明の更なる目的は、臨床目的、例えば
外傷および／または熱傷等を有する個体の感染に対する
抵抗性レベルの上昇、並びに喘息、アレルギー障害また
は例えばＡＩＤＳ、再生不良性貧血、先天性もしくは周
期性好中球減少症により、または癌、リンパ腫、白血
病、および／または骨髄移植の細胞毒治療の結果誘起さ
れる造血障害の予防、改善、処置、診断、および／また
は素因決定のために用いることができる、ＨＲ−１レセ
プターポリペプチド、とりわけヒトＨＲ−１レセプター
ポリペプチドを提供することである。

【００１３】本発明のこの態様によれば、本明細書でＨ
Ｒ−１レセプターと称する、ヒト由来の新規ポリペプチ
ド、および生物学的、診断学的、または治療的に有用な
それらの断片、変異型および誘導体、その断片の変異型
および誘導体並びに前掲の類似体が提供される。本発明
の特に好ましい態様は、ヒトＨＲ−１レセプター遺伝子
の天然発生のアレルによりコードされるヒトＨＲ−１レ
セプター遺伝子の変異型である。本発明の別の態様によ
れば、本発明のレセプターポリペプチドに結合し、およ
びそれらを活性化または活性化を阻害する化合物（リガ
ンドまたはその他のタンパク質を含む）、およびレセプ
ターリガンドをスクリーニングする方法が提供される。

【００１４】本発明の別の目的は、前述のポリペプチ
ド、ポリペプチド断片、変異型および誘導体、変異型お
よび誘導体の断片、並びに前掲の類似体の製造方法を提
供することである。本発明の好ましい態様において、外
因性のヒトＨＲ−１レセプターをコードするポリヌクレ
オチドを発現可能な様に挿入した宿主細胞を、宿主にお
いてヒトＨＲ−１レセプターを発現するような条件下で
培養し、発現したポリペプチドを回収することを含む、
前述のＨＲ−１レセプターポリペプチドの製造方法を提
供する。

【００１５】本発明の他の目的は、研究、生物学的、臨
床的および治療的目的で、前述のポリペプチドおよびポ
リヌクレオチドを利用し、とりわけ例えば外傷および／
または熱傷等を有する個体の感染に対する抵抗性レベル
を上昇させ、並びに喘息、アレルギー障害または例えば
ＡＩＤＳ、再生不良性貧血、先天性もしくは周期性好中
球減少症により、または癌、リンパ腫、白血病、および
／または骨髄移植の細胞毒治療の結果誘起される造血障
害の予防、改善、処置、診断、および／または素因決定
する産生物、組成物、過程および方法を提供することで
ある。

【００１６】本発明のある種の好ましい態様によれば、
とりわけ：ＨＲ−１レセプターポリペプチドまたはＨＲ
−１レセプターコード化ｍＲＮＡを測定することによ
る、細胞中のＨＲ−１レセプター発現の評価；細胞を本
明細書に開示するＨＲ−１レセプターポリペプチドまた
はポリヌクレオチドに曝露することにより、インビト
ロ、エクソビボまたはインビボで、例えば外傷および／
または熱傷等を有する個体の感染に対する抵抗性レベル
を上昇させ、並びに喘息、アレルギー障害または例えば
ＡＩＤＳ、再生不良性貧血、先天性もしくは周期性好中
球減少症により、または癌、リンパ腫、白血病、および
／または骨髄移植の細胞毒治療の結果誘起される造血障
害の予防、改善、処置、診断、および／または素因決定
すること；ＨＲ−１レセプター遺伝子の遺伝的変異およ
び異常、例えば欠損を検定する方法；並びにＨＲ−１レ
セプター機能を増強するための、またはＨＲ−１レセプ
ター機能障害を修復するための、ＨＲ−１レセプターポ
リペプチドまたはポリヌクレオチドの生体への投与のた
めの、産生物、組成物、および方法が提供される。

【００１７】本発明のさらに別の態様によれば、ＨＲ−
１レセプターの過少発現（underexpression）に関連す
る状態を治療するための、本発明のレセプターポリペプ
チドを刺激するような活性化化合物を用いる方法が提供
される。本発明の別の態様によれば、ＨＲ−１レセプタ
ーの過剰発現に関連する状態を処置するための、阻害化
合物を用いる方法が提供される。

【００１８】本発明のさらに別の態様によれば、レセプ
ターがＨＲ−１レセプターリガンドに結合できるよう
な、またはＨＲ−１レセプターリガンド結合を定量的ま
たは定性的にも制御できる保存アミノ酸置換体を有する
断片、コンセンサス断片および／または配列である、非
天然発生的合成、単離および／または組換えＨＲ−１レ
セプターポリペプチドが提供される。

【００１９】本発明のさらに別の態様によれば、予期さ
れる生物学的特性のために、リガンドへの結合またはリ
ガンド結合の制御により、ＨＲ−１レセプター機能の潜
在的な制御物質として有用な、合成または組換えＨＲ−
１レセプターポリペプチド、それらの保存置換体および
誘導体、抗体、抗イディオタイプ抗体、組成物並びに方
法を提供し、これらは診断、治療および／または研究に
適用できる。

【００２０】本発明のさらに別の目的は、種々ＨＲ−１
レセプターまたはそれらの断片をレセプタータイプまた
はサブタイプとして阻害または擬似するように設計し
た、合成、単離、または組換えポリペプチドを提供す
る。本発明の特定の好ましい態様において、ヒトＨＲ−
１レセプター配列にハイブリダイズするプローブを提供
する。本発明のさらに好ましい態様において、ＨＲ−１
レセプターポリペプチドに抗する抗体を提供する。この
点に関する特に好ましい態様では、その抗体はヒトＨＲ
−１レセプターに対して高度に選択的である。

【００２１】本発明の別の態様では、ＨＲ−１レセプタ
ーアゴニストを提供する。とりわけ好ましいアゴニスト
は、ＨＲ−１レセプター結合分子、またはレセプター分
子に結合し、ＨＲ−１レセプター誘起反応を引き出すま
たは増強するＨＲ−１レセプター擬似分子である。ま
た、とりわけ好ましいアゴニストは、ＨＲ−１レセプタ
ーもしくはＨＲ−１レセプターポリペプチド、またはそ
の他のＨＲ−１レセプター作用の制御物質と相互作用
し、それにより１またはそれ以上のＨＲ−１レセプター
の効果を可能にするかまたは増強する分子である。

【００２２】本発明のさらに別の態様において、ＨＲ−
１レセプターアンタゴニストを提供する。特に好ましい
アンタゴニストは、ＨＲ−１レセプターまたは結合分子
に結合するが、１またはそれ以上のＨＲ−１レセプター
誘起反応を引き出さないようなＨＲ−１レセプター擬似
分子である。また、特に好ましいアンタゴニストは、Ｈ
Ｒ−１レセプターの１もしくはそれ以上の効果を阻害す
るように、ＨＲ−１レセプターと結合もしくは相互作用
するか、またはＨＲ−１レセプターの発現を阻止する。

【００２３】本発明の更なる態様において、インビトロ
で細胞に、エクソビボで細胞におよびインビボで細胞
に、または多細胞生体に投与するための、ＨＲ−１レセ
プターポリヌクレオチドまたはＨＲ−１レセプターポリ
ペプチドを含む組成物を提供する。本発明の特に好まし
い態様において、その組成物には、疾患の処置のために
宿主生体においてＨＲ−１レセプターポリペプチドを発
現するためのＨＲ−１レセプターポリヌクレオチドが含
まれる。この点に関して、特に好ましい態様は、内因性
ＨＲ−１レセプターおよびその内因性リガンドの異常活
性に関連する機能不全の処置のための、ヒト患者におけ
る発現である。

【００２４】本発明のその他の目的、特徴、優越点およ
び態様は、以下の記載より当業者には明白であろう。し
かしながら、以下の記載および具体的な実施例は、本発
明の好ましい態様を示すものであり、説明のためにのみ
示すものであることを理解されたい。開示した本発明の
意図および範囲内での種々の変化および改変は、以下の
記載および本明細書のその他の部分の知見により、当業
者に容易に明らかとなろう。

【００２５】定義 以下の説明は、本明細書、とりわけ実施例において汎用
される特定の用語の理解を容易くするために示すもので
ある。説明は便宜上示すものであり、本発明を限定する
ものではない。

【００２６】「ＤＮＡ消化」とは、ＤＮＡの特定の配列
でのみ作用する制限酵素による、ＤＮＡの触媒的切断を
意味する。本明細書における種々の制限酵素は、市販に
より入手可能であり、反応条件、コファクターおよびそ
の他使用のための必要条件は、当業者に周知であり、通
常的に用いられるものである。

【００２７】分析の目的では、典型的なものではプラス
ミドまたはＤＮＡ断片１μｇを、反応緩衝液約２０μｌ
中酵素約２単位で消化する。プラスミド構築用にＤＮＡ
断片を単離する目的では、典型的なものではＤＮＡ５〜
５０μｇを、酵素約２０〜２５０単位で、相対的に高容
量中で消化する。特定の制限酵素のための適当な緩衝液
および基質量は、以下に引用するような標準的な実験マ
ニュアルに記載されており、それらは商業的供給者によ
り明記されている。

【００２８】３７℃で約１時間のインキュベーション時
間は、通常用いられるものであるが、標準的な方法、供
給者の指示書および反応の特色に応じて変更できる。消
化後、当業者に通常的な周知の方法により、反応物を分
析し、寒天またはポリアクリルアミドゲルの電気泳動に
より断片を精製できる。

【００２９】「遺伝的要素」とは、一般的にポリペプチ
ドをコードする領域、もしくは転写もしくは翻訳、もし
くは宿主細胞においてポリペプチドを発現するのに重要
なその他の過程を制御する領域を含むポリヌクレオチ
ド、またはポリペプチドをコードする領域、およびそれ
らに機能的に連結した発現を制御する領域の両方を含む
ポリヌクレオチドを意味する。

【００３０】遺伝的要素は、エピソーム要素即ち宿主細
胞ゲノムと物理的に独立した分子として複製するベクタ
ー内に含まれる得る。これらは真核細胞におけるメソト
レキセート選別によりトランスフェクトしたＤＮＡの増
幅中に現れるようなミニ染色体の中に含まれ得る。遺伝
的要素はまた、天然の状態ではなく、むしろ単離、クロ
ーニングおよび宿主細胞への導入のような操作の後に、
精製ＤＮＡの形態で宿主細胞ゲノム内またはとりわけベ
クター内にも含まれ得る。

【００３１】「単離」とは、「人工的に」天然の状態か
ら変化させられた、すなわち、それが天然に存在する場
合、元来の環境から変化させるもしくは取り除く、また
はその両方を行ったことを意味する。例えば天然発生の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で
生存動物に存在する場合は、「単離」されていないが、
同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に
共存する物質から分離されている場合は、本明細書に用
いる用語である、「単離」がなされている。例えば、ポ
リヌクレオチドに関して、単離されたという用語は、染
色体および細胞中で天然に生じるポリヌクレオチドが、
該染色体および細胞から分離されていることを意味す
る。

【００３２】単離の一部として、または単離に引き続い
て、このようなポリヌクレオチドは、例えばＤＮＡの様
なその他のポリヌクレオチドに結合して突然変異を誘発
したり、融合タンパク質を形成したり、宿主中で伸長ま
たは発現したりすることができる。単離ポリヌクレオチ
ドは単独で、またはベクターの様な他のポリヌクレオチ
ドと結合して、培養物中または全生物体中の宿主細胞に
導入できる。培養物中または全生物体中の宿主細胞に導
入されたＤＮＡも本明細書に用いる用語である、単離を
したといえる。というのはこれらは天然発生の形態また
は環境にはないからである。同様に、ポリヌクレオチド
およびポリペプチドは、培地製剤、例えば細胞にポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドを導入するための溶液、
化学的または酵素的反応のための組成物または溶液等の
組成物にも生じることができ、これらは天然には存在し
ない組成物であり、本明細書に用いる用語の単離された
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの範疇である。

【００３３】「ライゲーション」とは、２個またはそれ
以上のポリヌクレオチド間、最も多くは２本鎖ＤＮＡ間
の、ホスホジエステル結合を形成する工程を意味する。
ライゲーション技術は当業界に周知であり、ライゲーシ
ョンプロトコールは標準的な実験マニュアルおよび参考
文献、例えばSambrookら、Molecular Cloning，A Labor
atory Manual、第２版；コールドスプリングハーバー・
ラボラトリープレス、コールドスプリングハーバー、ニ
ューヨーク（1989）およびManiastisら、（以下に引
用）146頁に記載されている。

【００３４】「（複数の）オリゴヌクレオチド」とは、
比較的短いポリヌクレオチドを意味する。この用語はし
ばしば一本鎖デオキシリボヌクレオチドを意味するが、
同様に一本鎖または二本鎖リボヌクレオチド、ＲＮＡ：
ＤＮＡハイブリッドおよびとりわけ二本鎖ＤＮＡを意味
することができる。オリゴヌクレオチド、例えば一本鎖
ＤＮＡプローブオリゴヌクレオチドは、しばしば自動オ
リゴヌクレオチド合成器にかける等の化学的方法により
合成される。しかしながら、オリゴヌクレオチドはイン
ビトロ組換えＤＮＡ媒介法および細胞および生体におけ
るＤＮＡの発現によるなどの、種々のその他の方法によ
り作ることができる。

【００３５】最初、化学合成したＤＮＡは、典型的なも
のでは５’リン酸塩なしで得られる。このようなオリゴ
ヌクレオチドの５’末端は、組換えＤＮＡ分子を形成す
るのに通常使用されるＤＮＡリガーゼを用いるライゲー
ション反応によるホスホジエステル結合形成のための基
質ではない。このようなオリゴヌクレオチドのライゲー
ションが望まれる場合、キナーゼおよびＡＴＰを用いる
ような標準法により、リン酸塩を添加できる。

【００３６】化学合成したオリゴヌクレオチドの３’末
端は、通常遊離の水酸基を有し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ等
のリガーゼの存在下、別のオリゴヌクレオチドのような
別のポリヌクレオチドの５’リン酸塩と容易にホスホジ
エステル結合を形成する。周知のように、この反応は、
望む場合、ライゲーションの前にもう一つの（複数の）
ポリヌクレオチドの５'リン酸塩を除去することによ
り、選択的に防御できる。

【００３７】「プラスミド」は、本明細書では通常前に
小文字のｐを付し、および／または続いて大文字および
／または数字で示し、当業者に周知の標準命名法に準じ
る。本明細書に開示する出発プラスミドは、制約を受け
ずに市販により、公に入手可能であるかまたは、周知の
確立された技法を通常的に適用することにより、入手可
能なプラスミドから構築することができる。本発明に準
じて使用できる多くのプラスミド並びにその他のクロー
ニングおよび発現ベクターは、周知であり、当業者に容
易に入手できる。さらに、当業者は本発明の使用に適し
たその他のプラスミドをいくらでも容易に構築すること
ができる。本発明におけるこのようなプラスミドおよび
その他のベクターの特性、構築および使用は、本明細書
より当業者に容易に理解され得る。

【００３８】「（複数の）ポリヌクレオチド」とは、通
常改変されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または改変
されたＲＮＡもしくはＤＮＡでよい、任意のポリリボヌ
クレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを意味
する。従って、例えば本明細書で用いるポリヌクレオチ
ドは、とりわけ一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖およ
び二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本
鎖ＲＮＡ、並びに一本鎖および二本鎖領域の混合物であ
るＲＮＡ、一本鎖もしくはより通常的には二本鎖、また
は一本鎖および二本鎖領域の混合物でよいＤＮＡおよび
ＲＮＡを含むハイブリッド分子を意味する。

【００３９】さらに、本明細書で用いいるポリヌクレオ
チドは、ＲＮＡもしくはＤＮＡまたはＲＮＡとＤＮＡの
両方を含む三本鎖領域を意味する。そのような領域にお
ける鎖は同一の分子または異なる分子からのものでよ
い。この領域は一つまたはそれ以上の分子の全てを含み
得るが、より典型的には幾つかの分子の一領域のみを含
む。三重らせん領域の分子の一つは、しばしばオリゴヌ
クレオチドである。

【００４０】本明細書で用いるポリヌクレオチドなる用
語には、一つまたはそれ以上の改変した塩基を含有す
る、上述のＤＮＡまたはＲＮＡ等が含まれる。このよう
に、安定性またはその他の理由で改変した骨格を有する
ＤＮＡまたはＲＮＡは、本明細書で意図する用語であ
る”ポリヌクレオチド”である。さらに、イノシン等の
通常的でない塩基、またはトリチル化塩基等の改変塩基
を含むＤＮＡまたはＲＮＡは（二つの例だけをを示
す）、本明細書で用いられる用語である、ポリヌクレオ
チドである。

【００４１】当業者に既知の多くの有用な目的を提供す
るＤＮＡおよびＲＮＡに、非常に多くの改変がなされて
いることは、明らかであろう。本明細書で用いられるポ
リヌクレオチドなる用語は、ポリヌクレオチドのこのよ
うな化学的、酵素的または代謝的に改変した形態、およ
びとりわけ単細胞および複合細胞等のウイルスおよび細
胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含す
る。

【００４２】本明細書で用いる「ポリペプチド」は、以
下に記載する全てのポリペプチドを包含する。ポリペプ
チドの基本的な構造は周知であり、非常に多くの参考書
およびその他の当業界の発行物に記載されている。これ
に鑑み、本明細書で用いるこの用語は、ペプチド結合に
より直鎖で互いに結合している２個またはそれ以上のア
ミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を意味す
る。本明細書で用いるこの用語は、当業界で通常例えば
ペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマー、とも称す
る両方の短鎖、および多くの型があり、当業界で一般的
にタンパク質と称する長鎖を意味する。

【００４３】ポリペプチドはしばしば通常２０個の天然
発生アミノ酸と称される２０個のアミノ酸以外のアミノ
酸を含有し、末端アミノ酸等の多くのアミノ酸は、プロ
セッシングおよびその他の翻訳後改変のような天然の工
程によるのみならず、当業者に周知の化学的改変技術に
よっても、該ポリペプチド中で改変できることは理解さ
れよう。ポリペプチドに天然に起こる通常的な改変は余
りにも多いので、余すところなく掲示することはできな
いが、基礎的な参考書およびさらに詳細な論文並びに多
数の研究文献にも詳しく記載されており、これらは当業
者に周知である。

【００４４】本発明のポリペプチドに施すことができる
既知の改変には、説明のために幾つか示すと、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、
交差架橋、環状化、ジスルフィド結合形成、ジメチル
化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタ
メート形成、ホルミル化、ガンマー−カルボキシル化、
グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質加水
分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ
化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のようなトラ
ンスファーＲＮＡ媒介のタンパク質へのアミノ酸の添
加、およびユビキチン化などがある。

【００４５】このような改変は当業者に周知であり、科
学文献中に非常に詳細に記載されている。幾つかの特に
一般的な改変、例えばグリコシル化、脂質結合、硫酸
化、グルタミン酸残基のガンマーカルボキシル化、水酸
化およびＡＤＰリボシル化等が最も基本的な参考書、例
えばProteins-Structure and Molecular Properties、
第2版、T.E.Creighton、W.H.Freeman and Company、ニ
ューヨーク（1993）に記載されている。多くの詳細な報
文、例えば、Posttranslational Covalent Modificatio
n of Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、
ニューヨーク（1983）のWold,F.,Posttranslational Pr
otein Modifications ：Perspective andProspects、1
〜12頁；Seifterら、Analysis for Protein Modificati
ons and nonprotein cofactors、Meth.Enzymol.182:626
-646（1990）およびRattanら、Protein Synthesis：Pos
ttranslational Modification and Aging，Ann.N.Y.Aca
d.Sci.663:48-62（1992）の記載が、この目的のために
利用できる。

【００４６】ポリペプチドはいつも完全に直鎖であると
は限らないということは周知であり、上述の通りである
と理解されよう。例えばポリペプチドはユビキチン化の
結果分岐され、一般には、天然のプロセッシングなどの
翻訳後の事象および天然では起こり得ない人為的操作に
よりもたらされる事象の結果、分岐のある、または分岐
のない環状にすることができる。環状、分岐および分岐
した環状ポリペプチドは、非翻訳天然工程により、およ
び同様に全く合成的な方法で、合成できる。

【００４７】改変はペプチド骨格、アミノ酸側鎖および
アミノまたはカルボキシル末端など、ポリペプチドの至
る所で起こりうる。実際、共有結合の改変による、ポリ
ペプチドのアミノまたはカルボキシル基またはその両方
の遮断は、天然に起こり、合成ポリペプチドおよびこの
ような改変も同様に本発明のポリペプチドに存在し得
る。例えば、大腸菌（E.coli.）で作られるポリペプチ
ドのアミノ末端残基は、タンパク質溶解のプロセッシン
グの前に殆ど必ずＮ−ホルミルメチオニンになる。

【００４８】ポリペプチドに起こる改変はしばしばその
製法に影響される。例えば宿主にクローン化遺伝子を発
現することにより作られるポリペプチドでは、大部分の
改変の特性および程度は、宿主細胞の翻訳後改変能力お
よびポリペプチドアミノ酸配列に存在する改変シグナル
により決定される。例えば、周知のように、グリコシル
化は大腸菌のような細菌宿主では起こらないことがしば
しばである。従って、グリコシル化が望ましい場合、ポ
リペプチドは、グリコシル化宿主、一般には真核細胞に
て発現させるべきである。昆虫細胞がしばしば哺乳動物
細胞と同じ翻訳後グリコシル化に用いられ、この理由で
昆虫細胞発現系が、とりわけグリコシル化の本来のパタ
ーンを有する哺乳動物タンパク質を効率よく発現するよ
うに改造されている。同様の考察がその他の改変にも適
用される。

【００４９】改変の同一の型は、該ポリペプチドの幾つ
かの部分で、同じまたは異なる程度で存在しうると理解
されよう。また、該ポリペプチドには改変の多くの型が
存在し得る。一般的に、本明細書で用いる用語であるポ
リペプチドは、このような全ての改変、特に宿主細胞に
おいてポリヌクレオチドを発現することにより合成した
ポリペプチドに存在する改変を包含する。

【００５０】本明細書で用いるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの「（複数の）変異型」なる用語は、参照
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なるポ
リヌクレオチドまたはポリペプチドである。この意味で
の変異型は、本明細書の以下およびその他の部分でより
詳細に記載する。

【００５１】（１） ヌクレオチド配列が、別の参照ポ
リヌクレオチドとは異なるポリヌクレオチド。一般的に
差異は、参照体および変異型のヌクレオチド配列が、全
体的に非常に類似しており、多くの領域で同等であるよ
うに限定される。以下に記すように、変異型におけるヌ
クレオチドの配列の変化はサイレントでよい。すなわ
ち、ポリヌクレオチドによりコードされるアミノ酸には
変化がなくてよい。変化がこの型のサイレント変化はに
限定される場合、変異型は、参照体と同一のアミノ酸配
列を有するポリペプチドをコードする。また以下に記す
ように、変異型のヌクレオチド配列における変化が、参
照ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドの
アミノ酸配列を変化させ得る。このようなヌクレオチド
の変化は、以下に論じるように、参照配列によりコード
されるポリペプチドにおけるアミノ酸置換、添加、欠
失、融合およびトランケーションを招く。

【００５２】（２） アミノ酸配列が、別の参照ポリペ
プチドとは異なるポリペプチド。一般的に差異は、参照
体および変異型の配列が、全体的に非常に類似してお
り、多くの領域で同等であるように限定される。変異型
および参照ポリペプチドは、１またはそれ以上の置換、
添加、欠失、融合およびトランケーションが任意の組み
合わせで起こることにより、アミノ酸配列が変化し得
る。

【００５３】「融合タンパク質」：ＥＰ−Ａ−Ｏ ４６
４ ５３３（カナディアンカウンターパート２０４５８
６９）は免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分
を、別のヒトタンパク質またはその一部と一緒に含む融
合タンパク質を開示する。多くの場合、融合タンパク質
のＦｃ部分は、治療および診断における使用に非常に優
れており、かかる結果は、例えば薬物動態特性の改善を
もたらす（ＥＰ−Ａ０２３２２６２）。一方、記載する
優れた方法で融合タンパク質を発現、検出および精製し
た後、Ｆｃ部分を削除できるのが望ましい場合もある。
これはＦｃ部分が治療および診断に使用するのに妨げと
なることが判明している場合であり、例えば融合タンパ
ク質を免疫化の抗原として使用する場合である。薬物の
発見において、ヒトタンパク質、例えばｓｈＩＬ５−α
が、ｈＩＬ−５のアンタゴニストを同定する、高処理能
スクリーニング検定の目的のために、Ｆｃ部分と融合さ
れた。D.Bennettら、Journal of Molecular Recognitio
n，8:52-58（1995）およびK.Lohansonら、The Journal
of Biological Chemistry，270(16):9459-9471（1995）
を参照のこと。

【００５４】従って、本発明はまた、ＨＲ−１レセプタ
ー、またはそれらの一部、および種々サブクラスの免疫
グロブリン（IgG、IgM、IgA、IgE）の重または軽鎖の定
常領域の種々の部分からなる、遺伝子操作した可溶性融
合タンパク質にも関する。免疫グロブリンとして好まし
いものは、ヒトIgＧとりわけIgＧ１の重鎖の定常部分で
あり、その場合、融合は蝶番領域で起こる。とりわけ好
ましい態様において、Ｆｃ部分は、切断配列により簡単
に除去でき、切断配列もまた挿入され、Ｘａ因子により
切断できる。さらに、本発明は遺伝子操作による、これ
らの融合物の調製方法、およびそれらの診断および治療
のための使用にも関する。

【００５５】本明細書で用いる「レセプター分子」と
は、限定するものではないが、ＨＲ−１レセプターポリ
ヌクレオチドおよび、古典的なレセプター（これは好ま
しい）のみならず本発明のポリペプチドと特異的に結合
または相互作用するその他の分子をも含む本発明のＨＲ
−１レセプター（リガンド）ポリペプチドと特異的に結
合または相互作用する分子等の、本発明の分子を意味す
る（各々、「結合分子」および「相互作用分子」、並び
に「ＨＲ−１レセプター結合分子」および「ＨＲ−１レ
セプター相互作用分子」とも称することができる）。本
発明のポリペプチドと、レセプターまたは結合もしくは
相互作用分子等の分子との結合は、本発明のポリペプチ
ドに対して独占的であってもよく、これは非常に好まし
いことであり、または本発明のポリペプチドに対して非
常に特異的であってもよく、これは非常に好ましいこと
であり、または本発明のポリペプチドを含む一群のタン
パク質に対して非常に特異的であってもよく、これは好
ましいことであり、または少なくとも一つは本発明のポ
リペプチドを含む一群のタンパク質の幾つかに対して特
異的であってもよい。レセプター分子、例えば本発明の
ポリペプチドに特異的に結合する抗体および抗体由来物
質もまた非天然発生である。

【００５６】

【発明の実施の態様】本発明はとりわけ以下により詳細
に記載する、新規ＨＲ−１レセプターポリペプチドおよ
びポリヌクレオチドに関する。特に、本発明は、ヒトＩ
Ｌ−５レセプターポリヌクレオチドにアミノ酸配列の相
同性という点で関連している、新規ヒトＨＲ−１レセプ
ターポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関する。本
発明は特に図1−３（配列番号：２）に示すヌクレオチ
ドおよびアミノ酸配列を有するＨＲ−１レセプター、並
びに本明細書において「寄託クローン」または「寄託ク
ローンのｃＤＮＡ」と称するＡＴＣＣ寄託番号９８０６
９のヒトｃＤＮＡのＨＲ−１レセプターヌクレオチドお
よびアミノ酸配列に関する。図1−３（配列番号：２）
に示すヌクレオチドおよびアミノ酸配列が寄託クローン
のｃＤＮＡを配列決定することにより得られたことは理
解されよう。かくして、寄託クローンの配列は両者の不
一致を調整しており、図１−３の配列に関するいずれの
言及も、寄託クローンのヒトｃＤＮＡの配列の言及を包
含する。

【００５７】ポリヌクレオチド 本発明の一つの態様によれば、図１−３（配列番号：
２）の誘導アミノ酸配列を有するＨＲ−１レセプターポ
リペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドが提供さ
れる。本明細書に提供する情報を用いて、例えば図1−
３（配列番号：１）に示すポリヌクレオチド配列のよう
な、ヒトＨＲ−１レセプターポリペプチドをコードする
本発明のポリヌクレオチドは、例えば出発物質として微
小血管内皮組織からのｍＲＮＡを用いて、ｃＤＮＡをク
ローニングするような、標準的なクローニングおよびス
クリーニングの手法を用いて得ることができる。本発明
の実例となる図1−３（配列番号：１）に示すポリヌク
レオチドは、ヒト精巣組織の細胞に由来するヒトｃＤＮ
Ａライブラリーで見出された。

【００５８】寄託クローンのヒトＨＲ−１レセプターを
コードするｃＤＮＡ配列決定の結果に示されるように、
本発明のヒトＨＲ−１レセプターはサイトカインおよび
ペプチドホルモンレセプターのその他のタンパク質に構
造的に相関する。このように得られたｃＤＮＡ配列を図
1−３に示す。これは推定分子量約44.176kDaの約380個
のアミノ酸基のタンパク質をコードするオープンリーデ
ィングフレームを含有する。このタンパク質は既知タン
パク質の中で、ヒトＩＬ−５レセプタータンパク質に最
も相同的である。図１−３のＨＲ−１レセプターは、Ｉ
Ｌ−５レセプタータンパク質のアミノ酸配列と約２７％
の同等性、および約５２％の類似性を有する。

【００５９】本発明のヒトＨＲ−１レセプターはＮ末端
に２１個のアミノ酸シグナル配列を含有する。このよう
に、本発明の別の態様は、シグナル配列を含まない配列
番号：２の２２〜３８０のアミノ酸残基を有するＨＲ−
１レセプターに関する。

【００６０】本発明のポリヌクレオチドは、クローニン
グにより得るか、もしくは化学合成技術により産生する
か、またはそれらを組み合わせて得られた、ｍＲＮＡな
どのＲＮＡの形態でよい。ＤＮＡは二本鎖であってもま
たは一本鎖であってもよい。一本鎖ＤＮＡは有意（セン
ス）鎖としても知られているコード鎖であってもよく、
またアンチセンス鎖とも称される非コード鎖であっても
よい。

【００６１】ポリペプチドをコードするコード化配列
は、図1−３（配列番号：１）に示すポリヌクレオチド
のコード化配列と同一であってもよい。ポリヌクレオチ
ドは、また、遺伝子コードの重複（縮重）の結果とし
て、図１−３（配列番号：２）のＤＮＡのポリペプチド
をコードする異なる配列を有するポリヌクレオチドでも
よい。

【００６２】図1−３（配列番号：２）のポリペプチド
をコードする本発明のポリヌクレオチドは、限定するも
のではないが、単独の成熟ポリペプチドのコード化配
列；成熟ポリペプチドのコード化配列および付加コード
化配列、例えばプレ、プロ、プレプロタンパク質配列等
のリーダーまたは分泌配列をコードするコード化配列；
例えば、転写、スプライシングおよびポリアデニル化シ
グナル等のｍＲＮＡプロセッシング、リボソーム結合お
よびｍＲＮＡの安定性において役割を担う、転写された
非翻訳配列等のイントロン並びに非コード化５’および
３’配列（限定するものではない）等の、付加非コード
化配列と共に、前述の付加コード化配列を伴うかまたは
伴わない成熟ポリペプチドのコード化配列；付加機能性
を付与するような付加アミノ酸をコードする付加コード
化配列等を包含する。このように、例えばポリペプチド
は融合ポリペプチドの精製を促すマーカー配列例えばペ
プチドを融合してもよい。本発明のある好ましい態様に
おいて、マーカー配列はヘキサ−ヒスチジンペプチド、
例えば、とりわけｐＱＥベクター（キアゲン・インコー
ポレーティッド）に提供されるタグであり、多くが市販
により入手可能である。例えばGentzら、Proc.Natl.Aca
d.Sci.,USA，86:821-824（1989）に記載されるように、
ヘキサ−ヒスチジンは融合タンパク質の精製に便宜的に
提供される。ＨＡタグはインフルエンザヘマググルチニ
ンタンパク質由来のエピトープに対応し、これについて
は例えばWilsonら、Cell，37:767（1984）に記載されて
いる。

【００６３】前の記載によれば、本明細書で用いる「ポ
リペプチドをコードするポリヌクレオチド」なる用語
は、本発明のポリペプチド、とりわけ図１−３（配列番
号：２）に示すアミノ酸配列を有するヒトＨＲ−１レセ
プターをコードする配列を含有するポリヌクレオチド包
含する。この用語はまた、ポリペプチド（例えばイント
ロンに干渉される）をコードする単一の連続領域または
不連続領域を付加領域と共に含み、またコード化および
／または非コード化配列をも含有し得るポリヌクレオチ
ドをも包含する。

【００６４】本発明はさらに、図１−３（配列番号：
２）の誘導アミノ酸配列を有するポリペプチドの断片、
類似体および誘導体をコードする、上述のポリヌクレオ
チドの変異型に関する。ポリヌクレオチドの変異型には
天然発生アレル変異型のように天然に発生できる変異型
か、または天然に発生することが知られていない変異型
でもよい。このような非天然発生のポリヌクレオチドの
変異型は、ポリヌクレオチド、細胞または生体等に突然
変異誘発技法を施したりすることにより産生することが
できる。

【００６５】この点における変異型は、ヌクレオチド置
換、欠失または付加による前述のポリヌクレオチドとは
異なる変異体である。置換、欠失または付加は１または
それ以上のヌクレオチドに起こる。変異型はコード化も
しくは非コード化領域またはその両方において変化し得
る。コード化領域における変化は保存的または非保存的
アミノ酸置換、欠失または付加を産生する。

【００６６】この点に関する本発明の特に好ましい態様
は、図１−３（配列番号：２）に示すＨＲ−１レセプタ
ーのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド；それらの変異型、類似体、誘導体およ
び断片、並びに変異型、類似体および誘導体の断片であ
る。

【００６７】この点に関する本発明の特に好ましい態様
は、図１−３（配列番号：２）のＨＲ−１レセプターポ
リペプチドのアミノ酸配列に幾つか、少しの、５〜１
０、１〜５、１〜３、2、１または０個のアミノ酸残基
を置換、欠失または付加を任意の組み合わせで施したア
ミノ酸配列を有するＨＲ−１レセプター変異型、類似
体、誘導体および断片、並びにその断片の変異型、類似
体および誘導体をコードするポリヌクレオチドである。
中でもとりわけ好ましいものは、サイレント置換、付加
および欠失であり、ＨＲ−１レセプターの特性および活
性を変化しない。また、この点に関してとりわけ好まし
いものは、保存置換である。最も好ましいものは、置換
を施さない、図１−３（配列番号：２）のアミノ酸配列
を有するポリペプチドである。

【００６８】本発明のさらに好ましい態様は、図１−３
（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有するＨＲ−１
レセプターをコードするポリヌクレオチドおよびこのよ
うなポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドと、
少なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレオチドで
ある。また別に、最も好ましいポリヌクレオチドは、寄
託クローンのヒトｃＤＮＡのＨＲ−１レセプターポリペ
プチドをコードするポリヌクレオチド、およびそれらに
相補的なポリヌクレオチドと少なくとも８０％の同等性
を有する領域を含むポリヌクレオチドである。この点に
関して、とりわけ好ましいポリヌクレオチドは少なくと
も９０％の同等性を有するものであり、中でも特に好ま
しいのは少なくとも９５％の同等性を有するものであ
る。さらに少なくとも９５％の同等性を有するものの中
でも少なくとも９７％であるのがより好ましく、中でも
少なくとも９８％および少なくとも９９％であるのが特
に好ましく、さらに少なくとも９９％であるのがより好
ましい。

【００６９】この点に関するとりわけ好ましい態様は、
さらに、図１−３（配列番号：１）のｃＤＮＡにコード
される成熟ポリペプチドと実質的に同一の生物学的機能
または活性を保持するポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドである。本発明はさらに本明細書上述の配列
にハイブリダイズするポリヌクレオチドに関する。この
点に関して、本発明は特にストリンジェント状態で本明
細書上述のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリ
ヌクレオチドに関する。本明細書で用いる「ストリンジ
ェント状態」なる用語は、配列間の同等性が少なくとも
９５％、好ましくは少なくとも９７％である場合のみに
起こるハイブリダイゼーションを意味する。

【００７０】本発明のポリヌクレオチド検定に関してこ
こでさらに論じるが、例えば上述の本発明のポリヌクレ
オチドは、ＨＲ−１レセプターをコードするｃＤＮＡ全
長およびゲノムクローンを単離するため、およびヒトＨ
Ｒ−１レセプター遺伝子に高度な配列類似性を有するそ
の他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離す
るための、ｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡのハイブリダイ
ゼーションプローブとして使用することができる。この
ようなプローブは通常少なくとも１５塩基を含む。好ま
しくはこのようなプローブは少なくとも３０塩基を有
し、少なくとも５０塩基を有していてもよい。特に好ま
しいプローブは少なくとも３０塩基を有し、５０塩基以
下である。

【００７１】例えばＨＲ−１レセプター遺伝子のコード
化領域は、既知ＤＮＡ配列を用いてオリゴヌクレオチド
プローブを合成し、スクリーニングすることにより単離
できる。本発明の遺伝子の配列に相補的な配列を有する
標識オリゴヌクレオチドは、次に、ヒトｃＤＮＡ、ゲノ
ムＤＮＡまたはｍＲＮＡのライブラリーのスクリーニン
グに用い、プローブがハイブリダイズするライブラリー
の構成員を決定する。

【００７２】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、とりわけポリヌクレオチド検定に関連して本明
細書でさらに論じられるように、ヒト疾患の治療法およ
び診断法を見出すための研究物質および材料として使用
してもよい。

【００７３】本発明のポリヌクレオチドは、付加アミノ
酸もしくはカルボキシル末端アミノ酸を加えた成熟タン
パク質、または成熟タンパク質に内在するアミノ酸であ
る（例えば成熟形態が一つ以上のポリペプチド鎖を有す
る場合）ポリペプチドをコードできる。このような配列
は前駆体から成熟形態へのタンパク質のプロセッシング
に役割を担い、タンパク質のトラフィッキング（traffi
cking）を促進し、タンパク質の半減期を延長もしくは
短縮し、またはとりわけ検定もしくは産生のためのタン
パク質の操作を容易にすることができる。一般的には本
来、付加アミノ酸は、細胞酵素によりプロセッシングさ
れ、成熟タンパク質から取り除かれる。

【００７４】１またはそれ以上のプロ配列と融合したポ
リペプチドの成熟形態を有する前駆タンパク質は、ポリ
ペプチドの不活性形態にできる。プロ配列が除去される
と、このような不活性前駆体が通常活性化される。プロ
配列のいくつかまたは全ては、活性化の前に除去でき
る。通常、このような前駆体はプロタンパク質と称され
る。

【００７５】要するに、本発明のポリヌクレオチドは成
熟タンパク質、リーダー配列を加えた成熟タンパク質
（プレタンパク質と称することができる）、プレタンパ
ク質のリーダー配列ではない１またはそれ以上のプロ配
列を有する成熟タンパク質の前駆体、またはリーダー配
列および１またはそれ以上のプロ配列を有するプロタン
パク質の前駆体であるプレプロタンパク質であり、プロ
配列は通常ポリペプチドの活性および成熟形態を産み出
すプロセッシング段階で除去される。

【００７６】寄託物 ＨＲ−１レセプターｃＤＮＡの全長を含有する寄託物
は、前記したアメリカン・タイプ・カルチャー・コレク
ションに寄託した。また前記したとおり、ヒトｃＤＮＡ
寄託物は本明細書では「寄託クローン」または「寄託ク
ローンのｃＤＮＡ」と称する。

【００７７】寄託クローンは、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション、１２３０１パークローンドラ
イブ、ロックビル、メリーランド２０８５２，米国に１
９９６年５月３０日に、大腸菌（E.coli）ＪＭ１０１株
中ベクターｐＢluescriptＳＫ⁺プラスミド（ストラッタ
ジーン、ラジョーラ、カリフォルニア州）、ＡＴＧ−５
３１にて寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号９８０６９が付与
された。

【００７８】寄託は、特許手続き上の微生物寄託の国際
承認に関するブダペスト条約の条件下で為されている。
菌株は、特許が発行されると、変更されることなく、制
限または条件もなく、公衆に分譲される。寄託は当業者
の便宜のためにのみ提供され、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．１１２
条のもとに要求されるような、寄託が実施可能要件であ
ることを承認するものではない。

【００７９】本明細書の配列に関する記載と矛盾する事
象は、寄託物に含まれるポリヌクレオチド配列ならびに
それによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列に
従う。寄託物を製造、使用または販売するためにはライ
センスが必要であり、そのようなライセンスはここで付
与されるものではない。

【００８０】ポリペプチド 本発明はさらに図１−３（配列番号：２）の誘導アミノ
酸配列を有するヒトＨＲ−１レセプターポリペプチドに
関する。

【００８１】本発明はまたこれらのポリペプチドの断
片、類似体および誘導体にも関する。「断片」、「誘導
体」および「類似体」なる用語は図１−３（配列番号：
２）のポリペプチドを称していう場合、このようなポリ
ペプチドと本質的に同一の生物学的機能または活性を保
持するポリペプチド、すなわちＨＲ−１レセプターとし
て機能するポリペプチド、またはポリペプチドがＨＲ−
１レセプターとして機能しない場合でさえリガンドまた
はレセプターに結合する能力を保持するポリペプチド、
例えばレセプターの可溶性形態を意味する。従って、類
似体にはプロタンパク質部分を切断して活性成熟ポリペ
プチドを産生して活性化できるプロタンパク質等があ
る。

【００８２】本発明のポリペプチドは、組換えポリペプ
チド、天然ポリペプチドまたは合成ポリペプチドであっ
てもよい。ある種の好ましい態様では、これは組換えポ
リペプチドである。

【００８３】図１−３（配列番号：２）のポリペプチド
の断片、誘導体もしくは類似体は、（ｉ）１またはそれ
以上のアミノ酸残基が保存的または非保存的アミノ酸残
基（好ましくは保存アミノ酸残基）により置換されたも
ので、このような置換アミノ酸残基は遺伝的コードによ
りコードされたものかコードされていないものでよく、
または（ｉｉ）１またはそれ以上のアミノ酸残基が置換
基を含むもの、または（ｉｉｉ）成熟ポリペプチドがそ
の他の化合物例えばポリペプチドの半減期を伸ばす化合
物（例えばポリエチレングリコール）と融合したもの、
または（ｉｖ）付加アミノ酸が成熟ポリペプチド、例え
ばリーダーもしくは分泌配列、または成熟ポリペプチド
もしくはプロタンパク質配列の精製に用いられる配列と
融合するものであってもよい。このような断片、誘導体
および類似体は本明細書の教示より当業者の範疇である
と考えられる。

【００８４】この点に関する特に好ましい態様は、図１
−３（配列番号：２）に示すＨＲ−１レセプターのアミ
ノ酸配列を有するポリペプチド、それらの変異型、類似
体、誘導体および断片、並びにその断片の変異型、類似
体および誘導体である。また別に、この点に関するとり
わけ好ましい態様は、ＨＲ−１レセプターのアミノ酸配
列を有するポリペプチド、それらの変異型、類似体、誘
導体および断片、並びにその断片の変異型、類似体およ
び誘導体である。

【００８５】特に好ましい変異型は、保存アミノ酸置換
により参照とは異なる変異型である。このような置換体
は、ポリペプチドの特定のアミノ酸を特性の類似した別
のアミノ酸で置換したものである。保存置換で典型的に
認められるのは脂肪族アミノ酸Ａｌａ、ＬｅｕおよびＩ
ｌｅ間での相互の置き換え；水酸基ＳｅｒおよびＴｈｒ
の交換、酸性基ＡｓｐおよびＧｌｕの取り替え、アミド
基ＡｓｎおよびＧｌｎ間での置換、塩基性基Ｌｙｓおよ
びＡｒｇの取り替えおよび芳香性基Ｐｈｅ、Ｔｙｒ間で
の置き換えである。

【００８６】この点に関するさらに好ましい態様は、幾
つか、少しの、５〜１０、１〜５、１〜３、２、１また
は０個のアミノ酸残基を置換、欠失または付加を任意に
組み合わせて施した、図１−３（配列番号：２）のＨＲ
−１レセプターのアミノ酸配列を有する、変異型、類似
体、誘導体および断片、並びにその断片の変異型、類似
体および誘導体である。これらの中でもとりわけ好まし
いのは、ＨＲ−１レセプターの特性および活性を変化さ
せないサイレント置換、付加および欠失である。またこ
の点に関して特に好ましい態様は、保存置換である。最
も好ましいのは、置換していない図１−３（配列番号：
２）のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。本発
明のポリペプチドおよびポリヌクレオチドは単離形態で
提供されるのが好ましく、均質になるまで精製するのが
好ましい。

【００８７】本発明のポリペプチドには、配列番号：２
のポリペプチド（とりわけ成熟ポリペプチド）、および
配列番号：２のポリペプチドに少なくとも８０％の同等
性を有するポリペプチド、さらに好ましくは配列番号：
２のポリペプチドに少なくとも９０％の類似性（さらに
好ましくは少なくとも９０％の同等性）を有するポリペ
プチド、なおさらに好ましくは配列番号：２のポリペプ
チドに少なくとも９５％の類似性（なおさらに好ましく
は少なくとも９５％の同等性）を有するポリペプチドな
どがあり、また通常少なくとも３０個のアミノ酸、さら
に好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸を含むような
ポリペプチド部分を有する、このようなポリペプチド部
分なども含まれる。

【００８８】当業界に周知であるように、二つのポリペ
プチド間の「類似性」は、一つのポリペプチドのアミノ
酸配列およびそれの保存的アミノ酸置換体を第２のポリ
ペプチドの配列と比較して決定する。さらに当業界に周
知であるように、「同等性」はこのような配列の２本鎖
の適合の同等性により決定されるような２個のポリペプ
チドまたは２個のポリヌクレオチド間の配列の関連性の
程度を意味する。同等性および類似性は共に容易に算出
できる（Computational Molecular Biology，Lesk,A.M.
編、オックスフォードユニバーシティープレス、ニュー
ヨーク、1988年；Biocomputing：Informatics and Geno
me Projects，Smith,D.W.編、アカデミックプレス、ニ
ューヨーク、1993年；Computer Analysis of Sequence
Data，パートＩ，Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、
ヒューマンプレス、ニュージャージー、1994年；Sequen
ce Analysis in Molecular Biology，von Heinje,G.、
アカデミックプレス、1987年；およびSequence Analysi
s Primer，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストッ
クトンプレス、ニューヨーク、1991年）。二つのポリヌ
クレオチドまたはポリペプチド配列の同等性および類似
性を測定する方法は多数あるが、「同等性」および「類
似性」なる用語は、当業者に周知である（Sequence Ana
lysis in Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデ
ミックプレス、1987年；Sequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトンプレ
ス、ニューヨーク、1991年；並びにCarillo,H.およびLi
pman,D.，SIAM J.Applied Math.，48:1073（1988））。
二つの配列間の同等性または類似性を測定するために通
常用いられる方法は、Guide to Huge Computers，Marti
n J.Bishop編、アカデミックプレス、サンディエゴ、19
94年およびCarillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.Applie
d Math.，48:1073（1988）等に開示されているが、これ
らに限定するものではない。同等性を測定するための好
ましい方法は、試験する二つの配列間で最も良く適合す
るように設計される。同等性および類似性を測定する方
法は、コンピュータープログラムで組み立てられる。二
つの配列間の同等性および類似性を測定する好ましいコ
ンピュータープログラム法には、ＧＣＧプログラムパッ
ケージ（Devereux,J.ら、Nucleic Acids Research12
(1):387（1984）、BLASTP、BLASTN、FASTA（Atschul,S.
F.ら、J.Molec.Biol.215:403（1990）））等があるが、
これらに限定するものではない。

【００８９】本発明のポリペプチドの断片または部分
は、ペプチド合成により対応するポリペプチド全長を産
生するのに用いることができる；従って、断片はポリペ
プチドの全長を産生するための媒介物質として用いるこ
とができる。本発明のポリヌクレオチドの断片または部
分は本発明のポリヌクレオチド全長を合成するために用
いることができる。

【００９０】断片 また本発明の好ましい態様には、ＨＲ−１レセプターの
断片、特に図１−３（配列番号：２）に示すアミノ酸を
有するＨＲ−１レセプターの断片、および図１−３（配
列番号：２）のＨＲ−１レセプターの変異型および誘導
体の断片等を含むポリペプチドがある。この点に関し
て、断片は前述のＨＲ−１レセプターポリペプチドおよ
びそれらの変異型または誘導体の、全てではなく一部が
全く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドであ
る。

【００９１】このような断片は「フリースタンディン
グ」すなわちその他のアミノ酸またはポリペプチドの一
部かそれに融合したものではなく、一部もしくは領域を
形成するより大きなポリペプチド内に含まれてもよい。
より大きなポリペプチド内に含まれる場合、本明細書で
論じる断片は単一の連続した領域を形成するのが最も好
ましい。しかしながら、幾つかの断片が単一の、より大
きなポリペプチド内に含まれてもよい。例えば、ある好
ましい態様は、ＨＲ−１レセプター断片のアミノ末端に
融合した異型のプレおよびプロポリペプチド領域、およ
び断片のカルボキシル末端に融合した付加領域を有す
る、宿主中に発現するように設計した前駆体ポリペプチ
ドに含まれる本発明のＨＲ−１レセプターポリペプチド
の断片に関する。従って、本明細書の意図する一つの態
様における断片は、ＨＲ−１レセプター由来の融合ポリ
ペプチドまたは融合タンパク質の一つのまたは複数の部
分を意味する。

【００９２】本発明のポリペプチド断片の代表的な例と
しては、約５〜１５、１０〜２０、１５〜４０、３０〜
５５、４１〜７５、４１〜８０、４１〜９０、５０〜１
００、７５〜１００、９０〜１１５、１００〜１２５お
よび１１０〜１１３のアミノ酸の長さのポリペプチドが
ある。

【００９３】これに関連して、特に列挙した範囲および
複数の範囲がどちらかの末端または両方の末端の幾つか
の、少しの、５、４、３、２または1個のアミノ酸によ
り、より大きくまたはより小さくなることもある。これ
に関連して、例えば、約４０〜９０個のアミノ酸は、４
０プラスまたはマイナス幾つかの、少しの、５、４、
３、２または１個のアミノ酸、から９０プラスまたはマ
イナス幾つかの、少しの、５、４、３、２または１個の
アミノ酸、すなわち広義には４０マイナス幾つかのアミ
ノ酸から９０プラス幾つかのアミノ酸、狭義には４０プ
ラス幾つかのアミノ酸から９０マイナス幾つかのアミノ
酸の範囲とすることができることを意味する。

【００９４】この点に関して、より好ましくは、どちら
かまたは両方の末端で５個ほどのアミノ酸をプラスまた
はマイナスした前記した範囲である。とりわけ好ましく
は、上述の末端のどちらかまたは両方で３個ほどのアミ
ノ酸をプラスまたはマイナスした上述の範囲である。と
りわけ好ましくは、どちらかまたは両方の末端で１個の
アミノ酸をプラスまたはマイナスした範囲、または付加
または欠失のない上述の範囲である。この点に関して、
とりわけ最も好ましくは、約５〜１５、１０〜２０、１
５〜４０、３０〜５５、４１〜７５、４１〜８０、４１
〜９０、５０〜１００、７５〜１００、９０〜１１５、
１００〜１２５および１１０〜１１３のアミノ酸の長さ
のポリペプチドの断片である。

【００９５】本発明のとりわけ好ましい断片は、ＨＲ−
１レセプターのトランケーション突然変異である。トラ
ンケーション突然変異体には、アミノ末端を含む残基の
一連の連続（すなわち連続領域、部分または部位）もし
くはカルボキシル末端を含む残基の一連の連続の欠失、
または二重トランケーション突然変異のように一つはア
ミノ末端を含み、一つはカルボキシル末端を含む二つの
残基の一連の連続の欠失を除いた、図１−３（配列番
号：２）のアミノ酸配列を有するＨＲ−１レセプターポ
リペプチド、またはそれらの変異型もしくは誘導体など
がある。提示した大きさの範囲の断片もまたトランケー
ション断片の好ましい態様であり、これは通常の断片の
中でも特に好ましい。

【００９６】また本発明の好ましい態様は、ＨＲ−１レ
セプターの構造的または機能的属性により特徴づけられ
た断片である。この点に関する本発明の好ましい態様に
は、ＨＲ−１レセプターのアルファーヘリックスおよび
アルファーヘリックス形成領域（「アルファー領
域」）、ベータシートおよびベータシート形成領域
（「ベータ領域」）、ターンおよびターン形成領域
（「ターン領域」）、コイルおよびコイル形成領域
（「コイル領域」）、親水性領域、疎水性領域、アルフ
ァー両極性領域、ベータ両極性領域、可変領域、表面形
成領域および高抗原性指標領域を含む断片などがある。

【００９７】この点に関する非常に好ましい断片は、上
述の幾つかの様相のような幾つかの構造的様相をくみあ
わせたＨＲ−１レセプターの領域を含む断片である。こ
の点に関して、図１−３（配列番号：２）の約１０から
約２０、約４０から約５０、約７０から約９０および約
１００から約１１３の残基により、領域が定義され、全
てターン領域、親水性領域、可変領域、表面形成領域お
よび高抗原性指標領域に非常に特徴的なアミノ酸組成物
により特性化され、特に好ましい領域である。このよう
な領域は、大きなポリペプチド内に包含されてもよく、
また単独で上述の本発明の好ましい断片と成り得る。こ
の段落で用いる「約」なる用語は、一般に前記した断片
について示された意義を有する。

【００９８】さらに好ましい領域は、ＨＲ−１レセプタ
ーの活性を媒介する領域である。この点に関して最も好
ましくは、ＨＲ−１レセプターの化学的、生物学的また
はその他の活性を有する断片であり、類似の活性もしく
は改善された活性のある、または望ましくない活性を減
じた断片である。この点に関して非常に好ましい断片
は、配列もしくは位置または両方の配列において、およ
び関連するポリペプチド例えばヒトＩＬ−５レセプター
を含む関連するポリペプチドの、活性な領域に相同であ
る領域を含む断片である。この点に関して、とりわけ好
ましい断片は上述のトランケーション突然変異体であ
る。本発明はまたとりわけ前述の断片をコードするポリ
ヌクレオチド、その断片をコードするポリヌクレオチド
にハイブリダイズするポリヌクレオチド、特にストリン
ジェント状態でハイブリダイズするポリヌクレオチド、
およびその断片をコードするポリヌクレオチドを増幅す
るＰＣＲプライマーのようなポリヌクレオチドに関す
る。この点に関して、好ましいポリヌクレオチドは、上
述の様に、好ましい断片に対応するポリヌクレオチドで
ある。

【００９９】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含むベクタ
ー、本発明のベクターで遺伝子操作する宿主細胞および
組換え技法による本発明のポリペプチドの産生にも関す
る。宿主細胞は、遺伝子操作して、ポリヌクレオチドを
組み込み、本発明のポリペプチドを発現することができ
る。例えば感染、形質導入、トランスフェクション、ト
ランスベクションおよび形質転換の周知の技法を用い
て、ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入できる。ポリヌ
クレオチドは単独でまたは他のポリヌクレオチドと共に
導入できる。このようなその他のポリヌクレオチドは別
個に導入、同時導入または本発明のポリヌクレオチドに
結合させて導入できる。従って、例えば哺乳動物細胞で
同時トランスフェクションおよび選別するための標準的
な技法を用いて、選別マーカーをコードする別の離れた
ポリヌクレオチドと共に、本発明のポリヌクレオチドを
宿主細胞にトランスフェクトできる。この場合、ポリヌ
クレオチドは通常遺伝子的に安定して宿主細胞ゲノムに
組み込まれる。

【０１００】また別に、ポリヌクレオチドは宿主細胞に
おける伸長のための選別マーカーを含有するベクターに
結合できる。ベクター構築は上述の技法により、宿主細
胞に導入できる。一般的に、プラスミドベクターは沈殿
例えばリン酸カルシウム沈殿中、または荷電脂質との複
合体中ＤＮＡとして導入する。ポリヌクレオチドを宿主
に導入するために、電気泳動をも用いることができる。
ベクターがウイルスである場合、インビトロでパッケー
ジングまたはパッケージング細胞に導入でき、パッケー
ジングウイルスを細胞に形質導入できる。本発明の態様
に準じた、ポリヌクレオチドの製造および細胞へのポリ
ヌクレオチドの導入に適した種々の技法は、当業者に周
知であり、日常的に用いられるものである。このような
技法は上述のSambrookらに詳細に報告されており、これ
らの技法を詳細に説明する多くの実験マニュアルの説明
となるものである。

【０１０１】本発明のこの態様に準じて、ベクターは、
例えばプラスミドベクター、一本または二本鎖ファージ
ベクター、一本または二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡウイル
スベクターなどでよい。このようなベクターはポリヌク
レオチド、好ましくはＤＮＡとして、ＤＮＡおよびＲＮ
Ａの細胞への導入のための周知の技術により細胞に導入
できる。ベクターがファージおよびウイルスベクターで
ある場合もまた、感染および形質導入のため周知の技術
により、パッケージ化またはキャプシド化したウイルス
として細胞に導入でき、これは好ましいことである。ウ
イルスベクターは複製コンピーテントかまたは複製不能
でよい。後者の場合のウイルスの増殖は通常完全化した
宿主細胞にのみ起こる。

【０１０２】中でも好ましいベクターは、ある観点で
は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチを発現
するベクターである。一般に、このようなべクターは、
発現させるポリヌクレオチドに機能的に連鎖した、宿主
における発現に有効なシス作用制御領域を含む。適当な
トランス作用因子は宿主により供給されるか、完全化ベ
クターにより供給されるか、または宿主への導入時にベ
クター自身により供給されるかのいずれかである。

【０１０３】この点に関するある態様では、ベクターは
特異的発現を提供する。このような特異的発現は、誘導
可能な発現もしくは特定の型の細胞においてのみ発現す
るか、または誘導可能および細胞特異性の両方でよい。
誘導可能なベクターのうちとりわけ好ましいベクター
は、温度および栄養添加物など操作が容易である環境因
子により発現を誘導できるベクターである。本発明のこ
の態様に適した種々ベクターには原核および真核宿主で
用いられる構成および誘導可能な発現ベクター等があ
り、当業者に周知であり、通常的に用いられている。操
作した宿主細胞は、従来の栄養培地で培養でき、とりわ
けプロモーターの活性化、形質転換体の選別、または遺
伝子の増幅に適するように改変できる。発現のために選
別した宿主で以前に用いた培養条件例えば温度、ｐＨ等
は、当業者に明白であるように、通常本発明のポリペプ
チドの発現に適している。

【０１０４】非常に多くの種類のベクターが、本発明の
ポリペプチドを発現するために使用できる。このような
ベクターには、染色体、エピソームおよびウイルス由来
のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオフ
ァージ由来、酵母エピソーム由来、酵母染色体要素由
来、例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、例えば
ＳＶ４０、ワクシナウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウ
イルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等の
ウイルス由来のベクター、並びにそれらを組み合わせた
物に由来するベクター、例えばプラスミドおよびバクテ
リオファージ遺伝的要素由来のベクター、例えばコスミ
ドおよびファージミド（phagemids）等があり、全て本
発明の態様に準じた発現に用いることができる。通常宿
主中にポリペプチドを発現するためのポリヌクレオチド
を保持、伸長または発現するのに適した任意のベクター
が、この点に関する発現に使用できる。

【０１０５】周知のおよび日常的な種々の任意の技術に
より、適当なＤＮＡ配列をベクターに挿入できる。一般
に、１またはそれ以上の制限エンドヌクレアーゼでＤＮ
Ａ配列および発現ベクターを切断し、Ｔ４ＤＮＡリガー
ゼを用いて制限断片を結合することにより、発現のため
のＤＮＡ配列を発現ベクターに結合する。この目標のた
めに用いることができる制限およびライゲーション方法
は、当業者に周知であり、日常的に用いられているもの
である。この点に関して、および別法を用いた発現ベク
ターの構築のための適切な方法もまた、当業者に周知で
あり、日常的に用いられているものであり、本明細書に
引用したSambrookら、に非常に詳細に記載されている。

【０１０６】発現ベクターのＤＮＡ配列は、適当な（複
数の）発現制御配列、例えばｍＲＮＡ転写を指示するプ
ロモーター等に機能的に連結する。このようなプロモー
ターの代表的なものとしては、幾つか周知のプロモータ
ーの名前を挙げると、ファージラムダＰＬプロモータ
ー、大腸菌（E.coli）ｌａｃ、ｔｒｐおよびｔａｃプロ
モーター、ＳＶ４０初期および後期プロモーター並びに
レトロウイルスＬＴＲのプロモーター等がある。本発明
の態様に用いるのに適した、記載していない多くのプロ
モーターが周知であり、本明細書の記載および実施例で
説明する方法で当業者に容易に用いることができるとい
うことは、理解されよう。

【０１０７】一般に、発現構築物は転写開始および終了
部位を含み、転写された領域では翻訳のためのリボソー
ム結合部位を含む。構築物により発現される成熟転写物
のコード部分には、最初に翻訳開始ＡＵＧ、そして翻訳
されるポリペプチドの末端に適当に位置する停止コドン
でを含む。さらに構築物は、発現を制御および引き起こ
す調節領域を含有できる。通常、多くの一般的な慣習的
な方法に準じて、このような領域は転写の調節により、
例えばとりわけレプレッサー結合部位およびエンハンサ
ーとして操作される。

【０１０８】伸長および発現のためのベクターは通常選
別可能なマーカーを含有する。このようなマーカーはま
た増幅にも適するし、ベクターがこの目的のために更な
るマーカーを含有することもできる。この点に関して、
発現ベクターは、形質転換した宿主細胞の選別のための
表現型特性を提供する、１またはそれ以上の選別マーカ
ーを含有する。好ましいマーカーにはジヒドロフォレー
トリダクターゼまたは真核細胞培養用ネオマイシン抵
抗、大腸菌およびその他の細菌の培養用テトラサイクリ
ン、またはアンピシリン抵抗遺伝子等がある。

【０１０９】本明細書記載の適当なＤＮＡ配列を含有す
るベクター、および適当なプロモーター、およびその他
の適当な調節配列は、望ましいポリペプチドを適当な宿
主に発現するのに適した種々の周知の技術を用いて、適
当な宿主に導入できる。適当な宿主の代表的な例として
は、細菌細胞例えば大腸菌、ストレプトミセスおよびネ
ズミチフス菌（Salmonella typhimurium）細胞；真菌細
胞例えば酵母細胞；昆虫細胞例えばドロソフィラＳ２
（Drosophila S2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodopt
era Sf9）細胞；動物細胞例えばＣＨＯ，ＣＯＳおよび
ボウズ（Bows）黒色腫細胞；並びに植物細胞等がある。
非常に多様な発現構築のための宿主が周知であり、本明
細書の開示により、本発明の態様に準じたポリペプチド
を発現するための宿主の選択を、当業者は容易にでき
る。

【０１１０】さらに、本発明はまた上述の配列を１また
はそれ以上含む、組換え構築物例えば発現構築物をも含
む。構築物には、本発明のこのような配列が挿入されて
いるベクター、例えばプラスミドまたはウイルスプラス
ミド等も含まれる。この配列は正または逆配向で挿入で
きる。この点に関して、ある好ましい態様において、構
築物には、さらにその配列に機能的に連結した制御配列
例えばプロモーター等がある。非常に多くの適当なベク
ターおよびプロモーターが当業者に周知であり、本発明
の使用に適した多くのベクターが市販により入手可能で
ある。

【０１１１】市販されている以下のベクターを実例とし
て提示する。細菌中で使用するのに好ましいベクターに
は、キアゲンより入手可能なｐＱＥ７０、ｐＱＥ６０お
よびｐＱＥ−９；ストラッタジーンより入手可能なｐＢ
Ｓベクター、ファジェスクリプト（Phagescript）ベク
ター、ブルースクリプト（Bluescript）ベクター、ｐＮ
Ｈ８Ａ、ｐＮＨ１６ａ、ｐＮＨ１８ＡおよびｐＮＨ46
Ａ；並びにファルマシアより入手可能なｐｔｒｃ９９
ａ、ｐＫＫ２２３−３、ｐＫＫ２３３−３、ｐＤＲ５４
０、ｐＲＩＴ５等がある。真核生物ベクターで好ましい
ものは、ストラッタジーンより入手可能なｐＷＬＮＥ
Ｏ、ｐＳＶ２ＣＡＴ、ｐＯＧ４４、ｐＸＴ１およびｐＳ
Ｇ；並びにファルマシアより入手可能なｐＳＶＫ３、ｐ
ＢＰＶ、ｐＭＳＧおよびｐＳＶＬ等がある。これらのベ
クターは単に多くの市販のベクターの説明のために列挙
しており、本発明の態様に準じた使用のために、当業者
に入手可能なベクターである。宿主内で本発明のポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドを例えば導入、保持、伸
長または発現するのに適した任意のその他のプラスミド
またはベクターが、本発明のこの態様において使用でき
ることは理解されよう。

【０１１２】プロモーター領域は、プロモーター領域を
欠いたリポーター転写ユニット、例えばクロラムフェニ
コールアセチルトランスフェラーゼ（”ＣＡＴ”）転写
ユニットを、制限部位または志願プロモーター（candid
ate promoter）断片すなわちプロモーターを含み得る断
片を導入する部位の下流に含有するベクターを用いて、
任意の望ましい遺伝子から選別できる。周知の様に、ｃ
ａｔ遺伝子の上流の制限部位でプロモター含有断片をベ
クターに導入すると、ＣＡＴ活性の産生を引き起こし、
標準的なＣＡＴ検定により検出できる。この目標に適し
たベクターは周知であり、容易に入手可能である。2個
のこのようなベクターはｐＫＫ２３２−８およびｐＣＭ
７である。このように本発明のポリヌクレオチドの発現
のためのプロモーターには、周知で容易に入手できるプ
ロモーターのみならず、リポーター遺伝子を用いて前述
の技術により容易に得ることができるプロモーターもあ
る。

【０１１３】本発明に準じたポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの発現に適した、周知のの細菌性プロモータ
ーには、大腸菌ｌａｃＩおよびｌａｃＺプロモーター、
Ｔ３およびＴ７プロモーター、ｇｐｔプロモーター、ラ
ムダＰＲ、ＰＬプロモーター並びにｔｒｐプロモーター
等がある。この点に関して適当な周知の真核生物プロモ
ーターには、ＣＭＶ即時型プロモーター、ＨＳＶチミジ
ンキナーゼプロモーター、初期および後期ＳＶ４０プロ
モーター、レトロウイルスＬＴＲのプロモーター、例え
ばラウス肉腫ウイルス（”ＲＳＶ”）のプロモーター並
びにメタロチオネインプロモーター例えばマウスメタロ
チオネイン−Ｉプロモーター等がある。宿主細胞におけ
る発現のための適当なベクターおよびプロモーターの選
別は周知の方法であり、発現ベクター構築、宿主へのベ
クターの導入および宿主中での発現に必要な技術は当業
者に通常的に用いられるものである。

【０１１４】本発明はまた上述の構築物を含有する宿主
細胞にも関する。宿主細胞は高等な真核細胞、例えば哺
乳動物細胞、もしくは下等な真核細胞、例えば酵母細胞
でよく、または宿主細胞は原核細胞例えば細菌細胞でも
よい。構築物の宿主細胞への導入はリン酸カルシウムト
ランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トラ
ンスフェクション、カチオン脂質媒介トランスフェクシ
ョン、電気泳動、形質導入、感染またはその他の方法に
より影響を受け得る。このような方法は多くの標準的な
実験マニュアル、例えばDavisら、Basic Methods in Mo
lecular Biology，（1986）に記載されている。

【０１１５】宿主内の構築物は通常の方法を用いて、組
換え配列によりコードされる遺伝子産物を産生すること
ができる。また別に、本発明のポリペプチドは通常のペ
プチド合成により合成的に産生できる。成熟タンパク質
は哺乳動物細胞、酵母、細菌またはその他の細胞中、適
当なプロモーターの支配下で発現できる。細胞フリーの
翻訳系は本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを用い
たこのようなタンパク質の産生にも用いることができ
る。原核および真核生物宿主での使用に適当なクローニ
ングおよび発現ベクターは、Sambrookら、Molecular Cl
oning ：A Laboratory Manual，第二編、コールドスプ
リングハーバーラボラトリープレス、コールドスプリン
グハーバー、ニューヨーク州（1989）に記載されてい
る。

【０１１６】一般的に、組換え発現ベクターは複製源、
下流の構造配列の転写を指示する高発現遺伝子に由来す
るプロモーターおよびベクターに曝露した後、ベクター
含有細胞の単離を可能にする選別マーカーなどを含む。
なかでも適切なプロモーターには、グルコース分解酵素
例えば、とりわけ３−ホスホグリセレートキナーゼ（”
ＰＧＫ”）ａ−因子、酸ホスファターゼおよび熱ショッ
クタンパク質等をコードする遺伝子に由来するプロモー
ター等がある。選別マーカーには、大腸菌のアンピシリ
ン抵抗遺伝子およびビール酵母菌のｔｒｐ１遺伝子等が
ある。

【０１１７】高等真核細胞による本発明のポリペプチド
をコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列をベク
ターに挿入することにより増強させることができる。エ
ンハンサーは、該宿主細胞型におけるプロモーターの転
写活性を増強するように作用する、通常約１０〜３００
塩基対（bp）のＤＮＡのシス作用要素である。エンハン
サーの例としては、１００〜２７０塩基対での複製起点
の後位置に位置するＳＶ４０エンハンサー、サイトメガ
ロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の
後位置のポリオーマエンハンサー、およびアデノウイル
スエンハンサー等がある。

【０１１８】本発明のポリペプチドの異型の構造配列を
コードする本発明のポリヌクレオチドは、通常標準法を
用いてベクターに挿入し、発現用プロモーターに機能的
に連結する。ポリヌクレオチドは、転写開始部位がリボ
ソーム結合部位の５’にちょうどくるように位置決定す
る。リボソーム結合部位は、発現すべきポリペプチドの
翻訳を開始するＡＵＧの５’である。通常、開始コド
ン、通常ＡＵＧで始まるオープンリーディングフレーム
は他になく、リボソーム結合部位および開始ＡＵＧの間
にある。また、通常、ポリペプチドの末端に翻訳停止コ
ドンがあり、転写された領域の３’末端に適当に配置さ
れたポリアデニル化シグナルおよび転写終了シグナルが
ある。

【０１１９】翻訳タンパク質を、小胞体内腔、ペリプラ
スミックスペースまたは細胞外環境へ分泌するために、
適当な分泌シグナルを発現されるポリペプチドに挿入す
ることができる。シグナルはポリペプチドに対して内因
性でよく、または異型性のシグナルでもよい。

【０１２０】ポリペプチドは改変した形態、例えば融合
タンパク質の形態で発現でき、分泌シグナルのみならず
付加的な異型性機能的領域をも含み得る。このように、
例えば付加アミノ酸とりわけ荷電アミノ酸領域は、ポリ
ペプチドのＮ−末端に付加し、精製中またはそれに続く
操作および保存中の、宿主細胞内での安定性および持続
性を改善する。また、その領域はポリペプチドに付加し
て精製を容易にできる。このような領域はポリペプチド
の最終的な調製の前に除去できる。ペプチド部分をポリ
ペプチドに付加し、とりわけ、分泌または排泄を引き起
こし、安定性を改善し、および精製を容易にするのは、
当業界でよくあることであり、通常的な技術である。

【０１２１】本発明に準じたポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの伸長、保持または発現に適した原核生物宿
主には、種々大腸菌（Escherichia coli），枯草菌（Ba
cillus subtilis）およびネズミチフス菌（Salmonella
typhimurium）等がある。シュードモナス属、ストレプ
トミセス属、およびブドウ球菌属は、この点に関して、
適切な宿主である。さらに、多くのその他の宿主も当業
者に周知であり、使用できる。

【０１２２】細菌使用のための有用な発現ベクターの代
表的なものとして、周知のクローニングベクターｐＢＲ
３２２（ＡＴＣＣ３７０１７）の遺伝的要素を含む市販
されているプラスミド由来の選別マーカーおよび細菌の
複製起点等があるが、これに限定するものではない。こ
のような市販されているベクターには、例えばｐＫＫ２
２３−３（ファルマシアファインケミカルズ、ウプサ
ラ、スウェーデン）およびＧＥＭ１（プロメガバイオテ
ック、メディソン、ウイスコンシン州、米国）等があ
る。これらのｐＢＲ３２２”骨格”部分は適当なプロモ
ーターおよび構造配列と結合して発現される。

【０１２３】適当な宿主株の形質転換および適当な細胞
密度までの宿主株の成長に続いて、選択したプロモータ
ーが誘導可能な場合、適当な手段（例えば温度シフトま
たは化学的インデューサーへの曝露）によりそのプロモ
ーターを誘導し、細胞は更なる期間培養する。通常、次
に細胞を遠心により収穫し、物理学的または化学的手段
により分解し、得られた粗抽出物をさらなる精製用に保
持する。

【０１２４】タンパク質の発現に用いた微生物細胞は、
凍結−融解サイクル、ソニケーション、機械的分解また
は細胞溶解物質の使用等の、任意の通常的な方法により
分解でき、このような方法は当業者に周知である。種々
の哺乳動物細胞培養系も同様に発現に用いることができ
る。哺乳動物発現系の例としては、サル腎繊維芽細胞Ｃ
ＯＳ−７ライン等があり、Gluzmanら、Cell，23:175（1
981）に記載されている。適合するベクターを発現でき
るその他のセルラインには、例えばＣ１２７、３Ｔ３、
ＣＨＯ、ＨｅＬａ、ヒト腎２９３およびＢＨＫセルライ
ン等がある。

【０１２５】哺乳動物発現ベクターには、複製起点、適
当なプロモーターおよびエンハンサー等があり、また発
現に必要な、任意の必須リボソーム結合部位、ポリアデ
ニル化部位、スプライス供与部位および受容部位、転写
終止配列および５’フランキング非転写配列なども含ま
れる。この点に関する好ましい態様において、ＳＶ４０
スプライス部位およびＳＶ４０ポリアデニル化部位由来
のＤＮＡ配列はこれらの型の獲得非転写遺伝要素に用い
られる。

【０１２６】ＨＲ−１レセプターポリペプチドは、硫酸
アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオン
または陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロ
ースクロマトグラフィー、疎水性干渉クロマトグラフィ
ー（hydrophobic interaction chromatography）、親和
性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィー等の周
知の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製
できる。最も好ましくは、高速液体クロマトグラフィー
（”ＨＰＬＣ”）を精製に用いる。ポリペプチドが単離
および／または精製中に変性した場合、再び活性な立体
配座にするために、再折り畳みタンパク質のための周知
の技術を用いることができる。

【０１２７】本発明のポリペプチドには、天然に精製さ
れた産物、化学合成法の産物および組換え法により原核
または真核宿主、例えば細菌、酵母、高等植物、昆虫お
よび哺乳動物細胞から産生した産物等がある。組換え産
生法において用いる宿主に応じて、本発明のポリペプチ
ドはグリコシル化または非グリコシル化してよい。さら
に、本発明のポリペプチドはまた、ある場合は宿主媒介
工程の結果として、開始改変メチオニン残基をも含有で
きる場合もある。

【０１２８】ＨＲ−１レセプターポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドは本発明に準じて、種々の適用、とりわ
けＨＲ−１レセプターの化学的および生物学的特性を利
用する適用のために使用できる。さらに、これらは細
胞、組織および生体の障害の診断および処置に関連して
適用される。これらの本発明の態様は、さらに以下の記
載により説明する。

【０１２９】ポリヌクレオチド検定 本発明はまた、例えば診断用試薬として相補的ポリヌク
レオチドを検出するためのＨＲ−１レセプターポリヌク
レオチドの使用にも関する。機能不全に関与するＨＲ−
１レセプターの突然変異型の検出は、ＨＲ−１レセプタ
ーの過少発現、過剰発現または発現の変化の結果もたら
される疾患または疾患に対する感受性を付与できる、ま
たは明確にできる診断方法を提供する。ヒトＨＲ−１レ
セプター遺伝子の突然変異を担うものは種々の技術によ
りＤＮＡレベルで検出できる。診断用の核酸は患者の細
胞例えば血液、尿、唾液、組織生検および剖検材料より
得ることができる。ゲノムＤＮＡは直接的に検出するの
に使用できるか、または分析の前にＰＣＲを用いること
により酵素的に増幅できる（Saikiら、Nature，324:163
-166（1986））。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた同じ方法
で用いることができる。例としては、ＨＲ−１レセプタ
ーをコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーはＨＲ
−１レセプター発現および突然変異の同定および分析に
用いることができる。例えば、欠損および挿入は正常の
遺伝子型に比較して増幅産物の大きさの変化により検出
できる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを放射性標識化ＨＲ
−１レセプター ＲＮＡに、また別に放射性標識化ＨＲ
−１レセプターアンチセンスＤＮＡ配列にハイブリダイ
ズすることにより同定できる。完全に対合した配列はＲ
Ｎアーゼ消化により、または融解温度の差により、誤対
合二重らせんから区別できる。

【０１３０】参照遺伝子および突然変異を有する遺伝子
の配列の違いはまた、直接的なＤＮＡシークエンシング
により表すこともできる。さらに、クローン化ＤＮＡ部
分は特異的ＤＮＡ部分を検出するためのプローブとして
用いることができる。このような方法の感度はＰＣＲを
適当に使用することにより、または別の増幅方法により
非常に増強させることができる。例えば、シークエンシ
ングプライマーは二本鎖ＰＣＲ産物または改変ＰＣＲに
より生じる一本鎖鋳型分子と共に用いられる。配列決定
は、放射性標識化ヌクレオチドを用いる通常の方法によ
り、または蛍光タグを用いる自動シークエンシング法に
より行うことができる。

【０１３１】ＤＮＡ配列の差に基づく遺伝的試験は、変
性物質を伴うまたは伴わないゲル中のＤＮＡ断片の電気
泳動の可動性の変化を検出することにより達成できる。
小さな配列の欠損および挿入は高分析能ゲル電気泳動に
より可視化できる。異なる配列のＤＮＡ断片は、異なる
ＤＮＡ断片の可動性が特異的融解または部分的融解温度
に準じてゲル中の異なる位置で遅延する、変性ホルムア
ミドグラジエントゲル上で区別できる（例えばMeyers
ら、Science，230:1242（1985）参照）。

【０１３２】特異的な位置での配列の変化はまた、ヌク
レアーゼ保護検定例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護また
は化学的切断法によっても表すことができる（例えばCo
ttonら、Proc.Natl.Acad.Sci.,米国，85:4397-4401（19
85））。このように、特異的ＤＮＡ配列の検出は、ハイ
ブリダイゼーション、ＲＮアーゼ保護、化学的切断、直
接的ＤＮＡシークエンシングまたは制限酵素の使用（例
えば制限断片長多形性（restriction fragment length
polymorphism：「ＲＦＬＰ」））、ＳＳＣＰおよびゲノ
ムＤＮＡのサザンブロッティングにより達成できる。よ
り通常的なゲル電気泳動およびＤＮＡシークエンシング
に加えて、突然変異もまたインサイトウ分析（in situ
analysis）によっても検出できる。

【０１３３】本発明のさらなる態様に準じて、感染に対
する抵抗性のレベルの低下、喘息、種々アレルギーおよ
び造血性疾患、または前述の異常に対する感受性を決定
する方法を提供する。このように、ＨＲ−１レセプター
における突然変異は、感染のレベル低下、喘息、種々ア
レルギーおよび造血性疾患に対する感受性を示し、上述
の核酸配列はこのような感受性の確認のための検定に用
いることができる。このように、例えば、この検定は本
明細書に記載するヒトＨＲ−１レセプタータンパク質
の、感染に対する抵抗性のレベルの低下、喘息、種々ア
レルギーおよび造血性疾患に対する感受性を示すような
突然変異、例えば欠損、トランケーション、挿入、フレ
ームシフト等を決定するために用いることができる。

【０１３４】突然変異は例えばＤＮＡシークエンシング
検定により確認できる。限定するものではないが、血液
等の組織試料は、ヒト患者から得る。試料を当業界で周
知の方法により、ＲＮＡ捕獲するための処理を行う。ｃ
ＤＮＡの最初の鎖はｍＲＮＡ上に存在するポリアデノシ
ン配列にハイブリダイズするポリチミジン残基から成る
オリゴヌクレオチドプライマーを加えることにより、Ｒ
ＮＡ試料から合成させる。逆転写酵素およびデオキシヌ
クレオチドを加えてｃＤＮＡの最初の鎖を合成する。プ
ライマー配列は、本発明のＤＮＡ修復タンパク質のＤＮ
Ａ配列に基づいて合成する。プライマー配列は通常少な
くとも１５の連続的な塩基から成り、少なくとも３０ま
たは５０もの連続的な塩基を含有できる。

【０１３５】本発明の遺伝子に突然変異を担うものはま
た、種々の技術により、ＤＮＡレベルで検出できる。診
断用の核酸は患者の細胞例えば、限定するものではない
が、血液、尿、唾液、組織生検および剖検材料より得る
ことができる。ゲノムＤＮＡは直接的に検出するのに使
用できるか、または分析の前にＰＣＲを用いることによ
り酵素的に増幅できる（Saikiら、Nature，324:163-166
（1986））。ＲＴ−ＰＣＲもまた突然変異を検出するた
めに用いることができる。ＲＴ−ＰＣＲは自動検出系例
えばジーンスキャンと組み合わせて用いるのがとりわけ
好ましい。ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた同じ目的で、Ｐ
ＣＲまたはＲＴ−ＰＣＲで用いることができる。例を挙
げると、ＨＲ−１レセプターをコードする核酸に相補的
なＰＣＲプライマーは、突然変異を同定および分析する
のに用いることができる。例えば、欠損および挿入は正
常の遺伝子型に比較して増幅産物の大きさの変化により
検出できる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを放射性標識化
ＲＮＡに、また別に放射性標識化アンチセンスＤＮＡ配
列にハイブリダイズすることにより同定できる。完全に
対合した配列はＲＮアーゼＡ消化により、または融解温
度の差により、誤対合二重らせんから区別できる。

【０１３６】プライマーは患者由来の試料から単離した
ＨＲ−１レセプターｃＤＮＡを増幅するために用いるこ
とができる。本発明はまた５’および／または３’末端
から除去した１、２、３または４個のヌクレオチドを有
するプライマーを提供する。このプライマーは、患者か
ら単離した遺伝子を増幅するために用いることができ、
その遺伝子をＤＮＡ配列を明示するための種々技術に供
することができる。このようにして、ＤＮＡ配列におけ
る突然変異は診断できる。これに関連して用いるプライ
マーは、当業者に明白である。

【０１３７】参照遺伝子および突然変異を有する遺伝子
の配列の違いはまた、直接的なＤＮＡシークエンシング
法により表すこともできる。さらに、クローン化ＤＮＡ
部分は特異的ＤＮＡ部分を検出するためのプローブとし
て用いることができる。この方法の感度はＰＣＲを組み
合わせた場合に非常に増強される。例えば、シークエン
シングプライマーは二本鎖ＰＣＲ産物または改変ＰＣＲ
により生じる一本鎖鋳型分子と共に用いられる。配列決
定は、放射性標識化ヌクレオチドを用いる通常の方法に
より、または蛍光タグを用いる自動シークエンシング法
により行うことができる。

【０１３８】ＤＮＡ配列の差に基づく遺伝的試験は、変
性物質を伴うまたは伴わないゲル中のＤＮＡ断片の電気
泳動の可動性の変化を検出することにより達成できる。
小さな配列の欠損および挿入は高分析能ゲル電気泳動に
より可視化できる。異なる配列のＤＮＡ断片は、異なる
ＤＮＡ断片の可動性が特異的融解または部分的融解温度
に準じてゲル中の異なる位置で遅延する、変性ホルムア
ミドグラジエントゲル上で区別できる（例えばMeyers
ら、Science，230:1242（1985）参照）。特異的な位置
での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護検定例えばＲ
ＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断法によっても
表すことができる（例えばCottonら、PNAS,米国，85:43
97-4401（1985））。

【０１３９】このように、特異的ＤＮＡ配列の検出およ
び／または配列レベルの定量は、ハイブリダイゼーショ
ン、ＲＮアーゼ保護、化学的切断、直接的ＤＮＡシーク
エンシングまたは制限酵素の使用、（例えば制限断片長
多形性（”ＲＦＬＰ”））およびゲノムＤＮＡのサザン
ブロッティング等により達成できる。本発明は、患者由
来の試料より、図１（配列番号：１）の配列を有するポ
リヌクレオチドを発現レベルの低下を測定することを含
む、疾患、とりわけ感染に対する抵抗性レベルの低下、
喘息、種々アレルギーおよび造血性障害の診断方法を提
供する。ポリヌクレオチドの発現の低下は、ポリヌクレ
オチドの定量のための当業者に周知の方法、例えばＰＣ
Ｒ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッテ
ィングおよびその他のハイブリダイゼーション法等の任
意の方法を用いて測定することができる。

【０１４０】より通常的なゲル電気泳動およびＤＮＡシ
ークエンシングに加えて、突然変異もまたインサイトウ
分析により検出できる。ｃＤＮＡクローンの分裂中期染
色体分散に対する蛍光インサイトウハイブリダイゼーシ
ョン（ＦＩＳＨ）は、正確な染色体位置を提供するため
に用いることができる。

【０１４１】これを実施する方法の例を挙げると、ＨＲ
−１レセプター ＤＮＡはＱＩＡＥＸ ＩＩ ＤＮＡ精製
キット（キアゲンインコーポレーティッド、チャッツウ
ォース、カリフォルニア州）で消化および精製し、スー
パーＣｏｓ１コスミドベクター（ストラッタジーン、ラ
ジョーラ、カリフォルニア州）にライゲートする。ＤＮ
Ａをキアゲンプラスミド精製キット（キアゲンインコー
ポレーティッド、チャッツウォース、カリフォルニア
州）を用いて精製し、１ｍｇをバイオニックラベリング
キット（ギブコＢＲＬ、ライフテクノロジーズインコー
ポレーティッド、ガイザースベルグ、メリーランド州）
を用いて、ビオチン−ｄＡＴＰの存在下、ニック翻訳に
より標識する。ビオチニル化はジーン−テクト検出系
（クロンテックラボラトリーズインコーポレーティッ
ド、パロアルト、カリフォルニア州）で検出する。イン
サイトウハイブリダイゼーションはオンコールライトハ
イブリダイゼーションキット（オンコール、ガイザース
ベルグ、メリーランド州）を用いて、スライド上で、染
色体分裂中期の単一の複製配列を検出するために実施す
る。正常供与体の末梢血は２０％ＦＣＳ、３％ＰＨＡお
よびペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭ
Ｉ１６４０中3日間培養し、１０^-7Ｍメソトレキサート
で17時間同調化し、補充していないＲＰＭＩで２回洗浄
する。細胞を１０^-3Ｍチミジンと７時間インキュベート
する。コルセミド（０.５μｇ／ｍｌ）と２０分間、続
いて７５ｍＭ ＫＣｌ中の低張リジンと１５分間３７℃
でインキュベートした後、分裂中期の細胞を捕捉する。
細胞ペレットを次いで回転させ、カルノイ固定液（３：
１ メタノール／酢酸）中固定する。

【０１４２】懸濁液を１滴スライド上に加え、空気乾燥
して、分裂中期分散を調製する。遮断ヒト胎盤ＤＮＡ１
μｇ／ｍｌを含むハイブリダイゼーション混合物（５０
％ホルムアミド、２ｘＳＳＣ、１％硫酸デキストラン）
１０ｍｌに懸濁したプローブ１００ｎｇを加えて、ハイ
ブリダイゼーションを実施する。プローブ混合物を７０
℃温浴中１０分間変性し、３７℃で１時間インキュベー
トし、それから予め加温（３７℃）したスライドに載せ
るが、これは予め７０％ホルムアミド／２ｘＳＳＣ中７
０℃で変成し、エタノールシリーズで脱水し４℃に冷却
する。

【０１４３】スライドを３７℃で１６時間加湿器中でイ
ンキュベートする。スライドを５０％ホルムアミド／２
ｘＳＳＣ中４１℃で１０分間、および２ｘＳＳＣ中３７
℃で７分間洗浄する。製造プロトコールに準じて、スラ
イドをＦＩＴＣ−アビデン（オンコール、ガイザースベ
ルグ、メリーランド州）と共にインキュベートすること
により、ハイブリダイゼーションプローブを検出する。
染色体をマウント用培地に懸濁したプロプリジウムヨウ
素で対比染色する。レイツオルソプラン ２−エピ蛍光
顕微鏡を用いてスライドを可視化し、イメージネティッ
クスコンピューターおよびマッキントシュプリンターを
用いて５個のコンピューター画像を得る。

【０１４４】一度配列を正確な染色体位置にマッピング
すると、染色体上の物理的な位置は、遺伝子地図で補正
できる。このようなデータは例えばコンピューターを介
して公開されているＶ.McKusick，Mendelian Inheritan
ce in Manに見出される。同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患の関係は、連鎖分析（Co-Inherit
ance of Physically Adjacent Genes）により同定され
る。他に記載しない場合、形質転換はGraham,F.およびV
an der Eb,A.，Virology，52:456-457（1973）に記載さ
れる方法で実施する。

【０１４５】染色体検定 本発明の配列はまた染色体同定にも有用である。この配
列は個々のヒト染色体上の特定の位置を特異的に標的化
し、ハイブリダイズできる。さらに、染色体上の特定の
部位を同定する必要性が現在ある。今のところ染色体位
置をマークできる、実際の配列データー（繰り返し多形
性）に基づく染色体マーキング試薬は少ししかない。本
発明に準じた染色体に対するＤＮＡのマッピングは、こ
れらの配列を疾患に関与する遺伝子と関連付けるのに重
要な最初の段階である。

【０１４６】この点に関する好ましい態様において、本
明細書に開示するｃＤＮＡは、ＨＲ−１レセプター遺伝
子のゲノムＤＮＡをクローンするのに用いられる。これ
は種々の周知の技術および通常市販されているライブラ
リーを用いて達成できる。次にゲノムＤＮＡを、この目
的のための周知の技術を用いて、インサイトウ染色体マ
ッピングに使用する。典型的なものでは、染色体マッピ
ングのための通常的な方法に準じて、良好なインサイト
ウハイブリダイゼーションシグナルを提供するゲノムプ
ローブを同定するために、幾つかの試行錯誤が必要であ
る。

【０１４７】さらに、ｃＤＮＡからＰＣＲプライマー
（好ましくは１５〜２５塩基対）を調製することにより
配列を染色体にマッピングできる場合もある。遺伝子の
３’非翻訳領域のコンピューター分析は、増幅法を複雑
化する、ゲノムＤＮＡにおいて1以上のエクソンを延ば
さないプライマーを速やかに選別するために使用する。
これらのプライマーは次に個々のヒト染色体を含有する
体細胞ハイブリッドのＰＣＲスクリーニングに使用され
る。プライマーに対応するヒト遺伝子を含有するこれら
のハイブリッドのみが増幅断片を生じる。

【０１４８】体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピング
は、特定のＤＮＡを特定の染色体に割り当てるための迅
速な方法である。同一のオリゴヌクレオチドプライマー
を用いる本発明を使用して、類似の方法で特異的染色
体、または大きなゲノムクローンのプールからの、断片
のパネルで亜局在化（sublocalize）できる。その染色
体にマッピングするために使用できるその他のマッピン
グ方法には、インサイトウハブリダイゼーション、標識
化流動分類染色体でのプレスクリーニングおよび構築染
色体特異的ｃＤＮＡライブラリーに対するハイブリダイ
ズによるプレ選別等がある。

【０１４９】分裂中期染色体分散に対する、ｃＤＮＡク
ローンの蛍光インサイトウハイブリダイゼーション
（「ＦＩＳＨ」）は、１段階で正確な染色体位置を提供
するために使用できる。この技術は５０から６０の長さ
のｃＤＮＡで用いることができる。この技術に関する文
献に関しては、Vermaら、Human Chromosomes：A Manual
of Basic Techniques、ペルガモンプレス、ニューヨー
ク（1988）を参照されたい。

【０１５０】一度配列を正確な染色体位置にマッピング
すると、染色体上の配列の物理学的な位置が遺伝子地図
データーで補正できる。このようなデーターは例えば、
ジョーンズホプキンス大学、ウェルチメディカルライブ
ラリーを介したオンラインで利用できるV.McKusick，Me
ndelian Inheritance in Manに見出すことができる。同
一の染色体領域にマッピングされた遺伝子および疾患と
の関係は、次いで連鎖分析（物理的に近接した遺伝子の
共同遺伝（coinheritance））により同定される。

【０１５１】次に、影響を受けた個体および受けていな
い個体間のｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ配列における差
を決定する必要がある。影響を受けた個体の幾つかまた
は全てで突然変異が観察されるが、任意の正常の個体で
は突然変異が観察されない場合、突然変異は疾患の原因
物質になり得る。物理的マッピングおよび遺伝的マッピ
ング技術の現在の解析により、疾患に関与する染色体領
域に正確に位置するｃＤＮＡは、５０〜５００の強力原
因遺伝子のｃＤＮＡであろう。（これは１メガ塩基マッ
ピング解析とみなし、２０キロ塩基あたり１遺伝子とな
る）。

【０１５２】ポリペプチド検定 本発明はまた、細胞および組織中のＨＲ−１レセプター
タンパク質またはリガンドの正常および異常レベルの決
定を含む、細胞および組織中のＨＲ−１レセプタータン
パク質またはリガンドのレベルの検出のための定量およ
び診断検定等の診断検定にも関する。このように、例え
ば本発明に準じた、正常対照組織試料と比較したＨＲ−
１レセプターの過剰発現を検出する診断検定は、例えば
腫瘍の存在を検出するために用いることができる。宿主
由来の試料中のタンパク質例えば本発明のＨＲ−１レセ
プタータンパク質のレベルを測定するために用いること
ができる検定技術、は当業者に周知である。このような
検定方法にはラジオイムノアッセイ、競合結合検定、ウ
エスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡ検定等がある。
このうちＥＬＩＳＡが頻繁に好ましく用いられる。ＥＬ
ＩＳＡ検定ではまず、ＨＲ−１レセプターに特異的な抗
体、好ましくはモノクローナル抗体を調製する。さらに
モノクローナル抗体に結合するリポーター抗体を通常調
製する。リポーター抗体は放射性、蛍光または酵素試
薬、この例においては西洋ワサビペルオキシダーゼ等の
検出可能な試薬に結合する。

【０１５３】ＥＬＩＳＡを実施するために、試料を宿主
から取り出し、試料中のタンパク質と結合する固体支持
体例えばポリスチレン皿上でインキュベートする。皿上
の任意の遊離のタンパク質結合部位をウシ血清アルブミ
ンのような非特異的タンパク質とインキュベートするこ
とにより被覆する。次に、モノクローナル抗体がポリス
チレン皿に付着した任意のＨＲ−１レセプタータンパク
質に付着する時間、モノクローナル抗体を皿の中でイン
キュベートする。非結合モノクローナル抗体は緩衝液で
洗い出す。西洋ワサビペルオキシダーゼに連結したリポ
ーター抗体は皿に載せ、リポーター抗体をＨＲ−１レセ
プターに結合した任意のモノクローナル抗体に結合させ
る。非付着リポーター抗体を次いで洗い出す。比色基質
等のペルオキシダーゼ活性のための試薬を次いで皿に加
える。１次および２次抗体により、ＨＲ−１レセプター
に連結した固定化ペルオキシダーゼは呈色した反応産物
を産生する。規定の時間内に増加した色の量は試料中に
存在するＨＲ−１レセプタータンパク質の量を示す。一
般に定量結果は標準曲線との比較により得られる。

【０１５４】競合検定を用いることができ、この検定で
は、ＨＲ−１レセプター特異的抗体を固体支持体および
標識化ＨＲ−１レセプターに付着させ、宿主由来の試料
を固体支持体を通過させ、固体支持体に付着した検出さ
れる標識量は、試料中のＨＲ−１レセプター量に相関す
る。

【０１５５】抗体 ポリペプチド、それらの断片もしくはその他の誘導体、
またはそれらの類似体、またはそれらを発現する細胞
は、それらの抗体を産生する免疫原として用いることが
できる。これらの抗体は例えばポリクローナルまたはモ
ノクローナル抗体でよい。本発明はまたキメラ、一本鎖
およびヒト化抗体、およびＦａｂ断片またはＦａｂ発現
ライブラリーの産物等を含む。当業界に周知の種々の方
法は、このような抗体および断片の産生に使用できる。

【０１５６】本発明の配列に対応するポリペプチドに抗
して生じる抗体は、ポリペプチドを好ましくはヒトはで
ない動物に直接注射するかまたは動物にポリペプチドを
投与することにより得ることができる。このようにして
得られた抗体は次いでポリペプチド自身に結合する。こ
の方法でポリペプチドの断片のみをコードする配列さえ
ももとの全ポリペプチドに結合する抗体の産生に用いる
ことができる。このような抗体は、ポリペプチドをポリ
ペプチドを発現する組織から単離するのに用いることが
できる。

【０１５７】連続的なセルライン培養により産生される
抗体を提供する任意の技術を用いて、モノクローナル抗
体を調製することができる。実例としては、ハイブリド
ーマ法（Kohler，G.およびMilstein,C.，Nature，256:4
95-497（1975））、トリオーマ法、ヒトＢセルハイブリ
ドーマ法（Kozborら、Immunology Today，4:72（198
3））およびヒトモノクローナル抗体を産生するための
ＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Coleら、Monoclonal Antib
odies and Cancer Therapy，アランＲリスインコーポレ
ーティッド、77-96頁（1985））等がある。一本鎖抗体
の産生のために記載された技術（米国特許第４９４６７
７８号）は本発明の免疫原ポリペプチド産物に対する一
本鎖抗体を産生するのに適用できる。また、トランスジ
ェニックマウスまたはその他の生物例えばその他の哺乳
動物は、本発明の免疫原ポリペプチド産物に抗するヒト
化抗体等の抗体を発現するのに用いることができる。

【０１５８】上述の抗体は、親和性クロマトグラフィー
による単離および／または精製のための固体支持体に抗
体を付着させることにより、ポリペプチドを発現するク
ローンを単離もしくは同定し、または本発明のポリペプ
チドを精製するために用いることができる。従って、と
りわけＨＲ−１レセプターに抗する抗体は、感染に対す
る抵抗性レベルの低下、喘息、種々のアレルギーおよび
造血性障害を阻止するために用いることができる。ＨＲ
−１レセプターはまた、感染に対する抵抗性レベルの低
下、喘息、種々のアレルギーおよび造血性障害の阻止ま
たは処置にも用いることができる。

【０１５９】ＨＲ−１レセプター結合分子および検定 本発明はまた、ＨＲ−１レセプターに結合するレセプタ
ー分子等の分子の同定方法をも提供する。ＨＲ−１レセ
プターに結合するタンパク質、例えばレセプタータンパ
ク質をコードする遺伝子は、当業者に周知の多くの方法
より同定できる。このような方法は多くの実験マニュア
ル、例えばColiganら、Current Protocols in Immunolo
gy、1(2):第5章（1991）に記載されている。

【０１６０】本発明のポリペプチドはまた、ＨＲ−１レ
セプター結合分子、例えば細胞中または細胞不含調製物
中のレセプター分子の、ＨＲ−１レセプター結合能力を
評価するために用いることができる。本発明のＨＲ−１
レセプターは、本発明のレセプターポリペプチドを活性
化（アゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化
合物をスクリーニングする方法にも用いることができ
る。

【０１６１】一般的に、このようなスクリーニング方法
では、表面に本発明のレセプターポリペプチドを発現す
る適当な細胞を提供する。このような細胞には、哺乳動
物、酵母、ドロソフィラまたは大腸菌からの細胞等があ
る。とりわけ、本発明のレセプターをコードするポリヌ
クレオチドを用いて、細胞をトランスフェクトして、Ｈ
Ｒ−１レセプターを発現させる。発現したレセプター
は、次いで試験化合物と接触させ、結合、刺激または機
能的反応の阻害を観察する。このような細胞を、化合物
がシグナルを生じるかどうか、すなわちレセプターを活
性化するかどうかをスクリーニングして決定すべき化合
物と接触させ、レセプターを活性化する化合物を決定す
るためにスクリーニングすることができる。

【０１６２】その他のスクリーニング法には、レセプタ
ーの活性化により引き起こされる細胞内ｐＨ変化を測定
する系における、ＨＲ−１レセプター発現細胞（例えば
トランスフェクトしたＣＨＯ細胞）の使用等があり、例
えばScience，246:181-296（1989年10月）に記載されて
いる。例えば、化合物を本発明のレセプターポリペプチ
ドを発現する細胞と接触させ、２次メッセンジャー反
応、例えばシグナル形質導入またはｐＨ変化等を測定
し、潜在能力のある化合物がレセプターを活性化する
か、または阻害するかを決定できる。その他のこのよう
なスクリーニング法には、ＨＲ−１レセプター遺伝子を
セルラインにトランスフェクトし、ホスホリル化を引き
起こすリガンドを探す方法等がある。

【０１６３】その他の方法では、表面に本発明のレセプ
ターポリペプチドを有する細胞に対する標識化リガンド
の結合の阻害を決定することにより、本発明のアンタゴ
ニストのレセプターポリペプチドの活性化を阻害する化
合物をスクリーニングする方法等がある。このような方
法では、真核細胞がその表面にＨＲ−１レセプターを発
現するようにＨＲ−１レセプターをコードするＤＮＡで
真核細胞をトランスフェクトし、既知のリガンドの標識
化形態の存在下で該細胞を化合物と接触させる。リガン
ドは、例えば放射活性により標識化できる。レセプター
に結合する標識リガンドの量は、例えばレセプターの放
射活性を測定することにより測定できる。化合物のレセ
プターに対する結合が、レセプターに結合する標識リガ
ンドの減少が測定されるような結合である場合、レセプ
ターに対する標識リガンドの結合は阻害されている。

【０１６４】哺乳動物宿主中のＨＲ−１レセプターは、
多くの病態等の多くの生物学的機能に関与する。従っ
て、一方でＨＲ−１レセプターを刺激し、他方でＨＲ−
１レセプターの機能を阻害できる化合物および薬物を見
出すことが望まれる。例えば、ＨＲ−１レセプターを活
性化する化合物は、治療目的で例えば感染に対する抵抗
性レベルの低下、喘息、種々のアレルギーおよび造血性
障害の処置に用いることができる。

【０１６５】一般に、ＨＲ−１レセプターの活性化を阻
害する化合物は、種々の治療目的で、例えば、とりわけ
感染に対する抵抗性のレベルの低下、喘息、種々のアレ
ルギーおよび造血性障害の処置に用いることができる。
ＨＲ−１レセプターを阻害する化合物は、感染、に対す
る抵抗性レベルの低下喘息、種々のアレルギーおよび造
血性障害の逆転にも有用である。

【０１６６】抗体は、本発明のＨＲ−１レセプターをア
ンタゴナイズするか、またはＨＲ−１レセプターに結合
するが、ＨＲ−１レセプターの活性を防御するような２
次メッセンジャー反応を引き出さないオリゴペプチドで
ある場合もある。抗体には、通常抗体の抗原結合部位に
関与する独特の決定基を認識する抗イディオタイプ抗体
等がある。潜在的なアンタゴニスト化合物には、生物学
的機能を喪失し、ＨＲ−１レセプターに結合した時に、
反応を引き出さないＨＲ−１レセプターのリガンド、す
なわちリガンドの断片に正確に関連するタンパク質も含
まれる。

【０１６７】アンチセンス技術を用いることにより調製
したアンチセンス構築物は、三重らせん形成またはアン
チセンスＤＮＡもしくはＲＮＡによる遺伝子発現の調節
に用いることができるが、これらの方法は共にＤＮＡま
たはＲＮＡへのポリヌクレオチドの結合に基づくもので
ある。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチド配列の５’コード化部分は、約１０か
ら４０塩基対の長さのアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレ
オチドを設計するために用いられる。ＤＮＡオリゴヌク
レオチドは転写に関与する遺伝子の領域に相補的に設計
し（三重らせん−Leeら、Nucl.Acids Res.，6:3073（19
79）；Cooneyら、Science，241:456（1988）；およびDe
rvanら、Science，251:1360（1991）参照）、これによ
りＨＲ−１レセプターの転写および産生を防御する。ア
ンチセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲ
ＮＡにハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＨＲ−１レセ
プターへの翻訳を阻止する（アンチセンス−Okano,J.Ne
urochem.，56:560（1991）；Oligodeoxynucleotides as
Antisense Inhibitor of Gene Expression，ＣＲＣプ
レス、ボッカラートン、フロリダ州（1988））。上述の
オリゴヌクレオチドはまた細胞まで運ぶことができ、ア
ンチセンスＲＮＡまたはＤＮＡをインビボで発現させ、
ＨＲ−１レセプターの産生を阻害できる。

【０１６８】ＨＲ−１レセプターに結合し、リガンドへ
の到達をはばみ、正常の生物学的活性を防御するような
小さな分子、例えば小さなペプチドまたはペプチド様分
子は、本発明のレセプターポリペプチドの活性化阻害に
用いることができる。ＨＲ−１レセプターの可溶形態、
例えばレセプターの断片は、本発明のポリペプチドのリ
ガンドに結合し、リガンドが膜結合ＨＲ−１レセプター
と相互作用するのを防ぐことにより、レセプターの活性
化を阻害するために用いることができる。

【０１６９】本発明はさらに、過剰なＨＲ−１レセプタ
ー活性に関連する異常な状態を処置する方法をも提供
し、その方法には上述の化合物がＨＲ−１レセプターに
対するリガンドの結合を阻止し、または２次シグナルを
阻害することにより活性化を阻害し、それより異常な状
態を軽減するするのに有効な量を、医薬的に許容できる
担体と共に対象に投与することを含まれる。

【０１７０】本発明はまた、ＨＲ−１レセプター活性の
過少発現に関連する異常な状態を処置する方法をも提供
し、その方法には上述の本発明のレセプターポリペプチ
ドを活性化する化合物の治療的有効量を、医薬的に許容
できる担体と組み合わせて対象に投与し、異常な状態を
軽減することが含まれる。

【０１７１】ＨＲ−１レセプターの可溶形態、およびこ
のようなレセプターを活性化または阻害する化合物は、
適当な医薬的担体と組み合わせて用いることができる。
このような組成物にはポリペプチドまたは化合物の治療
的有効量、および医薬的に許容できる担体または賦形剤
が含まれる。このような担体には、生理食塩水、緩衝化
生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタ
ノール、およびそれらを組み合わせたもの等があるが、
これらに限定するものではない。製剤は投与方法に適し
たものであるべきである。

【０１７２】アゴニストおよびアンタゴニスト−検定お
よび分子 本発明はまた細胞上のＨＲ−１レセプターの作用、例え
ばＨＲ−１レセプター結合分子例えばレセプター分子と
ＨＲ−１レセプターの相互作用を増強または阻止する化
合物を同定するための、化合物のスクリーニング方法を
も提供する。アゴニストはＨＲ−１レセプターの天然の
生物学的機能を増強する化合物またはＨＲ−１レセプタ
ーと同様に機能する化合物であり、一方アンタゴニスト
はこのような機能を低下または排除する化合物である。

【０１７３】例えば、細胞の区画例えば膜またはそれら
の調製物，例えば膜調製物は、ＨＲ−１レセプターに結
合する分子、例えばＨＲ−１レセプターにより調節され
るシグナル化または制御経路の分子を発現する細胞から
調製できる。その調製物を、ＨＲ−１レセプターアゴニ
ストまたはアンタゴニストに成り得る候補分子の存在下
または不在下で、標識化ＨＲ−１レセプターと共にイン
キュベートする。候補分子が結合分子に結合する能力
は、標識化リガンドの結合の低下に反映される。結合し
ても影響を及ぼさない分子、すなわちＨＲ−１レセプタ
ー結合分子の結合にＨＲ−１レセプターの影響を誘起し
ない分子は、最も良好なアンタゴニストに成るであろ
う。結合性が良好で、ＨＲ−１レセプターと同一のまた
は非常に関連した効果を引き出す分子は、アゴニストで
ある。

【０１７４】潜在的なアゴニストおよびアンタゴニスト
のＨＲ−１レセプター様効果は、例えば候補分子と細胞
または適当な細胞調製物との相互作用に続く２次メッセ
ンジャーシステムの活性を測定し、その効果をＨＲ−１
レセプターの効果とまたはＨＲ−１レセプターと同一の
効果を引き出す分子の効果と比較することにより測定で
きる。この点に関して利用できる２次メッセンジャーシ
ステムには、ＡＭＰグアニレートサイクラーゼ、イオン
チャネル、またはホスホイノシタイド加水分解２次メッ
センジャーシステム等があるが、これらに限定するもの
ではない。

【０１７５】ＨＲ−１レセプターアンタゴニストの検定
の他の例は競合検定であり、競合阻害検定に適当な条件
下で、ＨＲ−１レセプターおよび潜在的なアンタゴニス
トを膜結合ＨＲ−１レセプター分子または組換えＨＲ−
１レセプター分子と組み合わせる。ＨＲ−１レセプター
を例えば放射活性により標識化し、レセプター分子に結
合するＨＲ−１レセプター分子の数を正確に決定し、潜
在的なアンタゴニストの効果を評価できる。

【０１７６】潜在的なアンタゴニストには、本発明のポ
リペプチドに結合し、それによりその活性を阻害または
消失させる小さい有機分子、ペプチド、ポリペプチドお
よび抗体等がある。潜在的なアンタゴニストにはまた、
結合分子例えばレセプター分子の同一の部位で結合する
が、ＨＲ−１レセプター誘起活性を誘起せず、それによ
りＨＲ−１レセプターを結合から排除することによりＨ
Ｒ−１レセプターの作用を防御する小さい有機分子、ペ
プチド、ポリペプチド、例えば非常に相関したタンパク
質または抗体等がある。

【０１７７】潜在的なアンタゴニストには、ポリペプチ
ドの結合部位に結合し、結合部位を占領し、それにより
細胞性結合分子例えばレセプター分子への結合を防御
し、正常の生物学的活性を防御する、小さい分子等があ
る。小さい分子の例としては、小さい有機分子、ペプチ
ドまたはペプチド様分子などがあるが、これらに限定す
るものではない。

【０１７８】その他の潜在的なアンタゴニストにはアン
チセンス分子等がある。アンチセンス技術を用いて、ア
ンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡにより、または三重らせ
ん形成により遺伝子発現を制御することができる。アン
チセンス技術については、例えばOkano,J.，Neurochem.
56:560（1991）；Oligodeoxynucleotides as Antisense
Inhibitors of Gene Expression，ＣＲＣプレス、ボッ
カラートン、フロリダ州（1988）に記載されている。三
重らせん形成については例えばLeeら、NucleicAcids Re
search6:3073（1979）；Cooneyら、Science241:456（19
88）；およびDervanら、Science251:1360（1991）に記
載されている。この方法は、ポリヌクレオチドの相補的
ＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づいている。例えば本
発明の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
の５’コード部分は、約１０〜４０塩基対の長さのアン
チセンスＲＮＡオリゴヌクレオチドを設計するのに用い
ることができる。ＤＮＡオリゴヌクレオチドは、ＨＲ−
１レセプターの転写および産生を防御する転写に係わる
遺伝子領域に相補的になるように設計される。アンチセ
ンスＲＮＡオリゴヌクレオチドはインビボでｍＲＮＡに
ハイブリダイズし、ｍＲＮＡ分子のＨＲ−１レセプター
ポリペプチドへの翻訳を阻止する。上述のオリゴヌクレ
オチドはまた、細胞に運び、アンチセンスＲＮＡまたは
ＤＮＡをインビボで発現し、ＨＲ−１レセプターの産生
を阻害することもできる。

【０１７９】潜在的アゴニストには本発明のポリペプチ
ドに結合し、その活性を引き出す、小さな有機分子、ペ
プチド、ペプチド様分子、ポリペプチドおよび抗体等が
ある。潜在的アゴニストはまた結合分子、例えばレセプ
ター分子の同一部位に結合し、ＨＲ−１レセプター作用
を誘起する、小さな有機分子、ペプチド、タンパク質に
非常に関連したポリペプチドまたは抗体でもよい。

【０１８０】このアンタゴニストおよび／またはアゴニ
ストは、例えば本明細書の以下に記載するような、医薬
的に許容できる担体と共に組成物として用いることがで
きる。このアンタゴニストおよび／またはアゴニスト
は、例えば感染に対する抵抗性レベルの低下、喘息、種
々のアレルギーおよび造血性障害の阻止に用いることが
できる。

【０１８１】組成物 本発明はまた上述のポリヌクレオチドもしくはポリペプ
チド、またはアゴニストもしくはアンタゴニストを含む
組成物にも関する。従って、本発明のポリペプチドは非
無菌もしくは無菌担体と、または細胞、組織もしくは生
物に用いられる担体、例えば対象への投与に適した医薬
的担体と組み合わせて用いることができる。このような
組成物には例えば溶媒添加物または本発明のポリペプチ
ドの治療的有効量、および医薬的に許容できる担体また
は賦形剤を含む。このような担体には生理食塩水、緩衝
化生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エ
タノールおよびそれらの組み合わせ等でよいが、これら
に限定するものではない。製剤は投与法に適した物にす
べきである。

【０１８２】キット 本発明はさらに、本発明の前述の組成物成分を1または
それ以上を充填した１またはそれ以上の容器を含む医薬
的パックおよびキットにも関する。このような（複数
の）容器に関連して、医薬または生物学的産物の製造、
使用または販売を統制する政府機関の命令形態の、ヒト
への投与用の産物の製造、使用または販売に関する該政
府機関の承認を示す注意書きが添付されることがある。

【０１８３】投与 本発明のポリペプチドおよびその他の化合物は、単独で
または治療用化合物等のその他の化合物と組み合わせて
用いることができる。医薬組成物は任意の有効な、利便
的な方法例えば、とりわけ局所、経口、経膣、静脈内、
腹膜腔内、筋肉内、皮下、鼻腔内、または皮膚内の経路
で投与できる。

【０１８４】医薬組成物は、通常具体的な適応症または
複数の適応症の処置または予防に有効な量を投与する。
一般に、この組成物は少なくとも約１０μｇ／ｋｇ体重
の量で投与する。たいていの場合、投与量は1日あたり
約８ｍｇ／ｋｇ体重を越えない量で投与する。好ましく
は、たいての場合、投与量は1日あたり約１０μｇ／ｋ
ｇから１ｍｇ／ｋｇ体重である。至適投与量は、適応、
その重篤度、投与経路、合併症の状態等を考慮に入れ
て、各々の処置様式および適応のための標準法により決
定されることは理解されよう。

【０１８５】遺伝子治療 ＨＲ−１レセプターポリヌクレオチド、ポリペプチド、
ポリペプチドであるアゴニストおよびアンタゴニスト
は、本発明に準じて、インビボでこのようなポリペプチ
ドを発現することにより、しばしば”遺伝子治療”と称
せられる治療様式に用いることができる。

【０１８６】このように、例えば患者の細胞をエクソビ
ボでポリペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡのよ
うなポリヌクレオチドで操作でき、次いで操作した細胞
をポリペプチドで処置すべき患者に提供できる。例え
ば、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含有す
るレトロウイルスプラスミドベクターを使用することに
より、細胞をエクソビボで操作できる。このような方法
は当業界で周知であり、本発明における使用は、本明細
書の教示より明白である。

【０１８７】同様に、細胞を当業界に周知の方法により
インビボで操作し、インビボでポリペプチドを発現させ
ることができる。例えば本発明のポリヌクレオチドは上
述のように複製不能レトロウイルスベクター中に発現す
るように操作できる。レトロウイルス発現構築物を、次
いで単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡ
を含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質導
入されたパッケージング細胞に導入し、パッケージング
細胞が目的遺伝子を含有する感染性のウイルス粒子を産
生するようにすることができる。これらの産生細胞を患
者に投与し、インビボで細胞操作し、インビボでポリペ
プチドを発現することができる。このような方法で本発
明のポリペプチドを患者に投与するためのこれらのまた
はその他の方法は、本明細書の教示から当業者に明らか
であるはずである。

【０１８８】上述のレトロウイルスプラスミドベクター
のレトロウイルスは、モロニーネズミ白血病ウイルス、
脾臓壊死ウイルス、レトロウイルス例えばラウス肉腫ウ
イルス、ハーヴェイ肉腫ウイルス、鳥白血症ウイルス、
テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ア
デノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルスおよび哺乳動物
腫瘍ウイルス等に由来するが、これらに限定するもので
はない。一つの態様では、レトロウイルスプラスミドベ
クターはモロニーネズミ白血病ウイルスに由来する。

【０１８９】このようなベクターは、ポリペプチド発現
のためのプロモーターを１またはそれ以上含む。用いる
ことができる適当なプロモーターには、レトロウイルス
ＬＴＲ、ＳＶ４０プロモーター、およびヒトサイトメガ
ロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（Millerら、Biotec
hniques7:980-990（1989）に記載されている）、または
その他の任意のプロモーター（例えばヒストン、ＲＮＡ
ポリメラーゼＩＩＩおよびβアクチンプロモーター等の
真核細胞プロモーターのような細胞性プロモーターなど
があるが、これらに限定するものではない）等がある
が、それらに限定するものではない。用いることができ
るその他のウイルス性プロモーターには、アデノウイル
スプロモーター、チミジンキナーゼ（ＴＫ）プロモータ
ー、およびＢ１９パルボウイルスプロモーター等がある
が、これらに限定するものではない。適当なプロモータ
ーの選別は、本明細書の教示より、当業者に明白であろ
う。

【０１９０】本発明のポリペプチドをコードする核酸配
列は適当なプロモーターの支配下に置かれる。用いるこ
とができる適当なプロモーターには、アデノウイルスプ
ロモーター、例えばアデノウイルス主要後期プロモータ
ー；または異型性プロモーター例えばサイトメガロウイ
ルス（ＣＭＶ）プロモーター；ＲＳウイルス（respirat
ory syncytial virus：ＲＳＶ）プロモーター；誘導プ
ロモーター例えばＭＭＴプロモーター、メタロチオネイ
ンプロモーター；熱ショックプロモーター；アルブミン
プロモーター；アポＡＩプロモーター；ヒトグロブリン
プロモーター；ウイルス性チミジンキナーゼプロモータ
ー例えば単純ヘルペスチミジンキナーゼプロモーター；
レトロウイルスＬＴＲ（上述の改変レトロウイルスＬＴ
Ｒを含む）；βアクチンプロモーター；ヒト成長ホルモ
ンプロモーター等があるが、これらに限定するものでは
ない。プロモーターはまたポリペプチドをコードする遺
伝子を支配する天然プロモーターでもよい。

【０１９１】レトロウイルスプラスミドベクターはパッ
ケージングセルラインに形質導入し、産生セルラインを
形成するのに用いることができる。トランスフェクトさ
れ得るパッケージング細胞の例としては、ＰＥ５０１、
ＰＡ３１７、Ｙ−２、Ｙ−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１
４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、ＹＣＲＥ、ＹＣＲＩ
Ｐ、ＧＰ⁺Ｅ−８６、ＧＰ⁺ｅｎｖＡｍ１２およびＤＡＮ
セルライン（Miller,A.，Human Gene Therapy，1:5-14
（1990）に記載されている）等があるが、これらに限定
するものではない。ベクターは当業界で周知の任意の方
法により、パッケージング細胞に形質導入できる。この
ような方法には、電気泳動、リポソームの使用、および
ＣａＰＯ₄沈殿などがあるが、これらに限定するもので
はない。また別に、レトロウイルスプラスミドベクター
はリポソームでカプセル化するか、または脂質と結合さ
せ、次いで宿主に投与することができる。

【０１９２】産生セルラインは感染性レトロウイルスベ
クター粒子を生じ、これはポリペプチドをコードする
（複数の）核酸配列を含む。このようなレトロウイルス
ベクター粒子は次いでインビトロまたはインビボのどち
らかで真核細胞に形質導入するのに用いることができ
る。形質導入した真核細胞は、ポリペプチドをコードす
る（複数の）核酸配列を発現する。形質導入される真核
細胞はには、胚幹細胞、胚癌細胞およびヘモポイエチン
幹細胞、肝細胞、繊維芽細胞、筋芽細胞、ケラチノサイ
ト、内皮細胞および気管支上皮細胞等があるが、これら
に限定するものではない。

【０１９３】

【配列表】

（１）一般的情報： （ｉ）出願人：ジン−シャン・フおよびエドワード・ア
ッペルボーム （ｉｉ）発明の名称：ＨＲ−１レセプター （ｉｉｉ）配列の数：２ （ｉｖ）連絡先： （Ａ）宛て名：スミスクライン・ビーチャム・コーポレ
イション （Ｂ）通り名：スェードランド・ロード７０９番 （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：ペンシルベニア州 （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６−２７９９ （ｖ）コンピューター読み込み可能形態： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：ＦａｓｔＳＥＱバージョン１.５ （ｖｉ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：ハン,ウィリアム・ティ （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＡＴＧ５０００７Ｐ （ｉｘ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：６１０−２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：６１０ー２７０ー５０９０ （Ｃ）テレックス番号

【０１９４】（２）配列番号：１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１２８８塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子の型：ｃＤＮＡ （ｉｉｉ）ハイポセティカル：なし （ｉｖ）アンチセンス：なし （ｖ）フラグメント型： （ｖｉ）起源： （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： GGCAATATCA AGGTTTTAAA TCTCGGAGAA ATGGCTTTCG TTTGCTTGGC TATCGGATGC 60 TTATATACCT TTCTGATAAG CACAACATTT GGCTGTACTT CATCTTCAGA CACCGAGATA 120 AAAGTTAACC CTCCTCAGGA TTTTGAGATA GTGGATCCCG GATACTTAGG TTATCTCTAT 180 TTGCAATGGC AACCCCCACT GTCTCTGGAT CATTTTAAGG AATGCACAGT GGAATATGAA 240 CTAAAATACC GAAACATTGG TAGTGAAACA TGGAAGACCA TCATTACTAA GAATCTACAT 300 TACAAAGATG GGTTTGATCT TAACAAGGGC ATTGAAGCGA AGATACACAC GCTTTTACCA 360 TGGCAATGCA CAAATGGATC AGAAGTTCAA AGTTCCTGGG CAGAAACTAC TTATTGGATA 420 TCACCACAAG GAATTCCAGA AACTAAAGTT CAGGATATGG ATTGCGTATA TTACAATTGG 480 CAATATTTAC TCTGTTCTTG GAAACCTGGC ATAGGTGTAC TTCTTGATAC CAATTACAAC 540 TTGTTTTACT GGTATGAGGG CTTGGATCAT GCATTACAGT GTGTTGATTA CATCAAGGCT 600 GATGGACAAA ATATAGGATG CAGATTTCCC TATTTGGAGG CATCAGACTA TAAAGATTTC 660 TATATTTGTG TTAATGGATC ATCAGAGAAC AAGCCTATCA GATCCAGTTA TTTCACTTTT 720 CAGCTTCAAA ATATAGTTAA ACCTTTGCCG CCAGTCTATC TTACTTTTAC TCGGGAGAGT 780 TCATGTGAAA TTAAGCTGAA ATGGAGCATA CCTTTGGGAC CTATTCCAGC AAGGTGTTTT 840 GATTATGAAA TTGAGATCAG AGAAGATGAT ACTACCTTGG TGACTGCTAC AGTTGAAAAT 900 GAAACATACA CCTTGAAAAC AACAAATGAA ACCCGACAAT TATGCTTTGT AGTAAGAAGC 960 AAAGTGAATA TTTATTGCTC AGATGACGGA ATTTGGAGTG AGTGGAGTGA TAAACAATGC 1020 TGGGAAGGTG AAGACCTATC GAAGAAAACT TTGCTACGTT TCTGGCTACC ATTTGGTTTC 1080 ATCTTAATAT TAGTTATATT TGTAACCGGT CTGCTTTTGC GTAAGCCAAA CACCTACCCA 1140 AAAATGATTC CAGAATTTTT CTGTGATACA TGAAGACTTT CCATATCAAG AGACATGGTA 1200 TTGACTCAAC AGTTTCCAGT CATGGCCAAA TGTTCAATAT GAGTCTCAAT AAACTGAATT 1260 TTTCTTGCGA AAAAAAAAAA AAAAAAAA 1288

【０１９５】（２）配列番号：２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３８０アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子の型：ペプチド （ｉｉｉ）ハイポセティカル：なし （ｉｖ）アンチセンス：なし （ｖ）フラグメント型：Ｎ−末端 （ｖｉ）起源： （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Ala Phe Val Cys Leu Ala Ile Gly Cys Leu Tyr Thr Phe Leu Ile 1 5 10 15 Ser Thr Thr Phe Gly Cys Thr Ser Ser Ser Asp Thr Glu Ile Lys Val 20 25 30 Asn Pro Pro Gln Asp Phe Glu Ile Val Asp Pro Gly Tyr Leu Gly Tyr 35 40 45 Leu Tyr Leu Gln Trp Gln Pro Pro Leu Ser Leu Asp His Phe Lys Glu 50 55 60 Cys Thr Val Glu Tyr Glu Leu Lys Tyr Arg Asn Ile Gly Ser Glu Thr 65 70 75 80 Trp Lys Thr Ile Ile Thr Lys Asn Leu His Tyr Lys Asp Gly Phe Asp 85 90 95 Leu Asn Lys Gly Ile Glu Ala Lys Ile His Thr Leu Leu Pro Trp Gln 100 105 110 Cys Thr Asn Gly Ser Glu Val Gln Ser Ser Trp Ala Glu Thr Thr Tyr 115 120 125 Trp Ile Ser Pro Gln Gly Ile Pro Glu Thr Lys Val Gln Asp Met Asp 130 135 140 Cys Val Tyr Tyr Asn Trp Gln Tyr Leu Leu Cys Ser Trp Lys Pro Gly 145 150 155 160 Ile Gly Val Leu Leu Asp Thr Asn Tyr Asn Leu Phe Tyr Trp Tyr Glu 165 170 175 Gly Leu Asp His Ala Leu Gln Cys Val Asp Tyr Ile Lys Ala Asp Gly 180 185 190 Gln Asn Ile Gly Cys Arg Phe Pro Tyr Leu Glu Ala Ser Asp Tyr Lys 195 200 205 Asp Phe Tyr Ile Cys Val Asn Gly Ser Ser Glu Asn Lys Pro Ile Arg 210 215 220 Ser Ser Tyr Phe Thr Phe Gln Leu Gln Asn Ile Val Lys Pro Leu Pro 225 230 235 240 Pro Val Tyr Leu Thr Phe Thr Arg Glu Ser Ser Cys Glu Ile Lys Leu 245 250 255 Lys Trp Ser Ile Pro Leu Gly Pro Ile Pro Ala Arg Cys Phe Asp Tyr 260 265 270 Glu Ile Glu Ile Arg Glu Asp Asp Thr Thr Leu Val Thr Ala Thr Val 275 280 285 Glu Asn Glu Thr Tyr Thr Leu Lys Thr Thr Asn Glu Thr Arg Gln Leu 290 295 300 Cys Phe Val Val Arg Ser Lys Val Asn Ile Tyr Cys Ser Asp Asp Gly 305 310 315 320 Ile Trp Ser Glu Trp Ser Asp Lys Gln Cys Trp Glu Gly Glu Asp Leu 325 330 335 Ser Lys Lys Thr Leu Leu Arg Phe Trp Leu Pro Phe Gly Phe Ile Leu 340 345 350 Ile Leu Val Ile Phe Val Thr Gly Leu Leu Leu Arg Lys Pro Asn Thr 355 360 365 Tyr Pro Lys Met Ile Pro Glu Phe Phe Cys Asp Thr 370 375 380

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒトＨＲ−１レセプターのヌクレオチドおよ
び誘導されるアミノ酸配列を示す（各々、配列番号：１
および２）。下線を付した部分はアミノ酸配列のシグナ
ル配列を示す。

【図２】 ヒトＨＲ−１レセプターのヌクレオチドおよ
び誘導されるアミノ酸配列を示す（各々、配列番号：１
および２）。

【図３】 ヒトＨＲ−１レセプターのヌクレオチドおよ
び誘導されるアミノ酸配列を示す（各々、配列番号：１
および２）。

【図４】 本発明のポリペプチド（上列）とヒトＩＬ−
５レセプターとの間のアミノ酸配列相同性の示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 48/00 ＡＤＳ Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ１２Ｎ 1/21 16/28 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＦ // Ｃ１２Ｐ 21/08 ＡＤＹ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (71)出願人 597034358 ヒューマン・ジェノム・サイエンシズ・イ ンコーポレイテッド ＨＵＭＡＮ ＧＥＮＯＭＥ ＳＣＩＥＮＣ ＥＳ， ＩＮＣ. アメリカ合衆国20850−3338メリーランド 州ロックビル、キー・ウエスト・アベニュ ー9410番 (72)発明者 ジン−シャン・フ アメリカ合衆国20878メリーランド州ゲイ ザーズバーグ、ハワード・ランディング・ ドライブ16125番 (72)発明者 エドワード・アール・アッペルボーム アメリカ合衆国19422ペンシルベニア州ブ ルー・ベル、ビレッジ・サークル830番

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】（ａ） 配列番号：２のアミノ酸１から３
   ８０を有してなるポリペプチドをコードするポリヌクレ
   オチドと少なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレ
   オチド； （ｂ） 配列番号：２のアミノ酸２２から３８０を有し
   てなるポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと少
   なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレオチド； （ｃ） （ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドに相補
   的なポリヌクレオチド；および （ｄ） （ａ）、（ｂ）または（ｃ）のポリヌクレオチ
   ドの少なくとも１５塩基を有してなるポリヌクレオチ
   ド；からなる群から選択される構成ポリヌクレオチドを
   有してなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 ポリヌクレオチドがＤＮＡである請求項
   １記載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ポリヌクレオチドがＲＮＡである請求項
   １記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号：１に示されるヌクレオチド１
   から１２８８を有してなる請求項２記載のポリヌクレオ
   チド。
5. 【請求項５】 配列番号：１に示されるヌクレオチド３
   １から１１７０を有してなる請求項２記載のポリヌクレ
   オチド。
6. 【請求項６】 配列番号：２のアミノ酸１から３８０を
   有してなるポリペプチドをコードする請求項２記載のポ
   リヌクレオチド。
7. 【請求項７】 配列番号：２のアミノ酸２２から３８０
   を有してなるポリペプチドをコードする請求項２記載の
   ポリヌクレオチド。
8. 【請求項８】（ａ） ＡＴＣＣ寄託番号９８０６９に含
   まれるヒトｃＤＮＡにより発現されるポリぺプチドと同
   一の成熟ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドと
   少なくとも７０％の同等性を有するポリヌクレオチド； （ｂ）（ａ）のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレ
   オチド；および （ｃ）（ａ）または（ｂ）のポリヌクレオチドの少なく
   とも１５塩基を有してなるポリヌクレオチド；からなる
   群から選択される構成ポリぺプチドを有してなる単離さ
   れたポリヌクレオチド。
9. 【請求項９】 請求項２に記載のＤＮＡを有してなるベ
   クター。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載のベクターを有してな
    る宿主細胞。
11. 【請求項１１】 請求項１０の宿主細胞より、該ＤＮＡ
    にコードされるポリペプチドを発現させることからなる
    ポリペプチドの産生方法。
12. 【請求項１２】 細胞が請求項９に記載のベクターに含
    まれるヒトｃＤＮＡによりコードされるポリヌクレオチ
    ドを発現するように、該ベクターで細胞を形質転換また
    はトランスフェクトすることからなるポリペプチドを発
    現する細胞の産生方法。
13. 【請求項１３】 配列番号：２のアミノ酸１から３８０
    と少なくとも７０％同等であるアミノ酸配列を有してな
    るポリペプチド。
14. 【請求項１４】 配列番号：２のアミノ酸２２から３８
    ０と少なくとも７０％同等であるアミノ酸配列を有して
    なるポリペプチド。
15. 【請求項１５】 配列番号：２に示されるアミノ酸配列
    １から３８０を有してなるポリペプチド。
16. 【請求項１６】 配列番号：２に示されるアミノ酸配列
    ２２から３８０を有してなるポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１３、１４、１５または１６に
    記載のポリペプチドに対するアゴニスト。
18. 【請求項１８】 請求項１３、１４、１５または１６に
    記載のポリペプチドに対する抗体。
19. 【請求項１９】 請求項１３、１４、１５または１６に
    記載のポリペプチドの活性を阻害するアンタゴニスト。
20. 【請求項２０】 治療上有効量の請求項１３、１４、１
    ５または１６に記載のポリペプチドを患者に投与するこ
    とからなる、ＨＲ−１レセプターを必要とする患者の治
    療方法。
21. 【請求項２１】 治療上有効量のポリペプチドを、該ポ
    リペプチドをコードするＤＮＡを患者に提供し、該ポリ
    ペプチドをインビボで発現させることにより、投与する
    請求項２０記載の方法。
22. 【請求項２２】 治療上有効量の請求項１９に記載のア
    ンタゴニストを患者に投与することからなる、ＨＲ−１
    レセプターポリペプチドを阻害する必要のある患者の治
    療方法。
23. 【請求項２３】 請求項１３、１４、１５または１６に
    記載のポリペプチドをコードする核酸配列における突然
    変異の測定を測定することからなる、該ポリペプチドの
    発現に関与する疾患またはその疾患に対する感受性の診
    断方法。
24. 【請求項２４】 宿主由来の試料中の請求項１３、１
    ４、１５または１６に記載のポリペプチドの存在を分析
    することからなる診断方法。
25. 【請求項２５】 請求項１３、１４、１５または１６記
    載のポリペプチドのレセプターに結合し、活性化または
    阻害する化合物の同定方法であって；該ポリペプチドの
    レセプター（化合物の該レセプターへの結合に応答して
    検出可能なシグナルを提供する能力のある第２成分に結
    合する）をその表面に発現する細胞を、該レセプターと
    の結合を可能にする条件下で、スクリーニングされるべ
    き化合物と接触させ；該化合物と該レセプターとの相互
    作用から生じるシグナルの存在または不在を検出するこ
    とにより、該化合物が該レセプターに結合して、活性化
    するかまたは阻害するかを測定する；ことからなる方
    法。