JP2000083688A - ＩＬ―１ファミリ―の新規メンバ―、ＩＬ―１δ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ＩＬ−１δポリペプチドおよびポリヌクレオ
チド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法
を提供する。 【解決手段】 配列番号２のＩＬ−１δポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
８０％同一であり、かつＩＬ−１δポリペプチドの活性
を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
チド配列を含んでなるポリヌクレオチドを単離する。 【効果】 ＩＬ−１δポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫
疾患、移植拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、
急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、
骨疾患、癌、アテローム性動脈硬化症、およびアルツハ
イマー病を含む機能障害または疾病の治療と、このよう
な症状の診断アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはインターロイキン−１ファミリーに関し、以後これ
をＩＬ−１δと記す。本発明はまた、このようなポリヌ
クレオチドおよびポリペプチドの作用を阻害または活性
化することに関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−１とは、炎症応答の
初期において重要な役割を果たす2つのタンパク質（Ｉ
Ｌ−１αおよびＩＬ−１β）をいう（検討のためには、
C. A.Dinarello, Blood, 87:2095-2147(1996)およびこ
の論文中の引用文献を参照のこと）。これらのタンパク
質は両方共に３１kDalの細胞内タンパク質前駆体として
生成し、該前駆体は分泌時に切断されて、生物学的活性
を有する１７kDal成熟カルボキシ末端断片となる。ＩＬ
−１βの場合には、この切断に、ＩＣＥとして知られる
細胞内システインプロテアーゼが関与しており、これは
不活性な前駆体から活性断片を放出するのに必要であ
る。ＩＬ−１αの前駆体は活性を有する。

【０００３】これら２つのタンパク質は、ほとんど全て
の細胞型に見られる細胞表面受容体に結合し、他の分泌
因子と協同でまたは単独である範囲の応答を引き起こす
ことによって作用する。これらの応答としては、増殖に
対する効果（例えば、繊維芽細胞、Ｔ細胞の増殖）、ア
ポトーシス（例えば、Ａ３７５メラノーマ細胞）、サイ
トカイン誘導（例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−８の
誘導）、受容体活性化（例えば、Ｅ−セレクチンの活性
化）、エイコサノイド生成（例えば、ＰＧＥ２の生成）
および分解性酵素の分泌（例えば、コラゲナーゼの分
泌）などがある。これを達成するために、ＩＬ−１はＮ
Ｆ−κＢおよびＡＰ−１のような転写因子を活性化す
る。標的細胞に対するＩＬ−１作用の活性の幾つかは、
例えばストレス活性化ＭＡＰキナーゼＪＮＫ／ＳＡＰＫ
およびｐ３８などの、細胞性ストレスにも関連している
キナーゼカスケードの活性化によって媒介されると考え
られる。

【０００４】次いで、ＩＬ−１ファミリーの第３のメン
バーが発見された。該メンバーは、細胞内シグナルまた
は生物学的応答を伝達することなくＩＬ−１受容体に結
合することにより、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの天然
アンタゴニストとして作用する。該タンパク質は（ＩＬ
−１受容体アンタゴニストに対しては）ＩＬ−１ｒａま
たは（ＩＬ−１受容体アンタゴニストタンパク質に対し
ては）ＩＲＡＰと呼ばれていた。ＩＬ−１ｒａには、選
択的にスプライシングされた少なくとも３つの型が存在
する。一つは分泌タンパク質をコードし、他の二つは細
胞内タンパク質をコードする。これらの３つの型の相対
的な役割、およびそれらの異なる局在性の理由は分かっ
ていない。３つのタンパク質、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β
およびＩＬ−１ｒａは全て、約２５〜３０％のアミノ酸
同一性を有し、さらに中間３反復構造モチーフを有する
βバレル中に折りたたまれた12個のβ鎖からなる類似の
３次元構造を共有する。

【０００５】３つのＩＬ−１受容体サブユニットが知ら
れている。活性のある受容体複合体はＩ型受容体および
ＩＬ１ＲＡｃＰ（ＩＬ−１アクセサリータンパク質）か
ら構成される。Ｉ型受容体は３つのリガンドの結合に関
与し、これはＩＬ１ＲＡｃＰの非存在下で結合すること
が可能である。しかし、シグナル伝達にはＩＬ−１αま
たはβとＩＬ１ＲＡｃＰとの相互作用が必要である。Ｉ
Ｌ−１ｒａはＩＬ１ＲＡｃＰと相互作用しないため、シ
グナル伝達はできない。第３の受容体サブユニット、Ｉ
Ｉ型受容体、はＩＬ−１αおよびＩＬ−１βに結合する
が、細胞内ドメインを有しないためにシグナル伝達でき
ない。むしろ、ＩＩ型受容体はその膜型でおとりとして
作用するか、または切断分泌型でアンタゴニストとして
作用し、従ってＩＬ−１活性を阻害する。それはほんの
弱くしかＩＬ−１ｒａに結合しない。

【０００６】ＩＬ−１ｒａ、Ｉ型ＩＬ−１Ｒの細胞外ド
メインから得られる可溶性ＩＬ−１Ｒ、ＩＬ−１αまた
はβに対する抗体、およびこれらの遺伝子のトランスジ
ェニックノックアウトを用いる多くの研究によって、結
果として、ＩＬ−１は幾つかの病態生理学的現象におい
て重要な役割を果たすことが示されている（検討のため
には、C. A. Dinarello, Blood 87:2095-2147(1996)を
参照のこと）。例えば、ＩＬ−１ｒａは、敗血症性ショ
ック、慢性関節リウマチ、移植片対宿主病、卒中（stro
ke）、心臓虚血の動物モデルにおいて効果があることが
示されており、現在、これらの適応症の幾つかについて
臨床試験中である。さらに、ＩＬ−１αおよびβは、造
血幹細胞刺激物質としての可能性を幾らか持っており、
放射線および化学防護物質として可能性のあることが示
されている。

【０００７】さらに最近では、ＩＬ−１ファミリーのよ
り遠縁のメンバーが同定された。このタンパク質は、当
初は、Ｔ細胞中でインターフェロンγを誘導する能力に
よって単離されたため、インターフェロンγ誘導因子
（ＩＧＩＦ）（H. Okamuraら,Nature 378:88-91(199
5)）と呼ばれたが、その後、ＩＬ−１と類似の構造で折
りたたまれており、低いアミノ酸同一性を共有すること
が示された（Bazanら, Nature 379:591(1996)）。ＩＬ
−１γという名称が提案されたが、公式にはＩＬ−１８
という名称が当てられている。ＩＧＩＦは毒素ショック
中に起こる肝臓損傷において直接的な役割を果たすよう
であり、従って、炎症およびストレスのある状態で初期
の役割を果たすという点で他のＩＬ−１に似ている。こ
うしたことは、インターロイキン−１ファミリーに治療
用ターゲットとしての確立され実証された歴史があるこ
とを示している。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎
症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片対宿主病、感
染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳
損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステオポローシ
ス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、アテローム性
動脈硬化症、およびアルツハイマー病を含むがこれらに
限らない、機能障害または疾病を予防し、改善し、治療
する上で何らかの役割を果たすインターロイキン−１フ
ァミリーの新たなメンバーを同定して特性づける必要性
が存在している。本発明はかかるメンバーを提供するも
のである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、ＩＬ−１δポリペプチドおよび組換え物質、並
びにその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様は
ＩＬ−１δポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用
方法に関する。こうした使用には、とりわけ、慢性およ
び急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、
炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片対宿主病、感
染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳
損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステオポローシ
ス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、アテローム性
動脈硬化症、およびアルツハイマー病の治療が含まれ
る。他の態様では、本発明は、本発明により提供される
物質を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定す
る方法、並びに同定された化合物を用いてＩＬ−１δの
不均衡と関連した状態を治療することに関する。本発明
のさらに他の態様は、不適当なＩＬ−１δ活性またはＩ
Ｌ−１δレベルと関連した疾病を検出するための診断ア
ッセイに関する。

【００１０】定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「ＩＬ−１δ」と
は、特に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配
列を有するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を
意味する。「ＩＬ−１δ活性またはＩＬ−１δポリペプ
チド活性」または「ＩＬ−１δまたはＩＬ−１δポリペ
プチドの生物学的活性」とは、類似の活性、向上した活
性、または望ましくない副作用が低下したこれらの活性
を含めて、ＩＬ−１δの代謝的または生理的機能を意味
する。さらに、前記ＩＬ−１δの抗原的および免疫原的
活性も含まれる。「ＩＬ−１δ遺伝子」とは、配列番号
１で表されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドまたはそのアレリック変異体および／またはそれらの
相補体を意味する。

【００１１】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【００１２】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１３】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のあるまたはない環状であってもよい。環状の、分
枝した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の
天然プロセスから生じることがあり、また、合成法によ
って製造することもできる。修飾としては、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結
合、架橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル
化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメー
トの形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシ
ル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素
化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解
処理、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル
化、硫酸化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミ
ノ酸の転移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。
例えば、PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERT
IES, 2nd Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Com
pany, New York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT M
ODIFICATION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic
Press, New York, 1983中のWold, F., Posttranslatio
nal Protein Modifications: Perspectives and Prospe
cts, pgs. 1-12; Seifter ら, “Analysis for protein
modifications and nonprotein cofactors", Meth Enz
ymol (1990) 182:626-646;および Rattan ら, “Protei
n Synthesis: Posttranslational Modifications and A
ging", Ann NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこ
と。

【００１４】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１５】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１６】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１７】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１８】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 一つの態様において、本発明はＩＬ−１δポリペプチド
（またはＩＬ−１δタンパク質）に関する。このＩＬ−
１δポリペプチドには、配列番号２および４のポリペプ
チドだけでなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリ
ペプチド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列
と少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、よ
り好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列
を含むポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９
７〜９９％同一であるものが特に好適である。また、そ
の全長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９
０％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドもＩＬ−１δポリペプチ
ドに含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一で
あるものが特に好適である。ＩＬ−１δポリペプチドは
ＩＬ−１δの少なくとも１つの生物学的活性を示すこと
が好ましい。

【００１９】ＩＬ−１δポリペプチドは「成熟」タンパ
ク質の形であっても、融合タンパク質のような、より大
きいタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加
のアミノ酸配列を含めることが有利であり、このような
アミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プ
ロ配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配
列、または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配
列などがある。

【００２０】また、ＩＬ−１δポリペプチドの断片も本
発明に含まれる。こうした断片は全体的に前記ＩＬ−１
δポリペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、
全部とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチド
である。ＩＬ−１δポリペプチドと同様に、断片は「フ
リースタンディング」（それ自体で独立）していても、
より大きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つま
りその大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好
ましくは一つの連続領域、を断片が構成していてもよ
い。本発明のポリペプチド断片の代表的な例として、お
よその見当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１
−６０、６１−８０、８１−１００、および１０１から
ＩＬ−１δポリペプチドの末端までの断片が挙げられ
る。ここで、「およそ」とは、上記の範囲の一端または
両端で数個、５個、４個、３個、２個または１個のアミ
ノ酸が増えたり減ったりした範囲を含むものである。

【００２１】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、Ｉ
Ｌ−１δポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケ
ーション(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、
αヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシ
ート形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイ
ル形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領
域、β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質
結合領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、
構造的または機能的特性により特徴づけられる断片も好
適である。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片
である。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断
片、その活性が向上した断片、または望ましくない活性
が減少した断片を含めて、ＩＬ−１δ活性を媒介するも
のである。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性また
は免疫原性がある断片も含まれる。

【００２２】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたＩＬ−１δの生物学的活性を保持すること
が好ましい。中でも、最も好ましい断片は配列番号４の
アミノ酸配列を有するものである。特定された配列およ
び断片の変異型も本発明の一部を構成する。好適な変異
型は同類アミノ酸置換により対象物と異なるもの、すな
わち、ある残基が同様の性質の他の残基で置換されてい
るものである。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Le
u と Ileの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGlu の
間；Asn とGln の間；塩基性残基 LysとArg の間；また
は芳香族残基 PheとTyr の間で起こる。特に、数個、５
〜１０個、１〜５個または１〜２個のアミノ酸が任意の
組合せで置換、欠失または付加されている変異型が好適
である。

【００２３】本発明のＩＬ−１δポリペプチドは任意の
適当な方法で製造することができる。このようなポリペ
プチドには、単離された天然に存在するポリペプチド、
組換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造され
たポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製
造されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプ
チドの製造のための手段は当業界でよく理解されてい
る。

【００２４】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの態様はＩＬ−１δポリヌクレオチド
に関する。ＩＬ−１δポリヌクレオチドには、ＩＬ−１
δポリペプチドおよび断片をコードする単離されたポリ
ヌクレオチド、並びにこれらと密接に関連したポリヌク
レオチドが含まれる。さらに特定すると、本発明のＩＬ
−１δポリヌクレオチドとしては、配列番号２のＩＬ−
１δポリペプチドをコードする配列番号１中に含まれる
ヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列
番号１および３の特定配列を有するポリヌクレオチドが
ある。さらに、ＩＬ−１δポリヌクレオチドには、配列
番号２のＩＬ−１δポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列と全長において少なくとも８０％同一であるヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番
号１のヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０
％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド
が含まれる。これに関連して、少なくとも９０％同一で
あるポリヌクレオチドが好適であり、特に少なくとも９
５％同一であるものが好適である。さらに、少なくとも
９７％同一であるものがより好ましく、少なくとも９８
〜９９％同一であるものがより一層好ましく、少なくと
も９９％同一であるものが最も好ましい。また、増幅反
応に使用できる条件下、またはプローブやマーカーとし
て使用できる条件下でハイブリダイズするのに十分な、
配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列との同一性を
有するヌクレオチド配列もＩＬ−１δポリヌクレオチド
に含まれる。本発明はまた、このようなＩＬ−１δポリ
ヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２５】本発明のＩＬ−１δは、ヒトＩＬ−１δを
コードするｃＤＮＡの配列決定の結果により示されるよ
うに、インターロイキン−１ファミリーの他のタンパク
質と構造的に関連している。配列番号１のｃＤＮＡ配列
は配列番号２の１６４個のアミノ酸からなるポリペプチ
ドをコードするオープンリーディングフレーム（ヌクレ
オチド番号１１２−６０３）を含んでいる。表２のアミ
ノ酸配列（配列番号２）は１５６個のアミノ酸残基にお
いてヒトＩＬ−１βと約２５．０％同一である（ＢＥＳ
ＴＦＩＴ使用）（Auronら, (1984) Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 81:7907-7911; Marchら, (1985) Nature 315:
641-647）。表１のヌクレオチド配列（配列番号１）は
７０個のヌクレオチド残基においてカエノラブディティ
ス・エレガンス（Caenorhabditis elegans）コスミドＦ
０１Ｄ４（Genbank受託番号：Z81054）と約６７％同一
である（ＢＬＡＳＴ使用）。したがって、本発明のＩＬ
−１δポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とりわ
け、それらの相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
と同様の生物学的機能／特性をもつことが予測され、そ
れらの有用性は当業者には自明である。

【００２６】ヒトＩＬ−１δのヌクレオチド配列（配列
番号１）

【表１】

【００２７】ヒトＩＬ−１δのアミノ酸配列（配列番号
２）

【表２】

【００２８】ＩＬ−１δをコードする本発明の一つのポ
リヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリ
ーニングにより、ヒト破骨細胞腫の細胞中のｍＲＮＡか
ら誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、発現配列タグ
（expressed sequence tag:EST)分析 (Adams, M.D. ら,
Science (1991) 252:1651-1656; Adams, M.D. ら,Natu
re (1992) 355:632-634; Adams, M.D.ら, Nature (199
5) 377 Supp:3-174)を用いて得ることができる。また、
本発明のポリヌクレオチドはゲノムＤＮＡライブラリー
のような天然源から得ることができ、商業的に入手可能
な公知の技法を用いて合成することもできる。

【００２９】配列番号２のＩＬ−１δポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペ
プチドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号１１
２−６０３）と同一であっても、遺伝子コードの重複性
（縮重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコ
ードする配列であってもよい。

【００３０】本発明のポリヌクレオチドをＩＬ−１δポ
リペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリ
ヌクレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列また
はその断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーも
しくは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タ
ンパク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードす
るもの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリ
ペプチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc.Natl. Acad. Sc
i. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ−
ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、こ
のポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００３１】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のＩＬ−１δポリペプチドのアミノ酸配列
（配列番号２）を含むＩＬ−１δ変異型をコードするポ
リヌクレオチドである。中でも、本発明の好ましいポリ
ヌクレオチドは表４のアミノ酸配列（配列番号４）をコ
ードする表３（配列番号３）中に含まれるポリヌクレオ
チドである。

【００３２】ヒトＩＬ−１δの部分ヌクレオチド配列
（配列番号３）

【表３】

【００３３】ヒトＩＬ−１δの部分アミノ酸配列（配列
番号４）

【表４】

【００３４】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００３５】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、ＩＬ−１δポリペプチドをコ
ードする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する
ために、また、ＩＬ−１δ遺伝子との配列類似性が高い
他の遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオー
ソログ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤ
ＮＡおよびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡ
およびゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブ
として用いることができる。このようなハイブリダイゼ
ーション技法は当業者には公知である。一般的に、これ
らのヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８
０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一で
ある。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを
含み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌク
レオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは
３０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものであ
る。

【００３６】一実施態様において、ＩＬ−１δポリペプ
チド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ
体を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ること
は、配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有
する標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブ
リダイゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリ
ーニングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃ
ＤＮＡおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んで
なる。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者
に公知である。かくして、もう一つの態様では、本発明
のＩＬ−１δポリヌクレオチドはさらに、配列番号１の
ヌクレオチド配列またはその断片（配列番号３の断片を
含む）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズす
るヌクレオチド配列を含んでなるヌクレオチド配列を含
むものである。ＩＬ−１δポリペプチドも、前記のハイ
ブリダイゼーション条件により得られたヌクレオチド配
列によりコードされるアミノ酸配列を含んでなるポリペ
プチドを含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件は上で定義したとおりであるか、または、50%
ホルムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三
ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５×De
nhardt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変
性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中で４２℃
で一夜インキュベートし、次いでフィルターを 0.1×SS
C 中約６５℃で洗浄する条件である。

【００３７】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００３８】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３９】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、射出導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００４０】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００４１】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００４２】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００４３】スクリーニングアッセイで使用するためＩ
Ｌ−１δポリペプチドを発現させようとする場合、その
ポリペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。ＩＬ−１δポリペプチドが培地
に分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製す
るために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、
その細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収す
る必要がある。

【００４４】組換え細胞培養物からＩＬ−１δポリペプ
チドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエ
タノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換ク
ロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００４５】診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのＩＬ−１δポリヌクレオ
チドの使用に関する。機能障害と関連したＩＬ−１δ遺
伝子の変異型の検出は、ＩＬ−１δの過少発現、過剰発
現または変化した発現により生ずる疾病またはその罹病
性の診断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断
用ツールを提供するだろう。ＩＬ−１δ遺伝子に変異が
ある個体を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つ
け出すことができる。

【００４６】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ＩＬ−１
δヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定
できる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖と
はＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により
区別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用い
るまたは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動
度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても
検出できる（例えば、Myers ら, Science (1985) 230:1
242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレア
ーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよ
びＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても
確認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1
985) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様で
は、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを
行うため、ＩＬ−１δヌクレオチド配列またはその断片
を含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築する
ことができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能
性を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性
を含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすため
に用いられている（例えば、M. Chee ら, Science, Vo
l.274, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４７】診断アッセイは、前記の方法によりＩＬ−
１δ遺伝子の変異を検出することで、慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸
疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片対宿主病、感染、卒
中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、
ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステオポローシス）、癌
（例えば、リンパ増殖性障害）、アテローム性動脈硬化
症、およびアルツハイマー病への罹りやすさを診断また
は判定する方法を提供する。

【００４８】さらに、被験者から得られたサンプルから
ＩＬ−１δポリペプチドまたはＩＬ−１δｍＲＮＡのレ
ベルの異常な低下または増加を測定する方法により、慢
性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例
えば、炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片対宿主
病、感染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再発狭窄
症、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステオポロ
ーシス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、アテロー
ム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病の診断を下す
ことができる。発現の低下または増加は、当技術分野で
公知のポリヌクレオチド定量法のいずれか、例えばＰＣ
Ｒ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザ
ンブロット、その他のハイブリダイゼーション法により
ＲＮＡレベルで測定することができる。宿主から得られ
たサンプル中のＩＬ−１δポリペプチドのようなタンパ
ク質のレベルを測定するためのアッセイ法は当業者によ
く知られている。こうしたアッセイ法として、ラジオイ
ムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット
分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４９】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病、特に慢性および急性炎症、関節炎、敗血
症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、移
植拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸
疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患
（例えば、オステオポローシス）、癌（例えば、リンパ
増殖性障害）、アテローム性動脈硬化症、およびアルツ
ハイマー病または該疾病への罹りやすさを診断するため
のキットに関し、このキットは、(a) ＩＬ−１δポリヌ
クレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレオチド配
列）もしくはその断片、(b) (a) のヌクレオチド配列に
相補的なヌクレオチド配列、(c)ＩＬ−１δポリペプチ
ド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）もしくは
その断片、または(d)ＩＬ−１δポリペプチド（好まし
くは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、を含
んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、(b) 、
(c) または(d)が実質的な構成成分であることが理解さ
れよう。

【００５０】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。患者と正常個
体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることが
できる。患者の一部または全部に変異が観察されて、ど
の正常個体にも観察されない場合は、その変異が疾病の
原因である可能性がある。

【００５１】抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、ＩＬ−１δポリペプチ
ドに免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても
使用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体
が従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその
親和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高
い親和性を有することを意味する。

【００５２】ＩＬ−１δポリペプチドに対する抗体は、
慣用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C.,Nature (1975) 256:495-497)、ト
リオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法(Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法 (Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AN
D CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R.Liss, Inc., 198
5) などがある。

【００５３】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。ＩＬ−１δポリペプチドに対する抗体は、とりわ
け、慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾
患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片
対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再
発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステ
オポローシス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、ア
テローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病の治療
に使用できる可能性がある。

【００５４】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性および急性
炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性
腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片対宿主病、感染、卒
中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、
ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステオポローシス）、癌
（例えば、リンパ増殖性障害）、アテローム性動脈硬化
症、およびアルツハイマー病から前記動物を防御するた
めの抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生ずるのに十
分なＩＬ−１δポリペプチドまたはその断片を哺乳動物
に接種することを含んでなる。本発明のさらに別の態様
は、哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させるよう
な免疫学的応答を引き出すために、in vivo でＩＬ−１
δポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介して
ＩＬ−１δポリペプチドを供給することを含んでなる、
哺乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関す
る。

【００５５】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてＩＬ−１δポリペプ
チドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチ
ン製剤（組成物）に関し、この組成物はＩＬ−１δポリ
ペプチドまたはＩＬ−１δ遺伝子を含有する。ワクチン
製剤は適当な担体をさらに含んでいてもよい。ＩＬ−１
δポリペプチドは胃の中で分解されうるので、非経口的
（皮下、筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投
与することが好ましい。非経口投与に適した製剤として
は、酸化防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容
者の血液と等張にする溶質を含みうる水性および非水性
の無菌注射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる
水性および非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は
１回量容器または数回量容器（例えば、密閉アンプルお
よびバイアル）で提供することができ、また、使用直前
に無菌の液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で
保管することもできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫
原性を増強するためのアジュバント系、例えば水中油型
のアジュバント系や当技術分野で公知の他のアジュバン
ト系を含んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で
変化し、ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５６】スクリーニングアッセイ 本発明のＩＬ−１δポリペプチドは、このポリペプチド
を活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻
害する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともい
う）のスクリーニング法において使用することができ
る。こうして、本発明のポリペプチドは、例えば、細
胞、無細胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産
物の混合物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価
し同定するためにも用いられる。これらのアゴニストま
たはアンタゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合
によって、天然のまたは修飾された基質、リガンド、受
容体、酵素などであってよく、また、本発明のポリペプ
チドの構造的または機能的な模擬物であってもよい（Co
ligan ら, Current Protocols in Immunology 1(2): Ch
apter 5 (1991)を参照のこと）。

【００５７】ＩＬ−１δポリペプチドは多くの病理を含
めて多数の生物学的機能に関与している。したがって、
一方ではＩＬ−１δポリペプチドを刺激し、他方ではＩ
Ｌ−１δポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および
薬物を見つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニス
トは慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾
患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植片
対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、再
発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オステ
オポローシス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、ア
テローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病のよう
な症状の治療および予防目的で用いられる。アンタゴニ
ストは慢性および急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫
疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶、移植
片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸疾患症候群、
再発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、骨疾患（例えば、オス
テオポローシス）、癌（例えば、リンパ増殖性障害）、
アテローム性動脈硬化症、およびアルツハイマー病のよ
うな症状のさまざまな治療および予防目的で使用しう
る。

【００５８】一般に、こうしたスクリーニング法はＩＬ
−１δポリペプチドを発現する適当な細胞、またはＩＬ
−１δポリペプチドに応答する適当な細胞を用いるもの
である。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョ
ウバエ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次い
で、ＩＬ−１δポリペプチドを発現する細胞（もしくは
発現されたポリペプチドを含む細胞膜）またはＩＬ−１
δポリペプチドに応答する細胞を試験化合物と接触させ
て、その結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観
察する。候補化合物と接触させた細胞の能力を、接触さ
せなかった同一細胞とＩＬ−１δ活性に関して比較す
る。

【００５９】また、ＩＬ−１δのｃＤＮＡ、タンパク質
またはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内で
のＩＬ−１δｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす
添加化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立て
ることができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法
によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用い
て、ＩＬ−１δタンパク質の分泌レベルまたは細胞結合
レベルを測定するためのＥＬＩＳＡを構築することがで
き、これは適切に操作された細胞または組織からのＩＬ
−１δの生産を抑制または増強する物質（それぞれアン
タゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用いる
ことができる。

【００６０】当技術分野で公知の標準的な受容体結合法
によって膜結合受容体または可溶性受容体を同定するた
めにＩＬ−１δタンパク質を用いることができる。こう
した受容体結合法には、限定するものではないが、リガ
ンド結合および架橋アッセイがあり、このアッセイで
は、ＩＬ−１δを放射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標
識するか、化学的に修飾（例：ビオチン化）するか、ま
たは検出や精製に適したペプチド配列に融合させ、そし
て推定上の受容体源（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽
出物、体液など）とインキュベートする。その他の方法
としては、表面プラズモン共鳴および分光学のような生
物物理的方法がある。受容体の精製およびクローニング
に用いることに加えて、これらの結合アッセイは、ＩＬ
−１δのその受容体への結合と競合するＩＬ−１δのア
ゴニストまたはアンタゴニストを同定するために用いる
こともできる。δのアゴニストおよびアンタゴニストを
同定するのに使用することができる。上記結合アッセイ
を使用して、ＩＬ−１δに対して生物学的に応答する細
胞を同定することができる。ＩＬ−１δに応答する細胞
は、細胞内シグナル伝達経路および遺伝子発現において
変化を示す可能性がある。これらの変化は、ＩＬ−１δ
の作用を模倣しまたは阻害する、それぞれアゴニストま
たはアンタゴニストのスクリーニングに利用することが
できる。

【００６１】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、ＩＬ−１δポ
リペプチドを担持する細胞への付着が検出される。さら
に、これらのアッセイでは、ＩＬ−１δポリペプチドを
担持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物がＩ
Ｌ−１δポリペプチドの活性化により生ずるシグナルを
結果的にもたらすか否かを試験することができる。一般
的に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でア
ッセイされ、そして候補化合物の存在がアゴニストによ
る活性化に与える影響が調べられる。

【００６２】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とＩＬ−１δポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて
混合物をつくり、この混合物中のＩＬ−１δ活性を測定
し、そしてこの混合物のＩＬ−１δ活性を標準と比較す
る各ステップを単に含むだけでよい。

【００６３】また、ＩＬ−１δのｃＤＮＡ、タンパク質
またはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内で
のＩＬ−１δｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす
添加化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立て
ることができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法
によりモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用い
て、ＩＬ−１δタンパク質の分泌レベルまたは細胞結合
レベルを測定するためのＥＬＩＳＡを構築することがで
き、これは適切に操作された細胞または組織からのＩＬ
−１δの生産を抑制または増強する物質（それぞれアン
タゴニストまたはアゴニストともいう）の探索に用いる
ことができる。

【００６４】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにＩＬ−１δタ
ンパク質を用いることができる。こうした受容体結合法
には、限定するものではないが、リガンド結合および架
橋アッセイがあり、このアッセイでは、ＩＬ−１δを放
射性アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に
修飾（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適
したペプチド配列に融合させ、そして推定上の受容体源
（細胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など）と
インキュベートする。その他の方法としては、表面プラ
ズモン共鳴および分光学のような生物物理的方法があ
る。受容体の精製およびクローニングに用いることに加
えて、これらの結合アッセイは、もし存在するのであれ
ば、ＩＬ−１δのその受容体への結合と競合するＩＬ−
１δのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するため
に用いることもできる。スクリーニングアッセイを行う
ための標準的な方法は当技術分野でよく理解されてい
る。

【００６５】ＩＬ−１δポリペプチドの潜在的なアンタ
ゴニストの例としては、抗体、ある場合には、ＩＬ−１
δポリペプチドの、場合により、リガンド、基質、受容
体、酵素などと密接な関係があるオリゴヌクレオチドも
しくはタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの断片）、または本発明のポリペプチドと結合
するが応答を誘導しない（それゆえポリペプチドの活性
を妨げる）小分子などがある。

【００６６】かくして、他の態様において、本発明は、
ＩＬ−１δポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニス
ト、リガンド、受容体、基質、酵素など、またはＩＬ−
１δポリペプチドの生産を低下または増加させる化合物
を同定するためのスクリーニングキットに関し、このキ
ットは、 (a)ＩＬ−１δポリペプチド（好ましくは、
配列番号２のポリペプチド）(b)ＩＬ−１δポリペプチ
ド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）を発現す
る組換え細胞、(c)ＩＬ−１δポリペプチド（好ましく
は、配列番号２のポリペプチド）を発現する細胞膜、ま
たは(d)ＩＬ−１δポリペプチド（好ましくは、配列番
号２のポリペプチド）に対する抗体、を含んでなる。こ
のようなキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または(d)
が実質的な構成成分であることが理解されよう。

【００６７】予防および治療法 本発明は、ＩＬ−１δポリペプチド活性の過剰量と不足
量のどちらにも関係した慢性および急性炎症、関節炎、
敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾
癬）、移植拒絶、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、
急性呼吸疾患症候群、再発狭窄症、脳損傷、ＡＩＤＳ、
骨疾患（例えば、オステオポローシス）、癌（例えば、
リンパ増殖性障害）、アテローム性動脈硬化症、および
アルツハイマー病などの異常な状態の治療法を提供す
る。

【００６８】ＩＬ−１δポリペプチドの活性が過剰であ
る場合は、いくつかのアプローチが利用可能である。一
つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容体、
酵素などの結合をブロックすることにより、または第２
のシグナルを抑制することで異常な状態を軽減すること
により、ＩＬ−１δポリペプチドの機能を阻害するのに
有効な量で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）を
製剤学上許容される担体とともに患者に投与することを
含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のＩＬ
−１δポリペプチドとの競合状態でリガンド、基質、酵
素、受容体などと結合する能力がまだある可溶性形態の
ＩＬ−１δポリペプチドを投与することができる。この
ような競合剤の典型的な例はＩＬ−１δポリペプチドの
断片である。

【００６９】別のアプローチでは、内因性のＩＬ−１δ
ポリペプチドとの競合状態でリガンドと結合する能力が
まだある可溶性形態のＩＬ−１δポリペプチドを投与す
ることができる。このような競合剤の典型的な例はＩＬ
−１δポリペプチドの断片である。

【００７０】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ＩＬ−１δポリペプチドをコードする遺伝
子の発現を抑制することができる。こうした公知技術
は、体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス
配列の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleoti
des as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CR
C Press, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neur
ochem (1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、こ
の遺伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチ
ドを供給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic
Acids Res (1979)6:3073; Cooney ら, Science (1988)
241:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照
のこと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与すること
もできるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させるこ
ともできる。

【００７１】ＩＬ−１δおよびその活性の過少発現に関
係した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロ
ーチを取ることができる。一つのアプローチは、治療上
有効な量のＩＬ−１δポリペプチドを活性化する化合物
（すなわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される
担体とともに患者に投与して、異常な状態を緩和するこ
とを含んでなる。別法として、患者の関連細胞において
ＩＬ−１δを内因的に産生させるために遺伝子治療を用
いることができる。例えば、上で述べたような複製欠損
レトロウイルスベクターによる発現のために本発明のポ
リヌクレオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス
発現構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードす
るＲＮＡを含有するレトロウイルスプラスミドベクター
で形質導入されたパッケージング細胞に導入する。その
結果、パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感
染性のウイルス粒子を産生するようになる。in vivo で
の細胞処理およびin vivo でのポリペプチド発現のため
に、これらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の
概論に関しては、Human Molecular Genetics, T Strach
anand A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (19
96) 中のChapter 20, Gene Therapy and other Molecul
ar Genetic-based Therapeutic Approaches(およびその
中の引用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは
治療量のＩＬ−１δポリペプチドを適当な製剤学上の担
体とともに投与することである。

【００７２】製剤および投与 可溶性形態のＩＬ−１δポリペプチドのようなペプチ
ド、アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または
小分子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化す
ることができる。このような製剤は治療上有効な量のポ
リペプチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体ま
たは賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩
水、生理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、
エタノール、およびこれらの組合せがあるが、これらに
限らない。製剤は投与様式に適合させるべきであり、こ
れは当技術分野の技量の範囲内である。本発明はさら
に、前記の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以
上の容器を含んでなる医薬用パックおよびキットに関す
る。本発明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使
用しても、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使
用してもよい。

【００７３】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００７４】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００７５】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００７６】

【実施例】以下に示す実施例は、詳細に記載する部分を
除いて、当業者にとって公知であり、日常的に行われる
標準的な技術を用いて実施された。これらの実施例は例
示のためのものであり、本発明を限定するものではな
い。

【００７７】〔実施例１〕公表はされていないが以前の
特許出願（米国特許出願第08/790032号）中に提示され
ている、以前に同定されたＩＬ−１ファミリーの新規メ
ンバー、ＩＬ−１ｒａβのアミノ酸配列を用いる市販デ
ータベースの調査によって、ＩＬ−１δをコードする部
分クローンを同定した。このクローンの部分配列は、Ｉ
Ｌ−１ｒａβと３４．８％のアミノ酸同一性を共有し、
ヒトＩＬ−１βと２５．８％の同一性を共有していた
（Auronら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:7907-7911
(1984); C. J. Marchら, Nature 315:641-647 (198
5)）。ＩＬ−１δをコードするクローンは破骨細胞腫細
胞ライブラリー中に見出された。

【００７８】〔実施例２〕全長ｃＤＮＡを得る方法は幾
つかあるが、そのうちの２つを以下に述べる。 （１） ｃＤＮＡ末端急速増幅法（Rapid Amplificatio
n of cDNA Ends: ＲＡＣＥ）を用いて５'末端を得た（F
rohmanら, Proc. Nat. Acad. Sci. USA 85, 8998-9002
(1988)を参照のこと）。すなわち、特定のオリゴヌクレ
オチドをｍＲＮＡにアニールし、これを用いてｃＤＮＡ
鎖の合成を開始させた。ＲＮアーゼＨを用いてｍＲＮＡ
を分解した後、ポリＣアンカー配列をｃＤＮＡの３'末
端に付加させ、得られる断片をネスティッドアンチセン
スプライマーセットおよび１種のアンカー配列プライマ
ーを用いて増幅した。増幅された断片を適切なベクター
中にクローニングし、制限酵素分析および配列分析に供
した。

【００７９】（２） ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）
を用い、２セットのプライマーを使用するネスティッド
ＰＣＲを連続して繰り返すことにより、ヒトｃＤＮＡラ
イブラリーに由来するｃＤＮＡの５'末端を増幅した。
一方のアンチセンスプライマーセットは部分ｃＤＮＡの
５'末端に特異的であり、他方のプライマーセットはベ
クターに特異的な配列にアニールされた。増幅産物を適
切なベクター中にクローニングし、制限酵素分析および
配列分析に供した。

【００８０】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００８１】

【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：１１９０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GGCACGAGGT TCCTCCCCAC TCTGTCTTTC TCACCTCTCC TTCACTTTTC CTAGCCTCCT 60 CACCACCATC TGATCTATCT TGTTCTCTTC ACAAAAGGCT CTGAAGACAT CATGAACCCA 120 CAACGGGAGG CAGCACCCAA ATCCTATGCT ATTCGTGATT CTCGACAGAT GGTGTGGGTC 180 CTGAGTGGAA ATTCTTTAAT AGCAGCTCCT CTTAGCCGCA GCATTAAGCC TGTCACTCTT 240 CATTTAATAG CCTGTAGAGA CACAGAATTC AGTGACAAGG AAAAGGGTAA TATGGTTTAC 300 CTGGGAATCA AGGGAAAAGA TCTCTGTCTC TTCTGTGCAG AAATTCAGGG CAAGCCTACT 360 TTGCAGCTTA AGCTTCAGGG CTCCCAAGAT AACATAGGGA AGGACACTTG CTGGAAACTA 420 GTTGGAATTC ACACATGCAT AAACCTGGAT GTGAGAGAGA GCTGCTTCAT GGGAACCCTT 480 GACCAATGGG GAATAGGAGT GGGTAGAAAG AAGTGGAAGA GTTCCTTTCA ACATCACCAT 540 CTCAGGAAGA AGGACAAAGA TTTCTCATCC ATGCGGACCA ACATAGGAAT GCCAGGAAGG 600 ATGTAGAAAT AAGGGGAGGA AGATTCCCAT CTCTACAATC TTTGAGTGGG TTTGCTATCA 660 ATGAAATGCT ACAAATGGAA TAAGTTGCAG AAATTTTTCT CTTTTCTTGG GTTCTGGAGA 720 GTTTGTAAAA CAAGGACACT ATGTATTTTT AAAGAGTTGG TAAATCTTAC CTGTAAAGCT 780 AGAGAAGGTC GGAGTCTTTT TAGGAGTAGA TTTGGACTAC ATAACCTGTA AATGTGTTTT 840 GTCCAGTCCT TAGAGTGTTT TTTAAAAAAT TGTAAAGTCA AGGTTTTCAT GAAAAATGGG 900 GAAGATCAGA CAACATTGGT CCTGAATTCC CACAGAGCAG CAAGCTACTA GAGCTCAATC 960 TGTTATTTCT TTTCCTGATG AACAGGGGTT AAGTCCTATG GAAGAAACAG CAGAATTATT 1020 CAAAATTATT TACATAATGT GCAATTATTC ACTAGAGCAT GAGGAGTGAA ACGCTCTGTT 1080 TAGTATGTAT AACTTAAAAG GAACACATAC AATTAAAAGT AATTGAAAGA CATTTCTTCT 1140 TAAAAATTCT ATAATCTTAC ACTGGTAAAA TAAACTAGTT TTTCCCATGT 1190

【００８２】 配列番号：２ 配列の長さ：１６４ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Asn Pro Gln Arg Glu Ala Ala Pro Lys Ser Tyr Ala Ile Arg Asp 1 5 10 15 Ser Arg Gln Met Val Trp Val Leu Ser Gly Asn Ser Leu Ile Ala Ala 20 25 30 Pro Leu Ser Arg Ser Ile Lys Pro Val Thr Leu His Leu Ile Ala Cys 35 40 45 Arg Asp Thr Glu Phe Ser Asp Lys Glu Lys Gly Asn Met Val Tyr Leu 50 55 60 Gly Ile Lys Gly Lys Asp Leu Cys Leu Phe Cys Ala Glu Ile Gln Gly 65 70 75 80 Lys Pro Thr Leu Gln Leu Lys Leu Gln Gly Ser Gln Asp Asn Ile Gly 85 90 95 Lys Asp Thr Cys Trp Lys Leu Val Gly Ile His Thr Cys Ile Asn Leu 100 105 110 Asp Val Arg Glu Ser Cys Phe Met Gly Thr Leu Asp Gln Trp Gly Ile 115 120 125 Gly Val Gly Arg Lys Lys Trp Lys Ser Ser Phe Gln His His His Leu 130 135 140 Arg Lys Lys Asp Lys Asp Phe Ser Ser Met Arg Thr Asn Ile Gly Met 145 150 155 160 Pro Gly Arg Met 164

【００８３】 配列番号：３ 配列の長さ：３２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 GTTCCTCCCC ACTCTTTNTT TNTCACCTNT CCTTCACTTT TCCTAGCCTC CTCACCACCA 60 TCTGATCTAT CTNGTTCTCT TCACAAAAGG CTCTGAAGAC ATCATGAACC CACAACGGGA 120 GGCAGCACCC AANTCCTATG CTATTCGTGA ATTCTNGACA GATGGTGTGG GTCCTGAGTG 180 GAAATTNTTT AATAGCAGCT CCTCTTAGCC GCAGCATTAA GCCTGTCACT CTTCATTTAA 240 TAGCCTGTAG AGACACAGAA TTCAGTGACA AGGAAAAGGG TAATATGGTT TACCTGGGGA 300 TCAAGGGAAA GATCTCTGGT 320

【００８４】 配列番号：４ 配列の長さ：７１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Thr His Asn Gly Arg Gln His Pro Xaa Pro Met Leu Phe Val Asn Ser 1 5 10 15 Xaa Gln Met Val Trp Val Leu Ser Gly Asn Xaa Leu Ile Ala Ala Pro 20 25 30 Leu Ser Arg Ser Ile Lys Pro Val Thr Leu His Leu Ile Ala Cys Arg 35 40 45 Asp Thr Glu Phe Ser Asp Lys Glu Lys Gly Asn Met Val Tyr Leu Gly 50 55 60 Ile Lys Gly Lys Ile Ser Gly 65 70 71

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 37/02 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/545 Ｃ０７Ｋ 14/545 16/24 16/24 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｋ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 1/68 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (72)発明者 イアン イー．ジェームズ アメリカ合衆国 19003 ペンシルバニア 州， アードモア，シンプソン ロード 119 (72)発明者 ジャニス アール．コナー アメリカ合衆国 19034 ペンシルバニア 州， フォート ワシントン，シーフ レ ーン 7200

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のＩＬ−１δポリペプチドを
   コードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも
   ８０％同一であり、かつＩＬ−１δポリペプチドの活性
   を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、
   またはこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオ
   チド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
   のＩＬ−１δポリペプチドをコードする配列番号１中に
   含まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記
   載のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記のポリヌクレオチドが、その全長に
   おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０
   ％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１のポリヌクレオチドである、
   請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のＩＬ−１δポリペプチドの
   アミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付
   加、欠失または置換されており、かつＩＬ−１δポリペ
   プチドの活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレ
   オチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも８０％
   同一であるアミノ酸配列を含むＩＬ−１δポリペプチド
   を産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまた
   はＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
9. 【請求項９】 ＩＬ−１δポリペプチドを産生させるの
   に十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、
   この培養物から前記ポリペプチドを回収することを含ん
   でなる、ＩＬ−１δポリペプチドの産生方法。
10. 【請求項１０】 宿主細胞が適当な培養条件下でＩＬ−
    １δポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の
    発現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェ
    クションすることを含んでなる、ＩＬ−１δポリペプチ
    ドを産生する細胞の作製方法。
11. 【請求項１１】 全長において配列番号２のアミノ酸配
    列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含んで
    なるＩＬ−１δポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
    求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のＩＬ−１δポリペ
    プチドに免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のＩＬ−１δポリペ
    プチドの活性増加または発現増加を必要としている患者
    を治療するための医薬組成物であって、治療上有効な量
    の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
    たは(b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたら
    す形の、配列番号２のＩＬ−１δポリペプチドをコード
    するヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％
    同一であるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド
    配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単
    離されたポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載のＩＬ−１δポリペ
    プチドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治
    療するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
    ／または(b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチ
    ド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c)
    前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に関し
    て前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含んで
    なる医薬組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載のＩＬ−１δポリペ
    プチドの発現または活性と関連した被験者の疾病または
    その罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者由来のゲノム中にＩＬ−１δポリペプチ
    ドをコードするヌクレオチド配列の突然変異があるかど
    うかを調べる、および／または(b) 前記被験者から得ら
    れたサンプル中のＩＬ−１δポリペプチド発現の存在ま
    たは量を分析する、ことを含んでなる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のＩＬ−１δポリペ
    プチドを阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方
    法であって、 (a) ＩＬ−１δポリペプチドを発現している細胞（もし
    くはＩＬ−１δポリペプチドを発現している細胞膜）ま
    たはＩＬ−１δポリペプチドに応答する細胞と候補化合
    物とを接触させ、そして(b) その結合、または機能的応
    答の刺激もしくは抑制を観察するか、または候補化合物
    と接触させた細胞（または細胞膜）の能力を、接触させ
    なかった同一の細胞と、ＩＬ−１δポリペプチド活性に
    関して比較する、ことを含んでなる方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。
19. 【請求項１９】 請求項１０に記載の方法により作製さ
    れた組換え宿主細胞、またはＩＬ−１δポリペプチドを
    発現しているその膜。