JPH11186A

JPH11186A - Ｆｒｚｂファミリーのメンバー、ｆｒａｚｚｌｅｄ

Info

Publication number: JPH11186A
Application number: JP10141081A
Authority: JP
Inventors: Michael W Lark; ウィリアムラークマイケル; Ian E James; エドワードジェームズイアン; Sanjay Kumar; クマーサンジェイ
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1997-05-22
Filing date: 1998-05-22
Publication date: 1999-01-06
Also published as: JP2000083683A; EP0887406A3; EP0887406A2; CA2231017A1

Abstract

(57)【要約】【課題】 FRAZZLEDポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法を
提供する。【解決手段】配列番号２のFRAZZLEDポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
０％同一であり、かつFRAZZLEDポリペプチドの活性を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
配列を含んでなるポリヌクレオチド。【効果】 FRAZZLEDポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは慢性および急性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血
症、自己免疫疾患、移植組織片拒絶反応、移植片対宿主
疾患、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、腎
障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性および他の骨
疾患、癌、動脈硬化、およびアルツハイマー病を含む機
能障害または疾病の治療と、このような症状の診断アッ
セイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはFRZBファミリーに関し、以後これをFRAZZLEDと記
す。本発明はまた、このようなポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの作用を阻害または活性化することに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】近年、発生パターンを制御するタンパク
質の同定および特性決定について多くの研究が集中的に
なされてきた。これらのタンパク質はフリズルド(frizz
led)およびスムーズンド(smoothened)[Moonら、Cell 8
8:725-728(1997)]に例示されるような、大きなファミリ
ー(フリズルドファミリーと称される)のメンバーであ
る。スムーズンドタンパク質は12回膜貫通タンパク質の
パッチド(patched)に関連する7回膜貫通タンパク質であ
り、可溶性アゴニストであるインディアン・ヘッジホッ
グ(Indian hedgehog)[(Stoneら、Science 384(14):129-
134(1996))]のシグナル伝達を調節している。インディ
アン・ヘッジホッグおよび副甲状腺ホルモン関連ペプチ
ドは哺乳動物系の軟骨細胞の分化を調節していると思わ
れる[Vortkampら、Science 273(2):613-622(1996)]。軟
骨細胞の表現型を制御することは、骨関節炎、骨粗鬆症
およびリウマチ様関節炎等の骨と軟骨との両方に関係し
た疾患において、軟骨のホメオスタシス(恒常性)を維持
する上で極めて重要でありうる。

【０００３】フリズルドファミリーの細胞膜に結合して
いるメンバーに加えて、最近になって、可溶性のフリズ
ルド関連タンパク質サブファミリーが記載された。Frz
b,Fritz,フレズルド(frezzled)またはｓFRP(可溶性フリ
ズルド関連タンパク質)と称されるこのファミリーのメ
ンバーは、細胞外でフリズルドアゴニストに結合してシ
グナル伝達を制御すると思われる[Moonら、Cell 88:725
-728(1997)；Wangら、Cell 88:757-766(1997)；Leyns
ら、Cell 88:747-756(1997)]。Frzbについての最初の記
載はウシ関節の軟骨抽出物から得られたものであった[H
oangら、J.Biol.Chem. 271(42):26 131-26137(1996)]。
この研究において、Frzbは発生中の軟骨原基および長骨
の成長部位の両方の軟骨細胞で発現されると報告され
た。これらの著者はヒトFrzb相同体についても記載して
おり、この相同体がウシ配列と94％の同一性を有すると
報告した。さらに最近になって、マウスで数種のｓFRP
が同定された[Ratt nerら、PNAS 94:2859-2863(199
7)]。このサブファミリーのメンバーの一つであるｓFRP
-3はウシおよびヒトFrzbと92％の同一性を有する。ｓFR
P-3が疎水性膜貫通ドメインを含有する構築物として発
現された場合には、ｓFR P-3はフリズルドアゴニストで
あるウイングレス(wingless)と結合する能力を有してお
り、この可溶性哺乳動物ｓFRP-3がフリズルドアゴニス
トと結合する能力を有することが確認された。

【０００４】上記の多くの研究により、フリズルドファ
ミリーのメンバーは軟骨および骨の形態形成において鍵
となる役割を果たしていることが示唆される。しかし、
これらのタンパク質が成体の骨および／または軟骨の維
持において、あるにしても、どのような役割を果たして
いるのか不明である。Frzbが最初にウシ関節の軟骨から
単離されたことは、成熟組織における潜在的な役割と一
致している。さらに、骨関節炎や骨折カルスの治癒[Hug
hesら、J.Bone Miner.Res. 10(4):533-544 (1995)]に例
示されるような、骨および軟骨の活発な再構築の部位で
肥厚性軟骨細胞から骨芽細胞様骨形成細胞への分化が起
こり得ることが提唱された。このプロセスの異常な制御
により、骨関節炎で観察されるような軟骨下の骨の硬化
が起こり、この疾患の発症および進行へと導きうる。本
発明はヒトFrzbファミリーの新規メンバーを記載する。
こうしたことは、FRZBファミリーに治療用ターゲットと
しての確立され実証された歴史があることを示してい
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、慢性および
急性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患
(例えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、
移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患
症候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性お
よび他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ
球増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイマー病を
含むがこれらに限らない、機能障害または疾病を予防
し、改善し、治療する上で何らかの役割を果たすFRZBフ
ァミリーの新たなメンバーを同定して特性づける必要性
が存在している。本発明はかかるメンバーを提供するも
のである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、FRAZZLEDポリペプチドおよび組換え物質、並び
にその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はFR
AZZLEDポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法
に関する。こうした使用には、とりわけ、慢性および急
性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患
(例えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、
移植片対宿主疾患、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾
患症候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性
および他の骨疾患(例えば、骨粗しょう症)、癌(例えば
リンパ増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイマー
病の治療が含まれる。他の態様では、本発明は、本発明
により提供される物質を用いてアゴニストおよびアンタ
ゴニストを同定する方法、並びに同定された化合物を用
いてFRAZZLEDの平衡異常と関連した状態を治療すること
に関する。本発明のさらに他の態様は、不適当なFRAZZL
ED活性またはFRAZZLEDレベルと関連した疾病を検出する
ための診断アッセイに関する。

【０００７】定義下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「FRAZZLED」とは、
特に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配列を
有するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を意味
する。「FRAZZLED活性またはFRAZZLEDポリペプチド活
性」または「FRAZZLEDまたはFRAZZLEDポリペプチドの生
物学的活性」とは、類似の活性、向上した活性、または
望ましくない副作用が低下したこれらの活性を含めて、
FRAZZLEDの代謝的または生理的機能を意味する。さら
に、前記FRAZZLEDの抗原的および免疫原的活性も含まれ
る。「FRAZZLED遺伝子」とは、配列番号１で表されるヌ
クレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたはそのア
レリック変異体および／またはそれらの相補体を意味す
る。

【０００８】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【０００９】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【００１０】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646;および Rattan ら, “Protein Synthes
is: Posttranslational Modifications and Aging",Ann
NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【００１１】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１２】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１３】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１４】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１５】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド一つの態様において、本発明はFRAZZLEDポリペプチド
（またはFRAZZLEDタンパク質）に関する。このFRAZZLED
ポリペプチドには、配列番号２および４のポリペプチド
だけでなく、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプ
チド、その全長において配列番号２のアミノ酸配列と少
なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好
ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含
むポリペプチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜
９９％同一であるものが特に好適である。また、その全
長において配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプ
チドと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０
％、より好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ
酸配列を有するポリペプチドもFRAZZLEDポリペプチドに
含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同一である
ものが特に好適である。FRAZZLEDポリペプチドはFRAZZL
EDの少なくとも１つの生物学的活性を示すことが好まし
い。

【００１６】FRAZZLEDポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列な
どがある。

【００１７】また、FRAZZLEDポリペプチドの断片も本発
明に含まれる。こうした断片は全体的に前記FRAZZLEDポ
リペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、全部
とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチドであ
る。FRAZZLEDポリペプチドと同様に、断片は「フリース
タンディング」（それ自体で独立）していても、より大
きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つまりその
大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好ましく
は一つの連続領域、を断片が構成していてもよい。本発
明のポリペプチド断片の代表的な例として、およその見
当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１−６０、
６１−８０、８１−１００、および１０１からFRAZZLED
ポリペプチドの末端までの断片が挙げられる。ここで、
「およそ」とは、上記の範囲の一端または両端で数個、
５個、４個、３個、２個または１個のアミノ酸が増えた
り減ったりした範囲を含むものである。

【００１８】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、FR
AZZLEDポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケー
ション(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、α
ヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシー
ト形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル
形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、
β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合
領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造
的または機能的特性により特徴づけられる断片も好適で
ある。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片であ
る。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、
その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減
少した断片を含めて、FRAZZLED活性を媒介するものであ
る。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫
原性がある断片も含まれる。

【００１９】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたFRAZZLEDの生物学的活性を保持することが
好ましい。中でも、最も好ましい断片は配列番号４のア
ミノ酸配列を有するものである。特定された配列および
断片の変異型も本発明の一部を構成する。好適な変異型
は同類アミノ酸置換により対象物と異なるもの、すなわ
ち、ある残基が同様の性質の他の残基で置換されている
ものである。典型的なこうした置換は、Ala, Val, Leu
と Ileの間；Ser とThr の間；酸性残基 AspとGlu の
間；Asn とGln の間；塩基性残基 LysとArg の間；また
は芳香族残基 PheとTyr の間で起こる。特に、数個、５
〜１０個、１〜５個または１〜２個のアミノ酸が任意の
組合せで置換、欠失または付加されている変異型が好適
である。

【００２０】本発明のFRAZZLEDポリペプチドは任意の適
当な方法で製造することができる。このようなポリペプ
チドには、単離された天然に存在するポリペプチド、組
換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造された
ポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造
されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチ
ドの製造のための手段は当業界でよく理解されている。

【００２１】本発明のポリヌクレオチド本発明のもう一つの態様はFRAZZLEDポリヌクレオチドに
関する。FRAZZLEDポリヌクレオチドには、FRAZZLEDポリ
ペプチドおよび断片をコードする単離されたポリヌクレ
オチド、並びにこれらと密接に関連したポリヌクレオチ
ドが含まれる。さらに特定すると、本発明のFRAZZLEDポ
リヌクレオチドとしては、配列番号２のFRAZZLEDポリペ
プチドをコードする配列番号１中に含まれるヌクレオチ
ド配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１およ
び３の特定配列を有するポリヌクレオチドがある。さら
に、FRAZZLEDポリヌクレオチドには、配列番号２のFRAZ
ZLEDポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と全長
において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配列
を含むポリヌクレオチド、および配列番号１のヌクレオ
チド配列と全長において少なくとも８０％同一であるヌ
クレオチド配列を含むポリヌクレオチドが含まれる。こ
れに関連して、少なくとも９０％同一であるポリヌクレ
オチドが好適であり、特に少なくとも９５％同一である
ものが好適である。さらに、少なくとも９７％同一であ
るものがより好ましく、少なくとも９８〜９９％同一で
あるものがより一層好ましく、少なくとも９９％同一で
あるものが最も好ましい。また、増幅反応に使用できる
条件下、またはプローブやマーカーとして使用できる条
件下でハイブリダイズするのに十分な、配列番号１中に
含まれるヌクレオチド配列との同一性を有するヌクレオ
チド配列もFRAZZLEDポリヌクレオチドに含まれる。本発
明はまた、このようなFRAZZLEDポリヌクレオチドと相補
的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２２】本発明のFRAZZLEDは、ヒトFRAZZLEDをコー
ドするｃＤＮＡの配列決定の結果により示されるよう
に、FRZBファミリーの他のタンパク質と構造的に関連し
ている。配列番号１のｃＤＮＡ配列は配列番号２の368
個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードするオープ
ンリーディングフレーム（ヌクレオチド番号105−120
8）を含んでいる。表２のアミノ酸配列（配列番号２）
は319個のアミノ酸残基においてマウスｓFRP−3(A.Ratn
erら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 94,2859−2863,199
7)と約50.8％の同一性を有する（FASTA使用）。表１の
ヌクレオチド配列（配列番号１）は582個のヌクレオチ
ド残基においてマウスｓFRP−4(A.Ratnerら、Proc.Nat
l.Acad.Sci.U.S.A. 94,2859−2863,1997)と約81.4％の
同一性を有する（FASTA使用）。したがって、本発明のF
RAZZLEDポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とり
わけ、それらの相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドと同様の生物学的機能／特性をもつことが予測され、
それらの有用性は当業者には自明である。

【００２３】ヒトFRAZZLEDのヌクレオチド配列（配列番号１）

【表１】 1 CGCGGCCGGA CCCCGCGGCC CCGCTTTGCT GCCGACTGGA GTTTGGGGGA 51 AGAAACTCTC CTGCGCCCCA GAGGATTTCT TCCTCGGCGA AGGGACAGCG 101 AAAGATGAGG GTGGCAGGAA GAGAAGGGCG CTTTCTGTCT GCCGGGGTCG 151 CAGCGCGAGA GGGCAGTGCC ATGTTCCTCT CCATCCTAGT GGCGCTGTGC 201 CTGTGGCTGC ACCTGGCGCT GGGCGTGCGC GGCGCGCCCT GCGAGGCGGT 251 GCGCATCCCT ATGTGCCGGC ACATGCCCTG GAACATCACG CGGATGCCCA 301 ACCACCTGCA CCACAGCACG CAGGAGAACG CCATCCTGGC CATCGAGCAG 351 TACGAGGAGG TGGTGGACGT GAACTGCAGC GCCGTGCTGC GCTTCTTCCT 401 CTGTGCCATG TACGCGCCCA TTTGCACCCT GGAGTTCCTG CACGACCCTA 451 TCAAGCCGTG CAAGTCGGTG TGCCAACGCG CGCGCGACGA CTGCGAGCCC 501 CTCATGAAGA TGTACAACCA CAGCTGGCCC GAAAGCCTGG CCTGCGACGA 551 GCTGCCTGTC TATGACCGTG GCGTGTGCAT CTCGCCTGAA GCCATCGTCA 601 CGGACCTCCC GGAGGATGTT AAGTGGATAG ACATCACACC AGACATGATG 651 GTACAGGAAA GGCCTCTTGA TGTTGACTGT AAACGCCTAA GCCCCGATCG 701 GTGCAAGTGT AAAAAGGTGA AGCCAACTTT GGCAACATAT CTCAGCAAAA 751 ACTACAGCTA TGTTATTCAT GCCAAAATAA AAGCTGTGCA GAGGAGTGGC 801 TGCAATGAGG TCACAACGGT GGTGGATGTA AAAGAGATCT TCAAGTCCTC 851 ATCACCCATC CCTCGAACTC AAGTCCCGCT CATTACAAAT TCTTCTTGCC 901 AGTGTCCACA CATCCTGCCC CATCAAGATG TTCTCATCAT GTGTTACGAG 951 TGGCGCTCAA GGATGATGCT TCTTGAAAAT TGCTTAGTTG AAAAATGGAG 1001 AGATCAGCTT AGTAAAAGAT CCATACAGTG GGAAGAGAGG CTGCAGGAAC 1051 AGCGGAGAAC AGTTCAGGAC AAGAAGAAAA CAGCCGGGCG CACCAGTCGT 1101 AGTAATCCCC CCAAACCAAA GGGAAAGACT CCTGCTCCCA AACCAGCCAG 1151 TCCCAAGAAG AACATTAAAA CTAGGAGTGC CCAGAAGAGA ACAAACCCGA 1201 AAAGAGTGTG AGCTAACTAG TTTCCAAAGC GGAGACTTCC GACTTCCTTA 1251 CAGGATGAGG CTGGGCATTG CCTGGGACAG CCTATGTAAG GCCATGTGCC 1301 CCTTGCCCTA ACAACTCACT GCAGTGCTCT TCATAGACAC ATCTTGCAGC 1351 ATTTTTCTTA AGGCTATGCT TCAGTTTTTC TTTGTAAGCC ATCACAAGCC 1401 ATAGTGGTAG GTTTGCCCTT TGGTACAGAA GGTGAGTTAA AGCTGGTGGA 1451 AAAGGCTTAT TGCATTGCAT TCAGAGTAAC CTGTGTGCAT ACTCTAGAAG 1501 AGTAGGGAAA ATAATGCTTG TTACAATTCG ACCTAATATG TGCATTGTAA 1551 AATAAATGCC ATATTTCAAA CAAAACACGT AATTTTTTTA CAGTATGTTT 1601 TATTACCTTT TGATATCTGT TGTTGCAATG TTAGTGATGT TTTAAAATGT 1651 GATCGAAAAT ATAATGCTTC TAAGAAAGGA ACAGTAGTGG AATGAATGTC 1701 TAAAAGATCT TTATGTGTTT ATGGTCTGCA GAAGGATTTT TGTGATGAAA 1751 GGGGATTTTT TGAAAAA

【００２４】ヒトFRAZZLEDのアミノ酸配列（配列番号２）

【表２】 1 MRVAGREGRF LSAGVAAREG SAMFLSILVA LCLWLHLALG VRGAPCEAVR 51 IPMCRHMPWN ITRMPNHLHH STQENAILAI EQYEEVVDVN CSAVLRFFLC 101 AMYAPICTLE FLHDPIKPCK SVCQRARDDC EPLMKMYNHS WPESLACDEL 151 PVYDRGVCIS PEAIVTDLPE DVKWIDITPD MMVQERPLDV DCKRLSPDRC 201 KCKKVKPTLA TYLSKNYSYV IHAKIKAVQR SGCNEVTTVV DVKEIFKSSS 251 PIPRTQVPLI TNSSCQCPHI LPHQDVLIMC YEWRSRMMLL ENCLVEKWRD 301 QLSKRSIQWE ERLQEQRRTV QDKKKTAGRT SRSNPPKPKG KTPAPKPASP 351 KKNIKTRSAQ KRTNPKRV

【００２５】FRAZZLEDをコードする本発明の一つのポリ
ヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリー
ニングにより、ヒト骨芽細胞の細胞中のｍＲＮＡから誘
導されたｃＤＮＡライブラリーから、エクスプレスド・
シークエンス・タグ（expressed sequence tag: EST)分
析 (Adams, M.D. ら, Science (1991) 252:1651-1656;
Adams, M.D. ら, Nature (1992) 355:632-634; Adams,
M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174) を用いて得る
ことができる。また、本発明のポリヌクレオチドはゲノ
ムＤＮＡライブラリーのような天然源から得ることがで
き、商業的に入手可能な公知の技法を用いて合成するこ
ともできる。

【００２６】配列番号２のFRAZZLEDポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペプ
チドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号105−1
208）と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮
重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコード
する配列であってもよい。

【００２７】本発明のポリヌクレオチドをFRAZZLEDポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列または
その断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもし
くは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タン
パク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードする
もの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペ
プチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ
−ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、
このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２８】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のFRAZZLEDポリペプチドのアミノ酸配列（配
列番号２）を含むFRAZZLED変異型をコードするポリヌク
レオチドである。中でも、本発明の好ましいポリヌクレ
オチドは表４のアミノ酸配列（配列番号４）をコードす
る表３（配列番号３）中に含まれるポリヌクレオチドで
ある。

【００２９】ヒトFRAZZLEDの部分ヌクレオチド配列（配列番号３）

【表３】 1 CGCGGAGTCC GGGACTGGAG CTGCCCGGGC GGGTTCGCGC CCCGAAGGCT 51 GAGAGCTGGC GCTGCTCGTG CCCTGTGTGC CAGACGGCGG AGCTCCGCGG 101 CCGGACCCCG CGGCCCCGCT TTGCTGCCGA CTGGAGTTTG GGGGAAGAAA 151 CTCTCCTGCG CCCCAGAGGA TTTCTTCCTC GGCGAAGGGA CAGCGAAAGA 201 TGAGGGTGGC AGGAAGAGAA GGGCGCTTTC TGTCTGCCGG GGTCGCAGCG 251 CGAGANGGCA GTGCCATGTT CCTCTCCATC CTAGTGGCGC TGTGCCTGTG 301 GCTGTCACCT GGGGCTGGGC GTGTCGCGGC GCCCCTGACG AGGTCGGTGC 351 GCATCCCTAT GTGCCGGCAC ATGCCCTGGA ACATCACGCG GATGCCCAAC 401 CACCTGCACC ACAGCACGCA GGAGAACGCC ATCCTGGCCA TCGAGCAGTA 451 CGAGGAGCTG GTGGACGTGA ACTGCAGCGC CGTGCTGCGC TTCTTCCTCT 501 GTGCCATGTA CGCGCCCATT TGCACCCTGG AGTTCCTGCA CGACCCTATC 551 AAGCCGTGCA AGTCGGTGTG CCAACGCGCG CGCGACGACT GCGAGCCCCT 601 CATGAAGATG TACAACCACA GCTGGCCCGA AAGCCTGGCC TGCGACGAGC 651 TGCCTGTCTA TGACCGTGGC GTGTGCATCT CGCCTGAAGC CATCGTCACG 701 GACCTCCCGG AGGATGTTAA GTGGATAGAC ATCACACCAG ACATGATGGT 751 ACAGGAAAGG CCTCTTGATG TTGACTGTAA ACGCCTAAGC CCCGATCGGT 801 GCAAGTGTAA AAAGGTGAAG CCAACTTTGG CAACATATCT CAGCAAAAAC 851 TACAGCTATG TTATTCATGC CAAAATAAAA GCTGTGCAGA GGAGTGGCTG 901 CAATGAGGTC ACAACGGTGG TGGATGTAAA AGAGATCTTC AAGTCCTCAT 951 CACCCATCCC TCGAACTCAA GTCCCGCTCA TTACAAATTC TTCTTGCCAG 1001 TGTCCACACA TCCTGCCCCA TCAAGATGTT CTCATCATGT GTTACGAGTG 1051 GCGCTCAAGG ATGATGCTTC TTGAAAATTG CTTAGTTGAA AAATGGAGAG 1101 ATCAGCTTAG TAAAAGATCC ATACAGTGGG AAGAGAGGCT GCAGGAACAG 1151 CGGAGAACAG TTCAGGACAA GAAGAAAACA GCCGGGCGCA CCAGTCGTAG 1201 TAATCCCCCC AAACCAAAGG GAAAGACTCC TGCTCCCAAA CCAGCCAGTC 1251 CCAAGAAGAA CATTAAAACT AGGGGTCGAC CCACGCGTCC GAAGAGAACA 1301 AACCCGAAAA GAGTGTGAGC TAACTAGTTT CCAAAGCGGA GACTTCCGAC 1351 TTCCTTACAG GATGAGGCTG GGCATTGCCT GGGACAGCCT ATGTAAGGCC 1401 ATGTGCCCCT TGCCCTAACA ACTCACTGCA GTGCTCTTCA TAGACACATC 1451 TTGCAGCATT TTTCTTAAGG CTATGCTTCA GTTTTTCTTT GTAAGCCATC 1501 ACAAGCCATA GTGGTAGGTT TGCCCTTTGG TACAGAAGGT GAGTTAAAGC 1551 TGGTGGAAAA GGCTTATTGC ATTGCATTCA GAGTAACCTG TGTGCATACT 1601 CTAGAAGAGT AGGGAAAATA ATGCTTGTTA CAATTCGACC TAATATGTGC 1651 ATTGTAAAAT AAATGCCATA TTTCAAACAA AACACGTAAT TTTTTTACAG 1701 TATGTTTATT ACCTTTTGAT ATCTGTTGTT GCAATGTTAG TGATGTTTAA 1751 AATGTGATCG AAAATATAAT GCTTCTAAGA AGGAACAGTA GTGGGAATGA 1801 ATGTCTAAAA GATCTTTATG TGTTTATGGT CTGCCAGAAG GATTTTTGTG 1851 ATGAAAGGGG ATTTTTTGAA AAATCTAGGG GAAGTAGCCA TATGGGAAAA 1901 TTATNATGTG TCTTTTTTAC ATGGACTTCC AGCTCCGTTT TTTGGCTNGG 1951 AAACTCTNAA AACCAAANT

【００３０】ヒトFRAZZLEDの部分アミノ酸配列（配列番号４）

【表４】 1 MRVAGREGRF LSAGVAARXG SAMFLSILVA LCLWLSPGAG RVAAPLTRSV 51 RIPMCRHMPW NITRMPNHLH HSTQENAILA IEQYEELVDV NCSAVLRFFL 101 CAMYAPICTL EFLHDPIKPC KSVCQRARDD CEPLMKMYNH SWPESLACDE 151 LPVYDRGVCI SPEAIVTDLP EDVKWIDITP DMMVQERPLD VDCKRLSPDR 201 CKCKKVKPTL ATYLSKNYSY VIHAKIKAVQ RSGCNEVTTV VDVKEIFKSS 251 SPIPRTQVPL ITNSSCQCPH ILPHQDVLIM CYEWRSRMML LENCLVEKWR 301 DQLSKRSIQW EERLQEQRRT VQDKKKTAGR TSRSNPPKPK GKTPAPKPAS 351 PKKNIKTRGR PTRPKRTNPK RV

【００３１】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００３２】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、FRAZZLEDポリペプチドをコー
ドする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するた
めに、また、FRAZZLED遺伝子との配列類似性が高い他の
遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソロ
グ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよ
びゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとし
て用いることができる。このようなハイブリダイゼーシ
ョン技法は当業者には公知である。一般的に、これらの
ヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８０
％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一であ
る。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含
み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレ
オチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３
０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００３３】一実施態様において、FRAZZLEDポリペプチ
ド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体
を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ることは、
配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有する
標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダ
イゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニ
ングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでな
る。このようなハイブリダイゼーション技法は当業者に
公知である。かくして、もう一つの態様では、本発明の
FRAZZLEDポリヌクレオチドはさらに、配列番号１のヌク
レオチド配列またはその断片（配列番号３の断片を含
む）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする
ヌクレオチド配列を含んでなるヌクレオチド配列を含む
ものである。FRAZZLEDポリペプチドも、前記のハイブリ
ダイゼーション条件により得られたヌクレオチド配列に
よりコードされるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチ
ドを含む。ストリンジェントなハイブリダイゼーション
条件は上で定義したとおりであるか、または、50% ホル
ムアミド、５×SSC (150mM NaCl, 15mM クエン酸三ナト
リウム) 、50mMリン酸ナトリウム (pH7.6)、５×Denhar
dt溶液、10% デキストラン硫酸および20μg/mlの変性し
剪断したサケ精子ＤＮＡを含有する溶液中で４２℃で一
夜インキュベートし、次いでフィルターを 0.1×SSC 中
約６５℃で洗浄する条件である。

【００３４】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００３５】ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３６】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、射出導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３７】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３８】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００３９】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００４０】スクリーニングアッセイで使用するためFR
AZZLEDポリペプチドを発現させようとする場合、そのポ
リペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。FRAZZLEDポリペプチドが培地に
分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、そ
の細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する
必要がある。

【００４１】組換え細胞培養物からFRAZZLEDポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００４２】診断アッセイ本発明はまた、診断薬としてのFRAZZLEDポリヌクレオチ
ドの使用に関する。機能障害と関連したFRAZZLED遺伝子
の変異型の検出は、FRAZZLEDの過少発現、過剰発現また
は変化した発現により生ずる疾病またはその罹病性の診
断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツー
ルを提供するだろう。FRAZZLED遺伝子に変異がある個体
を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すこ
とができる。

【００４３】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識FRAZZLED
ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定で
きる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とは
ＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区
別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いる
または用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動度
の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても検
出できる（例えば、Myers ら, Science (1985) 230:124
2 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレアー
ゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよび
Ｓ１プロテクション）または化学的開裂法によっても確
認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (19
85) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様では、
例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを行う
ため、FRAZZLEDヌクレオチド配列またはその断片を含む
オリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築することが
できる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性を有
し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を含め
た分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために用い
られている（例えば、M. Chee ら, Science, Vol.274,
pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４４】診断アッセイは、前記の方法によりFRAZZL
ED遺伝子の変異を検出することで、慢性および急性の炎
症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例え
ば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、移植
片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候
群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性および
他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ球増
殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイマー病への罹
りやすさを診断または判定する方法を提供する。

【００４５】さらに、被験者から得られたサンプルから
FRAZZLEDポリペプチドまたはFRAZZLEDｍＲＮＡのレベル
の異常な低下または増加を測定する方法により、慢性お
よび急性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己免疫
疾患(例えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶反
応、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系
疾患症候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝
性および他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリ
ンパ球増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイマー
病の診断を下すことができる。発現の低下または増加
は、当技術分野で公知のポリヌクレオチド定量法のいず
れか、例えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテ
クション、ノーザンブロット、その他のハイブリダイゼ
ーション法によりＲＮＡレベルで測定することができ
る。宿主から得られたサンプル中のFRAZZLEDポリペプチ
ドのようなタンパク質のレベルを測定するためのアッセ
イ法は当業者によく知られている。こうしたアッセイ法
として、ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウ
エスタンブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイなどがあ
る。

【００４６】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病、特に慢性および急性の炎症、関節炎、骨関
節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば、炎症性腸疾患、
乾癬)、移植組織片拒絶反応、移植片対宿主病、感染、
卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、腎障害、再発狭
窄症、脳損傷、AIDS、代謝性および他の骨疾患(例え
ば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、動脈
硬化、およびアルツハイマー病または該疾病への罹りや
すさを診断するためのキットに関し、このキットは、
(a) FRAZZLEDポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号
１のヌクレオチド配列）もしくはその断片、(b) (a) の
ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列、(c) FR
AZZLEDポリペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペ
プチド）もしくはその断片、または(d) FRAZZLEDポリペ
プチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対
する抗体、を含んでなる。このようなキットにおいて、
(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分である
ことが理解されよう。

【００４７】染色体アッセイ本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。患者と正常個
体とのｃＤＮＡまたはゲノム配列の差異も調べることが
できる。患者の一部または全部に変異が観察されて、ど
の正常個体にも観察されない場合は、その変異が疾病の
原因である可能性がある。FRAZZLEDをコードする遺伝子
は染色体15q21−23に位置づけられた。

【００４８】抗体本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、FRAZZLEDポリペプチド
に免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使
用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が
従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその親
和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い
親和性を有することを意味する。

【００４９】FRAZZLEDポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C., Nature (1975) 256:495-497)、ト
リオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法(Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AND
CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 198
5) などがある。

【００５０】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。FRAZZLEDポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、
慢性および急性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自
己免疫疾患(例えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片
拒絶反応、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼
吸器系疾患症候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AID
S、代謝性および他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例
えばリンパ球増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハ
イマー病の治療に使用できる可能性がある。

【００５１】ワクチン本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に慢性および急性
の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例
えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、移
植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症
候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性およ
び他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ球
増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイマー病から
前記動物を防御するための抗体および／またはＴ細胞免
疫応答を生ずるのに十分なFRAZZLEDポリペプチドまたは
その断片を哺乳動物に接種することを含んでなる。本発
明のさらに別の態様は、哺乳動物を疾病から防御する抗
体を産生させるような免疫学的応答を引き出すために、
in vivo でFRAZZLEDポリヌクレオチドの発現を指令する
ベクターを介してFRAZZLEDポリペプチドを供給すること
を含んでなる、哺乳動物において免疫学的応答を引き出
す方法に関する。

【００５２】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてFRAZZLEDポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物はFRAZZLEDポリペプ
チドまたはFRAZZLED遺伝子を含有する。ワクチン製剤は
適当な担体をさらに含んでいてもよい。FRAZZLEDポリペ
プチドは胃の中で分解されうるので、非経口的（皮下、
筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投与するこ
とが好ましい。非経口投与に適した製剤としては、酸化
防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液
と等張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注
射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる水性およ
び非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量容
器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイ
アル）で提供することができ、また、使用直前に無菌の
液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管する
こともできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増
強するためのアジュバント系、例えば水中油型のアジュ
バント系や当技術分野で公知の他のアジュバント系を含
んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で変化し、
ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５３】スクリーニングアッセイ本発明のFRAZZLEDポリペプチドは、このポリペプチドを
活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻害
する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともいう）
のスクリーニング法において使用することができる。こ
うして、本発明のポリペプチドは、例えば、細胞、無細
胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産物の混合
物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価し同定す
るためにも用いられる。これらのアゴニストまたはアン
タゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合によっ
て、天然のまたは修飾された基質、リガンド、受容体、
酵素などであってよく、また、本発明のポリペプチドの
構造的または機能的な模擬物であってもよい（Coligan
ら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapter
5 (1991)を参照のこと）。

【００５４】FRAZZLEDポリペプチドは多くの病理を含め
て多数の生物学的機能に関与している。したがって、一
方ではFRAZZLEDポリペプチドを刺激し、他方ではFRAZZL
EDポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および薬物を
見つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニストは慢
性および急性の炎症、関節炎、骨関節炎、敗血症、自己
免疫疾患(例えば、炎症性腸疾患、乾癬)、移植組織片拒
絶反応、移植片対宿主病、感染、卒中、虚血、急性呼吸
器系疾患症候群、腎障害、再発狭窄症、脳損傷、AIDS、
代謝性および他の骨疾患(例えば、骨粗鬆症)、癌(例え
ばリンパ球増殖性障害)、動脈硬化、およびアルツハイ
マー病のような症状の治療および予防目的で用いられ
る。アンタゴニストは慢性および急性の炎症、関節炎、
骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば、炎症性腸疾
患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、移植片対宿主病、感
染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、腎障害、再
発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性および他の骨疾患(例
えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、動
脈硬化、およびアルツハイマー病のような症状のさまざ
まな治療および予防目的で使用しうる。

【００５５】一般に、こうしたスクリーニング法はFRAZ
ZLEDポリペプチドを発現する適当な細胞、またはFRAZZL
EDポリペプチドに応答する適当な細胞を用いるものであ
る。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョウバ
エ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次いで、FR
AZZLEDポリペプチドを発現する細胞（もしくは発現され
たポリペプチドを含む細胞膜）またはFRAZZLEDポリペプ
チドに応答する細胞を試験化合物と接触させて、その結
合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。候
補化合物と接触させた細胞の能力を、接触させなかった
同一細胞とFRAZZLED活性に関して比較する。

【００５６】FRAZZLEDｃＤＮＡ、タンパク質およびこの
タンパク質に対する抗体を用いて、添加した化合物が細
胞内におけるFRAZZLEDｍＲＮＡおよびタンパク質の産生
に及ぼす影響を検出するためのアッセイを構築すること
ができる。例えば、当分野で公知の標準的な方法によ
り、モノクローナルおよびポリクローナル抗体を使用し
て、FRAZZLEDタンパク質の分泌レベルおよび細胞結合レ
ベルを測定するためのELISAを構築してもよい。このELI
SAを用いることにより、適切に操作された細胞または組
織からのFRAZZLED産生を阻害するかまたは増強しうる薬
剤（すなわちアンタゴニストもしくはアゴニスト）を探
索することができる。

【００５７】当分野で公知の標準リガンド／受容体結合
技術を使用して、膜結合型または可溶性のリガンドまた
は受容体を同定するためにFRAZZLEDタンパク質を使用し
てもよい。こうした結合技術としては、制限するもので
はないが、リガンド結合および架橋アッセイがあり、そ
の場合FRAZZLEDは放射性アイソトープ(例えば¹²⁵Ｉ)で
標識されるか、化学的に修飾される(例えばビオチン化)
か、または検出もしくは精製に適するペプチド配列に融
合されて、推定受容体の供給源(細胞、細胞膜、細胞上
清、組織抽出物、体液)と共にインキュベートされる。
他の方法は表面プラズモン共鳴および分光学のような生
物物理学的技法を含む。受容体の精製およびクローニン
グに使用する他に、これらの結合アッセイを、FRAZZLED
のその受容体またはリガンドへの結合と競合するFRAZZL
EDのアゴニストまたはアンタゴニストを同定するために
使用できる。

【００５８】上記の結合アッセイは、FRAZZLEDに生物学
的に応答する細胞を同定するために使用できる。FRAZZL
EDに応答する細胞は細胞内シグナル伝達経路および遺伝
子の発現に変化を示す。これらの変化はそれぞれ、FRAZ
ZLEDの作用を模倣するかまたは阻害するアゴニストまた
はアンタゴニストについてのスクリーニングに使用でき
る。

【００５９】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、FRAZZLEDポリ
ペプチドを担持する細胞への付着が検出される。さら
に、これらのアッセイでは、FRAZZLEDポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物がFRAZ
ZLEDポリペプチドの活性化により生ずるシグナルを結果
的にもたらすか否かを試験することができる。一般的
に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でアッ
セイされ、そして候補化合物の存在がアゴニストによる
活性化に与える影響が調べられる。

【００６０】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とFRAZZLEDポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混
合物をつくり、この混合物中のFRAZZLED活性を測定し、
そしてこの混合物のFRAZZLED活性を標準と比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。

【００６１】また、FRAZZLEDのｃＤＮＡ、タンパク質ま
たはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内での
FRAZZLEDｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす添加
化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立てるこ
とができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法によ
りモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用いて、
FRAZZLEDタンパク質の分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡを構築することができ、こ
れは適切に操作された細胞または組織からのFRAZZLEDの
生産を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニス
トまたはアゴニストともいう）の探索に用いることがで
きる。

【００６２】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにFRAZZLEDタン
パク質を用いることができる。こうした受容体結合法に
は、限定するものではないが、リガンド結合および架橋
アッセイがあり、このアッセイでは、FRAZZLEDを放射性
アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修飾
（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適した
ペプチド配列に融合させ、そして推定上の受容体源（細
胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など）とイン
キュベートする。その他の方法としては、表面プラズモ
ン共鳴および分光学のような生物物理的方法がある。受
容体の精製およびクローニングに用いることに加えて、
これらの結合アッセイは、もし存在するのであれば、FR
AZZLEDのその受容体への結合と競合するFRAZZLEDのアゴ
ニストまたはアンタゴニストを同定するために用いるこ
ともできる。スクリーニングアッセイを行うための標準
的な方法は当技術分野でよく理解されている。

【００６３】FRAZZLEDポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、FRAZZLEDポ
リペプチドの、場合により、リガンド、基質、受容体、
酵素などと密接な関係があるオリゴヌクレオチドもしく
はタンパク質（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素
などの断片）、または本発明のポリペプチドと結合する
が応答を誘導しない（それゆえポリペプチドの活性を妨
げる）小分子などがある。

【００６４】かくして、他の態様において、本発明は、
FRAZZLEDポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはFRAZZLEDポ
リペプチドの生産を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、(a) FRAZZLEDポリペプチド（好ましくは、配列番号
２のポリペプチド） (b) FRAZZLEDポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）を発現する組換え細胞、(c) FRAZZLEDポ
リペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）
を発現する細胞膜、または(d) FRAZZLEDポリペプチド
（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗
体、を含んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、
(b) 、(c) または (d)が実質的な構成成分であることが
理解されよう。

【００６５】予防および治療法本発明は、FRAZZLEDポリペプチド活性の過剰量と不足量
のどちらにも関係した慢性および急性の炎症、関節炎、
骨関節炎、敗血症、自己免疫疾患(例えば、炎症性腸疾
患、乾癬)、移植組織片拒絶反応、移植片対宿主病、感
染、卒中、虚血、急性呼吸器系疾患症候群、腎障害、再
発狭窄症、脳損傷、AIDS、代謝性および他の骨疾患(例
えば、骨粗鬆症)、癌(例えばリンパ球増殖性障害)、動
脈硬化、およびアルツハイマー病などの異常な状態の治
療法を提供する。FRAZZLEDポリペプチドの活性が過剰で
ある場合は、いくつかのアプローチが利用可能である。
一つのアプローチは、例えば、リガンド、基質、受容
体、酵素などの結合をブロックすることにより、または
第２のシグナルを抑制することで異常な状態を軽減する
ことにより、FRAZZLEDポリペプチドの機能を阻害するの
に有効な量で、前記の阻害剤化合物（アンタゴニスト）
を製剤学上許容される担体とともに患者に投与すること
を含んでなる。もう一つのアプローチでは、内因性のFR
AZZLEDポリペプチドとの競合状態でリガンド、基質、酵
素、受容体などと結合する能力がまだある可溶性形態の
FRAZZLEDポリペプチドを投与することができる。このよ
うな競合剤の典型的な例はFRAZZLEDポリペプチドの断片
である。

【００６６】別のアプローチでは、内因性のFRAZZLEDポ
リペプチドとの競合状態でリガンドと結合する能力がま
だある可溶性形態のFRAZZLEDポリペプチドを投与するこ
とができる。このような競合剤の典型的な例はFRAZZLED
ポリペプチドの断片である。

【００６７】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性FRAZZLEDポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRCPre
ss, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neurochem
(1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、この遺
伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを
供給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic Acid
s Res (1979) 6:3073; Cooney ら, Science (1988) 24
1:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照の
こと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することも
できるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させること
もできる。

【００６８】FRAZZLEDおよびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療上有
効な量のFRAZZLEDポリペプチドを活性化する化合物（す
なわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される担体
とともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを
含んでなる。別法として、患者の関連細胞においてFRAZ
ZLEDを内因的に産生させるために遺伝子治療を用いるこ
とができる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロ
ウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌク
レオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構
築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮ
Ａを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質
導入されたパッケージング細胞に導入する。その結果、
パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性の
ウイルス粒子を産生するようになる。in vivo での細胞
処理およびin vivo でのポリペプチド発現のために、こ
れらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に
関しては、Human Molecular Genetics, T Strachanand
A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996) 中
のChapter 20, GeneTherapy and other Molecular Gene
tic-based Therapeutic Approaches(およびその中の引
用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量
のFRAZZLEDポリペプチドを適当な製剤学上の担体ととも
に投与することである。

【００６９】製剤および投与可溶性形態のFRAZZLEDポリペプチドのようなペプチド、
アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分
子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化するこ
とができる。このような製剤は治療上有効な量のポリペ
プチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または
賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生
理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノ
ール、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らな
い。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当
技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記
の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器
を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００７０】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００７１】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００７２】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００７３】実施例１以前に同定されたフリズルドファミリーのメンバー、Fr
zbのアミノ酸配列を使用して、市販のESTデータベース
の検索によりFRAZZLEDをコードする部分的なクロ−ン(E
ST＃2105409)を同定した。次にこのクローンを完全に配
列決定した。このクローンの全長配列はヒトFrzbと73.8
％の同一性を有していた(Hoangら、J.Biol. Chem. 271
(42):26131−26137(1996))。FRAZZLEDをコードする該ク
ローンは骨芽細胞ライブラリー中に存在していた。また
この遺伝子は、軟骨肉腫、骨肉腫、破骨細胞腫、滑液の
繊維芽細胞、ホジキンリンパ腫、卵巣、子宮、胎児肺、
脂肪および膵臓の腫瘍においても発現される。ソアレス
(Soares) NhHMPuS1ｃＤＮＡライブラリーからのこの遺
伝子に対応する２つのESTは市販のESTデータベース中に
見出される。

【００７４】実施例２−FRAZZLED遺伝子発現の組織分布ヒト組織におけるFRAZZLEDｍＲＮＡの発現を試験するた
めにノーザンブロット分析を行なった。ヒト多細胞およ
び多組織ノーザンブロット(Clonetech Labo ratories,I
nc)を、レジプライム(rediprime)ＤＮＡ標識システム
(商標)(AmershamL ife Sciences)を用いて製造業者の指
示に従い、³²P で標識したFRAZZLEDｃＤＮＡの完全ヌク
レオチド配列とハイブリダイズさせた。製造業者の指示
に従いハイブリダイゼーションと洗浄を行なって、得ら
れたブロットを−70℃で72時間フィルムに露出した。FR
AZZLEDは卵巣、精巣および脾臓において高レベルに発現
された。また、前立腺、小腸、結腸、骨格筋および心臓
において中程度に発現され、また胸腺、胎盤、肺、腎臓
および膵臓ではずっと低レベルに発現された。

【００７５】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００７６】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：１７６７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡ配列 CGCGGCCGGA CCCCGCGGCC CCGCTTTGCT GCCGACTGGA GTTTGGGGGA AGAAACTCTC 60 CTGCGCCCCA GAGGATTTCT TCCTCGGCGA AGGGACAGCG AAAGATGAGG GTGGCAGGAA 120 GAGAAGGGCG CTTTCTGTCT GCCGGGGTCG CAGCGCGAGA GGGCAGTGCC ATGTTCCTCT 180 CCATCCTAGT GGCGCTGTGC CTGTGGCTGC ACCTGGCGCT GGGCGTGCGC GGCGCGCCCT 240 GCGAGGCGGT GCGCATCCCT ATGTGCCGGC ACATGCCCTG GAACATCACG CGGATGCCCA 300 ACCACCTGCA CCACAGCACG CAGGAGAACG CCATCCTGGC CATCGAGCAG TACGAGGAGG 360 TGGTGGACGT GAACTGCAGC GCCGTGCTGC GCTTCTTCCT CTGTGCCATG TACGCGCCCA 420 TTTGCACCCT GGAGTTCCTG CACGACCCTA TCAAGCCGTG CAAGTCGGTG TGCCAACGCG 480 CGCGCGACGA CTGCGAGCCC CTCATGAAGA TGTACAACCA CAGCTGGCCC GAAAGCCTGG 540 CCTGCGACGA GCTGCCTGTC TATGACCGTG GCGTGTGCAT CTCGCCTGAA GCCATCGTCA 600 CGGACCTCCC GGAGGATGTT AAGTGGATAG ACATCACACC AGACATGATG GTACAGGAAA 660 GGCCTCTTGA TGTTGACTGT AAACGCCTAA GCCCCGATCG GTGCAAGTGT AAAAAGGTGA 720 AGCCAACTTT GGCAACATAT CTCAGCAAAA ACTACAGCTA TGTTATTCAT GCCAAAATAA 780 AAGCTGTGCA GAGGAGTGGC TGCAATGAGG TCACAACGGT GGTGGATGTA AAAGAGATCT 840 TCAAGTCCTC ATCACCCATC CCTCGAACTC AAGTCCCGCT CATTACAAAT TCTTCTTGCC 900 AGTGTCCACA CATCCTGCCC CATCAAGATG TTCTCATCAT GTGTTACGAG TGGCGCTCAA 960 GGATGATGCT TCTTGAAAAT TGCTTAGTTG AAAAATGGAG AGATCAGCTT AGTAAAAGAT 1020 CCATACAGTG GGAAGAGAGG CTGCAGGAAC AGCGGAGAAC AGTTCAGGAC AAGAAGAAAA 1080 CAGCCGGGCG CACCAGTCGT AGTAATCCCC CCAAACCAAA GGGAAAGACT CCTGCTCCCA 1140 AACCAGCCAG TCCCAAGAAG AACATTAAAA CTAGGAGTGC CCAGAAGAGA ACAAACCCGA 1200 AAAGAGTGTG AGCTAACTAG TTTCCAAAGC GGAGACTTCC GACTTCCTTA CAGGATGAGG 1260 CTGGGCATTG CCTGGGACAG CCTATGTAAG GCCATGTGCC CCTTGCCCTA ACAACTCACT 1320 GCAGTGCTCT TCATAGACAC ATCTTGCAGC ATTTTTCTTA AGGCTATGCT TCAGTTTTTC 1380 TTTGTAAGCC ATCACAAGCC ATAGTGGTAG GTTTGCCCTT TGGTACAGAA GGTGAGTTAA 1440 AGCTGGTGGA AAAGGCTTAT TGCATTGCAT TCAGAGTAAC CTGTGTGCAT ACTCTAGAAG 1500 AGTAGGGAAA ATAATGCTTG TTACAATTCG ACCTAATATG TGCATTGTAA AATAAATGCC 1560 ATATTTCAAA CAAAACACGT AATTTTTTTA CAGTATGTTT TATTACCTTT TGATATCTGT 1620 TGTTGCAATG TTAGTGATGT TTTAAAATGT GATCGAAAAT ATAATGCTTC TAAGAAAGGA 1680 ACAGTAGTGG AATGAATGTC TAAAAGATCT TTATGTGTTT ATGGTCTGCA GAAGGATTTT 1740 TGTGATGAAA GGGGATTTTT TGAAAAA 1767

【００７７】配列番号：２配列の長さ：３６８配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Met Arg Val Ala Gly Arg Glu Gly Arg Phe Leu Ser Ala Gly Val Ala 1 5 10 15 Ala Arg Glu Gly Ser Ala Met Phe Leu Ser Ile Leu Val Ala Leu Cys 20 25 30 Leu Trp Leu His Leu Ala Leu Gly Val Arg Gly Ala Pro Cys Glu Ala 35 40 45 Val Arg Ile Pro Met Cys Arg His Met Pro Trp Asn Ile Thr Arg Met 50 55 60 Pro Asn His Leu His His Ser Thr Gln Glu Asn Ala Ile Leu Ala Ile 65 70 75 80 Glu Gln Tyr Glu Glu Val Val Asp Val Asn Cys Ser Ala Val Leu Arg 85 90 95 Phe Phe Leu Cys Ala Met Tyr Ala Pro Ile Cys Thr Leu Glu Phe Leu 100 105 110 His Asp Pro Ile Lys Pro Cys Lys Ser Val Cys Gln Arg Ala Arg Asp 115 120 125 Asp Cys Glu Pro Leu Met Lys Met Tyr Asn His Ser Trp Pro Glu Ser 130 135 140 Leu Ala Cys Asp Glu Leu Pro Val Tyr Asp Arg Gly Val Cys Ile Ser 145 150 155 160 Pro Glu Ala Ile Val Thr Asp Leu Pro Glu Asp Val Lys Trp Ile Asp 165 170 175 Ile Thr Pro Asp Met Met Val Gln Glu Arg Pro Leu Asp Val Asp Cys 180 185 190 Lys Arg Leu Ser Pro Asp Arg Cys Lys Cys Lys Lys Val Lys Pro Thr 195 200 205 Leu Ala Thr Tyr Leu Ser Lys Asn Tyr Ser Tyr Val Ile His Ala Lys 210 215 220 Ile Lys Ala Val Gln Arg Ser Gly Cys Asn Glu Val Thr Thr Val Val 225 230 235 240 Asp Val Lys Glu Ile Phe Lys Ser Ser Ser Pro Ile Pro Arg Thr Gln 245 250 255 Val Pro Leu Ile Thr Asn Ser Ser Cys Gln Cys Pro His Ile Leu Pro 260 265 270 His Gln Asp Val Leu Ile Met Cys Tyr Glu Trp Arg Ser Arg Met Met 275 280 285 Leu Leu Glu Asn Cys Leu Val Glu Lys Trp Arg Asp Gln Leu Ser Lys 290 295 300 Arg Ser Ile Gln Trp Glu Glu Arg Leu Gln Glu Gln Arg Arg Thr Val 305 310 315 320 Gln Asp Lys Lys Lys Thr Ala Gly Arg Thr Ser Arg Ser Asn Pro Pro 325 330 335 Lys Pro Lys Gly Lys Thr Pro Ala Pro Lys Pro Ala Ser Pro Lys Lys 340 345 350 Asn Ile Lys Thr Arg Ser Ala Gln Lys Arg Thr Asn Pro Lys Arg Val 355 360 365

【００７８】配列番号：３配列の長さ：１９６９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡ配列 CGCGGAGTCC GGGACTGGAG CTGCCCGGGC GGGTTCGCGC CCCGAAGGCT GAGAGCTGGC 60 GCTGCTCGTG CCCTGTGTGC CAGACGGCGG AGCTCCGCGG CCGGACCCCG CGGCCCCGCT 120 TTGCTGCCGA CTGGAGTTTG GGGGAAGAAA CTCTCCTGCG CCCCAGAGGA TTTCTTCCTC 180 GGCGAAGGGA CAGCGAAAGA TGAGGGTGGC AGGAAGAGAA GGGCGCTTTC TGTCTGCCGG 240 GGTCGCAGCG CGAGANGGCA GTGCCATGTT CCTCTCCATC CTAGTGGCGC TGTGCCTGTG 300 GCTGTCACCT GGGGCTGGGC GTGTCGCGGC GCCCCTGACG AGGTCGGTGC GCATCCCTAT 360 GTGCCGGCAC ATGCCCTGGA ACATCACGCG GATGCCCAAC CACCTGCACC ACAGCACGCA 420 GGAGAACGCC ATCCTGGCCA TCGAGCAGTA CGAGGAGCTG GTGGACGTGA ACTGCAGCGC 480 CGTGCTGCGC TTCTTCCTCT GTGCCATGTA CGCGCCCATT TGCACCCTGG AGTTCCTGCA 540 CGACCCTATC AAGCCGTGCA AGTCGGTGTG CCAACGCGCG CGCGACGACT GCGAGCCCCT 600 CATGAAGATG TACAACCACA GCTGGCCCGA AAGCCTGGCC TGCGACGAGC TGCCTGTCTA 660 TGACCGTGGC GTGTGCATCT CGCCTGAAGC CATCGTCACG GACCTCCCGG AGGATGTTAA 720 GTGGATAGAC ATCACACCAG ACATGATGGT ACAGGAAAGG CCTCTTGATG TTGACTGTAA 780 ACGCCTAAGC CCCGATCGGT GCAAGTGTAA AAAGGTGAAG CCAACTTTGG CAACATATCT 840 CAGCAAAAAC TACAGCTATG TTATTCATGC CAAAATAAAA GCTGTGCAGA GGAGTGGCTG 900 CAATGAGGTC ACAACGGTGG TGGATGTAAA AGAGATCTTC AAGTCCTCAT CACCCATCCC 960 TCGAACTCAA GTCCCGCTCA TTACAAATTC TTCTTGCCAG TGTCCACACA TCCTGCCCCA 1020 TCAAGATGTT CTCATCATGT GTTACGAGTG GCGCTCAAGG ATGATGCTTC TTGAAAATTG 1080 CTTAGTTGAA AAATGGAGAG ATCAGCTTAG TAAAAGATCC ATACAGTGGG AAGAGAGGCT 1140 GCAGGAACAG CGGAGAACAG TTCAGGACAA GAAGAAAACA GCCGGGCGCA CCAGTCGTAG 1200 TAATCCCCCC AAACCAAAGG GAAAGACTCC TGCTCCCAAA CCAGCCAGTC CCAAGAAGAA 1260 CATTAAAACT AGGGGTCGAC CCACGCGTCC GAAGAGAACA AACCCGAAAA GAGTGTGAGC 1320 TAACTAGTTT CCAAAGCGGA GACTTCCGAC TTCCTTACAG GATGAGGCTG GGCATTGCCT 1380 GGGACAGCCT ATGTAAGGCC ATGTGCCCCT TGCCCTAACA ACTCACTGCA GTGCTCTTCA 1440 TAGACACATC TTGCAGCATT TTTCTTAAGG CTATGCTTCA GTTTTTCTTT GTAAGCCATC 1500 ACAAGCCATA GTGGTAGGTT TGCCCTTTGG TACAGAAGGT GAGTTAAAGC TGGTGGAAAA 1560 GGCTTATTGC ATTGCATTCA GAGTAACCTG TGTGCATACT CTAGAAGAGT AGGGAAAATA 1620 ATGCTTGTTA CAATTCGACC TAATATGTGC ATTGTAAAAT AAATGCCATA TTTCAAACAA 1680 AACACGTAAT TTTTTTACAG TATGTTTATT ACCTTTTGAT ATCTGTTGTT GCAATGTTAG 1740 TGATGTTTAA AATGTGATCG AAAATATAAT GCTTCTAAGA AGGAACAGTA GTGGGAATGA 1800 ATGTCTAAAA GATCTTTATG TGTTTATGGT CTGCCAGAAG GATTTTTGTG ATGAAAGGGG 1860 ATTTTTTGAA AAATCTAGGG GAAGTAGCCA TATGGGAAAA TTATNATGTG TCTTTTTTAC 1920 ATGGACTTCC AGCTCCGTTT TTTGGCTNGG AAACTCTNAA AACCAAANT 1969

【００７９】配列番号：４配列の長さ：３７２配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Met Arg Val Ala Gly Arg Glu Gly Arg Phe Leu Ser Ala Gly Val Ala 1 5 10 15 Ala Arg Xaa Gly Ser Ala Met Phe Leu Ser Ile Leu Val Ala Leu Cys 20 25 30 Leu Trp Leu Ser Pro Gly Ala Gly Arg Val Ala Ala Pro Leu Thr Arg 35 40 45 Ser Val Arg Ile Pro Met Cys Arg His Met Pro Trp Asn Ile Thr Arg 50 55 60 Met Pro Asn His Leu His His Ser Thr Gln Glu Asn Ala Ile Leu Ala 65 70 75 80 Ile Glu Gln Tyr Glu Glu Leu Val Asp Val Asn Cys Ser Ala Val Leu 85 90 95 Arg Phe Phe Leu Cys Ala Met Tyr Ala Pro Ile Cys Thr Leu Glu Phe 100 105 110 Leu His Asp Pro Ile Lys Pro Cys Lys Ser Val Cys Gln Arg Ala Arg 115 120 125 Asp Asp Cys Glu Pro Leu Met Lys Met Tyr Asn His Ser Trp Pro Glu 130 135 140 Ser Leu Ala Cys Asp Glu Leu Pro Val Tyr Asp Arg Gly Val Cys Ile 145 150 155 160 Ser Pro Glu Ala Ile Val Thr Asp Leu Pro Glu Asp Val Lys Trp Ile 165 170 175 Asp Ile Thr Pro Asp Met Met Val Gln Glu Arg Pro Leu Asp Val Asp 180 185 190 Cys Lys Arg Leu Ser Pro Asp Arg Cys Lys Cys Lys Lys Val Lys Pro 195 200 205 Thr Leu Ala Thr Tyr Leu Ser Lys Asn Tyr Ser Tyr Val Ile His Ala 210 215 220 Lys Ile Lys Ala Val Gln Arg Ser Gly Cys Asn Glu Val Thr Thr Val 225 230 235 240 Val Asp Val Lys Glu Ile Phe Lys Ser Ser Ser Pro Ile Pro Arg Thr 245 250 255 Gln Val Pro Leu Ile Thr Asn Ser Ser Cys Gln Cys Pro His Ile Leu 260 265 270 Pro His Gln Asp Val Leu Ile Met Cys Tyr Glu Trp Arg Ser Arg Met 275 280 285 Met Leu Leu Glu Asn Cys Leu Val Glu Lys Trp Arg Asp Gln Leu Ser 290 295 300 Lys Arg Ser Ile Gln Trp Glu Glu Arg Leu Gln Glu Gln Arg Arg Thr 305 310 315 320 Val Gln Asp Lys Lys Lys Thr Ala Gly Arg Thr Ser Arg Ser Asn Pro 325 330 335 Pro Lys Pro Lys Gly Lys Thr Pro Ala Pro Lys Pro Ala Ser Pro Lys 340 345 350 Lys Asn Ile Lys Thr Arg Gly Arg Pro Thr Arg Pro Lys Arg Thr Asn 355 360 365 Pro Lys Arg Val 370

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＢＳＣ１２Ｎ 1/16 ＡＣＤ 1/19 ＡＣＶ 1/21 ＡＤＳＣ１２Ｐ 21/02 ＡＤＵＧ０１Ｎ 33/53 ＤＡＤＹ 33/531 ＡＡＤＺ 33/566 39/395 ＡＡＭ 33/577 Ｂ 48/00 ＡＢＸＡ６１Ｋ 37/02 ＡＡＡＣ０７Ｋ 14/47 ＡＢＡ 16/18 ＡＢＥＣ１２Ｎ 1/16 ＡＢＮ 1/19 ＡＢＳ 1/21 ＡＣＤ 5/10 ＡＣＶＣ１２Ｐ 21/02 ＡＤＳＧ０１Ｎ 33/53 ＡＤＵ 33/531 ＡＤＹ 33/566 ＡＤＺ 33/577 Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ (72)発明者イアンエドワードジェームズアメリカ合衆国 19003 ペンシルバニア州，アードモア，シンプソンロード 119 (72)発明者サンジェイクマーアメリカ合衆国 19406 ペンシルバニア州，キングオブプラッシア，ペンサークル 1021

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２のFRAZZLEDポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
０％同一であり、かつFRAZZLEDポリペプチドの活性を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
のFRAZZLEDポリペプチドをコードする配列番号１中に含
まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載
のポリヌクレオチド。
【請求項３】前記のポリヌクレオチドが、その全長に
おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０
％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】配列番号１のポリヌクレオチドである、
請求項３に記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】配列番号２のFRAZZLEDポリペプチドのア
ミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、
欠失または置換されており、かつFRAZZLEDポリペプチド
の活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド
配列を含んでなるポリヌクレオチド。
【請求項７】下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも８０％
同一であるアミノ酸配列を含むFRAZZLEDポリペプチドを
産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまたは
ＲＮＡ分子。
【請求項８】請求項７に記載の発現系を含有する宿主
細胞。
【請求項９】 FRAZZLEDポリペプチドを産生させるのに
十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、こ
の培養物から前記ポリペプチドを回収することを含んで
なる、FRAZZLEDポリペプチドの産生方法。
【請求項１０】宿主細胞が適当な培養条件下でFRAZZL
EDポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の発
現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
ションすることを含んでなる、FRAZZLEDポリペプチドを
産生する細胞の作製方法。
【請求項１１】全長において配列番号２のアミノ酸配
列と少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を含んで
なるFRAZZLEDポリペプチド。
【請求項１２】配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
求項１１に記載のポリペプチド。
【請求項１３】請求項１１に記載のFRAZZLEDポリペプ
チドに免疫特異的な抗体。
【請求項１４】請求項１１に記載のFRAZZLEDポリペプ
チドの活性増加または発現増加を必要としている患者を
治療するための医薬組成物であって、治療上有効な量
の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
たは(b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたら
す形の、配列番号２のFRAZZLEDポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列と全長において少なくとも８０％同
一であるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配
列に対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離
されたポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
【請求項１５】請求項１１に記載のFRAZZLEDポリペプ
チドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治療
するための医薬組成物であって、治療上有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
／または(b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチ
ド配列の発現を抑制する核酸分子、および／または(c)
前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に関し
て前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含んで
なる医薬組成物。
【請求項１６】請求項１１に記載のFRAZZLEDポリペプ
チドの発現または活性と関連した被験者の疾病またはそ
の罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者由来のゲノム中にFRAZZLEDポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列の突然変異があるかどう
かを調べる、および／または(b) 前記被験者から得られ
たサンプル中のFRAZZLEDポリペプチド発現の存在または
量を分析する、ことを含んでなる方法。
【請求項１７】請求項１１に記載のFRAZZLEDポリペプ
チドを阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方法
であって、 (a) FRAZZLEDポリペプチドを発現している細胞（もしく
はFRAZZLEDポリペプチドを発現している細胞膜）または
FRAZZLEDポリペプチドに応答する細胞と候補化合物とを
接触させ、そして(b) その結合、または機能的応答の刺
激もしくは抑制を観察するか、または候補化合物と接触
させた細胞（または細胞膜）の能力を、接触させなかっ
た同一の細胞と、FRAZZLEDポリペプチド活性に関して比
較する、ことを含んでなる方法。
【請求項１８】請求項１７に記載の方法により同定さ
れたアゴニスト。
【請求項１９】請求項１７に記載の方法により同定さ
れたアンタゴニスト。
【請求項２０】請求項１０に記載の方法により作製さ
れた組換え宿主細胞、またはFRAZZLEDポリペプチドを発
現しているその膜。