JPH11151093A - ショウジョウバエｋｕｚ遺伝子に関連したヒト・ディスインテグリン・メタロプロテアーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 ヒトKUZポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ド並びに前記ポリペプチドの組換え法による生産方法を
提供する。 【解決手段】 配列番号２のヒトKUZポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
０％同一であり、かつヒトKUZポリペプチドの活性を有
するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。 【効果】 ヒトKUZポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドは炎症、神経変性、アレルギー性疾患、または基質サ
イトカインもしくは受容体の脱調節を伴う他の疾患を含
む機能障害または疾病の治療と、このような症状の診断
アッセイに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、このポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチド、前記のポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの使用、並びにその生産方法に関する。より
詳細には、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドはADAMファミリーに関係しており、以後ヒトKUZと記
す。本発明はまた、このようなポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの作用を阻害または活性化することに関す
る。

【０００２】

【従来の技術】ショウジョウバエKUZ遺伝子のヒト相同
体として知られるタンパク質はメタロプロテアーゼのAD
AMファミリーのメンバーである。このプロテアーゼおよ
び別のファミリーメンバーであるTNF転換酵素は、プロT
NFをプロセシングしてTNFの成熟形態にしうることが示
された(Blackら、Nature 385:729、1997；Lunnら、FEBS
Lett. 400:333-335，1997)。したがって、このメンバー
および追加のファミリーメンバーが、他のサイトカイ
ン、成長因子、または受容体のプロセシングにおいて何
らかの役割を担っていることが予想されるだろう。プロ
セシングが生じ、かつその生化学がADAMファミリーのメ
ンバーを含む機構と一致する他のサイトカインや受容体
には、CD23、L−セレクチン、FASリガンド、CD16および
その他が含まれる(Hooperら、Biochem J. 321,265-279,
1997に概説されている)。存在しうる基質とADAMファミ
リーメンバーとの関係は不明であり、そのためヒトKUZ
タンパク質は1以上の細胞型においてこれらのサイトカ
インおよび成長因子の任意の組合わせのプロセシングに
関与している可能性がある。他のファミリーメンバーで
あるメルトリン(meltrin)とフェルチリン(fertilin)
は、細胞−細胞融合に関与している(Yagami−Hiromasa
ら、Nature 377:652-656(1995))。ヒトKUZタンパク質の
ウシ相同体は基質としてミエリンを使用することが示さ
れており(Howardら、Biochem J. 317:45-50,1996)、ま
たショウジョウバエKUZ遺伝子産物は神経分化に関与し
ている(Rookeら、Science 273:1227-1231,1996)。これ
らのプロセシング酵素の１以上を阻害することは、炎
症、神経変性、アレルギー性疾患、または基質サイトカ
インもしくは受容体の脱調節を伴う他の疾患における治
療上の有用性をもちうる。こうしたことは、ADAMファミ
リーに治療標的としての確立され実証された歴史がある
ことを示している。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】明らかに、炎症、神経
変性、アレルギー性疾患、または基質サイトカインもし
くは受容体の脱調節を伴う他の疾患を含むがこれらに限
らない、機能障害または疾病を予防し、改善し、治療す
る上で何らかの役割を果たすADAMファミリーの新たなメ
ンバーを同定して特性付ける必要性が存在している。本
発明はこのようなメンバーを提供するものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明は、一つの態様に
おいて、ヒトKUZポリペプチドおよび組換え物質、並び
にその生産方法に関する。本発明のもう一つの態様はヒ
トKUZポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法
に関する。こうした使用には、とりわけ、炎症、神経変
性、アレルギー性疾患、または基質サイトカインもしく
は受容体の脱調節を伴う他の疾患の治療が含まれる。他
の態様では、本発明は、本発明により提供される物質を
用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定する方
法、並びに同定された化合物を用いてヒトKUZの平衡異
常と関連した状態を治療することに関する。本発明のさ
らに他の態様は、不適当なヒトKUZ活性またはヒトKUZレ
ベルと関連した疾病を検出するための診断アッセイに関
する。

【０００５】定義 下記の定義は、本明細書中で頻繁に使用される用語を理
解しやすくするためのものである。「ヒトKUZ」とは、
特に、一般的には配列番号２で表されるアミノ酸配列を
有するポリペプチドまたはそのアレリック変異体を意味
する。「ヒトKUZ活性もしくはヒトKUZポリペプチド活
性」または「ヒトKUZもしくはヒトKUZポリペプチドの生
物学的活性」とは、類似の活性、向上した活性、または
望ましくない副作用が低下したこれらの活性を含めて、
ヒトKUZの代謝的または生理的機能を意味する。さら
に、前記ヒトKUZの抗原的および免疫原的活性も含まれ
る。「ヒトKUZ遺伝子」とは、配列番号１で表されるヌ
クレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたはそのア
レリック変異体および／またはそれらの相補体を意味す
る。

【０００６】本明細書中で用いる「抗体」には、ポリク
ローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ抗体、一本
鎖抗体、ヒト化抗体、さらにＦａｂまたは他の免疫グロ
ブリン発現ライブラリーの産物を含むＦａｂフラグメン
トが含まれる。「単離された」とは、天然の状態から
「人間の手によって」改変されたことを意味する。「単
離された」組成物または物質が天然に存在するのであれ
ば、それはそのもとの環境から変化しているか移動して
おり、またはその両方である。例えば、生存している動
物の体内に自然界で存在するポリヌクレオチドまたはポ
リペプチドは「単離された」ものではないが、その天然
状態の共存物質から分離されたポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書中で用いられるように、「単
離された」ものである。

【０００７】「ポリヌクレオチド」とは、一般に任意の
ポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオ
チドをさし、これは修飾されていないＲＮＡもしくはＤ
ＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであり得
る。「ポリヌクレオチド」には、制限するものではない
が、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、
一本鎖領域と二本鎖領域が混じり合ったＲＮＡ、ＤＮＡ
とＲＮＡを含むハイブリッド分子（一本鎖でも、または
より典型的には二本鎖でもよく、一本鎖領域と二本鎖領
域が混じり合ったものでもよい）が含まれる。加えて、
「ポリヌクレオチド」はＲＮＡまたはＤＮＡまたはＲＮ
ＡとＤＮＡの両方からなる三重鎖領域を意味する。「ポ
リヌクレオチド」という用語はまた、１個以上の修飾塩
基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、および安定性または
他の理由のために修飾された骨格を有するＤＮＡまたは
ＲＮＡも含む。「修飾」塩基としては、例えば、トリチ
ル化された塩基およびイノシンのような特殊な塩基があ
る。ＤＮＡおよびＲＮＡに対してさまざまな修飾が行わ
れてきた。こうして、「ポリヌクレオチド」は、自然界
に一般的に存在するポリヌクレオチドの化学的、酵素的
または代謝的に修飾された形態、並びにウイルスおよび
細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含
する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴ
ヌクレオチドと称される比較的短いポリヌクレオチドも
包含する。

【０００８】「ポリペプチド」とは、ペプチド結合また
は修飾されたペプチド結合（すなわち、ペプチドアイソ
スター）により連結された２個以上のアミノ酸を含む任
意のペプチドまたはタンパク質を意味する。「ポリペプ
チド」は短鎖（通常はペプチド、オリゴペプチドまたは
オリゴマーという）と長鎖（一般的にはタンパク質とい
う）の両方をさす。ポリペプチドは２０種類の遺伝子コ
ード化アミノ酸以外のアミノ酸を含んでもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセシングのような天然のプロ
セスで、または当技術分野で公知の化学的修飾法のいず
れかで修飾されたアミノ酸配列を含む。このような修飾
は基本的な教科書、より詳細な学術論文および研究文献
に詳述されている。修飾はペプチド骨格、アミノ酸側
鎖、アミノまたはカルボキシル末端を含めてポリペプチ
ドのどこでも行うことができる。同じタイプの修飾が所
定のポリペプチドのいくつかの部位に同程度でまたはさ
まざまに異なる程度で存在してもよい。また、所定のポ
リペプチドが多くのタイプの修飾を含んでいてもよい。
ポリペプチドはユビキチン化のために分枝していても、
分枝のある又はない環状であってもよい。環状の、分枝
した、または分枝した環状のポリペプチドは翻訳後の天
然プロセスから生じることがあり、また、合成法によっ
て製造することもできる。修飾としては、アセチル化、
アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの
共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌ
クレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の
共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架
橋、環化、ジスルフィド結合の形成、脱メチル化、共有
架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタメートの形
成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、
ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解処理、リ
ン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫酸
化、アルギニル化のようなタンパク質へのアミノ酸の転
移ＲＮＡ媒介付加、ユビキチン化などがある。例えば、
PROTEINS - STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES, 2nd
Ed., T.E. Creighton, W.H. Freeman and Company, Ne
w York, 1993; POSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICAT
ION OF PROTEINS, B.C. Johnson 編, Academic Press,
New York,1983中のWold, F., Posttranslational Prote
in Modifications: Perspectivesand Prospects, pgs.
1-12; Seifter ら, “Analysis for protein modificat
ions and nonprotein cofactors", Meth Enzymol (199
0) 182:626-646;および Rattan ら, “Protein Synthes
is: Posttranslational Modifications and Aging",Ann
NY Acad Sci (1992) 663:48-62を参照のこと。

【０００９】本明細書中で用いる「変異体」とは、基準
のポリヌクレオチドまたはポリペプチドと異なるが、不
可欠な性質を保持しているポリヌクレオチドまたはポリ
ペプチドのことである。典型的なポリヌクレオチドの変
異体は基準ポリヌクレオチドとヌクレオチド配列の点で
相違する。この変異体のヌクレオチド配列の変化は、基
準ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド
のアミノ酸配列を変更しても、しなくてもよい。ヌクレ
オチドの変化は、以下で述べるように、基準配列により
コードされるポリペプチドにおいてアミノ酸の置換、付
加、欠失、融合および末端切断（トランケーション）を
生じさせることができる。典型的なポリペプチドの変異
体は基準ポリペプチドとアミノ酸配列の点で相違する。
一般的には、基準ポリペプチドの配列と変異体の配列が
全般的によく類似しており、多くの領域で同一となるよ
うな相違に限られる。変異体と基準ポリペプチドは任意
に組み合わせた１以上の置換、付加、欠失によりアミノ
酸配列が相違していてよい。置換または挿入されるアミ
ノ酸残基は遺伝子コードによりコードされるものであっ
ても、なくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドの変異体はアレリック変異体のように天然に存在す
るものでも、天然に存在することが知られていない変異
体であってもよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの天然に存在しない変異体は、突然変異誘発法または
直接合成により調製することができる。

【００１０】「同一性」はヌクレオチド配列またはアミ
ノ酸配列の同一性の尺度である。一般に、最大級の整合
（一致）が得られるように配列を並べる。「同一性」そ
れ自体は当技術分野で認識された意味をもち、発表され
た技法を使って計算することができる。例えば、COMPUT
ATIONAL MOLECULAR BIOLOGY, Lesk, A.M. 編, OxfordUn
iversity Press, New York, 1988; BIOCOMPUTING: INFO
RMATICS AND GENOMEPROJECTS, Smith, D.W. 編, Academ
ic Press, New York, 1993; COMPUTER ANALYSIS OF SEQ
UENCE DATA, PART I, Griffin, A.M. and Griffin, H.
G. 編, HumanaPress, New Jersey, 1994; SEQUENCE ANA
LYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY, von Heinje, G., Academ
ic Press, 1987; および SEQUENCE ANALYSIS PRIMER, G
ribskov, M. and Devereux, J.編, M Stockton Press,
New York, 1991を参照のこと。２つのポリヌクレオチド
またはポリペプチド配列間の同一性を決定する方法は多
数存在していると同時に、「同一性」なる用語は当業者
には公知である (Carillo, H. and Lipton, D., SIAM J
Applied Math (1988) 48:1073) 。２つの配列間の同一
性または類似性を決定するために汎用される方法として
は、Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop 編,
Academic Press, San Diego, 1994 およびCarillo, H.
and Lipton, D., SIAM J Applied Math (1988) 48:1073
に記載される方法があるが、これらに限らない。同一
性および類似性の決定方法はコンピュータプログラムに
集成されている。２つの配列間の同一性および類似性を
決定するための好適なコンピュータプログラム法として
は、GCS プログラムパッケージ (Devereux, J.ら, Nucl
eic Acids Research (1984) 12(1):387)、BLASTP、BLAS
TN、FASTA (Atschul, S.F.ら, J Molec Biol (1990) 21
5:403)があるが、これらに限らない。

【００１１】一例として、配列番号１の基準ヌクレオチ
ド配列に対して、例えば、少なくとも９５％の「同一
性」を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドとは、このポリヌクレオチドのヌクレオチド配列が配
列番号１の基準ヌクレオチド配列のそれぞれ１００ヌク
レオチドにつき最高で５つの点突然変異を含みうること
を除けば、基準配列と同一であることを意図している。
言い換えると、基準ヌクレオチド配列と少なくとも９５
％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドを得るには、基準配列中の５％までのヌクレオチドを
欠失させるか、他のヌクレオチドで置換するか、または
基準配列中の全ヌクレオチドの５％までのヌクレオチド
数を基準配列に挿入すればよい。基準配列のこれらの突
然変異は、基準ヌクレオチド配列の5'もしくは3'末端位
置、またはこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基
準配列中のヌクレオチドの間に個々に、または基準配列
内に１以上の連続するグループとして配置することがで
きる。

【００１２】同様に、配列番号２の基準アミノ酸配列に
対して、例えば、少なくとも９５％の「同一性」を有す
るアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、このポリペ
プチド配列が配列番号２の基準アミノ酸配列のそれぞれ
１００アミノ酸につき最高で５つのアミノ酸変更を含み
うることを除けば、基準配列と同一であることを意図し
ている。言い換えると、基準アミノ酸配列と少なくとも
９５％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを
得るには、基準配列中の５％までのアミノ酸残基を欠失
させるか、他のアミノ酸で置換するか、または基準配列
中の全アミノ酸残基の５％までのアミノ酸数を基準配列
に挿入すればよい。基準配列のこれらの変更は、基準ア
ミノ酸配列のアミノもしくはカルボキシ末端位置、また
はこれらの末端位置の間のどこかで起こり、基準配列中
のアミノ酸残基の間に個々に、または基準配列内に１以
上の連続するグループとして配置することができる。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチド 一つの態様において、本発明はヒトKUZポリペプチド
（またはヒトKUZタンパク質）に関する。このヒトKUZポ
リペプチドには、配列番号２のポリペプチドだけでな
く、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチド、そ
の全長において配列番号２のアミノ酸配列と少なくとも
８０％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは
少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含むポリペ
プチドも含まれる。さらに、少なくとも９７〜９９％同
一であるものが非常に好適である。また、その全長にお
いて配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと
少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、より
好ましくは少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を
有するポリペプチドもヒトKUZポリペプチドに含まれ
る。さらに、少なくとも９７〜９９％同一であるものが
非常に好適である。ヒトKUZポリペプチドはヒトKUZの少
なくとも１つの生物学的活性を示すことが好ましい。

【００１４】ヒトKUZポリペプチドは「成熟」タンパク
質の形であっても、融合タンパク質のような、より大き
いタンパク質の一部であってもよい。しばしば、追加の
アミノ酸配列を含めることが有利であり、このようなア
ミノ酸配列としては、分泌すなわちリーダー配列、プロ
配列、多重ヒスチジン残基のような精製に役立つ配列、
または組換え生産の際の安定性を確保する付加的配列な
どがある。

【００１５】また、ヒトKUZポリペプチドの断片も本発
明に含まれる。こうした断片は全体的に前記ヒトKUZポ
リペプチドのアミノ酸配列の一部と同一であるが、全部
とは同一でないアミノ酸配列を有するポリペプチドであ
る。ヒトKUZポリペプチドと同様に、断片は「フリース
タンディング」（それ自体で独立）していても、より大
きいポリペプチド内に含まれていてもよく、つまりその
大きいポリペプチドの一部または一領域、最も好ましく
は一つの連続領域、を断片が構成していてもよい。本発
明のポリペプチド断片の代表的な例として、およその見
当でアミノ酸番号１−２０、２１−４０、４１−６０、
６１−８０、８１−１００、および１０１からヒトKUZ
ポリペプチドの末端までの断片が挙げられる。ここで、
「およそ」とは、上記の範囲の一端または両端で数個、
５個、４個、３個、２個または１個のアミノ酸が増えた
り減ったりした範囲を含むものである。

【００１６】好適な断片としては、例えば、アミノ末端
を含む一連の残基もしくはカルボキシル末端を含む一連
の残基の欠失、またはアミノ末端を含むものとカルボキ
シル末端を含むものとの二連の残基の欠失を除いた、ヒ
トKUZポリペプチドのアミノ酸配列を有するトランケー
ション(truncation)ポリペプチドが含まれる。また、α
ヘリックスとαヘリックス形成領域、βシートとβシー
ト形成領域、ターンとターン形成領域、コイルとコイル
形成領域、親水性領域、疎水性領域、α両親媒性領域、
β両親媒性領域、可変性領域、表面形成領域、基質結合
領域、および高抗原指数領域を含む断片のような、構造
的または機能的特性により特徴づけられる断片も好適で
ある。その他の好適な断片は生物学的に活性な断片であ
る。生物学的に活性な断片は、同様の活性をもつ断片、
その活性が向上した断片、または望ましくない活性が減
少した断片を含めて、ヒトKUZ活性を媒介するものであ
る。さらに、動物、特にヒトにおいて抗原性または免疫
原性がある断片も含まれる。

【００１７】これらのポリペプチド断片はどれも、抗原
活性を含めたヒトKUZの生物学的活性を保持することが
好ましい。特定された配列および断片の変異型も本発明
の一部を構成する。好適な変異型は同類アミノ酸置換に
より対象物と異なるもの、すなわち、ある残基が同様の
性質の他の残基で置換されているものである。典型的な
こうした置換は、Ala, Val, Leu と Ileの間；Ser とTh
r の間；酸性残基 AspとGlu の間；Asn とGln の間；塩
基性残基 LysとArg の間；または芳香族残基 PheとTyr
の間で起こる。特に、数個、５〜１０個、１〜５個また
は１〜２個のアミノ酸が任意の組合せで置換、欠失また
は付加されている変異型が好適である。

【００１８】本発明のヒトKUZポリペプチドは任意の適
当な方法で製造することができる。このようなポリペプ
チドには、単離された天然に存在するポリペプチド、組
換え的に生産されたポリペプチド、合成的に製造された
ポリペプチド、またはこれらの方法の組合せにより製造
されたポリペプチドが含まれる。このようなポリペプチ
ドの製造のための手段は当業界でよく理解されている。

【００１９】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つの態様はヒトKUZポリヌクレオチドに
関する。ヒトKUZポリヌクレオチドには、ヒトKUZポリペ
プチドおよび断片をコードする単離されたポリヌクレオ
チド、並びにこれらと密接に関連したポリヌクレオチド
が含まれる。さらに特定すると、本発明のヒトKUZポリ
ヌクレオチドとしては、配列番号２のヒトKUZポリペプ
チドをコードする配列番号１中に含まれるヌクレオチド
配列を含むポリヌクレオチド、および配列番号１の特定
配列を有するポリヌクレオチドがある。さらに、ヒトKU
Zポリヌクレオチドには、配列番号２のヒトKUZポリペプ
チドをコードするヌクレオチド配列と全長において少な
くとも８０％同一であるヌクレオチド配列を含むポリヌ
クレオチド、および配列番号１のヌクレオチド配列と全
長において少なくとも８０％同一であるヌクレオチド配
列を含むポリヌクレオチドが含まれる。これに関連し
て、少なくとも９０％同一であるポリヌクレオチドが好
適であり、特に少なくとも９５％同一であるものが好適
である。さらに、少なくとも９７％同一であるものがよ
り好ましく、少なくとも９８〜９９％同一であるものが
より一層好ましく、少なくとも９９％同一であるものが
最も好ましい。また、増幅反応に使用できる条件下、ま
たはプローブやマーカーとして使用できる条件下でハイ
ブリダイズするのに十分な、配列番号１中に含まれるヌ
クレオチド配列との同一性を有するヌクレオチド配列も
ヒトKUZポリヌクレオチドに含まれる。本発明はまた、
このようなヒトKUZポリヌクレオチドと相補的なポリヌ
クレオチドを提供する。

【００２０】本発明のヒトKUZは、ヒトKUZをコードする
表１のｃＤＮＡ（配列番号１）の配列決定の結果により
示されるように、ADAMファミリーの他のタンパク質と構
造的に関連している。配列番号１のｃＤＮＡ配列は配列
番号２の748個のアミノ酸からなるポリペプチドをコー
ドするオープンリーディングフレーム（ヌクレオチド番
号113−2356）を含んでいる。表２のアミノ酸配列（配
列番号２）は748個のアミノ酸残基においてB.taurusメ
タロプロテアーゼ(Howard,L.ら、Biochem J. 317,45-5
0,(1996))と約97％の同一性を有し、また589個のアミノ
酸残基においてディスインテグリン(disintegrin)・メ
タロプロテアーゼについての部分ヒトクローン（GenBan
k Z48 579）と99％の同一性を有する(BLAST使用）。さ
らに、ヒトKUZ(配列番号2)は589個のアミノ酸残基にお
いてショウジョウバエKUZ遺伝子と49％の同一性を有す
る(Rooke,J.ら、Science 273,1227-1231,1996)。また、
ヒトKUZ(配列番号2)は805個のアミノ酸残基においてTNF
−α転換酵素と25％の同一性を有する(Black,R.ら、Nat
ure, 385:729-733,1997;Moss,M.L.ら、Nature 385:733-
736,199 7)。表１のヌクレオチド配列（配列番号１）は
2255個のヌクレオチド残基においてB.taurusメタロプロ
テアーゼ(Howard,L.ら、Biochem J. 317,45-50,(1996))
と約94％の同一性を有し、また2116個のヌクレオチド残
基においてディスインテグリン・メタロプロテアーゼに
ついての部分ヒトクローン（GenBank Z48579）と100％
の同一性を有する(BLAST使用）。したがって、本発明の
ヒトKUZポリペプチドおよびポリヌクレオチドは、とり
わけ、それらの相同ポリペプチドおよびポリヌクレオチ
ドと同様の生物学的機能／特性をもつことが予測され、
それらの有用性は当業者には自明である。

【００２１】ヒトKUZのヌクレオチド配列（配列番号
１）

【表１】 GTCCCGGCTTCCCGTGGAGGCTCCGGACCAAGCCCCTTCAGCTTCTCCCTCCGGATCGAT GTGCTGCTGTTAACCCGTGAGGAGGCGGCGGCGGCGGCAGCGGCAGCGGAAGATGGTGTT GCTGAGAGTGTTAATTCTGCTCCTCTCCTGGGCGGCGGGGATGGGAGGTCAGTATGGGAA TCCTTTAAATAAATATATCAGACATTATGAAGGATTATCTTACAATGTGGATTCATTACA CCAAAAACACCAGCGTGCCAAAAGAGCAGTCTCACATGAAGACCAATTTTTACGTCTAGA TTTCCATGCCCATGGAAGACATTTCAACCTACGAATGAAGAGGGACACTTCCCTTTTCAG TGATGAATTTAAAGTAGAAACATCAAATAAAGTACTTGATTATGATACCTCTCATATTTA CACTGGACATATTTATGGTGAAGAAGGAAGTTTTAGCCATGGGTCTGTTATTGATGGAAG ATTTGAAGGATTCATCCAGACTCGTGGTGGCACATTTTATGTTGAGCCAGCAGAGAGATA TATTAAAGACCGAACTCTGCCATTTCACTCTGTCATTTATCATGAAGATGATATTAACTA TCCCCATAAATACGGTCCTCAGGGGGGCTGTGCAGATCATTCAGTATTTGAAAGAATGAG GAAATACCAGATGACTGGTGTAGAGGAAGTAACACAGATACCTCAAGAAGAACATGCTGC TAATGGTCCAGAACTTCTGAGGAAAAAACGTACAACTTCAGCTGAAAAAAATACTTGTCA GCTTTATATTCAGACTGATCATTTGTTCTTTAAATATTACGGAACACGAGAAGCTGTGAT TGCCCAGATATCCAGTCATGTTAAAGCGATTGATACAATTTACCAGACCACAGACTTCTC CGGAATCCGTAACATCAGTTTCATGGTGAAACGCATAAGAATCAATACAACTGCTGATGA GAAGGACCCTACAAATCCTTTCCGTTTCCCAAATATTGGTGTGGAGAAGTTTCTGGAATT GAATTCTGAGCAGAATCATGATGACTACTGTTTGGCCTATGTCTTCACAGACCGAGATTT TGATGATGGCGTACTTGGTCTGGCTTGGGTTGGAGCACCTTCAGGAAGCTCTGGAGGAAT ATGTGAAAAAAGTAAACTCTATTCAGATGGTAAGAAGAAGTCCTTAAACACTGGAATTAT TACTGTTCAGAACTATGGGTCTCATGTACCTCCCAAAGTCTCTCACATTACTTTTGCTCA CGAAGTTGGACATAACTTTGGATCCCCACATGATTCTGGAACAGAGTGCACACCAGGAGA ATCTAAGAATTTGGGTCAAAAAGAAAATGGCAATTACATCATGTATGCAAGAGCAACATC TGGGGACAAACTTAACAACAATAAATTCTCACTCTGTAGTATTAGAAATATAAGCCAAGT TCTTGAGAAGAAGAGAAACAACTGTTTTGTTGAATCTGGCCAACCTATTTGTGGAAATGG AATGGTAGAACAAGGTGAAGAATGTGATTGTGGCTATAGTGACCAGTGTAAAGATGAATG CTGCTTCGATGCAAATCAACCAGAGGGAAGAAAATGCAAACTGAAACCTGGGAAACAGTG CAGTCCAAGTCAAGGTCCTTGTTGTACAGCACAGTGTGCATTCAAGTCAAAGTCTGAGAA GTGTCGGGATGATTCAGACTGTGCAAGGGAAGGAATATGTAATGGCTTCACAGCTCTCTG CCCAGCATCTGACCCTAAACCAAACTTCACAGACTGTAATAGGCATACACAAGTGTGCAT TAATGGGCAATGTGCAGGTTCTATCTGTGAGAAATATGGCTTAGAGGAGTGTACGTGTGC CAGTTCTGATGGCAAAGATGATAAAGAATTATGCCATGTATGCTGTATGAAGAAAATGGA CCCATCAACTTGTGCCAGTACAGGGTCTGTGCAGTGGAGTAGGCACTTCAGTGGTCGAAC CATCACCCTGCAACCTGGATCCCCTTGCAACGATTTTAGAGGTTACTGTGATGTTTTCAT GCGGTGCAGATTAGTAGATGCTGATGGTCCTCTAGCTAGGCTTAAAAAAGCAATTTTTAG TCCAGAGCTCTATGAAAACATTGCTGAATGGATTGTGGCTCATTGGTGGGCAGTATTACT TATGGGAATTGCTCTGATCATGCTAATGGCTGGATTTATTAAGATATGCAGTGTTCATAC TCCAAGTAGTAATCCAAAGTTGCCTCCTCCTAAACCACTTCCAGGCACTTTAAAGAGGAG GAGACCTCCACAGCCCATTCAGCAACCCCAGCGTCAGCGGCCCCGAGAGAGTTATCAAAT GGGACACATGAGACGCTAACTGCAGCTTTTGCCTTGGTTCTTCCTAGTGCCTACAATGGG AAAACTTCACTCCAAAGAGAAACCTATTAAGTCATCATCTCCAAACTAAACCCTCACAAG TAACAGTTGAAGAAAAAATGGCAAGAGATCATATCCTCAGACCAGGTGGAATTACTTAAA TTTTAAAGCCTGAAAATTCCAATTTGGGGGTGGGAGGTGGAAAAGGAACCCAATTTTCTT ATGAACAGATATTTTTAACTTAATGGCACAAAGTCTTAGAATATTATTATGTGCCCCGTG TTCCCTGTTCTTCGTTGCTGCATTTTCTTCACTTGCAGGCAAACTTGGCTCTCAATAAAC TTTTACCACAAATTGAAATAAATATATTTTTTTCAACTGCCAATCAAGGGTAGGAGGCTC GACCACCTCAACATTGGAGACATCACTTGCCAATGTACATACCTTGTTATATGCAGACAT GTATTTCTTACGTACACTGTACTTCTGTGTGCAATTGTAAACAGAAATTGCAATATGGAT GTTTCTTTGTATTATAAAATTTTTCCGCTCTTAATTAAAAATTACTGTTTAATTGACATA CTCAGGATAACAGAGAATGGTGGTATTCAGTGGTCCAGGATTCTGTAATGCTTTACACAG GCAGTTTTGAAATGAAAATCAATTTACCTTTCTGTTACGATGGAGTTGGTTTTGATACTC ATTTTTTCTTTATCACATGGCTGCTACGGGCACAAGTGACTATACTGAAGAACACAGTTA AGTGTTGTGCAAACTGGACATAGCAGCACATACTACTTCAGAGTTCATGATGTAGATGTC TGGTTTCTGCTTACGTCTTTTAAACTTTCTAATTCAATTCCATTTTTCAATTAATAGGTG AAATTTTATTCATGCTTTGATAGAAATTATGTCAATGAAATGAAAAAAAAAAAAAAAAGG GCGGCCGCTCTAGAGGATCCCTCGAGGGGCCCAAGCTTACGCGTGCATG

【００２２】ヒトKUZのアミノ酸配列（配列番号２）

【表２】 MVLLRVLILLLSWAAGMGGQYGNPLNKYIRHYEGLSYNVDSLHQKHQRAKRAVSHEDQFL RLDFHAHGRHFNLRMKRDTSLFSDEFKVETSNKVLDYDTSHIYTGHIYGEEGSFSHGSVI DGRFEGFIQTRGGTFYVEPAERYIKDRTLPFHSVIYHEDDINYPHKYGPQGGCADHSVFE RMRKYQMTGVEEVTQIPQEEHAANGPELLRKKRTTSAEKNTCQLYIQTDHLFFKYYGTRE AVIAQISSHVKAIDTIYQTTDFSGIRNISFMVKRIRINTTADEKDPTNPFRFPNIGVEKF LELNSEQNHDDYCLAYVFTDRDFDDGVLGLAWVGAPSGSSGGICEKSKLYSDGKKKSLNT GIITVQNYGSHVPPKVSHITFAHEVGHNFGSPHDSGTECTPGESKNLGQKENGNYIMYAR ATSGDKLNNNKFSLCSIRNISQVLEKKRNNCFVESGQPICGNGMVEQGEECDCGYSDQCK DECCFDANQPEGRKCKLKPGKQCSPSQGPCCTAQCAFKSKSEKCRDDSDCAREGICNGFT ALCPASDPKPNFTDCNRHTQVCINGQCAGSICEKYGLEECTCASSDGKDDKELCHVCCMK KMDPSTCASTGSVQWSRHFSGRTITLQPGSPCNDFRGYCDVFMRCRLVDADGPLARLKKA IFSPELYENIAEWIVAHWWAVLLMGIALIMLMAGFIKICSVHTPSSNPKLPPPKPLPGTL KRRRPPQPIQQPQRQRPRESYQMGHMRR

【００２３】ヒトKUZをコードする本発明の一つのポリ
ヌクレオチドは、標準的なクローニングおよびスクリー
ニングにより、ヒト滑膜繊維芽細胞、ヒト破骨細胞腫、
ヒト活性化単球、ヒトＴ細胞、ヒト結腸癌の細胞中のｍ
ＲＮＡから誘導されたｃＤＮＡライブラリーから、エク
スプレスド・シークエンス・タグ（expressed sequence
tag: EST)分析 (Adams, M.D. ら, Science (1991) 25
2:1651-1656; Adams, M.D. ら, Nature (1992) 355:632
-634; Adams, M.D.ら, Nature (1995) 377 Supp:3-174)
を用いて得ることができる。また、本発明のポリヌク
レオチドはゲノムＤＮＡライブラリーのような天然源か
ら得ることができ、商業的に入手可能な公知の技法を用
いて合成することもできる。

【００２４】配列番号２のヒトKUZポリペプチドをコー
ドするヌクレオチド配列は、表１中に含まれるポリペプ
チドコード配列（配列番号１のヌクレオチド番号113−2
356）と同一であっても、遺伝子コードの重複性（縮
重）のため、やはり配列番号２のポリペプチドをコード
する配列であってもよい。

【００２５】本発明のポリヌクレオチドをヒトKUZポリ
ペプチドの組換え生産のために用いる場合、そのポリヌ
クレオチドには、成熟ポリペプチドのコード配列または
その断片単独、他のコード配列（例えば、リーダーもし
くは分泌配列、プレ−、プロ−もしくはプレプロ−タン
パク質配列、または他の融合ペプチド部分をコードする
もの）と同じリーディングフレーム内にある成熟ポリペ
プチドのコード配列またはその断片が含まれる。例え
ば、融合ポリペプチドの精製を容易にするマーカー配列
がコードされ得る。本発明のこの態様の好ましい具体例
として、マーカー配列は、ｐＱＥベクター(Qiagen, In
c.)により提供されかつGentz ら, Proc. Natl. Acad. S
ci. USA (1989) 86:821-824に記載されるようなヘキサ
−ヒスチジンペプチド、またはＨＡタグである。また、
このポリヌクレオチドは5'および3'非コード配列、例え
ば、転写されるが翻訳されない配列、スプライシングお
よびポリアデニル化シグナル、リボソーム結合部位、お
よびｍＲＮＡ安定化配列を含んでいてもよい。

【００２６】さらに好適な具体例は、数個、５〜１０
個、１〜５個、１〜３個、１〜２個、または１個のアミ
ノ酸残基が任意の組合せで置換、欠失または付加されて
いる、表２のヒトKUZポリペプチドのアミノ酸配列（配
列番号２）を含むヒトKUZ変異型をコードするポリヌク
レオチドである。

【００２７】本発明はさらに、前記の配列とハイブリダ
イズするポリヌクレオチドに関する。これに関して、本
発明は特にストリンジェントな条件下で前記のポリヌク
レオチドとハイブリダイズするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書中で用いる「ストリンジェントな条件」と
は、配列間に少なくとも８０％、好ましくは少なくとも
９０％、より好ましくは少なくとも９５％、より一層好
ましくは少なくとも９７〜９９％の同一性があるときだ
けハイブリダイゼーションが起こる条件を指す。

【００２８】配列番号１中に含まれるヌクレオチド配列
またはその断片と同一であるか実質的に同一である本発
明のポリヌクレオチドは、ヒトKUZポリペプチドをコー
ドする全長ｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離するた
めに、また、ヒトKUZ遺伝子との配列類似性が高い他の
遺伝子（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソロ
グ体(ortholog)をコードする遺伝子を含む）のｃＤＮＡ
およびゲノムクローンを単離するために、ｃＤＮＡおよ
びゲノムＤＮＡのハイブリダイゼーションプローブとし
て用いることができる。このようなハイブリダイゼーシ
ョン技法は当業者には公知である。一般的に、これらの
ヌクレオチド配列は対象物のヌクレオチド配列と８０
％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％同一であ
る。プローブはたいてい１５個以上のヌクレオチドを含
み、好ましくは３０個以上を含み、５０個以上のヌクレ
オチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３
０〜５０個の範囲のヌクレオチドを有するものである。

【００２９】一実施態様において、ヒトKUZポリペプチ
ド（ヒト以外の種に由来する相同体およびオーソログ体
を含む）をコードするポリヌクレオチドを得ることは、
配列番号１のヌクレオチド配列またはその断片を有する
標識プローブを用いて、ストリンジェントなハイブリダ
イゼーション条件下で適当なライブラリーをスクリーニ
ングし、前記のポリヌクレオチド配列を含む全長ｃＤＮ
Ａおよびゲノムクローンを単離する各工程を含んでな
る。かくして、もう一つの態様では、本発明のヒトKUZ
ポリヌクレオチドはさらに、配列番号１のヌクレオチド
配列またはその断片とストリンジェントな条件下でハイ
ブリダイズするヌクレオチド配列を含んでなるヌクレオ
チド配列を含むものである。ヒトKUZポリペプチドも、
前記のハイブリダイゼーション条件により得られたヌク
レオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を含んで
なるポリペプチドを含む。このようなハイブリダイゼー
ション技法は当業者に公知である。ストリンジェントな
ハイブリダイゼーション条件は上で定義したとおりであ
るか、または、50% ホルムアミド、５×SSC (150mM NaC
l, 15mM クエン酸三ナトリウム) 、50mMリン酸ナトリウ
ム (pH7.6)、５×Denhardt溶液、10% デキストラン硫酸
および20μg/mlの変性し剪断したサケ精子ＤＮＡを含有
する溶液中で４２℃で一夜インキュベートし、次いでフ
ィルターを 0.1×SSC 中約６５℃で洗浄する条件であ
る。

【００３０】本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドは、動物およびヒトの疾病に対する治療薬および診
断薬を探索するための研究用の試薬および材料として利
用することができる。

【００３１】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチドを含有するベ
クター、このベクターにより遺伝子操作された宿主細
胞、および組換え法による本発明のポリペプチドの生産
に関する。本発明のＤＮＡ構築物から誘導されたＲＮＡ
を用いてこの種のタンパク質を生産するための無細胞翻
訳系も使用することができる。

【００３２】組換え体生産に関しては、本発明のポリヌ
クレオチドの発現系またはその一部を組み入れるため
に、宿主細胞が遺伝子操作される。宿主細胞へのポリヌ
クレオチドの導入は、Davis ら, BASIC METHODS IN MOL
ECULAR BIOLOGY (1986) およびSambrook ら, MOLECULAR
CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2nd Ed., Cold Sprin
g Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.
Y. (1989) などの多くの標準的な実験室マニュアルに記
載される方法、例えば、リン酸カルシウムトランスフェ
クション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェク
ション、トランスベクション(transvection)、マイクロ
インジェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェク
ション、エレクトロポレーション、形質導入、スクレー
プローディング(scrape loading)、弾丸導入(ballistic
introduction)または感染により行うことができる。

【００３３】適当な宿主の代表的な例として、細菌細胞
（例：ストレプトコッカス、スタフィロコッカス、大腸
菌、ストレプトミセス、枯草菌）、真菌細胞（例：酵
母、アスペルギルス）、昆虫細胞（例：ドロソフィラＳ
２、スポドプテラＳｆ９）、動物細胞（例：ＣＨＯ、Ｃ
ＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ 127、３Ｔ３、ＢＨＫ、ＨＥＫ 29
3、Bowes メラノーマ細胞）および植物細胞が挙げられ
る。

【００３４】多種多様な発現系を使用することができ
る。こうした発現系として、特に、染色体、エピソーム
およびウイルス由来の系、例えば、細菌プラスミド由
来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵
母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エ
レメント由来、ウイルス（例：バキュロウイルス、ＳＶ
４０のようなパポバウイルス、ワクシニアウイルス、ア
デノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルス、レ
トロウイルス）由来のベクター、およびこれらの組合せ
に由来するベクター、例えば、コスミドやファージミド
のようなプラスミドとバクテリオファージの遺伝的要素
に由来するものがある。この発現系は発現を起こさせる
だけでなく発現を調節する制御配列を含んでいてもよ
い。一般的に、宿主内でのポリペプチドの産生のために
ポリヌクレオチドを維持し、増やし、発現するのに適し
た系またはベクターはどれも使用することができる。Sa
mbrookら, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL
(前掲) に記載されるような、日常的に用いられる公知
の技法のいずれかにより、適当なヌクレオチド配列を発
現系に挿入することができる。

【００３５】翻訳されたタンパク質を小胞体の内腔に、
細胞周辺腔に、または細胞外の環境に分泌させるため
に、適当な分泌シグナルを目的のポリペプチドに組み込
むことができる。これらのシグナルは目的のポリペプチ
ドに対して内因性であっても、異種シグナルであっても
よい。

【００３６】スクリーニングアッセイで使用するためヒ
トKUZポリペプチドを発現させようとする場合、そのポ
リペプチドを細胞の表面に産生させることが好適であ
る。この場合は、スクリーニングアッセイでの使用に先
立って細胞を回収する。ヒトKUZポリペプチドが培地に
分泌される場合は、そのポリペプチドを回収し精製する
ために培地を回収する。細胞内に産生される場合は、そ
の細胞をまず溶解し、その後にポリペプチドを回収する
必要がある。

【００３７】組換え細胞培養物からヒトKUZポリペプチ
ドを回収し精製するには、硫酸アンモニウムまたはエタ
ノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロ
マトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィ
ー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマ
トグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め
た公知の方法を用いることができる。最も好ましくは、
高速液体クロマトグラフィーが精製に用いられる。ポリ
ペプチドが単離および／または精製中に変性されるとき
は、タンパク質を再生させるための公知の技法を用い
て、活性のあるコンフォメーションを復元することが可
能である。

【００３８】診断アッセイ 本発明はまた、診断薬としてのヒトKUZポリヌクレオチ
ドの使用に関する。機能障害と関連したヒトKUZ遺伝子
の変異型の検出は、ヒトKUZの過少発現、過剰発現また
は変化した発現により生ずる疾病またはその罹病性の診
断に追加しうる、またはその診断を下しうる診断用ツー
ルを提供するだろう。ヒトKUZ遺伝子に変異がある個体
を、さまざまな技法によりＤＮＡレベルで見つけ出すこ
とができる。

【００３９】診断用の核酸は、被験者の細胞、例えば血
液、尿、唾液、組織の生検または剖検材料から得ること
ができる。検出のためにゲノムＤＮＡを直接使用して
も、分析前にＰＣＲまたは他の増幅法を使って酵素的に
増幅してもよい。同様の方法でＲＮＡまたはｃＤＮＡを
使用することもできる。欠失および挿入変異は、正常な
遺伝子型と比較したときの増幅産物のサイズの変化によ
り検出できる。点突然変異は増幅ＤＮＡを標識ヒトKUZ
ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせることで同定で
きる。完全にマッチした配列とミスマッチの二重鎖とは
ＲＮアーゼ消化により、または融解温度の差異により区
別できる。また、ＤＮＡ配列の差異は、変性剤を用いる
もしくは用いないゲルでのＤＮＡ断片の電気泳動の移動
度の変化により、または直接ＤＮＡ配列決定によっても
検出できる（例えば、Myers ら, Science (1985) 230:1
242 を参照のこと）。特定位置での配列変化はヌクレア
ーゼプロテクションアッセイ（例えば、ＲＮアーゼおよ
びＳ１プロテクション）または化学的開裂法によっても
確認できる（Cottonら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1
985) 85:4397-4401を参照のこと）。別の実施態様で
は、例えば、遺伝子変異の効率のよいスクリーニングを
行うため、ヒトKUZヌクレオチド配列またはその断片を
含むオリゴヌクレオチドプローブのアレイを構築するこ
とができる。アレイ技法は公知で、一般的な適用可能性
を有し、遺伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変異性を
含めた分子遺伝学のさまざまな問題を解きあかすために
用いられている（例えば、M. Chee ら, Science, Vol.2
74, pp.610-613 (1996) を参照のこと）。

【００４０】診断アッセイは、前記の方法によりヒトKU
Z遺伝子の変異を検出することで、炎症、神経変性、ア
レルギー性疾患、または基質サイトカインもしくは受容
体の脱調節を伴う他の疾患への罹りやすさを診断または
判定する方法を提供する。

【００４１】さらに、被験者から得られたサンプルから
ヒトKUZポリペプチドまたはヒトKUZｍＲＮＡのレベルの
異常な低下または増加を測定する方法により、炎症、神
経変性、アレルギー性疾患、または基質サイトカインも
しくは受容体の脱調節を伴う他の疾患の診断を下すこと
ができる。発現の低下または増加は、当技術分野で公知
のポリヌクレオチド定量法のいずれか、例えばＰＣＲ、
ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼプロテクション、ノーザンブ
ロット、その他のハイブリダイゼーション法によりＲＮ
Ａレベルで測定することができる。宿主から得られたサ
ンプル中のヒトKUZポリペプチドのようなタンパク質の
レベルを測定するためのアッセイ法は当業者によく知ら
れている。こうしたアッセイ法として、ラジオイムノア
ッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタンブロット分析、
ＥＬＩＳＡアッセイなどがある。

【００４２】かくして、もう一つの態様において、本発
明は、疾病、特に、炎症、神経変性、アレルギー性疾
患、または基質サイトカインもしくは受容体の脱調節を
伴う他の疾患またはこのような疾病への罹りやすさを診
断するためのキットに関し、このキットは、(a) ヒトKU
Zポリヌクレオチド（好ましくは、配列番号１のヌクレ
オチド配列）もしくはその断片、(b) (a) のヌクレオチ
ド配列に相補的なヌクレオチド配列、(c) ヒトKUZポリ
ペプチド（好ましくは、配列番号２のポリペプチド）も
しくはその断片、または(d) ヒトKUZポリペプチド（好
ましくは、配列番号２のポリペプチド）に対する抗体、
を含んでなる。このようなキットにおいて、(a) 、(b)
、(c) または (d)が実質的な構成成分であることが理
解されよう。

【００４３】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列はまた、染色体の同定にも有
用である。この配列は個々のヒト染色体上の特定の位置
を標的指向し、その特定位置とハイブリダイズすること
ができる。本発明に従って関連配列の染色体地図を作成
することは、これらの配列と遺伝子関連疾患とを相関さ
せる上で重要な第一段階である。ひとたび配列が正確な
染色体位置にマッピングされたら、その染色体上のその
配列の物理的位置を遺伝地図データと相関させることが
できる。この種のデータは、例えば、V. McKusick, Men
delian Inheritance in Man (Johns Hopkins Universit
yWelch Medical Library からオンラインで入手可能)
中に見いだせる。その後、同一の染色体領域にマッピン
グされた遺伝子と疾患との関係を連鎖分析（物理的に隣
接した遺伝子の共遺伝）により同定する。

【００４４】患者と正常個体とのｃＤＮＡまたはゲノム
配列の差異も調べることができる。患者の一部または全
部に変異が観察されるが、どの正常個体にも観察されな
い場合は、その変異が疾病の原因である可能性がある。

【００４５】抗体 本発明のポリペプチドまたはその断片もしくは類似体、
またはそれらを発現する細胞は、ヒトKUZポリペプチド
に免疫特異的な抗体を産生するための免疫原としても使
用することができる。「免疫特異的」とは、その抗体が
従来技術における他の関連ポリペプチドに対するその親
和性よりも本発明のポリペプチドに対して実質的に高い
親和性を有することを意味する。

【００４６】ヒトKUZポリペプチドに対する抗体は、慣
用のプロトコールを用いて、動物（好ましくはヒト以
外）に該ポリペプチドまたはエピトープを含む断片、類
似体もしくは細胞を投与することにより得られる。モノ
クローナル抗体の調製には、連続細胞系の培養物により
産生される抗体をもたらす任意の技法を用いることがで
きる。例を挙げると、ハイブリドーマ技法 (Kohler, G.
およびMilstein, C., Nature (1975) 256:495-497)、ト
リオーマ技法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法 (Kozbor
ら, Immunology Today (1983) 4:72) およびＥＢＶ−ハ
イブリドーマ技法(Coleら, MONOCLONAL ANTIBODIES AND
CANCER THERAPY, pp.77-96, Alan R. Liss, Inc., 198
5) などがある。

【００４７】本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体
をつくるために、一本鎖抗体の調製法（米国特許第4,94
6,778 号）を適応させることができる。また、ヒト化抗
体を発現させるために、トランスジェニックマウスまた
は他の哺乳動物を含む他の生物を利用することができ
る。前記の抗体を用いて、そのポリペプチドを発現する
クローンを単離・同定したり、アフィニティークロマト
グラフィーでそのポリペプチドを精製することもでき
る。ヒトKUZポリペプチドに対する抗体は、とりわけ、
炎症、神経変性、アレルギー性疾患、または基質サイト
カインもしくは受容体の脱調節を伴う他の疾患の治療に
使用できる可能性がある。

【００４８】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物において免疫学的応答を
引き出す方法に関し、この方法は、特に炎症、神経変
性、アレルギー性疾患、または基質サイトカインもしく
は受容体の脱調節を伴う他の疾患から前記動物を防御す
るための抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生ずるの
に十分なヒトKUZポリペプチドまたはその断片を哺乳動
物に接種することを含んでなる。本発明のさらに別の態
様は、哺乳動物を疾病から防御する抗体を産生させるよ
うな免疫学的応答を引き出すために、in vivo でヒトKU
Zポリヌクレオチドの発現を指令するベクターを介して
ヒトKUZポリペプチドを供給することを含んでなる、哺
乳動物において免疫学的応答を引き出す方法に関する。

【００４９】本発明の更なる態様は、哺乳動物宿主に導
入したとき、その哺乳動物においてヒトKUZポリペプチ
ドに対する免疫学的応答を引き出す免疫学的／ワクチン
製剤（組成物）に関し、この組成物はヒトKUZポリペプ
チドまたはヒトKUZ遺伝子を含有する。ワクチン製剤は
適当な担体をさらに含んでいてもよい。ヒトKUZポリペ
プチドは胃の中で分解されうるので、非経口的（皮下、
筋肉内、静脈内、皮内等への注射を含む）に投与するこ
とが好ましい。非経口投与に適した製剤としては、酸化
防止剤、緩衝液、静菌剤およびこの製剤を受容者の血液
と等張にする溶質を含みうる水性および非水性の無菌注
射液、並びに懸濁化剤または増粘剤を含みうる水性およ
び非水性の無菌懸濁液がある。こうした製剤は１回量容
器または数回量容器（例えば、密閉アンプルおよびバイ
アル）で提供することができ、また、使用直前に無菌の
液状担体を添加するだけでよい凍結乾燥状態で保管する
こともできる。ワクチン製剤はこの製剤の免疫原性を増
強するためのアジュバント系、例えば水中油型のアジュ
バント系や当技術分野で公知の他のアジュバント系を含
んでいてもよい。投与量はワクチンの比活性で変化し、
ルーチンな実験操作により簡単に決定できる。

【００５０】スクリーニングアッセイ 本発明のヒトKUZポリペプチドは、このポリペプチドを
活性化する化合物（アゴニスト）またはその活性を阻害
する化合物（アンタゴニスト、または阻害剤ともいう）
のスクリーニング法において使用することができる。こ
うして、本発明のポリペプチドは、例えば、細胞、無細
胞調製物、化学物質ライブラリーおよび天然産物の混合
物からアゴニストまたはアンタゴニストを評価し同定す
るためにも用いられる。これらのアゴニストまたはアン
タゴニストは、本発明のポリペプチドの、場合によっ
て、天然のまたは修飾された基質、リガンド、受容体、
酵素などであってよく、また、本発明のポリペプチドの
構造的または機能的な模擬物であってもよい（Coligan
ら, Current Protocols in Immunology 1(2): Chapter
5 (1991)を参照のこと）。

【００５１】ヒトKUZポリペプチドは多くの病理を含め
て多数の生物学的機能に関与している。したがって、一
方ではヒトKUZポリペプチドを刺激し、他方ではヒトKUZ
ポリペプチドの機能を阻害し得る化合物および薬物を見
つけ出すことが望まれる。一般的に、アゴニストは炎
症、神経変性、アレルギー性疾患、または基質サイトカ
インもしくは受容体の脱調節を伴う他の疾患のような症
状の治療および予防目的で用いられる。アンタゴニスト
は炎症、神経変性、アレルギー性疾患、または基質サイ
トカインもしくは受容体の脱調節を伴う他の疾患のよう
な症状のさまざまな治療および予防目的で使用しうる。

【００５２】一般に、こうしたスクリーニング法はヒト
KUZポリペプチドを発現する適当な細胞、またはヒトKUZ
ポリペプチドに応答する適当な細胞を用いるものであ
る。この種の細胞には哺乳動物、酵母、ショウジョウバ
エ由来の細胞または大腸菌細胞が含まれる。次いで、ヒ
トKUZポリペプチドを発現する細胞（もしくは発現され
たポリペプチドを含む細胞膜）またはヒトKUZポリペプ
チドに応答する細胞を試験化合物と接触させて、その結
合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。候
補化合物と接触させた細胞の能力を、接触させなかった
同一細胞とヒトKUZ活性に関して比較する。酵素活性ま
たは活性の阻害は、プロテアーゼについての標準的な技
術のいずれかを使用して測定可能で、例えば、こうした
技術として、タンパク質の配列をベースとした蛍光消滅
基質、ビオチン化および放射性標識ペプチドを使用する
シンチレーション近接アッセイ、産物タンパク質に対す
るウェスタンブロットまたはELISAがある。

【００５３】これらのアッセイでは候補化合物の結合を
簡単に試験することができ、そこでは候補化合物と直接
または間接に結合された標識により、または標識した競
合物質との競合を用いるアッセイにより、ヒトKUZポリ
ペプチドを担持する細胞への付着が検出される。さら
に、これらのアッセイでは、ヒトKUZポリペプチドを担
持する細胞に適した検出系を用いて、候補化合物がヒト
KUZポリペプチドの活性化により生ずるシグナルを結果
的にもたらすか否かを試験することができる。一般的
に、活性化の阻害剤は既知のアゴニストの存在下でアッ
セイされ、そして候補化合物の存在がアゴニストによる
活性化に与える影響が調べられる。

【００５４】さらに、これらのアッセイは、候補化合物
とヒトKUZポリペプチドを含む溶液とを混ぜ合わせて混
合物をつくり、この混合物中のヒトKUZ活性を測定し、
そしてこの混合物のヒトKUZ活性を標準と比較する各ス
テップを単に含むだけでよい。

【００５５】また、ヒトKUZのｃＤＮＡ、タンパク質ま
たはこのタンパク質に対する抗体を用いて、細胞内での
ヒトKUZｍＲＮＡまたはタンパク質の生産に及ぼす添加
化合物の作用を検出するためのアッセイを組み立てるこ
とができる。例えば、当技術分野で公知の標準方法によ
りモノクローナルまたはポリクローナル抗体を用いて、
ヒトKUZタンパク質の分泌レベルまたは細胞結合レベル
を測定するためのＥＬＩＳＡを構築することができ、こ
れは適切に操作された細胞または組織からのヒトKUZの
生産を抑制または増強する物質（それぞれアンタゴニス
トまたはアゴニストともいう）の探索に用いることがで
きる。

【００５６】膜結合受容体または可溶性受容体が存在す
るのであれば、当技術分野で公知の標準的な受容体結合
法によりこの種の受容体を同定するためにヒトKUZタン
パク質を用いることができる。こうした受容体結合法に
は、限定するものではないが、リガンド結合および架橋
アッセイがあり、このアッセイでは、ヒトKUZを放射性
アイソトープ（例：¹²⁵I）で標識するか、化学的に修飾
（例：ビオチン化）するか、または検出や精製に適した
ペプチド配列に融合させ、そして推定上の受容体源（細
胞、細胞膜、細胞上清、組織抽出物、体液など）とイン
キュベートする。その他の方法としては、表面プラズモ
ン共鳴および分光学のような生物物理的方法がある。受
容体の精製およびクローニングに用いることに加えて、
これらの結合アッセイは、もし存在するのであれば、ヒ
トKUZのその受容体への結合と競合するヒトKUZのアゴニ
ストまたはアンタゴニストを同定するために用いること
もできる。スクリーニングアッセイを行うための標準的
な方法は当技術分野でよく理解されている。

【００５７】ヒトKUZポリペプチドの潜在的なアンタゴ
ニストの例としては、抗体、ある場合には、ヒトKUZポ
リペプチドのリガンド、基質、受容体、酵素などと密接
な関係があるオリゴヌクレオチドもしくはタンパク質
（例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの断
片）、または本発明のポリペプチドと結合するが応答を
誘導しない（それゆえポリペプチドの活性を妨げる）小
分子などがある。

【００５８】かくして、他の態様において、本発明は、
ヒトKUZポリペプチドのアゴニスト、アンタゴニスト、
リガンド、受容体、基質、酵素など、またはヒトKUZポ
リペプチドの生産を低下または増加させる化合物を同定
するためのスクリーニングキットに関し、このキット
は、 (a) ヒトKUZポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド） (b) ヒトKUZポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）を発現する組換え細胞、 (c) ヒトKUZポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）を発現する細胞膜、または (d) ヒトKUZポリペプチド（好ましくは、配列番号２の
ポリペプチド）に対する抗体、を含んでなる。このよう
なキットにおいて、(a) 、(b) 、(c) または (d)が実質
的な構成成分であることが理解されよう。

【００５９】予防および治療法 本発明は、ヒトKUZポリペプチド活性の過剰量と不足量
のどちらにも関係した炎症、神経変性、アレルギー性疾
患、または基質サイトカインもしくは受容体の脱調節を
伴う他の疾患などの異常な状態の治療法を提供する。ヒ
トKUZポリペプチドの活性が過剰である場合は、いくつ
かのアプローチが利用可能である。一つのアプローチ
は、例えば、リガンド、基質、受容体、酵素などの結合
をブロックすることにより、または第２のシグナルを抑
制することで異常な状態を軽減することにより、ヒトKU
Zポリペプチドの機能を阻害するのに有効な量で、前記
の阻害剤化合物（アンタゴニスト）を製剤学上許容され
る担体とともに患者に投与することを含んでなる。もう
一つのアプローチでは、リガンド、基質、酵素、受容体
などと結合する能力がまだある可溶性形態のヒトKUZポ
リペプチドを、内因性のヒトKUZポリペプチドとの競合
状態で投与する。このような競合剤の典型的な例はヒト
KUZポリペプチドの断片である。

【００６０】さらに別のアプローチでは、発現阻止法を
使って内因性ヒトKUZポリペプチドをコードする遺伝子
の発現を抑制することができる。こうした公知技術は、
体内で生成されるか別個に投与されるアンチセンス配列
の使用を必要とする。例えば、Oligodeoxynucleotides
as Antisense Inhibitors of Gene Expression, CRCPre
ss, Boca Raton, FL (1988)中のO'Connor, J Neurochem
(1991) 56:560 を参照のこと。あるいはまた、この遺
伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを
供給することもできる。例えば、Lee ら, Nucleic Acid
s Res (1979) 6:3073; Cooney ら, Science (1988) 24
1:456; Dervanら, Science (1991) 251:1360 を参照の
こと。これらのオリゴマーはそれ自体を投与することも
できるし、関連オリゴマーをin vivo で発現させること
もできる。

【００６１】ヒトKUZおよびその活性の過少発現に関係
した異常な状態を治療する場合も、いくつかのアプロー
チを取ることができる。一つのアプローチは、治療上有
効な量のヒトKUZポリペプチドを活性化する化合物（す
なわち、前記のアゴニスト）を製剤学上許容される担体
とともに患者に投与して、異常な状態を緩和することを
含んでなる。別法として、患者の関連細胞においてヒト
KUZを内因的に産生させるために遺伝子治療を用いるこ
とができる。例えば、上で述べたような複製欠損レトロ
ウイルスベクターによる発現のために本発明のポリヌク
レオチドを遺伝子操作する。次にレトロウイルス発現構
築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮ
Ａを含有するレトロウイルスプラスミドベクターで形質
導入されたパッケージング細胞に導入する。その結果、
パッケージング細胞は対象の遺伝子を含有する感染性の
ウイルス粒子を産生するようになる。in vivo での細胞
処理およびin vivo でのポリペプチド発現のために、こ
れらの産生細胞を患者に投与する。遺伝子治療の概論に
関しては、Human Molecular Genetics, T Strachanand
A P Read, BIOS Scientific Publishers Ltd (1996) 中
のChapter 20, GeneTherapy and other Molecular Gene
tic-based Therapeutic Approaches(およびその中の引
用文献) を参照のこと。もう一つのアプローチは治療量
のヒトKUZポリペプチドを適当な製剤学上の担体ととも
に投与することである。

【００６２】製剤および投与 可溶性形態のヒトKUZポリペプチドのようなペプチド、
アゴニストおよびアンタゴニストペプチド、または小分
子は適当な製剤学上の担体と組み合わせて製剤化するこ
とができる。このような製剤は治療上有効な量のポリペ
プチドまたは化合物と、製剤学上許容される担体または
賦形剤を含有する。この種の担体としては、食塩水、生
理食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノ
ール、およびこれらの組合せがあるが、これらに限らな
い。製剤は投与様式に適合させるべきであり、これは当
技術分野の技量の範囲内である。本発明はさらに、前記
の本発明組成物の１以上の成分を充填した１以上の容器
を含んでなる医薬用パックおよびキットに関する。本発
明のポリペプチドおよび他の化合物は単独で使用して
も、他の化合物、例えば治療用化合物と一緒に使用して
もよい。

【００６３】医薬組成物を全身投与するときの好ましい
形態は、注入（注射）、典型的には静注である。皮下、
筋肉内または腹腔内のような他の注入経路も使用でき
る。全身投与の別の手段は、胆汁酸塩、フシジン酸、そ
の他の界面活性剤などの浸透剤を用いた経粘膜および経
皮投与である。さらに、腸溶剤またはカプセル剤として
適切に製剤化されているのであれば、経口投与も可能で
ある。これらの化合物は軟膏、ペースト、ゲルなどの剤
形で局所に投与しても、かつ／または局在化させてもよ
い。

【００６４】必要な投与量範囲はペプチドの選択、投与
経路、製剤の性質、患者の状態、そして医師の判断に左
右される。しかし、適当な投与量は患者の体重１kgあた
り0.1 〜100 μg の範囲である。利用可能な化合物が多
種多様であり、それぞれの投与経路の効率も異なるた
め、必要とされる投与量は広範に変動することを予想す
べきである。例えば、経口投与は静注による投与よりも
高い投与量を必要とすることが予想される。こうした投
与量レベルの変動は、当技術分野でよく理解されている
ような、標準的経験的な最適化手順を用いて調整するこ
とができる。

【００６５】治療に用いるポリペプチドは、上述したよ
うな「遺伝子治療」と称する治療法において、患者の体
内で産生させることもできる。例えば、患者由来の細胞
を、ex vivo でポリペプチドをコードするＤＮＡまたは
ＲＮＡのようなポリヌクレオチドにより、例えばレトロ
ウイルスプラスミドベクターを用いて、遺伝子工学的に
操作する。その後、この細胞を患者に導入する。

【００６６】

【実施例】他に詳述した場合を除いて、当業者には公知
で一般的な技術を使用して、以下の実施例を行なった。
これらの実施例は本発明を例示するものであるが、限定
するものではない。

【００６７】実施例１ ウシ・ディスインテグリン・メタロプロテアーゼ遺伝子
のコード領域の５'末端を使用してHGSデータベースを検
索した。ＥＳＴ1759347(プロジェクトID :HSYAG89)がヒ
ト胸腺間質細胞のｃＤＮＡライブラリーから同定され、
このＥＳＴの全挿入物を配列決定したところ、該挿入物
が公表されたヒトKUZ遺伝子(Howard L.ら、Biochem.J.
317(Pt 1),45−50,1996)の欠失5'末端を含有することを
確認した。また、公表された部分ヒトKUZ遺伝子中のヌ
クレオチド160位に存在するがウシ相同体内には存在し
ない153個のヌクレオチド残基からなる内部挿入物は、H
SYAG89には存在していない。したがって、HSYAG89はシ
ョウジョウバエKUZ遺伝子に関連するウシ・ディスイン
テグリン・メタロプロテアーゼのヒト対応物である。次
にApa I、Not I二重消化物を用いてノーザンブロットを
行い、コード領域の3.5 kb断片を得、これをゲル電気泳
動により単離し放射性標識した。この断片を使用して多
組織ブロット(Clontech)上でコード配列を検出した。こ
れらのブロットはヒトKUZをコードするｍＲＮＡの広範
な発現を示し、心臓、脳、膵臓および胸腺で最高の発現
を示した。存在しうる基質は、293細胞または同等の細
胞において該基質を共発現させ、その細胞上清中の産物
タンパク質断片を検出することにより同定できる。

【００６８】実施例２ 全長ｃＤＮＡを得るための方法はいくつかあるが、その
うちの２つを以下に説明する。 １）ｃＤＮＡ末端の高速増幅(Rapid Amplification of
cDNA Ends:RACE)法は５'末端を得るために利用すること
ができる。Frohmanら、Proc.Natl. Acad.Sci.USA 85,89
98-9002(1988)を参照のこと。簡単に述べると、特定の
オリゴヌクレオチドをｍＲＮＡにアニーリングし、これ
によりｃＤＮＡ鎖の合成を開始させる。ＲＮアーゼＨを
用いてｍＲＮＡを破壊した後、ｃＤＮＡの3'末端にポリ
Ｃアンカー配列を付加し、得られた断片をネステッド(n
ested)組のアンチセンスプライマーおよびアンカー配列
プライマーを用いて増幅する。増幅断片は適当なベクタ
ーにクローニングして、制限分析および配列解析にかけ
る。 ２）ポリメラーゼ連鎖反応は、2組のプライマーを用い
るネステッドＰＣＲを連続して行なうことで、ヒトｃＤ
ＮＡライブラリー由来のｃＤＮＡの5'末端を増幅するた
めに使用することができる。1組のアンチセンスプライ
マーは部分ｃＤＮＡの5'末端に特異的であり、もう1組
のプライマーはベクター特異的配列にアニーリングす
る。増幅産物は適当なベクターにクローニングして、制
限分析および配列解析にかける。

【００６９】本明細書中に引用された、特許および特許
出願明細書を含めた全ての刊行物は、あたかも各刊行物
が明確にかつ個々に示されているかのように、その全体
を参考としてここに組み入れるものとする。

【００７０】

【配列表】

SEQUENCE LISTING ＜110＞SmithKline Beecham Corporation ＜120＞Human Disintegrin Metalloprotease Related t
o Drosophila KUZ Gene ＜130＞PA98-257 ＜150＞U.S. Application Serial No.08/920,234 ＜151＞1997-8-25 ＜160＞2 ＜170＞FastSEQ for Windows Version 2.0 ＜210＞ 1 ＜211＞ 3349 ＜212＞ DNA ＜213＞ Homo sapiens ＜400＞1 gtcccggctt cccgtggagg ctccggacca agccccttca gcttctccct ccggatcgat 60 gtgctgctgt taacccgtga ggaggcggcg gcggcggcag cggcagcgga agatggtgtt 120 gctgagagtg ttaattctgc tcctctcctg ggcggcgggg atgggaggtc agtatgggaa 180 tcctttaaat aaatatatca gacattatga aggattatct tacaatgtgg attcattaca 240 ccaaaaacac cagcgtgcca aaagagcagt ctcacatgaa gaccaatttt tacgtctaga 300 tttccatgcc catggaagac atttcaacct acgaatgaag agggacactt cccttttcag 360 tgatgaattt aaagtagaaa catcaaataa agtacttgat tatgatacct ctcatattta 420 cactggacat atttatggtg aagaaggaag ttttagccat gggtctgtta ttgatggaag 480 atttgaagga ttcatccaga ctcgtggtgg cacattttat gttgagccag cagagagata 540 tattaaagac cgaactctgc catttcactc tgtcatttat catgaagatg atattaacta 600 tccccataaa tacggtcctc aggggggctg tgcagatcat tcagtatttg aaagaatgag 660 gaaataccag atgactggtg tagaggaagt aacacagata cctcaagaag aacatgctgc 720 taatggtcca gaacttctga ggaaaaaacg tacaacttca gctgaaaaaa atacttgtca 780 gctttatatt cagactgatc atttgttctt taaatattac ggaacacgag aagctgtgat 840 tgcccagata tccagtcatg ttaaagcgat tgatacaatt taccagacca cagacttctc 900 cggaatccgt aacatcagtt tcatggtgaa acgcataaga atcaatacaa ctgctgatga 960 gaaggaccct acaaatcctt tccgtttccc aaatattggt gtggagaagt ttctggaatt 1020 gaattctgag cagaatcatg atgactactg tttggcctat gtcttcacag accgagattt 1080 tgatgatggc gtacttggtc tggcttgggt tggagcacct tcaggaagct ctggaggaat 1140 atgtgaaaaa agtaaactct attcagatgg taagaagaag tccttaaaca ctggaattat 1200 tactgttcag aactatgggt ctcatgtacc tcccaaagtc tctcacatta cttttgctca 1260 cgaagttgga cataactttg gatccccaca tgattctgga acagagtgca caccaggaga 1320 atctaagaat ttgggtcaaa aagaaaatgg caattacatc atgtatgcaa gagcaacatc 1380 tggggacaaa cttaacaaca ataaattctc actctgtagt attagaaata taagccaagt 1440 tcttgagaag aagagaaaca actgttttgt tgaatctggc caacctattt gtggaaatgg 1500 aatggtagaa caaggtgaag aatgtgattg tggctatagt gaccagtgta aagatgaatg 1560 ctgcttcgat gcaaatcaac cagagggaag aaaatgcaaa ctgaaacctg ggaaacagtg 1620 cagtccaagt caaggtcctt gttgtacagc acagtgtgca ttcaagtcaa agtctgagaa 1680 gtgtcgggat gattcagact gtgcaaggga aggaatatgt aatggcttca cagctctctg 1740 cccagcatct gaccctaaac caaacttcac agactgtaat aggcatacac aagtgtgcat 1800 taatgggcaa tgtgcaggtt ctatctgtga gaaatatggc ttagaggagt gtacgtgtgc 1860 cagttctgat ggcaaagatg ataaagaatt atgccatgta tgctgtatga agaaaatgga 1920 cccatcaact tgtgccagta cagggtctgt gcagtggagt aggcacttca gtggtcgaac 1980 catcaccctg caacctggat ccccttgcaa cgattttaga ggttactgtg atgttttcat 2040 gcggtgcaga ttagtagatg ctgatggtcc tctagctagg cttaaaaaag caatttttag 2100 tccagagctc tatgaaaaca ttgctgaatg gattgtggct cattggtggg cagtattact 2160 tatgggaatt gctctgatca tgctaatggc tggatttatt aagatatgca gtgttcatac 2220 tccaagtagt aatccaaagt tgcctcctcc taaaccactt ccaggcactt taaagaggag 2280 gagacctcca cagcccattc agcaacccca gcgtcagcgg ccccgagaga gttatcaaat 2340 gggacacatg agacgctaac tgcagctttt gccttggttc ttcctagtgc ctacaatggg 2400 aaaacttcac tccaaagaga aacctattaa gtcatcatct ccaaactaaa ccctcacaag 2460 taacagttga agaaaaaatg gcaagagatc atatcctcag accaggtgga attacttaaa 2520 ttttaaagcc tgaaaattcc aatttggggg tgggaggtgg aaaaggaacc caattttctt 2580 atgaacagat atttttaact taatggcaca aagtcttaga atattattat gtgccccgtg 2640 ttccctgttc ttcgttgctg cattttcttc acttgcaggc aaacttggct ctcaataaac 2700 ttttaccaca aattgaaata aatatatttt tttcaactgc caatcaaggg taggaggctc 2760 gaccacctca acattggaga catcacttgc caatgtacat accttgttat atgcagacat 2820 gtatttctta cgtacactgt acttctgtgt gcaattgtaa acagaaattg caatatggat 2880 gtttctttgt attataaaat ttttccgctc ttaattaaaa attactgttt aattgacata 2940 ctcaggataa cagagaatgg tggtattcag tggtccagga ttctgtaatg ctttacacag 3000 gcagttttga aatgaaaatc aatttacctt tctgttacga tggagttggt tttgatactc 3060 attttttctt tatcacatgg ctgctacggg cacaagtgac tatactgaag aacacagtta 3120 agtgttgtgc aaactggaca tagcagcaca tactacttca gagttcatga tgtagatgtc 3180 tggtttctgc ttacgtcttt taaactttct aattcaattc catttttcaa ttaataggtg 3240 aaattttatt catgctttga tagaaattat gtcaatgaaa tgaaaaaaaa aaaaaaaagg 3300 gcggccgctc tagaggatcc ctcgaggggc ccaagcttac gcgtgcatg 3349 ＜210＞ 2 ＜211＞ 748 ＜212＞ PRT ＜213＞ Homo sapiens ＜401＞2 Met Val Leu Leu Arg Val Leu Ile Leu Leu Leu Ser Trp Ala Ala Gly 1 5 10 15 Met Gly Gly Gln Tyr Gly Asn Pro Leu Asn Lys Tyr Ile Arg His Tyr 20 25 30 Glu Gly Leu Ser Tyr Asn Val Asp Ser Leu His Gln Lys His Gln Arg 35 40 45 Ala Lys Arg Ala Val Ser His Glu Asp Gln Phe Leu Arg Leu Asp Phe 50 55 60 His Ala His Gly Arg His Phe Asn Leu Arg Met Lys Arg Asp Thr Ser 65 70 75 80 Leu Phe Ser Asp Glu Phe Lys Val Glu Thr Ser Asn Lys Val Leu Asp 85 90 95 Tyr Asp Thr Ser His Ile Tyr Thr Gly His Ile Tyr Gly Glu Glu Gly 100 105 110 Ser Phe Ser His Gly Ser Val Ile Asp Gly Arg Phe Glu Gly Phe Ile 115 120 125 Gln Thr Arg Gly Gly Thr Phe Tyr Val Glu Pro Ala Glu Arg Tyr Ile 130 135 140 Lys Asp Arg Thr Leu Pro Phe His Ser Val Ile Tyr His Glu Asp Asp 145 150 155 160 Ile Asn Tyr Pro His Lys Tyr Gly Pro Gln Gly Gly Cys Ala Asp His 165 170 175 Ser Val Phe Glu Arg Met Arg Lys Tyr Gln Met Thr Gly Val Glu Glu 180 185 190 Val Thr Gln Ile Pro Gln Glu Glu His Ala Ala Asn Gly Pro Glu Leu 195 200 205 Leu Arg Lys Lys Arg Thr Thr Ser Ala Glu Lys Asn Thr Cys Gln Leu 210 215 220 Tyr Ile Gln Thr Asp His Leu Phe Phe Lys Tyr Tyr Gly Thr Arg Glu 225 230 235 240 Ala Val Ile Ala Gln Ile Ser Ser His Val Lys Ala Ile Asp Thr Ile 245 250 255 Tyr Gln Thr Thr Asp Phe Ser Gly Ile Arg Asn Ile Ser Phe Met Val 260 265 270 Lys Arg Ile Arg Ile Asn Thr Thr Ala Asp Glu Lys Asp Pro Thr Asn 275 280 285 Pro Phe Arg Phe Pro Asn Ile Gly Val Glu Lys Phe Leu Glu Leu Asn 290 295 300 Ser Glu Gln Asn His Asp Asp Tyr Cys Leu Ala Tyr Val Phe Thr Asp 305 310 315 320 Arg Asp Phe Asp Asp Gly Val Leu Gly Leu Ala Trp Val Gly Ala Pro 325 330 335 Ser Gly Ser Ser Gly Gly Ile Cys Glu Lys Ser Lys Leu Tyr Ser Asp 340 345 350 Gly Lys Lys Lys Ser Leu Asn Thr Gly Ile Ile Thr Val Gln Asn Tyr 355 360 365 Gly Ser His Val Pro Pro Lys Val Ser His Ile Thr Phe Ala His Glu 370 375 380 Val Gly His Asn Phe Gly Ser Pro His Asp Ser Gly Thr Glu Cys Thr 385 390 395 400 Pro Gly Glu Ser Lys Asn Leu Gly Gln Lys Glu Asn Gly Asn Tyr Ile 405 410 415 Met Tyr Ala Arg Ala Thr Ser Gly Asp Lys Leu Asn Asn Asn Lys Phe 420 425 430 Ser Leu Cys Ser Ile Arg Asn Ile Ser Gln Val Leu Glu Lys Lys Arg 435 440 445 Asn Asn Cys Phe Val Glu Ser Gly Gln Pro Ile Cys Gly Asn Gly Met 450 455 460 Val Glu Gln Gly Glu Glu Cys Asp Cys Gly Tyr Ser Asp Gln Cys Lys 465 470 475 480 Asp Glu Cys Cys Phe Asp Ala Asn Gln Pro Glu Gly Arg Lys Cys Lys 485 490 495 Leu Lys Pro Gly Lys Gln Cys Ser Pro Ser Gln Gly Pro Cys Cys Thr 500 505 510 Ala Gln Cys Ala Phe Lys Ser Lys Ser Glu Lys Cys Arg Asp Asp Ser 515 520 525 Asp Cys Ala Arg Glu Gly Ile Cys Asn Gly Phe Thr Ala Leu Cys Pro 530 535 540 Ala Ser Asp Pro Lys Pro Asn Phe Thr Asp Cys Asn Arg His Thr Gln 545 550 555 560 Val Cys Ile Asn Gly Gln Cys Ala Gly Ser Ile Cys Glu Lys Tyr Gly 565 570 575 Leu Glu Glu Cys Thr Cys Ala Ser Ser Asp Gly Lys Asp Asp Lys Glu 580 585 590 Leu Cys His Val Cys Cys Met Lys Lys Met Asp Pro Ser Thr Cys Ala 595 600 605 Ser Thr Gly Ser Val Gln Trp Ser Arg His Phe Ser Gly Arg Thr Ile 610 615 620 Thr Leu Gln Pro Gly Ser Pro Cys Asn Asp Phe Arg Gly Tyr Cys Asp 625 630 635 640 Val Phe Met Arg Cys Arg Leu Val Asp Ala Asp Gly Pro Leu Ala Arg 645 650 655 Leu Lys Lys Ala Ile Phe Ser Pro Glu Leu Tyr Glu Asn Ile Ala Glu 660 665 670 Trp Ile Val Ala His Trp Trp Ala Val Leu Leu Met Gly Ile Ala Leu 675 680 685 Ile Met Leu Met Ala Gly Phe Ile Lys Ile Cys Ser Val His Thr Pro 690 695 700 Ser Ser Asn Pro Lys Leu Pro Pro Pro Lys Pro Leu Pro Gly Thr Leu 705 710 715 720 Lys Arg Arg Arg Pro Pro Gln Pro Ile Gln Gln Pro Gln Arg Gln Arg 725 730 735 Pro Arg Glu Ser Tyr Gln Met Gly His Met Arg Arg 740 745

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｔ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｐ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＢＦ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (72)発明者 ジェフリー リチャード ジャクソン アメリカ合衆国 19406 ペンシルバニア 州，カレッジビル，スプルース レーン 134 (72)発明者 ルース ジュディク メイヤー アメリカ合衆国 19087 ペンシルバニア 州，ウェイン，リベイル ロード 110

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のヒトKUZポリペプチドをコ
   ードするヌクレオチド配列と全長において少なくとも８
   ０％同一であり、かつヒトKUZポリペプチドの活性を有
   するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、また
   はこのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド
   配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 前記のポリヌクレオチドが、配列番号２
   のヒトKUZポリペプチドをコードする配列番号１中に含
   まれるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１に記載
   のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 前記のポリヌクレオチドが、その全長に
   おいて配列番号１のヌクレオチド配列と少なくとも８０
   ％同一であるヌクレオチド配列を含んでなる、請求項１
   に記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 配列番号１のポリヌクレオチドである、
   請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 ＤＮＡまたはＲＮＡである、請求項１に
   記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 配列番号２のヒトKUZポリペプチドのア
   ミノ酸配列において１もしくは複数のアミノ酸が付加、
   欠失または置換されており、かつヒトKUZポリペプチド
   の活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド
   配列を含んでなるポリヌクレオチド。
7. 【請求項７】 下記発現系が適合性の宿主細胞内に存在
   するとき配列番号２のポリペプチドと少なくとも９８％
   同一であるアミノ酸配列を含むヒトKUZポリペプチドを
   産生することができる発現系を含んでなるＤＮＡまたは
   ＲＮＡ分子。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の発現系を含有する宿主
   細胞。
9. 【請求項９】 ヒトKUZポリペプチドを産生させるのに
   十分な条件下で請求項８に記載の宿主細胞を培養し、こ
   の培養物から前記ポリペプチドを回収することを含んで
   なる、ヒトKUZポリペプチドの産生方法。
10. 【請求項１０】 宿主細胞が適当な培養条件下でヒトKU
    Zポリペプチドを産生するように、請求項７に記載の発
    現系を用いて宿主細胞を形質転換またはトランスフェク
    ションすることを含んでなる、ヒトKUZポリペプチドを
    産生する細胞の作製方法。
11. 【請求項１１】 全長において配列番号２のアミノ酸配
    列と少なくとも９８％同一であるアミノ酸配列を含んで
    なるヒトKUZポリペプチド。
12. 【請求項１２】 配列番号２のアミノ酸配列を含む、請
    求項１１に記載のポリペプチド。
13. 【請求項１３】 請求項１１に記載のヒトKUZポリペプ
    チドに免疫特異的な抗体。
14. 【請求項１４】 請求項１１に記載のヒトKUZポリペプ
    チドの活性増加または発現増加を必要としている患者を
    治療するための医薬組成物であって、治療に有効な量
    の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアゴニスト、および／ま
    たは (b) 前記ポリペプチド活性のin vivo 生産をもたらす形
    の、配列番号２のヒトKUZポリペプチドをコードするヌ
    クレオチド配列と全長において少なくとも８０％同一で
    あるヌクレオチド配列、または前記ヌクレオチド配列に
    対して相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離され
    たポリヌクレオチド、を含んでなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１１に記載のヒトKUZポリペプ
    チドの活性または発現を抑制する必要がある患者を治療
    するための医薬組成物であって、治療に有効な量の、 (a) 前記ポリペプチドに対するアンタゴニスト、および
    ／または (b) 前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の
    発現を抑制する核酸分子、および／または (c) 前記ポリペプチドのリガンド、基質または受容体に
    関して前記ポリペプチドと競合するポリペプチド、を含
    んでなる医薬組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１１に記載のヒトKUZポリペプ
    チドの発現または活性と関連した被験者の疾病またはそ
    の罹病性の検出方法であって、 (a) 前記被験者のゲノム中にヒトKUZポリペプチドをコ
    ードするヌクレオチド配列の突然変異があるかどうかを
    調べる、および／または (b) 前記被験者から得られたサンプル中のヒトKUZポリ
    ペプチド発現の存在または量を分析する、ことを含んで
    なる方法。
17. 【請求項１７】 請求項１１に記載のヒトKUZポリペプ
    チドを阻害（拮抗）または活性化する化合物の同定方法
    であって、 (a) ヒトKUZポリペプチドを発現している細胞（もしく
    はヒトKUZポリペプチドを発現している細胞膜）または
    ヒトKUZポリペプチドに応答する細胞と候補化合物とを
    接触させ、そして (b) その結合、または機能的応答の刺激もしくは抑制を
    観察するか、または候補化合物と接触させた細胞（また
    は細胞膜）の能力を、接触させなかった同一の細胞と、
    ヒトKUZポリペプチド活性に関して比較する、ことを含
    んでなる方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアゴニスト。
19. 【請求項１９】 請求項１７に記載の方法により同定さ
    れたアンタゴニスト。
20. 【請求項２０】 請求項１０に記載の方法により作製さ
    れた組換え宿主細胞、またはヒトKUZポリペプチドを発
    現しているその膜。