JP2002335982A - 線維芽細胞成長因子−１０ - Google Patents
線維芽細胞成長因子−１０Info
- Publication number
- JP2002335982A JP2002335982A JP2002058893A JP2002058893A JP2002335982A JP 2002335982 A JP2002335982 A JP 2002335982A JP 2002058893 A JP2002058893 A JP 2002058893A JP 2002058893 A JP2002058893 A JP 2002058893A JP 2002335982 A JP2002335982 A JP 2002335982A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- fgf
- polypeptide
- sequence
- dna
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090001047 Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 title abstract description 76
- 102000004864 Fibroblast growth factor 10 Human genes 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 122
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 118
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 116
- 102100028412 Fibroblast growth factor 10 Human genes 0.000 abstract description 70
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 53
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 33
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 abstract description 8
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 abstract description 5
- 101000917237 Homo sapiens Fibroblast growth factor 10 Proteins 0.000 abstract description 4
- 208000028389 Nerve injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008764 nerve damage Effects 0.000 abstract description 4
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 abstract description 3
- 102000057243 human FGF10 Human genes 0.000 abstract description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 210000003644 lens cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract description 2
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 58
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 46
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 46
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 46
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 39
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 39
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 32
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 23
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 21
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 18
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 17
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 15
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 14
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 12
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 12
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 10
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 10
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 10
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 10
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 9
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 9
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 9
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 8
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 7
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 5
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 4
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 4
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100031000 Hepatoma-derived growth factor Human genes 0.000 description 3
- 101001083798 Homo sapiens Hepatoma-derived growth factor Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 3
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 3
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 2
- 108090000385 Fibroblast growth factor 7 Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 101001052035 Homo sapiens Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000879758 Homo sapiens Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 2
- 102100037330 Sjoegren syndrome nuclear autoantigen 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000007894 restriction fragment length polymorphism technique Methods 0.000 description 2
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 102220240796 rs553605556 Human genes 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 2
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 101100325793 Arabidopsis thaliana BCA2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100238293 Arabidopsis thaliana MOR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 101001051969 Bos taurus Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100032566 Carbonic anhydrase-related protein 10 Human genes 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 101000686777 Escherichia phage T7 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 108091060211 Expressed sequence tag Proteins 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 102000003972 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100028071 Fibroblast growth factor 7 Human genes 0.000 description 1
- 108090000367 Fibroblast growth factor 9 Proteins 0.000 description 1
- 102100037665 Fibroblast growth factor 9 Human genes 0.000 description 1
- 241000700662 Fowlpox virus Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010078321 Guanylate Cyclase Proteins 0.000 description 1
- 102000014469 Guanylate cyclase Human genes 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108010093488 His-His-His-His-His-His Proteins 0.000 description 1
- 101000867836 Homo sapiens Carbonic anhydrase-related protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000969137 Mus musculus Metallothionein-1 Proteins 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 206010036346 Posterior capsule opacification Diseases 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710141795 Ribonuclease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122208 Ribonuclease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102100037968 Ribonuclease inhibitor Human genes 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002556 adrenal cortex cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000000399 corneal endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011243 crosslinked material Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150056310 gem1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 1
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 101150109249 lacI gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000001542 lens epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000001020 neural plate Anatomy 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 238000009595 pap smear Methods 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000002379 periodontal ligament Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 150000003906 phosphoinositides Chemical class 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 210000004509 vascular smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/50—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 ヒトＦＧＦ−１０ポリペプチドおよびそのよ
うなＦＧＦ−１０ポリペプチドをコードするＤＮＡ（Ｒ
ＮＡ）を開示する 【解決手段】 組換え技術によるそのようなポリペプチ
ドの製造方法も提供する。再血管新生を刺激するため、
傷を治療し、神経損傷を防止するためにそのようなポリ
ペプチドを用いる方法も開示する。そのようなポリペプ
チドに対するアンタゴニスト、および異常な細胞増殖、
血管過多の病気、上皮水晶体細胞増殖を防止するための
治療剤としてのそれらの使用も開示する。宿主からの試
料中のＦＧＦ−１０をコードする配列における変異、お
よびＦＧＦ−１０タンパク質の濃度の変化を検出する診
断方法も開示する。
うなＦＧＦ−１０ポリペプチドをコードするＤＮＡ（Ｒ
ＮＡ）を開示する 【解決手段】 組換え技術によるそのようなポリペプチ
ドの製造方法も提供する。再血管新生を刺激するため、
傷を治療し、神経損傷を防止するためにそのようなポリ
ペプチドを用いる方法も開示する。そのようなポリペプ
チドに対するアンタゴニスト、および異常な細胞増殖、
血管過多の病気、上皮水晶体細胞増殖を防止するための
治療剤としてのそれらの使用も開示する。宿主からの試
料中のＦＧＦ−１０をコードする配列における変異、お
よびＦＧＦ−１０タンパク質の濃度の変化を検出する診
断方法も開示する。
Description
【０００１】本発明は、新しく同定されたポリヌクレオ
チド、そのようなポリヌクレオチドをコードするポリペ
プチド、そのようなポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、並びにそのようなポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの製造に関する。詳しくは、本発明のポリペ
プチドは、線維芽細胞成長因子−１０／ヘパリン結合性
成長因子−１０(以下ＦＧＦ１０と呼ぶ)である。本発明
は、そのようなポリペプチドの作用を阻害することにも
関する。
チド、そのようなポリヌクレオチドをコードするポリペ
プチド、そのようなポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドの使用、並びにそのようなポリヌクレオチドおよびポ
リペプチドの製造に関する。詳しくは、本発明のポリペ
プチドは、線維芽細胞成長因子−１０／ヘパリン結合性
成長因子−１０(以下ＦＧＦ１０と呼ぶ)である。本発明
は、そのようなポリペプチドの作用を阻害することにも
関する。
【０００２】線維芽細胞成長因子は、ヘパリンに結合す
るのが特徴のタンパク質のファミリーであり、それ故、
ヘパリン結合成長因子(ＨＢＧＦ)とも呼ばれる。これら
のタンパク質の異なったメンバーの発現が様々な組織で
見出され、特別な時間的および空間的制御下にある。こ
れらのタンパク質は、線維芽細胞、角膜および血管の内
皮細胞、果粒球、副腎皮質細胞、軟骨細胞、筋芽細胞、
血管平滑筋細胞、水晶体上皮細胞、メラニン形成細胞、
ケラチノサイト、乏突起膠細胞、神経膠星状細胞、骨芽
細胞、造血細胞を含む、中胚葉、外胚葉、内胚様起源の
様々な細胞に対する強力な分裂促進物質である。
るのが特徴のタンパク質のファミリーであり、それ故、
ヘパリン結合成長因子(ＨＢＧＦ)とも呼ばれる。これら
のタンパク質の異なったメンバーの発現が様々な組織で
見出され、特別な時間的および空間的制御下にある。こ
れらのタンパク質は、線維芽細胞、角膜および血管の内
皮細胞、果粒球、副腎皮質細胞、軟骨細胞、筋芽細胞、
血管平滑筋細胞、水晶体上皮細胞、メラニン形成細胞、
ケラチノサイト、乏突起膠細胞、神経膠星状細胞、骨芽
細胞、造血細胞を含む、中胚葉、外胚葉、内胚様起源の
様々な細胞に対する強力な分裂促進物質である。
【０００３】各メンバーは他のメンバーとオーバーラッ
プした機能を有し、独自の機能スペクトルをも有す。血
管内皮細胞の増殖を刺激する能力の外、ＦＧＦ−１およ
び２の両方は内皮細胞に対して走化性であり、ＦＧＦ−
２は内皮細胞が基礎膜に貫入するのを可能にする。これ
らの性質と一致して、ＦＧＦ−１および２の両方は血管
形成を刺激する能力を有する。これらの成長因子の他の
重要な特徴は、傷の修復を促進する能力である。ＦＧＦ
ファミリーの多くの他のメンバーは、血管形成の促進お
よび傷の修復等の、ＦＧＦ−１および２と類似の活性を
有する。ＦＧＦ遺伝子ファミリーのいくつかのメンバー
は、中胚葉形成を誘導して、神経細胞、脂肪細胞、およ
び滑核筋細胞の分化を調節することが示された。
プした機能を有し、独自の機能スペクトルをも有す。血
管内皮細胞の増殖を刺激する能力の外、ＦＧＦ−１およ
び２の両方は内皮細胞に対して走化性であり、ＦＧＦ−
２は内皮細胞が基礎膜に貫入するのを可能にする。これ
らの性質と一致して、ＦＧＦ−１および２の両方は血管
形成を刺激する能力を有する。これらの成長因子の他の
重要な特徴は、傷の修復を促進する能力である。ＦＧＦ
ファミリーの多くの他のメンバーは、血管形成の促進お
よび傷の修復等の、ＦＧＦ−１および２と類似の活性を
有する。ＦＧＦ遺伝子ファミリーのいくつかのメンバー
は、中胚葉形成を誘導して、神経細胞、脂肪細胞、およ
び滑核筋細胞の分化を調節することが示された。
【０００４】正常な組織におけるこれ等の生物学的活性
の外に、ＦＧＦタンパク質は、腫瘍血管化を促進するこ
とにより、およびそれらの発現が脱制御される場合は形
質転換タンパク質として、カルチノーマおよびサルコー
マにおける腫瘍形成の促進に関係している。
の外に、ＦＧＦタンパク質は、腫瘍血管化を促進するこ
とにより、およびそれらの発現が脱制御される場合は形
質転換タンパク質として、カルチノーマおよびサルコー
マにおける腫瘍形成の促進に関係している。
【０００５】ＦＧＦファミリーは現在のところ８つの構
造的に関連したポリペプチドよりなる。各々の遺伝子は
クローン化され、配列決定されている。そのメンバーの
うちの２つ、ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２は多くの名称
の下にキャラクタライズされているが、それぞれ酸性お
よび塩基性線維芽細胞成長因子と呼ばれることが最も多
い。正常な遺伝子産物は多くの中胚葉および神経外胚葉
由来細胞の一般的な増殖能力に影響を与える。それらは
インビボで血管形成を誘導することができ、初期発達に
重要な役割を果たすかもしれない（Ｂurgess, Ｗ.Ｈ.お
よびＭaciag,Ｔ.、Ａnnu．Ｒev．Ｂiochem.、５８:５７
５−６０６(１９８９))。
造的に関連したポリペプチドよりなる。各々の遺伝子は
クローン化され、配列決定されている。そのメンバーの
うちの２つ、ＦＧＦ−１およびＦＧＦ−２は多くの名称
の下にキャラクタライズされているが、それぞれ酸性お
よび塩基性線維芽細胞成長因子と呼ばれることが最も多
い。正常な遺伝子産物は多くの中胚葉および神経外胚葉
由来細胞の一般的な増殖能力に影響を与える。それらは
インビボで血管形成を誘導することができ、初期発達に
重要な役割を果たすかもしれない（Ｂurgess, Ｗ.Ｈ.お
よびＭaciag,Ｔ.、Ａnnu．Ｒev．Ｂiochem.、５８:５７
５−６０６(１９８９))。
【０００６】分泌型のＦＧＦ−１をコードする真核生物
発現ベクターがブタの動脈に遺伝子導入により導入され
た。このモデルはインビボでの動脈壁における遺伝子機
能をはっきりと決める。ＦＧＦ−１の発現は、遺伝子導
入の２１日後にブタの動脈の内膜肥厚を誘導した(Ｎabe
l, Ｅ.Ｇ.等、Ｎature、３６２:８４４−６(１９９
３))。塩基性線維芽細胞成長因子は腫瘍血管形成におけ
るその役割とは独立にグリオーム生長および進行を制御
すること、および塩基性線維芽細胞成長因子の放出また
は分泌にはこれらの作用が必要かも知れないことが更に
示された(Ｍorrison, Ｒ.Ｓ.等、Ｊ．Ｎeurosci．Ｒe
s．、３４:５０２−９(１９９３))。
発現ベクターがブタの動脈に遺伝子導入により導入され
た。このモデルはインビボでの動脈壁における遺伝子機
能をはっきりと決める。ＦＧＦ−１の発現は、遺伝子導
入の２１日後にブタの動脈の内膜肥厚を誘導した(Ｎabe
l, Ｅ.Ｇ.等、Ｎature、３６２:８４４−６(１９９
３))。塩基性線維芽細胞成長因子は腫瘍血管形成におけ
るその役割とは独立にグリオーム生長および進行を制御
すること、および塩基性線維芽細胞成長因子の放出また
は分泌にはこれらの作用が必要かも知れないことが更に
示された(Ｍorrison, Ｒ.Ｓ.等、Ｊ．Ｎeurosci．Ｒe
s．、３４:５０２−９(１９９３))。
【０００７】塩基性ＦＧＦ等の線維芽細胞成長因子はイ
ンビトロでカポシ肉腫細胞の成長に更に関与している
（Ｈuang, Ｙ. Ｑ. 等、Ｊ. Ｃlin. Ｉnvest.,９１：１
１９１−７（１９９３））。ヒトの塩基性線維芽細胞成
長因子をコードするcＤＮＡ配列が、バクテリオファー
ジＴ７ ＲＮＡポリメラーゼにより認識される転写プロ
モーターの下流にクローンされた。得られた塩基性線維
芽細胞成長因子は、分裂促進活性、プラスミノーゲンア
クチベーターの合成および血管形成アッセイにおいて、
ヒト胎盤線維芽細胞成長因子と区別できない生物学的活
性を有することが示された(Ｓquires, Ｃ.Ｈ．等、Ｊ．
Ｂiol．Ｃhem．、２６３:１６２９７−３０２(１９８
８))。
ンビトロでカポシ肉腫細胞の成長に更に関与している
（Ｈuang, Ｙ. Ｑ. 等、Ｊ. Ｃlin. Ｉnvest.,９１：１
１９１−７（１９９３））。ヒトの塩基性線維芽細胞成
長因子をコードするcＤＮＡ配列が、バクテリオファー
ジＴ７ ＲＮＡポリメラーゼにより認識される転写プロ
モーターの下流にクローンされた。得られた塩基性線維
芽細胞成長因子は、分裂促進活性、プラスミノーゲンア
クチベーターの合成および血管形成アッセイにおいて、
ヒト胎盤線維芽細胞成長因子と区別できない生物学的活
性を有することが示された(Ｓquires, Ｃ.Ｈ．等、Ｊ．
Ｂiol．Ｃhem．、２６３:１６２９７−３０２(１９８
８))。
【０００８】米国特許第５,１５５,２１４号は、実質的
に純粋な哺乳動物の塩基性線維芽細胞成長因子およびそ
れらの製造を開示する。ウシおよびヒトの塩基性線維芽
細胞成長因子のアミノ酸配列、およびウシ種のポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列が開示されている。
に純粋な哺乳動物の塩基性線維芽細胞成長因子およびそ
れらの製造を開示する。ウシおよびヒトの塩基性線維芽
細胞成長因子のアミノ酸配列、およびウシ種のポリペプ
チドをコードするＤＮＡ配列が開示されている。
【０００９】本発明のポリペプチドは、他のＦＧＦファ
ミリーのメンバーとのアミノ酸配列相同性の結果とし
て、ＦＧＦファミリーのメンバーと推定的に同定され
た。
ミリーのメンバーとのアミノ酸配列相同性の結果とし
て、ＦＧＦファミリーのメンバーと推定的に同定され
た。
【００１０】本発明の一態様によれば、ＦＧＦ−１０で
ある新規な成熟ポリペプチド、並びに生物学的に活性
で、診断または治療に有用なそのフラグメント、アナロ
グおよび誘導体が提供される。本発明の該ポリペプチド
はヒト起源である。
ある新規な成熟ポリペプチド、並びに生物学的に活性
で、診断または治療に有用なそのフラグメント、アナロ
グおよび誘導体が提供される。本発明の該ポリペプチド
はヒト起源である。
【００１１】本発明の一態様によれば、mＲＡＮ、ＤＮ
Ａ、cＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、並びにそれらのアンチセ
ンスアナログおよび生物学的に活性で診断または治療に
有用なそれらのフラグメントを含む、ヒトＦＧＦ−１０
をコードする単離された核酸分子が提供される。
Ａ、cＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、並びにそれらのアンチセ
ンスアナログおよび生物学的に活性で診断または治療に
有用なそれらのフラグメントを含む、ヒトＦＧＦ−１０
をコードする単離された核酸分子が提供される。
【００１２】本発明の他の態様によれば、ＦＧＦ−１０
タンパク質の組換え生産における試剤として有用なクロ
ーニングおよび発現プラスミド等の組換えベクター、並
びにヒトＦＧＦ−１０核酸配列を含む組換え原核および
／または真核宿主細胞を使用して組換え技術によりその
ようなポリペプチドを製造する方法が提供される。
タンパク質の組換え生産における試剤として有用なクロ
ーニングおよび発現プラスミド等の組換えベクター、並
びにヒトＦＧＦ−１０核酸配列を含む組換え原核および
／または真核宿主細胞を使用して組換え技術によりその
ようなポリペプチドを製造する方法が提供される。
【００１３】本発明の更なる態様によれば、治療目的、
例えば負傷、熱傷および潰瘍の治癒を促進するために、
そのようなポリペプチド、またはそのようなポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを用いる方法を提供
し、神経の障害による神経損傷を防止し、皮膚の老化お
よび脱毛を防止する。
例えば負傷、熱傷および潰瘍の治癒を促進するために、
そのようなポリペプチド、またはそのようなポリペプチ
ドをコードするポリヌクレオチドを用いる方法を提供
し、神経の障害による神経損傷を防止し、皮膚の老化お
よび脱毛を防止する。
【００１４】本発明の更なる態様によれば、そのような
ポリペプチドに対する抗体が提供される。
ポリペプチドに対する抗体が提供される。
【００１５】本発明の更なる態様によれば、そのような
ポリペプチドに対するアンタゴニストが提供され、該ア
ンタゴニストは、例えば腫瘍および血管過多の病気の治
療において、そのようなポリペプチドの作用を阻害する
のに使用し得る。本発明の他の態様によれば、ヒトＦＧ
Ｆ−１０配列に特異的にハイブリダイズする十分な長さ
の核酸分子を含む核酸プローブが提供される。
ポリペプチドに対するアンタゴニストが提供され、該ア
ンタゴニストは、例えば腫瘍および血管過多の病気の治
療において、そのようなポリペプチドの作用を阻害する
のに使用し得る。本発明の他の態様によれば、ヒトＦＧ
Ｆ−１０配列に特異的にハイブリダイズする十分な長さ
の核酸分子を含む核酸プローブが提供される。
【００１６】本発明の他の態様によれば、ＦＧＦ−１０
核酸配列における変異またはそのような配列によりコー
ドされるポリペプチドの過発現に関連する病気または病
気に対する感受性を検出するための診断アッセイが提供
される。
核酸配列における変異またはそのような配列によりコー
ドされるポリペプチドの過発現に関連する病気または病
気に対する感受性を検出するための診断アッセイが提供
される。
【００１７】本発明の他の態様によれば、科学的研究、
ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの製造に関するイン
ビトロ目的のためにそのようなポリペプチドまたはその
ようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを使
用する方法が提供される。
ＤＮＡの合成およびＤＮＡベクターの製造に関するイン
ビトロ目的のためにそのようなポリペプチドまたはその
ようなポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを使
用する方法が提供される。
【００１８】本発明のこれらの他の態様は、本明細書か
ら当業者に明らかであろう。
ら当業者に明らかであろう。
【００１９】次の図面は本発明の具体的態様の単なる説
明として意図され、限定として意味するものではない。
明として意図され、限定として意味するものではない。
【００２０】図１及び２は、ＦＧＦ−１０のcＤＮＡ配
列および対応する推定されるアミノ酸配列を示す。示し
たアミノ酸配列は該プロテインの成熟形を示す。アミノ
酸についての標準的な１文字省略を用いている。配列決
定の不正確さはポリヌクレオチド配列を決定することを
試みる場合の一般的な問題である。配列決定は３７３自
動ＤＮＡシークエンサー(Ａpplied Ｂiosystems., In
c．)を用いて行った。配列決定の正確さは９７％以上の
正確さであると予想される。図２は、ＦＧＦ−１０と他
のＦＧＦファミリーのメンバーとのアミノ酸配列相同性
を説明する。保存されたアミノ酸を太線で示す。図３
は、ＦＧＦ−１０タンパク質のインビトロ転写／翻訳後
のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
列および対応する推定されるアミノ酸配列を示す。示し
たアミノ酸配列は該プロテインの成熟形を示す。アミノ
酸についての標準的な１文字省略を用いている。配列決
定の不正確さはポリヌクレオチド配列を決定することを
試みる場合の一般的な問題である。配列決定は３７３自
動ＤＮＡシークエンサー(Ａpplied Ｂiosystems., In
c．)を用いて行った。配列決定の正確さは９７％以上の
正確さであると予想される。図２は、ＦＧＦ−１０と他
のＦＧＦファミリーのメンバーとのアミノ酸配列相同性
を説明する。保存されたアミノ酸を太線で示す。図３
は、ＦＧＦ−１０タンパク質のインビトロ転写／翻訳後
のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
【００２１】本発明の一態様によれば、図１及び２の推
定されたアミノ酸配列(配列番号２)を有する成熟ポリペ
プチド、または１９９４年３月４日にＡＴＣＣ寄託番号
第７５６９６号として寄託されたクローンのcＤＮＡに
よりコードされた成熟ポリペプチドをコードする単離さ
れた核酸分子(ポリヌクレオチド)が提供される。
定されたアミノ酸配列(配列番号２)を有する成熟ポリペ
プチド、または１９９４年３月４日にＡＴＣＣ寄託番号
第７５６９６号として寄託されたクローンのcＤＮＡに
よりコードされた成熟ポリペプチドをコードする単離さ
れた核酸分子(ポリヌクレオチド)が提供される。
【００２２】本発明のポリヌクレオチドは、８週令の初
期段階のヒト組織に由来するcＤＮＡライブラリーにお
いて最初発見され、後に完全鎖長のcＤＮＡがヒトの扁
桃に由来するライブラリーで発見された。それは線維芽
細胞成長因子遺伝子ファミリーのすべてのメンバーと構
造的に関係があり、１８１個のアミノ酸よりなるポリペ
プチドをコードする読み取り枠を含む。１)１２９個の
アミノ酸にわたる脳から単離されたＦＧＦ−９に対する
３７％の同一性と６７％の配列類似性; ２)１２１個の
アミノ酸の領域でのＦＧＦ−７(ケラチノサイト生長因
子)と３６％の同一性と６４％の類似性; ３)１１０個の
アミノ酸にわたるＦＧＦ−１(酸性ＦＧＦ)との３３％の
同一性と５５％の類似性が最高のマッチにある。さらに
ＦＧＨ／ＨＢＧＦファミリーの記号（signature）、Ｇ
ＸＬＸ(Ｓ,Ｔ,Ａ,Ｇ)Ｘ６(Ｄ、Ｅ)ＣＸＦＸＥは本発明
のポリペプチドにおいて保存されている(Ｘはいずれか
のアミノ酸を意味し、(Ｄ、Ｅ)はＤまたはＥ残基を意味
し; Ｘ６はいずれかの６つのアミノ酸残基を意味す
る)。
期段階のヒト組織に由来するcＤＮＡライブラリーにお
いて最初発見され、後に完全鎖長のcＤＮＡがヒトの扁
桃に由来するライブラリーで発見された。それは線維芽
細胞成長因子遺伝子ファミリーのすべてのメンバーと構
造的に関係があり、１８１個のアミノ酸よりなるポリペ
プチドをコードする読み取り枠を含む。１)１２９個の
アミノ酸にわたる脳から単離されたＦＧＦ−９に対する
３７％の同一性と６７％の配列類似性; ２)１２１個の
アミノ酸の領域でのＦＧＦ−７(ケラチノサイト生長因
子)と３６％の同一性と６４％の類似性; ３)１１０個の
アミノ酸にわたるＦＧＦ−１(酸性ＦＧＦ)との３３％の
同一性と５５％の類似性が最高のマッチにある。さらに
ＦＧＨ／ＨＢＧＦファミリーの記号（signature）、Ｇ
ＸＬＸ(Ｓ,Ｔ,Ａ,Ｇ)Ｘ６(Ｄ、Ｅ)ＣＸＦＸＥは本発明
のポリペプチドにおいて保存されている(Ｘはいずれか
のアミノ酸を意味し、(Ｄ、Ｅ)はＤまたはＥ残基を意味
し; Ｘ６はいずれかの６つのアミノ酸残基を意味す
る)。
【００２３】本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの
形、またはＤＮＡの形(該ＤＮＡはcＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａおよび合成ＤＮＡを含む)であり得る。該ＤＮＡは２
本鎖または１本鎖であり得る。成熟ポリペプチドをコー
ドするコード配列は、図１及び２に示すコード配列(配
列番号１)または寄託されたクローンの配列と同一であ
ってもよく、または遺伝コードの重複または縮重の結果
として異なったコード配列であってもよく、図１及び２
のＤＮＡ(配列番号１)または寄託されたcＤＮＡとして
同じ、成熟したポリペプチドをコードする。
形、またはＤＮＡの形(該ＤＮＡはcＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａおよび合成ＤＮＡを含む)であり得る。該ＤＮＡは２
本鎖または１本鎖であり得る。成熟ポリペプチドをコー
ドするコード配列は、図１及び２に示すコード配列(配
列番号１)または寄託されたクローンの配列と同一であ
ってもよく、または遺伝コードの重複または縮重の結果
として異なったコード配列であってもよく、図１及び２
のＤＮＡ(配列番号１)または寄託されたcＤＮＡとして
同じ、成熟したポリペプチドをコードする。
【００２４】図１及び２の成熟ポリペプチド(配列番号
２)、または寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、成熟ポ
リペプチドのコード配列のみ; 成熟ポリペプチドのコー
ド配列およびリーダー若しくは分泌配列またはプロプロ
テイン配列等の付加的コード配列; 成熟ポリペプチドの
コード配列(および場合により付加的コード配列)および
イントロンまたは成熟ポリペプチドのコード配列の非コ
ード配列５'および／または３'等の非コード配列を含
む。
２)、または寄託されたcＤＮＡによりコードされる成熟
ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、成熟ポ
リペプチドのコード配列のみ; 成熟ポリペプチドのコー
ド配列およびリーダー若しくは分泌配列またはプロプロ
テイン配列等の付加的コード配列; 成熟ポリペプチドの
コード配列(および場合により付加的コード配列)および
イントロンまたは成熟ポリペプチドのコード配列の非コ
ード配列５'および／または３'等の非コード配列を含
む。
【００２５】「ポリペプチドをコードするポリヌクレオ
チド」の語は、ポリペプチドのコード配列のみを含むポ
リヌクレオチド、および付加的なコードおよび／または
非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
チド」の語は、ポリペプチドのコード配列のみを含むポ
リヌクレオチド、および付加的なコードおよび／または
非コード配列を含むポリヌクレオチドを包含する。
【００２６】本発明は、図１及び２の推定アミノ酸配列
(配列番号２)を有するポリペプチド、または寄託された
クローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドの
フラグメント、アナログおよび誘導体をコードする、上
に記載したポリヌクレオチドの変異体に更に関する。ポ
リヌクレオチドの変異体はポリヌクレオチドの天然に存
在するアレル変異体またはポリヌクレオチドの非天然の
変異体であり得る。
(配列番号２)を有するポリペプチド、または寄託された
クローンのcＤＮＡによりコードされるポリペプチドの
フラグメント、アナログおよび誘導体をコードする、上
に記載したポリヌクレオチドの変異体に更に関する。ポ
リヌクレオチドの変異体はポリヌクレオチドの天然に存
在するアレル変異体またはポリヌクレオチドの非天然の
変異体であり得る。
【００２７】従って本発明は、図１及び２に示すのと同
じ成熟ポリペプチド(配列番号２)または寄託されたクロ
ーンのcＤＮＡによりコードされた同じ成熟ポリペプチ
ド、並びにそのようなポリヌクレオチドの変異体であっ
て、該変異体は図１及び２のポリペプチド(配列番号２)
または寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされ
るポリペプチドのフラグメント、誘導体、またはアナロ
グをコードするものを含む。そのようなヌクレオチド変
異体は、削除変異体、置換変異体および付加または挿入
変異体を含む。
じ成熟ポリペプチド(配列番号２)または寄託されたクロ
ーンのcＤＮＡによりコードされた同じ成熟ポリペプチ
ド、並びにそのようなポリヌクレオチドの変異体であっ
て、該変異体は図１及び２のポリペプチド(配列番号２)
または寄託されたクローンのcＤＮＡによりコードされ
るポリペプチドのフラグメント、誘導体、またはアナロ
グをコードするものを含む。そのようなヌクレオチド変
異体は、削除変異体、置換変異体および付加または挿入
変異体を含む。
【００２８】上に示したように、該ポリヌクレオチド
は、図１及び２に示すコード配列(配列番号１)または寄
託されたクローンのコード配列の、天然に存在するアレ
ル変異体であるコード配列を有してもよい。当業者に知
られているように、アレル変異体は１以上のヌクレオチ
ドの置換、削除または付加を有し、コードされたポリペ
プチドの機能を実質的に変更しない、別の形のポリヌク
レオチド配列である。
は、図１及び２に示すコード配列(配列番号１)または寄
託されたクローンのコード配列の、天然に存在するアレ
ル変異体であるコード配列を有してもよい。当業者に知
られているように、アレル変異体は１以上のヌクレオチ
ドの置換、削除または付加を有し、コードされたポリペ
プチドの機能を実質的に変更しない、別の形のポリヌク
レオチド配列である。
【００２９】本発明は、成熟ポリペプチドのコード配列
が同じ読み枠で、宿主細胞からのポリペプチドの発現お
よび分泌を助けるポリヌクレオチド配列、例えば細胞か
らのポリペプチドの輸送を制御する分泌配列として機能
するリーダー配列に融合していてもよいポリペプチドを
も含む。リーダー配列を有するポリペプチドはプレプロ
テインであり、宿主細胞により解裂されてそのポリペプ
チドの成熟形を形成するリーダー配列を有してもよい。
該ポリヌクレオチドは成熟タンパク質プラス付加的５'
アミノ酸残基であるプロプロテインをコードしてもよ
い。プロ配列を有する成熟タンパク質はプロプロテイン
であり、そのタンパク質の不活性形である。プロ配列が
一たび解裂すると活性な成熟タンパク質が残る。
が同じ読み枠で、宿主細胞からのポリペプチドの発現お
よび分泌を助けるポリヌクレオチド配列、例えば細胞か
らのポリペプチドの輸送を制御する分泌配列として機能
するリーダー配列に融合していてもよいポリペプチドを
も含む。リーダー配列を有するポリペプチドはプレプロ
テインであり、宿主細胞により解裂されてそのポリペプ
チドの成熟形を形成するリーダー配列を有してもよい。
該ポリヌクレオチドは成熟タンパク質プラス付加的５'
アミノ酸残基であるプロプロテインをコードしてもよ
い。プロ配列を有する成熟タンパク質はプロプロテイン
であり、そのタンパク質の不活性形である。プロ配列が
一たび解裂すると活性な成熟タンパク質が残る。
【００３０】従って例えば本発明のポリヌクレオチド
は、成熟タンパク質、プロ配列を有するタンパク質、ま
たはプロ配列とプレ配列(リーダー配列)をコードし得
る。
は、成熟タンパク質、プロ配列を有するタンパク質、ま
たはプロ配列とプレ配列(リーダー配列)をコードし得
る。
【００３１】本発明のポリヌクレオチドは、本発明のポ
リペプチドの精製を可能にするマーカー配列に枠内で融
合したコード配列を有し得る。マーカー配列は、細菌宿
主の場合、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製
に役立つpＱＥ−９ベクターにより提供されるヘキサヒ
スチジンのタグ(tag)であってもよく、哺乳動物宿主、
例えばＣＯＳ−７細胞を用いる場合には、マーカー配列
はヘマググルチニン(ＨＡ)タグであってもよい。ＨＡタ
グはインフルエンザヘマググルチニン タンパク質由来
のエピトープに対応する(Ｗilson, Ｉ等、Ｃell、３７:
７６７(１９８４))。
リペプチドの精製を可能にするマーカー配列に枠内で融
合したコード配列を有し得る。マーカー配列は、細菌宿
主の場合、マーカーに融合した成熟ポリペプチドの精製
に役立つpＱＥ−９ベクターにより提供されるヘキサヒ
スチジンのタグ(tag)であってもよく、哺乳動物宿主、
例えばＣＯＳ−７細胞を用いる場合には、マーカー配列
はヘマググルチニン(ＨＡ)タグであってもよい。ＨＡタ
グはインフルエンザヘマググルチニン タンパク質由来
のエピトープに対応する(Ｗilson, Ｉ等、Ｃell、３７:
７６７(１９８４))。
【００３２】本発明はさらに、その配列間に少なくとも
５０％、好ましくは７０％の同一性があるなら、上述の
配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに更に関す
る。本発明は特に、上述のポリヌクレオチドにストリン
ジェント条件下にハイブリダイズするポリヌクレオチド
に関する。本明細書で「ストリンジェント条件」とは、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起
こることを意味する。好ましい態様で上述のポリヌクレ
オチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドは、図１
及び２のcＤＮＡ(配列番号１)または寄託されたcＤＮＡ
によりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同じ生
物学的な機能または活性を保持するポリペプチドをコー
ドする。
５０％、好ましくは７０％の同一性があるなら、上述の
配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドに更に関す
る。本発明は特に、上述のポリヌクレオチドにストリン
ジェント条件下にハイブリダイズするポリヌクレオチド
に関する。本明細書で「ストリンジェント条件」とは、配
列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％
の同一性がある場合にのみハイブリダイゼーションが起
こることを意味する。好ましい態様で上述のポリヌクレ
オチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドは、図１
及び２のcＤＮＡ(配列番号１)または寄託されたcＤＮＡ
によりコードされる成熟ポリペプチドと実質的に同じ生
物学的な機能または活性を保持するポリペプチドをコー
ドする。
【００３３】本明細書で言及する寄託は、特許手続上の
微生物の寄託の国際的承認に関するプタペスト条約の下
に保持される。これらの寄託は単に便利のためにのみ行
なわれるのであり、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１２の下
に必要とされるという自認ではない。寄託された物に含
まれるポリヌクレオチドの配列、およびそれによってコ
ードされるアミノ酸配列は本明細書の一部を構成し、本
明細書の配列の記述と矛盾する場合に照らし合わせる。
寄託した物を作り、使用しまたは販売するには実施権が
必要で、そのような実施権はここでは許可しない。
微生物の寄託の国際的承認に関するプタペスト条約の下
に保持される。これらの寄託は単に便利のためにのみ行
なわれるのであり、寄託が３５Ｕ.Ｓ.Ｃ.§１１２の下
に必要とされるという自認ではない。寄託された物に含
まれるポリヌクレオチドの配列、およびそれによってコ
ードされるアミノ酸配列は本明細書の一部を構成し、本
明細書の配列の記述と矛盾する場合に照らし合わせる。
寄託した物を作り、使用しまたは販売するには実施権が
必要で、そのような実施権はここでは許可しない。
【００３４】本発明は、図１及び２の推定アミノ酸配列
(配列番号２)または寄託されたcＤＮＡによりコードさ
れたアミノ酸配列を有するＦＧＦ−１０ポリペプチド、
並びにそのようなポリペプチドのフラグメント、アナロ
グおよび誘導体に更に関する。
(配列番号２)または寄託されたcＤＮＡによりコードさ
れたアミノ酸配列を有するＦＧＦ−１０ポリペプチド、
並びにそのようなポリペプチドのフラグメント、アナロ
グおよび誘導体に更に関する。
【００３５】図１及び２のポリペプチド(配列番号２)ま
たは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ドに言及する場合の「フラグメント」、「誘導体」および
「アナログ」の語は、そのようなポリペプチドと実質的に
同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを
言う。従ってアナログには、プロプロテイン部分の解裂
により活性化されて活性な成熟ポリペプチドを産生する
プロプロテインが含まれる。
たは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ドに言及する場合の「フラグメント」、「誘導体」および
「アナログ」の語は、そのようなポリペプチドと実質的に
同じ生物学的機能または活性を保持するポリペプチドを
言う。従ってアナログには、プロプロテイン部分の解裂
により活性化されて活性な成熟ポリペプチドを産生する
プロプロテインが含まれる。
【００３６】本発明のポリペプチドは、組換えポリペプ
チド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドであ
ってもよく、好ましくは組換えポリペプチドである。
チド、天然ポリペプチド、または合成ポリペプチドであ
ってもよく、好ましくは組換えポリペプチドである。
【００３７】図１及び２のポリペプチド(配列番号２)ま
たは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ドのフラグメント、誘導体またはアナログは、（ｉ）１
以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ酸残基
(好ましくは保存されたアミノ酸残基)で置換されてお
り、そのような置換されたアミノ酸残基は遺伝コードに
よりコードされたものであってもよく、コードされたも
のでなくてもよいもの、(ii)１以上のアミノ酸残基が置
換基を含むもの、または(iii)成熟ポリペプチドが該ポ
リペプチドの半減期を増加させる化合物(例えば、ポリ
エチレングリコール)等の他の化合物と融合しているも
の、または(iv)リーダー配列、分泌配列または成熟ポリ
ペプチドまたはプロプロテインの精製に用いられる配列
等の付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融合している
ものであり得る。そのようなフラグメント、誘導体およ
びアナログは本明細書の教示から当業者の範囲内にある
と思われる。
たは寄託されたcＤＮＡによりコードされるポリペプチ
ドのフラグメント、誘導体またはアナログは、（ｉ）１
以上のアミノ酸残基が保存または非保存アミノ酸残基
(好ましくは保存されたアミノ酸残基)で置換されてお
り、そのような置換されたアミノ酸残基は遺伝コードに
よりコードされたものであってもよく、コードされたも
のでなくてもよいもの、(ii)１以上のアミノ酸残基が置
換基を含むもの、または(iii)成熟ポリペプチドが該ポ
リペプチドの半減期を増加させる化合物(例えば、ポリ
エチレングリコール)等の他の化合物と融合しているも
の、または(iv)リーダー配列、分泌配列または成熟ポリ
ペプチドまたはプロプロテインの精製に用いられる配列
等の付加的アミノ酸が成熟ポリペプチドに融合している
ものであり得る。そのようなフラグメント、誘導体およ
びアナログは本明細書の教示から当業者の範囲内にある
と思われる。
【００３８】本発明のポリペプチドおよびポリヌクレオ
チドは単離された形で好ましくは提供され、好ましくは
均一にまで精製される。
チドは単離された形で好ましくは提供され、好ましくは
均一にまで精製される。
【００３９】「単離された」の語は、その物質がその元の
環境(例えば、それが天然のものであれば天然の環境)か
ら除去されていることを意味する。例えば、生きている
動物に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは単離されていないが、同じポリヌクレオチドもし
くはＤＮＡまたはポリペプチドが、天然の系における共
存物質のいくつかまたはすべてから分離されているな
ら、単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベ
クターの部分となり得、および／またはそのようなポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の部分となり
得、そのようなベクターまたは組成物はその天然の環境
の部分でないという点において、なお単離されている。
環境(例えば、それが天然のものであれば天然の環境)か
ら除去されていることを意味する。例えば、生きている
動物に存在する天然のポリヌクレオチドまたはポリペプ
チドは単離されていないが、同じポリヌクレオチドもし
くはＤＮＡまたはポリペプチドが、天然の系における共
存物質のいくつかまたはすべてから分離されているな
ら、単離されている。そのようなポリヌクレオチドはベ
クターの部分となり得、および／またはそのようなポリ
ヌクレオチドまたはポリペプチドは組成物の部分となり
得、そのようなベクターまたは組成物はその天然の環境
の部分でないという点において、なお単離されている。
【００４０】本発明は、本発明のポリヌクレオチドを含
むベクター、本発明のベクターで遺伝的に操作された宿
主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチド
の製造にも関する。
むベクター、本発明のベクターで遺伝的に操作された宿
主細胞、および組換え技術による本発明のポリペプチド
の製造にも関する。
【００４１】例えば、クローニングベクターまたは発現
ベクターであり得る本発明のベクターで宿主細胞は遺伝
的に操作され得る(トランスデュースされ、トランスフ
ォームされ、またはトランスフェクトされる)。ベクタ
ーは例えばプラスミド、ウイルス粒子、ファージ等であ
り得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化
し、トランスフォーマントを選択し、またはＦＧＦ−１
０遺伝子を増幅するのに適するように改変された従来の
栄養培地で培養できる。温度、pＨ等の培養条件は、発
現用に選択された宿主細胞について前に用いられたもの
であり、当業者に明らかであろう。
ベクターであり得る本発明のベクターで宿主細胞は遺伝
的に操作され得る(トランスデュースされ、トランスフ
ォームされ、またはトランスフェクトされる)。ベクタ
ーは例えばプラスミド、ウイルス粒子、ファージ等であ
り得る。操作された宿主細胞は、プロモーターを活性化
し、トランスフォーマントを選択し、またはＦＧＦ−１
０遺伝子を増幅するのに適するように改変された従来の
栄養培地で培養できる。温度、pＨ等の培養条件は、発
現用に選択された宿主細胞について前に用いられたもの
であり、当業者に明らかであろう。
【００４２】本発明のポリヌクレオチドは組換え技術に
よりペプチドを製造するのに用い得る。したがって、例
えばそのポリヌクレオチド配列を様々な発現ビークル、
特にポリペプチド発現用ベクターまたはプラスミドのい
ずれかに含ませ得る。そのようなベクターは、染色体、
非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０の誘導
体、細菌のプラスミド、ファージＤＮＡ、酵母プラスミ
ド、プラスミドをファージＤＮＡと組合せたベクター、
ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬
病等のウイルスＤＮＡを含む。しかし、他のいずれのベ
クターまたはプラスミドもそれらが宿主中で複製可能
で、成育可能である限り用い得る。
よりペプチドを製造するのに用い得る。したがって、例
えばそのポリヌクレオチド配列を様々な発現ビークル、
特にポリペプチド発現用ベクターまたはプラスミドのい
ずれかに含ませ得る。そのようなベクターは、染色体、
非染色体および合成ＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０の誘導
体、細菌のプラスミド、ファージＤＮＡ、酵母プラスミ
ド、プラスミドをファージＤＮＡと組合せたベクター、
ワクシニア、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬
病等のウイルスＤＮＡを含む。しかし、他のいずれのベ
クターまたはプラスミドもそれらが宿主中で複製可能
で、成育可能である限り用い得る。
【００４３】適当なＤＮＡ配列を様々な方法によりベク
ター中に挿入し得る。一般にＤＮＡ配列は、適当な制限
エンドヌクレアーゼ部位に当業界で知られた方法により
挿入する。そのような方法等は当業者の範囲内にあると
考えられる。
ター中に挿入し得る。一般にＤＮＡ配列は、適当な制限
エンドヌクレアーゼ部位に当業界で知られた方法により
挿入する。そのような方法等は当業者の範囲内にあると
考えられる。
【００４４】発現ベクター中のＤＮＡ配列を、適当な発
現制御配列(プロモーター)に作動可能に結合し、mＲＮ
Ａ合成を行わせる。そのようなプロモーターの代表例と
して、ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、Ｅ．coliの
lacまたはtrp、ファージラムダＰＬプロモーター、およ
び原核または真核細胞もしくはそれらのウイルス中で遺
伝子の発現を制御することが知られている他のプロモー
ターを挙げる。発現ベクターは翻訳開始のためのリボソ
ーム結合部位および転写終了をも含む。ベクターは発現
を増幅するための適当な配列をも含み得る。
現制御配列(プロモーター)に作動可能に結合し、mＲＮ
Ａ合成を行わせる。そのようなプロモーターの代表例と
して、ＬＴＲまたはＳＶ４０プロモーター、Ｅ．coliの
lacまたはtrp、ファージラムダＰＬプロモーター、およ
び原核または真核細胞もしくはそれらのウイルス中で遺
伝子の発現を制御することが知られている他のプロモー
ターを挙げる。発現ベクターは翻訳開始のためのリボソ
ーム結合部位および転写終了をも含む。ベクターは発現
を増幅するための適当な配列をも含み得る。
【００４５】さらに、発現ベクターは、真核細胞培養の
場合のジヒドロフォレートリダクターゼ、またはネオマ
イシン耐性、Ｅ．coliにおけるテトラサイクリンまたは
アンピシリン耐性等のトランスフォームされた宿主細胞
の選択のための表現型特性を提供する遺伝子を好ましく
は含む。
場合のジヒドロフォレートリダクターゼ、またはネオマ
イシン耐性、Ｅ．coliにおけるテトラサイクリンまたは
アンピシリン耐性等のトランスフォームされた宿主細胞
の選択のための表現型特性を提供する遺伝子を好ましく
は含む。
【００４６】上記したような適当なＤＮＡ配列、および
適当なプロモーターまたは制御配列を含むベクターを用
いて適当な宿主をトランスフォームし、宿主にタンパク
質を発現させる。適当な宿主の代表的な例として、Ｅ．
coli、Ｓalmonella typhimurium、Ｓtreptomycos等の細
菌細胞、酵母等のfungal細胞、Ｄrosophila Ｓ２およ
びＳpodoptera Ｓf９等の昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳま
たはＢowes melanoma等の動物細胞、アデノウイルス、
植物細胞等を挙げ得る。適当な宿主の選択は本明細書の
教示から当業者の範囲内にあると考えられる。
適当なプロモーターまたは制御配列を含むベクターを用
いて適当な宿主をトランスフォームし、宿主にタンパク
質を発現させる。適当な宿主の代表的な例として、Ｅ．
coli、Ｓalmonella typhimurium、Ｓtreptomycos等の細
菌細胞、酵母等のfungal細胞、Ｄrosophila Ｓ２およ
びＳpodoptera Ｓf９等の昆虫細胞、ＣＨＯ、ＣＯＳま
たはＢowes melanoma等の動物細胞、アデノウイルス、
植物細胞等を挙げ得る。適当な宿主の選択は本明細書の
教示から当業者の範囲内にあると考えられる。
【００４７】特には、本発明は上に広く記載した配列の
１以上を含んでなる組換え構築物をも含む。その構築物
は、その中に本発明の配列を順または逆方向で挿入する
ベクターを含んでなる。この好ましい態様では、構築物
は該配列に作動可能に結合した例えばプロモーターを含
む制御配列を更に含む。多数の適当なベクターおよびプ
ロモーターが当業者に知られており、商業的に入手でき
る。次のベクターを例として挙げる。細菌用: pＱＥ７
０、pＱＥ６０、pＱＥ−９(Ｑiagen)、pＢＳ、ファージ
スクリプト、psiＸ１７４、pＢluescriptＳＫ、pＢsＫ
Ｓ、pＮＨ８a、pＮＨ１６a、pＮＨ１８a、pＮＨ４６a
(Ｓtratagene); pＴＲＬ９９Ａ、pＫＫ２２３−３、pＫ
Ｋ２３３−３、pＤＲ５４０、pＲＩＴＳ(Ｐharmacia)。
真核生物用:pＷＬneo、pＳＶ２cat、pＯＧ４４、pＸＴ
１、pＳＧ(Ｓtratagene)、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳ
Ｇ、pＳＶＬ(Ｐharmacia)。しかしながら、他のいずれ
のプラスミドまたはベクターも、それらが宿主中で複製
可能で生存可能である限り用い得る。
１以上を含んでなる組換え構築物をも含む。その構築物
は、その中に本発明の配列を順または逆方向で挿入する
ベクターを含んでなる。この好ましい態様では、構築物
は該配列に作動可能に結合した例えばプロモーターを含
む制御配列を更に含む。多数の適当なベクターおよびプ
ロモーターが当業者に知られており、商業的に入手でき
る。次のベクターを例として挙げる。細菌用: pＱＥ７
０、pＱＥ６０、pＱＥ−９(Ｑiagen)、pＢＳ、ファージ
スクリプト、psiＸ１７４、pＢluescriptＳＫ、pＢsＫ
Ｓ、pＮＨ８a、pＮＨ１６a、pＮＨ１８a、pＮＨ４６a
(Ｓtratagene); pＴＲＬ９９Ａ、pＫＫ２２３−３、pＫ
Ｋ２３３−３、pＤＲ５４０、pＲＩＴＳ(Ｐharmacia)。
真核生物用:pＷＬneo、pＳＶ２cat、pＯＧ４４、pＸＴ
１、pＳＧ(Ｓtratagene)、pＳＶＫ３、pＢＰＶ、pＭＳ
Ｇ、pＳＶＬ(Ｐharmacia)。しかしながら、他のいずれ
のプラスミドまたはベクターも、それらが宿主中で複製
可能で生存可能である限り用い得る。
【００４８】プロモーター領域は、ＣＡＴ(クロラムフ
ェニコールトランスフェラーゼ)ベクターまたは選択マ
ーカーを有する他のベクターを用いて所望の遺伝子から
選択できる。２つの適当なベクターはpＫＫ２３２−８
およびpＣＭ７である。個々の名前の付けられた細菌プ
ロモーターは、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gpt、ラム
ダＰＲ、ＰＬおよびtrpを含む。真核プロモーターはＣ
ＭＶ即時、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期Ｓ
Ｖ４０、レトロウイルスからのＬＴＲ、およびマウスメ
タロチオネイン−Ｉを含む。適当なベクターおよびプロ
モーターの選択は当業者のレベルの範囲に十分ある。
ェニコールトランスフェラーゼ)ベクターまたは選択マ
ーカーを有する他のベクターを用いて所望の遺伝子から
選択できる。２つの適当なベクターはpＫＫ２３２−８
およびpＣＭ７である。個々の名前の付けられた細菌プ
ロモーターは、lacＩ、lacＺ、Ｔ３、Ｔ７、gpt、ラム
ダＰＲ、ＰＬおよびtrpを含む。真核プロモーターはＣ
ＭＶ即時、ＨＳＶチミジンキナーゼ、初期および後期Ｓ
Ｖ４０、レトロウイルスからのＬＴＲ、およびマウスメ
タロチオネイン−Ｉを含む。適当なベクターおよびプロ
モーターの選択は当業者のレベルの範囲に十分ある。
【００４９】更なる態様において、本発明は上記構築物
を含む宿主細胞に関する。宿主細胞は、哺乳動物細胞な
どの高級真核細胞、酵母細胞等の低級真核細胞であり
得、または宿主細胞は細菌細胞等の原核細胞であり得
る。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムト
ランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トラ
ンスフェクションまたはエレクトロポレーションによっ
て行うことができる(Ｄavis, Ｌ.、Ｄibner, Ｍ.、Ｂat
ley, Ｌ.、Ｂasic Ｍethods in Ｍolecular Ｂiolo
gy(１９８６))。
を含む宿主細胞に関する。宿主細胞は、哺乳動物細胞な
どの高級真核細胞、酵母細胞等の低級真核細胞であり
得、または宿主細胞は細菌細胞等の原核細胞であり得
る。構築物の宿主細胞への導入は、リン酸カルシウムト
ランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トラ
ンスフェクションまたはエレクトロポレーションによっ
て行うことができる(Ｄavis, Ｌ.、Ｄibner, Ｍ.、Ｂat
ley, Ｌ.、Ｂasic Ｍethods in Ｍolecular Ｂiolo
gy(１９８６))。
【００５０】宿主細胞中の構築物を通常の方法で用い
て、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を製造で
きる。あるいは、本発明のポリペプチドは通常のペプチ
ド合成機によって合成的に製造することができる。
て、組換え配列によりコードされる遺伝子産物を製造で
きる。あるいは、本発明のポリペプチドは通常のペプチ
ド合成機によって合成的に製造することができる。
【００５１】成熟タンパク質は適当なプロモーターの制
御下に哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞中で
発現させることができる。無細胞翻訳系を用いて、本発
明のＤＮＡ構築物からのＲＮＡを用い、そのようなタン
パク質を製造することもできる。原核および真核宿主で
用いる適当なクローニングおよび発現ベクターはＳambr
ook等、Ｍolecular Ｃloning: Ａ Ｌaboratory Ｍan
ual, 第２編(ＣoldＳpring Ｈarbor、ニューヨーク、
１９８９)により記載されている。その開示は本明細書
の一部を構成する。高級真核生物による本発明のポリペ
プチドをコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列
をベクター中に挿入することにより増加する。エンハン
サーはプロモーターに作用しその転写を増加させる、通
常約１０〜３００bpのＤＮＡのシス作用性因子である。
例としては複製起源の後期側にあるＳＶ４０エンハンサ
ー(bp１００〜２７０)、サイトメガロウイルス初期プロ
モーターエンハンサー、複製起源の後期側にあるポリオ
ーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサー
がある。
御下に哺乳動物細胞、酵母、細菌、または他の細胞中で
発現させることができる。無細胞翻訳系を用いて、本発
明のＤＮＡ構築物からのＲＮＡを用い、そのようなタン
パク質を製造することもできる。原核および真核宿主で
用いる適当なクローニングおよび発現ベクターはＳambr
ook等、Ｍolecular Ｃloning: Ａ Ｌaboratory Ｍan
ual, 第２編(ＣoldＳpring Ｈarbor、ニューヨーク、
１９８９)により記載されている。その開示は本明細書
の一部を構成する。高級真核生物による本発明のポリペ
プチドをコードするＤＮＡの転写は、エンハンサー配列
をベクター中に挿入することにより増加する。エンハン
サーはプロモーターに作用しその転写を増加させる、通
常約１０〜３００bpのＤＮＡのシス作用性因子である。
例としては複製起源の後期側にあるＳＶ４０エンハンサ
ー(bp１００〜２７０)、サイトメガロウイルス初期プロ
モーターエンハンサー、複製起源の後期側にあるポリオ
ーマエンハンサー、およびアデノウイルスエンハンサー
がある。
【００５２】一般に、組換え発現ベクターは複製起源、
および宿主細胞のトランスフォーメーションを可能にす
る選択可能なマーカー、例えばＥ．coliのアンピシリン
耐性遺伝子、Ｓ．cerevisiae ＴＲＰ １遺伝子、下流
の構造遺伝子の転写を指示する高度に発現される遺伝子
由来のプロモーターを含む。そのようなプロモーター
は、３−ホスホグリセレートキナーゼ(ＰＧＫ)等の解糖
系の酵素、α因子、酸性ホスホターゼ、熱ショックタン
パク質をコードするオペロンから誘導できる。ヘテロロ
ガスな構造配列が、翻訳開始および終了配列と共に適当
な相へ組立てられる。場合によっては、ヘテロロガスな
配列は、所望の特徴、例えば発現された組換え生成物の
安定化または精製の簡易化を与えるＮ−末端の確認（id
entification）ペプチドを含む融合タンパク質をコード
できる。
および宿主細胞のトランスフォーメーションを可能にす
る選択可能なマーカー、例えばＥ．coliのアンピシリン
耐性遺伝子、Ｓ．cerevisiae ＴＲＰ １遺伝子、下流
の構造遺伝子の転写を指示する高度に発現される遺伝子
由来のプロモーターを含む。そのようなプロモーター
は、３−ホスホグリセレートキナーゼ(ＰＧＫ)等の解糖
系の酵素、α因子、酸性ホスホターゼ、熱ショックタン
パク質をコードするオペロンから誘導できる。ヘテロロ
ガスな構造配列が、翻訳開始および終了配列と共に適当
な相へ組立てられる。場合によっては、ヘテロロガスな
配列は、所望の特徴、例えば発現された組換え生成物の
安定化または精製の簡易化を与えるＮ−末端の確認（id
entification）ペプチドを含む融合タンパク質をコード
できる。
【００５３】細菌で使用する有用な発現ベクターは、所
望のタンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を、適当な
翻訳開始および終了シグナルと共に、機能的なプロモー
ターを有する作動可能なリーディング相に挿入すること
により構築される。そのベクターは１以上の表現型選択
可能なマーカーおよび複製起源を含んでなり、ベクター
の維持および所望なら宿主内部での増幅を与える。トラ
ンスフォーメーション用の適当な原核宿主は、Ｅ．col
i、Ｂacillus subtilis、Ｓalmonella typhimurium、お
よびＰseudomonas属、Ｓtreptmyces属、およびＳtaphyl
ococcus属の様々な種を含むが、他のものも選択の問題
として用い得る。
望のタンパク質をコードする構造ＤＮＡ配列を、適当な
翻訳開始および終了シグナルと共に、機能的なプロモー
ターを有する作動可能なリーディング相に挿入すること
により構築される。そのベクターは１以上の表現型選択
可能なマーカーおよび複製起源を含んでなり、ベクター
の維持および所望なら宿主内部での増幅を与える。トラ
ンスフォーメーション用の適当な原核宿主は、Ｅ．col
i、Ｂacillus subtilis、Ｓalmonella typhimurium、お
よびＰseudomonas属、Ｓtreptmyces属、およびＳtaphyl
ococcus属の様々な種を含むが、他のものも選択の問題
として用い得る。
【００５４】代表的な、しかし非限定的な例として、細
菌に使用する有用なベクターは、よく知られたクローニ
ングベクターpＢＲ３２２(ＡＴＣＣ３７０１７)の遺伝
因子を含む商業的に入手可能なプラスミド由来の、選択
可能なマーカーおよび細菌の複製起源を含むことができ
る。そのような商業的なベクターは、例えばpＫＫ２２
３−３(Ｐharmacia Ｆine Ｃhemicals、Ｕppsala、ス
エーデン)およびＧＥＭ１(Ｐromega Ｂiotec、Ｍadiso
n、ウィスコンシン、米国)を含む、これらのpＢＲ３２
２「骨核」部分を適当なプロモーターおよび発現されるべ
き構造配列と結合させる。
菌に使用する有用なベクターは、よく知られたクローニ
ングベクターpＢＲ３２２(ＡＴＣＣ３７０１７)の遺伝
因子を含む商業的に入手可能なプラスミド由来の、選択
可能なマーカーおよび細菌の複製起源を含むことができ
る。そのような商業的なベクターは、例えばpＫＫ２２
３−３(Ｐharmacia Ｆine Ｃhemicals、Ｕppsala、ス
エーデン)およびＧＥＭ１(Ｐromega Ｂiotec、Ｍadiso
n、ウィスコンシン、米国)を含む、これらのpＢＲ３２
２「骨核」部分を適当なプロモーターおよび発現されるべ
き構造配列と結合させる。
【００５５】適当な宿主株のトランスフオーメーショ
ン、および宿主株の適当な細胞密度までの増殖の後、選
択したプロモーターを適当な手段(例えば温度シフトま
たは化学誘導)により脱抑制し、細胞をさらなる期間培
養する。細胞は典型的には遠心分離によって収穫し、物
理的または化学的手段により破壊し、得られた粗抽出物
を更なる精製のために保持する。
ン、および宿主株の適当な細胞密度までの増殖の後、選
択したプロモーターを適当な手段(例えば温度シフトま
たは化学誘導)により脱抑制し、細胞をさらなる期間培
養する。細胞は典型的には遠心分離によって収穫し、物
理的または化学的手段により破壊し、得られた粗抽出物
を更なる精製のために保持する。
【００５６】タンパク質の発現に用いる微生物細胞は、
凍結−解凍サイクル、ソニケーション、機械的破壊また
は細胞溶解剤の使用を含む、従来のいずれの方法によっ
ても破壊できる。
凍結−解凍サイクル、ソニケーション、機械的破壊また
は細胞溶解剤の使用を含む、従来のいずれの方法によっ
ても破壊できる。
【００５７】様々な哺乳動物細胞培養系を用いて、組換
えタンパク質を発現させることもできる。哺乳動物発現
系の例は、Ｇluzman、Ｃell、２３:１７５(１９８１)に
より記載されたサルの腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系、
および適合性のベクターを発現できる他の細胞系、例え
ばＣ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨelaおよびＢＨＫ細胞
系を含む。哺乳動物発現ベクターは、複製起源、適当な
プロモーターおよびエンハンサーを含み、必要ないずれ
かのリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプラ
イスドナーおよびアクセプター部位、転写終了配列、
５'に隣接する非転写配列も含むであろう。ＳＶ４０ウ
イルスゲノムに由来するＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０複
製起源、初期プロモーター、エンハンサー、スプライ
ス、およびポリアデニル化部位を用いて必要な非転写遺
伝因子を提供し得る。
えタンパク質を発現させることもできる。哺乳動物発現
系の例は、Ｇluzman、Ｃell、２３:１７５(１９８１)に
より記載されたサルの腎臓線維芽細胞のＣＯＳ−７系、
および適合性のベクターを発現できる他の細胞系、例え
ばＣ１２７、３Ｔ３、ＣＨＯ、ＨelaおよびＢＨＫ細胞
系を含む。哺乳動物発現ベクターは、複製起源、適当な
プロモーターおよびエンハンサーを含み、必要ないずれ
かのリボソーム結合部位、ポリアデニル化部位、スプラ
イスドナーおよびアクセプター部位、転写終了配列、
５'に隣接する非転写配列も含むであろう。ＳＶ４０ウ
イルスゲノムに由来するＤＮＡ配列、例えばＳＶ４０複
製起源、初期プロモーター、エンハンサー、スプライ
ス、およびポリアデニル化部位を用いて必要な非転写遺
伝因子を提供し得る。
【００５８】ＦＧＦ−１０は、硫酸アンモニウムまたは
エタノール沈澱、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換
クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフ
ィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマ
トグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含
む、今日までに用いられる方法により、組換え細胞培養
物から回収し、精製し得る。天然のタンパク質の立体配
置を完成させるために必要に応じてタンパク質の再生工
程も用い得る。最後に高速液体クロマトグラフィー(Ｈ
ＰＬＣ)を最終的な精製工程のために用い得る。
エタノール沈澱、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換
クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフ
ィー、疎水的相互作用クロマトグラフィー、アフィニテ
ィークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマ
トグラフィー、およびレクチンクロマトグラフィーを含
む、今日までに用いられる方法により、組換え細胞培養
物から回収し、精製し得る。天然のタンパク質の立体配
置を完成させるために必要に応じてタンパク質の再生工
程も用い得る。最後に高速液体クロマトグラフィー(Ｈ
ＰＬＣ)を最終的な精製工程のために用い得る。
【００５９】本発明のポリペプチドは、天然の精製され
た産物、もしくは化合的合成法の産物であるか、または
原核もしくは真核宿主(例えば培養物中の細菌、酵母、
高等植物、昆虫および哺乳動物細胞)からの組換え技術
により製造し得る。組換え製造方法に用いる宿主によ
り、本発明のポリペプチドは、哺乳動物または他の真核
の炭水化物でグリコシル化され得、またはグルコシル化
され得ない。本発明のポリペプチドは最初のメチオニン
アミノ酸残基を含み得る。
た産物、もしくは化合的合成法の産物であるか、または
原核もしくは真核宿主(例えば培養物中の細菌、酵母、
高等植物、昆虫および哺乳動物細胞)からの組換え技術
により製造し得る。組換え製造方法に用いる宿主によ
り、本発明のポリペプチドは、哺乳動物または他の真核
の炭水化物でグリコシル化され得、またはグルコシル化
され得ない。本発明のポリペプチドは最初のメチオニン
アミノ酸残基を含み得る。
【００６０】血管内皮細胞成長を刺激する能力の結果と
して、本発明のポリペプチドは、血栓症、動脈硬化およ
び他の心臓血管状態等の様々な病気状態による虚血性組
織の再血管化を刺激するための治療に用い得る。ＦＧＦ
−１０は外傷、熱傷、手術後組織修復、潰瘍による傷を
処置するのに用い得る。なぜならそれは線維芽細胞およ
び骨格筋細胞等の様々な種類の細胞に対する分裂促進剤
である能力を有するからである。
して、本発明のポリペプチドは、血栓症、動脈硬化およ
び他の心臓血管状態等の様々な病気状態による虚血性組
織の再血管化を刺激するための治療に用い得る。ＦＧＦ
−１０は外傷、熱傷、手術後組織修復、潰瘍による傷を
処置するのに用い得る。なぜならそれは線維芽細胞およ
び骨格筋細胞等の様々な種類の細胞に対する分裂促進剤
である能力を有するからである。
【００６１】ＦＧＦ−１０は、アルツハイマー病、パー
キンソン病、ＡＩＤＳ関連コンムプレックス等のある神
経の障害または神経変性状態において生じる神経損傷を
処置しおよび抑制するのに用いる得る。ＦＧＦ−１０は
軟骨細胞生長を刺激する能力を有し、それ故、骨および
歯根膜再生を高め、組織移植および骨移植を助けるのに
用い得る。
キンソン病、ＡＩＤＳ関連コンムプレックス等のある神
経の障害または神経変性状態において生じる神経損傷を
処置しおよび抑制するのに用いる得る。ＦＧＦ−１０は
軟骨細胞生長を刺激する能力を有し、それ故、骨および
歯根膜再生を高め、組織移植および骨移植を助けるのに
用い得る。
【００６２】ＦＧＦ−１０はケラチノサイト生長を刺激
することにより、日焼けによる皮膚老化を防止するのに
用い得る。
することにより、日焼けによる皮膚老化を防止するのに
用い得る。
【００６３】ＦＧＦ−１０は脱毛を防止するのにも用い
得る。何故ならＦＧＦ−１０は毛形成細胞を活性化し、
メラノサイト生長を促進するからである。同じ系列で、
ＦＧＦ−１０は、他のサイトカインと組合せて用いた場
合、造血細胞および骨髄細胞の生長と分化を刺激する。
得る。何故ならＦＧＦ−１０は毛形成細胞を活性化し、
メラノサイト生長を促進するからである。同じ系列で、
ＦＧＦ−１０は、他のサイトカインと組合せて用いた場
合、造血細胞および骨髄細胞の生長と分化を刺激する。
【００６４】ＦＧＦ−１０は移植前の器官を保持するの
に、または一次組織の細胞培養を支持するのにも用い得
る。
に、または一次組織の細胞培養を支持するのにも用い得
る。
【００６５】本発明の更なる態様によれば、科学的な研
究、ＤＮＡの合成、ＤＮＡベクターの調製に関するイン
ビトロ目的のために、およびヒトの病気の処置のための
診断薬および治療薬を提供するために、そのようなポリ
ペプチドまたはそのようなポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを用いる方法を提供する。
究、ＤＮＡの合成、ＤＮＡベクターの調製に関するイン
ビトロ目的のために、およびヒトの病気の処置のための
診断薬および治療薬を提供するために、そのようなポリ
ペプチドまたはそのようなポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを用いる方法を提供する。
【００６６】完全鎖長のＦＧＦ−１０遺伝子のフラグメ
ントは、完全鎖長のＦＧＦ−１０遺伝子を単離するため
の、およびＦＧＦ−１０遺伝子に大きい配列類似性また
は同様の生物学的活性を有する他の遺伝子を単離するた
めの、cＤＮＡライブラリーについてのハイブリダイゼ
ーションプローブとして用い得る。この種のプローブは
一般に少なくとも２０塩基を有する。しかしながら、好
ましくはプローブは少なくとも３０塩基を有し、一般に
は５０塩基を超えないが、より多い塩基を有してもよ
い。完全鎖長転写に対応するcＤＮＡクローン、および
制御およびプロモーター領域、エキソンおよびイントロ
ンを含む完全なＦＧＦ−１０遺伝子を含むゲノムクロー
ンを同定するのにも該プローブは用い得る。スクリーニ
ングの例は、その知られたＤＮＡ配列を用いてオリゴヌ
クレオチドプローブを合成することにより、ＦＧＦ−１
０遺伝子のコード領域を単離することを含む。本発明の
遺伝子の配列に相補的な配列を有するラベルされたオリ
ゴヌクレオチドは、ヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはm
ＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、ライブラリ
ーのどのメンバーにプローブがハイブリダイズするか決
定するのに用いられる。
ントは、完全鎖長のＦＧＦ−１０遺伝子を単離するため
の、およびＦＧＦ−１０遺伝子に大きい配列類似性また
は同様の生物学的活性を有する他の遺伝子を単離するた
めの、cＤＮＡライブラリーについてのハイブリダイゼ
ーションプローブとして用い得る。この種のプローブは
一般に少なくとも２０塩基を有する。しかしながら、好
ましくはプローブは少なくとも３０塩基を有し、一般に
は５０塩基を超えないが、より多い塩基を有してもよ
い。完全鎖長転写に対応するcＤＮＡクローン、および
制御およびプロモーター領域、エキソンおよびイントロ
ンを含む完全なＦＧＦ−１０遺伝子を含むゲノムクロー
ンを同定するのにも該プローブは用い得る。スクリーニ
ングの例は、その知られたＤＮＡ配列を用いてオリゴヌ
クレオチドプローブを合成することにより、ＦＧＦ−１
０遺伝子のコード領域を単離することを含む。本発明の
遺伝子の配列に相補的な配列を有するラベルされたオリ
ゴヌクレオチドは、ヒトcＤＮＡ、ゲノムＤＮＡまたはm
ＲＮＡのライブラリーをスクリーニングし、ライブラリ
ーのどのメンバーにプローブがハイブリダイズするか決
定するのに用いられる。
【００６７】本発明はＦＧＦ−１０ポリペプチドの受容
体を同定する方法を提供する。受容体をコードする遺伝
子を、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパ
ンニングおよびＦＡＣＳソーティング(Ｃoligan等、Ｃu
rrent Ｐrotocols in Ｉmmun.、１(２)、第５章(１
９９１)）により同定できる。好ましくは、ポリアデニ
ル化ＲＮＡを該ポリペプチドに応答する細胞から作り、
このＲＮＡから作ったcＤＮＡライブラリーをプールに
分割し、ＣＯＳ細胞または該ポリペプチドに応答しない
他の細胞をトランスフェクトするのに用いる。ガラスス
ライド上で生長したトランスフェクトされた細胞を、ラ
ベルしたポリペプチドにさらす。そのポリペプチドは部
位特異的なプロテインキナーゼの認識部位のヨード化ま
たは包接を含む種々の手段によりラベルすることができ
る。固定化とインキュベーションの後に、スライドをオ
ートラジオグラフ分析に付す。ポジティブのプールを同
定し、サブプールを調製し、反復サブプーリングiterat
ive sub-pooling）および再スクリーニング方法を用い
て再びトランスフェクトし、推定のレセプターをコード
する単一のクローンをついには得る。
体を同定する方法を提供する。受容体をコードする遺伝
子を、当業者に知られた多くの方法、例えばリガンドパ
ンニングおよびＦＡＣＳソーティング(Ｃoligan等、Ｃu
rrent Ｐrotocols in Ｉmmun.、１(２)、第５章(１
９９１)）により同定できる。好ましくは、ポリアデニ
ル化ＲＮＡを該ポリペプチドに応答する細胞から作り、
このＲＮＡから作ったcＤＮＡライブラリーをプールに
分割し、ＣＯＳ細胞または該ポリペプチドに応答しない
他の細胞をトランスフェクトするのに用いる。ガラスス
ライド上で生長したトランスフェクトされた細胞を、ラ
ベルしたポリペプチドにさらす。そのポリペプチドは部
位特異的なプロテインキナーゼの認識部位のヨード化ま
たは包接を含む種々の手段によりラベルすることができ
る。固定化とインキュベーションの後に、スライドをオ
ートラジオグラフ分析に付す。ポジティブのプールを同
定し、サブプールを調製し、反復サブプーリングiterat
ive sub-pooling）および再スクリーニング方法を用い
て再びトランスフェクトし、推定のレセプターをコード
する単一のクローンをついには得る。
【００６８】レセプター同定のための別のアプローチと
して、ラベルしたポリペプチドを、レセプター分子を発
現する細胞膜または抽出調製物とフォトアフィニティ(p
hotoaffinity)に結合させ得る。架橋した物質をＰＡＧ
Ｅ分析により分け、Ｘ線フイルムにさらす。そのポリペ
プチドの受容体を含むラベルしたコンプレックスを切除
し、ペプチドフラグメントに分け、タンパク質のミクロ
配列決定に付すことができる。ミクロ配列決定から得ら
れるアミノ酸配列を用いて一組の縮重オリゴヌクレオチ
ドプローブをデザインし、cＤＮＡライブラリーをスク
リーニングし、推定の受容体をコードする遺伝子を同定
する。
して、ラベルしたポリペプチドを、レセプター分子を発
現する細胞膜または抽出調製物とフォトアフィニティ(p
hotoaffinity)に結合させ得る。架橋した物質をＰＡＧ
Ｅ分析により分け、Ｘ線フイルムにさらす。そのポリペ
プチドの受容体を含むラベルしたコンプレックスを切除
し、ペプチドフラグメントに分け、タンパク質のミクロ
配列決定に付すことができる。ミクロ配列決定から得ら
れるアミノ酸配列を用いて一組の縮重オリゴヌクレオチ
ドプローブをデザインし、cＤＮＡライブラリーをスク
リーニングし、推定の受容体をコードする遺伝子を同定
する。
【００６９】本発明はＦＧＦ−１０の作用を調節する化
合物を同定するための化合物をスクリーニングする方法
を提供する。そのようなアッセイの例は、哺乳動物線維
芽細胞、ＦＧＦ−１０、スクリーニングすべき化合物お
よび３[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞
培養条件下に一緒にすることを含んでなる。コントロー
ルアッセイをスクリーニングすべき化合物の不存在下に
行い、化合物存在下での線維芽細胞増殖量と比較して、
各場合における３[Ｈ]チミジン取り込みを測定すること
により該化合物がケラチノサイトの増殖を刺激するかど
うかを決定する。 アンタゴニストをスクリーニングす
るために同じアッセイを用いることができ、該化合物の
線維芽細胞増殖を阻げる能力を測定し、アンタゴニスト
能の測定を行う。線維芽細胞増殖量を３[Ｈ]チミジンの
取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラ
フィーにより測定する。
合物を同定するための化合物をスクリーニングする方法
を提供する。そのようなアッセイの例は、哺乳動物線維
芽細胞、ＦＧＦ−１０、スクリーニングすべき化合物お
よび３[Ｈ]チミジンを、線維芽細胞が通常増殖する細胞
培養条件下に一緒にすることを含んでなる。コントロー
ルアッセイをスクリーニングすべき化合物の不存在下に
行い、化合物存在下での線維芽細胞増殖量と比較して、
各場合における３[Ｈ]チミジン取り込みを測定すること
により該化合物がケラチノサイトの増殖を刺激するかど
うかを決定する。 アンタゴニストをスクリーニングす
るために同じアッセイを用いることができ、該化合物の
線維芽細胞増殖を阻げる能力を測定し、アンタゴニスト
能の測定を行う。線維芽細胞増殖量を３[Ｈ]チミジンの
取り込みを測定する液体シンチレーションクロマトグラ
フィーにより測定する。
【００７０】他の方法では、ＦＧＦ−１０受容体を発現
する哺乳動物細胞または膜調製物を該化合物の存在下に
ラベルしたＦＧＦ−１０と共にインキュベートする。こ
の相互作用を高めまたはブロックする化合物の能力を次
に測定し得るであろう。あるいは、ＦＧＦ−１０および
受容体の相互作用を追跡する公知の第２のメッセンジャ
ーシステムの応答を測定し、化合物の存在下または不存
在下に比較する。そのような第２のメッセンジャーシス
テムはcＡＭＰグアニレートサイクラーゼ、イオンチャ
ンネルまたはホスホイノシチド加水分解を含むが、これ
らに限定されない。
する哺乳動物細胞または膜調製物を該化合物の存在下に
ラベルしたＦＧＦ−１０と共にインキュベートする。こ
の相互作用を高めまたはブロックする化合物の能力を次
に測定し得るであろう。あるいは、ＦＧＦ−１０および
受容体の相互作用を追跡する公知の第２のメッセンジャ
ーシステムの応答を測定し、化合物の存在下または不存
在下に比較する。そのような第２のメッセンジャーシス
テムはcＡＭＰグアニレートサイクラーゼ、イオンチャ
ンネルまたはホスホイノシチド加水分解を含むが、これ
らに限定されない。
【００７１】可能性のあるＦＧＦ−１０アンタゴニスト
の例には、抗体またはある場合には該ポリペプチドに結
合するオリゴヌクレオチドを含む。あるいは、可能性の
あるＦＧＦ−１０アンタゴニストはＦＧＦ−１０受容体
に結合するＦＧＦ−１０の変異体形であり得るが、第２
メッセンジャー応答は引き出されず、ＦＧＦ−１０の作
用は効果的に阻害されない。
の例には、抗体またはある場合には該ポリペプチドに結
合するオリゴヌクレオチドを含む。あるいは、可能性の
あるＦＧＦ−１０アンタゴニストはＦＧＦ−１０受容体
に結合するＦＧＦ−１０の変異体形であり得るが、第２
メッセンジャー応答は引き出されず、ＦＧＦ−１０の作
用は効果的に阻害されない。
【００７２】他の可能性のあるＦＧＦ−１０アンタゴニ
ストはアンチセンス技術を用いて調製したアンチセンス
構築物である。アンチセンス技術を用いて、３重ヘリッ
クス形成またはアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡにより
遺伝子発現を制御できる。その両方の方法は、ポリヌク
レオチドのＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づいてい
る。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド配列の５'コード部分を用いて、長さで
約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレ
オチドをデザインする。ＤＮＡオリゴヌクレオチドを転
写に関与する遺伝子の領域に相補的であるようデザイン
し(３重ヘリックス、Ｌee等、Ｎucl．Ａcids Ｒes.、
６:３０７３(１９７９); Ｃooney等、Ｓcience、２４
１: ４５６(１９８８); およびＤervan等、Ｓcience、
２５１:１３６０(１９９１)参照)、それによりＦＧＦ−
１０の転写および生産を阻害する。アンチセンスＲＮＡ
オリゴヌクレオチドはインビボでmＲＮＡにハイブリダ
イズし、mＲＮＡ分子のＦＧＦ−１０ポリペプチドへの
翻訳をブロックする(アンチセンス−Ｏkano、Ｊ．Ｎeur
ochem．、５６:５６０(１９９１); Ｏlgodeoxynucleoti
des as Ａntisense Ｉnhibitors of Ｇene Ｅxpressio
n、ＣＲＣ Ｐress, Ｂoca Ｒaton、フロリダ(１９８
８))。上記のオリゴヌクレオチドを細胞に運搬し、アン
チセンスＲＮＡまたはＤＮＡがインビボで発現し、ＦＧ
Ｆ−１０の生産を阻害することもできる。可能なＦＧＦ
−１０アンタゴニストは、ＦＧＦ−１０受容体の結合部
位に結合し、占有し、それによって受容体をＦＧＦ−１
０に接近不可能にし、その結果、正常な生物学的活性が
阻害される、小分子を含む。小分子の例は小さいペプチ
ドまたはペプチド様分子を含むが、これに限定されな
い。
ストはアンチセンス技術を用いて調製したアンチセンス
構築物である。アンチセンス技術を用いて、３重ヘリッ
クス形成またはアンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡにより
遺伝子発現を制御できる。その両方の方法は、ポリヌク
レオチドのＤＮＡまたはＲＮＡへの結合に基づいてい
る。例えば、本発明の成熟ポリペプチドをコードするポ
リヌクレオチド配列の５'コード部分を用いて、長さで
約１０〜４０塩基対のアンチセンスＲＮＡオリゴヌクレ
オチドをデザインする。ＤＮＡオリゴヌクレオチドを転
写に関与する遺伝子の領域に相補的であるようデザイン
し(３重ヘリックス、Ｌee等、Ｎucl．Ａcids Ｒes.、
６:３０７３(１９７９); Ｃooney等、Ｓcience、２４
１: ４５６(１９８８); およびＤervan等、Ｓcience、
２５１:１３６０(１９９１)参照)、それによりＦＧＦ−
１０の転写および生産を阻害する。アンチセンスＲＮＡ
オリゴヌクレオチドはインビボでmＲＮＡにハイブリダ
イズし、mＲＮＡ分子のＦＧＦ−１０ポリペプチドへの
翻訳をブロックする(アンチセンス−Ｏkano、Ｊ．Ｎeur
ochem．、５６:５６０(１９９１); Ｏlgodeoxynucleoti
des as Ａntisense Ｉnhibitors of Ｇene Ｅxpressio
n、ＣＲＣ Ｐress, Ｂoca Ｒaton、フロリダ(１９８
８))。上記のオリゴヌクレオチドを細胞に運搬し、アン
チセンスＲＮＡまたはＤＮＡがインビボで発現し、ＦＧ
Ｆ−１０の生産を阻害することもできる。可能なＦＧＦ
−１０アンタゴニストは、ＦＧＦ−１０受容体の結合部
位に結合し、占有し、それによって受容体をＦＧＦ−１
０に接近不可能にし、その結果、正常な生物学的活性が
阻害される、小分子を含む。小分子の例は小さいペプチ
ドまたはペプチド様分子を含むが、これに限定されな
い。
【００７３】ＦＧＦ−１０アンタゴニストは、ＦＧＦ−
１０の腫瘍細胞および組織に及ぼす細胞の生長および増
殖効果を阻害し、それ故、異常な細胞生長および増殖、
例えば腫瘍生長を抑制し、阻害するのに用い得る。
１０の腫瘍細胞および組織に及ぼす細胞の生長および増
殖効果を阻害し、それ故、異常な細胞生長および増殖、
例えば腫瘍生長を抑制し、阻害するのに用い得る。
【００７４】ＦＧＦ−１０アンタゴニストは血管過多の
病気を防止し、間接のう外白内障手術後の上皮水晶体細
胞の増殖を防止するのにも用い得る。
病気を防止し、間接のう外白内障手術後の上皮水晶体細
胞の増殖を防止するのにも用い得る。
【００７５】アンタゴニストは薬学的に許容し得る担体
(例えば下記のような)と共に組成物で用い得る。
(例えば下記のような)と共に組成物で用い得る。
【００７６】本発明のポリペプチド、アゴニスト、アン
タゴニストを適当な薬学的担体と組合せて用い、薬学的
組成物を作り得る。そのような組成物は治療的に有効量
のポリペプチド、アゴニスト、アンタゴニストおよび薬
学的に許容し得る担体または賦形剤を含む。そのような
担体は、食塩水、緩衝化された食塩水、デキストロー
ズ、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合
せを含むが、それらに限定されない。その調合物は投与
様式に適合させるべきである。
タゴニストを適当な薬学的担体と組合せて用い、薬学的
組成物を作り得る。そのような組成物は治療的に有効量
のポリペプチド、アゴニスト、アンタゴニストおよび薬
学的に許容し得る担体または賦形剤を含む。そのような
担体は、食塩水、緩衝化された食塩水、デキストロー
ズ、水、グリセロール、エタノールおよびそれらの組合
せを含むが、それらに限定されない。その調合物は投与
様式に適合させるべきである。
【００７７】本発明は本発明の薬学的組成物の１以上の
成分を充填した１以上の容器を含む薬学的なパックまた
はキットをも提供する。そのような容器には、薬学的ま
たは生物学的製品の製造、使用、販売を規制する政府当
局により定められた形の通知を付してもよく、その通知
はヒトへの投与のための製造、使用または販売の、該当
局による承認を表わす。更に本発明のポリペプチド、ア
ゴニストおよびアンタゴニストは他の治療用化合物と組
合せて用いてもよい。
成分を充填した１以上の容器を含む薬学的なパックまた
はキットをも提供する。そのような容器には、薬学的ま
たは生物学的製品の製造、使用、販売を規制する政府当
局により定められた形の通知を付してもよく、その通知
はヒトへの投与のための製造、使用または販売の、該当
局による承認を表わす。更に本発明のポリペプチド、ア
ゴニストおよびアンタゴニストは他の治療用化合物と組
合せて用いてもよい。
【００７８】その薬学的組成物は、経口、局所、静脈、
腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔、皮内経路等により便利な
方法で投与し得る。薬学的組成物は具体的な適応症の治
療および／または予防に有効な量投与される。一般にそ
れらは少くとも約１０μg／kg体重投与され、たいてい
の場合１日当り約８mg／kg体重を超えない量投与され
る。たいていの場合、投与ルートおよび症状を考慮し
て、用量は毎日約１０μg／kg〜約１mg／kgである。局
所的投与の特殊な場合には用量は好ましくは約０.１μg
〜９mg／cm２投与される。
腹腔内、筋肉内、皮下、鼻腔、皮内経路等により便利な
方法で投与し得る。薬学的組成物は具体的な適応症の治
療および／または予防に有効な量投与される。一般にそ
れらは少くとも約１０μg／kg体重投与され、たいてい
の場合１日当り約８mg／kg体重を超えない量投与され
る。たいていの場合、投与ルートおよび症状を考慮し
て、用量は毎日約１０μg／kg〜約１mg／kgである。局
所的投与の特殊な場合には用量は好ましくは約０.１μg
〜９mg／cm２投与される。
【００７９】ポリペプチドであるＦＧＦ−１０ポリペプ
チド、アゴニストおよびアンタゴニストは、しばしば
「遺伝子治療」と呼ばれるインビボでのそのようなポリペ
プチドの発現により本発明に従い用い得る。
チド、アゴニストおよびアンタゴニストは、しばしば
「遺伝子治療」と呼ばれるインビボでのそのようなポリペ
プチドの発現により本発明に従い用い得る。
【００８０】したがって例えば細胞を、エクスビボでそ
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(ＤＮＡ
またはＲＮＡ)で処理して、処理された細胞を患者に与
えて、そのポリペプチドで治療する。そのような方法は
当業界でよく知られている。例えば本発明のポリペプチ
ドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を用い
て当業界で知られた方法により細胞を処理する。
のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド(ＤＮＡ
またはＲＮＡ)で処理して、処理された細胞を患者に与
えて、そのポリペプチドで治療する。そのような方法は
当業界でよく知られている。例えば本発明のポリペプチ
ドをコードするＲＮＡを含むレトロウイルス粒子を用い
て当業界で知られた方法により細胞を処理する。
【００８１】同様に、例えば当業界で知られた方法によ
り、インビボでのポリペプチドの発現のため細胞をイン
ビボで処理し得る。当業界で知られているように、本発
明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイ
ルス粒子を製造するための生産細胞を、インビボで細胞
を処理し、インビボでポリペプチドを発現させるため患
者に投与する。そのような方法により本発明のポリペプ
チドを投与するこれらのおよび他の方法は本発明の教示
から当業者に明らかであるはずである。例えば細胞を処
理するための発現ビークルはレトロウイルス粒子以外の
もの、例えばアデノウイルスであってもよく、アデノウ
イルスは適当な運搬ビークルと組合せた後インビボで細
胞を処理するために用い得る。
り、インビボでのポリペプチドの発現のため細胞をイン
ビボで処理し得る。当業界で知られているように、本発
明のポリペプチドをコードするＲＮＡを含むレトロウイ
ルス粒子を製造するための生産細胞を、インビボで細胞
を処理し、インビボでポリペプチドを発現させるため患
者に投与する。そのような方法により本発明のポリペプ
チドを投与するこれらのおよび他の方法は本発明の教示
から当業者に明らかであるはずである。例えば細胞を処
理するための発現ビークルはレトロウイルス粒子以外の
もの、例えばアデノウイルスであってもよく、アデノウ
イルスは適当な運搬ビークルと組合せた後インビボで細
胞を処理するために用い得る。
【００８２】本発明は、ＦＧＦ−１０核酸配列における
変異の存在に関連する病気また病気に対する感受性を検
出する診断法の一部として、ＦＧＦ−１０遺伝子を用い
ることにも関する。
変異の存在に関連する病気また病気に対する感受性を検
出する診断法の一部として、ＦＧＦ−１０遺伝子を用い
ることにも関する。
【００８３】ＦＧＦ−１０遺伝子における変異を有する
個体を様々な技術によりＤＮＡレベで検出する。診断用
の核酸は血液、尿、唾液、組織生検、剖検材料などの患
者の細胞から得られ得る。ゲノムＤＮＡを検出のため直
接用いることができ、または分析前にＰＣＲ(Ｓakai
等、Ｎature、３２４:１６３−１６６(１９８６))を用
いることにより酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたは
cＤＮＡも同じ目的で使用し得る。一例としてＦＧＦ−
１０をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用
いて、ＦＧＦ−１０変異体を同定し分析できる。例えば
削除または挿入は正常な遺伝子型と比較して増幅産物の
大きの変化により検出できる。点変異は増幅したＤＮＡ
を放射ラベルしたＦＧＦ−１０ ＲＮＡ、または放射ラ
ベルしたＦＧＦ−１０アンチセンスＤＮＡ配列にハイブ
リダイズすることにより同定できる。完全にマッチした
配列は、ミスマッチした二重鎖と、ＲＮaseＡ消化によ
り、または融点の相違により区別できる。
個体を様々な技術によりＤＮＡレベで検出する。診断用
の核酸は血液、尿、唾液、組織生検、剖検材料などの患
者の細胞から得られ得る。ゲノムＤＮＡを検出のため直
接用いることができ、または分析前にＰＣＲ(Ｓakai
等、Ｎature、３２４:１６３−１６６(１９８６))を用
いることにより酵素的に増幅してもよい。ＲＮＡまたは
cＤＮＡも同じ目的で使用し得る。一例としてＦＧＦ−
１０をコードする核酸に相補的なＰＣＲプライマーを用
いて、ＦＧＦ−１０変異体を同定し分析できる。例えば
削除または挿入は正常な遺伝子型と比較して増幅産物の
大きの変化により検出できる。点変異は増幅したＤＮＡ
を放射ラベルしたＦＧＦ−１０ ＲＮＡ、または放射ラ
ベルしたＦＧＦ−１０アンチセンスＤＮＡ配列にハイブ
リダイズすることにより同定できる。完全にマッチした
配列は、ミスマッチした二重鎖と、ＲＮaseＡ消化によ
り、または融点の相違により区別できる。
【００８４】ＤＮＡ配列の相違に基づく遺伝的試験は、
変性剤を用いる、または用いない、ゲル中のＤＮＡフラ
グメントの電気泳動モビリティの変化の検出により行い
得る。小さい配列削除および挿入は高分解ゲル電気泳動
により視覚化できる。異った配列のＤＮＡ断片は、その
モビリティが融点または部分融点に従って異った位置で
ゲル中で減ずる変性ホルムアミドグラジエントゲルで区
別し得る(例えばＭyers等、Ｓcience、２３０:１２４２
(１９８５))。
変性剤を用いる、または用いない、ゲル中のＤＮＡフラ
グメントの電気泳動モビリティの変化の検出により行い
得る。小さい配列削除および挿入は高分解ゲル電気泳動
により視覚化できる。異った配列のＤＮＡ断片は、その
モビリティが融点または部分融点に従って異った位置で
ゲル中で減ずる変性ホルムアミドグラジエントゲルで区
別し得る(例えばＭyers等、Ｓcience、２３０:１２４２
(１９８５))。
【００８５】特殊な位置での配列変化も、ＲＮaseおよ
びＳl保護または化学的解裂法等のヌクレアーゼ保護ア
ッセイにより明らかになり得る(例えばＣotton等、ＰＮ
ＡＳ,ＵＳＡ、８５:４３９７〜４４０１(１９８５))。
びＳl保護または化学的解裂法等のヌクレアーゼ保護ア
ッセイにより明らかになり得る(例えばＣotton等、ＰＮ
ＡＳ,ＵＳＡ、８５:４３９７〜４４０１(１９８５))。
【００８６】したがって特殊なＤＮＡ配列の検出は、ハ
イブリダイゼーション、ＲＮase保護、化学的解裂、直
接的なＤＮＡ配列決定、または制限酵素の使用(例えば
制限断片長多型性(ＲＦＬＰ))、およびゲノムＤＮＡの
サザーンブロッテイング等の方法により行い得る。
イブリダイゼーション、ＲＮase保護、化学的解裂、直
接的なＤＮＡ配列決定、または制限酵素の使用(例えば
制限断片長多型性(ＲＦＬＰ))、およびゲノムＤＮＡの
サザーンブロッテイング等の方法により行い得る。
【００８７】よりありふれたゲル電気泳動およびＤＮＡ
配列決定の外に、突然変異はin sitn分析によっても検
出し得る。
配列決定の外に、突然変異はin sitn分析によっても検
出し得る。
【００８８】本発明は様々な組織中のＦＧＦ−１０タン
パク質のレベルの変化を検出する診断アッセイにも関す
る。何故なら正常なコントロール組織試料を比べた該タ
ンパク質の過剰発現は、例えば腫瘍等の病気、または病
気に対する感受性の存在を検出し得るからである。宿主
に由来する試料中のＦＧＦ−１０タンパク質のレベルを
検出するのに用いるアッセイは、当業者に周知であり、
ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタン
ブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、および「サンドイ
ッチ」アッセイを含むＥＬＩＳＡアッセイ(Ｃoligan等、
Ｃurrent Ｐrotocols in lmmunology、１(２)、第６
章(１９９１))はＦＧＦ−１０抗原に特異的な抗体、好
ましくはモノクローナル抗体を最初に調製することを含
む。更にリポーター抗体をモノクローナル抗体に対して
作る。リポーター抗体に放射活性、蛍光またはこの例で
は西洋ワサビパーオキシダーゼ酵素等の検出可能な試薬
を結合させる。試料を宿主から取り出し、試料中のタン
パク質を結合する固体担体、例えばポリスチレン皿上で
インキュベートする。皿上のフリーなタンパク質結合部
位を、ウシ血清アルブミンの様な非特異的なタンパク質
を用いてインキュベートすることにより次に被覆する。
次にモノクローナル抗体を皿中でインキュベートし、そ
の間にモノクローナル抗体はポリスチレン皿に付着した
ＦＧＦ−１０タンパク質に付着する。すべての非結合モ
ノクローナル抗体を緩衝液で洗浄除去する。西洋ワサビ
パーオキシダーゼに結合したリポーター抗体を皿中に置
き、ＦＧＦ−１０に結合したモノクローナル抗体にリポ
ーター抗体を結合させる。次に非付着リポーター抗体を
洗浄除去する。パーオキシダーゼの基質を次に皿に加
え、ある時間に発色した色の量は、標準曲線と比較した
場合、一定量の患者の試料中に存在するＦＧＦ−１０タ
ンパク質の尺度である。競合アッセイを用いてもよい。
その方法ではＦＧＦ−１０に特異的な抗体を固体担体に
付着させ、ラベルしたＦＧＦ−１０および宿主由来の試
料を固体担体に通し、例えば液体シンチレーションクロ
マトグラフィーにより検出したラベルの量を試料中のＦ
ＧＦ−１０量に関連づける。
パク質のレベルの変化を検出する診断アッセイにも関す
る。何故なら正常なコントロール組織試料を比べた該タ
ンパク質の過剰発現は、例えば腫瘍等の病気、または病
気に対する感受性の存在を検出し得るからである。宿主
に由来する試料中のＦＧＦ−１０タンパク質のレベルを
検出するのに用いるアッセイは、当業者に周知であり、
ラジオイムノアッセイ、競合結合アッセイ、ウエスタン
ブロット分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、および「サンドイ
ッチ」アッセイを含むＥＬＩＳＡアッセイ(Ｃoligan等、
Ｃurrent Ｐrotocols in lmmunology、１(２)、第６
章(１９９１))はＦＧＦ−１０抗原に特異的な抗体、好
ましくはモノクローナル抗体を最初に調製することを含
む。更にリポーター抗体をモノクローナル抗体に対して
作る。リポーター抗体に放射活性、蛍光またはこの例で
は西洋ワサビパーオキシダーゼ酵素等の検出可能な試薬
を結合させる。試料を宿主から取り出し、試料中のタン
パク質を結合する固体担体、例えばポリスチレン皿上で
インキュベートする。皿上のフリーなタンパク質結合部
位を、ウシ血清アルブミンの様な非特異的なタンパク質
を用いてインキュベートすることにより次に被覆する。
次にモノクローナル抗体を皿中でインキュベートし、そ
の間にモノクローナル抗体はポリスチレン皿に付着した
ＦＧＦ−１０タンパク質に付着する。すべての非結合モ
ノクローナル抗体を緩衝液で洗浄除去する。西洋ワサビ
パーオキシダーゼに結合したリポーター抗体を皿中に置
き、ＦＧＦ−１０に結合したモノクローナル抗体にリポ
ーター抗体を結合させる。次に非付着リポーター抗体を
洗浄除去する。パーオキシダーゼの基質を次に皿に加
え、ある時間に発色した色の量は、標準曲線と比較した
場合、一定量の患者の試料中に存在するＦＧＦ−１０タ
ンパク質の尺度である。競合アッセイを用いてもよい。
その方法ではＦＧＦ−１０に特異的な抗体を固体担体に
付着させ、ラベルしたＦＧＦ−１０および宿主由来の試
料を固体担体に通し、例えば液体シンチレーションクロ
マトグラフィーにより検出したラベルの量を試料中のＦ
ＧＦ−１０量に関連づける。
【００８９】「サンドイッチ」アッセイはＥＬＩＳＡアッ
セイに類似している。「サンドイッチ」アッセイでは、Ｆ
ＧＦ−１０を固体担体に通し、固体担体に付着した抗体
に結合させる。第２抗体を次にＦＧＦ−１０に結合させ
る。ラベルされており、第２抗体に特異的な第３抗体を
固体担体に通し、第２抗体に結合させ、量を定量する。
セイに類似している。「サンドイッチ」アッセイでは、Ｆ
ＧＦ−１０を固体担体に通し、固体担体に付着した抗体
に結合させる。第２抗体を次にＦＧＦ−１０に結合させ
る。ラベルされており、第２抗体に特異的な第３抗体を
固体担体に通し、第２抗体に結合させ、量を定量する。
【００９０】本発明の配列は染色体同定にも価値があ
る。その配列を個々のヒト染色体上のある位置に対して
特異的に目標に定めて、ハイブリダイズさせる。さらに
染色体上の特定の部位を同定する現在の必要がある。現
在染色体位置をマークするのに利用できる、実際の配列
データ(リピートポリモルフィズム)に基いた染色体マー
キング試料はわずかしかない。本発明による染色体への
ＤＮＡのマッピングは、これらの配列を病気と関連する
遺伝子と関係づける重要な第一歩である。
る。その配列を個々のヒト染色体上のある位置に対して
特異的に目標に定めて、ハイブリダイズさせる。さらに
染色体上の特定の部位を同定する現在の必要がある。現
在染色体位置をマークするのに利用できる、実際の配列
データ(リピートポリモルフィズム)に基いた染色体マー
キング試料はわずかしかない。本発明による染色体への
ＤＮＡのマッピングは、これらの配列を病気と関連する
遺伝子と関係づける重要な第一歩である。
【００９１】簡単に言うと、cＤＮＡからのＰＣＲプラ
イマー(好ましくは１５−２５bp)を調製することによ
り、配列を染色体にマップする。３'非翻訳領域のコン
ピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡの１以上のエク
ソンをスパン(spun)しないプライマーを急速に選択し、
増幅方法を複雑（complicate）にする。これらのプライ
マーを、個々のヒトの染色体を含む体細胞ハイブリッド
のＰＣＲスクリーニングに次に用いる。プライマーに対
応するヒト遺伝子を含むこれらのハイブリッドのみが増
幅されたフラグメントを生じるであろう。
イマー(好ましくは１５−２５bp)を調製することによ
り、配列を染色体にマップする。３'非翻訳領域のコン
ピューター分析を用いて、ゲノムＤＮＡの１以上のエク
ソンをスパン(spun)しないプライマーを急速に選択し、
増幅方法を複雑（complicate）にする。これらのプライ
マーを、個々のヒトの染色体を含む体細胞ハイブリッド
のＰＣＲスクリーニングに次に用いる。プライマーに対
応するヒト遺伝子を含むこれらのハイブリッドのみが増
幅されたフラグメントを生じるであろう。
【００９２】体細胞ハイブリッドのＰＣＲマッピングは
特定のＤＮＡを特定の染色体に帰属させる速い方法であ
る。同じオリゴヌクレオチドプライマーを用いる本発明
を用いて、具体的な染色体または大きいゲノムクローン
のプールからのフラグメントのパネルを用いて類似の方
法でサブローカリゼーションを行うことができる。染色
体へマッピングするのに同様に用いることができる他の
マッピング戦略は、insituハイブリダイゼーション、ラ
ベルしたフローソートした染色体を用いるプレスクリー
ニング、および染色体特異的cＤＮＡライブラリーを構
築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレク
ションを含む。
特定のＤＮＡを特定の染色体に帰属させる速い方法であ
る。同じオリゴヌクレオチドプライマーを用いる本発明
を用いて、具体的な染色体または大きいゲノムクローン
のプールからのフラグメントのパネルを用いて類似の方
法でサブローカリゼーションを行うことができる。染色
体へマッピングするのに同様に用いることができる他の
マッピング戦略は、insituハイブリダイゼーション、ラ
ベルしたフローソートした染色体を用いるプレスクリー
ニング、および染色体特異的cＤＮＡライブラリーを構
築するためのハイブリダイゼーションによるプレセレク
ションを含む。
【００９３】中期染色体スプレッドへのcＤＮＡクロー
ンの蛍光インサイテュハイブリダイゼーション(ＦＩＳ
Ｈ)を用いて正確な染色体位置を一工程で提供できる。
この技術は５００〜６００塩基という短いcＤＮＡで用
いることができるが、２０００bpより大きいクローン
は、簡単な検出のための十分なシグナル強度で、ユニー
クな染色体位置へのより大きい結合可能性を有する。Ｆ
ＩＳＨは、発現配列タグ(本発明の遺伝子のフラグメン
ト)が由来するクローンの使用を要し、長ければ長いほ
どよい。例えば２０００bpは良好であり、４０００はよ
り良好であり、４０００以上は良好な結果を得るのに多
分必要ない。この技術をレビューするには、Ｖerma等、
Ｈuman Ｃhromosomes:a Ｍanual of Ｂasic Ｔech
niqnes，Ｐergamon Ｐress、ニューヨーク(１９８８)
を参照する。
ンの蛍光インサイテュハイブリダイゼーション(ＦＩＳ
Ｈ)を用いて正確な染色体位置を一工程で提供できる。
この技術は５００〜６００塩基という短いcＤＮＡで用
いることができるが、２０００bpより大きいクローン
は、簡単な検出のための十分なシグナル強度で、ユニー
クな染色体位置へのより大きい結合可能性を有する。Ｆ
ＩＳＨは、発現配列タグ(本発明の遺伝子のフラグメン
ト)が由来するクローンの使用を要し、長ければ長いほ
どよい。例えば２０００bpは良好であり、４０００はよ
り良好であり、４０００以上は良好な結果を得るのに多
分必要ない。この技術をレビューするには、Ｖerma等、
Ｈuman Ｃhromosomes:a Ｍanual of Ｂasic Ｔech
niqnes，Ｐergamon Ｐress、ニューヨーク(１９８８)
を参照する。
【００９４】一度ある配列が正確な染色体位置にマップ
されると、その染色体上のその配列の物理的な位置を遺
伝マップデータと関連づけることができる。そのような
データは例えばＶ．ＭcＫusick、Ｍendelian Ｉnherit
ance in Ｍan(ジョンホプキンス大学のウエルチメデ
ィカルライブラリーを介してオンラインで利用できる)
中に見出される。同じ染色体領域にマップされた遺伝子
と病気との間の関係を次に結合分析(物理的に隣接した
遺伝子の共遺伝(coinheritance))により確認される。
されると、その染色体上のその配列の物理的な位置を遺
伝マップデータと関連づけることができる。そのような
データは例えばＶ．ＭcＫusick、Ｍendelian Ｉnherit
ance in Ｍan(ジョンホプキンス大学のウエルチメデ
ィカルライブラリーを介してオンラインで利用できる)
中に見出される。同じ染色体領域にマップされた遺伝子
と病気との間の関係を次に結合分析(物理的に隣接した
遺伝子の共遺伝(coinheritance))により確認される。
【００９５】次に、病気に冒された個体と冒されない個
体との間のcＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する
ことが必要である。もしある変異が病気に冒された個体
のいくつかまたはすべてに認められるが、いずれの正常
な個体にも認められなかったなら、その変異はその病気
の原因となるものであるようである。
体との間のcＤＮＡまたはゲノム配列の相違を決定する
ことが必要である。もしある変異が病気に冒された個体
のいくつかまたはすべてに認められるが、いずれの正常
な個体にも認められなかったなら、その変異はその病気
の原因となるものであるようである。
【００９６】物理的マッピングと遺伝的マッピングの現
在の分析により、病気と関連づけられた染色体領域に正
確に位置づけられたcＤＮＡは５０〜５００の可能な原
因となる遺伝子の一つである。(これは１メガベースの
マッピングレゾリューションと２０kb当り１遺伝子を仮
定する)。
在の分析により、病気と関連づけられた染色体領域に正
確に位置づけられたcＤＮＡは５０〜５００の可能な原
因となる遺伝子の一つである。(これは１メガベースの
マッピングレゾリューションと２０kb当り１遺伝子を仮
定する)。
【００９７】ポリペプチド、それらのフラグメント若し
くは他の誘導体、またはそれらのアナグロ、またはそれ
らを発現する細胞は、それらに対する抗体を製造するた
めの免疫源として用い得る。これらの抗体は例えばポリ
クローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。本発
明は、キメラ、単鎖、およびヒト化抗体並びにＦabフラ
グメントまたはＦab発現ライブラリーの生成物をも含
む。当業界で知られた様々の方法をそのような抗体およ
びフラグメントの製造に用い得る。
くは他の誘導体、またはそれらのアナグロ、またはそれ
らを発現する細胞は、それらに対する抗体を製造するた
めの免疫源として用い得る。これらの抗体は例えばポリ
クローナルまたはモノクローナル抗体であり得る。本発
明は、キメラ、単鎖、およびヒト化抗体並びにＦabフラ
グメントまたはＦab発現ライブラリーの生成物をも含
む。当業界で知られた様々の方法をそのような抗体およ
びフラグメントの製造に用い得る。
【００９８】本発明の配列に対応するポリペプチドに対
して生成した抗体は、ポリペプチドを動物に直接注入す
ることにより、またはそのポリペプチドを動物に、好ま
しくは人でない動物に、投与することにより得ることが
できる。かく得られた抗体はそのポリペプチド自体に結
合するであろう。この方法では、ポリペプチドのフラグ
メントのみをコードする配列さえも、全体の本来のポリ
ペプチドを結合する抗体を作り出すのに用いることがで
きる。そのような抗体を用いて次にそのポリペプチドを
発現する組織からそのポリペプチドを単離できる。
して生成した抗体は、ポリペプチドを動物に直接注入す
ることにより、またはそのポリペプチドを動物に、好ま
しくは人でない動物に、投与することにより得ることが
できる。かく得られた抗体はそのポリペプチド自体に結
合するであろう。この方法では、ポリペプチドのフラグ
メントのみをコードする配列さえも、全体の本来のポリ
ペプチドを結合する抗体を作り出すのに用いることがで
きる。そのような抗体を用いて次にそのポリペプチドを
発現する組織からそのポリペプチドを単離できる。
【００９９】モノクローナル抗体を調製するために、連
続的な細胞系培養により産生される抗体を生じるどのよ
うな技術も使用できる。例としては、ハイブリドーマ技
術(ＫohlerおよびＭilstein、１９７５、Ｎature、２５
６:４９５−４９７)、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイ
ブリドーマ技術(Ｋozbor等、１９８３、Ｉmmunology
Ｔoday ４:７２)、およびヒトモノクローナル抗体を作
るＥＢＶ−ハイブリドーマ技術(Ｃole等、１９８５、Ｍ
onoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy中、
Ａlan Ｒ．Ｌiss,Ｉnc．、７７−９６頁)がある。
続的な細胞系培養により産生される抗体を生じるどのよ
うな技術も使用できる。例としては、ハイブリドーマ技
術(ＫohlerおよびＭilstein、１９７５、Ｎature、２５
６:４９５−４９７)、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイ
ブリドーマ技術(Ｋozbor等、１９８３、Ｉmmunology
Ｔoday ４:７２)、およびヒトモノクローナル抗体を作
るＥＢＶ−ハイブリドーマ技術(Ｃole等、１９８５、Ｍ
onoclonal Ａntibodies and Ｃancer Ｔherapy中、
Ａlan Ｒ．Ｌiss,Ｉnc．、７７−９６頁)がある。
【０１００】単鎖抗体の製造について記載された技術
(米国特許第４,９４６,７７８号)は、本発明の免疫原性
ポリペプチド生産物に対する単鎖抗体を製造するのに適
応させることができる。遺伝子導入マウスを用いて、本
発明の免疫原性ポリペプチド生産物に対するヒト化抗体
を発現させ得る。
(米国特許第４,９４６,７７８号)は、本発明の免疫原性
ポリペプチド生産物に対する単鎖抗体を製造するのに適
応させることができる。遺伝子導入マウスを用いて、本
発明の免疫原性ポリペプチド生産物に対するヒト化抗体
を発現させ得る。
【０１０１】本発明を次の実施例によって更に記載する
が、本発明はそのような実施例に限定されないことを理
解すべきである。ことわらない限りすべての部または量
は重量による。
が、本発明はそのような実施例に限定されないことを理
解すべきである。ことわらない限りすべての部または量
は重量による。
【０１０２】次の実施例の理解を促進するために、いく
つかのしばしば用いる方法および／または用語を記載す
る。
つかのしばしば用いる方法および／または用語を記載す
る。
【０１０３】「プラスミド」は先行するpおよび／または
それに続く大文字および／または数字により示す。出発
プラスミドは商業的に入手可能で限定されずに公的に入
手できるか、公開された方法に従い入手可能なプラスミ
ドから構築できる。さらに記載されたものに同等のプラ
スミドは当業界で知られ、当業者に明らかであろう。
それに続く大文字および／または数字により示す。出発
プラスミドは商業的に入手可能で限定されずに公的に入
手できるか、公開された方法に従い入手可能なプラスミ
ドから構築できる。さらに記載されたものに同等のプラ
スミドは当業界で知られ、当業者に明らかであろう。
【０１０４】ＤＮＡの「消化」とは、ＤＮＡのある配列の
みに作用する制限酵素でＤＮＡを触媒的に解裂すること
をいう。本明細書で用いる様々な制限酵素は商業的に入
手でき、その反応条件、コファクターおよび他の必要条
件は当業者に知られているように用いられた。分析目的
のために、典型的には１μgのプラスミドまたはＤＮＡ
フラグメントを約２０μlの緩衝溶液中で約２単位の酵
素と共に用いる。プラスミド構築のためのＤＮＡフラグ
メントを単離する目的のために、典型的には５〜５０μ
gのＤＮＡをより大きい体積中で２０〜２５０単位の酵
素で消化する。個々の制限酵素のための適当な緩衝剤お
よび基質量は製造者により指定されている。３７℃にお
ける約１時間のインキュベーション時間を通常用いる
が、供給者の指示に従い変更してよい。消化後、反応物
をポリアクリルアミドゲルで直接電気泳動して所望のフ
ラグメントを単離する。解裂したフラグメントの大きさ
による分離は、Ｇoeddel,Ｄ等、Ｎucleic Ａcid Ｒe
s．、８:４０５７(１９８０)により記載された８％ポリ
アクリルアミドゲルを用いて行う。
みに作用する制限酵素でＤＮＡを触媒的に解裂すること
をいう。本明細書で用いる様々な制限酵素は商業的に入
手でき、その反応条件、コファクターおよび他の必要条
件は当業者に知られているように用いられた。分析目的
のために、典型的には１μgのプラスミドまたはＤＮＡ
フラグメントを約２０μlの緩衝溶液中で約２単位の酵
素と共に用いる。プラスミド構築のためのＤＮＡフラグ
メントを単離する目的のために、典型的には５〜５０μ
gのＤＮＡをより大きい体積中で２０〜２５０単位の酵
素で消化する。個々の制限酵素のための適当な緩衝剤お
よび基質量は製造者により指定されている。３７℃にお
ける約１時間のインキュベーション時間を通常用いる
が、供給者の指示に従い変更してよい。消化後、反応物
をポリアクリルアミドゲルで直接電気泳動して所望のフ
ラグメントを単離する。解裂したフラグメントの大きさ
による分離は、Ｇoeddel,Ｄ等、Ｎucleic Ａcid Ｒe
s．、８:４０５７(１９８０)により記載された８％ポリ
アクリルアミドゲルを用いて行う。
【０１０５】「オリゴヌクレオチド」とは、化学的に合成
し得る、一本鎖ポリデオキシヌクレオチド、または２つ
の相補性ポリヌクレオチド鎖をいう。そのような合成オ
リゴヌクレオチドは５'リン酸を有さず、従ってキナー
ゼの存在下にＡＴＰによりリン酸を付加せずに他のオリ
ゴヌクレオチドにライゲートしないであろう。合成オリ
ゴヌクレオチドは脱リン酸化されていないフラグメント
にライゲートするであろう。
し得る、一本鎖ポリデオキシヌクレオチド、または２つ
の相補性ポリヌクレオチド鎖をいう。そのような合成オ
リゴヌクレオチドは５'リン酸を有さず、従ってキナー
ゼの存在下にＡＴＰによりリン酸を付加せずに他のオリ
ゴヌクレオチドにライゲートしないであろう。合成オリ
ゴヌクレオチドは脱リン酸化されていないフラグメント
にライゲートするであろう。
【０１０６】「ライゲーション」とは、２つの２本鎖核酸
フラグメント間にホスホジエステル結合を形成する工程
をいう(Ｍaniatis,Ｔ．等、同書、１４６ページ)。特に
ことわらない限り、ライゲーションは、ライゲートすべ
きＤＮＡの約当量の０.５μg当り１０単位のＴ４ＤＮＡ
リガーゼ(「リガーゼ」)と共に公知の緩衝液および条件を
用いて行い得る。
フラグメント間にホスホジエステル結合を形成する工程
をいう(Ｍaniatis,Ｔ．等、同書、１４６ページ)。特に
ことわらない限り、ライゲーションは、ライゲートすべ
きＤＮＡの約当量の０.５μg当り１０単位のＴ４ＤＮＡ
リガーゼ(「リガーゼ」)と共に公知の緩衝液および条件を
用いて行い得る。
【０１０７】ことわらない限り、トランスフォーメーシ
ョンは、Ｇraham,ＦおよびＶan der Ｅb,Ａ、Ｖirolo
gy、５２:４５６−４５７(１９７３)の方法に記載され
た如く行った。
ョンは、Ｇraham,ＦおよびＶan der Ｅb,Ａ、Ｖirolo
gy、５２:４５６−４５７(１９７３)の方法に記載され
た如く行った。
【０１０８】
【０１０９】実施例１ ヒトの大人の組織におけるＦＧＦ−１０mＲＮＡの組成
分布 ＦＧＦ−１０mＲＮＡの発現を分析するために、プロー
ブとして放射ラベルした完全なＦＧＦ−１０cＤＮＡを
用いて、いくつかのヒトの成人組織からのポリＡ＋mＲ
ＮＡ２μgでノーザーン分析を行った。その結果は、１.
４kbメッセージが骨格筋で最も豊富に発現され、中間レ
ベルで心臓、脳、胎盤、腎臓および膵臓中で、低レベル
で肝臓中で発現されることを示す。心臓では、４.４k
b、２.４kbおよび０.５kbの大きさの３つの他のフラグ
メントも存在する。心臓中のこの異なる大きさのmＲＮ
Ａは別のスプライシングから生じるらしい。脳では４.
４kbのmＲＮＡも存在する。膜に結合したいくつかのヒ
ト成人組織からのポリＡ＋mＲＮＡ２μｇを有するナイ
ロンブロットは、Ｃlontech Ｌaboratories,Ｉnc．Ｐa
loＡlto、カリホルニアから得た。そのブロットをラン
ダムプライムラベリングにより放射活性dＣＴＰでラベ
ルした完全なＦＧＦ−１０cＤＮＡとハイブリダイズさ
せた。ハイブリダイゼーションは７％ＳＤＳ、０.５Ｍ
ＮaＰＯ４、pＨ７.２、１％ＢＳＡ中で、６５℃で一晩
行った。０.２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中で６５℃で２
×３０分洗滌の後、そのブロットを、スクリーンを強化
してＸ線フイルムに一晩さらした。
分布 ＦＧＦ−１０mＲＮＡの発現を分析するために、プロー
ブとして放射ラベルした完全なＦＧＦ−１０cＤＮＡを
用いて、いくつかのヒトの成人組織からのポリＡ＋mＲ
ＮＡ２μgでノーザーン分析を行った。その結果は、１.
４kbメッセージが骨格筋で最も豊富に発現され、中間レ
ベルで心臓、脳、胎盤、腎臓および膵臓中で、低レベル
で肝臓中で発現されることを示す。心臓では、４.４k
b、２.４kbおよび０.５kbの大きさの３つの他のフラグ
メントも存在する。心臓中のこの異なる大きさのmＲＮ
Ａは別のスプライシングから生じるらしい。脳では４.
４kbのmＲＮＡも存在する。膜に結合したいくつかのヒ
ト成人組織からのポリＡ＋mＲＮＡ２μｇを有するナイ
ロンブロットは、Ｃlontech Ｌaboratories,Ｉnc．Ｐa
loＡlto、カリホルニアから得た。そのブロットをラン
ダムプライムラベリングにより放射活性dＣＴＰでラベ
ルした完全なＦＧＦ−１０cＤＮＡとハイブリダイズさ
せた。ハイブリダイゼーションは７％ＳＤＳ、０.５Ｍ
ＮaＰＯ４、pＨ７.２、１％ＢＳＡ中で、６５℃で一晩
行った。０.２×ＳＳＣ、０.１％ＳＤＳ中で６５℃で２
×３０分洗滌の後、そのブロットを、スクリーンを強化
してＸ線フイルムに一晩さらした。
【０１１０】実施例２ インビトロ転写および翻訳によるＦＧＦ−１０の発現 ＦＧＦ−１０ cＤＮＡ(ＡＴＣＣ＃７５６９６)をインビ
トロで転写し、翻訳して、完全鎖長の、および部分的な
ＦＧＦ−１０cＤＮＡによりコードされた翻訳可能なポ
リプペチドの大きさを決定した。pＢluescript ＳＫベ
クター中のＦＧＦ−１０の完全鎖長および部分的cＤＮ
Ａ挿入物を３対のプライマー、１)Ｍ１３−逆および順
プライマー;２)Ｍ１３−逆プライマーおよびＦＧＦプラ
イマーＰ２０;３)Ｍ１３−逆プライマーおよびＦＧＦプ
ライマーＰ２２を用いるＰＣＲにより増幅した。これら
のプライマーの配列は以下の通りである。 Ｍ１３−２逆プライマー: ５'−ＡＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧ−３'
(配列番号３) この配列はpＢluescriptベクター中のＦＧＦ−１０ cＤ
ＮＡ挿入物の５'末端の上流に配置され、そのcＤＮＡに
関してアンチセンス配位である。Ｔ３プロモーター配列
をこのプライマーとＦＧＦ−１０cＤＮＡの間に配置す
る Ｍ１３−２順プライマー: ５'−ＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ−３'
(配列番号４) この配列はpＢluescriptベクター中のＦＧＦ−１０ cＤ
ＮＡの３'末端の下流に配置され、そのcＤＮＡ挿入物に
関してアンチセンス配位である。 ＦＧＦプライマーＰ２０: ５'−ＧＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧ
ＧＡ−３' (配列番号５) ３'プライム上のこのプライマーの１５bp配列は、終止
コドンから１２bp下流にある、ＦＧＦ−１０c ＤＮＡ配
列bp７８０−７６６にアンチセンスである。 ＦＧＦプライマーＰ２２: ５'−ＣＣＡＣＣＧＡＴＡＡＴＣＣＴＣＣＴＴ−３'
(配列番号６) この配列はアンチセンス配位でＦＧＦ−１０ cＤＮＡの
内部に配置され、停止コドンから約２１３bp下流にあ
る。 ３対のプライマーすべてについてのＰＣＲ反応は、cＤ
ＮＡ挿入物の前部でＴ３プロモーター配列による増幅さ
れた生成物を産生する。３対のプライマーのすべては完
全鎖長ＦＧＦ−１０ポリペプチドをコードするＰＣＲ産
物を産生する。第１のプライマー対からの約１μgのＰＣ
Ｒ産物、第２のプライマー対からの０.３μg、第３のプ
ライマー対からの０.３μgをインビトロ転写／翻訳に用
いた。インビトロ転写／翻訳反応を、ＴＮＴＴＭ Ｃoup
led Ｒeticulocyte Ｌysate Ｓystems (Ｐromega、
ＣＡＴ＃Ｌ４９５０)を用いて、２５μl体積中で行っ
た。具体的には、その反応は、１２.５μlのＴＮＴラビ
ット網状赤血球溶解産物、２μlのＴＮＴ反応緩衝液、
１μlのＴ３ポリメラーゼ、１μlの１mＭアミノ酸混合
物(メチオニンを除く)、４μlの３５Ｓ−メチオニン(＞
１０００Ｃi／mmol、１０mＣi／ml)、１μlの４０Ｕ／
μl,ＲＮasinリボヌクレアーゼ阻害剤、０.５または１
μgのＰＣＲ産物を含む。ヌクレアーゼを含まないＨ２
Ｏを加えて２５μlの体積にした。その反応を３０℃で
２時間インキュベートした。反応生成物の５μlを４−
２０％グラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分析した。
２５％イソプロパノールおよび１０％酢酸中で固定した
後、そのゲルを乾燥し、Ｘ線フイルムに一晩７０℃でさ
らした。図３に示すように完全鎖長ＦＧＦ−１０cＤＮ
Ａおよび３'非翻訳領域(３'−ＵＴＲ)に約３４０bpおよ
び約１４０bpを欠いたcＤＮＡは、同じ長さの翻訳産物
を生じ、その分子量は約１９kdであると見積られる(レ
ーン２−４)。本発明の様々な改変および変更は上記の
教示を考慮すれば可能であり、それ故特許請求の範囲の
範囲内にあり、本発明は特に記載した以外でも行い得
る。
トロで転写し、翻訳して、完全鎖長の、および部分的な
ＦＧＦ−１０cＤＮＡによりコードされた翻訳可能なポ
リプペチドの大きさを決定した。pＢluescript ＳＫベ
クター中のＦＧＦ−１０の完全鎖長および部分的cＤＮ
Ａ挿入物を３対のプライマー、１)Ｍ１３−逆および順
プライマー;２)Ｍ１３−逆プライマーおよびＦＧＦプラ
イマーＰ２０;３)Ｍ１３−逆プライマーおよびＦＧＦプ
ライマーＰ２２を用いるＰＣＲにより増幅した。これら
のプライマーの配列は以下の通りである。 Ｍ１３−２逆プライマー: ５'−ＡＴＧＣＴＴＣＣＧＧＣＴＣＧＴＡＴＧ−３'
(配列番号３) この配列はpＢluescriptベクター中のＦＧＦ−１０ cＤ
ＮＡ挿入物の５'末端の上流に配置され、そのcＤＮＡに
関してアンチセンス配位である。Ｔ３プロモーター配列
をこのプライマーとＦＧＦ−１０cＤＮＡの間に配置す
る Ｍ１３−２順プライマー: ５'−ＧＧＧＴＴＴＴＣＣＣＡＧＴＣＡＣＧＡＣ−３'
(配列番号４) この配列はpＢluescriptベクター中のＦＧＦ−１０ cＤ
ＮＡの３'末端の下流に配置され、そのcＤＮＡ挿入物に
関してアンチセンス配位である。 ＦＧＦプライマーＰ２０: ５'−ＧＴＧＡＧＡＴＣＴＧＡＧＧＧＡＡＧＡＡＧＧＧ
ＧＡ−３' (配列番号５) ３'プライム上のこのプライマーの１５bp配列は、終止
コドンから１２bp下流にある、ＦＧＦ−１０c ＤＮＡ配
列bp７８０−７６６にアンチセンスである。 ＦＧＦプライマーＰ２２: ５'−ＣＣＡＣＣＧＡＴＡＡＴＣＣＴＣＣＴＴ−３'
(配列番号６) この配列はアンチセンス配位でＦＧＦ−１０ cＤＮＡの
内部に配置され、停止コドンから約２１３bp下流にあ
る。 ３対のプライマーすべてについてのＰＣＲ反応は、cＤ
ＮＡ挿入物の前部でＴ３プロモーター配列による増幅さ
れた生成物を産生する。３対のプライマーのすべては完
全鎖長ＦＧＦ−１０ポリペプチドをコードするＰＣＲ産
物を産生する。第１のプライマー対からの約１μgのＰＣ
Ｒ産物、第２のプライマー対からの０.３μg、第３のプ
ライマー対からの０.３μgをインビトロ転写／翻訳に用
いた。インビトロ転写／翻訳反応を、ＴＮＴＴＭ Ｃoup
led Ｒeticulocyte Ｌysate Ｓystems (Ｐromega、
ＣＡＴ＃Ｌ４９５０)を用いて、２５μl体積中で行っ
た。具体的には、その反応は、１２.５μlのＴＮＴラビ
ット網状赤血球溶解産物、２μlのＴＮＴ反応緩衝液、
１μlのＴ３ポリメラーゼ、１μlの１mＭアミノ酸混合
物(メチオニンを除く)、４μlの３５Ｓ−メチオニン(＞
１０００Ｃi／mmol、１０mＣi／ml)、１μlの４０Ｕ／
μl,ＲＮasinリボヌクレアーゼ阻害剤、０.５または１
μgのＰＣＲ産物を含む。ヌクレアーゼを含まないＨ２
Ｏを加えて２５μlの体積にした。その反応を３０℃で
２時間インキュベートした。反応生成物の５μlを４−
２０％グラジエントＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルで分析した。
２５％イソプロパノールおよび１０％酢酸中で固定した
後、そのゲルを乾燥し、Ｘ線フイルムに一晩７０℃でさ
らした。図３に示すように完全鎖長ＦＧＦ−１０cＤＮ
Ａおよび３'非翻訳領域(３'−ＵＴＲ)に約３４０bpおよ
び約１４０bpを欠いたcＤＮＡは、同じ長さの翻訳産物
を生じ、その分子量は約１９kdであると見積られる(レ
ーン２−４)。本発明の様々な改変および変更は上記の
教示を考慮すれば可能であり、それ故特許請求の範囲の
範囲内にあり、本発明は特に記載した以外でも行い得
る。
【０１１１】
【配列表】(1) 一般的情報： (ｉ) 特許出願人：ヒュ等 (ii) 発明の名称：腺維芽細胞成長因子−１０ (iii) 配列の数：6 (iv) 連絡先： (A) 住所：カレラ, バーン, ベーン, ギルフィーラン,
セッチ，ステュアート及びオルステイン (B) 通り：ベッカー・フォーム・ロード６番 (C) 市：ローズランド (D) 州：ニュージャージー (E) 国：アメリカ合衆国 (F) ZIP：07068 (v) コンピューター解読書式： (A) 媒体型：3.5インチディスケット (B) コンピューター：IBM PS/2 (C) オペレーティングシステム：MS-DOS (D) ソフトウェア：ワードパーフェクト5.1 (vi) 本出願のデータ： (A) 出願番号： (B) 出願番号：同時 (C) 分類： (vii) 優先権主張出願のデータ： (A) 出願番号：O8/207,412 (B) 出願日：1994年3月8日 (viii) 弁理士／代理人情報： (A) 氏名：フェルラロ，グレゴリー・ディ (B) 登録番号：36,134 (C) 参照/整理番号：325800-347 (xi) 電話連絡先情報： (A) 電話番号：201-994-1700 (B) ファックス番号：201-994-1744 (2) 配列番号1の情報： (ｉ) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：1121塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：cDNA (xi) 配列の記述：配列番号1：
セッチ，ステュアート及びオルステイン (B) 通り：ベッカー・フォーム・ロード６番 (C) 市：ローズランド (D) 州：ニュージャージー (E) 国：アメリカ合衆国 (F) ZIP：07068 (v) コンピューター解読書式： (A) 媒体型：3.5インチディスケット (B) コンピューター：IBM PS/2 (C) オペレーティングシステム：MS-DOS (D) ソフトウェア：ワードパーフェクト5.1 (vi) 本出願のデータ： (A) 出願番号： (B) 出願番号：同時 (C) 分類： (vii) 優先権主張出願のデータ： (A) 出願番号：O8/207,412 (B) 出願日：1994年3月8日 (viii) 弁理士／代理人情報： (A) 氏名：フェルラロ，グレゴリー・ディ (B) 登録番号：36,134 (C) 参照/整理番号：325800-347 (xi) 電話連絡先情報： (A) 電話番号：201-994-1700 (B) ファックス番号：201-994-1744 (2) 配列番号1の情報： (ｉ) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：1121塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：cDNA (xi) 配列の記述：配列番号1：
【数１】 (2) 配列番号2の情報： (ｉ) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：181 アミノ酸S (B) 配列の種類：アミノ酸 (C) 鎖の数： (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：タンパク質 (xi) 配列の記述：配列番号2：
【数２】 (2) 配列番号3の情報： (i) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：18塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：オリゴヌクレオチド (xi) 配列の記述：配列番号3：
【数３】 (2) 配列番号4の情報： (i) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：19塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：オリゴヌクレオチド (xi) 配列の記述：配列番号4：
【数４】 (2) 配列番号5の情報： (i) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：24塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：オリゴヌクレオチド (xi) 配列の記述：配列番号5：
【数５】 (2) 配列番号6の情報： (i) 配列の特徴 (A) 配列の長さ：18塩基対 (B) 配列の種類：核酸 (C) 鎖の数：一本鎖 (D) トポロジー：直鎖状 (ii) 分子の種類：オリゴヌクレオチド (xi) 配列の記述：配列番号6：
【数６】
【図１】 ＦＧＦ−１０のcＤＮＡ配列および対応する
推定されるアミノ酸配列を示す。示したアミノ酸配列は
該プロテインの成熟形を示す。アミノ酸についての標準
的な１文字省略を用いている。配列決定の不正確さはポ
リヌクレオチド配列を決定することを試みる場合の一般
的な問題である。配列決定は３７３自動ＤＮＡシークエ
ンサー(Ａpplied Ｂiosystems., Inc．)を用いて行っ
た。配列決定の正確さは９７％以上の正確さであると予
想される。
推定されるアミノ酸配列を示す。示したアミノ酸配列は
該プロテインの成熟形を示す。アミノ酸についての標準
的な１文字省略を用いている。配列決定の不正確さはポ
リヌクレオチド配列を決定することを試みる場合の一般
的な問題である。配列決定は３７３自動ＤＮＡシークエ
ンサー(Ａpplied Ｂiosystems., Inc．)を用いて行っ
た。配列決定の正確さは９７％以上の正確さであると予
想される。
【図２】 ＦＧＦ−１０のcＤＮＡ配列および対応する
推定されるアミノ酸配列を示す。示したアミノ酸配列は
該プロテインの成熟形を示す。アミノ酸についての標準
的な１文字省略を用いている。配列決定の不正確さはポ
リヌクレオチド配列を決定することを試みる場合の一般
的な問題である。配列決定は３７３自動ＤＮＡシークエ
ンサー(Ａpplied Ｂiosystems., Inc．)を用いて行っ
た。配列決定の正確さは９７％以上の正確さであると予
想される
推定されるアミノ酸配列を示す。示したアミノ酸配列は
該プロテインの成熟形を示す。アミノ酸についての標準
的な１文字省略を用いている。配列決定の不正確さはポ
リヌクレオチド配列を決定することを試みる場合の一般
的な問題である。配列決定は３７３自動ＤＮＡシークエ
ンサー(Ａpplied Ｂiosystems., Inc．)を用いて行っ
た。配列決定の正確さは９７％以上の正確さであると予
想される
【図３】 ＦＧＦ−１０と他のＦＧＦファミリーのメン
バーとのアミノ酸配列相同性を説明する。保存されたア
ミノ酸を太線で示す。
バーとのアミノ酸配列相同性を説明する。保存されたア
ミノ酸を太線で示す。
【図４】 ＦＧＦ−１０と他のＦＧＦファミリーのメン
バーとのアミノ酸配列相同性を説明する。保存されたア
ミノ酸を太線で示す。
バーとのアミノ酸配列相同性を説明する。保存されたア
ミノ酸を太線で示す。
【図５】 ＦＧＦ−１０タンパク質のインビトロ転写／
翻訳後のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
翻訳後のＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｐ 17/14 ４Ｃ０８６ 48/00 17/16 ４Ｈ０４５ Ａ６１Ｐ 17/02 35/00 17/14 43/00 １０５ 17/16 １１１ 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/50 43/00 １０５ 16/18 １１１ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ０７Ｋ 14/50 21/08 16/18 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 33/50 Ｚ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 37/02 33/50 37/24 (72)発明者 ジン−シャン・ヒュ アメリカ合衆国20878メリーランド州ゲイ ザーズバーグ、ハワード・ランディング・ ドライブ16125番 (72)発明者 ジーニー・ディ・ゴカイン アメリカ合衆国20902メリーランド州シル バー・スプリング、ハーモン・ロード2715 番 Ｆターム(参考） 2G045 AA40 DA12 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA44 BA80 CA04 CA09 DA03 DA05 DA11 EA04 GA11 HA14 HA15 HA17 4B063 QA01 QA05 QA19 QQ02 QQ42 QQ79 QR32 QR48 QR51 QR55 QR62 QR77 QS25 QS34 QX02 QX07 4B064 AG13 AG27 CA02 CA10 CA19 DA03 DA13 4C084 AA02 AA06 BA01 BA08 BA22 BA23 CA18 CA53 CA59 DB54 NA14 ZA892 ZA922 ZB212 ZB262 ZC022 4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA89 ZA92 ZB21 ZB26 ZC02 4H045 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA76 EA20 EA50
Claims (1)
- 【請求項１】 本願明細書に記載したいずれかの発明
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/207,412 | 1994-03-08 | ||
| US08/207,412 US5817485A (en) | 1994-03-08 | 1994-03-08 | Nucleic acids and cells for recombinant production of fibroblast growth factor-10 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7523645A Division JPH09510103A (ja) | 1994-03-08 | 1995-03-08 | 線維芽細胞成長因子−１０ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002335982A true JP2002335982A (ja) | 2002-11-26 |
Family
ID=22770445
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7523645A Ceased JPH09510103A (ja) | 1994-03-08 | 1995-03-08 | 線維芽細胞成長因子−１０ |
| JP2002058893A Pending JP2002335982A (ja) | 1994-03-08 | 2002-03-05 | 線維芽細胞成長因子−１０ |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7523645A Ceased JPH09510103A (ja) | 1994-03-08 | 1995-03-08 | 線維芽細胞成長因子−１０ |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5817485A (ja) |
| EP (2) | EP0750628B1 (ja) |
| JP (2) | JPH09510103A (ja) |
| CN (1) | CN1150804A (ja) |
| AT (1) | ATE251637T1 (ja) |
| AU (1) | AU1986195A (ja) |
| CA (1) | CA2183961A1 (ja) |
| CZ (1) | CZ260696A3 (ja) |
| DE (1) | DE69531892T2 (ja) |
| DK (1) | DK0750628T3 (ja) |
| ES (1) | ES2208676T3 (ja) |
| FI (1) | FI963475A (ja) |
| HU (1) | HUT77578A (ja) |
| IL (1) | IL112878A0 (ja) |
| MX (1) | MX9603897A (ja) |
| NO (1) | NO963728L (ja) |
| PL (1) | PL316202A1 (ja) |
| PT (1) | PT750628E (ja) |
| SK (1) | SK112996A3 (ja) |
| WO (1) | WO1995024414A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA951886B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013544361A (ja) * | 2010-11-23 | 2013-12-12 | ケーシーアイ ライセンシング インク | バイオマーカーを用いた創傷の診断及び治療用の装置及び方法 |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7153827B1 (en) | 1994-03-08 | 2006-12-26 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 and methods of use |
| US6040157A (en) * | 1994-03-08 | 2000-03-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 |
| EP0751992B1 (en) | 1994-03-08 | 2005-11-09 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 |
| US6734285B2 (en) | 1994-03-08 | 2004-05-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 proteins and compositions |
| US7186688B1 (en) | 1994-03-08 | 2007-03-06 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods of stimulating angiogenesis in a patient by administering vascular endothelial growth factor 2 |
| US5932540A (en) | 1994-03-08 | 1999-08-03 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 |
| US7109308B1 (en) | 1994-03-08 | 2006-09-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies to human vascular endothelial growth factor 2 |
| US6608182B1 (en) | 1994-03-08 | 2003-08-19 | Human Genome Sciences, Inc. | Human vascular endothelial growth factor 2 |
| US5693775A (en) * | 1995-05-12 | 1997-12-02 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Fibroblast growth factor homologous factor-1 (FHF-1) and methods of use |
| US5773252A (en) | 1995-06-05 | 1998-06-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Fibroblast growth factor 15 |
| KR19990008319A (ko) * | 1995-06-05 | 1999-01-25 | 벤슨로버트에이치 | 섬유아세포 성장 인자 15 |
| US6020189A (en) * | 1996-08-30 | 2000-02-01 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Fibroblast growth factor homologous factors (FHFs) and methods of use |
| US6812327B1 (en) | 1996-10-25 | 2004-11-02 | Human Genome Sciences, Inc. | Neutrokine-alpha polypeptides |
| US8212004B2 (en) | 1999-03-02 | 2012-07-03 | Human Genome Sciences, Inc. | Neutrokine-alpha fusion proteins |
| JPH10279501A (ja) * | 1997-02-10 | 1998-10-20 | Rohto Pharmaceut Co Ltd | 育毛剤 |
| US6335317B1 (en) * | 1998-04-10 | 2002-01-01 | Emory University | Use of gut-trophic growth factors to improve oxidative status |
| US7223724B1 (en) | 1999-02-08 | 2007-05-29 | Human Genome Sciences, Inc. | Use of vascular endothelial growth factor to treat photoreceptor cells |
| WO2000071152A1 (en) * | 1999-05-21 | 2000-11-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Fibroblast growth factor 10 |
| PT2281843T (pt) | 2000-06-16 | 2017-01-02 | Human Genome Sciences Inc | Anticorpos que se ligam imunoespecificamente a blys |
| US7879328B2 (en) | 2000-06-16 | 2011-02-01 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to B lymphocyte stimulator |
| AU8473401A (en) | 2000-08-04 | 2002-02-18 | Human Genome Sciences, Inc. | Vascular endothelial growth factor 2 |
| AU2001288301A1 (en) | 2000-08-18 | 2002-03-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Binding polypeptides and methods based thereon |
| US7402312B2 (en) | 2001-04-13 | 2008-07-22 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies to vascular endothelial growth factor 2 (VEGF-2) |
| KR20030093316A (ko) | 2001-04-13 | 2003-12-06 | 휴먼 게놈 사이언시즈, 인코포레이티드 | 혈관 내피 성장 인자 ２ |
| US20060183712A1 (en) * | 2005-02-17 | 2006-08-17 | The Texas A&M University System | Affinity purified heparin/heparan sulfate for controlling the biological activity of the FGF receptor |
| US9168286B2 (en) | 2005-10-13 | 2015-10-27 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods and compositions for use in treatment of patients with autoantibody positive disease |
| US8211649B2 (en) | 2006-03-31 | 2012-07-03 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods of diagnosing and prognosing hodgkin's lymphoma |
| KR101187871B1 (ko) | 2009-09-23 | 2012-10-05 | (주)케어젠 | Ｆｇｆ１０－유래 펩타이드 및 그의 용도 |
| CN103169658A (zh) * | 2012-10-26 | 2013-06-26 | 温州医学院 | 成纤维细胞生长因子-10脂质体制备及在毛发再生中的应用 |
| EP4183796A1 (en) | 2021-11-19 | 2023-05-24 | Enantis s.r.o. | Thermostable fgf10 polypeptide or fragment thereof use thereof |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5155214A (en) * | 1984-03-05 | 1992-10-13 | The Salk Institute For Biological Studies | Basic fibroblast growth factor |
| US4868113A (en) * | 1986-03-03 | 1989-09-19 | Rorer Biotechnology, Inc. | Recombinant DNA vector encoding human endothelial cell growth factor |
| JP3303211B2 (ja) * | 1991-04-26 | 2002-07-15 | 武田薬品工業株式会社 | ｂＦＧＦムテインおよびその製造法 |
| WO1994003199A1 (en) * | 1992-08-04 | 1994-02-17 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Method of enhancing differentiation and survival of neuronal precursor cells |
-
1994
- 1994-03-08 US US08/207,412 patent/US5817485A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-03-03 IL IL11287895A patent/IL112878A0/xx unknown
- 1995-03-07 ZA ZA951886A patent/ZA951886B/xx unknown
- 1995-03-08 PT PT95912829T patent/PT750628E/pt unknown
- 1995-03-08 HU HU9602434A patent/HUT77578A/hu unknown
- 1995-03-08 EP EP95912829A patent/EP0750628B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 AT AT95912829T patent/ATE251637T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-03-08 CN CN95192340A patent/CN1150804A/zh active Pending
- 1995-03-08 DK DK95912829T patent/DK0750628T3/da active
- 1995-03-08 JP JP7523645A patent/JPH09510103A/ja not_active Ceased
- 1995-03-08 WO PCT/US1995/002950 patent/WO1995024414A1/en active IP Right Grant
- 1995-03-08 SK SK1129-96A patent/SK112996A3/sk unknown
- 1995-03-08 ES ES95912829T patent/ES2208676T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-03-08 CA CA002183961A patent/CA2183961A1/en not_active Abandoned
- 1995-03-08 PL PL95316202A patent/PL316202A1/xx unknown
- 1995-03-08 CZ CZ962606A patent/CZ260696A3/cs unknown
- 1995-03-08 AU AU19861/95A patent/AU1986195A/en not_active Abandoned
- 1995-03-08 MX MX9603897A patent/MX9603897A/es unknown
- 1995-03-08 DE DE69531892T patent/DE69531892T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-08 EP EP03022286A patent/EP1380594A1/en not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-09-05 FI FI963475A patent/FI963475A/fi not_active Application Discontinuation
- 1996-09-06 NO NO963728A patent/NO963728L/no unknown
-
2001
- 2001-07-12 US US09/902,773 patent/US20020034787A1/en not_active Abandoned
-
2002
- 2002-03-05 JP JP2002058893A patent/JP2002335982A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013544361A (ja) * | 2010-11-23 | 2013-12-12 | ケーシーアイ ライセンシング インク | バイオマーカーを用いた創傷の診断及び治療用の装置及び方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO963728L (no) | 1996-11-07 |
| PT750628E (pt) | 2004-03-31 |
| US5817485A (en) | 1998-10-06 |
| AU1986195A (en) | 1995-09-25 |
| JPH09510103A (ja) | 1997-10-14 |
| US20020034787A1 (en) | 2002-03-21 |
| EP0750628B1 (en) | 2003-10-08 |
| MX9603897A (es) | 1997-07-31 |
| FI963475A (fi) | 1996-11-05 |
| DE69531892T2 (de) | 2004-07-22 |
| FI963475A0 (fi) | 1996-09-05 |
| PL316202A1 (en) | 1996-12-23 |
| ATE251637T1 (de) | 2003-10-15 |
| ZA951886B (en) | 1996-09-09 |
| EP1380594A1 (en) | 2004-01-14 |
| ES2208676T3 (es) | 2004-06-16 |
| DK0750628T3 (da) | 2004-02-02 |
| CA2183961A1 (en) | 1995-09-14 |
| SK112996A3 (en) | 1997-01-08 |
| CZ260696A3 (en) | 1997-05-14 |
| NO963728D0 (no) | 1996-09-06 |
| CN1150804A (zh) | 1997-05-28 |
| IL112878A0 (en) | 1995-06-29 |
| EP0750628A4 (en) | 1997-06-11 |
| WO1995024414A1 (en) | 1995-09-14 |
| HU9602434D0 (en) | 1996-11-28 |
| EP0750628A1 (en) | 1997-01-02 |
| HUT77578A (hu) | 1998-06-29 |
| DE69531892D1 (de) | 2003-11-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002335982A (ja) | 線維芽細胞成長因子−１０ | |
| JP4439490B2 (ja) | 血管内皮細胞増殖因子２ | |
| US6608182B1 (en) | Human vascular endothelial growth factor 2 | |
| US7439333B2 (en) | Vascular endothelial growth factor 2 | |
| US6521227B1 (en) | Polynucleotides encoding prostatic growth factor and process for producing prostatic growth factor polypeptides | |
| US20060057117A1 (en) | Vascular endothelial growth factor 2 | |
| US20070166310A1 (en) | Prostatic Growth Factor | |
| CA2322748A1 (en) | Vascular endothelial growth factor 2 | |
| WO1995020398A1 (en) | Human growth hormone | |
| US6342370B1 (en) | Human slit polypeptide and polynucleotides encoding same | |
| WO1996018730A1 (en) | Prostatic growth factor | |
| US5869284A (en) | DNA encoding retinotic acid receptor epsilon | |
| US7109308B1 (en) | Antibodies to human vascular endothelial growth factor 2 | |
| US6358702B1 (en) | Polynucleotides encoding human Hox C10 | |
| JPH11507504A (ja) | 線維芽細胞増殖因子１３ | |
| US20030022312A1 (en) | Human hepatoma-derived growth factor-2 | |
| US20020098515A1 (en) | Cytostatin I | |
| US20020049304A1 (en) | Human CCN-like growth factor | |
| MXPA96003897A (en) | Factor 10 of fibroblas growth | |
| CA2206640A1 (en) | Human vascular ibp-like growth factor | |
| CA2413012A1 (en) | Human vascular endothelial growth factor 2 | |
| JP2002247983A (ja) | ヒト血管ｉｂｐ様成長因子 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040622 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20041116 |