JPH10113191A

JPH10113191A - ヒトインターフェロンτ変異体

Info

Publication number: JPH10113191A
Application number: JP9223318A
Authority: JP
Inventors: Masako Ishimura; 雅子石村; Takashi Nishigaki; 隆西垣
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1996-08-21
Filing date: 1997-08-20
Publication date: 1998-05-06

Abstract

(57)【要約】【課題】ウイルス感染症、腫瘍または自己免疫疾患に
対する予防または治療剤として有用な、活性の高いヒト
インターフェロンτ変異体を提供する。【解決手段】配列表の配列番号８に示されるアミノ酸
配列において、少なくともアミノ酸番号８６のArg がCy
s で置換され、アミノ酸番号８５のCys がCys以外のア
ミノ酸で置換されているアミノ酸配列を含むことからな
り、インターフェロン活性を有することを特徴とするポ
リペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ウイルス感染症、
腫瘍および自己免疫疾患の治療に有効な、細胞毒性の少
ないインターフェロン変異体、およびその遺伝子操作に
よる製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターフェロンは、生体内でリンパ球
や線維芽細胞などさまざまな細胞が産生する生理活性タ
ンパク質で、抗ウイルス作用や抗ガン作用を有する。イ
ンターフェロンにはさまざまなサブタイプが存在する
が、そのうちＩ型インターフェロンとして分類されるも
のとしては、インターフェロンα、インターフェロンβ
およびインターフェロンωがよく知られている。特にイ
ンターフェロンαおよびβは抗ウイルス剤として利用さ
れており、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による慢性肝炎
に対して、長期大量投与（１０⁶ ＩＵ／個体、週３回、
６ヶ月間）により、２０乃至４０％の患者において有効
性が示されている［Davis, G. L., et. al.,（1989）N.
Engl. J. Med. 321, 1501およびDiBisceglie, A. M.,
et al., （1989）N. Engl. J. Med. 321, 1506参照］。

【０００３】一方、インターフェロンτは、当初、妊娠
後１０日から２１日にかけてヒツジ受胎産物（conceptu
s ）より分泌されるタンパク質（ヒツジトロフォブラス
トプロテイン−１（ＯＴＰ−１））として同定された
［Wilson, et al. (1979) Biology of Reproduction 20
(Supp.1): 101A 、およびBazer, F. W., et al. (198
6) J. Reporduction and Fertility 76, 841 参照］。
ＯＴＰ−１は排卵誘発作用を有するプロスタグランジン
Ｆ２αの子宮内への分泌を抑制する作用を有していたた
め［Bazer, F. W., et al. (1986) Biology of Reprodu
ction 76, 841 参照］、妊娠の成立に関与する機能を有
するものと考えられた。後に、ＯＴＰ−１が種々の動物
のインターフェロンαとの間に高いアミノ酸配列相同性
（５０乃至７０％）を有しており［Imakawa, K., et. a
l. (1987) Nature 330, 377 参照］、またＩ型インター
フェロンレセプターに結合する性質を有していることが
明らかとなり［Stewart, H. J., et al. (1987) J. End
ocrinol. 115, R13 参照］、国際インターフェロン協会
により、新たなＩ型インターフェロンファミリーに属す
る活性タンパク質として認められた。

【０００４】その後、ヒツジインターフェロンτ（ｏＩ
ＦＮτ）をコードする遺伝子を大腸菌中で発現後、リフ
ォールディングにより活性化された組換え体が、抗ウイ
ルス活性［Stewart, H. J., et al. (1987) J. Endocri
nol. 115, R13 および Pontzer, C. H., et al. (1988)
Biochem. Biophys. Res. Commun. 152, 801参照］、抗
腫瘍活性［Pontzer, C. H. et al. (1991) Cancer Res.
51, 5304 参照］、自己免疫抑制活性［Soos, J. M. an
d Johnson, H. M. (1995) J. IFN. Cytokine Res. 15,
39参照］を有することが示された。さらに、インターフ
ェロンαおよびβに比してその細胞毒性が低く［Subram
aniam, P. S., et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 92, 12270-12274参照］、生体における副作用発現
も低い可能性が示唆されている。また、特開平３−２７
２８８号公報には、ウシインターフェロンτの一次構造
が開示されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】ヒト型インターフェロ
ンτをコードするＤＮＡは、今川らによってヒト胎盤由
来のｃＤＮＡライブラリーよりヒトインターフェロンω
配列由来のプローブを用いてクローニングされている
［Imakawa, K., et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 1
0864参照］。しかしながら、ヒト型インターフェロンτ
のアミノ酸配列をどのように変更すれば、より高い抗ウ
イルス活性を有する組換え体を得られるかについては全
く知られていない。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）配列
表の配列番号８に示されるアミノ酸配列において、少な
くとも、アミノ酸番号８６のArg がCys で置換され、か
つアミノ酸番号８５のCys がCys以外のアミノ酸で置換
されているアミノ酸配列を含むことからなり、インター
フェロン活性を有することを特徴とするポリペプチド
（ただし、ヒツジインターフェロンτおよびウシインタ
ーフェロンτを除く）、に関する。該ポリペプチドは、
好適には、（２）（１）において、配列表の配列番号
８のアミノ酸番号８５のCys がLeu で置換されているポ
リペプチド、であり、より好適には、（３）（２）に
おいて、配列表の配列番号８のアミノ酸番号８４のPro
がGln で置換されているポリペプチド、であり、さらに
好適には、（４）配列表の配列番号２のアミノ酸番号
１から１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからな
る（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、（５）配列表の配列番号４のアミノ酸番号１から
１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからなる、
（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、（６）配列表の配列番号６のアミノ酸番号１から
１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからなる、
（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、（７）本質的に配列表の配列番号２のアミノ酸番
号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、
（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、（８）本質的に配列表の配列番号４のアミノ酸番
号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、
（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、（９）本質的に配列表の配列番号６のアミノ酸番
号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、
（１）乃至（３）のいずれか１つに記載のポリペプチ
ド、であり、最も好適には（７）乃至（９）記載のポリ
ペプチドである。

【０００７】本発明はまた、（１０）（１）乃至
（９）のいずれか１つに記載のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列を含むことからなるＤＮＡ、に関す
る。該ＤＮＡは、好適には、（１１）形質転換大腸菌
Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−
５６０２）が保持する組換えＤＮＡベクターより得るこ
とができる、（１０）記載のＤＮＡ、（１２）配列表
の配列番号１のヌクレオチド番号４から５１９で示され
るヌクレオチド配列を含むことからなる、（１０）記載
のＤＮＡ、（１３）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉ
ｐＴ７ＩＦＮτｄ２（ＦＥＲＭＢＰ−５６０３）が保持
する組換えＤＮＡベクターより得ることができる、（１
０）記載のＤＮＡ、（１４）配列表の配列番号３のヌ
クレオチド番号４から５１９で示されるヌクレオチド配
列を含むことからなる、（１０）記載のＤＮＡ、（１
５）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτ
ｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０４）が保持する組換えＤＮ
Ａベクターより得ることができる、（１０）記載のＤＮ
Ａ、（１６）配列表の配列番号５のヌクレオチド番号
４から５１９で示されるヌクレオチド配列を含むことか
らなる、（１０）記載のＤＮＡ、（１７）（１１）乃
至（１６）のいずれか１つに記載のＤＮＡとハイブリダ
イズし、インターフェロン活性を有するポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列を含むことからなるＤＮ
Ａ、（１８）（１１）乃至（１６）のいずれか１つに
記載のＤＮＡと６×ＳＳＣ、５５℃の条件でハイブリダ
イズし、インターフェロン活性を有するポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列を含むことからなるＤＮ
Ａ、であり、より好適には、（１１）乃至（１６）記載
のＤＮＡである。

【０００８】本発明はさらに、（１９）（１０）乃至
（１８）のいずれか１つに記載のＤＮＡを含む組換えＤ
ＮＡベクター、を提供する。該ベクターは、好適には、
（２０）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦ
Ｎτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−５６０２）に保持される、
（１９）記載の組換えＤＮＡベクター、（２１）形質
転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ２（ＦＥ
ＲＭＢＰ−５６０３）に保持される、（１９）記載の組
換えＤＮＡベクター、（２２）形質転換大腸菌Ｅ．
ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０
４）に保持される、（１９）記載の組換えＤＮＡベクタ
ー、である。

【０００９】さらにまた、本発明は、（２３）（１
９）乃至（２２）のいずれか１つに記載の組換えＤＮＡ
ベクターで形質転換された宿主細胞、に関する。該宿主
細胞は、好適には、（２４）大腸菌であることを特徴
とする、（２３）記載の宿主細胞、であり、最も好適に
は、（２５）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７
ＩＦＮτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−５６０２）である、（２
３）または（２４）記載の宿主細胞、（２６）形質転
換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ２（ＦＥＲ
ＭＢＰ−５６０３）である、（２３）または（２４）記
載の宿主細胞、（２７）形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌ
ｉｐＴ７ＩＦＮτｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０４）で
ある、（２３）または（２４）記載の宿主細胞、であ
る。

【００１０】本発明は、（２８）（２３）乃至（２
７）のいずれか１つに記載の宿主細胞をインターフェロ
ン活性を有するポリペプチドの産生が可能な条件下で培
養し、次いで該培養物からインターフェロン活性を有す
るポリペプチドを回収することを特徴とする、インター
フェロン活性を有するポリペプチドの製造方法、をも提
供するものである。

【００１１】さらに、本発明は、（２９）治療上有効
な量の（１）乃至（９）のいずれか１つに記載のポリペ
プチドを含むことからなる医薬組成物、（３０）治療
上有効な量の（１）乃至（９）のいずれか１つに記載の
ポリペプチドを含むことからなる、ウイルス感染症の予
防または治療のための医薬組成物、（３１）治療上有
効な量の（１）乃至（９）のいずれか１つに記載のポリ
ペプチドを含むことからなる、腫瘍の予防または治療の
ための医薬組成物、（３２）治療上有効な量の（１）
乃至（９）のいずれか１つに記載のポリペプチドを含む
ことからなる、自己免疫疾患の予防または治療のための
医薬組成物、に関するものである。

【００１２】本発明者らは、ヒトインターフェロンτ
（以下「ｈＩＦＮτ」という）のアミノ酸配列に最小限
の置換を施すべく該アミノ酸配列をコードする遺伝子に
変異を導入し、該変異遺伝子を含むプラスミドで大腸菌
を形質転換して該変異遺伝子を発現させた結果、強力な
抗ウイルス活性を有する変異体を作出することに成功
し、本発明を完成させた。

【００１３】本発明において「インターフェロン活性を
有する」とは、既知の他のＩ型インターフェロン同様、
抗ウイルス作用、抗腫瘍作用または自己免疫反応抑制作
用を有することをいう。

【００１４】また、本発明において「ｈＩＦＮτ変異
体」とは、今川らの文献［Imakawa, K., et al. (1994)
J. Biol. Chem. 269, 10864参照］に記載されたｈＩＦ
Ｎτのアミノ酸配列（配列表の配列番号８のアミノ酸番
号２〜１７２）中の１つまたは２つ以上の部位におい
て、１つまたは２つ以上のアミノ酸残基が付加、置換、
欠失または挿入されているアミノ酸配列からなり、イン
ターフェロン活性を有するポリペプチドをいう。

【００１５】上記の定義における「付加、置換、欠失ま
たは挿入」の程度は特に限定されないが、ｈＩＦＮτ変
異体を医薬としてヒト生体内に投与することが目的であ
る場合は、ヒトに対する免疫原性を高めないよう、イン
ターフェロン活性を向上せしめる最小限の変異であるこ
とが好ましい。具体的には、本発明のポリペプチドは、
少なくとも配列表の配列番号８のアミノ酸番号８５のCy
s がCys 以外のアミノ酸で、アミノ酸番号８６のArg が
Cys でそれぞれ置換されているポリペプチドであり、好
適には少なくとも配列表の配列番号８のアミノ酸番号８
５のCys がLeuで、アミノ酸番号８６のArg がCys でそ
れぞれ置換されているポリペプチドであり、より好適に
は少なくとも配列表の配列番号８のアミノ酸番号８４の
Pro がGln で、アミノ酸番号８５のCys がLeu で、アミ
ノ酸番号８６のArg がCys でそれぞれ置換されているポ
リペプチドであり、さらに好適には配列表の配列番号
２、４または６のアミノ酸番号１から１７２に示される
アミノ酸配列を含むことからなるポリペプチドであり、
最も好適には、本質的に配列表の配列番号２、４または
６のアミノ酸番号１から１７２に示されるアミノ酸配列
からなるポリペプチドであるが、本発明はこれらに限定
されない。ここで、「本質的に」とは例えば配列表の配
列番号２、４または６のアミノ酸番号１から１７２に示
されるアミノ酸配列からなるポリペプチドに糖が付加さ
れ、かつインターフェロン活性を保持する場合等をい
う。

【００１６】

【発明の実施の形態】本発明のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列を含むことからなるＤＮＡは、ｈＩ
ＦＮτとして知られているアミノ酸配列［Imakawa, K.,
et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 10864参照］（配
列表の配列番号８のアミノ酸番号１から１７２；以下
「ｈＩＦＮτ配列」という）を基に、ｈＩＦＮτ配列の
１つまたは２つ以上の部位において、１つまたは２つ以
上のアミノ酸残基が付加、置換、欠失または挿入された
アミノ酸配列をコードするように、ｈＩＦＮτ配列をコ
ードするヌクレオチド配列を改変するか、または所望の
ｈＩＦＮτ変異体アミノ酸配列をコードするヌクレオチ
ド配列を全合成することにより得ることができる。

【００１７】ｈＩＦＮτ配列をコードするＤＮＡは、文
献に記載された方法に従って、ＩＦＮτを産生するヒト
組織または細胞株から作製されたｃＤＮＡライブラリー
からクローニングすることにより得られる［Imakawa,
K., et al. (1994) J. Biol.Chem. 269, 10864参照］。

【００１８】また、例えば大腸菌で組換えタンパク質を
生産する目的で、大腸菌での使用頻度の高いコドンを用
いてｈＩＦＮτ配列をコードするヌクレオチド配列から
なるＤＮＡを人工的に調製することもできる。この場
合、シグナルペプチド部分は不要であるから、成熟型タ
ンパク質のＮ末端に開始メチオニンコドンが付加された
ものをコードするＤＮＡを調製することができる。な
お、本発明の好適な実施態様においては、通常、翻訳に
より生成したポリペプチドのＮ末端メチオニンは、精製
に至るまでの過程で自動的に除去される。

【００１９】ｈＩＦＮτ配列をコードするＤＮＡに所望
の改変を加える方法としては、該改変部位をコードする
部分を含む合成オリゴＤＮＡを用いて部位特異的変異を
導入する方法（インビトロ・ミュータジェネシス）［Ma
rk, D. F., et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. US
A 81, 5662-5666 参照］、またポリメラーゼ連鎖反応
（以下「ＰＣＲ」という）［Saiki, R. K., et al (198
8) Science 239, 487-491 参照］を利用して該アミノ酸
をコードするＤＮＡ部分を付け加える方法などを利用す
ることができる。

【００２０】なお、本発明のポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列からなるＤＮＡを保持する発現ベクタ
ーで形質転換された大腸菌株Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦ
Ｎτｄ１、Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ２および
Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ３が、平成８（１９９
６）年７月２３日付で工業技術院生命工学工業技術研究
所に国際寄託され、それぞれ受託番号ＦＥＲＭＢＰ−
５６０２、ＦＥＲＭＢＰ−５６０３およびＦＥＲＭ
ＢＰ−５６０４が付されている。これらの菌株よりプラ
スミドを単離することにより、本発明の好適なＤＮＡを
調製することができる。

【００２１】また、所望の変異体をコードするＤＮＡを
全合成することもできる［Hunkapiller, M., et al (19
84) Nature 310, 105-111 参照］。例えば、両端がオー
バーラップするように、センスおよびアンチセンス部分
配列を合成し、ＰＣＲ等のＤＮＡポリメラーゼ反応を利
用してそれら部分配列が連結された全配列を構築するこ
ともできる。

【００２２】一般に、真核生物の遺伝子は、多型現象(p
olymorphism)を示すことがあり［例えば、Nishi, T., e
t al. (1985) J. Biochem. 97, 153-159参照］、この多
型現象によって１個またはそれ以上のアミノ酸が置換さ
れる場合もあれば、ヌクレオチドの変化はあってもアミ
ノ酸は全く変わらない場合もある。ｈＩＦＮτのアミノ
酸配列の中の、一つもしくは二つ以上の部位において、
一つもしくは二つ以上のアミノ酸残基が欠失、挿入もし
くは置換されているポリペプチドであっても、インター
フェロン活性を有することがある。これらのポリペプチ
ドを本発明のｈＩＦＮτポリペプチドの同効物と呼ぶ。

【００２３】例えば、インターロイキン２（ＩＬ−２）
遺伝子のシステインに相当するヌクレオチド配列をセリ
ンに相当するヌクレオチド配列に変換して得られたタン
パク質がＩＬ−２活性を保持することも既に公知となっ
ている［Wang, A., et al. (1984) Science 224, 1431-
1433参照］。それゆえ、人工的に設計・発現されたｈＩ
ＦＮτポリペプチド変異体の同効物も本発明に含まれ
る。

【００２４】なお、所望のアミノ酸に対するコドンはそ
れ自体公知であり、その選択も任意でよく、例えば利用
する宿主のコドン使用頻度を考慮して常法に従い決定で
きる［Grantham, R., et al. (1981) Nucleic Acids Re
s. 9, r43-r74 参照］。さらに、これらヌクレオチド配
列のコドンの一部改変は、前述の部位特異的変異導入法
等に従って行うことができる。

【００２５】また、あるＤＮＡが配列表の配列番号１、
３または５のヌクレオチド番号４から５１９に示される
ヌクレオチド配列を有するＤＮＡとハイブリダイズする
か否かは、以下のようにして調べることができる。すな
わち、まず被検検体のＤＮＡを必要に応じてアガロース
ゲル電気泳動した後、ニトロセルロースまたはナイロン
等の膜にブロットし、吸着したＤＮＡを熱処理や紫外線
照射等により膜に固定する。配列表の配列番号１、３ま
たは５のヌクレオチド番号４から５１９に示されるヌク
レオチド配列を含むことからなるＤＮＡを、ランダムプ
ライマー法［Feinberg, A. P., et al. (1983) Anal. B
iochem., 132, 6-13参照］、ニックトランスレーション
法［Maniatis, T., et al. (1982) "Molecular Clonin
g: A Laboratory Manual" Cold Spring Harbor Laborat
ory, New York参照］等に従って、³²Ｐ、³⁵Ｓ等の放射
性同位元素、ビオチン、ジゴキシゲニンまたは酵素等で
標識したプローブを作製する。該プローブを含むハイブ
リダイゼーション溶液中に膜を浸して、所定の温度でイ
ンキュベーションした後、膜を洗浄し、それぞれの標識
に即した方法によりプローブを検出する。ハイブリダイ
ゼーション溶液中に含まれるＳＳＣ（salined-sodium c
itrate：「クエン酸ナトリウム−生理食塩水液」；１×
ＳＳＣは０．１５Ｍの塩化ナトリウム、１５ｍＭのクエ
ン酸ナトリウムを含む）の濃度は好適には４乃至８×Ｓ
ＳＣ、より好適には６×ＳＳＣである。また、インキュ
ベーション温度は好適には３０乃至７０℃、より好適に
は６０℃である。

【００２６】上記の方法を利用することにより、配列表
の配列番号１、３または５のヌクレオチド番号４から５
１９に示されるヌクレオチド配列を含むことからなるＤ
ＮＡとハイブリダイズするＤＮＡを、種々のｃＤＮＡラ
イブラリーまたはゲノムライブラリーからクローニング
することができる。

【００２７】このようにして得られた本発明のｈＩＦＮ
τ変異体をコードするＤＮＡを、好適なベクターＤＮＡ
に組込むことにより、原核生物または真核生物の宿主細
胞を形質転換させることができる。さらに、これらのベ
クターに適当なプロモーターおよび形質転換にかかわる
配列を導入することにより、それぞれの宿主細胞におい
て遺伝子を発現させることが可能である。

【００２８】原核細胞の宿主としては、例えば大腸菌
（Escherichia coli）や枯草菌（Bacillus subtilis ）
等が挙げられる。目的の遺伝子をこれらの宿主細胞内で
形質発現させるには、宿主と適合し得る種由来のレプリ
コン、すなわち複製起点および調節配列を含んでいるプ
ラスミドベクターで宿主細胞を形質転換させればよい。
またベクターは形質転換細胞に表現形質（表現型）の選
択性を付与することができる配列を持つものが望まし
い。

【００２９】例えば大腸菌としてはＥ．ｃｏｌｉＫ１
２株等がよく用いられ、ベクターとしては一般にｐＢＲ
３２２やｐＵＣ系のプラスミドがよく用いられるが、こ
れに限定されず、公知の各種の菌株及びベクターがいず
れも利用できる。

【００３０】プロモーターとしては、大腸菌においては
トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター、ラクトース
（ｌａｃ）プロモーター、トリプトファン・ラクトース
（ｔａｃ）プロモーター、リポプロテイン（ｌｐｐ）プ
ロモーター、バクテリオファージ由来のラムダ（λ）Ｐ
Ｌプロモーター、ポリペプチド鎖伸長因子Ｔｕ（ｔｕｆ
Ｂ）プロモーター等が挙げられ、どのプロモーターも本
発明のポリペプチドの産生に使用することができる。

【００３１】枯草菌としては、例えば２０７−２５株が
好ましく、ベクターとしてはｐＴＵＢ２２８［Ohmura,
K., et al. (1984) J. Biochem. 95, 87-93 参照］等が
用いられるが、これに限定されるものではない。枯草菌
用プロモーターとしては、枯草菌のα−アミラーゼ遺伝
子の調節配列がよく用いられ、さらに必要によりα−ア
ミラーゼのシグナルペプチド配列をコードするＤＮＡ配
列を連結することにより、菌体外での分泌発現も可能と
なる。

【００３２】宿主細胞として大腸菌を用いる場合を例に
挙げると、発現ベクターとしては、ｐＢＲ３２２複製起
点を有し、大腸菌において自律増殖が可能であり、さら
に転写プロモーター、翻訳開始シグナルを備えたものを
用いることができる。該発現ベクターはカルシウム−ク
ロライド法［Mandel, M. and Higa, A. (1970) J. Mol.
Biol. 53, 154参照］、ハナハンの方法［Hanahan, D.
(1983) J. Mol. Biol.166, 557-580 参照］および電気
パルス穿孔法［Neumann, E., et al. (1982) EMBO J.
1, 841-845 参照］等により大腸菌に取り込ませること
ができ、かくして所望のベクターがトランスフェクトさ
れた細胞を得ることができる。

【００３３】真核生物の宿主細胞には、脊椎動物、昆
虫、酵母等の細胞が含まれ、脊椎動物細胞としては、例
えばサルの細胞であるＣＯＳ細胞［Gluzman, Y. (1981)
Cell23, 175-182 参照］やチャイニーズハムスター卵
巣細胞（ＣＨＯ）のジヒドロ葉酸レダクターゼ欠損株
［Urlaub, G. and Chasin, L. A. (1980) Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 77, 4216-4220参照］、ヒトナマルバ細
胞、ハムスターＢＨＫ細胞等がよく用いられるが、これ
らに限定されない。

【００３４】脊椎動物細胞の発現ベクターとしては、通
常発現させようとする遺伝子の上流に位置するプロモー
ター、ＲＮＡのスプライス部位、ポリアデニル化部位お
よび転写終結配列等を有するものを使用でき、これはさ
らに必要により複製起点を有してもよい。該発現ベクタ
ーの例としては、ＳＶ４０の初期プロモーターを有する
ｐＳＶ２ｄｈｆｒ［Subramani, S., et al. (1981) Mo
l. Cell. Biol. 1, 854-864参照］等を例示できるが、
これに限定されない。

【００３５】また真核微生物としては酵母が一般によく
用いれられており、その中でもサッカロミセス属酵母、
例えばサッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces ce
revisiae）が好ましい。該酵母等の真核生物の発現ベク
ターとしては、例えばアルコール脱水素酵素遺伝子のプ
ロモーター［Bennetzen, J. L. and Hall, B. D. (198
2) J. Biol. Chem. 257, 3018-3025 参照］や酸性ホス
ファターゼ遺伝子のプロモーター［Miyanohara, A., et
al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 1-5参
照］等を好ましく利用できる。

【００３６】宿主細胞として、ＣＯＳ細胞を用いる場合
を例に挙げると、発現ベクターとしては、ＳＶ４０複製
起点を有し、ＣＯＳ細胞において自立増殖が可能であ
り、さらに転写プロモーター、転写集結シグナルおよび
ＲＮＡスプライス部位を備えたものを用いることができ
る。該発現ベクターはＤＥＡＥ−デキストラン法［Luth
man, H. and Magnusson, G. (1983) Nucleic Acids Re
s. 11, 1295-1308 参照］、リン酸カルシウム−ＤＮＡ
共沈澱法［Graham, F. L. and van der Ed, A. J.(197
3) Virology 52, 456-457 参照］および電気パルス穿孔
法［Neumann, E., et al. (1982) EMBO J. 1, 841-845
参照］等によりＣＯＳ細胞に取り込ませることができ、
かくして所望の形質転換細胞を得ることができる。ま
た、宿主細胞としてＣＨＯ細胞を用いる場合には、発現
ベクターと共にＧ４１８耐性マーカーとして機能するｎ
ｅｏ遺伝子を発現し得るベクター、例えばｐＲＳＶｎｅ
ｏ［Sambrook, J., et al. (1989) "Molecular Clonin
g: A Laboratory Manual" Cold Spring Harbor Laborat
ory, NY参照］やｐＳＶ２ｎｅｏ［Southern, P. J. and
Berg, P. (1982) J. Mol. Appl. Genet. 1, 327-341
参照］等をコ・トランスフェクトし、Ｇ４１８耐性のコ
ロニーを選択することにより本発明のポリペプチドを安
定に産生する形質転換細胞を得ることができる。

【００３７】上記の方法によって得られる所望の形質転
換体は、常法に従って培養することができ、該培養によ
り細胞内または細胞外に本発明のポリペプチドが生産さ
れる。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主
細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択でき、例
えば、大腸菌であればトリプトン−イースト培地（バク
トトリプトン１．６％、イーストエキストラクト
１．０％、塩化ナトリウム０．５％（ｐＨ７．０））
やペプトン培地（ディフコ社製）等を使用できる。ま
た、上記ＣＯＳ細胞であればＲＰＭＩ−１６４０培地や
ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）等の培地に必
要に応じウシ胎児血清（ＦＢＳ）等の血清成分を添加し
たものを使用できる。

【００３８】なお、本発明の好適なポリペプチドをコー
ドするＤＮＡを含む発現ベクターで形質転換された大腸
菌株Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ１、Ｅ．ｃｏｌｉ
ｐＴ７ＩＦＮτｄ２およびＥ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦ
Ｎτｄ３は、平成８（１９９６）年７月２３日付で工業
技術院生命工学工業技術研究所に国際寄託され、それぞ
れ受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５６０２、ＦＥＲＭＢＰ
−５６０３およびＦＥＲＭＢＰ−５６０４が付されて
いる。これらの菌株を上記のごとく培養することによ
り、本発明のポリペプチドを生産することができる。

【００３９】上記方法によって形質転換体の細胞内また
は細胞外に生産される本発明のポリペプチドは、その物
理的性質や化学的性質等を利用した各種の公知の分離操
作法により、分離・精製することができる。かかる方法
としては、具体的には例えば通常のタンパク質沈澱剤に
よる処理、限外ろ過、分子ふるいクロマトグラフィー
（ゲルろ過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換ク
ロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィ
ー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種
クロマトグラフィー、透析法、これらの組合せ等を例示
できる。

【００４０】外来遺伝子を大腸菌等に導入して大量発現
させた場合、産生されたポリペプチドが、封入体と呼ば
れる水に不溶の集塊を形成することがある。そのような
場合、グアニジンイソチオシアネート等の強力な変性剤
を用いて該ポリペプチドを変性させることにより該ポリ
ペプチドを可溶化することができるが、変性したポリペ
プチドは、本来の高次構造を形成していないため活性を
有していないことが多い。また、封入体を形成しない場
合でも、産生されたポリペプチドが、正しい高次構造を
形成しないままの状態であったり、精製中に変性したり
することにより、不活性型として得られることもある。
そのような場合には、ポリペプチドに正しい高次構造を
形成させて活性型のタンパク質を得る目的で、当業者に
周知のリフォールディング技術［例えば、Klemann, S.
W., et al. (1990) Molecular Endocrinology 4, 1506-
1514および Yamada, K., et al. (1990) Biotechnology
8, 1036-1040 参照］を用いることができる。

【００４１】上記のごとくして得られる本発明のポリペ
プチドがインターフェロン活性を有するか否かは、例え
ば以下に記載するような方法により調べることができ
る。

【００４２】〔１〕抗ウイルス活性［Pestka, S. (198
1) Methods in Enzymology vol.78,386 参照］：９６穴
細胞培養プレート中で、ウシ腎由来の細胞株ＭＤＢＫ
（例えば、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクシ
ョン（以下「ATCC」という） No. CCL22）を、被検試料
を含む培地で培養後、水疱性口内炎ウイルス（Vesicula
r Stomatitis Virus：例えば、ATCC No. VR-159 ）を添
加し感染させる。一定時間培養した後、各ウェルの細胞
をホルマリン固定し、クリスタルバイオレットで染色す
る。各ウェルの５５０ｎｍの吸光度を測定することによ
り、細胞変性作用の抑制活性として抗ウイルス活性を調
べることができる。

【００４３】〔２〕抗腫瘍活性［Pontzer, C. H., et a
l. (1991) Cancer Res. 51, 5304-5307 参照］：２４穴
細胞培養プレート中で、ヒト羊膜細胞株ＷＩＳＨ（例え
ば、ATCC No. CCL25）を、被検試料を含む培地で培養す
る。８日間培養後、各ウェルの細胞をホルマリン固定
し、クリスタルバイオレットで染色して、顕微鏡下で形
成コロニー数をカウントする。被検試料が抗腫瘍活性を
有する場合は、形成コロニー数が抑制される。

【００４４】〔３〕自己免疫疾患に対する効果［Soos,
J. M., et al. (1995) J. Immunol.155, 2747-2753 参
照］：ＮＺＷマウスをウシミエリンベーシックプロテイ
ンで免疫し、さらに百日咳毒素（pertussis toxin ）を
投与することにより、実験的アレルギー性脳脊髄炎を発
症させる。このマウスをしばらく飼育すると症状が消失
するが、ブドウ球菌外毒素Ｂ（Staphylococcul enterot
oxin B；以下「ＳＥＢ」という）を投与することにより
症状が再発する。このＳＥＢ投与の前に被検試料を投与
して、症状再発の抑制効果を検討する。

【００４５】なお、インターフェロン活性の測定方法は
これらに限定されず、当業者に周知の他の測定方法も用
いられ得る。

【００４６】本発明のポリペプチドは、ウイルス感染
症、腫瘍、自己免疫疾患ならびにそれらに付随して生ず
る各種疾患の処置において、単独または他の治療薬との
併用投与で用いられる。

【００４７】上記の症状を処置するために用いる本発明
のウイルス感染症、腫瘍または自己免疫疾患の予防また
は治療用組成物は、医学的に許容される担体と治療上有
効な量の本発明のポリペプチドとの混合物からなる。本
組成物は、種々の形態で投与することができ、それらの
投与形態としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
シロップ剤等による経口投与、または、注射剤、点滴
剤、坐薬などによる非経口投与をあげることができる。

【００４８】注射剤または点滴剤として投与される場
合、本発明の予防または治療剤組成物は発熱物質を含ま
ず、非経口的に許容可能な水溶液の態様である。ｐＨ、
等張性、および安定性を考慮して調製される上記の非経
口的に許容されうるタンパク質溶液の調剤は、当業者に
周知の技術により実施できる。

【００４９】上記症状の処置における投与量および投与
法は、本薬剤の作用に影響を及ぼし得る要因、例えば、
患者の症状、体重、性、年令、食餌、何らかの感染の重
度、投与の時間およびその他の臨床上影響を与える要因
を考慮して診察する医師によって決定されうる。通常、
経口投与では成人に対して１日約１ｎｇ乃至１００ｍｇ
であり、これらを１回または数回に分けて投与すること
ができる。また、非経口投与では、１回約１ｎｇないし
１００ｍｇを皮下注射、筋肉注射、または静脈注射によ
って投与することができる。

【００５０】本発明のウイルス感染症、腫瘍または自己
免疫疾患の予防または治療用組成物は、他の適当なウイ
ルス感染症、腫瘍または自己免疫疾患の予防または治療
剤と併用して用いられ得る。この場合、他のウイルス感
染症、腫瘍または自己免疫疾患の予防または治療剤は本
発明のウイルス感染症、腫瘍または自己免疫疾患の予防
または治療用組成物中の一成分として加えて用いること
ができるが、別々の組成物として同じ患者に投与するこ
ともできる。上記の併用は、他のウイルス感染症、腫瘍
または自己免疫疾患の予防または治療剤単独での処置の
活性または効果を増進しうる。

【００５１】本発明のウイルス感染症、腫瘍または自己
免疫疾患の予防または治療用組成物は、前述のｈＩＦＮ
τ変異体を主成分として含有する。他の成分としては、
一般的な医薬添加物が選ばれる。添加物がなくとも本発
明の目的は達成されるが、一般的には主として安定化の
ために添加物が加えられる。そのような医薬添加物とし
ては、局方に記載された、医薬添加物として使用できる
タンパク質または糖類の中から選ばれる。特に好適には
ヒト血清アルブミン、ゼラチン、マンニトール、ソルビ
トール、ラクトースなどの中から適宜あるいは組み合わ
せて選ばれるが、これらに限定されない。

【００５２】

【実施例】以下に参考例および実施例を挙げて、本発明
をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定され
ない。

【００５３】参考例．ｈＩＦＮτをコードするＤＮＡの
調製および大腸菌での発現１）ＤＮＡの調製ｈＩＦＮτの全アミノ酸配列［Imakawa, K., et al. (1
994) J. Biol. Chem.269, 10864参照］をコードするＤ
ＮＡを大腸菌で発現させるため、大腸菌のコドン使用頻
度（E. coli codon usage ）［Watson, J. D., et al.
"Molecular Biology of the Gene 4th Edition, 440,
Garland Publishing 参照］を参考にして、配列表の配
列番号７に示すＤＮＡを調製した。まず、以下に記載す
るヌクレオチド： 5'- ATGTGCGACC TGTCTCAGAA CCACGTTCTG GTTGGTCGTA AAAACCTGCG TCTGCTGGAC GAAATGC -3' （Ａ−１：配列表の配列番号９）； 5'- CGGTCCTGCA GGCAGAAGTG CGGAGACAGA CGACGCATTT CGTCCAGCAG ACGCA -3' （Ａ−２：配列表の配列番号１０）； 5'- TCTGCCTGCA GGACCGTAAG GACTTCGCTC TGCCGCAGGA AATGGTTGAA GGCGGCCAGC TGCAG -3' （Ａ−３：配列表の配列番号１１）； 5'- GAAGGACTGC TGCAGCATTT CGTGCAGAAC GGAGATAGCC TGAGCTTCCT GCAGCTGGCC GCCTTCAAC -3' （Ａ−４：配列表の配列番号１２）； 5'- AAATGCTGCA GCAGTCCTTC AACCTGTTCC ACACTGAACA CTCCTCTGCT GCTTGGGACA CT -3' （Ａ−５：配列表の配列番号１３）； 5'- CAGCTGCTGG TGCAGGCCAG TACGGCACGG TTCCAGCAGA GTAGTGTCCC AAGCAGCAGA GGA -3' （Ａ−６：配列表の配列番号１４）； 5'- ACTGGTCTGC ACCAGCAGCT GGACAACCTG GACGCTTGCC TAGGTCAGGT TATGGGCGAA GAAGAC -3' （Ａ−７：配列表の配列番号１５）； 5'- CAGAGTCGGA CCAGTACGAC CCAGAGCAGA GTCTTCTTCG CCCATAACCT GACC -3' （Ａ−８：配列表の配列番号１６）； 5'- CGTACTGGTC CGACTCTGGC TCTGAAACGT TACTTCCAAG GCATCCACGT TTACCTGAAG GAA -3' （Ａ−９：配列表の配列番号１７）； 5'- TTCCAGACGA ACAGTTTCCC AAGCGCAGTC GCTGTAGCCC TTTTCCTTCA GGTAAACGTG GAT -3' （Ａ−１０：配列表の配列番号１８）； 5'- TGGGAAACTG TTCGTCTGGA AATCATGCGT TCCTTCTCCT CTCTGATCAG CCTGCAG -3' （Ａ−１１：配列表の配列番号１９）； 5'- TCACGGAGAA GACAGGTCAC CGTCCATCAT ACGCAGACGT TCCTGCAGGC TGATCAGAGA GG -3' （Ａ−１２：配列表の配列番号２０）；をＤＮＡ合成機（モデル３９２：アプライド・バイオシ
ステムズ社製）にて合成した。

【００５４】次いで、Ａ−１とＡ−２、Ａ−３とＡ−
４、Ａ−５とＡ−６、Ａ−７とＡ−８、Ａ−９とＡ−１
０およびＡ−１１とＡ−１２の各組み合わせで、各約
０．１ｎｍｏｌのヌクレオチドを２種類づつ混合し、そ
れぞれ１サイクルあたり９６℃で３０秒、５４℃で１
分、７２℃で１分の条件にてＰＣＲを４サイクル実施し
た。なお、以下に記載する参考例および実施例中の全て
のＰＣＲにおいて、ＬＡＰＣＲキット・バージョン２
（宝酒造（株）社製）を使用した。鋳型ＤＮＡ以外の反
応液組成は以下に記載する通りであった：１０倍濃度ＬＡＰＣＲ緩衝液（Ｍｇ²⁺）（キットに添付）５μｌｄＮＴＰ混合液（キットに添付）８μｌプライマー（２０ｐｍｏｌ／μｌ）各０．５μｌＬＡＴａｑポリメラーゼ（５単位／μｌ，キットに添付）０．５μｌ滅菌蒸留水で全量５０μｌとする（ただし、上記の例の
ように、複数の鋳型を混合して相補鎖をアニーリングさ
せることにより、互いに一方の鋳型が他方の鋳型のプラ
イマーとなるような条件の反応においては、プライマー
は添加されない場合がある）。

【００５５】上記の各組合わせのオリゴヌクレオチド
は、いずれも３’末端側に互いに相補的な配列を有して
いる。ＰＣＲにおいて、まずこれら相補鎖がアニーリン
グし、次いで残りの一本鎖部分にポリメラーゼ反応によ
る相補鎖が生成されるので、結果として元のヌクレオチ
ドの鎖長の合計から重複部分を除いた鎖長の二本鎖ＤＮ
Ａが得られる。各反応生成物をポリアクリルアミドゲル
電気泳動し、目的の鎖長に相当するバンド部分のゲルを
切り出して、それぞれの反応で増幅されたＤＮＡ断片
（「Ａ−（１＋２）」、「Ａ−（３＋４）」、「Ａ−
（５＋６）」、「Ａ−（７＋８）」、「Ａ−（９＋１
０）」および「Ａ−（１１＋１２）」という）を抽出精
製した。

【００５６】次に、以下に記載するオリゴヌクレオチド
プライマー： 5'- ATACGGATCC CATATGTGCG ACCTGTCTCA GAACCACGTT CTG -3' （Ａ−１Ｐｒ：配列表の配列番号２１）； 5'- GAAGGACTGC TGCAGCATTT CCACC -3' （Ａ−４Ｐｒ：配列表の配列番号２２）； 5'- AAATGCTGCA GCAGTCCTTC AACCTG -3' （Ａ−５Ｐｒ：配列表の配列番号２３）； 5'- CAGAGTCGGA CCAGTACGAC CCAG -3' （Ａ−８Ｐｒ：配列表の配列番号２４）； 5'- CGTACTGGTC CGACTCTGGC TCTG -3' （Ａ−９Ｐｒ：配列表の配列番号２５）； 5'- TTAAGGATCC TCACGGAGAA GACAGGTCAC CGTCC -3' （Ａ−１２Ｐｒ：配列表の配列番号２６）を合成し、次いで、表１に記載する組み合わせでＰＣＲ
を実施した。

【００５７】

【表１】 ───────────────────────────────── 鋳型（２種類を混合）プライマー ───────────────────────────────── Ａ−（１＋２），Ａ−（３＋４）Ａ−１Ｐｒ，Ａ−４ＰｒＡ−（５＋６），Ａ−（７＋８）Ａ−５Ｐｒ，Ａ−８ＰｒＡ−（９＋１０），Ａ−（１１＋１２）Ａ−９Ｐｒ，Ａ−１２Ｐｒ ───────────────────────────────── ＰＣＲはいずれの場合も１サイクルあたり９８℃で３０
秒、５４℃で１分、７２℃で１分の条件で２０サイクル
実施した。各反応液中の２種類の鋳型は、３’末端側に
互いに相補的な配列を有するので、ＰＣＲによりこれら
の相補鎖で連結したＤＮＡが生成される。各反応生成物
をポリアクリルアミドゲル電気泳動し、目的の鎖長に相
当するバンドを切り出して、それぞれのＰＣＲで増幅さ
れたＤＮＡ断片（それぞれ「Ａ−（１〜４）」、「Ａ−
（５〜８）」および「Ａ−（９〜１２）」という）を精
製した。

【００５８】同様にして、Ａ−（１〜４）とＡ−（５〜
８）を混合して鋳型とし、Ａ−１ＰｒとＡ−８Ｐｒをプ
ライマーとするＰＣＲ（１サイクルにつき９８℃で１
分、５４℃で２分、７２℃で２分；２０サイクル）を実
施してＡ−（１〜４）とＡ−（５〜８）が接続されたＤ
ＮＡ（「Ａ−（１〜８）」という）を調製した。さら
に、Ａ−（１〜８）とＡ−（９〜１２）を混合して鋳型
とし、Ａ−１ＰｒとＡ−１２ＰｒをプライマーとしたＰ
ＣＲを実施して、配列表の配列番号７に示されるヌクレ
オチド配列を含むＤＮＡを得た。該ヌクレオチド配列
は、ｈＩＦＮτのアミノ酸配列をコードするＤＮＡの
５’末端に、翻訳開始のためのメチオニンコドンが付加
されているものである。

【００５９】２）発現ベクターの構築以下に記載するヌクレオチド： 5'- TCAAGGGCAT CGGTCGACGC TCTCC -3' （Ｓ１Ｐｒ：配列表の配列番号２７）； 5'- CTGAGACAGG TCGCACATAT GTATATCTCC TTC -3' （Ｓ２Ｐｒ：配列表の配列番号２８）を合成した。次にｐＡＲ３０４０ベクター［Rosenberg,
A. H., et al. (1987)Gene 56, 125-135参照］を鋳型
とし、上記Ｓ１ＰｒおよびＳ２Ｐｒをプライマーとして
ＰＣＲ（１サイクルにつき９８℃で１分、５４℃で２
分、７２℃で４分；２０サイクル）を実施して、該ベク
ター中に存在するＴ７プロモーターを含む領域（Ｓａｌ
Ｉ切断部位〜ＮｄｅＩ切断部位）と上記１）で得られた
ｈＩＦＮτをコードするＤＮＡの５’末端の１８ヌクレ
オチドが連結したＤＮＡ（配列表の配列番号２９：以下
「Ｔ７プロモーター含有断片」という）を増幅した。次
いで、上記１）で得られたｈＩＦＮτをコードするＤＮ
Ａを制限酵素ＮｄｅＩおよびＢａｍＨＩで消化してか
ら、０．１乃至０．３ｐｍｏｌとなるように１ｍＭ
エチレンジアミン四酢酸（以下「ＥＤＴＡ」という」）
を含む１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０：以
下「ＴＥ緩衝液」という）に溶解した。このものとＴ７
プロモーター含有断片とを混合して鋳型とし、Ｓ１Ｐｒ
とＡ−１２ＰｒをプライマーとしてＰＣＲ（１サイクル
につき９８℃で１分、５４℃で２分、７２℃で４分；２
０サイクル）を実施することにより鋳型どうしを接続し
た後、クローニングキット（ｐＣＲ−ＳｃｒｉｐｔＳ
Ｋ（＋）クローニングキット：ストラタジーン社製）を
添付された説明書に記載の方法で使用することによりプ
ラスミドベクターｐＣＲ−ＳｃｒｉｐｔＳＫ（＋）
に導入した。上記１）で得られたｈＩＦＮτをコードす
るＤＮＡのヌクレオチド配列はジデオキシ法［Sanger,
F. (1981) Science 214, 1205 参照］によるＤＮＡシー
クエンシングにより確認した。

【００６０】３）大腸菌における発現上記２）で作製したｈＩＦＮτ発現ベクター（図１）
を、ハナハン法［Hanahan, D. (1983) J. Mol. Biol. 1
66, 557-580 参照］により調製した大腸菌ＢＬ−２１
（ＤＥ３）株（ストラタジーン社製）のコンピテント細
胞５０μｌに加え、２０分間氷冷した後、３７℃で２
分間保温してから直ちに氷冷した。このものに５００μ
ｌのＳＯＣ培地（ギブコ・ビーアールエル社製）を加
え、３７℃で４０分間振盪培養した。この培養液を１０
０μｇ／ｍｌアンピシリンを含むＬ−ブロス寒天培地
プレート上に塗り広げ、３７℃で一晩培養した。出現し
たアンピシリン耐性コロニーを単離してＭ９ＣＡ培地に
接種し、培養液の６００ｎｍにおける吸光度（ＯＤ
_600nm ）が０．４から０．８に達するまで２４〜２６℃
で振盪培養した後、等量のＬ培地およびイソプロピルβ
−Ｄ−チオガラクトピラノシド（最終濃度１ｍＭ）を加
え、３７℃にてさらに４時間振盪培養した。ここで使用
された培地の組成は以下に記載する通りであった：Ｍ９ＣＡ培地：リン酸二ナトリウム１２水和物１５ｇリン酸一カリウム３ｇ塩化ナトリウム０．５ｇ塩化アンモニウム１ｇカザミノ酸２ｇ１Ｍ硫酸マグネシウム２００μｌ２０％グルコース１ｍｌ１Ｍ塩化カルシウム１０μｌ水１リットルＬ培地：バクト・トリプトン（ディフコ社製）１０ｇバクト・イーストエキストラクト（ディフコ社製）５ｇ塩化ナトリウム５ｇ水１リットルＬ−ブロス寒天培地：バクト・トリプトン１２．５ｇバクト・イーストエキストラクト３．７５ｇバクト・アガー（ディフコ社製）７．５ｇ水５００ｍｌ。

【００６１】４）粗精製上記３）の培養後の培養液を遠心分離して上清を除いた
後、沈澱した大腸菌体をフレンチプレスにて破砕した。
このものを２５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、未破
砕細胞および細胞破片を沈澱させてから、上清を１２０
００ｒｐｍで２５分間遠心分離し、沈澱を回収した。こ
の沈澱を１％トリトンＸ−１００を含む緩衝液（１０
０ｍＭ塩化ナトリウム、５０ｍＭトリス−塩酸（ｐ
Ｈ７．５））にて２回洗浄し、さらに１ｍＭフッ化
フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）を含むＴＥ緩衝
液にて１回洗浄後、６Ｍグアニジンイソチオシアネー
トおよび０．２５％２−メルカプトエタノールを含む
０．０１ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）にタ
ンパク質濃度が１ｍｇ／ｍｌとなるよう溶解し、その後
０．２５％２−メルカプトエタノールを含む０．０１
ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）を徐々に滴下
して１０倍に希釈した。希釈後の溶液を０．０２ｍＭ
トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）に対して４℃下で透
析した（透析チューブの分画分子量１０００；３時間毎
に膜外液を交換し、計１２時間実施した）後、透析チュ
ーブ内液を遠心分離（４６５０×ｇ、１５分）すること
により析出物を沈澱させた。得られた上清を、限外ろ過
膜（ビバポア、排出限界分子量７５００；ビバサイエン
ス社製）を用いて１０倍濃縮したものを、ｈＩＦＮτ試
料とした。

【００６２】５）精製およびアミノ酸配列確認０．０２ｍＭトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）にて
平衡化したＤＥＡＥ−セファロースカラム（ハイトラッ
プ・ファストフロー、５ｍｌ；ファルマシア社製）に、
上記４）で得られたｈＩＦＮτ試料を注入し、０から
０．５Ｍの塩化ナトリウム直線濃度勾配にて流速２ｍｌ
／分で溶出した。約０．２Ｍ塩化ナトリウムにて溶出
された画分をｈＩＦＮτ精製試料とした。

【００６３】得られた精製試料について、そのＮ末端の
アミノ酸配列を軒原らの方法［Nokihara, K., et al.
(1992) Analytical Letters 25, 513-533参照］に従っ
てプロテインシークエンサー（モデルＰＳＱ−１；島津
製作所（株）社製）で解析した結果、Cys Asp Leu Ser
Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu Arg Le
u LeuAsp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys L
eu Gln Asp Arg（配列表の配列番号３０）なる配列が確
認された。この配列は配列表の配列番号８のアミノ酸番
号１から３３に示されるアミノ酸配列と同一であること
から、翻訳開始のためにＮ末端に付加されたメチオニン
は発現から精製までのいずれかの過程で失われ、結果的
に天然の成熟型ｈＩＦＮτと同一のＮ末端アミノ酸配列
を有する組換え体が得られたことが判明した。

【００６４】実施例１．変異体（ｈＩＦＮτｄ１）をコ
ードするＤＮＡの調製および発現以下に記載するヌクレオチド： 5'- TCCAGCAGAG TAGTGTCCCA AGCAGC -3' （τｄ１−１Ｐｒ：配列表の配列番号３１）； 5'- GCTGCTTGGG ACACTACTCT GCTGGACCAG CTGTGCACTG GTCTGCAC -3' （τｄ１−２Ｐｒ：配列表の配列番号３２）；を合成した。次に前記参考例の１）で作製されたｈＩＦ
Ｎτ発現ベクターＤＮＡを制限酵素ＫｐｎＩおよびＳａ
ｃＩで消化し、アガロースゲル電気泳動後、約１ｋｂｐ
に相当するＤＮＡ断片を切り出した。このＤＮＡ断片を
鋳型とし、Ａ−１Ｐｒとτｄ１−１Ｐｒ、またτｄ１−
２ＰｒとＡ−１２Ｐｒを各々プライマーとして、ＰＣＲ
（１サイクルにつき９４℃で１分、３７℃で１分、７２
℃で３分；２５サイクル）を実施し、それぞれ増幅され
たＤＮＡ断片を回収した。得られた二つのＤＮＡ断片を
混合して鋳型とし、Ａ−１ＰｒとＡ−１２Ｐｒをプライ
マーとして再度ＰＣＲ（１サイクルにつき９４℃で１
分、３７℃で１分、７２℃で３分；２５サイクル）を実
施し、参考例の２）に記載した方法により変異体ｈＩＦ
Ｎτｄ１（配列表の配列番号２）をコードするヌクレオ
チド配列（配列表の配列番号１）を含むＤＮＡを大腸菌
で発現させるプラスミドｐＴ７ＩＦＮτｄ１を調製し
た。以下、参考例の２）から４）に記載した方法で該Ｄ
ＮＡを大腸菌で発現させ、ｈＩＦＮτｄ１ポリペプチド
試料を調製した。なお、ｐＴ７ＩＦＮτｄ１で形質転換
された大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ１は、平
成８（１９９６）年７月２３日付で工業技術院生命工学
工業技術研究所に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭＢ
Ｐ−５６０２が付された。

【００６５】実施例２．変異体（ｈＩＦＮτｄ２）をコ
ードするＤＮＡの調製および発現以下に記載するヌクレオチド： 5'- ATACGGATCC CATATGTGCG ACCTGTCTCA GTACCACGTT CTG -3' （τｄ２−１Ｐｒ：配列表の配列番号３３）を合成した。次に前記参考例の１）で作製されたｈＩＦ
Ｎτ発現ベクターＤＮＡを制限酵素ＫｐｎＩおよびＳａ
ｃＩで消化し、アガロースゲル電気泳動後、約１ｋｂｐ
に相当するＤＮＡ断片を切り出した。このＤＮＡ断片を
鋳型とし、τｄ２−１Ｐｒとτｄ１−１Ｐｒ、またはτ
ｄ１−２ＰｒとＡ−１２Ｐｒをプライマーとして、ＰＣ
Ｒ（１サイクルにつき９８℃で１分、５４℃で２分、７
２℃で２分；２０サイクル）を実施した。さらにそれぞ
れの増幅断片を混合したものを鋳型とし、τｄ２−１Ｐ
ｒとＡ−１２ＰｒをプライマーとしてＰＣＲ（１サイク
ルにつき９８℃で１分、５４℃で２分、７２℃で２分；
２０サイクル）を実施することにより、変異体ｈＩＦＮ
τｄ２（配列表の配列番号４）をコードするヌクレオチ
ド配列（配列表の配列番号３）を含むＤＮＡを得た。こ
のＤＮＡを用いて、参考例の２）に記載した方法でｈＩ
ＦＮτｄ２をコードするＤＮＡを大腸菌で発現させるプ
ラスミドｐＴ７ＩＦＮτｄ２を調製し、参考例の２）か
ら４）に記載した方法で該ＤＮＡを大腸菌で発現させ、
ｈＩＦＮτｄ２ポリペプチド試料を調製した。ただし、
参考例の２）に相当する工程において、以下に記載する
合成ヌクレオチド： 5'- ACTGAGACAG GTCGCACATA TGTATATCTC CTTC -3' （Ｓ３Ｐｒ：配列表の配列番号３４）をＳ２Ｐｒの代わりにプライマーとして使用した。な
お、ｐＴ７ＩＦＮτｄ２で形質転換された大腸菌Ｅ．ｃ
ｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ２は、平成８（１９９６）年
７月２３日付で工業技術院生命工学工業技術研究所に国
際寄託され、受託番号ＦＥＲＭＢＰ−５６０３が付さ
れた。

【００６６】実施例３．変異体（ｈＩＦＮτｄ３）をコ
ードするＤＮＡの調製および発現以下に記載するヌクレオチド： 5'- GCTGCTTGGG ACACTACTCT GCTGGAACAG CTGTGCACTG GTCTGCAC -3' （τｄ３−１Ｐｒ：配列表の配列番号３５）を合成した。さらに、実施例１で作製されたＩＦＮτｄ
１をコードするＤＮＡを制限酵素ＫｐｎＩおよびＳａｃ
Ｉで消化し、アガロースゲル電気泳動後、約１ｋｂｐに
相当するＤＮＡ断片を切り出した。このＤＮＡ断片を鋳
型とし、Ａ−１Ｐｒとτｄ１−１Ｐｒ、そしてτｄ３−
１ＰｒとＡ−１２Ｐｒをそれぞれプライマーとして、２
０サイクルのＰＣＲ（１サイクルにつき９８℃で１分、
５４℃で２分、７２℃で２分）を実施して、それぞれ増
幅された２つのＤＮＡ断片を回収した。これらのＤＮＡ
断片を混合して鋳型とし、Ａ−１ＰｒとＡ−１２Ｐｒを
プライマーとして２０サイクルのＰＣＲ（１サイクルに
つき９８℃で１分、５４℃で２分、７２℃で２分）を実
施することにより、変異体ｈＩＦＮτｄ３（配列表の配
列番号６）をコードするヌクレオチド配列（配列表の配
列番号５）を含むＤＮＡを得た。以下、参考例の２）に
記載した方法でｈＩＦＮτｄ３をコードするＤＮＡを大
腸菌で発現させるプラスミドｐＴ７ＩＦＮτｄ３を調製
し、さらに参考例の２）から４）に記載した方法で該Ｄ
ＮＡを大腸菌で発現させ、ｈＩＦＮτｄ３ポリペプチド
試料を調製した。なお、ｐＴ７ＩＦＮτｄ３で形質転換
された大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ７ＩＦＮτｄ３は、平
成８（１９９６）年７月２３日付で工業技術院生命工学
工業技術研究所に国際寄託され、受託番号ＦＥＲＭＢ
Ｐ−５６０４が付された。

【００６７】試験例．ＭＤＢＫ細胞（ATCC No. CCL22）
を用い、水疱性口内炎ウイルス（VesicularStomatitis
Virus）ニュージャージー（New Jersey）株（以下「Ｖ
ＳＶ」という）による細胞変性を抑制する活性として抗
ウイルス活性を測定する、インターフェロン力価測定の
常法［Pestka, S. (1981) Methods in Enzymology vol.
78, 386 参照］に従い、以下に記載する方法で抗ウイル
ス活性を測定した。

【００６８】まず、ＭＤＢＫ細胞を、１０％ウシ胎児血
清を含むダルベッコ変法イーグル培地（以下「ＤＭＥ
Ｍ」という）に３×１０⁵ 細胞／ｍｌとなるように懸濁
してから、この細胞懸濁液を９６穴の細胞培養用プレー
トの各ウェルに１００μｌずつ分注し、３７℃、５％炭
酸ガス下で培養した。細胞がウェル底に付着した後に、
参考例、実施例１乃至３で得られた試料をＤＭＥＭで段
階希釈したものを１００μｌ／ウェル加え、３７℃、５
％炭酸ガス下で１時間静置培養した。次いで、１．２５
×１０⁵ プラーク形成単位（Plaque Forming Unit ：Ｐ
ＦＵ）／ｍｌの感染価のＶＳＶを含むＤＭＥＭを５０μ
ｌ／ウェル加え、３７℃、５％炭酸ガス下で２０時間静
置培養した。

【００６９】培養終了後、各ウェルの細胞をホルマリン
固定してから、０．１％のクリスタルバイオレット溶液
にて染色し、洗浄後、５０％エタノール（１００μｌ／
ウェル）を加えて細胞に残存した色素を溶解させた。こ
のプレートの各ウェルについて、５５０ｎｍの吸光度を
測定した。ＶＳＶを添加しなかったウェルの吸光度を１
００％、ＶＳＶを添加し試料を添加しなかったウェルの
吸光度を０％として、吸光度が５０％となるような試料
濃度をＩＣ₅₀とした。また、力価定量のための対照とし
て、リコンビナントヒトインターフェロンα（３×１０
⁶ 国際単位（international unit：以下「ＩＵ」とい
う）／ｍｌ：コラボレイティブ・バイオメディカル・プ
ロダクツ社製）を段階希釈したものについて上記と同様
に抗ウイルス活性を測定した。このインターフェロンα
のＩＣ₅₀値を基準として、各試料の相対的な抗ウイルス
活性を求めた。

【００７０】参考例および実施例１乃至３で調製された
各ポリペプチド試料の抗ウイルス活性は表２に示す通り
であった。

【００７１】

【表２】 ─────────────────────────── 試料抗ウイルス活性（ＩＵ^* ／ｍｇ） ─────────────────────────── ｈＩＦＮτｄ１＞１０⁶ ｈＩＦＮτｄ２＞１０⁶ ｈＩＦＮτｄ３＞１０⁶ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ｈＩＦＮτ ＜１００（陰性対照と同等） ─────────────────────────── ＊インターフェロンα測定の国際単位なお、ｈＩＦＮτでは、参考例の５）で調製された精製
試料においても活性は認められなかった。

【００７２】製剤例．本発明のインターフェロンτ変異
体は、水またはそれ以外の薬理学的に許容し得る溶液に
溶解した無菌性溶液または懸濁液のアンプルとして使用
に供される。また、無菌粉末製剤（インターフェロンτ
変異体を凍結乾燥するのが好ましい）をアンプルに充填
しておき、使用時に薬理学的に許容し得る溶液で希釈し
てもよい。

【００７３】

【発明の効果】本発明のポリペプチドは、高い抗ウイル
ス活性を有し、また細胞毒性が低いことから、ウイルス
感染症、腫瘍または自己免疫疾患に対する優れた予防ま
たは治療剤として使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ｈＩＦＮτをコードするＤＮＡを大腸菌で発現
させるためのプラスミドベクターの構築図を表わす。

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：５１９配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..519 特徴を表す記号：mat_peptide 存在位置：4..519 配列 ATG TGC GAC CTG TCT CAG CAC CAC GTT CTG GTT GGT CGT AAA AAC CTG 48 Met Cys Asp Leu Ser Gln His His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 CGT CTG CTG GAC GAA ATG CGT CGT CTG TCT CCG CAC TTC TGC CTG CAG 96 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 GAC CGT AAG GAC TTC GCT CTG CCG CAG GAA ATG GTT GAA GGC GGT CAG 144 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 CTG CAG GAA GCT CAG GCT ATC TCC GTT CTG CAC GAA ATG CTG CAG CAG 192 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 TCC TTC AAC CTG TTC CAC ACT GAA CAC TCC TCT GCT GCT TGG GAC ACT 240 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 ACT CTG CTG GAC CAG CTG TGC ACT GGT CTG CAC CAG CAG CTG GAC AAC 288 Thr Leu Leu Asp Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 CTG GAC GCT TGC CTA GGT CAG GTT ATG GGC GAA GAA GAC TCT GCT CTG 336 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 GGT CGT ACT GGT CCG ACT CTG GCT CTG AAA CGT TAC TTC CAA GGC ATC 384 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 CAC GTT TAC CTG AAG GAA AAG GGC TAC AGC GAC TGC GCT TGG GAA ACT 432 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 GTT CGT CTG GAA ATC ATG CGT TCC TTC TCC TCT CTG ATC AGC CTG CAG 480 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 GAA CGT CTG CGT ATG ATG GAC GGT GAC CTG TCT TCT CCG 519 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：２配列の長さ：173 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：蛋白質配列 Met Cys Asp Leu Ser Gln His His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 Thr Leu Leu Asp Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：３配列の長さ：519 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..519 特徴を表す記号：mat_peptide 存在位置：4..519 配列 ATG TGC GAC CTG TCT CAG TAC CAC GTT CTG GTT GGT CGT AAA AAC CTG 48 Met Cys Asp Leu Ser Gln Tyr His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 CGT CTG CTG GAC GAA ATG CGT CGT CTG TCT CCG CAC TTC TGC CTG CAG 96 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 GAC CGT AAG GAC TTC GCT CTG CCG CAG GAA ATG GTT GAA GGC GGT CAG 144 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 CTG CAG GAA GCT CAG GCT ATC TCC GTT CTG CAC GAA ATG CTG CAG CAG 192 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 TCC TTC AAC CTG TTC CAC ACT GAA CAC TCC TCT GCT GCT TGG GAC ACT 240 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 ACT CTG CTG GAC CAG CTG TGC ACT GGT CTG CAC CAG CAG CTG GAC AAC 288 Thr Leu Leu Asp Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 CTG GAC GCT TGC CTA GGT CAG GTT ATG GGC GAA GAA GAC TCT GCT CTG 336 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 GGT CGT ACT GGT CCG ACT CTG GCT CTG AAA CGT TAC TTC CAA GGC ATC 384 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 CAC GTT TAC CTG AAG GAA AAG GGC TAC AGC GAC TGC GCT TGG GAA ACT 432 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 GTT CGT CTG GAA ATC ATG CGT TCC TTC TCC TCT CTG ATC AGC CTG CAG 480 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 GAA CGT CTG CGT ATG ATG GAC GGT GAC CTG TCT TCT CCG 519 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：４配列の長さ：173 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：蛋白質配列 Met Cys Asp Leu Ser Gln Tyr His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 Thr Leu Leu Asp Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：５配列の長さ：519 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..519 特徴を表す記号：mat_peptide 存在位置：4..519 配列 ATG TGC GAC CTG TCT CAG AAC CAC GTT CTG GTT GGT CGT AAA AAC CTG 48 Met Cys Asp Leu Ser Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 CGT CTG CTG GAC GAA ATG CGT CGT CTG TCT CCG CAC TTC TGC CTG CAG 96 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 GAC CGT AAG GAC TTC GCT CTG CCG CAG GAA ATG GTT GAA GGC GGT CAG 144 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 CTG CAG GAA GCT CAG GCT ATC TCC GTT CTG CAC GAA ATG CTG CAG CAG 192 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 TCC TTC AAC CTG TTC CAC ACT GAA CAC TCC TCT GCT GCT TGG GAC ACT 240 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 ACT CTG CTG GAA CAG CTG TGC ACT GGT CTG CAC CAG CAG CTG GAC AAC 288 Thr Leu Leu Glu Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 CTG GAC GCT TGC CTA GGT CAG GTT ATG GGC GAA GAA GAC TCT GCT CTG 336 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 GGT CGT ACT GGT CCG ACT CTG GCT CTG AAA CGT TAC TTC CAA GGC ATC 384 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 CAC GTT TAC CTG AAG GAA AAG GGC TAC AGC GAC TGC GCT TGG GAA ACT 432 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 GTT CGT CTG GAA ATC ATG CGT TCC TTC TCC TCT CTG ATC AGC CTG CAG 480 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 GAA CGT CTG CGT ATG ATG GAC GGT GAC CTG TCT TCT CCG 519 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：６配列の長さ：173 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：蛋白質配列 Met Cys Asp Leu Ser Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 Thr Leu Leu Glu Gln Leu Cys Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：７配列の長さ：519 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列の特徴特徴を表す記号：CDS 存在位置：1..519 特徴を表す記号：mat_peptide 存在位置：4..519 配列 ATG TGC GAC CTG TCT CAG AAC CAC GTT CTG GTT GGT CGT AAA AAC CTG 48 Met Cys Asp Leu Ser Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 CGT CTG CTG GAC GAA ATG CGT CGT CTG TCT CCG CAC TTC TGC CTG CAG 96 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 GAC CGT AAG GAC TTC GCT CTG CCG CAG GAA ATG GTT GAA GGC GGT CAG 144 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 CTG CAG GAA GCT CAG GCT ATC TCC GTT CTG CAC GAA ATG CTG CAG CAG 192 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 TCC TTC AAC CTG TTC CAC ACT GAA CAC TCC TCT GCT GCT TGG GAC ACT 240 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 ACT CTG CTG GAA CCG TGC CGT ACT GGT CTG CAC CAG CAG CTG GAC AAC 288 Thr Leu Leu Glu Pro Cys Arg Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 CTG GAC GCT TGC CTA GGT CAG GTT ATG GGC GAA GAA GAC TCT GCT CTG 336 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 GGT CGT ACT GGT CCG ACT CTG GCT CTG AAA CGT TAC TTC CAA GGC ATC 384 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 CAC GTT TAC CTG AAG GAA AAG GGC TAC AGC GAC TGC GCT TGG GAA ACT 432 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 GTT CGT CTG GAA ATC ATG CGT TCC TTC TCC TCT CTG ATC AGC CTG CAG 480 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 GAA CGT CTG CGT ATG ATG GAC GGT GAC CTG TCT TCT CCG 519 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：８配列の長さ：173 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：蛋白質配列 Met Cys Asp Leu Ser Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu -1 1 5 10 15 Arg Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln 20 25 30 Asp Arg Lys Asp Phe Ala Leu Pro Gln Glu Met Val Glu Gly Gly Gln 35 40 45 Leu Gln Glu Ala Gln Ala Ile Ser Val Leu His Glu Met Leu Gln Gln 50 55 60 Ser Phe Asn Leu Phe His Thr Glu His Ser Ser Ala Ala Trp Asp Thr 65 70 75 Thr Leu Leu Glu Pro Cys Arg Thr Gly Leu His Gln Gln Leu Asp Asn 80 85 90 95 Leu Asp Ala Cys Leu Gly Gln Val Met Gly Glu Glu Asp Ser Ala Leu 100 105 110 Gly Arg Thr Gly Pro Thr Leu Ala Leu Lys Arg Tyr Phe Gln Gly Ile 115 120 125 His Val Tyr Leu Lys Glu Lys Gly Tyr Ser Asp Cys Ala Trp Glu Thr 130 135 140 Val Arg Leu Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Ser Leu Ile Ser Leu Gln 145 150 155 Glu Arg Leu Arg Met Met Asp Gly Asp Leu Ser Ser Pro 160 165 170 配列番号：９配列の長さ：６７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATGTGCGACC TGTCTCAGAA CCACGTTCTG GTTGGTCGTA AAAACCTGCG TCTGCTGGAC 60 GAAATGC 67 配列番号：１０配列の長さ：５５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 CGGTCCTGCA GGCAGAAGTG CGGAGACAGA CGACGCATTT CGTCCAGCAG ACGCA 55 配列番号：１１配列の長さ：６５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCTGCCTGCA GGACCGTAAG GACTTCGCTC TGCCGCAGGA AATGGTTGAA GGCGGCCAGC 60 TGCAG 65 配列番号：１２配列の長さ：６９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 GAAGGACTGC TGCAGCATTT CGTGCAGAAC GGAGATAGCC TGAGCTTCCT GCAGCTGGCC 60 GCCTTCAAC 69 配列番号：１３配列の長さ：６２配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAATGCTGCA GCAGTCCTTC AACCTGTTCC ACACTGAACA CTCCTCTGCT GCTTGGGACA 60 CT 62 配列番号：１４配列の長さ：６３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 CAGCTGCTGG TGCAGGCCAG TACGGCACGG TTCCAGCAGA GTAGTGTCCC AAGCAGCAGA 60 GGA 63 配列番号：１５配列の長さ：６６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ACTGGTCTGC ACCAGCAGCT GGACAACCTG GACGCTTGCC TAGGTCAGGT TATGGGCGAA 60 GAAGAC 66 配列番号：１６配列の長さ：５４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 CAGAGTCGGA CCAGTACGAC CCAGAGCAGA GTCTTCTTCG CCCATAACCT GACC 54 配列番号：１７配列の長さ：６３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 CGTACTGGTC CGACTCTGGC TCTGAAACGT TACTTCCAAG GCATCCACGT TTACCTGAAG 60 GAA 63 配列番号：１８配列の長さ：６３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 TTCCAGACGA ACAGTTTCCC AAGCGCAGTC GCTGTAGCCC TTTTCCTTCA GGTAAACGTG 60 GAT 63 配列番号：１９配列の長さ：５７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Ｎｏ配列ＴＧＧＧＡＡＡＣＴＧＴＴＣＧＴＣＴＧＧＡＡＡＴＣＡＴＧＣＧＴＴＣＣ
ＴＴＣＴＣＣＴＣＴＣＴＧＡＴＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧ 57 配列番号：２０配列の長さ：６２配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 TCACGGAGAA GACAGGTCAC CGTCCATCAT ACGCAGACGT TCCTGCAGGC TGATCAGAGA 60 GG 62 配列番号：２１配列の長さ：４３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATACGGATCC CATATGTGCG ACCTGTCTCA GAACCACGTT CTG 43 配列番号：２２配列の長さ：２５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 GAAGGACTGC TGCAGCATTT CCACC 25 配列番号：２３配列の長さ：２６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 AAATGCTGCA GCAGTCCTTC AACCTG 26 配列番号：２４配列の長さ：２４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 CAGAGTCGGA CCAGTACGAC CCAG ２４配列番号：２５配列の長さ：２４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：Ｎｏアンチセンス：No 配列 CGTACTGGTC CGACTCTGGC TCTG 24 配列番号：２６配列の長さ：３５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 TTAAGGATCC TCACGGAGAA GACAGGTCAC CGTCC 35 配列番号：２７配列の長さ：２５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCAAGGGCAT CGGTCGACGC TCTCC 25 配列番号：２８配列の長さ：３３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 CTGAGACAGG TCGCACATAT GTATATCTCC TTC 33 配列番号：２９配列の長さ：412 配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：Genomic DNA ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 TCAAGGGCAT CGGTCGACGC TCTCCCTTAT GCGACTCCTG CATTAGGAAG CAGCCCAGTA 60 GTAGGTTGAG GCCGTTGAGC ACCGCCGCCG CAAGGAATGG TGCATGCAAG GAGATGGCGC 120 CCAACAGTCC CCCGGCCACG GGGCCTGCCA CCATACCCAC GCCGAAACAA GCGCTCATGA 180 GCCCGAAGTG GCGAGCCCGA TCTTCCCCAT CGGTGATGTC GGCGATATAG GCGCCAGCAA 240 CCGCACCTGT GGCGCCGGTG ATGCCGGCCA CGATGCGTCC GGCGTAGAGG ATCGAGATCT 300 CGATCCCGCG AAATTAATAC GACTCACTAT AGGGAGACCA CAACGGTTTC CCTCTAGAAA 360 TAATTTTGTT TAACTTTAAG AAGGAGATAT ACATATGTGC GACCTGTCTC AG 412 配列番号：３０配列の長さ：３３配列の型：アミノ酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：蛋白質フラグメント型：Ｎ末端フラグメント配列 Cys Asp Leu Ser Gln Asn His Val Leu Val Gly Arg Lys Asn Leu Arg 1 5 10 15 Leu Leu Asp Glu Met Arg Arg Leu Ser Pro His Phe Cys Leu Gln Asp 20 25 30 Arg 配列番号：３１配列の長さ：２６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 TCCAGCAGAG TAGTGTCCCA AGCAGC ２６配列番号：３２配列の長さ：４８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：Ｎｏアンチセンス：No 配列 GCTGCTTGGG ACACTACTCT GCTGGACCAG CTGTGCACTG GTCTGCAC 48 配列番号：３３配列の長さ：４３配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 ATACGGATCC CATATGTGCG ACCTGTCTCA GTACCACGTT CTG 43 配列番号：３４配列の長さ：３４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：Yes 配列 ACTGAGACAG GTCGCACATA TGTATATCTC CTTC 34 配列番号：３５配列の長さ：４８配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：他の核酸（合成ＤＮＡ）ハイポセティカル：No アンチセンス：No 配列 GCTGCTTGGG ACACTACTCT GCTGGAACAG CTGTGCACTG GTCTGCAC 48

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ０７Ｋ 14/555 Ａ６１Ｋ 37/66 ＡＢＣＣ１２Ｎ 1/21 ＡＤＵＣ１２Ｐ 21/02 ＡＤＹ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列表の配列番号８に示されるアミノ酸
配列において、少なくとも、アミノ酸番号８６のArg が
Cys で置換され、かつアミノ酸番号８５のCysがCys 以
外のアミノ酸で置換されているアミノ酸配列を含むこと
からなり、インターフェロン活性を有することを特徴と
するポリペプチド（ただし、ヒツジインターフェロンτ
およびウシインターフェロンτを除く）。
【請求項２】請求項１において、配列表の配列番号８
のアミノ酸番号８５のCys がLeu で置換されているポリ
ペプチド。
【請求項３】請求項２において、配列表の配列番号８
のアミノ酸番号８４のPro がGln で置換されているポリ
ペプチド。
【請求項４】配列表の配列番号２のアミノ酸番号１か
ら１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからなる、
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項５】配列表の配列番号４のアミノ酸番号１か
ら１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからなる、
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項６】配列表の配列番号６のアミノ酸番号１か
ら１７２で示されるアミノ酸配列を含むことからなる、
請求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項７】本質的に配列表の配列番号２のアミノ酸
番号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、請
求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項８】本質的に配列表の配列番号４のアミノ酸
番号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、請
求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項９】本質的に配列表の配列番号６のアミノ酸
番号１から１７２で示されるアミノ酸配列からなる、請
求項１乃至３のいずれか１つに記載のポリペプチド。
【請求項１０】請求項１乃至９のいずれか１つに記載
のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含むこ
とからなるＤＮＡ。
【請求項１１】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−５６０２）が保持す
る組換えＤＮＡベクターより得ることができる、請求項
１０記載のＤＮＡ。
【請求項１２】配列表の配列番号１のヌクレオチド番
号４から５１９で示されるヌクレオチド配列を含むこと
からなる、請求項１０記載のＤＮＡ。
【請求項１３】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ２（ＦＥＲＭＢＰ−５６０３）が保持す
る組換えＤＮＡベクターより得ることができる、請求項
１０記載のＤＮＡ。
【請求項１４】配列表の配列番号３のヌクレオチド番
号４から５１９で示されるヌクレオチド配列を含むこと
からなる、請求項１０記載のＤＮＡ。
【請求項１５】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０４）が保持す
る組換えＤＮＡベクターより得ることができる、請求項
１０記載のＤＮＡ。
【請求項１６】配列表の配列番号５のヌクレオチド番
号４から５１９で示されるヌクレオチド配列を含むこと
からなる、請求項１０記載のＤＮＡ。
【請求項１７】請求項１１乃至１６のいずれか１つに
記載のＤＮＡとハイブリダイズし、インターフェロン活
性を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列
を含むことからなるＤＮＡ。
【請求項１８】請求項１１乃至１６のいずれか１つに
記載のＤＮＡと６×ＳＳＣ、５５℃の条件でハイブリダ
イズし、インターフェロン活性を有するポリペプチドを
コードするヌクレオチド配列を含むことからなるＤＮ
Ａ。
【請求項１９】請求項１０乃至１８のいずれか１つに
記載のＤＮＡを含む組換えＤＮＡベクター。
【請求項２０】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−５６０２）に保持さ
れる、請求項１９記載の組換えＤＮＡベクター。
【請求項２１】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ２（ＦＥＲＭＢＰ−５６０３）に保持さ
れる、請求項１９記載の組換えＤＮＡベクター。
【請求項２２】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０４）に保持さ
れる、請求項１９記載の組換えＤＮＡベクター。
【請求項２３】請求項１９乃至２２のいずれか１つに
記載の組換えＤＮＡベクターで形質転換された宿主細
胞。
【請求項２４】大腸菌であることを特徴とする、請求
項２３記載の宿主細胞。
【請求項２５】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ１（ＦＥＲＭＢＰ−５６０２）である、
請求項２３または２４記載の宿主細胞。
【請求項２６】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ２（ＦＥＲＭＢＰ−５６０３）である、
請求項２３または２４記載の宿主細胞。
【請求項２７】形質転換大腸菌Ｅ．ｃｏｌｉｐＴ
７ＩＦＮτｄ３（ＦＥＲＭＢＰ−５６０４）である、
請求項２３または２４記載の宿主細胞。
【請求項２８】請求項２３乃至２７のいずれか１つに
記載の宿主細胞をインターフェロン活性を有するポリペ
プチドの産生が可能な条件下で培養し、次いで該培養物
からインターフェロン活性を有するポリペプチドを回収
することを特徴とする、インターフェロン活性を有する
ポリペプチドの製造方法。
【請求項２９】治療上有効な量の請求項１乃至９のい
ずれか１つに記載のポリペプチドを含むことからなる医
薬組成物。
【請求項３０】治療上有効な量の請求項１乃至９のい
ずれか１つに記載のポリペプチドを含むことからなる、
ウイルス感染症の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項３１】治療上有効な量の請求項１乃至９のい
ずれか１つに記載のポリペプチドを含むことからなる、
腫瘍の予防または治療のための医薬組成物。
【請求項３２】治療上有効な量の請求項１乃至９のい
ずれか１つに記載のポリペプチドを含むことからなる、
自己免疫疾患の予防または治療のための医薬組成物。