JPH10101690A - 新規なリピドａ及びｌｐｓ並びにこれを産生する光合成細菌 - Google Patents
新規なリピドａ及びｌｐｓ並びにこれを産生する光合成細菌Info
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- JPH10101690A JPH10101690A JP8255869A JP25586996A JPH10101690A JP H10101690 A JPH10101690 A JP H10101690A JP 8255869 A JP8255869 A JP 8255869A JP 25586996 A JP25586996 A JP 25586996A JP H10101690 A JPH10101690 A JP H10101690A
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 生体の免疫賦活的活性が高く、しかも毒性の
低いリピドＡを提供すること。 【解決手段】 糖鎖と、該糖鎖とエステル結合した型の
脂肪酸及びアミド結合した型の脂肪酸との複合体である
リピドＡにおいて、該糖がグルコサミン、マンノース又
は名称不明の糖からなることと；該エステル結合した型
の脂肪酸が炭素原子数１２の直鎖飽和脂肪酸であること
と；該アミド結合した型の脂肪酸が炭素原子数１４の直
鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の炭素原子と末端から
２番目の炭素原子との間の結合が二重結合である直鎖不
飽和脂肪酸、及び炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であっ
て、該直鎖の末端から３番目の炭素原子に結合する水素
原子１つが水酸基により置換された直鎖飽和脂肪酸であ
ることと；該リピドＡがリンを包含しないことと；質量
が１９２８．９であることとを特徴とするリピドＡ。
低いリピドＡを提供すること。 【解決手段】 糖鎖と、該糖鎖とエステル結合した型の
脂肪酸及びアミド結合した型の脂肪酸との複合体である
リピドＡにおいて、該糖がグルコサミン、マンノース又
は名称不明の糖からなることと；該エステル結合した型
の脂肪酸が炭素原子数１２の直鎖飽和脂肪酸であること
と；該アミド結合した型の脂肪酸が炭素原子数１４の直
鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の炭素原子と末端から
２番目の炭素原子との間の結合が二重結合である直鎖不
飽和脂肪酸、及び炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であっ
て、該直鎖の末端から３番目の炭素原子に結合する水素
原子１つが水酸基により置換された直鎖飽和脂肪酸であ
ることと；該リピドＡがリンを包含しないことと；質量
が１９２８．９であることとを特徴とするリピドＡ。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なリピドＡ及
びリポ多糖（以下ＬＰＳという）並びにこれを産生する
光合成細菌に関する。本発明のリピドＡ及びＬＰＳは、
ＣＳＦ(colony stimulation factor) の誘導作用活性を
有し、かつ毒性が低いので健康食品、食品添加物とし
て、さらには医薬として利用することができる。
びリポ多糖（以下ＬＰＳという）並びにこれを産生する
光合成細菌に関する。本発明のリピドＡ及びＬＰＳは、
ＣＳＦ(colony stimulation factor) の誘導作用活性を
有し、かつ毒性が低いので健康食品、食品添加物とし
て、さらには医薬として利用することができる。
【０００２】
【従来の技術】腸内細菌等グラム陰性菌の細胞壁表面に
は、ＬＰＳが存在する。ＬＰＳは脂質（リピドＡ）と多
糖の複合体であり、菌体内毒素の主成分であることが知
られている。菌体内毒素の生物活性については、リピド
Ａがその活性中心部分であることも知られているが、リ
ピドＡの組成、構造及び生物活性は、菌種によって多少
異なる。
は、ＬＰＳが存在する。ＬＰＳは脂質（リピドＡ）と多
糖の複合体であり、菌体内毒素の主成分であることが知
られている。菌体内毒素の生物活性については、リピド
Ａがその活性中心部分であることも知られているが、リ
ピドＡの組成、構造及び生物活性は、菌種によって多少
異なる。
【０００３】代表的腸内細菌である大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）のリピドＡは、以下の化１に示す構造を有すること
が知られている。
ｉ）のリピドＡは、以下の化１に示す構造を有すること
が知られている。
【０００４】
【化１】
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】上記大腸菌のリピドＡ
は、血液幹細胞の増殖分化因子であるＣＳＦの誘導作用
活性を有することが知られているが、毒性が高いため食
用に供することができない。
は、血液幹細胞の増殖分化因子であるＣＳＦの誘導作用
活性を有することが知られているが、毒性が高いため食
用に供することができない。
【０００６】本発明は、ＣＳＦ活性などの生体の免疫賦
活的活性が高く、しかも毒性の低いリピドＡを提供する
ことを目的とするものである。
活的活性が高く、しかも毒性の低いリピドＡを提供する
ことを目的とするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記事情
に鑑み鋭意研究の結果、ある種の光合成細菌の細胞壁表
面にあるＬＰＳから抽出されるリピドＡが、大腸菌由来
のリピドＡと比較してＣＳＦ活性はやや劣るが、毒性が
極めて低いことを見いだした。
に鑑み鋭意研究の結果、ある種の光合成細菌の細胞壁表
面にあるＬＰＳから抽出されるリピドＡが、大腸菌由来
のリピドＡと比較してＣＳＦ活性はやや劣るが、毒性が
極めて低いことを見いだした。
【０００８】すなわち、本発明は、糖鎖と、該糖鎖とエ
ステル結合した型の脂肪酸及びアミド結合した型の脂肪
酸との複合体であるリピドＡにおいて、該糖がグルコサ
ミン、マンノース又は名称不明の糖からなることと；該
エステル結合した型の脂肪酸が炭素原子数１２の直鎖飽
和脂肪酸であることと；該アミド結合した型の脂肪酸が
炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の
炭素原子と末端から２番目の炭素原子との間の結合が二
重結合である直鎖不飽和脂肪酸、及び炭素原子数１４の
直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端から３番目の炭素原
子に結合する水素原子１つが水酸基により置換された直
鎖飽和脂肪酸であることと；該リピドＡがリンを包含し
ないことと；質量が１９２８．９であることとを特徴と
するリピドＡを提供する。
ステル結合した型の脂肪酸及びアミド結合した型の脂肪
酸との複合体であるリピドＡにおいて、該糖がグルコサ
ミン、マンノース又は名称不明の糖からなることと；該
エステル結合した型の脂肪酸が炭素原子数１２の直鎖飽
和脂肪酸であることと；該アミド結合した型の脂肪酸が
炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の
炭素原子と末端から２番目の炭素原子との間の結合が二
重結合である直鎖不飽和脂肪酸、及び炭素原子数１４の
直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端から３番目の炭素原
子に結合する水素原子１つが水酸基により置換された直
鎖飽和脂肪酸であることと；該リピドＡがリンを包含し
ないことと；質量が１９２８．９であることとを特徴と
するリピドＡを提供する。
【０００９】本発明は、前記リピドＡを包含するＬＰＳ
をも提供する。
をも提供する。
【００１０】さらに、本発明は、受託番号ＦＥＲＭ Ｐ
−１５８７１で寄託されたランプロバクター（Lamproba
cter）属の光合成細菌を提供する。
−１５８７１で寄託されたランプロバクター（Lamproba
cter）属の光合成細菌を提供する。
【００１１】
【発明の実施の形態】以下、本発明のリピドＡについて
詳細に説明する。
詳細に説明する。
【００１２】本発明のリピドＡを構成する糖は、グルコ
サミン、マンノースおよび名称不明の糖である。グルコ
サミン：マンノース：名称不明の糖を合わせると構成糖
は、３〜５個と考えられる。
サミン、マンノースおよび名称不明の糖である。グルコ
サミン：マンノース：名称不明の糖を合わせると構成糖
は、３〜５個と考えられる。
【００１３】本発明のリピドＡを構成する脂肪酸は、前
記糖とエステル結合した型の脂肪酸が炭素原子数１２の
直鎖飽和脂肪酸（以下「１２：０の脂肪酸」という）で
あり、また前記糖にアミド結合した型の脂肪酸が炭素原
子数１４の直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の炭素原
子と末端から２番目の炭素原子との間の結合が二重結合
である直鎖不飽和脂肪酸（以下「１４：１の脂肪酸」と
いう）、及び炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であって、該
直鎖の末端から３番目の炭素原子に結合する水素原子１
つが水酸基により置換された直鎖飽和脂肪酸（以下「３
−ＯＨ−１４：０の脂肪酸」という）である。
記糖とエステル結合した型の脂肪酸が炭素原子数１２の
直鎖飽和脂肪酸（以下「１２：０の脂肪酸」という）で
あり、また前記糖にアミド結合した型の脂肪酸が炭素原
子数１４の直鎖脂肪酸であって、該直鎖の末端の炭素原
子と末端から２番目の炭素原子との間の結合が二重結合
である直鎖不飽和脂肪酸（以下「１４：１の脂肪酸」と
いう）、及び炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であって、該
直鎖の末端から３番目の炭素原子に結合する水素原子１
つが水酸基により置換された直鎖飽和脂肪酸（以下「３
−ＯＨ−１４：０の脂肪酸」という）である。
【００１４】本発明のリピドＡには、リンは包含されて
いない。
いない。
【００１５】本発明のリピドＡは、高速原子衝撃法−重
量分析法（以下「ＦＡＢ−ＭＳ」という）により測定し
た質量が１９２８．９である。
量分析法（以下「ＦＡＢ−ＭＳ」という）により測定し
た質量が１９２８．９である。
【００１６】本発明のリピドＡの構造は、それを構成す
る糖として、マンノース及び名称不明の糖を包含してい
る点、さらにはリンを含んでいない点において大腸菌由
来のリピドＡと大きく異なる。
る糖として、マンノース及び名称不明の糖を包含してい
る点、さらにはリンを含んでいない点において大腸菌由
来のリピドＡと大きく異なる。
【００１７】本発明のリピドＡは、後に詳細に説明する
Lamprobacter属の新規な光合成細菌（以下「ＴＰ−５」
という）を出発物質として、それ自体は公知の、リピド
Ａの抽出方法に準じて製造することができる。以下に、
本発明のリピドＡの製造方法の一例を示す。
Lamprobacter属の新規な光合成細菌（以下「ＴＰ−５」
という）を出発物質として、それ自体は公知の、リピド
Ａの抽出方法に準じて製造することができる。以下に、
本発明のリピドＡの製造方法の一例を示す。
【００１８】ＴＰ−５の脱脂乾燥菌体を、温フェノール
法により抽出し、水層に粗ＬＰＳを得る。得られた粗Ｌ
ＰＳを、酵素処理に供し、精製ＬＰＳを得る。次いで、
ＬＰＳを酸加水分解し、精製することによりリピドＡが
得られる。
法により抽出し、水層に粗ＬＰＳを得る。得られた粗Ｌ
ＰＳを、酵素処理に供し、精製ＬＰＳを得る。次いで、
ＬＰＳを酸加水分解し、精製することによりリピドＡが
得られる。
【００１９】より詳しくは、本発明のリピドＡは、通
常、４５％〜５０％のフェノールを用い、通常、６５℃
〜７０℃で、１０分〜２０分間抽出する。４５％フェノ
ールで抽出する場合には、例えば、９０％フェノール水
溶液と、同量のＴＰ−５の水縣濁液とを混合して、フェ
ノールの終濃度を４５％として抽出することができる。
常、４５％〜５０％のフェノールを用い、通常、６５℃
〜７０℃で、１０分〜２０分間抽出する。４５％フェノ
ールで抽出する場合には、例えば、９０％フェノール水
溶液と、同量のＴＰ−５の水縣濁液とを混合して、フェ
ノールの終濃度を４５％として抽出することができる。
【００２０】粗ＬＰＳを含む水層は、水で透析すること
により、フェノール、塩類のような低分子を除去するこ
とができる。
により、フェノール、塩類のような低分子を除去するこ
とができる。
【００２１】粗ＬＰＳの酵素処理には、ＲＮａｓｅ−Ａ
を用いることができる。
を用いることができる。
【００２２】酵素処理は、用いる酵素の種類により適宜
設定することができるが、通常、ｐＨ５．０、温度３７
℃、で１２〜１６時間行なう。
設定することができるが、通常、ｐＨ５．０、温度３７
℃、で１２〜１６時間行なう。
【００２３】酵素処理した粗ＬＰＳは、通常１０5 ×ｇ
〜１．５×１０5 ×ｇの超遠心に３時間〜４時間供する
と、沈殿に精製ＬＰＳが得られる。
〜１．５×１０5 ×ｇの超遠心に３時間〜４時間供する
と、沈殿に精製ＬＰＳが得られる。
【００２４】この精製ＬＰＳは、通常、濃度０．１規定
〜０．２規定の例えば酢酸、塩酸等の酸により、１００
℃〜１２０℃の温度で、２〜８時間加水分解する。これ
を遠心に供し、沈殿にリピドＡが得られる。このリピド
Ａは、クロロホルム：メタノール（４：１、体積比）に
溶解し、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を
用いることにより精製することができる。
〜０．２規定の例えば酢酸、塩酸等の酸により、１００
℃〜１２０℃の温度で、２〜８時間加水分解する。これ
を遠心に供し、沈殿にリピドＡが得られる。このリピド
Ａは、クロロホルム：メタノール（４：１、体積比）に
溶解し、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を
用いることにより精製することができる。
【００２５】本発明のリピドＡのＣＳＦ誘導作用活性
は、大腸菌リピドＡのそれと同等又はそれよりも若干弱
い。しかしながら、本発明のリピドＡは、大腸菌由来の
リピドＡに比べて極めて低い毒性を有するという利点を
有する。
は、大腸菌リピドＡのそれと同等又はそれよりも若干弱
い。しかしながら、本発明のリピドＡは、大腸菌由来の
リピドＡに比べて極めて低い毒性を有するという利点を
有する。
【００２６】本発明は、上記方法により製造されたＴＰ
−５由来の新規なＬＰＳをも提供するものである。
−５由来の新規なＬＰＳをも提供するものである。
【００２７】以下、本発明のＬＰＳを詳細に説明する。
【００２８】本発明のＬＰＳは、少糖の繰返し単位であ
るＯ抗原性多糖にＲコアオリゴ糖がつき、それがさらに
ＫＤＯ(3-keto-3-deoxyoctonate)を介して本発明のリピ
ドＡに結合する複合体であるいわゆるＩ型のＬＰＳであ
る。
るＯ抗原性多糖にＲコアオリゴ糖がつき、それがさらに
ＫＤＯ(3-keto-3-deoxyoctonate)を介して本発明のリピ
ドＡに結合する複合体であるいわゆるＩ型のＬＰＳであ
る。
【００２９】本発明は、上述した本発明のリピドＡの製
造方法における出発物質であるＴＰ−５も提供するもの
である。
造方法における出発物質であるＴＰ−５も提供するもの
である。
【００３０】以下、本発明のＴＰ−５について詳細に説
明する。
明する。
【００３１】ＴＰ−５は、通産省工業技術院 生命工学
工業技術研究所に平成８年９月１９日から受託番号ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１５８７１として寄託された。
工業技術研究所に平成８年９月１９日から受託番号ＦＥ
ＲＭ Ｐ−１５８７１として寄託された。
【００３２】ＴＰ−５は、Chromatiaceae 科（紅色硫黄
細菌：Purple sulfur bacteria) 、Lamprobacter属に属
し、以下に記載する形態、生化学的性状のうち、特にビ
タミンＢ12要求性がないこと、ＮａＣｌ要求性がないこ
とが、公知の種(Lamprobacter modestohalophilus 種）
と異なるため、新規な種と判定した。なお、Lamprobact
erは、１種しか報告されていない。（Gorlenko, V.M.,
E.N. Krasil'nilova,O.G. Kikina and N.Y. Tatarinov
a, 1988. In Validation of the publicationof new na
mes and new combinations previously effectively pu
blished outside the IJSB, Int. J. Syst. Bacteriol.
38:220-222) （ａ）形態 （１）卵型状、短桿状 （２）グラム染色性：− （３）莢膜(slime) ：− （４）細胞内硫黄粒：＋ （５）ガス胞：＋ （ｂ）生育状態 （１）菌体懸濁液：紅色 （ｃ）生理的性質 （１）微好気ないしは嫌気状態で成長する （２）細胞中に硫黄粒の生成 （３）成長最適温度：３０℃付近 （４）ＮａＣｌ要求性：− （ｄ）炭素源の利用性 （１）グルコース：− （２）シュクロース：− （３）マンノース：− （４）フラクトース：＋ （５）ラクトース：− （６）マンニット：− （７）ソルビトール：− （８）スターチ：− （９）フォルメイト：− （１０）アセテート：＋ （１１）パイルベート：＋ （１２）プロピオネート：＋ （１３）マレート：＋ （１４）サクシネート：＋ （１５）グリセロール：＋ （１６）メタノール：− （１７）エタノール：− （ｅ）その他 （１）ビタミンＢ12要求性：− （２）培養液（生細胞）の吸収スペクトル：８００、８
５５ｎｍ付近に吸収極大を有する。図１に吸収スペクト
ルを示す。
細菌：Purple sulfur bacteria) 、Lamprobacter属に属
し、以下に記載する形態、生化学的性状のうち、特にビ
タミンＢ12要求性がないこと、ＮａＣｌ要求性がないこ
とが、公知の種(Lamprobacter modestohalophilus 種）
と異なるため、新規な種と判定した。なお、Lamprobact
erは、１種しか報告されていない。（Gorlenko, V.M.,
E.N. Krasil'nilova,O.G. Kikina and N.Y. Tatarinov
a, 1988. In Validation of the publicationof new na
mes and new combinations previously effectively pu
blished outside the IJSB, Int. J. Syst. Bacteriol.
38:220-222) （ａ）形態 （１）卵型状、短桿状 （２）グラム染色性：− （３）莢膜(slime) ：− （４）細胞内硫黄粒：＋ （５）ガス胞：＋ （ｂ）生育状態 （１）菌体懸濁液：紅色 （ｃ）生理的性質 （１）微好気ないしは嫌気状態で成長する （２）細胞中に硫黄粒の生成 （３）成長最適温度：３０℃付近 （４）ＮａＣｌ要求性：− （ｄ）炭素源の利用性 （１）グルコース：− （２）シュクロース：− （３）マンノース：− （４）フラクトース：＋ （５）ラクトース：− （６）マンニット：− （７）ソルビトール：− （８）スターチ：− （９）フォルメイト：− （１０）アセテート：＋ （１１）パイルベート：＋ （１２）プロピオネート：＋ （１３）マレート：＋ （１４）サクシネート：＋ （１５）グリセロール：＋ （１６）メタノール：− （１７）エタノール：− （ｅ）その他 （１）ビタミンＢ12要求性：− （２）培養液（生細胞）の吸収スペクトル：８００、８
５５ｎｍ付近に吸収極大を有する。図１に吸収スペクト
ルを示す。
【００３３】本発明のＴＰ−５は、以下に記載する方法
により製造することができる。
により製造することができる。
【００３４】長崎県大村湾河口から採取した泥を０．８
％（重量）寒天を加えた実施例１の培養液で培養し、生
えてきた菌のコロニーをさらにビタミンＢ12を除いた培
養液で培養し、色調、硫黄粒、ガス胞、莢膜及び形態で
選択する。
％（重量）寒天を加えた実施例１の培養液で培養し、生
えてきた菌のコロニーをさらにビタミンＢ12を除いた培
養液で培養し、色調、硫黄粒、ガス胞、莢膜及び形態で
選択する。
【００３５】本発明のＴＰ−５には、大腸菌とほぼ同量
のＬＰＳが含有されることが分かった。したがって、本
発明のＴＰ−５は、本発明のリピドＡ及びＬＰＳの製造
に有用に用いることができる。
のＬＰＳが含有されることが分かった。したがって、本
発明のＴＰ−５は、本発明のリピドＡ及びＬＰＳの製造
に有用に用いることができる。
【００３６】以上説明したように、本発明のリピドＡ、
ＬＰＳ及びＴＰ−５は、ＣＳＦ誘導作用活性が高く、し
かも毒性がきわめて低い。したがって、本発明のリピド
Ａ、ＬＰＳ及びＴＰ−５は、健康食品、食品添加物とし
て、さらには医薬として使用することができる。
ＬＰＳ及びＴＰ−５は、ＣＳＦ誘導作用活性が高く、し
かも毒性がきわめて低い。したがって、本発明のリピド
Ａ、ＬＰＳ及びＴＰ−５は、健康食品、食品添加物とし
て、さらには医薬として使用することができる。
【００３７】本発明のリピドＡを医薬として用いる場
合、水溶液中にエマルジョン化した状態で、あるいはカ
プセル中に封入、又は経口剤に添加した状態で、経口薬
として、用量として０．１μｇ〜１ｇの範囲で、好まし
くは１０μｇ〜１００ｍｇの範囲で用いることができ
る。注射薬としては用量として０．１μｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは１μｇ〜１０ｍｇの範囲で用いることが
できる。また皮膚からの吸収を考慮した湿布薬として、
用量としては１μｇ〜１ｇの範囲で用いることができ
る。
合、水溶液中にエマルジョン化した状態で、あるいはカ
プセル中に封入、又は経口剤に添加した状態で、経口薬
として、用量として０．１μｇ〜１ｇの範囲で、好まし
くは１０μｇ〜１００ｍｇの範囲で用いることができ
る。注射薬としては用量として０．１μｇ〜１００ｍ
ｇ、好ましくは１μｇ〜１０ｍｇの範囲で用いることが
できる。また皮膚からの吸収を考慮した湿布薬として、
用量としては１μｇ〜１ｇの範囲で用いることができ
る。
【００３８】本発明のＬＰＳを健康食品、特定保健用食
品あるいは食品添加物として用いる場合、クロレラや他
の食物に添加した状態、あるいは水溶液中に添加した状
態で、用量として０．１ｍｇ〜１００ｇ、好ましくは１
ｍｇ〜１０ｇの範囲で用いることができる。
品あるいは食品添加物として用いる場合、クロレラや他
の食物に添加した状態、あるいは水溶液中に添加した状
態で、用量として０．１ｍｇ〜１００ｇ、好ましくは１
ｍｇ〜１０ｇの範囲で用いることができる。
【００３９】ＬＰＳを医薬として用いる場合、経口剤に
添加した状態で、あるいは水溶液中に添加した状態で、
用量として０．１ｍｇ〜１００ｇ、好ましくは１ｍｇ〜
１０ｇの範囲で用いることができる。注射薬としては用
量として１μｇ〜１０ｇ、好ましくは１０μｇ〜１００
ｍｇの範囲で用いることができる。また皮膚からの吸収
を考慮した湿布薬として、用量としては１０μｇ〜１０
０ｇの範囲で用いることができる。
添加した状態で、あるいは水溶液中に添加した状態で、
用量として０．１ｍｇ〜１００ｇ、好ましくは１ｍｇ〜
１０ｇの範囲で用いることができる。注射薬としては用
量として１μｇ〜１０ｇ、好ましくは１０μｇ〜１００
ｍｇの範囲で用いることができる。また皮膚からの吸収
を考慮した湿布薬として、用量としては１０μｇ〜１０
０ｇの範囲で用いることができる。
【００４０】本発明のＴＰ−５を健康食品、特定保健用
食品あるいは食品添加物として用いる場合、クロレラや
他の食品に添加した状態、あるいはＴＰ−５の熱水抽出
物（菌体を１００℃の熱水で２０分間加熱した後に得ら
れる抽出物（以下、「熱水抽出物」という））を含む水
溶液の状態で、用量として１０ｍｇ〜１００ｇ、好まし
くは１００ｍｇ〜１０ｇの範囲で用いることができる。
食品あるいは食品添加物として用いる場合、クロレラや
他の食品に添加した状態、あるいはＴＰ−５の熱水抽出
物（菌体を１００℃の熱水で２０分間加熱した後に得ら
れる抽出物（以下、「熱水抽出物」という））を含む水
溶液の状態で、用量として１０ｍｇ〜１００ｇ、好まし
くは１００ｍｇ〜１０ｇの範囲で用いることができる。
【００４１】
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４２】実施例１ （１）ＴＰ−５の培養 菌体の培養には以下に記載する化合物を１リットルの蒸
留水に溶解した培養液（以下「培養液１」という）、以
下に記載する培養液２及び培養液３を用いた。
留水に溶解した培養液（以下「培養液１」という）、以
下に記載する培養液２及び培養液３を用いた。
【００４３】培養液１で用いた化合物 ＣＨ3 ＣＯＯＮａ ０．５ｇ ＫＨ2 ＰＯ4 １．０ｇ ＮＨ4 Ｃｌ １．０ｇ ＣａＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ ０．２ｇ ＥＤＴＡ- ２Ｎａ ２ ｍｇ ＦｅＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ２ ｍｇ Ｈ3 ＢＯ3 １００ μｇ ＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ １００ μｇ ＺｎＣｌ2 １００ μｇ ＭｎＣｌ2 ・４Ｈ2 Ｏ １００ μｇ Ｎａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ ２０ μｇ ＮｉＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏ ２０ μｇ ＣｕＣｌ2 ・２Ｈ2 Ｏ １０ μｇ Ｎａ2 ＳｅＯ3 １ μｇ チアミン−ＨＣｌ ５００ μｇ ナイアシン ５００ μｇ ｐ−アミノ安息香酸 ３００ μｇ ビタミンＢ12 ５０ μｇ ピリドキシン−ＨＣｌ １００ μｇ ビオチン ５０ μｇ 培養液２：Ｎａ2 Ｓ・９Ｈ2 Ｏ ０．２５ｇ／１０ｍｌ 培養液３：４％のＮａＣＯ3 ２５ｍｌ 上記培養液１及び培養液２を、１２１℃、１５分間オー
トクレーブで別々に滅菌した。培養液３は、ろ過滅菌し
た。
トクレーブで別々に滅菌した。培養液３は、ろ過滅菌し
た。
【００４４】継代培養 培養液１及び培養液２を冷却後、培養液３を加えすばや
く撹拌し、スクリューキャップ付試験管（全容量２０ミ
リリットル）にほぼ満たすまで入れてから試験管のキャ
ップを閉めた。得られた培地入試験管は、よく振った
後、一昼夜冷暗所に放置し、培地内を完全に嫌気的にし
た。この状態で１カ月程度の保存ができる。１昼夜以上
放置した培地に菌を含む溶液を培養液２０ミリリットル
に対して１〜２滴加えて培養を開始した。通常、室内
（できれば暗所）に数時間から１昼夜放置し、その後光
照射下（弱光）に移して光合成培養を開始した。５〜７
日間培養を続け、継代を繰返す。
く撹拌し、スクリューキャップ付試験管（全容量２０ミ
リリットル）にほぼ満たすまで入れてから試験管のキャ
ップを閉めた。得られた培地入試験管は、よく振った
後、一昼夜冷暗所に放置し、培地内を完全に嫌気的にし
た。この状態で１カ月程度の保存ができる。１昼夜以上
放置した培地に菌を含む溶液を培養液２０ミリリットル
に対して１〜２滴加えて培養を開始した。通常、室内
（できれば暗所）に数時間から１昼夜放置し、その後光
照射下（弱光）に移して光合成培養を開始した。５〜７
日間培養を続け、継代を繰返す。
【００４５】ＴＰ−５の生産培地としては、培養液１の
ＣＨ3 ＣＯＯＮａを２．０ｇ／リットルに増加した上記
の培地を５リットル用して培養し、培養期間５〜７日間
で、１．５〜２．０ｇ（乾燥重量）のＴＰ−５を得た。
ＣＨ3 ＣＯＯＮａを２．０ｇ／リットルに増加した上記
の培地を５リットル用して培養し、培養期間５〜７日間
で、１．５〜２．０ｇ（乾燥重量）のＴＰ−５を得た。
【００４６】（２）ＬＰＳの調製 上記（１）で得られた脱脂菌体２０ｇに４５％フェノー
ルを７５０ミリリットル添加し、６８℃で１５分間抽出
した。水層を水で透析した後、凍結乾燥し、１．６ｇの
粗ＬＰＳが得られた。粗ＬＰＳをｐＨ５．０、３７℃で
１２時間ＲＮａｓｅ−Ａ（WORTHINGTON BIOCHEMICAL CO
RPORATION 製）処理し、超遠心（１０5×ｇ、３時間、
２回）し、得られた沈殿を凍結乾燥し、０．２ｇの精製
ＬＰＳが得られた。
ルを７５０ミリリットル添加し、６８℃で１５分間抽出
した。水層を水で透析した後、凍結乾燥し、１．６ｇの
粗ＬＰＳが得られた。粗ＬＰＳをｐＨ５．０、３７℃で
１２時間ＲＮａｓｅ−Ａ（WORTHINGTON BIOCHEMICAL CO
RPORATION 製）処理し、超遠心（１０5×ｇ、３時間、
２回）し、得られた沈殿を凍結乾燥し、０．２ｇの精製
ＬＰＳが得られた。
【００４７】（３）リピドＡの調製 上記（２）で得られた乾燥ＬＰＳ１．０ｇに０．２規定
酢酸を１００ミリリットル添加し、１００℃で３時間加
水分解した。沈殿（０．０５ｇ）を１〜２ミリリットル
のクロロホルム：メタノール（４：１、体積比）溶液に
溶解させた。これを薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬ
Ｃという）に２回かけ精製した。得られたリピドＡは、
以下に示すリソ−リピドＡの調製、並びにリピドＡのリ
ンの測定、糖分析、脂肪酸分析及び質量分析に供した。
酢酸を１００ミリリットル添加し、１００℃で３時間加
水分解した。沈殿（０．０５ｇ）を１〜２ミリリットル
のクロロホルム：メタノール（４：１、体積比）溶液に
溶解させた。これを薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬ
Ｃという）に２回かけ精製した。得られたリピドＡは、
以下に示すリソ−リピドＡの調製、並びにリピドＡのリ
ンの測定、糖分析、脂肪酸分析及び質量分析に供した。
【００４８】（４）リソ−リピドＡの調製 上記（３）で得られたリピドＡ０．０２ｇに０．２規定
ＫＯＨ−メタノール２０ミリリットルを添加し、３７℃
で１４時間加水分解した。沈殿（０．００４ｇ）をクロ
ロホルム：メタノール（４：１、体積比）に溶解させ
る。これをＴＬＣに２回かけ、リソ−リピドＡを精製し
た。リソ−リピドＡは、リピドＡからエステル結合型脂
肪酸を除いたものである。
ＫＯＨ−メタノール２０ミリリットルを添加し、３７℃
で１４時間加水分解した。沈殿（０．００４ｇ）をクロ
ロホルム：メタノール（４：１、体積比）に溶解させ
る。これをＴＬＣに２回かけ、リソ−リピドＡを精製し
た。リソ−リピドＡは、リピドＡからエステル結合型脂
肪酸を除いたものである。
【００４９】（５）リピドＡのリンの測定 上記（３）で得られたリピドＡをＴＬＣで展開し、ディ
ットマー−レスター(dittmer-Lester)試薬を噴霧してリ
ンの有無を確認したが、リンは確認されなかった。
ットマー−レスター(dittmer-Lester)試薬を噴霧してリ
ンの有無を確認したが、リンは確認されなかった。
【００５０】同様にして、ＴＬＣで展開したリピドＡを
バートレット(Bartlett)法により非色定量したが、リン
は検知されなかった。
バートレット(Bartlett)法により非色定量したが、リン
は検知されなかった。
【００５１】（６）リピドＡの糖分析 上記（４）で得られたリソ−リピドＡを２．０モル／リ
ットルのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて１２０℃
で２時間加水分解した。得られた糖画分を回収し、アル
ジトールアセテイト化し、ガスクロマトグラフィー（58
90 SERIES II、HEWLETT-PACKARD 製）（以下「ＧＣ」と
いう）、次いでＧＣで得られたピーク部分の重量分析
（JEO L-SX 102、日本電子製）（以下「ＭＳ」という）
により分析した。得られた結果を図２（ＧＣ）、図３〜
５（ＭＳ）に示す。
ットルのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を用いて１２０℃
で２時間加水分解した。得られた糖画分を回収し、アル
ジトールアセテイト化し、ガスクロマトグラフィー（58
90 SERIES II、HEWLETT-PACKARD 製）（以下「ＧＣ」と
いう）、次いでＧＣで得られたピーク部分の重量分析
（JEO L-SX 102、日本電子製）（以下「ＭＳ」という）
により分析した。得られた結果を図２（ＧＣ）、図３〜
５（ＭＳ）に示す。
【００５２】図２〜５の結果より、リピドＡは、グルコ
ース、マンノースおよびもう１種未知の糖から構成され
ることが明らかになった。
ース、マンノースおよびもう１種未知の糖から構成され
ることが明らかになった。
【００５３】７）リピドＡの脂肪酸分析 ａ）エステル結合型脂肪酸の分析 上記（３）で得られたリピドＡに０．２規定ＫＯＨ−メ
タノールを添加し、３７℃で１４時間加水分解した後、
脂肪酸分画を回収し、メチルエステル化し、ＧＣ、次い
でＧＣにより得られたピーク部分のＭＳにより分析し
た。得られた結果を図６（ＧＣ）、図７（ＭＳ）に示
す。
タノールを添加し、３７℃で１４時間加水分解した後、
脂肪酸分画を回収し、メチルエステル化し、ＧＣ、次い
でＧＣにより得られたピーク部分のＭＳにより分析し
た。得られた結果を図６（ＧＣ）、図７（ＭＳ）に示
す。
【００５４】図６〜７に示した結果から、エステル型脂
肪酸は、１２：０の脂肪酸であることがわかった。
肪酸は、１２：０の脂肪酸であることがわかった。
【００５５】ｂ）アミド結合型脂肪酸の分析 上記（４）で得られたリソ−リピドＡに６．０規定ＨＣ
ｌを添加し、１００℃で２時間加水分解した後、脂肪酸
分画を回収し、メチルエステル化し、ＧＣ、次いでＧＣ
により得られたピーク部分のＭＳにより分析した。得ら
れた結果を図８（ＧＣ）、図９〜１０（ＭＳ）に示す。
ｌを添加し、１００℃で２時間加水分解した後、脂肪酸
分画を回収し、メチルエステル化し、ＧＣ、次いでＧＣ
により得られたピーク部分のＭＳにより分析した。得ら
れた結果を図８（ＧＣ）、図９〜１０（ＭＳ）に示す。
【００５６】図８〜１０に示した結果から、アミド型脂
肪酸は、３−ＯＨ−１４：０の脂肪酸及び１４：１の脂
肪酸であることがわかった。
肪酸は、３−ＯＨ−１４：０の脂肪酸及び１４：１の脂
肪酸であることがわかった。
【００５７】ｃ）全脂肪酸の分析 上記（３）のリピドＡを６．０規定ＨＣｌを用いて１０
０℃で２時間加水分解した後、脂肪酸分画を回収し、メ
チルエステル化し、ＧＣ、次いでＧＣにより得られたピ
ーク部分のＭＳにより分析した。得られた結果を図１１
（ＧＣ）、図１２〜１４（ＭＳ）に示す。
０℃で２時間加水分解した後、脂肪酸分画を回収し、メ
チルエステル化し、ＧＣ、次いでＧＣにより得られたピ
ーク部分のＭＳにより分析した。得られた結果を図１１
（ＧＣ）、図１２〜１４（ＭＳ）に示す。
【００５８】図１１〜１４から明らかなように、３−Ｏ
Ｈ−１４：０、１４：１および１２：０の脂肪酸が確認
された。
Ｈ−１４：０、１４：１および１２：０の脂肪酸が確認
された。
【００５９】（８）リピドＡの質量分析 上記（３）のリピドＡを高速原子衝撃法−重量分析法
（以下「ＦＡＢ−ＭＳ」という）（JEOL-SX 102 、日本
電子製）によりその質量を分析した。得られた結果を図
１５に示す。
（以下「ＦＡＢ−ＭＳ」という）（JEOL-SX 102 、日本
電子製）によりその質量を分析した。得られた結果を図
１５に示す。
【００６０】図１５の結果は、リピドＡからＨ＋をはず
したリピドＡマイナスイオンの質量であるので、リピド
Ａの質量は、１９２８．９であることが分かった。
したリピドＡマイナスイオンの質量であるので、リピド
Ａの質量は、１９２８．９であることが分かった。
【００６１】実施例２ リピドＡのＣＳＦ誘導作用活性 本発明のリピドＡのＣＳＦ誘導作用活性は、次のように
して測定した。
して測定した。
【００６２】本発明のリピドＡをリン酸緩衝溶液（以下
ＰＢＳという）に溶解し、ＣＤＦ１マウスの腹腔内に投
与し、６時間後に血清を回収する。この血清（５０マイ
クロリットル）をＣＤＦ１マウス骨髄細胞（５×１０4
個）と混和し、軟寒天（DIFCO 社製）中に蒔き込み、Ｃ
Ｏ2 雰囲気下、３７℃で５日間培養する。得られたコロ
ニー数を測定した結果を、図７に示す。本発明のリピド
Ａの代わりに大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来のリピド
Ａ（LIST BIOLOGICAL LABORATORIES. INC.製）を用いた
以外は同じ条件で測定した結果も図１６に示す。
ＰＢＳという）に溶解し、ＣＤＦ１マウスの腹腔内に投
与し、６時間後に血清を回収する。この血清（５０マイ
クロリットル）をＣＤＦ１マウス骨髄細胞（５×１０4
個）と混和し、軟寒天（DIFCO 社製）中に蒔き込み、Ｃ
Ｏ2 雰囲気下、３７℃で５日間培養する。得られたコロ
ニー数を測定した結果を、図７に示す。本発明のリピド
Ａの代わりに大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来のリピド
Ａ（LIST BIOLOGICAL LABORATORIES. INC.製）を用いた
以外は同じ条件で測定した結果も図１６に示す。
【００６３】図１６から、ＣＳＦ誘導作用活性は、０．
１μｇ／マウス及び１μｇ／マウスの投与では、大腸菌
のリピドＡのほうが高いが、１０マイクログラム／マウ
スの投与では、ＴＰ−５のリピドＡと大腸菌由来のリピ
ドＡとは有意差がないことが分かる。
１μｇ／マウス及び１μｇ／マウスの投与では、大腸菌
のリピドＡのほうが高いが、１０マイクログラム／マウ
スの投与では、ＴＰ−５のリピドＡと大腸菌由来のリピ
ドＡとは有意差がないことが分かる。
【００６４】実施例３ 本発明のＬＰＳのドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリ
ルアミドゲル（以下「ＳＤＳ・ＰＡＧＥ」という）電気
泳動のパターンを図１７に示す。
ルアミドゲル（以下「ＳＤＳ・ＰＡＧＥ」という）電気
泳動のパターンを図１７に示す。
【００６５】図１７から、本発明のＬＰＳは、段階状に
数千〜４、５万の分子量分布を示すものであることがわ
かる。
数千〜４、５万の分子量分布を示すものであることがわ
かる。
【００６６】実施例４ ＬＰＳの毒性試験及び血中クリアランス試験を次のよう
にして行った。
にして行った。
【００６７】ＣＤＦ１マウス（５週齢、メス）に上記方
法により製造したＬＰＳおよび大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ
４）由来ＬＰＳ（LIST BIOLOGICAL LABORATORIES. INC.
製）を投与し、致死毒性を測定した。得られた結果を表
１に示す。
法により製造したＬＰＳおよび大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ
４）由来ＬＰＳ（LIST BIOLOGICAL LABORATORIES. INC.
製）を投与し、致死毒性を測定した。得られた結果を表
１に示す。
【００６８】
【表１】
【００６９】表１から明らかなように、ＴＰ−５由来Ｌ
ＰＳのＬＤ50は、大腸菌由来ＬＰＳのＬＤ50の約１００
倍であった。
ＰＳのＬＤ50は、大腸菌由来ＬＰＳのＬＤ50の約１００
倍であった。
【００７０】このように、ＴＰ−５由来ＬＰＳの毒性
が、大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来ＬＰＳの毒性に比
べて極めて低いのは、ＴＰ−５由来ＬＰＳが血中から速
やかに除去されるためと見られる。以下に、ＴＰ−５由
来ＬＰＳと大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来のＬＰＳに
ついてのそれぞれの血中クリアランス時間測定方法とそ
の結果を示す。
が、大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来ＬＰＳの毒性に比
べて極めて低いのは、ＴＰ−５由来ＬＰＳが血中から速
やかに除去されるためと見られる。以下に、ＴＰ−５由
来ＬＰＳと大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来のＬＰＳに
ついてのそれぞれの血中クリアランス時間測定方法とそ
の結果を示す。
【００７１】ＣＤＦ１マウス（５週齢、メス）にＴＰ−
５由来ＬＰＳまたは大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来の
ＬＰＳを０．１ミリグラム／マウス腹腔投与し、１、
３、および６時間後に血中に放出されるＬＰＳの量をリ
ムルステストにより測定した。得られた結果を表２に示
す。
５由来ＬＰＳまたは大腸菌（Ｏ−１１１：Ｂ４）由来の
ＬＰＳを０．１ミリグラム／マウス腹腔投与し、１、
３、および６時間後に血中に放出されるＬＰＳの量をリ
ムルステストにより測定した。得られた結果を表２に示
す。
【００７２】
【表２】
【００７３】表２の結果から、大腸菌由来のＬＰＳは、
６時間の測定時間の範囲では血中にとどまるのに対し、
ＴＰ−５のＬＰＳは、速やかに血中から除去されること
がわかる。
６時間の測定時間の範囲では血中にとどまるのに対し、
ＴＰ−５のＬＰＳは、速やかに血中から除去されること
がわかる。
【００７４】ＬＰＳの毒性試験結果は、ＬＰＳの活性中
心がリピドＡであることから、リピドＡの毒性試験結果
に比例することは明らかである。
心がリピドＡであることから、リピドＡの毒性試験結果
に比例することは明らかである。
【００７５】実施例５ ＴＰ−５に含有されるＬＰＳ量の測定 以下の方法により、ＴＰ−５及びＥ．ｃｏｌｉのＬＰ
Ｓ、並びに各々の菌体の熱水抽出物のＬＰＳの含有量を
リムルステストで測定した。
Ｓ、並びに各々の菌体の熱水抽出物のＬＰＳの含有量を
リムルステストで測定した。
【００７６】得られた結果を表３に示す。
【００７７】
【表３】
【００７８】表３の結果から、ＴＰ−５には、菌体とし
て測定したときは、Ｅ．ｃｏｌｉよりも多くのＬＰＳ
を、熱水抽出物として測定したときは、Ｅ．ｃｏｌｉよ
りもやや少ないＬＰＳが含有されていることが分かる。
なお、熱水抽出物として測定した時のほうが含有量が多
いのは、熱水抽出により、ＬＰＳが菌体から遊離し、試
薬と反応し易くなるとの理由によるものと思われる。
て測定したときは、Ｅ．ｃｏｌｉよりも多くのＬＰＳ
を、熱水抽出物として測定したときは、Ｅ．ｃｏｌｉよ
りもやや少ないＬＰＳが含有されていることが分かる。
なお、熱水抽出物として測定した時のほうが含有量が多
いのは、熱水抽出により、ＬＰＳが菌体から遊離し、試
薬と反応し易くなるとの理由によるものと思われる。
【００７９】実施例６ ＴＰ−５の抗腫瘍効果 ＢＡＬＢ／ｃマウスにＭｅｔｈ−Ａ繊維肉腫をマウス１
匹当り５×１０6 細胞づつ右側脇腹に皮下移植した。移
植の２日後より２日に１回づつ計２回各試料（ＴＰ−
５、大腸菌は、死菌各１ｍｇ／マウス）をリン酸緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ）に縣濁して腫瘍内注射により投与し
た。腫瘍移植１５日後に腫瘍のサイズを測定した。
匹当り５×１０6 細胞づつ右側脇腹に皮下移植した。移
植の２日後より２日に１回づつ計２回各試料（ＴＰ−
５、大腸菌は、死菌各１ｍｇ／マウス）をリン酸緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ）に縣濁して腫瘍内注射により投与し
た。腫瘍移植１５日後に腫瘍のサイズを測定した。
【００８０】得られた結果を表４に示す。
【００８１】
【表４】
【００８２】表４から明らかなように、ＴＰ−５は、大
腸菌に比べるとやや劣るが、高い抗腫瘍活性を有してい
る。
腸菌に比べるとやや劣るが、高い抗腫瘍活性を有してい
る。
【００８３】実施例７ ＴＰ−５の安全性を以下に示す動物実験により試験し
た。
た。
【００８４】飼育条件 飼料は、オリエンタル酵母のＣＲＦ−１固形飼料をコン
トロールとして、同飼料にＴＰ−５乾燥菌体をそれぞれ
１、５、１０％添加した飼料を作成した。
トロールとして、同飼料にＴＰ−５乾燥菌体をそれぞれ
１、５、１０％添加した飼料を作成した。
【００８５】実験動物としてはＩＣＲマウスを用い、オ
ス、メス各群１０匹、８群に分け５週零より１２週間飼
育した。飼料の摂取は、飼育開始より２週間は自由摂取
とし、３週目より制限食とし、５ｇ／マウス／日、更に
６週目より試験終了時まで６ｇ／マウス／日とした。ま
た、水は自由摂取とした。
ス、メス各群１０匹、８群に分け５週零より１２週間飼
育した。飼料の摂取は、飼育開始より２週間は自由摂取
とし、３週目より制限食とし、５ｇ／マウス／日、更に
６週目より試験終了時まで６ｇ／マウス／日とした。ま
た、水は自由摂取とした。
【００８６】実験期間中は体重の変動を調べた。また飼
育終了時には、採血後、剖検を行い、臓器を採取して湿
重量を測定した。採血した血液については、血液学的検
査、血液生化学的検査を行うと共に、１０％投与群につ
いては各種の臓器について病理学的検査もあわせて行な
った。得られた結果を図１８〜１９及び表５〜７に示
す。
育終了時には、採血後、剖検を行い、臓器を採取して湿
重量を測定した。採血した血液については、血液学的検
査、血液生化学的検査を行うと共に、１０％投与群につ
いては各種の臓器について病理学的検査もあわせて行な
った。得られた結果を図１８〜１９及び表５〜７に示
す。
【００８７】ａ）体重 オス、メスともにＴＰ−５の添加量が多い飼料ほど食べ
残しが多くなる傾向が観察さたが、飼育中の体重の変動
についてはオス、メスとも各群に有意な差は認められな
かった。
残しが多くなる傾向が観察さたが、飼育中の体重の変動
についてはオス、メスとも各群に有意な差は認められな
かった。
【００８８】ｂ）臓器重量
【表５】
【００８９】臓器重量については、造血臓器である脾臓
が肥大した以外、悪影響を示す肥大という点ではオス、
メスとも各群に有意な差は認められなかった。
が肥大した以外、悪影響を示す肥大という点ではオス、
メスとも各群に有意な差は認められなかった。
【００９０】ｃ）血液学的検査
【表６】
【００９１】血液学的検査では、ＭＣＶ（平均赤血球容
積）やヘモグロビン量に一部有意差が見られる群があっ
たが、これはマウスの個体差に基づくばらつきによるも
のと考えられた。
積）やヘモグロビン量に一部有意差が見られる群があっ
たが、これはマウスの個体差に基づくばらつきによるも
のと考えられた。
【００９２】ｄ）血液生化学的検査
【表７】
【００９３】血液生化学的検査についても一部に有意の
差が認められたが、ＴＰ−５投与量に依存したものでは
なかった。
差が認められたが、ＴＰ−５投与量に依存したものでは
なかった。
【００９４】ｅ）各臓器の病理学的検査 唾液線、膀胱、子宮、精巣、卵巣、肝臓、腎臓、腸間膜
リンパ節について検討した。唾液線、膀胱、子宮、精
巣、卵巣、並びに阻害物質の影響を受け易い臓器である
肝臓及び腎臓については、コントロール群との間に変化
は認められなかった。免疫に係わる臓器である脾臓と腸
間膜総合的に判断すると、ＴＰ−５は、全身的な毒性は
低い。
リンパ節について検討した。唾液線、膀胱、子宮、精
巣、卵巣、並びに阻害物質の影響を受け易い臓器である
肝臓及び腎臓については、コントロール群との間に変化
は認められなかった。免疫に係わる臓器である脾臓と腸
間膜総合的に判断すると、ＴＰ−５は、全身的な毒性は
低い。
【００９５】
【発明の効果】本発明により、ＣＳＦ活性などの生体の
免疫賦活的活性が高く、しかも毒性の低いリピドＡが提
供される。
免疫賦活的活性が高く、しかも毒性の低いリピドＡが提
供される。
【００９６】また、本発明のＴＰ−５により、新規なＬ
ＰＳおよびリピドＡを提供することができる。
ＰＳおよびリピドＡを提供することができる。
【図１】ＴＰ−５の培養液の吸収スペクトルの図
【図２】リピドＡの糖のガスクロマトグラムの図
【図３】リピドＡの糖の重量分析の図
【図４】リピドＡの糖の重量分析の図
【図５】リピドＡの糖の重量分析の図
【図６】リピドＡのエステル型脂肪酸のガスクロマトグ
ラムの図
ラムの図
【図７】リピドＡのエステル型脂肪酸の重量分析の図
【図８】リピドＡのアミド型脂肪酸のガスクロマトグラ
ムの図
ムの図
【図９】リピドＡのアミド型脂肪酸の重量分析の図
【図１０】リピドＡのアミド型脂肪酸の重量分析の図
【図１１】リピドＡの全脂肪酸のガスクロマトグラムの
図
図
【図１２】リピドＡの全脂肪酸の重量分析の図
【図１３】リピドＡの全脂肪酸の重量分析の図
【図１４】リピドＡの全脂肪酸の重量分析の図
【図１５】リピドＡの高速原子衝撃法−重量分析の図
【図１６】リピドＡのＣＳＦ活性を表すグラフ
【図１７】ＬＰＳの電気泳動の写真
【図１８】ＴＰ−５投与マウス（オス）の体重変化を表
すグラフ
すグラフ
【図１９】ＴＰ−５投与マウス（メス）の体重変化を表
すグラフ
すグラフ
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 19/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 高橋 次郎 愛知県岡崎市滝町字外浦66−１ (72)発明者 隈本 正一郎 福岡県筑紫野市美しが丘南４丁目１−11
Claims (3)
- 【請求項１】 糖鎖と、該糖鎖とエステル結合した型の
脂肪酸及びアミド結合した型の脂肪酸との複合体である
リピドＡにおいて、 該糖がグルコサミン、マンノース又は名称不明の糖から
なることと、 該エステル結合した型の脂肪酸が炭素原子数１２の直鎖
飽和脂肪酸であることと、 該アミド結合した型の脂肪酸が炭素原子数１４の直鎖脂
肪酸であって、該直鎖の末端の炭素原子と末端から２番
目の炭素原子との間の結合が二重結合である直鎖不飽和
脂肪酸、及び炭素原子数１４の直鎖脂肪酸であって、該
直鎖の末端から３番目の炭素原子に結合する水素原子１
つが水酸基により置換された直鎖飽和脂肪酸であること
と、 該リピドＡがリンを包含しないことと、 質量が１９２８．９であることとを特徴とするリピド
Ａ。 - 【請求項２】 請求項１に記載のリピドＡを包含するポ
リ多糖。 - 【請求項３】 受託番号ＦＥＲＭ Ｐ−１５８７１であ
るランプロバクター属の光合成細菌。
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP25586996A JP3866337B2 (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | 新規なリピドａ及びｌｐｓ並びにこれを産生する光合成細菌 |
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ID=17284715
Family Applications (1)
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| JP25586996A Expired - Fee Related JP3866337B2 (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | 新規なリピドａ及びｌｐｓ並びにこれを産生する光合成細菌 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3866337B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013136787A (ja) * | 2005-11-28 | 2013-07-11 | Genichiro Soma | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 |
| JP2018044038A (ja) * | 2016-09-12 | 2018-03-22 | 有限会社バイオメディカルリサーチグループ | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 |
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-
1996
- 1996-09-27 JP JP25586996A patent/JP3866337B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|---|---|---|
| JP2013136787A (ja) * | 2005-11-28 | 2013-07-11 | Genichiro Soma | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 |
| JP5603537B2 (ja) * | 2005-11-28 | 2014-10-08 | 源一郎 杣 | リポ多糖及びリポ多糖製造方法 |
| JP2016222923A (ja) * | 2005-11-28 | 2016-12-28 | 源一郎 杣 | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 |
| US10017727B2 (en) | 2005-11-28 | 2018-07-10 | Gen-Ichiro Soma | Method for fermentation and culture, fermented plant extract, fermented plant extract composition, method for producing lipopolysaccharide and lipopolysaccharide |
| JP2018044038A (ja) * | 2016-09-12 | 2018-03-22 | 有限会社バイオメディカルリサーチグループ | リポ多糖、リポ多糖製造方法及びリポ多糖配合物 |
| WO2018155051A1 (ja) * | 2017-02-21 | 2018-08-30 | 一般財団法人阪大微生物病研究会 | リピドａ |
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| Publication number | Publication date |
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| JP3866337B2 (ja) | 2007-01-10 |
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