JPH0984600A - 核酸抽出試薬および核酸抽出方法 - Google Patents
核酸抽出試薬および核酸抽出方法Info
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- JPH0984600A JPH0984600A JP25098895A JP25098895A JPH0984600A JP H0984600 A JPH0984600 A JP H0984600A JP 25098895 A JP25098895 A JP 25098895A JP 25098895 A JP25098895 A JP 25098895A JP H0984600 A JPH0984600 A JP H0984600A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 操作が簡単で且つ短時間で行うことができる
核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供する。 【解決手段】 グアニジン誘導体またはチオシアン酸誘
導体からなるタンパク可溶化剤と、ポリヌクレオチドか
らなるキャリアと、メルカプト基および水酸基を有する
可溶化促進剤とを少なくとも含む核酸抽出試薬と；試料
とを混合して、該試料中の抽出すべき核酸を不溶化した
後；該不溶化した核酸を分離する。
核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供する。 【解決手段】 グアニジン誘導体またはチオシアン酸誘
導体からなるタンパク可溶化剤と、ポリヌクレオチドか
らなるキャリアと、メルカプト基および水酸基を有する
可溶化促進剤とを少なくとも含む核酸抽出試薬と；試料
とを混合して、該試料中の抽出すべき核酸を不溶化した
後；該不溶化した核酸を分離する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、核酸を含有する試
料（血清等）からの核酸の抽出ないし精製に好適に使用
可能な核酸抽出試薬および核酸抽出方法に関する。本発
明は、核酸検出試薬（例えば、肝炎Ｃ型ウィルス（ＨＣ
Ｖ）−ＲＮＡ検出用の診断薬）等との組合せにおいて、
特に好ましく利用可能である。
料（血清等）からの核酸の抽出ないし精製に好適に使用
可能な核酸抽出試薬および核酸抽出方法に関する。本発
明は、核酸検出試薬（例えば、肝炎Ｃ型ウィルス（ＨＣ
Ｖ）−ＲＮＡ検出用の診断薬）等との組合せにおいて、
特に好ましく利用可能である。
【０００２】
【従来の技術】血清等の生体試料から核酸を精製するこ
とは、遺伝子操作、臨床検査等において重要な操作とな
っている。例えば、ガン遺伝子等の遺伝子検査を行う場
合には、血液中の白血球細胞等から核酸を精製すること
が必要である。また、ウィルス性の感染症を発症した患
者のウィルスの存在を確定するためには、該患者の血清
からの核酸の精製が必要である。
とは、遺伝子操作、臨床検査等において重要な操作とな
っている。例えば、ガン遺伝子等の遺伝子検査を行う場
合には、血液中の白血球細胞等から核酸を精製すること
が必要である。また、ウィルス性の感染症を発症した患
者のウィルスの存在を確定するためには、該患者の血清
からの核酸の精製が必要である。
【０００３】核酸は、通常、血清中等には遊離しておら
ず、白血球やウィルス粒子に内在している。核酸がどの
ような状態になっているか、また、核酸の存在あるいは
その数がどのようになっているか検査するためには、白
血球の膜やウィルス粒子の外壁を破壊し、該白血球やウ
ィルス粒子を構成しているタンパクを変成ないし分解
し、核酸を露出ないし遊離した状態にする操作が必要と
なる。
ず、白血球やウィルス粒子に内在している。核酸がどの
ような状態になっているか、また、核酸の存在あるいは
その数がどのようになっているか検査するためには、白
血球の膜やウィルス粒子の外壁を破壊し、該白血球やウ
ィルス粒子を構成しているタンパクを変成ないし分解
し、核酸を露出ないし遊離した状態にする操作が必要と
なる。
【０００４】このような核酸の露出ないし遊離方法とし
て、従来より、フロテアーゼＫ等のタンパク分解酵素を
用いて核酸を露出し、フェノール／クロロホルムを用い
て精製する方法( Ｍolecular cloning: A Laboratory m
anual Appendix E3,E ４, New York: Cold Spring Harb
or Laboratory,１９８９) や；グアニジンを用いて精製
を行う方法(Acid Guanidinium-thiocyanate Phenol-Chl
oroform method: Analytical Biochemistry １６２: １
５６- １５９, １９８7)( Ｍolecular cloning: A Labo
ratory manual 7.２3-7.２５, New York: Cold Spring
Harbor Laboratory,１９８９, Analytical Biochemistr
y １６２: ４６3,１９８7)等が知られている。
て、従来より、フロテアーゼＫ等のタンパク分解酵素を
用いて核酸を露出し、フェノール／クロロホルムを用い
て精製する方法( Ｍolecular cloning: A Laboratory m
anual Appendix E3,E ４, New York: Cold Spring Harb
or Laboratory,１９８９) や；グアニジンを用いて精製
を行う方法(Acid Guanidinium-thiocyanate Phenol-Chl
oroform method: Analytical Biochemistry １６２: １
５６- １５９, １９８7)( Ｍolecular cloning: A Labo
ratory manual 7.２3-7.２５, New York: Cold Spring
Harbor Laboratory,１９８９, Analytical Biochemistr
y １６２: ４６3,１９８7)等が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】核酸の処理に上記した
タンパク分解酵素プロテアーゼＫ等を用いた場合、タン
パクの分解に長い時間が必要となる。また、上記フェノ
ール／クロロホルムを用いて核酸の精製を行うために
は、換気装置を有するクリーンベンチ等の設備が必要と
なるのみならず、廃液の処理も必要となる。更には、こ
のフェノール／クロロホルムを用いる精製の効率は比較
的低いため、精製の原料たる試料等を大量に用意する必
要がある。
タンパク分解酵素プロテアーゼＫ等を用いた場合、タン
パクの分解に長い時間が必要となる。また、上記フェノ
ール／クロロホルムを用いて核酸の精製を行うために
は、換気装置を有するクリーンベンチ等の設備が必要と
なるのみならず、廃液の処理も必要となる。更には、こ
のフェノール／クロロホルムを用いる精製の効率は比較
的低いため、精製の原料たる試料等を大量に用意する必
要がある。
【０００６】更に、従来法においては、精製を進めてい
く際に、１つの試料に対して数本のチューブを用いる必
要があるため操作性は良好でなく、しかもエアゾル等の
コンタミネーションを生じやすい欠点がある。例えば、
血清中のＣ型肝炎ウィルス(ＨＣＶ) の存在を検出する
場合、各患者によってウィルスの存在個数の範囲が１０
1 から１０8 ｃｏｐｙ／ｍｌ程度の範囲にあるため、エ
アゾルによるチューブ相互のコンタミネーションの克服
が重要な問題となる。
く際に、１つの試料に対して数本のチューブを用いる必
要があるため操作性は良好でなく、しかもエアゾル等の
コンタミネーションを生じやすい欠点がある。例えば、
血清中のＣ型肝炎ウィルス(ＨＣＶ) の存在を検出する
場合、各患者によってウィルスの存在個数の範囲が１０
1 から１０8 ｃｏｐｙ／ｍｌ程度の範囲にあるため、エ
アゾルによるチューブ相互のコンタミネーションの克服
が重要な問題となる。
【０００７】上記した問題点を解消する目的で、チキソ
トロピー性を有する増粘剤を用いる遠心分離により、比
重差を利用して核酸を抽出する方法も提案されている
（特開平６−４６８５６号公報、特開平７−５９５７２
号公報）。しかしながら、このような増粘剤を用いる方
法は精密な核酸の分離が可能となる一方で、操作が煩雑
となって、大量の試料の処理には適しないという欠点が
あった。
トロピー性を有する増粘剤を用いる遠心分離により、比
重差を利用して核酸を抽出する方法も提案されている
（特開平６−４６８５６号公報、特開平７−５９５７２
号公報）。しかしながら、このような増粘剤を用いる方
法は精密な核酸の分離が可能となる一方で、操作が煩雑
となって、大量の試料の処理には適しないという欠点が
あった。
【０００８】本発明の目的は、操作が簡単で且つ短時間
で行うことができる核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を
提供することにある。
で行うことができる核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を
提供することにある。
【０００９】本発明の他の目的は、フェノール／クロロ
ホルム等の有害な試薬を用いることなく、安全に核酸を
抽出可能な核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供する
ことにある。
ホルム等の有害な試薬を用いることなく、安全に核酸を
抽出可能な核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供する
ことにある。
【００１０】本発明の更に他の目的は、大量の試料処理
が容易な核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供するこ
とにある。。
が容易な核酸抽出試薬ないし核酸抽出方法を提供するこ
とにある。。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者は鋭意研究の結
果、所定のタンパク可溶化剤と、ポリヌクレオチドから
なるキャリアと、メルカプト基を有する可溶化促進剤と
からなる核酸抽出試薬を用いた場合には、従来の増粘剤
を用いる分離を用いなくても良好な核酸分離が達成され
ることを見出した。
果、所定のタンパク可溶化剤と、ポリヌクレオチドから
なるキャリアと、メルカプト基を有する可溶化促進剤と
からなる核酸抽出試薬を用いた場合には、従来の増粘剤
を用いる分離を用いなくても良好な核酸分離が達成され
ることを見出した。
【００１２】本発明の核酸抽出試薬は上記の知見に基づ
くものであり、より詳しくは、グアニジン誘導体または
チオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤と；ポリ
ヌクレオチドからなるキャリアと；メルカプト基および
水酸基を有する化合物からなる可溶化促進剤と；を少な
くとも含むことを特徴とするものである。
くものであり、より詳しくは、グアニジン誘導体または
チオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤と；ポリ
ヌクレオチドからなるキャリアと；メルカプト基および
水酸基を有する化合物からなる可溶化促進剤と；を少な
くとも含むことを特徴とするものである。
【００１３】本発明によれば、更に、グアニジン誘導体
またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む核酸抽出試薬と；試料とを混合して、該試料中の抽出
すべき核酸を不溶化した後；該不溶化した核酸を分離す
ることを特徴とする核酸抽出方法が提供される。
またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む核酸抽出試薬と；試料とを混合して、該試料中の抽出
すべき核酸を不溶化した後；該不溶化した核酸を分離す
ることを特徴とする核酸抽出方法が提供される。
【００１４】本発明の核酸抽出方法は、上記した構成を
有する核酸抽出「試薬α」を（必要に応じて、至適ｐＨ
に調整した系で）、試料と混合する工程１と、ポリヌク
レオチドからなるキャリアと試料中の核酸とを液層から
分離する工程２とからなる。
有する核酸抽出「試薬α」を（必要に応じて、至適ｐＨ
に調整した系で）、試料と混合する工程１と、ポリヌク
レオチドからなるキャリアと試料中の核酸とを液層から
分離する工程２とからなる。
【００１５】本発明の核酸抽出方法によれば、上記した
２つの工程により、当初に試料を入れた１本の容器（チ
ューブ等）を用いて核酸の良好な精製が可能となる。本
発明においては、ポリヌクレオチドからなるキャリアと
試料中の核酸とを液層から分離する際にも、危険性を伴
うフェノール／クロロホルムを用いる必要はない。
２つの工程により、当初に試料を入れた１本の容器（チ
ューブ等）を用いて核酸の良好な精製が可能となる。本
発明においては、ポリヌクレオチドからなるキャリアと
試料中の核酸とを液層から分離する際にも、危険性を伴
うフェノール／クロロホルムを用いる必要はない。
【００１６】本発明は、核酸の抽出効率の点からは、Ｈ
ＣＶ−ＲＮＡに特に好適に適用可能である。本発明を用
いて精製した血清等の試料中のＨＣＶ−ＲＮＡは、Ｔａ
ｑ-Polymerase を用いたＰＣＲ法を利用した増幅ないし
検出法に供することも可能であるが、特に、Ｔｔｈポリ
メラーゼを用いるＰＣＲ法（例えば、商品名「アンプリ
コアＨＣＶ−ＲＮＡ」、ロッシュ社製）により増幅ない
し検出した場合に、最も良好な高感度な検出結果を得る
ことが可能となる。
ＣＶ−ＲＮＡに特に好適に適用可能である。本発明を用
いて精製した血清等の試料中のＨＣＶ−ＲＮＡは、Ｔａ
ｑ-Polymerase を用いたＰＣＲ法を利用した増幅ないし
検出法に供することも可能であるが、特に、Ｔｔｈポリ
メラーゼを用いるＰＣＲ法（例えば、商品名「アンプリ
コアＨＣＶ−ＲＮＡ」、ロッシュ社製）により増幅ない
し検出した場合に、最も良好な高感度な検出結果を得る
ことが可能となる。
【００１７】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
以下の記載において、量比を表す「％」は特に断らない
限り「重量基準（重量％）」である。
以下の記載において、量比を表す「％」は特に断らない
限り「重量基準（重量％）」である。
【００１８】（試薬α）「試薬α」は、グアニジン誘導
体またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む。該「試薬α」は、必要に応じて、ｐＨ調整剤を更に
含んでいてもよい。
体またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む。該「試薬α」は、必要に応じて、ｐＨ調整剤を更に
含んでいてもよい。
【００１９】「試薬α」を構成する各成分の好ましい範
囲（試料と混合される際の濃度範囲等）は、以下の通り
である。
囲（試料と混合される際の濃度範囲等）は、以下の通り
である。
【００２０】 タンパク可溶化剤：２Ｍ〜６Ｍ（ｍｏｌ／ｌ） 可溶化促進剤：０. ０１〜１０％ キャリア：０. ００１〜１０００μｇ／ｍｌ ｐＨ：４〜８ ｐＨ調整剤：０. １〜０. ５Ｍ （タンパク可溶化剤）タンパク可溶化剤は、タンパクを
可溶化して抽出すべき核酸を露出させる機能を有する成
分である。本発明において該タンパク可溶化剤は、グア
ニジン誘導体またはチオシアン酸誘導体から選択された
ものの１種類以上の化合物からなる。より具体的には例
えば、グアニジウムイソチオシアネート、塩酸グアジニ
ン、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウムが
好ましく使用可能である。
可溶化して抽出すべき核酸を露出させる機能を有する成
分である。本発明において該タンパク可溶化剤は、グア
ニジン誘導体またはチオシアン酸誘導体から選択された
ものの１種類以上の化合物からなる。より具体的には例
えば、グアニジウムイソチオシアネート、塩酸グアジニ
ン、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウムが
好ましく使用可能である。
【００２１】（可溶化促進剤）可溶化促進剤は、上記タ
ンパク可溶化剤によるタンパク可溶化を促進する機能を
有する成分である。本発明において該可溶化促進剤は、
メルカプト基および水酸基を有する化合物からなる。こ
のメルカプト基は、水酸基に対して、β−位にあること
が好ましい。より具体的には例えば、ジチオスレイトー
ル（ＤＴＴ）、β- メルカプトエタノールから選択され
た１種類以上の化合物が挙げられる。
ンパク可溶化剤によるタンパク可溶化を促進する機能を
有する成分である。本発明において該可溶化促進剤は、
メルカプト基および水酸基を有する化合物からなる。こ
のメルカプト基は、水酸基に対して、β−位にあること
が好ましい。より具体的には例えば、ジチオスレイトー
ル（ＤＴＴ）、β- メルカプトエタノールから選択され
た１種類以上の化合物が挙げられる。
【００２２】（キャリア）キャリアは、露出した核酸の
不溶化による分離（アルコール等の作用による）を促進
する機能を有する成分である。本発明において該キャリ
アは、ポリヌクレオチドからなる。より具体的には例え
ば、t ＲＮＡ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のt ＲＮ
Ａ）、またはｐｏｌｙ−ｒＡ（例えば、化学合成により
得られたｐｏｌｙ−ｒＡ）から選択された１種類以上の
ものが挙げられる。
不溶化による分離（アルコール等の作用による）を促進
する機能を有する成分である。本発明において該キャリ
アは、ポリヌクレオチドからなる。より具体的には例え
ば、t ＲＮＡ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のt ＲＮ
Ａ）、またはｐｏｌｙ−ｒＡ（例えば、化学合成により
得られたｐｏｌｙ−ｒＡ）から選択された１種類以上の
ものが挙げられる。
【００２３】（ｐＨ調整剤）ｐＨ調整剤は、核酸抽出の
条件を最適化するために必要に応じて使用される成分で
ある。本発明においては、該ｐＨ調整剤は、酢酸ナトリ
ウム、酢酸アンモニウム、またはＮ, Ｎ−ビス（２−ヒ
ドロキシエチル）−グリシン（バイシン）から選択され
た１種類以上のものが挙げられる。このｐＨ調整剤の濃
度は、（試料と混合する際に）０. １〜０. ５Ｍ（ｐＨ
は４〜７）の範囲であることが好ましい。
条件を最適化するために必要に応じて使用される成分で
ある。本発明においては、該ｐＨ調整剤は、酢酸ナトリ
ウム、酢酸アンモニウム、またはＮ, Ｎ−ビス（２−ヒ
ドロキシエチル）−グリシン（バイシン）から選択され
た１種類以上のものが挙げられる。このｐＨ調整剤の濃
度は、（試料と混合する際に）０. １〜０. ５Ｍ（ｐＨ
は４〜７）の範囲であることが好ましい。
【００２４】（不溶化核酸の分離）本発明においては、
上記した構成を有する「試薬α」により不溶化した核酸
の分離手段は特に制限されない。比重の差による分離の
点からは、アルコールを用いる不溶化核酸分離手段が好
ましく用いられる。抽出核酸の純度を高める点からは、
該アルコールを用いる不溶化核酸の分離は、２段階で行
うことが好ましい（以下、この２段階のうち、前の段階
で用いる試薬を「試薬β」と称し、後の段階で用いる試
薬を「試薬γ」と称することがある）。この２段階の分
離に際しては、タンパク溶解性が異なる複数種類のアル
コールを用いることが好ましい。
上記した構成を有する「試薬α」により不溶化した核酸
の分離手段は特に制限されない。比重の差による分離の
点からは、アルコールを用いる不溶化核酸分離手段が好
ましく用いられる。抽出核酸の純度を高める点からは、
該アルコールを用いる不溶化核酸の分離は、２段階で行
うことが好ましい（以下、この２段階のうち、前の段階
で用いる試薬を「試薬β」と称し、後の段階で用いる試
薬を「試薬γ」と称することがある）。この２段階の分
離に際しては、タンパク溶解性が異なる複数種類のアル
コールを用いることが好ましい。
【００２５】毒性ないし沸点等に基づく除去の容易性の
点からは、これらの異なる種類のアルコールとして、エ
チルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアル
コール、アミルアルコールから選択された２種類以上が
好適に使用可能である。
点からは、これらの異なる種類のアルコールとして、エ
チルアルコール、イソプロピルアルコール、ブチルアル
コール、アミルアルコールから選択された２種類以上が
好適に使用可能である。
【００２６】比重および親和性の点からは、上記「試薬
β」は、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、
アミルアルコールから選択された１種類以上を含むこと
が好ましい。
β」は、イソプロピルアルコール、ブチルアルコール、
アミルアルコールから選択された１種類以上を含むこと
が好ましい。
【００２７】一方、上記「試薬γ」は、エタノールを含
むことが好ましい。
むことが好ましい。
【００２８】本発明における不溶化核酸の分離におい
て、好適に使用可能なアルコールの濃度は、以下の通り
である。
て、好適に使用可能なアルコールの濃度は、以下の通り
である。
【００２９】 イソプロピルアルコール：４０〜６０重量％ エチルアルコール：７０〜１００重量％（更には、６０
〜８０重量％） （各成分の好適な組合せ）本発明において、好適に使用
可能な「試薬α」の各成分の好適な組合せは、以下の通
りである（タンパク可溶化剤／キャリア／可溶化促進剤
／ｐＨ調整剤の順に示す）。
〜８０重量％） （各成分の好適な組合せ）本発明において、好適に使用
可能な「試薬α」の各成分の好適な組合せは、以下の通
りである（タンパク可溶化剤／キャリア／可溶化促進剤
／ｐＨ調整剤の順に示す）。
【００３０】（１）グアニジンイソチオシアネート／ｔ
ＲＮＡ／β- メルカプトエタノール／（酢酸ナトリウム
−バイシン） （２）グアニジンイソチオシアネート／ｐｏｌｙ−ｒＡ
／β- メルカプトエタノール／（酢酸ナトリウム−バイ
シン） （３）グアニジンイソチオシアネート／ｔＲＮＡ／ＤＴ
Ｔ／（酢酸ナトリウム−バイシン） （４）グアニジンイソチオシアネート／ｐｏｌｙ−ｒＡ
／ＤＴＴ／（酢酸ナトリウム−バイシン） （５）塩酸グアニジン／ｔＲＮＡ／β- メルカプトエタ
ノール／（酢酸ナトリウム−バイシン） （６）塩酸グアニジン／ｐｏｌｙ−ｒＡ／β- メルカプ
トエタノール／（酢酸ナトリウム−バイシン） （７）塩酸グアニジン／ｔＲＮＡ／ＤＴＴ／（酢酸ナト
リウム−バイシン） （８）塩酸グアニジン／ｐｏｌｙ−ｒＡ／ＤＴＴ／（酢
酸ナトリウム−バイシン） （核酸の抽出法）核酸を精製するに際しては、上記した
「試薬α」と試料を混合し、試料中のタンパクを変成お
よび分解を行うとともに、露出した核酸とキャリアを結
合させ、不溶化する。このように不溶化した核酸を含む
混合物に、「試薬β」を、該混合物の体積を基準として
体積で１．５〜２．５倍程度（更には、体積で１．８〜
２．２倍、特に等量程度）添加して、キャリアと核酸と
を沈殿させる。更に、上記した「試薬γ」を添加して、
共沈した核酸を洗浄する。
ＲＮＡ／β- メルカプトエタノール／（酢酸ナトリウム
−バイシン） （２）グアニジンイソチオシアネート／ｐｏｌｙ−ｒＡ
／β- メルカプトエタノール／（酢酸ナトリウム−バイ
シン） （３）グアニジンイソチオシアネート／ｔＲＮＡ／ＤＴ
Ｔ／（酢酸ナトリウム−バイシン） （４）グアニジンイソチオシアネート／ｐｏｌｙ−ｒＡ
／ＤＴＴ／（酢酸ナトリウム−バイシン） （５）塩酸グアニジン／ｔＲＮＡ／β- メルカプトエタ
ノール／（酢酸ナトリウム−バイシン） （６）塩酸グアニジン／ｐｏｌｙ−ｒＡ／β- メルカプ
トエタノール／（酢酸ナトリウム−バイシン） （７）塩酸グアニジン／ｔＲＮＡ／ＤＴＴ／（酢酸ナト
リウム−バイシン） （８）塩酸グアニジン／ｐｏｌｙ−ｒＡ／ＤＴＴ／（酢
酸ナトリウム−バイシン） （核酸の抽出法）核酸を精製するに際しては、上記した
「試薬α」と試料を混合し、試料中のタンパクを変成お
よび分解を行うとともに、露出した核酸とキャリアを結
合させ、不溶化する。このように不溶化した核酸を含む
混合物に、「試薬β」を、該混合物の体積を基準として
体積で１．５〜２．５倍程度（更には、体積で１．８〜
２．２倍、特に等量程度）添加して、キャリアと核酸と
を沈殿させる。更に、上記した「試薬γ」を添加して、
共沈した核酸を洗浄する。
【００３１】試薬αの各成分の濃度等の条件は、抽出さ
れるべき核酸を含有する試料中のタンパクや脂質が可溶
化し、核酸が露出、核酸とキャリアが結合し、不溶化さ
れるステップが効率的に行われる条件であることが好ま
しい。本発明者の検討によれば（試料に添加したときの
条件で）、タンパク可溶化剤２Ｍ〜６Ｍ、ｐＨ４〜８、
可溶化促進剤０. ０１〜１０％、キャリア０. ００１〜
１μｇ／ｍｌの範囲であることが特に好ましい。
れるべき核酸を含有する試料中のタンパクや脂質が可溶
化し、核酸が露出、核酸とキャリアが結合し、不溶化さ
れるステップが効率的に行われる条件であることが好ま
しい。本発明者の検討によれば（試料に添加したときの
条件で）、タンパク可溶化剤２Ｍ〜６Ｍ、ｐＨ４〜８、
可溶化促進剤０. ０１〜１０％、キャリア０. ００１〜
１μｇ／ｍｌの範囲であることが特に好ましい。
【００３２】例えば、「試薬α」にグアニジンイソチオ
シアネート（ＧＣＮ；タンパク可溶化剤）、t ＲＮＡ
（キャリア）等、およびβ−メルカプトエタノール（可
溶化促進剤）等を用い、試薬βにイソプロピルアルコー
ルを用いた場合、良好な効率で核酸を精製するための各
試薬成分の好ましい濃度は、（試料と混合した際で）以
下の通りである グアニジンイソチオシアネート：３〜６Ｍ（更には４〜
５．５Ｍ、特に４〜５Ｍ） β- メルカプトエタノール：０．１〜５％（更には０.
５〜１. ５％） ＤＴＴ：０．５〜２％ t ＲＮＡ：０．０３７５〜３．７５μｇ／ｍｌ（更には
０．１５〜０．７μｇ／ｍｌ） ｐｏｌｙ−ｒＡ：５〜２０μｇ／ｍｌ ｐＨ：４〜６ バイシン：０．１〜０．５Ｍ イソプロピルアルコール：４０〜６０％ グアニジンイソチオシアネートの濃度が２Ｍ未満では、
試料中のタンパクや脂質を充分に可溶化することが困難
となり、一方、該濃度が６Ｍを超えるとグアニジンイソ
チオシアネートが析出しやすくなり扱いが難しくなる。
「試薬α」に「試薬β」を添加した場合のイソプロピル
アルコール濃度が４０％未満では、キャリアおよび核酸
の不溶化が充分とすることが困難であり、一方、該濃度
が７０％を超えるとグアニジンイソチオシアネートをよ
り高濃度にする必要があるため、グアニジンイソチオシ
アネートの方が調整不能範囲に達してしまう。
シアネート（ＧＣＮ；タンパク可溶化剤）、t ＲＮＡ
（キャリア）等、およびβ−メルカプトエタノール（可
溶化促進剤）等を用い、試薬βにイソプロピルアルコー
ルを用いた場合、良好な効率で核酸を精製するための各
試薬成分の好ましい濃度は、（試料と混合した際で）以
下の通りである グアニジンイソチオシアネート：３〜６Ｍ（更には４〜
５．５Ｍ、特に４〜５Ｍ） β- メルカプトエタノール：０．１〜５％（更には０.
５〜１. ５％） ＤＴＴ：０．５〜２％ t ＲＮＡ：０．０３７５〜３．７５μｇ／ｍｌ（更には
０．１５〜０．７μｇ／ｍｌ） ｐｏｌｙ−ｒＡ：５〜２０μｇ／ｍｌ ｐＨ：４〜６ バイシン：０．１〜０．５Ｍ イソプロピルアルコール：４０〜６０％ グアニジンイソチオシアネートの濃度が２Ｍ未満では、
試料中のタンパクや脂質を充分に可溶化することが困難
となり、一方、該濃度が６Ｍを超えるとグアニジンイソ
チオシアネートが析出しやすくなり扱いが難しくなる。
「試薬α」に「試薬β」を添加した場合のイソプロピル
アルコール濃度が４０％未満では、キャリアおよび核酸
の不溶化が充分とすることが困難であり、一方、該濃度
が７０％を超えるとグアニジンイソチオシアネートをよ
り高濃度にする必要があるため、グアニジンイソチオシ
アネートの方が調整不能範囲に達してしまう。
【００３３】「試薬γ」は、試薬αおよび試薬βにより
分離されたキャリアと核酸を洗浄するために用いられ
る。試薬α、試薬β、ないしは試薬γ自体が分離された
核酸とともに残存するため、洗浄を試薬γで行うことが
好ましい。
分離されたキャリアと核酸を洗浄するために用いられ
る。試薬α、試薬β、ないしは試薬γ自体が分離された
核酸とともに残存するため、洗浄を試薬γで行うことが
好ましい。
【００３４】試薬αと試薬βの混合液から、遠心操作等
の公知の分離操作により、液層と不溶化している核酸と
を分離する。液層を除去して、核酸部分に試薬γを添加
し、混合した後、再び遠心操作等の公知の分離操作によ
り分離することにより、洗浄を行うことができる。
の公知の分離操作により、液層と不溶化している核酸と
を分離する。液層を除去して、核酸部分に試薬γを添加
し、混合した後、再び遠心操作等の公知の分離操作によ
り分離することにより、洗浄を行うことができる。
【００３５】通常の場合には、核酸精製後、逆転写酵素
反応やＰＣＲ反応を行うことが多いため、このような洗
浄操作を行うことが極めて好ましい。この点からは、試
薬γは濃度５０％以上、更には６０〜８０％の濃度のエ
タノールからなることが好ましい。
反応やＰＣＲ反応を行うことが多いため、このような洗
浄操作を行うことが極めて好ましい。この点からは、試
薬γは濃度５０％以上、更には６０〜８０％の濃度のエ
タノールからなることが好ましい。
【００３６】試薬αの基礎バッファーとしては、バイシ
ンまたはＴｒｉｓ−ＨＣｌ系のものが好ましい。良好な
増幅結果が容易に得られる点からは、ＰＣＲにＴａｑ P
olymerase を用いる場合には、特にＴｒｉｓ−ＨＣｌ系
のバッファーが好ましく、ＰＣＲにＴｔｈ Polymerase
を用いる場合には、特にバイシン系のバッファーが好ま
しい。
ンまたはＴｒｉｓ−ＨＣｌ系のものが好ましい。良好な
増幅結果が容易に得られる点からは、ＰＣＲにＴａｑ P
olymerase を用いる場合には、特にＴｒｉｓ−ＨＣｌ系
のバッファーが好ましく、ＰＣＲにＴｔｈ Polymerase
を用いる場合には、特にバイシン系のバッファーが好ま
しい。
【００３７】本発明において、特に好ましい抽出試薬の
組成例を、以下に示す。
組成例を、以下に示す。
【００３８】（１） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネ
ート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ β- メルカプトエタノール １０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−ｒＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （２） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ β- メルカプトエタノール ０．３７５μｇ／ｍｌ Ｅ．ｃｏｌｉ- ｔＲＮＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （３） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ ＤＴＴ １０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−ｒＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （４） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ ＤＴＴ ０．３７５μｇ／ｍｌ Ｅ．ｃｏｌｉ- ｔＲＮＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） 本発明において、血清等からなる試料中にＨＣＶが含ま
れる場合、これを確認するために逆転写反応を経てＰＣ
Ｒ法を実施することが好ましい。例えば、市販のＨＣＶ
−ＲＮＡ検出試薬たる、アンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡ
（ロッシュ社製）においては、Ｔｔｈ Polymerase を用
いてＰＣＲが行われ、マイクロプレートに固相化された
プローブとのハイブリダイゼーションにより、特異性お
よび検出感度の向上が図られている。
ート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ β- メルカプトエタノール １０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−ｒＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （２） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ β- メルカプトエタノール ０．３７５μｇ／ｍｌ Ｅ．ｃｏｌｉ- ｔＲＮＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （３） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ ＤＴＴ １０μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙ−ｒＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） （４） ５Ｍ グアニジンイソチオシアネート ０．３Ｍ 酢酸ナトリウム ０．２５Ｍ バイシン １％ ＤＴＴ ０．３７５μｇ／ｍｌ Ｅ．ｃｏｌｉ- ｔＲＮＡ （５０％イソプロパノール） （３５％エタノール） 本発明において、血清等からなる試料中にＨＣＶが含ま
れる場合、これを確認するために逆転写反応を経てＰＣ
Ｒ法を実施することが好ましい。例えば、市販のＨＣＶ
−ＲＮＡ検出試薬たる、アンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡ
（ロッシュ社製）においては、Ｔｔｈ Polymerase を用
いてＰＣＲが行われ、マイクロプレートに固相化された
プローブとのハイブリダイゼーションにより、特異性お
よび検出感度の向上が図られている。
【００３９】
【実施例】実施例１ （抽出試薬の調整）「試薬α」を構成する各成分として
は、５Ｍ−グアニジンイソチオシアネート、０. ３Ｍ−
酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ N,N- ビス( ２-hydroxyet
hl)-glycine （バイシン）、１％β- メルカプタエタノ
ール、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡを用
いた。試薬αの基礎バッファ−には０. ２５Ｍバイシン
を用いた。 試薬βとしてはイソプロパノール（１００
％）、試薬γとしては７０％エタノールを用いた。核酸
を抽出すべき試料としては、ＨＣＶの存在が確認されて
いる血清を用いた。
は、５Ｍ−グアニジンイソチオシアネート、０. ３Ｍ−
酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ N,N- ビス( ２-hydroxyet
hl)-glycine （バイシン）、１％β- メルカプタエタノ
ール、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡを用
いた。試薬αの基礎バッファ−には０. ２５Ｍバイシン
を用いた。 試薬βとしてはイソプロパノール（１００
％）、試薬γとしては７０％エタノールを用いた。核酸
を抽出すべき試料としては、ＨＣＶの存在が確認されて
いる血清を用いた。
【００４０】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
（エッペンドルフ社製）に、血清１００μｌ、および上
記で調製した「試薬α」４００μｌを入れて混合した。
この混合物を６０℃で１０分間加温した後、上記した
「試薬β」５００μｌを添加し、充分に混合した後２０
分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去した後、上記
した「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混合した後、分間
１３０００Ｇで遠心した。
（エッペンドルフ社製）に、血清１００μｌ、および上
記で調製した「試薬α」４００μｌを入れて混合した。
この混合物を６０℃で１０分間加温した後、上記した
「試薬β」５００μｌを添加し、充分に混合した後２０
分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去した後、上記
した「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混合した後、分間
１３０００Ｇで遠心した。
【００４１】液層を除去した後、得られた核酸を、アン
プリコアＨＣＶ−ＲＮＡキット（ロッシュ社製）付属の
バッファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解し
た。
プリコアＨＣＶ−ＲＮＡキット（ロッシュ社製）付属の
バッファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解し
た。
【００４２】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌを用いて、上
記「アンプリコア」キット添付の説明書に記載された使
用法に従って、増幅および検出を行った。その結果、１
０1 copy ／５０μｌの検出感度が得られた。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌを用いて、上
記「アンプリコア」キット添付の説明書に記載された使
用法に従って、増幅および検出を行った。その結果、１
０1 copy ／５０μｌの検出感度が得られた。
【００４３】比較のため、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬を用いて、同一の血清からＲＮＡの抽出を行
ったところ、１０3 copy ／５０μｌの感度しか得られ
ならった。
Ａ精製試薬を用いて、同一の血清からＲＮＡの抽出を行
ったところ、１０3 copy ／５０μｌの感度しか得られ
ならった。
【００４４】上述したように、本発明のＲＮＡ抽出試薬
を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮＡ精製
試薬を用いた場合に比べて１００倍以上の検出感度が得
られた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用いた場
合には、抽出効率が極めて良好であった。
を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮＡ精製
試薬を用いた場合に比べて１００倍以上の検出感度が得
られた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用いた場
合には、抽出効率が極めて良好であった。
【００４５】上記により得られた結果を下記の表１にま
とめて示す。
とめて示す。
【００４６】 ＜実施例１の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例２ （抽出試薬の調製）「試薬α」としては５Ｍ−グアニジ
ンイソチオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、
０. ２５ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine
（バイシン）、 １％β- メルカプタエタノール、０. ３
７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ；「試薬β」とし
てはイソプロパノール（１００％）；「試薬γ」として
は７０％エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認
されている血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−
には０. ２５Ｍ−バイシンを用いた。
ンイソチオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、
０. ２５ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine
（バイシン）、 １％β- メルカプタエタノール、０. ３
７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ；「試薬β」とし
てはイソプロパノール（１００％）；「試薬γ」として
は７０％エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認
されている血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−
には０. ２５Ｍ−バイシンを用いた。
【００４７】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清２００μｌ、「試薬α」８００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」１０００μｌ
を添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」２ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して、６０℃で５分間溶解し
た。
に血清２００μｌ、「試薬α」８００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」１０００μｌ
を添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」２ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して、６０℃で５分間溶解し
た。
【００４８】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０0 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１０００倍以上の検出感度を得る
ことができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用
いた場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０0 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１０００倍以上の検出感度を得る
ことができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用
いた場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００４９】上記により得られた結果を下記の表１にま
とめて示す。
とめて示す。
【００５０】 ＜実施例２の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陽性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例３ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１０μｇ／ｍｌ
ｐｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１０μｇ／ｍｌ
ｐｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
【００５１】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００５２】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００５３】 ＜実施例３の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例４ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ.
t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール（１０
０％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、試料と
してはＨＣＶの存在が確認されている血清を用いた。
「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシン
を用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ.
t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール（１０
０％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、試料と
してはＨＣＶの存在が確認されている血清を用いた。
「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシン
を用いた。
【００５４】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃で１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して２５℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃で１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して２５℃で５分間溶解した。
【００５５】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０μｌ
の感度が得られた。したがって、本発明のＲＮＡ抽出試
薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮＡ精
製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０μｌ
の感度が得られた。したがって、本発明のＲＮＡ抽出試
薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮＡ精
製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
【００５６】 ＜実施例４の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陰性 陰性 １０2 陰性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例５ （抽出試薬の調製）「試薬α」は２Ｍグアニジンイソチ
オシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ
のＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β-メルカプタエタノール、０. ３７５μｇ
／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソ
プロパノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％
エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されてい
る血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０.
２５Ｍ−バイシンを用いた。
オシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ
のＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β-メルカプタエタノール、０. ３７５μｇ
／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソ
プロパノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％
エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されてい
る血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０.
２５Ｍ−バイシンを用いた。
【００５７】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃に１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃に１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００５８】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０μｌ
の感度が得られた。したがって、本発明のＲＮＡ抽出試
薬を用いた場合にはアンプリコアに付属するＲＮＡ精製
試薬と同等の検出感度を得ることができた。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０μｌ
の感度が得られた。したがって、本発明のＲＮＡ抽出試
薬を用いた場合にはアンプリコアに付属するＲＮＡ精製
試薬と同等の検出感度を得ることができた。
【００５９】 ＜実施例５の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陰性 陰性 １０2 陰性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例６ （抽出試薬の調製）「試薬α」は７Ｍグアニジンイソチ
オシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ
のＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β-メルカプタエタノール、０. ３７５μｇ
／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソ
プロパノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％
エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されてい
る血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０.
２５Ｍ−バイシンを用いた。
オシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５Ｍ
のＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β-メルカプタエタノール、０. ３７５μｇ
／ｍｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソ
プロパノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％
エタノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されてい
る血清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０.
２５Ｍ−バイシンを用いた。
【００６０】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００６１】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００６２】 実施例６の結果 ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例７ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１０μｇ／ｍｌ
ｐｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１０μｇ／ｍｌ
ｐｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
【００６３】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００６４】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００６５】 ＜実施例７の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例８ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、１０μｇ／ｍｌｐｏｌｙ−ｒＡ、
「試薬β」としてはイソプロパノール（１００％）、
「試薬γ」としては７０％エタノール、試料としてはＨ
ＣＶの存在が確認されている血清を用いた。「試薬α」
の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、１０μｇ／ｍｌｐｏｌｙ−ｒＡ、
「試薬β」としてはイソプロパノール（１００％）、
「試薬γ」としては７０％エタノール、試料としてはＨ
ＣＶの存在が確認されている血清を用いた。「試薬α」
の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシンを用いた。
【００６６】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃に１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して２５℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。２５℃に１０分間放置後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して２５℃で５分間溶解した。
【００６７】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００６８】 ＜実施例８の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例９ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ.
t ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール（１０
０％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、試料と
してはＨＣＶの存在が確認されている血清を用いた。
「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシン
を用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％ＤＴＴ、０. ３７５μｇ／ｍｌＥｃｏｌｉ.
t ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール（１０
０％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、試料と
してはＨＣＶの存在が確認されている血清を用いた。
「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイシン
を用いた。
【００６９】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００７０】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００７１】 ＜実施例９の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例１０ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、４μｇ／ｍｌＥ
ｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノ
ール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノー
ル、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を
用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−
バイシンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、４μｇ／ｍｌＥ
ｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノ
ール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノー
ル、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を
用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−
バイシンを用いた。
【００７２】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００７３】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
【００７４】 ＜実施例１０の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陰性 陰性 １０2 陰性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例１１ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、０. ５μｇ／ｍ
ｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロ
パノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタ
ノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血
清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５
Ｍ−バイシンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、０. ５μｇ／ｍ
ｌＥｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロ
パノール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタ
ノール、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血
清を用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５
Ｍ−バイシンを用いた。
【００７５】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００７６】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０3 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬と同等の検出感度を得ることができた。
【００７７】 ＜実施例１１結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陰性 陰性 １０2 陰性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例１２ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１μｇ／ｍｌｐ
ｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１μｇ／ｍｌｐ
ｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
【００７８】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００７９】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００８０】 ＜実施例１２の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例１３ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１μｇ／ｍｌｐ
ｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、１μｇ／ｍｌｐ
ｏｌｙ−ｒＡ、「試薬β」としてはイソプロパノール
（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノール、
試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を用い
た。「試薬α」の基礎バッファ−には０. ２５Ｍ−バイ
シンを用いた。
【００８１】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、得
られた核酸にアンプリコアＨＣＶ−ＲＮＡの付属のバッ
ファーを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００８２】（アンプリコアを用いたＰＣＲおよび検
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
出）上記により得られた核酸溶液５０μｌをアンプリコ
ア法で増幅および検出した。その結果、１０1 copy ／
５０μｌの検出感度が得られた。比較のため、アンプリ
コアに付属するＲＮＡ精製試薬を用いて同一の血清から
ＲＮＡの抽出を行ったが、１０3 copy ／５０μｌの感
度しか得られなかった。したがって、本発明のＲＮＡ抽
出試薬を用いた場合には、アンプリコアに付属するＲＮ
Ａ精製試薬に比べて、１００倍以上の検出感度を得るこ
とができた。すなわち、本発明のＲＮＡ抽出試薬を用い
た場合の抽出効率は、極めて良好であった。
【００８３】 ＜実施例１３の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 アンプリコア付属試薬 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陽性 陰性 １０2 陽性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性実施例１４ （抽出試薬の調製）「試薬α」は５Ｍ−グアニジンイソ
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、４μｇ／ｍｌＥ
ｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノ
ール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノー
ル、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を
用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. １Ｍ−Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌを用いた。
チオシアネート、０. ３Ｍ−酢酸ナトリウム、０. ２５
ＭのＮ，Ｎ- ビス( ２-hydroxyethl)-glycine （バイシ
ン）、 １％β- メルカプタエタノール、４μｇ／ｍｌＥ
ｃｏｌｉ. t-ＲＮＡ、「試薬β」としてはイソプロパノ
ール（１００％）、「試薬γ」としては７０％エタノー
ル、試料としてはＨＣＶの存在が確認されている血清を
用いた。「試薬α」の基礎バッファ−には０. １Ｍ−Ｔ
ｒｉｓ−ＨＣｌを用いた。
【００８４】（ＲＮＡの精製）２ｍｌマイクロチューブ
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、DI
-Waterを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
に血清１００μｌ、「試薬α」４００μｌを入れ混合し
た。６０℃に１０分間加温後、「試薬β」５００μｌを
添加して充分に混合後２０分間１３０００Ｇで遠心し
た。液層を除去後、「試薬γ」１ｍｌを添加し充分に混
合後５分間１３０００Ｇで遠心した。液層を除去後、DI
-Waterを３００μｌ添加して６０℃で５分間溶解した。
【００８５】（Competitive ＰＣＲ法を用いたＰＣＲお
よび検出）上記により得られた核酸溶液５μｌをチュー
ブ（エッペンドルフ社製、商品名：Safe-Lock ００３
０. １２０. ０９４）へ移し、逆転写酵素を用いてｃＤ
ＮＡ合成後、Ｔａｑ Polymerase を含むＰＣＲ mixture
（シータス社製）へ移し、Competier とともにサーマル
サイクラー（パーキンエルマー社製、商品名：９６０
０）でＰＣＲ増幅を行った。
よび検出）上記により得られた核酸溶液５μｌをチュー
ブ（エッペンドルフ社製、商品名：Safe-Lock ００３
０. １２０. ０９４）へ移し、逆転写酵素を用いてｃＤ
ＮＡ合成後、Ｔａｑ Polymerase を含むＰＣＲ mixture
（シータス社製）へ移し、Competier とともにサーマル
サイクラー（パーキンエルマー社製、商品名：９６０
０）でＰＣＲ増幅を行った。
【００８６】上記により得られたＰＣＲ Productを３％
アガロースゲル（タカラ株式会社製）上で電気泳動し、
バンドを検出した。その結果、１０3 copy ／５０μｌ
の検出感度が得られた。
アガロースゲル（タカラ株式会社製）上で電気泳動し、
バンドを検出した。その結果、１０3 copy ／５０μｌ
の検出感度が得られた。
【００８７】比較のため、ＡＧＰＣ法試薬ＲＮＡ- ＺＯ
Ｌ（販売：コスモバイオ株式会社）を用いて同一の血清
からＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０
μｌの感度が得られた。
Ｌ（販売：コスモバイオ株式会社）を用いて同一の血清
からＲＮＡの抽出を行ったところ、１０3 copy ／５０
μｌの感度が得られた。
【００８８】 ＜実施例１４の結果＞ ＨＣＶ−ＲＮＡ量 本法でＲＮＡ精製 ＲＮＡ-ZOL法で精製 ＜ｃｏｐｙ／ｍｌ＞ ＜判定＞ ＜判定＞ ０ 陰性 陰性 １０0 陰性 陰性 １０1 陰性 陰性 １０2 陰性 陰性 １０3 陽性 陽性 １０4 陽性 陽性
【００８９】
【発明の効果】上述したように本発明によれば、グアニ
ジン誘導体またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク
可溶化剤と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メ
ルカプト基および水酸基を有する化合物からなる可溶化
促進剤とを少なくとも含むことを特徴とする核酸抽出試
薬が提供される。
ジン誘導体またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク
可溶化剤と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メ
ルカプト基および水酸基を有する化合物からなる可溶化
促進剤とを少なくとも含むことを特徴とする核酸抽出試
薬が提供される。
【００９０】本発明によれば、更に、グアニジン誘導体
またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む核酸抽出試薬と；試料とを混合して、該試料中の抽出
すべき核酸を不溶化した後；該不溶化した核酸を分離す
ることを特徴とする核酸抽出方法が提供される。
またはチオシアン酸誘導体からなるタンパク可溶化剤
と、ポリヌクレオチドからなるキャリアと、メルカプト
基および水酸基を有する可溶化促進剤とを少なくとも含
む核酸抽出試薬と；試料とを混合して、該試料中の抽出
すべき核酸を不溶化した後；該不溶化した核酸を分離す
ることを特徴とする核酸抽出方法が提供される。
【００９１】上記した構成を有する本発明の核酸抽出試
薬ないし核酸抽出方法によれば、核酸精製までの操作が
簡単、安全で且つ短時間で行うことができ、しかも良好
な抽出効率が容易に得られる。
薬ないし核酸抽出方法によれば、核酸精製までの操作が
簡単、安全で且つ短時間で行うことができ、しかも良好
な抽出効率が容易に得られる。
【００９２】本発明によれば、フェノール／クロロホル
ム等の有害な試薬を用いることなく、核酸を短時間に抽
出することができる。更には、本発明によれば、１つの
試料を１本チューブを用いて核酸を精製することができ
るため、大量の試料処理が容易となる。
ム等の有害な試薬を用いることなく、核酸を短時間に抽
出することができる。更には、本発明によれば、１つの
試料を１本チューブを用いて核酸を精製することができ
るため、大量の試料処理が容易となる。
【００９３】本発明によりＨＣＶ−ＲＮＡを精製し、更
に、Ｔｔｈポリメラーゼを用いるＰＣＲ法を利用する検
出法（例えば、ロッシュ社製、アンプリコアＨＣＶ−Ｒ
ＮＡ）で該ＨＣＶ−ＲＮＡを検出した場合には、特に高
感度なＨＣＶ−ＲＮＡの検出が可能となる。
に、Ｔｔｈポリメラーゼを用いるＰＣＲ法を利用する検
出法（例えば、ロッシュ社製、アンプリコアＨＣＶ−Ｒ
ＮＡ）で該ＨＣＶ−ＲＮＡを検出した場合には、特に高
感度なＨＣＶ−ＲＮＡの検出が可能となる。
Claims (16)
- 【請求項１】 グアニジン誘導体またはチオシアン酸誘
導体からなるタンパク可溶化剤と；ポリヌクレオチドか
らなるキャリアと；メルカプト基および水酸基を有する
化合物からなる可溶化促進剤と；を少なくとも含むこと
を特徴とする核酸抽出試薬。 - 【請求項２】 前記タンパク可溶化剤が、グアニジンイ
ソチオシアネート、塩酸グアジニン、チオシアン酸ナト
リウム、またはチオシアン酸カリウムから選択された１
種類以上からなる請求項１記載の核酸抽出試薬。 - 【請求項３】 前記キャリアが、ｔＲＮＡまたはｐｏｌ
ｙ−ｒＡから選択された１種類以上からなる請求項１記
載の核酸抽出試薬。 - 【請求項４】 前記可溶化促進剤が、ジチオスレイトー
ル（ＤＴＴ）またはβ- メルカプトエタノールから選択
された１種類以上からなる請求項１記載の核酸抽出試
薬。 - 【請求項５】 更に、ｐＨ調整剤を含む請求項１記載の
核酸抽出試薬。 - 【請求項６】 前記ｐＨ調整剤が、酢酸ナトリウム、酢
酸アンモニウム、Ｎ, Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチ
ル）−グリシン（バイシン）、 またはＴｒｉｓ−ＨＣｌ
から選択された１種類以上からなる請求項５記載の核酸
抽出試薬。 - 【請求項７】 グアニジン誘導体またはチオシアン酸誘
導体からなるタンパク可溶化剤と、ポリヌクレオチドか
らなるキャリアと、メルカプト基および水酸基を有する
可溶化促進剤とを少なくとも含む核酸抽出試薬と；試料
とを混合して、該試料中の抽出すべき核酸を不溶化した
後；該不溶化した核酸を分離することを特徴とする核酸
抽出方法。 - 【請求項８】 試料と混合される際に、前記タンパク可
溶化剤の濃度が２Ｍ〜６Ｍ（ｍｏｌ／ｌ）、可溶化促進
剤の濃度が０. ０１〜１０％、キャリアの濃度が０. ０
０１〜１０００μｇ／ｍｌ、ｐＨが４〜８の範囲である
請求項７記載の核酸抽出方法。 - 【請求項９】 前記核酸抽出試薬が、更にｐＨ調整剤を
含む請求項７記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１０】 前記ｐＨ調整剤の濃度が０. １〜０.
５Ｍ（ｐＨ４〜７）の範囲である請求項７記載の核酸抽
出方法。 - 【請求項１１】 アルコールを用いて、前記不溶化した
核酸の分離を行う請求項７記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１２】 前記アルコールの濃度が６０〜８０％
の範囲である請求項１１記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１３】 前記不溶化により分離した核酸をＰＣ
Ｒ（ポリメラーゼ連鎖反応）法を用いて増幅する請求項
７記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１４】 Ｔｔｈポリメラーゼを用いて、前記Ｐ
ＣＲ増幅を行う請求項１３記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１５】 バイシン緩衝液を用いて前記核酸の抽
出を行い、且つＴｔｈポリメラーゼを用いて前記ＰＣＲ
増幅を行う請求項１４記載の核酸抽出方法。 - 【請求項１６】 Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液を用いて前記
核酸の抽出を行い、且つＴａｑポリメラーゼを用いて前
記ＰＣＲ増幅を行う請求項１３記載の核酸抽出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25098895A JPH0984600A (ja) | 1995-09-28 | 1995-09-28 | 核酸抽出試薬および核酸抽出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25098895A JPH0984600A (ja) | 1995-09-28 | 1995-09-28 | 核酸抽出試薬および核酸抽出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0984600A true JPH0984600A (ja) | 1997-03-31 |
Family
ID=17216002
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25098895A Pending JPH0984600A (ja) | 1995-09-28 | 1995-09-28 | 核酸抽出試薬および核酸抽出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0984600A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108823201A (zh) * | 2018-07-11 | 2018-11-16 | 广州海力特生物科技有限公司 | 一种rna核酸释放剂及其应用 |
-
1995
- 1995-09-28 JP JP25098895A patent/JPH0984600A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108823201A (zh) * | 2018-07-11 | 2018-11-16 | 广州海力特生物科技有限公司 | 一种rna核酸释放剂及其应用 |
| CN108823201B (zh) * | 2018-07-11 | 2020-06-19 | 广州海力特生物科技有限公司 | 一种rna核酸释放剂及其应用 |
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