【発明の詳細な説明】
免疫調節障害の治療
発明の背景
エンケファリンのような内因性オピオイドペプチド、及びモルヒネのような外
因性阿片剤の作用が少なくとも３つの異なる型のオピオイド受容体〔ミュー（μ
）、デルタ（δ）、カッパ（Ｋ）〕に媒介されるという事実は、高選択性外因性
オピオイド作動薬又は拮抗薬を開発し得る可能性を提起する（W.R．Martin，Pha
rmacol．Rev.，35，283(1983)参照）。実際、近年、選択性オピオイド拮抗薬の
開発において、かなりの進展がもたらされた。構造的にエンケファリンに関連が
あるペンタペプチドは、高デルタ選択性オピオイド拮抗薬であると報告されてい
る。このような化合物（例えばＩＣＩ174864）は、受容体機能及び構造の薬理学
的プローブとして広く用いられるが、しかしそれらは低効力で且つ中枢神経系（
ＣＮＳ）に十分浸透しないという欠点を有する（J.W．Shaw et al.，Life Sci.,
31，1259(1982)及び R.Cotton et al.，Eur．J．Pharmacol.，97，331(1984)参
照）。Portoghese et al．（米国特許第4,816,586号）は、ナルトリンドール（
ＮＴＩ）及び７−ベンジリデン−ナルトレキソン（ＢＮＴＸ）を含めたデルタ受
容体で高選択性及び効力を有するある種のオピオイド類似体を開示する。これら
の化合物のあるものは、アルコール嗜好性ラット系統におけるエタノール摂取を
妨げ、ラットモデルにおけるモルヒネ耐容性及び依存性を遮断することが報告さ
れている（J.C．Froehlich et al.，Alcoholism Clin．and Exp．Les.，Abstrac
t 20，page 315（1991）and M．Sofuoglu et al.，J．Pharmacol．Exp．Ther.，
257，676(1991)参照）。
近年、内因性オピオイドペプチド及び外因性オピオイド作動薬がin vitro及び
in vivoの免疫反応をともに調整することも示された。例えばエンケファリンは
、正常個体及び免疫抑制患者の両方においてＴリンパ球上でのＣＤ２分子の発現
を増強することが示されている（例えばJ．Wybran et al.，J．Immumol.，123，
1068(1979)及びR.E．Faith et al.，NIDA Res．Monogr.，54，300(1984)参照）
。エンケファリンはさらに、ウイルス及び腫瘍試験に対する、並びにR.E．Faith
et al.，Ann．N．Y．Acad．Sci.，496，137(1987)により報告されているような
アナフィラキシーショックに対するネズミ宿主耐性を増大し得る。他の試験では
、免疫機能に及ぼすエンケファリンの作用が、二相性であり、濃度が高いほど抑
制性で低濃度ほど刺激性であると報告されている（例えばD．Maric et al.，Ann
．N.Y．Acad．Sci.，496，126(1987)及びD.R．Oleson et al.，Brain，Behavior
and Immun.，2，171(1988)参照）。
エンケファリンがこのような調節作用を発揮する間の免疫細胞上の受容体の型
を調べた今日までの実験は、それが脳で認められたものと同様のオピオイド受容
体であることを示唆している。特に、免疫系の細胞上のエンケファリン結合受容
体はデルタ亜種のオピオイド受容体に属すると仮定されている。したがって免疫
機能に及ぼすエンケファリンの多数の作用は、古典的オピオイド受容体拮抗薬で
あるナロキソンによるだけでなく、デルタ受容体特異的拮抗薬であるＩＣＩ 174
864によっても遮断され得る（B.D．Jankovic et al.，Ann．N.Y．Acad．Sci.，5
40，691(1988)及びR．Cotton et al.，Eur．J．Pharmacol.，97，331(1984)参照
）。
ＮＴＩそれ自体は、in vivo及びin vitroの両方で免疫抑制性及び非毒性であ
るであることが示された。例えば、K．Arakawa等は、Transplant,53，951(1992)
及びTranspl．Prog.，24，696(1992)
で、ＮＴＩを用いて、ラット腎移植モデルにおける同種移植片生存を延長し、in
vitro同種及び異種混合リンパ球反応を抑制することを報告した。両in vitro反
応において、ＮＴＩは、同種移植生存のために選択される一般的治療であるシク
ロスポリンＡ（ＣｓＡ）より効力が低いことが判明した。
自己混合リンパ球反応（ＡＭＬＲ）は、自己ＩＩ型（Ｉａ／ＤＲ）抗原保有細
胞（Ｂ細胞、マクロファージ、樹状突起細胞又は活性化Ｔ細胞）に応答するＴ細
胞増殖のin vitro現象であり、したがって自己免疫反応の一型を示す。ＡＭＬＲ
もとはマウスに特徴的なもので、その後にヒトで検出された。ＡＭＬＲにおいて
増殖する細胞は、W.E. Crowe et al., Arth. Rheum., 28, 537(1985)により免疫
調整し得ることが示されている。
ＡＭＬＲは免疫調節現象を試験するためのin vitroモデルを提供し得ると一般
に考えられる（例えば、M.M. Kuntz et al., J. Exp.Med., 143, 1042(1976); M
.E. Weksler et al., J. Exp.Med., 146, 1833(1977); 及びJ.S. Smolen et al.
, J. Clin. Invest., 68，1601(1981)参照）。このようなモデルの生存度は、Ａ
ＭＬＲが自己免疫疾患において、並びに免疫調節障害から生じる他の疾患、例え
ばエプスタインバーウイルスにより引き起こされる感染性単核球増加症でしばし
ば抑制されるという事実により支持される（例えば、R.L. Hirsch, Clin. Exp.
Immunol., 64, 107(1986)参照）。ＡＭＬＲ抑制と自己免疫疾患とのこの関連は
、異常ＡＭＬＲにおいて明らかな免疫調節損傷がこれらの疾患の病因に関連し得
ることが、W.E. Crowe et al., Arth. Rheum., 28, 537(1985)により示唆された
。免疫抑制剤としてＮＴＩを用いた試験で、H. Nagase等（欧州特許出願第45683
3号）は、ＮＴＩが同種ネズミ脾臓細胞の標本においてＭＬＲを強力に抑制する
と報告した。したがって、ＡＭＬＲ及び
それに関連した免疫調節障害を調整し得る薬剤の必要性がある。
本発明の要約
本発明は、
１．治療が必要な哺乳類における自己混合性リンパ球反応（ＡＭＬＲ）低下を
特徴とする免疫調節疾患を治療するための方法であって、式Ｉ：
（式中、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル、
Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキル、トランス（Ｃ4
〜Ｃ5）アルケニル、アリル又はフラン−２−イルアルキルであり、Ｒ2はＨ、
ＯＨ又はＯ2Ｃ（Ｃ1〜5）アルキルであり、Ｒ3はＨ、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は
（（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル）ＣＯであり、Ｒ4及びＲ5は別々にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ
、ＮＣＳ、ＮＯ2、ＮＨ2、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシで
あるかあるいはともにベンゾであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＹ（ここでＹはＨ、（Ｃ1
〜Ｃ5）アルキル又は（Ｒ4）（Ｒ5）ベンゾである）である）の有効量の化合物
、並びにその製薬上許容可能な塩を上記の哺乳類に投与することから成る方法を
提供する。
米国特許第4,816,586号に開示されたＩ式の好ましい化合物は「ナルトリンド
ール」又は「ＮＴＩ」（１７−（シクロプロピルメチル）−６，７−デヒドロ−
３，１４β−ジヒドロキシ−４，５α−
エポキシ−６，７−２’，３’−インドールモルヒナン）と呼ばれており、次式
：
を有する。
Ｉ式の別の好ましい化合物は、（１７−（シクロプロピルメチル）−６，７−
デヒドロ−３，１４β−ジヒドロキシ−４，５α−エポキシ−６，７−２’，３
’−ベンゾ〔ｂ〕フラノモルヒナン）である（P.S. Portoghese et al., J. Med
. Chem., 31, 281(1988)参照）。Ｉ式の別の好ましい化合物は、ナルトリンドー
ル５’−イソチオシアネート又は「５’−ＮＴＩＩ」である（P.S. Portoghese
et al., J. Med. Chem., 33, 1547(1990); Eur. J. Pharmacol., 146, 185(1988
); J. Med. Chem., 31, 281(1988); J. Pharmacol. Exp. Ther., 258, 299(1991
)参照）。これらの化合物は選択的δ−オピオイド受容体拮抗薬である。
本方法の別の実施例では、ＡＭＬＲ低下を蒙った哺乳類を、式（ＩＩ）：
（式中、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル、
Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキル、トランス（Ｃ4
〜Ｃ5）アルケニル、アリル又
はフラン−２−イルアルキルであり、Ｒ2はＨ、ＯＨ又はＯ2Ｃ（Ｃ1〜5）アルキ
ルであり、Ｒ3はＨ、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキルＣＯであ
り、Ｒ4及びＲ5は別々にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ2、ＮＨ2、ＮＣＳ、（Ｃ1〜
Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシであるかあるいはともにジオキシメ
チレン（−ＯＣＨ2Ｏ−）又はベンゾであり、ＸはＯ、（Ｈ）2又はＣＨ2であり
、Ｒ6及びＲ7はともにＨであるかあるいはともにある結合である）である）の有
効量の化合物、並びにその製薬上許容可能な塩で治療する。ＩＩ式の好ましい化
合物は、７−ベンジリデンナルトレキソン又は「ＢＮＴＸ」（ここでＲ1はシク
ロプロピルメチルであり、Ｒ2はＯＨであり、Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝Ｈであり、Ｒ6及
びＲ7はともにある結合である）である。６−ケト（Ｃ＝０）基は存在しないか
（−ＣＨ2−に置換される）又はエキソ−メチレンに置換される。
本発明はさらに、哺乳類ＡＭＬＲ低下の治療方法であって、このような治療を
要するヒトに式ＩＩＩ：
（式中、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル、
Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキル、トランス（Ｃ4
〜Ｃ5）アルケニル、アリル又はフラン−２−イルアルキルであり、Ｒ2はＨ、
ＯＨ又はＯ2Ｃ（Ｃ1〜5）アルキルであり、Ｒ3はＨ、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は
（（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル）Ｃ＝Ｏであり、ＭはＮ又はＣＨであ
り、Ｒ4及びＲ5は上記Ｉ式に関する上記と同様である）の有効量の化合物、並び
にその製薬上許容可能な塩を投与することによる方法を提供する。
Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ式の化合物は、δオピオイド受容体に関して選択的である
。特に、ＩＩ式の化合物はデルタ受容体のδ1サブセットに特異的である。Ｉ、
ＩＩ又はＩＩＩ式の化合物のデルタ選択性は明らかに、化合物を投与される哺乳
類、例えばヒト患者におけるＡＭＬＲ低下を上昇させるこれらの化合物の顕著な
特徴である。本明細書中で用いる場合、「上昇させる」という用語は、反応低下
の正常レベルへの１００％上昇を、並びに関連免疫調節疾患状態の少なくとも１
つを治療するために、即ち寛解に似せるために臨床的に有意の上昇の量を意味す
る。同様に、治療のために選択されるＡＭＬＲ低下は、急性又は切迫性ＡＭＬＲ
関連疾患状態により現れるものであるか、又はその症状である。したがって本方
法は、動物及びヒトの両方におけるＡＭＬＲ低下関連免疫調節疾患、例えば自己
免疫疾患、リンパ球増殖疾患及びある種のウイルス感染を治療するのに有効であ
る。
本発明の化合物は構成上はモルヒネ誘導体であるため、それらの安定性並びに
「血管−脳関門」を越える、そしてＣＮＳに作用するそれらの能力はデルタオピ
オイド拮抗薬よりはるかに優れていると考えられる。
下記で例示するように、Ｉ〜ＩＩＩ式の化合物のあるものは、同一種類の他の
化合物の生成における中間物質として用い得る。例えば、ニトロ基はアミノ基に
還元され得る。
Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ式の化合物中でシクロアルキル、シクロアルケニル、アリ
ール又はフラン−２−イル部分を塩基性窒素原子に連結するＲ1基中に存在する
アルキル部分は、低級（アルキル）基、
好ましくは−（ＣＨ2）n−（式中、ｎは約１〜５であり、最も好ましくはｎは１
である）であり、例えばＲ1はＣ3〜Ｃ6（シクロアルキル）メチル、Ｃ5〜Ｃ7（
シクロアルケニル）メチル、アリールメチル又はフラン−２−イルメチルである
。好ましいアリール部分としては、（Ｃ6〜Ｃ10）アリール、好ましくは（Ｃ6〜
Ｃ9）アリール、即ちフェニル、ベンジル、トリル、キシリル、アニシル等が挙
げられる。
（Ｒ4）（Ｒ5）ベンジルは、（Ｒ4）（Ｒ5）フェニルメチル（ここで、Ｒ4及
びＲ5はフェニル環上の任意の位置を占める）を示す。
Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ式において、−Ｒ4及び−Ｒ5基の位置は、それらがそれぞ
れ−Ｘ基又は−Ｎ＝基に対してオルト、メタ又はパラであり得ることを示し、例
えばＲ4及び／又はＲ5はフェニル環上のあらゆる利用可能な部位を占めることが
できる。構造式Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ中で、楔形又は黒太線で示した結合はフェニ
ル環の平面上に伸びる結合を表す。破線で示した結合は、フェニル環の平面下に
伸びる結合を表す。
これらのデルタオピオイド拮抗薬としては、Ｉ式、ＩＩ式又はＩＩＩ式（式中
、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル又はＣ5〜
Ｃ7（シクロアルケニル）アルキルであり、好ましくはＲ1は（Ｃ2〜Ｃ3）アルキ
ル又はＣ3〜Ｃ4（シクロアルキル）メチルであり、最も好ましくはＲ1はシクロ
プロピルメチルである。Ｒ2は好ましくはＯＨ又はＯＡｃ（Ｏ2ＣＣＨ2）であり
、Ｒ3は好ましくはＨである。好ましくはＲ4及びＲ5の少なくとも１つそして最
も好ましくは両方がＨであるか、又はＲ4がＨでＲ5がＮＣＳ、即ち５’−ＮＣＳ
である）の化合物が挙げられる。好ましい化合物はさらにＲ4がＨでＲ5がＦ、（
Ｃ1
〜Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシである場合にも結果的に生じる。
好ましいＹはＨ、メチル又はベンジルである。Ｘは好ましくはＯである。
本発明のさらに別の態様は、包装材料、例えば紙箱、封筒、瓶、バイアル、プ
ラスチックパック、静脈内バッグ等、並びにＡＭＬＲ低下に関連したヒト又は動
物の免疫調節疾患を治療するのに有効な量のＩ、ＩＩ又はＩＩＩ式の化合物ある
いはその混合物を含有する少なくとも１つの薬剤単位投与形態、例えば錠剤又は
カプセルから成っており、上記の包装材料がその中に又はその上にヒト又は動物
のＡＭＬＲ低下を治療する（上昇させる）ために、あるいはＡＭＬＲ低下に関連
した免疫調節疾患を治療するために上記の単位投与形態を用い得ることを示した
使用説明手段、例えば印刷したラベル、包装挿入物、札、カセットテープ、ビデ
オテープ等を含入する製品又はキットを包含する。
図面の簡単な説明
図１は、Ｉ式の化合物の図式である。
図２は、細胞培養にＮＴＩを付加することにより逆転されるＡＭＬＲ低下（ラ
ット脾臓ＭＮＣ使用）を示す６つの別々の実験（実験１〜６）からのデータを含
有する。各々の実験は、３匹のラットのプールからの脾臓細胞を含有する。１８
匹の未感染ラット（６実験）のプールから対照を算出した。
図３は、ｍＣＭＶによるマウスの計画的感染が用量依存性デアルＡＭＬＲ抑制
を引き起こすことを示す。感染マウスにｍＣＭＶを摂取させたのと同時に、未感
染マウスに食塩水を注射した。各処置群は、２匹のマウスからプールされた細胞
で構成された。
図４Ａ及び４Ｂは、ＮＴＩがＣＭＶ感染により引き起こされるＡ
ＭＬＲ抑制を逆転し得ることを示す。図１に示したラットＡＭＬＲ実験から、Ｎ
ＴＩの最適濃度を確定した。
本発明の詳細な説明
ＡＭＬＲ低下関連疾患
本発明の方法を用いて治療し得る疾患は、免疫調節の障害を特徴とするもので
、その例としては（ｉ）自己免疫疾患、例えば多発性硬化症（ＭＳ）、全身性紅
斑性狼瘡（ＳＬＥ）及び慢性関節リウマチ（ＲＡ）、（ｉｉ）いくつかのウイル
ス感染、例えばエプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス
（ＣＭＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、１型糖尿病、ニューカッスル病
ウイルス（ＮＤＶ）により引き起こされる感染、及びリンパ球増殖性疾患、例え
ば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）が挙げられるが、これらに限定されない。これ
らの疾病状態及びＡＭＬＲ低下との関連を記載した参照文献を下記の表Ａに列挙
する。
上記並びにJ.K. Gutowski等(Immunol., 46, 801(1982))が記載したように、Ａ
ＭＬＲは自己抗原に対して増殖するＴリンパ球の能力の測定値であり、Ｔ細胞調
節能力を示すものと思われる。ＣＤ４ Ｔ細胞（ＣＤ４＋ ４５Ｒ＋）のサプレ
ッサー−インデューサー亜群は、培養中の抗原呈示細胞により呈示される自己抗
原により活性化される一次細胞であると思われる。ＡＭＬＲにおけるこれらの細
胞の活性化の一次機能的結果は、ＡＭＬＲ検定における増殖の大きさにより明示
されるサプレッサーＴ細胞の生成であることが示されている（D. Kelleher et a
l., Gut, 30,839(1989); D.A. Hafler et al., Clin. Immunol. and Immunopath
ol., 58, 115(1991); J.
K. Gutowski et al., Immunuol., 46, 801(1982);F. Pazderka et al., Cell. I
mmunol., 112, 64(1988)参照）。
J.K. Gutowski et al., Immunuol., 46, 801(1982)に記載されているように、
サプレッサー細胞機能不全に関連した自己免疫疾患を有するヒト及び動物は、Ａ
ＭＬＲ活性損傷を示す。ＡＭＬＲ発生サプレッサー細胞又はサプレッサー細胞機
能の非存在は病因的にこれらの個体における自己寛容の損失に関連し得ると考え
られる。ＡＭＬＲ低下を逆転し得る抗原は、ＡＭＬＲ低下を特徴とする疾患の治
療に有効であり得るが、これは治療により又は疾病自然過程の一部として寛解状
態にある自己免疫疾患を有する患者において、ＡＭＬＲが正常レベルに戻るとい
うことをA. Laffer等（Rheumatol. Int., 3, 117(1983)）により立証されている
ためである。したがって、本発明の化合物によるＡＭＬＲ低下の逆転は、サプレ
ッサー細胞活性増大に依るものであり、これは次いで自己免疫疾患の正常寛解に
類似した状態をもたらし得る。
下記に教示のように上昇されたＡＭＬＲ低下は、ラットコロニーにおける非制
御ウイルス感染及びネズミサイトメガロウイルス（ｍＣＭＶ）の制御感染の結果
であった。これらの免疫調節障害のすベてに関与するメカニズムは複雑であるた
め、２つの疾患に関連するin vitro欠陥の修正が概してこの種の疾患すべてに関
連し得るか否かは疑問である。しかしながら、そうであることを示唆する強力な
証拠がある。ＨＩＶ感染患者は、ともにＴ細胞が機能するのに必要なＩＬ−２産
生及びＩＬ−２受容体（ＩＬ−２Ｒ）発現に一部関連したＡＭＬＲ低下を有する
ことが示されている。これらの同一の機能的欠陥（即ちＡＭＬＲ低下、ＩＬ−２
産生及びＩＬ−２Ｒ発現低下）は、ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）に感染
したマウスで、並びに自己免疫疾患に罹患し易いマウスの全系統で記載されてい
て、このことは共通のメカニズムが異なる免疫調節障害において欠如しているこ
とを示唆する（N. Tala et al., Behring Inst. Mitt., 72, 169(1983)参照）。
したがってウイルス感染後にラット及びマウスで生じるＡＭＬＲ低下を逆転する
ＮＴＩの能力は、特にその安定性及び血管／脳関門を越える能力の点からみて、
免疫調節の障害を伴う全疾患に一般化し得る。
化学的知見
Ｉ式（１〜１５及び１８）又はＩＩＩ式（１６〜１７）の代表的化合物は、米
国特許第4,816,586号に記載され、図１に略記したように、式ＩＶａ又はＩＶｂ
の出発物質から合成された。図１で一般的に示した化合物１〜１５及び１８の構
造を、下記の表Ｉに要約する。
化合物１〜１８は、オピオイド作動薬Ｃ環の６，７位置に融合するインドール
（１〜７、９〜１５）、ベンゾフラン（８）、ベンゾピラジン（１６）、ベンゾ
キノリン（１７）又はベンゾインドール（１８）部分を有する。
出発物質
一般式ＩＶのそれぞれの４，５−エポキシ−６−ケト−モルヒナン出発物質の
構造式、一般名及びMerck Index参照番号を下記の表ＩＩに要約する。
有機化学業界では十分公知の合成方法により、ＩＶ式の他の出発物質を調製し
得る。例えばＩＶ式（式中、Ｒ1はＨであり、Ｒ3は適切な保護基であって、６−
ケト基も保護されている）の化合物は、化合物ＩＶａ〜gから調製し得る。これ
らの中間体は、十分公知の反応を適用することにより、Ｎ−アルキル化及び脱保
護化されて、Ｉ式（式中、Ｒ1はＣ2〜Ｃ5（アルキル）、Ｃ4〜Ｃ6（シクロアル
キル）アルキル、Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキ
ル、トランス−Ｃ4〜Ｃ5−アルケニル又はフラン−２−イルアルキルである）の
化合物を産生し得る。
例えば、ＩＶ式の化合物の遊離ヒドロキシル基、例えばＲ2＝ＯＨ及び／又は
Ｒ3＝Ｈを酸不安定基、例えばCompendium of Organic Synthetic Methods, I.T.
Harrison et al., eds., Wiley-Interscience, New York, NY(1971)at pages 1
24-131, （以後「Compendium」と記載する）に開示されている（その記載内容は
、参照により本明細書中に含まれるものとする）ようなテトラヒドロピラニル−
イル、トリメチルシリル、１−メトキシ−イソプロピル等により保護し得る。そ
のケタール又はチオケタール基への可逆的変換によるＩＶ式の化合物の６−ケト
基の保護化は、Compendium（449-453ページ）（その記載内容は、参照により本
明細書中に含まれるものとする）に記載されている。Ｎ−メチルアミンのデメチ
ル化のための方法は、例えばCompendium（ｐ．247）、J. Amer. Chem. Soc., 89
, 1942(1967)及びJ. Amer. Chem. Soc.,77, 4079(1955)（これ
らの記載内容は、参照により本明細書中に含まれるものとする）に記載されてい
る。
塩基性又は中性条件下でのハロゲン化物を用いた第二アミンのアルキル化の手
順は、十分公知である（例えばCompendium（ｐ．242-245）、Org. Synth., 43,
45(1963)、J. Org. Chem., 27, 3639(1962)及びJ. Amer. Chem. Soc., 82, 6163
(1960)参照）（これらの記載内容は、参照により本明細書中に含まれるものとす
る）。
デルタオピオイド受容体拮抗薬の合成
対応する出発物質ＩＶを用いて、Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ式（式中、Ｒ2はアシル
オキシであり、及び／又はＲ3はアシルである）の化合物を調製し得る。例えば
出発物質ＩＶａを、それとピリジンに溶解した適切な無水（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル
とを１８〜２５℃で１０〜１８時間反応させて、二アシル化する。その結果生じ
た３，１４−ジアシル化化合物を限定加水分解により１４アシル化化合物に変換
する。ＩＶ式の化合物を無水物と短時間、例えば約２〜４時間反応させて、３−
アシル化出発物質を調製する。３−アシル化物質をクロマトグラフィーにより３
，１４−ジアシル化物質から分離する。
ＩＩ式（式中、Ｘはエキソ−メチレンである）の化合物は、６−ケト基をＣＨ2
＝ＰＰｈ3と反応させて調製する。ＩＩ式（式中、Ｘは（Ｈ）2である）の化合
物は、対応するチオケタール又はジチアニル保護化６−ケト基を水素化分解して
、調製し得る。
１〜７、９〜１５及び１８の調製は、フィッシャーインドール合成を用いて成
し遂げられた（R.B. Van Orden et al., Chem. Rev., 30, 78(1942)参照）（こ
の記載内容は、参照により本明細書中に含まれるものとする）。ＩＶ式の化合物
、例えば塩酸ナルトレキソン（ＩＶａ−ＨＣｌ）又は塩酸オキシモルホン（ＩＶ ｂ
−ＨＣｌ）
及び適切な芳香族塩酸ヒドラジン（３０）を、有機又は無機酸、例えばメタンス
ルホン酸又は塩酸（ＨＣｌ）を含有する氷酢酸又はメタノール中で３〜６時間還
流した。５’−ニトロインドール（６）を５’−アミノ誘導体（１２ａ）に還元
し、これをチオホスゲンで処理して１２ｂを水和塩として生成することにより、
化合物１２ｂを調製した（P.S. Portoghese et al., J. Med. Chem., 31, 281(1
988)参照）。ナトレキソン−ＨＣｌを１−ナフチルヒドラジンとともに還流して
、６’，７’−ベンゾ誘導体（１８）を調製した。
等量のＩＶａ−ＨＣｌ、メタンスルホン酸及びｏ−フェニルヒドロキシルアミ
ン−ＨＣｌ（３１）を含有するエタノール溶液を１８時間還流して、ベンゾフラ
ン（８）を調製した。
オキシミノ誘導体２１に変換した後、ｏ−フェニレンジアミン２５と反応させ
て、ＩＶａ−ＨＣｌからベンゾピラジン１６を合成した。
ナルトレキソン−ＨＣｌをエタノール中のｏ−アミノベンズアルデヒド２８及
びメタンスルホン酸とともに還流して、キノリン誘導体１７を調製した。ＩＶ式
の化合物を酸の存在下でチオフェノールと反応させ、その後Ｈg高圧ランプを用
いて窒素大気中でＯＨ−保護化チオエノールを光分解することにより、対応する
ベンゾチオフェン誘導体（Ｉ，Ｘ＝Ｓ）を合成した（S.H. Green et al., J. Or
g．Chem.，33，2218(1968)参照）（この記載内容は、参照により本明細書中に含
まれるものとする）。
出発物質をＤＭＦ中に溶解し、余分量の適切な（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル沃化物及
びジイソプロピルエチルアミンのようなアミンを付加して、Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩ
式（式中、Ｒ3＝Ｈ）の化合物の酸塩を対応する（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシ誘導体
〔Ｒ3＝（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル〕に変換する。反応は、温度を上げて、約４〜１
０時間
で実施し得る。最終産物をカラムクロマトグラフィーにより精製する。
これらの化合物の製薬上許容可能なアミン塩は、有機酸、例えば酢酸、クエン
酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸等の
塩、並びに製薬上許容可能な無機酸、例えばリン酸、塩酸又は硫酸等の塩である
。これらの生理学的に許容可能な塩は、当業界で公知の方法により、例えば遊離
アミン塩基を余分量の酸とともに水性アルコール中に溶解して、調製する。
化合物１〜１２及び１３〜１７の合成は、P.S. Portoghese（米国特許第4,816
,586号）に詳細に記載されている（この記載内容は、参照により本明細書中に含
まれるものとする）。
ＩＩ式の化合物は、下記のように、ＩＶ式の化合物を塩基の存在下でベンズア
ルデヒドあるいはその一又は二置換化誘導体と反応させることにより容易に合成
し得る。
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4及びＲ5は上記と同様である）。好ましくは、ＩＶ
は塩酸ナトレキソンで、例えばＲ3＝Ｈ、Ｒ2＝ＯＨでＲ1はシクロプロピルメチ
ルであって、ＩＩ式（式中、Ｒ2＝ＯＨ、Ｒ1＝シクロプロピルメチル及びＲ3＝
Ｒ4＝Ｒ5＝Ｈである）の化合物の合成は、P.S. Portoghese et al., J. Med. Ch
em., 34, 1292(1991)に記載されたように実施する。ＯＲ3及び／又はＲ2が塩基
不安定基、例えばアルカノキシである場合、ＩＩ式の化合物中ではＲ3はＨであ
り、Ｒ2はＯＨである。このような情況
では、ヒドロキシル基の保護／脱保護のための当業界で認識された方法により、
保護基を置換し得る。もちろん、ナルトレキソン−ＨＣｌ又は遊離ＯＨ基を含有
するＩＶ式の同様の化合物を用いてＩＩ式（式中、Ｒ3はＨであり、及び／又は
Ｒ2はＯＨ又はＨである）の化合物を調製する場合、ＩＩ式の化合物中の遊離ヒ
ドロキシル基も当業界で公知の方法によりアルカノイルオキシに変換される。
ＩＩ式の化合物の特定の実施例の合成は、米国特許出願第07/867,997号（1992
年4月13日提出）に詳細に記載されている。
投与及び投薬形態
本発明の臨床的実施に際しては、本発明の化合物は一般に、経口的に又は非経
口的に、例えば注射又は注入により、活性成分を製薬上許容可能な担体と組合せ
て包含する製剤の形態で、例えば薬剤単位投薬形態で投与する。担体は、固体、
半固体又は液体希釈剤であるか、あるいは経口摂取用カプセル中に圧縮されるか
又は成形される。化合物又はその塩は、担体物質なしで使用してもよい。
本発明の拮抗薬を含有する薬剤単位投薬形態の例としては、錠剤、予備選択容
量の静注液、懸濁液、硬質又は軟質ゼラチンカプセル、マイクロカプセル、座薬
、リポソーム及び活性剤の制御又は遅延放出のために設計されたシステム、例え
ば経皮供給又は皮下供給用に設計されたレザーバーが挙げられる。このようなレ
ザーバーとしては、皮膚パッチ及び成形高分子インプラントが挙げられる。通常
、活性物質はその結果生じる薬剤単位投薬形態の約０．０５〜９９重量％、又は
０．１〜９５重量％を構成し、例えば注射又は注入用としては製剤の０．５〜２
０％、例えば錠剤又はカプセルのような経口投与用では０．１〜５０％である。
ＡＭＬＲ低下に反作用するのに、且つＡＭＬＲ低下の結果生じた疾病状態の症
状を治療するのに有効なＩ、ＩＩ又はＩＩＩ式の規定
の化合物の用量は、動物投与データをヒトに外挿するための当業界で公知の方法
により、ある程度まで、下記のin vitroネズミデータから、並びにEur. J. Phar
macol., 219, 346(1992)に示されたin vivoネズミデータから推定し得る（例え
ば米国特許第5,035,878号及び第4,938,949号参照）。
バイオアッセイ
Ａ．モルモット回腸筋肉を用いた試験
モルモット回腸（ＧＰＩ）からの抽出縦筋肉を生理学的培地中に懸濁すると、
電気刺激は確実に収縮を引き起こす。したがって、電気刺激に対する反応性を用
いて薬物の効果を示し得る。モルヒネは普通は電気刺激から派生する収縮を確実
に抑制し、古典的オピオイド拮抗薬、例えばナロキソン及びナルトレキソンはモ
ルヒネの作用を遮断するという観察により例証されるように、用いた手法及び一
般の結果は標準になった。
Ｂ．マウス精管（ＭＶＤ）
マウス精管はデルタオピオイド薬に感受性である。さらにＭＶＤは、デルタオ
ピオイドと選択的に反応する。したがって、それは選択的デルタ−オピオイド薬
を指示するのに有用である。本明細書で用いる方法は、Henderson等（Brit. J.
Pharmacol., 46, 764(1972)）（この記載内容は、参照により本明細書中に含ま
れるものとする）が記載したものである。
実施例１
拮抗薬活性の評価
Ａ．材料及び方法
１．モルモット回腸縦筋肉（ＧＰＩ）。
モルモットからの回腸を回盲接合部から約１０cm摘出し、取付け
られる筋層間神経叢を有する縦筋肉のストリップをRang et al., Brit. J. Phar
macol., 22, 356(1964)（この記載内容は、参照により本明細書中に含まれるも
のとする）の方法により調製した。次にこのストリップの１cm部分を、１０mlの
器官浴中に設置した２つのプラチナ電極の間に載せて、同大変換器に接続した。
ポリグラフで収縮を記録した。全標本で超最大矩形パルス（０．１Hzの周波数で
持続時間０．５msで８０V）により、回腸ストリップの収縮を開始させた。１．
２５μMのマレイン酸クロルフェニルアミンを含有するクレブス重炭酸塩溶液を
浴液とし、持続的に９５％Ｏ2及び５％ＣＯ2で発泡させた。器官浴は３６〜３７
℃に保持した。縦筋肉ストリップを最低９０分間の連続刺激で平衡状態にした。
薬剤を１０〜５０μlの量で浴中に付加し、それらの最大作用を書き留めた後に
緩衝液１０mlで２回洗浄後、累積濃度−反応曲線を確定した。
２．マウス精管（ＭＶＤ）。
Henderson et al., Brit. J. Pharmacol.,46, 764(1972)（この記載内容は、
参照により本明細書中に含まれるものとする）の記述に従って、本検定を実施し
た。両精管をマウスから摘出して、１０mlの器官浴中の２つのプラチナ環電極全
体に１つずつ載せた。浴は、持続的に９５％Ｏ2及び５％ＣＯ2で発泡させたクレ
ブス重炭酸塩溶液を含入した。器官浴は３７℃に保持した。この組織を同大変換
器に取り付けて、矩形パルス（０．１Hz、持続時間１ms、超最大電圧）で経壁的
に刺激した。薬剤を１０〜５０〜μlの量で浴中に累積的に付加し、それらの最
大作用を書き留めた後に洗浄した。
Ｂ．薬理学的知見
マウス精管（ＭＶＤ）及びモルモット回腸（ＧＰＩ）標本に関して、in vitro
で化合物を試験した。各化合物（１００又は２００nM）を組織と一緒に１５分間
インキュベートした後、ＩＣ50値を確定
するために段階的用量の標準作動薬を付加した。使用した標準作動薬は、〔Ｄ−
Ａｌａ2，Ｄ−Ｌｅｕ5〕−エンケファリン（ＤＡＤＬＥ）、モルヒネ（Ｍ）及び
エチルケタゾシン（ＥＫ）であった。これらはそれぞれデルタ、ミュー及びカッ
パオピオイド受容体に対して選択的である。ＩＣ50値を同一組織の対照ＩＣ50値
で割って、このＩＣ50比（ＤＲ）を用いて、等式Ｋｅ＝（拮抗薬）／（ＤＲ−１
）からＫｅ値を算出した。これらのバイオアッセイの結果を、下記の表ＩＩＩに
要約する。
すべてのＮ−シクロプロピルメチル化合物（１〜６、８〜１４及び１６〜１７
）がデルタ作動薬ＤＡＤＬＥの作用を相殺した。実質的にはモルヒネ及びＥＫに
対する拮抗作用はほとんど観察されなかった。これらの化合物は作動薬活性を欠
いているか、又は弱い、部分的作動薬として振る舞い、１μMの濃度で最大反応
の２０〜４０％でプラットーとなる反応曲線を有した。作動薬作用は、試験中の
拮抗薬に関して使用した濃度（２０〜２００mM）で、一貫して２０％以下であっ
た。
Ｎ−メチル化合物７も部分的作動薬活性を示した。しかしながら、その作動薬
作用が５nM又はそれ未満で２０％以下でしかないため、この濃度での拮抗薬活性
に関してそれを試験して、この点では不活性であることが判明した。
実施例２
ＮＴＩのin vivoでの拮抗薬活性
本系列の高活性デルタ拮抗薬ＮＴＩ（１）を、Ｔｙｒ−Ｄ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（ＤＳＬＥＴ）、モルヒネ及びＵ５０４８８Ｈの抗侵害
受容作用を相殺するに際してのその有効性に関してマウスで評価した。その作動
薬活性がそれぞれデルタ、ミュー及びカッパオピオイド受容体を介して選択的に
媒介されるために、これらの作動薬を用いた。
表ＩＶのデータに示されるように、化合物１は２０mg/kg皮下投与で、ＤＳＬ
ＥＴによる苦悩阻害を有効に遮断し、モルヒネ又はＵ５０４８８Ｈの作用を有意
に相殺しなかった。
したがって、in vitro及びin vivoデータはともに、インドール、ベンゾフラ
ン、ベンゾブラジン又はキノリン環系とナルトレキソンのＣ環との融合が、独特
のオピオイド受容体拮抗薬プロフィールを有する化合物を生じる。これらの化合
物のほとんどがデルタオピオイド受容体に対して高選択性で、非置換インドール１
はその置換コンジナーより効力があると思われる。ＮＴＩの選択性比は、デル
タ／ミューに関して約５０で、デルタ／カッパに関する値より大きいと思われる
。
ベンゾフラン８は、デルタ拮抗薬として１より低効力及び低感受
性であるが、しかし実質的デルタ拮抗活性を保持することが注目される。同様の
関係は、ベンゾピラジン１６及びキノリン１７に関して観察された。これは、イ
ンドール環系がデルタ選択性に必要だというわけではないことを示す。おそらく
、これらの化合物中のピロール、フラン、ピラジン及びキノリン部分の役割は、
それがモルヒネ核のＣ環と同一平面であるように付加的ベンゼン環を阻むことで
ある。
実施例３．ラットコロナウイルス感染におけるＡＭＬＲ低下に及ぼすＮＴＩの
作用
ラット。
Harlan-Sprague Dawley, Inc.(Indianapolis, IN)から１５０ｇの雄Lewisラッ
トを入手し、各実験前に少なくとも１週間、慣用的ラットケージ中で飼育した。
ラットには餌及び飲料水を自由に摂取させ、１２時間：１２時間の明暗周期で保
持した。
脾臓単核球（ＭＮＣ）の単離。
８mg/mlケタミン及び２mg/mlアセプロマジン（用量＝０．１ml／体重１００g
）の混合物でラットを麻酔し、脾臓を無菌的に摘出した。動物を麻酔下で瀉血し
た。金網を通して離散させて、脾臓ＭＮＣを周囲結合組織から外した。ficol-hy
paque（リンパ球分離培地 Lymphocyte Separation Medium, LSM, Organon Teckn
ika, Durham, NC）上での密度勾配遠心分離により、赤血球を除去した。精製Ｍ
ＮＣを１％ゼラチン及び２mMＥＤＴＡを含有するハンクス平衡塩溶液Hanks Bala
nced Salt Solution中で洗浄し、５％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／mlペ
ニシリン、１００μg／mlストレプトマイシン及び５ x １０-5M ２−メルカプト
エタノールを含有するＲＰＭＩ−１６４０培地中に再懸濁した。いくつかの実験
では、ＴＣＭTM，限定培地サプリメント（CELOX, Minneapolis, MN）をＦ
ＢＳの代わりに用いた。
自系細胞培養。
精製ＭＮＣを総容積０．２ml中に２ x１０5細胞／ウエルで９６ウエル丸底プ
レート中に入れ、３７℃で５日間インキュベートした。いくつかのウエルには、
培養開始時にＮＴＩ（P. Portoghese博士(University of Minn,参考文献9)より
入手)を１０-6M〜１０-18Mの範囲の濃度で付加した。培養の最後の１８時間に、
１μCiの3Ｈ−チミジン（６．７ Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, MA）
を各ウエルに付加した。次に細胞をガラス繊維濾紙上に採集して、ベックマンBe
ckman（Fullerton，CA）シンチレーション計数器で計数した。結果を三重のウエ
ルの１分当たりの平均数として算出し、対照の％として表す（抑制ＡＭＬＲのcp
m/対照ＡＭＬＲのcpm）。
ＡＭＬＲ検定を実施するためのもっとも一般的な手順は、Ｔ細胞を非Ｔ細胞か
ら分離し、非Ｔ細胞を照射又はマイトマイシンＣ処理して、培養中でそれらを再
結合することである。このような操作は培養中のｃｐｍをやや高くするが、しか
しながら、これらの培養中に3Ｈ−チミジンを混入する非分別化脾臓ＭＮＣも自
己抗原に対してそのようにしている ということがR.I. Zuberi et al., Cell.
Immunol., 84, 299(1984)により示されている。したがって、本実施例に記載し
た方法で単独で培養された非分別化脾臓ＭＮＣは真のＡＭＬＲを生じる。
ラットコロナウイルス感染。
われわれのコロニー中のラットのあるものは、われわれの獣医が診断した場合
、ラットコロナウイルス感染の臨床徴候を示した。このウイルスは、致命的では
ないが免疫抑制的であることが公知の上部呼吸器感染を引き起こす（R.O.Jacoby
et al., in The Laborato
ry Rat, Vol. I, Biology and Diseases, H.J. Baker et al., eds., Academic
Press, NY(1979)at page 272参照）。ラットは一般的には発病後１週間〜１０日
以内に回復した。感染ラットからの脾臓ＭＮＣは一貫してＡＭＬＲ低下を示した
。非感染ラットから単離した脾臓ＭＮＣから、対照反応が得られた。
ＮＴＩ投与
図１は、感染ラット（３ラットから採集した細胞を各実験用にプールした）か
らの自系混合リンパ球反応をＮＴＩにより調整し、3Ｈ−チミジン取込みにより
測定した６つの代表的実験（標識化実験１〜６）の結果を示す。反応は、非感染
ラットから単離したＭＮＣを用いて得られた対照反応のパーセント（％）として
表す。５％ＦＢＳを培地中に用いた場合、対照計数は３８００〜５２００cpmの
範囲であった。ＦＢＳの代わりにＴＣＭTMを培地中に用いた場合には僅かに低い
計数が観察された（１２００〜１５００cpm）。ＴＣＭTMを２つの実験に用いて
、対照培養中に観察された3Ｈ−チミジン取込みが本当にＡＭＬＲであって、異
種血清によるマイトジェン刺激によるものでないことを立証した。
全実験において、感染ラットからの細胞におけるＡＭＬＲの抑制は、健常ラッ
トからの対照細胞と比較して、単に部分的で、３２％（実験例２は対照の６８％
として示される）〜７５％（実験例３）の範囲であった。６つの実験全てに関し
て、％抑制は５２＋／−８（平均＋／−ｓ．ｅ．ｍ．）であった。これらの反応
は多発性硬化症患者で観察されたものの典型で、例えばその場合、抑制患者ＡＭ
ＬＲは健常対照の場合の約５０％である（例えばR.L. Hirsch, Clin. Immunol.
and Immunopathol., 58, 115(1991)参照）。
われわれの実験では、ＡＭＬＲを示している抑制培養へのＮＴＩ付加、3Ｈ−
チミジン取込みにより測定した場合、完全な又はほ
ぼ完全な反応の復帰（正常増殖）を引き起こした。実験３で示された最も重症な
抑制反応は、この実験に用いたＮＴＩの濃度により部分的に復活しただけであっ
た。しかしながら１０-12M ＮＴＩはこれらの培養における抑制反応を完全に逆
転させたと思われる。ＡＭＬＲ低下を逆転させるのに最も有効なＮＴＩの濃度は
、一般的に１０-10〜１０-14Mの範囲であった。
実施例４．ネズミサイトメガロウイルス（ｍＣＭＶ）感染におけるＡＭＬＲ低
下に及ぼすＮＴＩ作用
マウス。
８週齢雄Ｂａ１ｂ／ＣマウスをHarlan-Sprague Dawley Inc.(Indianapolis, I
N)から入手し、各実験前に少なくとも１週間、慣用的マウスケージ中で飼育した
。マウスには餌及び飲料水を自由に摂取させ、１２時間：１２時間の明暗周期で
保持した。
ｍＣＭＶ感染。
ストックｍＣＭＶ溶液の連続１０倍希釈液をマウスに腹腔内注射した。ストッ
クウイルスの希釈は、１０-2〜１０-6の範囲であった。注射の１０日後にマウス
を屠殺した。対照マウスには食塩水を注射した。
Ｔ及び非Ｔ ＭＮＣ分画の単離。
ＣＭＶ感染及び非感染マウスからの脾臓ＭＮＣを、ラット脾臓ＭＮＣに関して
上記したのと同様に、ＬＳＭでの密度勾配遠心分離により精製した。M.H．Juliu
s et al., Eur. J. Immunol., 3, 645(1973)に記載されたようなナイロンウール
カラムにより、Ｔ及び非Ｔ細胞分画を単離した。富Ｔ細胞を応答体細胞として用
いた。K.M. Linner et al., Endocrinol., 128, 717(1991)に記載されているよ
うに非Ｔ細胞をマイトマイシンＣで処理してその増殖を停止させ、刺激体細胞と
して用いた。次に自系細胞培養を作って、等数（２ x
１０5）の反応体Ｔ及び刺激体非Ｔ細胞を９６ウエルマイクロ滴定プレート中で
培養した。細胞は５日間培養した。いくつかのウエルには、ラットＡＭＬＲ試験
から最適であることが立証された濃度である１０-10、１０-12又は１０-14MでＮ
ＴＩを培養期間中付加した。3Ｈ−チミジンをインキュベーションの最後の１８
時間各ウエルに付加し、上記のように培養を採集し、計数した。
図２は、ＡＭＬＲに関するin vivo ｍＣＭＶ感染の結果を示す。ＣＭＶ感染後
１０日目に、１０-4のＣＭ部でＡＭＬＲの最大抑制が観察された。１０-5及び１
０-6のＣＭＶはこの時点ではＡＭＬＲに影響を及ぼさなかったが、一方１０-3及
び１０-2のＣＭＶはＡＭＬＲをより低度に抑制した。対照（非感染）ＡＭＬＲは
４５００〜１４，５００の範囲のcpmを有した。
図３Ａ及び３Ｂは、１０-10〜１０-14Mの範囲の濃度のＮＴＩによる２つの抑
制ＡＭＬＲ培養の逆転を示す。図３Ａは、１０-2のＣＭＶに対して部分的に抑制
された（２０％）ＡＭＬＲを示す。それは１０-12及び１０-10MのＮＴＩにより
完全に逆転されるが、しかし１０-14MのＮＴＩによっては逆転されない。図３Ｂ
は、ＣＭＶ１０-4に対して最大に抑制された（４２％）ＡＭＬＲを示す。これも
１０-14M〜１０-12MのＮＴＩにより完全に抑制が逆転されるが、１０-10MのＮＴ
Ｉでは部分的である。
実施例５．７−ベンジリデン−７−デヒドロナルトレキソン（ＩＩ，Ｒ1＝シ
クロプロピル−メチル，Ｒ2＝ＯＨ，Ｒ3＝Ｒ4＝Ｒ5＝Ｈ）
ＭｅＯＨ（８ml）に溶解した塩酸ナルトレキソン（２００mg，０．５３mmol）
の攪拌溶液に、氷浴中で水酸化ナトリウム（１N，４ml）及びベンズアルデヒド
（０．５ml，３．７mmol）を付加した。混合物を１４時間冷蔵した。混合物を１
N水性ＨＣｌで中和し、Ｃ
ＨＣｌ（３ x）で抽出した。併合有機層をブラインで洗浄し、乾燥させて、濃縮
し、粗製物質を得て、これをセファデックスSephadexカラム（ＣＨ−２０，Ｍｅ
ＯＨ）上で精製して、７−ベンジリデン−７−デヒドロナルトレキソン（１１３
mg，５０％）を得た。融点２３０℃。ｄｅｃ；Ｒf０．６０（ＣＨＣｌ3−ＭｅＯ
Ｈ−アセトン，１９：０．５：０．１）；ＩＲ（液体フィルム，cm-1）１６８５
，１６１１；ＭＳ ｍ／ｅ ４２９（Ｍ+，ＥＩ）。塩酸塩：Ｒf０．７２（ブタ
ノール−アセトン−Ｈ2Ｏ，２：１：１）；融点２１０℃ ｄｅｃ．分析値（Ｃ2 7
Ｈ27Ｏ4Ｎ・ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｃｌ．
実施例６．置換７−ベンジリデン−７−デヒドロナルトレキソン
塩基として水酸化ナトリウムを用いた種々の過剰量（３０当量）の置換ベンズ
アルデヒドによるナルトレキソンのアルドール縮合により、ＩＩ式の一連のＢＮ
ＴＸ類似体の合成を成し遂げた。ＨＭＤＳのような強塩基を用いたベンジルナル
トレキソン（ＩＶ，Ｒ1＝シクロプロピルメチル，Ｒ2＝ＯＨ，Ｒ3＝ベンジル）
のベンズアルデヒド（１．５当量）との反応は、所望の化合物を生成しなかった
。しかしながら反応混合物中に１２−クラウン−４を付加すると、所望のベンジ
リデン誘導体が収率４８％で得られた。ベンジルエーテルの開裂は、ＢＢｒ3で
処理して収率３２％で達成した。代表例を下記の実施例６ａに示す。
実施例６ａ．塩酸Ｅ−７−（４−ニトロベンジリデノ）ナルトレキソン（ＩＩ
ａ）
ＭｅＯＨ（４０ml）に溶解した塩酸ナルトレキソン（１００mg，０．２６mmol
）及び４−ニトロベンズアルデヒド（１．０ｇ，６．６mmol）の溶液に、１N水
酸化ナトリウム（２ml）を付加した。混合物を０℃で３日間放置し、次いで水で
希釈して、Ｎ−ＨＣｌで酸
性にして、エーテルで洗浄した。水性層を飽和水性ＮａＨＣＯ3でアルカリ性に
して、ＥｔＯＡｃで抽出した。抽出物を水で洗浄し、乾燥、蒸発させた。残渣を
シリカゲル（ヘキサン−ＥｔＯＡｃ，１：１）上でクロマトグラフィー処理して
、Ｅ−７−（４−ニトロベンジリデノ）ナルトレキソン（１０２mg，７８％）を
得た。Ｅ−７−（４−ニトロベンジリデノ）ナルトレキソンの遊離塩基をエタノ
ールに溶解して、数滴の濃塩酸を付加した。溶液を濃縮して、エーテルを加え、
乾燥させた（１００mg）。Ｃ27Ｈ27Ｎ2Ｏ6（Ｍ＋Ｈ）+に関する正確な質量計算
値 ４７５．１８６９，実測値４７５．１８８３。類似体ＩＩａ〜ＩＩｍに関す
る反応時間（ｒｔ＝２５℃）、収率及び融点（ｍｐ）を下記の表Ｖに示す。
実施例７．生物活性
実施例５（ＢＮＴＸ）及び６の化合物の拮抗薬効力を、マウス精管（ＭＶＤ）
標本におけるin vitroＮＴＩ及びナルトレキソンの活性について比較した。各化
合物（１００nM）を組織とともに１５分間インキュベート後、ＩＣ50値を確定す
るために段階用量の標準作動薬を付加した。使用した標準デルタ選択性作動薬は
〔Ｄ−Ａｌａ2
，Ｄ−Ｌｅｕ3〕エンケファリン（ＤＡＤＬＥ）であった。ＩＣ50値として表さ
れる拮抗薬の非存在下（対照）及び存在下で、濃度−反応曲線を得た。ＩＣ50比
は、拮抗薬の存在下でのＩＣ50を同一組織における対照ＩＣ50値で割った値であ
る。したがって、高ＩＣ50値は、特定の受容体での相対的に高度の拮抗作用を示
す。化合物ＩＩａ〜ｃ、ＩＩｅ、ＩＩｇ〜ｉ、ＩＩｊ及びＩＩｌ〜ｍに関するＩ
Ｃ50比（ＭＶＤ検定を用いて確定）を下記の表ＶＩに示す。ＩＣ50値を用いて、
等式Ｋｅ＝（拮抗薬）／（ＩＣ50比−１）からＫｅ値を算出した。したがって、
低Ｋｅは特定の受容体での相対的に高度の結合を示す。
ＢＮＴＸに関するこれらの生物検定の結果を下記の表ＶＩＩに要
約する。
表ＶＩＩに示したデータは、ＢＮＴＸがδ−選択性拮抗薬であることを示す。
そのＫｅ比は標準δ−作動薬ＮＴＩの値より低いが、しかしμ−選択性拮抗薬で
あるナルトレキソンよりも大きいということも注目される。
表ＶＩＩに示した平滑筋薬理学的データは、ＢＮＴＸがδ−選択性であること
を明示しているが、ＭＶＤ標本が脳と比較した場合、異なるδ亜型又はδ亜型の
混合物を含有すると思われるため、データは、たとえあるにしても、そのδ亜型
選択性を同定しない。
したがって、δ亜型選択性のより良好な査定は、脳膜の結合から、並びにマウ
スにおける拮抗薬試験から得られる。ＢＮＴＸのモルモット脳膜との結合を、L.
L. Werling et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 233, 722(1985)の一般的方法
のA.E. Takemori et al., J. Pharmacol. Exp. Ther.,246, 255(1988)による変
法を用いて確
定した。使用した放射性リガンドはδ1受容体に対する〔3Ｈ〕（〔Ｄ−Ｐｅｎ2
，Ｄ−Ｐｅｎ5〕エンケファリン）、δ2受容体に対する〔3Ｈ〕ＤＳＬＥＴ（〔
Ｄ−Ｓｅｒ2−Ｌｅｕ5〕エンケファリン−Ｔｈｒ6）、μ受容体に対する〔3Ｈ〕
ＤＡＭＧＯ、及びκ受容体に対するＵ６９５９３（トランス−（±）−３，４−
ジクロロ−Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−（１ピリジジニル）−シクロヘキシル〕ベン
ゼンアセトアミド）であった。
下記の表ＶＩＩＩのデータに示すように、ＢＮＴＸは約１００のＫｉ（δ2）
／Ｋｉ（δ1）結合比を示した。規定受容体での高Ｋｉ値は受容体に対する低度
結合親和性を示すため、ＢＮＴＸはδ1受容体部位に対して高度選択性であるこ
とが認められる。
抗侵害受容性に及ぼすＢＮＴＸの拮抗薬作用を、F.C. Tulunay et al., J. Ph
armacol. Exp. Ther., 243, 91(1987)の手法に従っ
て、テールフリック検定を用いてマウスで評価した。１０匹のマウスから成る少
なくとも３群を用いて用量−反応曲線を作った。尾で払いのける潜伏期間が対照
潜伏期間＋群の平均反応時間の３Ｓ．Ｄ．より大きい場合には、マウスは抗侵害
受容に関して陽性と見なされた。反応時間は、種々の作動薬投与後の抗侵害受容
に対するピーク時間で確定した。脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）注射は、５μlの容量
で、T.J. Haley et al., Br. J. Pharmacol., 12, 12(1957)の方法で実施した。
表ＶＩＩＩでは、効力はＥＤ50比として表す。これはＢＮＴＸの存在下で皮下
投与した標準作動薬（６．２５ｐｍｏｌ／ｉ．ｃ．ｖ．／マウス）のＥＤ50を標
準作動薬のＥＤ50で割った値である。したがって、ＤＰＤＰＥに関して得られた
用量−反応曲線は約７．２の因子だけ高濃度に移動されたが、一方ＤＳＬＥＴ、
モルヒネ及びＵ５０４８８Ｈ（κ作動薬）の曲線は、有意に移動されなかった。
したがって、モルモット脳膜に関して測定された結合データはin vivoデータと
相関し、δ亜型選択性の指示薬として、表ＩＸに示した平滑筋ベースの検定デー
タより優れている。ＢＮＴＸは、同定される最初のδ1オピオイド受容体亜種選
択性拮抗薬であると考えられる。
論文、特許及び特許文書はすべて、個別に参照に含まれると考えられる場合に
は、参照により本明細書中に含まれる。本発明は、種々の特定の及び好ましい実
施例及び方法を参照して記載されている。しかし、本発明の精神及び範囲を逸脱
しない限りにおいて、多数の変更及び修正が成されるものと理解されるべきであ
る。
【手続補正書】特許法第１８４条の８
【提出日】１９９５年９月１９日
【補正内容】
請求の範囲
１．自己混合性リンパ球反応（ＡＭＬＲ）低下を特徴とする疾患に苦しむ哺乳
類のＡＭＬＲを上昇させる薬剤を調製するための、式Ｉ：
（式中、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル、
Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキル、トランス（Ｃ4
〜Ｃ5）アルケニル、アリル又はフラン−２−イルアルキルであり、Ｒ2はＨ、
ＯＨ又はＯ2Ｃ（Ｃ1〜5）アルキルであり、Ｒ3はＨ、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は
（（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル）ＣＯであり、Ｒ4及びＲ5は別々にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ
、ＮＣＳ、ＮＯ2、ＮＨ2、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシで
あるかあるいはともにベンゾであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＹ（ここでＹはＨ、（Ｃ1
〜Ｃ5）アルキル又は（Ｒ4）（Ｒ5）ベンゾである）である）の化合物、及びそ
の製薬上許容可能な塩を用いる方法。
２．哺乳類がヒトである請求項１記載の方法。
３．ＡＭＬＲが慢性関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡又はシェーグレン症候群
、多発性硬化症、慢性リンパ性白血病又は１型糖尿病に依る請求項２記載の方法
。
４．Ｉ式の化合物がナルトリンドールである請求項１記載の化合物。
５．Ｉ式の化合物がナルトリンドール５’−イソシアネートである請求項１記
載の化合物。
６．薬剤が単位投薬形態で、製薬上許容可能な担体と組合せて、有効量のＩ式
の化合物を含む請求項１又は２記載の方法。
７．製薬上許容可能な担体が液体である請求項６記載の方法。
８．単位投薬形態がＩ式の化合物を含有する錠剤、カプセル又は溶液を包含す
る請求項６記載の方法。
９．薬剤が注射、静注又は経皮投与によるような非経口投与に適応される請求
項１又は２記載の方法。
１０．自己混合性リンパ球反応（ＡＭＬＲ）低下を特徴とするウイルス感染に
苦しむ哺乳類のＡＭＬＲを上昇させる薬剤を調製するための、式Ｉ：
（式中、Ｒ1は（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル、Ｃ3〜Ｃ6（シクロアルキル）アルキル、
Ｃ5〜Ｃ7（シクロアルケニル）アルキル、アリール、アラルキル、トランス（Ｃ4
〜Ｃ5）アルケニル、アリル又はフラン−２−イルアルキルであり、Ｒ2はＨ、
ＯＨ又はＯ2Ｃ（Ｃ1〜5）アルキルであり、Ｒ3はＨ、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は
（（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル）ＣＯであり、Ｒ4及びＲ5は別々にＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ
、ＮＣＳ、ＮＯ2、ＮＨ2、（Ｃ1〜Ｃ5）アルキル又は（Ｃ1〜Ｃ5）アルコキシで
あるかあるいはともにベンゾであり、ＸはＯ、Ｓ又はＮＹ（ここでＹはＨ、（Ｃ1
〜Ｃ5）アルキル又は（Ｒ4）（Ｒ5）ベンゾである）である）の化合物、及
びその製薬上許容可能な塩を用いる方法。
１１．哺乳類がヒトである請求項１０記載の方法。
１２．Ｉ式の化合物がナルトリンドールである請求項１０記載の方法。
１３．Ｉ式の化合物がナルトリンドール５’−イソシアネートである請求項１
０記載の方法。
１４．薬剤が単位投薬形態で、製薬上許容可能な担体と組合せて、有効量のＩ
式の化合物を含む請求項１０又は１１記載の方法。
１５．製薬上許容可能な担体が液体である請求項１４記載の方法。
１６．単位投薬形態かＩ式の化合物を含有する錠剤、カプセル又は溶液を包含
する請求項１４記載の方法。
１７．薬剤が注射、静注又は経皮投与によるような非経口投与に適応される請
求項１０又は１１記載の方法。
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(51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＤＵ 9454−4Ｃ Ａ６１Ｋ 31/40 ＡＤＵ
ＡＤＶ 9454−4Ｃ ＡＤＶ
ＡＤＹ 9454−4Ｃ ＡＤＹ
Ｃ０７Ｄ 498/08 8415−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 498/08
513/08 8415−4Ｃ 513/08
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ
Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ
，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，
ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ)，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ
Ｎ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ
，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，
ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，Ｎ
Ｌ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ
，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ
(72)発明者 ポートジェス，フィリップ エス.
アメリカ合衆国，ミネソタ 55127，セン
ト ポール，オリオール レーン 17
(72)発明者 シャープ，バート エム.
アメリカ合衆国，ミネソタ 55416，セン
ト ルイス パーク，セダーウッド ロー
ド 4301
(72)発明者 リンナー，クリスティン エム.
アメリカ合衆国，ミネソタ 55116，セン
ト ポール，サウス クリーブランド ア
ベニュ 831