JPH09502353A

JPH09502353A - プラスモジウム・ビバックスおよびプラスモジウム・ファルシパルム赤血球結合蛋白質からの結合領域

Info

Publication number: JPH09502353A
Application number: JP7508825A
Authority: JP
Inventors: シム，キン，リー; チットニス，チェタン; ミラー，ルイス，エイチ．; ピーターソン，デビッド，エス．; ス，シン−ジュアン; ウィレムズ，トスマス，イー．
Original assignee: US Department of Health and Human Services
Current assignee: US Department of Health and Human Services
Priority date: 1993-09-10
Filing date: 1994-09-07
Publication date: 1997-03-11
Also published as: US6962987B2; DE69434221D1; US20020169305A1; WO1995007353A2; CA2171193A1; HK1010395A1; US6392026B1; CN1414102A; ATE286536T1; CN1134173A; DE69434221T2; AU694142B2; CN1414018A; EP0719333A1; US5849306A; AU7872194A; WO1995007353A3; EP0719333B1

Abstract

(57)【要約】本発明はプラスモジウム・ファルシパルムまたはＰ.ビバックスにより引き起こされるマラリアの治療および予防に有用な単離されたポリペプチドを提供する。特に、本ポリペプチドはＥＢＬ群中の蛋白質の結合領域並びにＰ.ファルシパルムのメロゾイト上のシアル酸結合蛋白質（ＳＡＢＰ）由来のものである。本ポリペプチドはまたＰ.ビバックスのメロゾイト上のダッフィ抗原結合蛋白質（ＤＡＢＰ）由来のものでもよい。

Description

【発明の詳細な説明】プラスモジウム・ビバックスおよびプラスモジウム・ファルシパルム赤血球結合蛋白質からの結合領域発明の背景毎年２〜４億人の人間が罹患し１〜２百万人がそのために死亡するマラリアは、依然として世界で最も重大な感染性疾病の一つである。アフリカの地方における１〜４才の子供の全死亡者の約２５％がマラリアによるものである。マラリアが全世界的な健康問題として重要であるため、マラリアワクチンを同定し開発するためにかなりの努力が払われている。ヒトにおけるマラリアは４種の寄生体プラスモジウム(Plasmodium)、すなわちＰ.ファルシパルム(falciparum)、Ｐ.ビバックス(vivax)、Ｐ.ナレシ(knowlesi) およびＰ.マラリアエ(malariae)により引き起こされる。ヒトにおけるマラリアの主な原因はＰ.ファルシパルムであり、それによって毎年２〜４億人の人間が罹患し、１〜４百万人の人間が死亡する。Ｐ.ナレシ（旧世界サルで見られるマラリア菌株でヒトの赤血球も侵襲する）およびＰ.ファルシパルムとは違い、Ｐ.ビバックス（ヒトに対して感染性である４種のうちの１種）は試験管内で培養することができない。Ｐ.ビバックスはＰ. ナレシと実質的な系統的類似性を有するが、これらの２種は多くの重要な面において異なる。例えば、Ｐ.ビバックスは多くのサル種に感染性でなく、感染は他のものでは不十分であるのに対して、Ｐ.ナレシはヒトには不十分な感染性であるが多くのサル種には易感染性である。マラリアに対抗する種々の可能なワクチンの根拠は寄生体のライフサイクルの理解を通して認識される。若いマラリア寄生体すなわち「スポロゾイト」がカによりヒトの血液流中に注入される時にヒトにおける感染が始まる。注入後、寄生体は肝臓細胞に限局化する。約１週間後に、寄生体すなわち「メロゾイト」が血液流中に放出される。血液流中への寄生体の侵襲が「赤血球」期を開始させる。成長し発達するために各々の寄生体が赤血球の中に入る。メロゾイトが赤血球の中で成熟したものはトロフォゾイトと呼ばれる。トロフォゾイトはそれによって赤血球が破裂するまで数回の核分裂（増員増殖）を行い、６〜２４個のメロゾイトを放出する。５、６回の無性増員増殖サイクル後に、一部の寄生体は、無性生殖によりシゾントになる代わりに、「配偶子母細胞」として知られる形態学的に特徴のある形態に発達し、それらは長く生存し有性発達を行う。マラリア寄生体の有性発達は雌の寄生体すなわち「大配偶子母細胞」と雄の寄生体すなわち「小配偶子母細胞」を必要とする。これらの配偶子母細胞はヒトにおいてはそれ以上の発達をしない。カの中に配偶子母細胞が取り入れられると、カの中腸で複雑な有性サイクルが始まる。１０〜２０分後に赤血球がカの中腸で崩壊する。小配偶子母細胞は鞭毛放出により発育し続け、極めて鞭毛の発達した８個の小配偶子を放出する。小配偶子および大配偶子の融合で接合が起こる。接合した寄生体は接合体として知られており、それは「オーキネート」に発達する。オーキネートはカの中腸に付着し、卵母細胞に形質転換し、その中で多くの小さいスポロゾイトを生ずる。中腸に付着する前に、オーキネートは、取り入れられた寄生体の侵襲に対する障壁として明白に働く囲食膜をまず突破するにちがいない。卵母細胞が破裂するとスポロゾイトは血リンパを介してカの唾液腺に移動する。一旦カの唾液中にはいると、寄生体は宿主に注入可能となる。プラスモジウムのライフサイクルの赤血球期は、宿主中のマラリアの臨床的および病理学的特徴がこの期に起因するため、ワクチン開発に特に関係がある。Ｐ .ビバックスおよびＰ.ナレシでは、ダッフィ陽性赤血球上に存在するダッフィ血液型決定基がヒト赤血球の侵襲には必須である［Miller他、Science 189：561-5 63，(1975)；Miller他、N．Engl．J．Med．295：302-304，(1976)］。Ｐ.ファルシパルムでは、メロゾイトの赤血球中への侵襲は赤血球上のグリコホリン上のシアル酸に対する結合に依存するようである［Miller他、J．Exp．Med．146：277- 281，(1971)；Pasvol,他、Lancet．ii：947-950(1982)；Pasvol,他、Nature，27 9：64-66(1982)；Perkins，J．Exp．Med．160：788-798(1984)］。サルの寄生体であるＰ.ナレシに関する研究で、侵襲中に起きる複数の事象がさらに明白に理解された。Ｐ.ビバックスおよびＰ.ファルシパルムがそれぞれダッフィ抗原およびシアル酸と結合しても、それらは互いに、そしてＰ.ナレシと共通の侵襲方法を有するようである。Ｐ.ナレシでは、侵襲中にメロゾイトは最初にメロゾイトの表面のどこかで赤血球に付着し、次に再配向して、その頂端部が赤血球と接触する［Dvorak他、Scie nce 187：748−750、(1975)］。メロゾイトの付着および再配向は共にダッフィ陽性およびダッフィ陰性細胞上で同等によく起きる。次にメロゾイトの頂端部とダッフィ陽性赤血球との間で結合が生じ、その後に液胞生成および液胞中へのメロゾイトの侵入が起こる。Aikawa他、J．Cell Biol．77：72-82(1978)。結合生成および赤血球中へのメロゾイト侵入はダッフィ陰性細胞上では起こらず［Mill er他、J．Exp．Med．149：172-184(1979)］、これはダッフィ決定基に特異的な受容体が頂結合生成に関係するが最初の付着には関係しないことを示唆している。メロゾイトの頂点端部は３種の細胞小器官、すなわちロープテリー(rhoptry) 、デンスグラニュールおよび短系(microneme)、の存在により規定される。ロープテリーおよびデンスグラニュールはそれらの内容物を液胞生成時に放出する［ Ladda他、1969；Aikawa他、J．Cell Biol.，77：72-82(1978)；Torn他、Infecti on and Immunity 57：3230-3233(1989)；BannisterおよびDluzewski，Blood Cel ls 16：257-292(1990)］。今までのところ短系の機能は未知である。しかしながら、短系の位置はそれらが侵襲過程に関与していることを示唆している。ダッフィ抗原結合蛋白質（ＤＡＢＰ）およびシアル酸結合蛋白質（ＳＡＢＰ）はそれぞれＰ.ナレシおよびＰ.ファルシパルムの短系に限局化されている［Adams他、Cel l 63：141-153(1990)；Sim他、Mol．Biochem．Parasitol．51：157-160(1992)］。ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰは、感染した赤血球がメロゾイトを放出した後に培養上澄み液中に出現する可溶性蛋白質である。免疫化学データは、赤血球上のＰ. ビバックスおよびＰ.ファルシパルムのダッフィおよびシアル酸受容体用の各々のリガンドであるＤＡＢＰおよびＳＡＢＰが可溶形または膜結合された形のいずれかという点で同一である結合の特異性を有することを示している。ＤＡＢＰはダッフィ血液型決定基と特異的に結合する１３５ｋＤａ蛋白質である［Wertheimer他、Exp．Parasitol．69：340ー350(1989)；Barnwell他、J．Exp ．Med．169：1795-1802(1989)］。それ故、ＤＡＢＰの結合はヒトのダッフィ陽性赤血球に特異的である。ヒトの赤血球に関しては４種の主要ダッフィ表現型、すなわち抗−Ｆｙaおよび抗−Ｆｙb血清により定義されたＦｙ(ａ)、Ｆｙ(ｂ)、Ｆｙ(ａｂ)およびＦｙ(陰性)、がある［Hadley他、In Red Cell Antigens and A ntibodies，G．Garratty，編集（Arlington，Va.:American Association of Blo od Banks）pp．17-33(1986)］。ＤＡＢＰはＰ.ビバックスによるに侵襲に同等に感受性であるＦｙ(ａ)およびＦｙ(ｂ)赤血球の両方と同等に結合するが、Ｆｙ( 陰性)赤血球とは結合しない。ＳＡＢＰすなわち１７５ｋＤａ蛋白質の場合には、結合は赤血球上のグリコホリンシアル酸残基に対して特異的である［CamusおよびHadley，Science 230:553 -556(1985)；Orlandi，他、J．Cell Biol．116:901-909(1992)］。それ故、ノイラミニダーゼ処理（それはシアル酸残基を切断する）により赤血球がＰ.ファルシパルム侵襲に対して免疫性になる。したがって、結合の特異性および寄生体による侵襲との相互関係により、ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰが赤血球上のシアル酸およびダッフィ抗原と相互作用するＰ .ビバックスおよびＰ.ファルシパルムの蛋白質であることが示される。両者の蛋白質をコードする遺伝子はクローン化されており、そのＤＮＡおよび予期される蛋白質配列は決定されている［B．Kim Lee Sim，他、J．Cell Biol．111：1877- 1884(1990)；Fang，X.，他、Mol．Biochem Parasitol．44：125-132(1991)］。世界的にかなりの研究努力がなされたにもかかわらず、プラスモジウム寄生体の複雑さおよびその宿主とのそれとの相互作用のために、マラリアの血液期の予防または緩和に関して満足のいく解決法を発見することはできなかった。マラリアはそのように大きな世界的な健康問題であるため、この疾病の影響を緩和する方法に関する要望がある。本発明はプラスモジウム侵襲に対する効果的な予防および治療手段を提供する。発明の概要本発明は単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドおよび／または単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む組成物を提供する。ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドは好ましくは約２００〜約３００個のアミノ酸残基を含むが、ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドは好ましくは約２００〜約６００個のアミノ酸残基を含む。好ましいＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドはＳＥＱＩＤＮｏ.２に見られるアミノ酸配列の残基１〜約３２５を有する。好ましいＡＢＰ結合領域ポリペプチドはＳＥＱＩＤＮｏ.４のアミノ酸配列の残基１〜約６１６を有する。本発明はまた医薬的に許容可能な担体および生物中でプラスモジウム・ビバックスのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む医薬組成物も包含する。さらに、プラスモジウム・ファルシパルムに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドを医薬組成物に加えてもよい。医薬的に許容可能な担体および生物中でプラスモジウム・ファルシパルムのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む医薬組成物も提供される。さらに、プラスモジウム・ビバックスに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドを医薬組成物に加えてもよい。ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドまたはＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドも開示されている。さらに、本発明はＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む組み換え細胞も包含する。この発明はさらに患者においてプラスモジウムのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発させる方法も含む。この方法は患者に、免疫学的に有効な量の、医薬的に許容可能な担体および単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチド、ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドまたはそれらの組み合わせを含む医薬組成物を投与することを含む。この開示はまたＰ.ファルシパルム１７５ｋＤおよびＰ.ビバックス１３５ｋＤ結合蛋白質において保存されている領域を有する赤血球結合リガンド（ＥＢＬ）群における別のＰ.ファルシパルム遺伝子のＤＮＡ配列も提供する。定義ここで使用される「ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチド」または「ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチド」は、それぞれダッフィ抗原結合蛋白質（ＤＡＢＰ）またはシアル酸結合蛋白質（ＳＡＢＰ）のシステインに富んだアミノ末端領域からの配列と（以下で定義されている通り）実質的に同一であるポリペプチドである。そのようなポリペプチドはグリコホリン上でダッフィ抗原またはシアル酸残基のいずれかと結合することができる。特に、ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドはＮ−末端アミノ酸（残基１）から約残基３２５までの結合領域内のＳＡＢＰの配列と実質的に同様なアミノ酸残基からなる。ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドはＮ−末端アミノ酸（残基１）から約残基６１６までの結合領域内のＤＡＢＰの配列と実質的に同様なアミノ酸残基からなる。ＥＢＬ群の遺伝子によりコードされた結合領域ポリペプチドは以上で定義されているＤＡＢＰおよびＳＡＢＰの結合領域の配列と実質的に同一の残基からなっている。ＥＢＬ群はＤＡＢＰおよびＳＡＢＰの保存されている領域と実質的に同様な配列を含む。これらには、ここでＥＢＬ−ｅ１（ＳＥＱＩＤＮｏ５および６）、Ｅ３１ａ（ＳＥＱＩＤＮｏ７および８）、ＥＢＬ−ｅ２（ＳＥＱＩＤＮｏ９および１０）並びにＰｒｏｊ３（ＳＥＱＩＤＮｏ１１および１２）として報告されている配列が包含されている。本発明のポリペプチドは全長の結合領域またはその断片からなっていてよい。典型的にはＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドは約５０〜約３２５個の残基、好ましくは約７５〜約３００個の、より好ましくは約１００〜約２５０個の残基からなるであろう。ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドは約５０〜約６１６個の残基、好ましくは約７５〜３００個の、より好ましくは約１００〜約２５０個の残基からなるであろう。本発明の特に好ましいポリペプチドはＳＡＢＰおよびＥＢＬ群の間で保存されている結合領域内のものである。これらの保存されている領域内の残基は以下の図１に示されている。２つの配列におけるヌクレオチドまたはアミノ酸残基の配列が最大一致を見るために整列化されたときに同一であるなら、２種のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「同一」であると言われる。比較のための配列の最適アラインメントは、SmithおよびWaterman のローカルホモロジーアラインメントアルゴリズム［ Adv．Appl．Math．2：482(1981)］や、Needeleman および Wunsch のホモロジーアラインメントアルゴリズム［J．Mol．Biol．48:443(1970)］、Pearlsonおよび Lipman の類似性探索方法［Proc．Natl．Acad．Sci．(U.S.A.)85：2444(1988)］、これらのアルゴリズムのコンピューター計算方法（ウィスコンシン州メディソン、サイアンスドライブ５７５、遺伝子コンピュータグループのウィスコンシンソフトウエアパッケージ、GAP，BESTFIT，FASTA，およびTFASTA）またはインスペクションにより行ってもよい。これらの参考文献は引用することにより本明細書の内容に含める。「実質的な同一性」という用語は、ポリペプチドが約２０〜約６００個の残基 −典型的には約５０〜約５００個の残基、通常は約２５０〜約３００個の残基、の比較窓にわたり対照配列と比べて少なくとも８０％の、好ましくは９０％の、より好ましくは９５％以上の配列同一性を有する配列を含むことを意味する。同一性％値は上記のプログラムを用いて決定される。本発明の特に好ましいペプチドはＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ中で保存されているシステイン残基の少なくとも７０％が存在する配列を含むものである。さらに、ペプチドはＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ中で保存されているトリプトファン残基の少なくとも５０％が存在する配列を含む。実質的な同様性という用語もここではＤＡＢＰ、ＳＡＢＰおよびＥＢＬ群の配列の間で保存されていることが見いだされるアミノ酸残基に関して特に定義されている。これらの保存されたアミノ酸はここで報告された全ての配列の間で保存されたトリプトファンおよびシステイン残基から主としてなる。さらに、保存されたアミノ酸残基にはチロシンで置換されていてもよいフェニルアラニン残基も包含される。これらのアミノ酸残基は当業者により上述の方法を用いて配列を整列化した後に、保存されていると測定することができる。ポリペプチド配列が実質的に同一であることの他の徴候は、１つの蛋白質が他の蛋白質に対して得られた抗体と免疫学的に反応性である場合である。それ故、本発明のポリペプチドには、ＳＡＢＰ結合領域、ＤＡＢＰ結合領域に対して得られたまたはＥＢＬ群の保存されている領域に対して得られた抗体と免疫学的に反応性であるポリペプチドが包含される。ヌクレオチド配列が実質的に同一であることのもう一つの徴候は、２つの分子がストリンジェント条件下で互いにハイブリッド形成する場合である。ストリンジェント条件は配列依存性であり、環境が異なれば緊張条件も異なるであろう。一般的には、ストリンジェント条件は規定されたイオン強度およびｐＨにおける特異的配列に関する熱融点（Ｔｍ）より約５℃低く選択される。Ｔｍは目標配列の５０％が完全に整合したプローブに対して（規定されたイオン強度およびｐＨにおいて）ハイブリッド形成する温度である。典型的には、ストリンジェント条件とは塩濃度がｐＨ７において少なくとも約０.０２モルであり、温度は少なくとも約６０℃である。「単離された」または「生物学的に純粋な」という用句は、その自然状態で見られるような通常はそれに伴っている成分が実質的にまたは本質的に除去された物質をさす。それ故、本発明の結合領域ポリペプチドはそれらのその場での環境で通常伴っている物質、例えばメロゾイト膜の他の蛋白質を含有していない。しかしながら、蛋白質がＰＡＧＥにより均一または優性バンドに単離されている場合でも、５〜１０％の範囲内の痕跡量の天然蛋白質不純物が存在することがあり、それらは希望する蛋白質と共に精製される。本発明の単離されたポリペプチドはそのような内因性の共精製された蛋白質を含有していない。蛋白質純度すなわち均一性は当技術において既知である多数の手段、例えば蛋白質サンプルのポリアクリルアミドゲル電気泳動およびその後の染色時の可視化により示すことができる。ある種の目的のためには高い解像力が必要で、ＨＰＬＣまたは同様な精製手段が利用される。「残基」という用語は、アミド結合またはアミド結合類似物によりオリゴペプチド中に取り込まれているアミノ酸（ＤもしくはＬ）またはアミノ酸類似物をさす。本発明のアミド結合類似物には当技術の専門家に既知であるペプチド骨格修飾が包含される。図面の簡単な説明図１はＤＡＢＰ結合領域（ビバックス）、２つの相同ＳＡＢＰ領域（ＳＡＢＰＦ１およびＳＡＢＰＦ２）並びにＥＢＬ遺伝子群の内の配列決定されたもの（ｅｂｌ−ｅ１、Ｅ３１ａ、ＥＢＬ−ｅ２および３つの相同Ｐｒｏｊ３領域）の推定アミノ酸配列を表す。図２はｐＲＥ４クローニングベクターの概略図を表す。図３は本発明の保存されたモチーフをコードする配列を単離するために有用なプライマーを示す。好ましい態様の説明赤血球に対するメロゾイトおよびシゾントの結合はメロゾイトまたはシゾントの表面上の特異的な結合蛋白質により仲介されており、それは赤血球侵襲に必要である。Ｐ.ファルシパルムの場合には、この結合は赤血球上のシアル酸グリコホリン残基とメロゾイトまたはシゾントの表面上のシアル酸結合蛋白質（ＳＡＢＰ）との間の特異的な相互作用を必要とする。精製されたＳＡＢＰの、赤血球を化学的にまたは酵素的に変更されたシアル酸残基と結合させる能力は、Ｐ.ファルシパルムの、これらの赤血球を侵襲する能力に対応した。さらに、シアル酸が欠損している赤血球はＳＡＢＰを結合しないしＰ.ファルシパルムによる侵襲もない。Ｐ.ファルシパルムのＳＡＢＰをコードしているＤＮＡもクローン化され配列決定されている。Ｐ.ビバックスにおいては、赤血球に対する特異的な結合は赤血球上のダッフィ血液型抗原とメロゾイト上のダッフィ抗原結合蛋白質（ＤＡＢＰ）との間の相互作用を必要とする。ダッフィ結合蛋白質は、生物学的には、ヒトのダッフィ陽性赤血球とは結合するがダッフィ陰性赤血球とは結合しないメロゾイトを感染赤血球が放出した後に培養上澄み液中に出現する可溶性蛋白質であると定義された。ダッフィ陽性赤血球に対するＰ.ビバックスＤＡＢＰ蛋白質の結合はダッフィ血液型決定基に対する抗血清により阻止されることが分かった。精製されたダッフィ血液型抗原もまた赤血球との結合を阻止する。ＤＡＢＰが、ウェスタンブロット上のダッフィ血液型決定基と結合することも分かった。ヒトの赤血球上のダッフィ陽性血液型決定基はプラスモジウム・ビバックスによるヒトの赤血球の侵襲にとって必須である。Ｐ.ビバックスのメロゾイト付着および再配向はダッフィ陽性および陰性赤血球上で同等によく起きる。次にメロゾイトの頂端部とダッフィ−陽性赤血球との間で結合が形成され、その後に液胞が形成されてメロゾイトが液胞の中に入る。結合形成および赤血球中へのメロゾイトの侵入はダッフィ陰性細胞上では起きず、そのことはダッフィ決定基に特異的な受容体が頂点結合形成には関係するが初期付着には関係しないことを示唆している。Ｐ.ビバックスおよびＰ.ナレシのＤＡＢＰをコードするＤＮＡ配列はクローン化されそして配列決定されている。Ｐ.ビバックスの赤血球侵襲にはダッフィ血液型抗原が絶対に必要である。しかしながら、Ｐ.ファルシパルムの単離体は侵襲に関してはシアル酸への依存度において異なる。シアル酸が欠損する赤血球を通常の割合で侵襲するある種のＰ .ファルシパルムクローンが開発されている。このことは、Ｐ.ファルシパルムのある種の菌株は赤血球上で他のリガンドと相互作用することができ、従って異なる特異性を有する複数の赤血球結合蛋白質を有するかもしれないことを示唆している。本発明の基礎はＤＡＢＰおよびＳＡＢＰの両方における結合領域の発見である。ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰの予想された蛋白質配列の比較によって、２種の蛋白質間の高度の類似性を有する両方の蛋白質におけるアミノ−末端の、システインに富んだ領域の存在を明らかになる。ＤＡＢＰのアミノ−末端の、システインに富んだ領域は約３２５個のアミノ酸を有し、一方ＳＡＢＰのアミノ−末端のシステインに富んだ領域は約６１６個のアミノ酸を有する。これはＳＡＢＰ蛋白質中のアミノ−末端のシステインに富んだ領域の明白な重複に起因する。システイン残基はシステイン残基を取り囲むアミノ酸およびこの領域中の多数の芳香族アミノ酸残基と同様に、ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰの２つの領域の間で保存されている。アミノ−末端システインに富んだ領域およびカルボキシル−末端近くの他のシステインに富んだ領域はＤＡＢＰ蛋白質とＳＡＢＰ蛋白質が最も類似している部分である。これらの２つのシステインに富んだ領域間のアミノ酸配列の領域ではＤＡＢＰとＳＡＢＰの間には限定された類似性しか見られない。他のＰ.ファルシパルムのオープンリーディングフレーム、並びにＳＡＢＰおよびＤＡＢＰの結合領域と実質的な同一性を有する領域を持つ遺伝子が同定されている。これらの配列の複数のコピーが寄生体ゲノムの中に存在し、そのことは宿主−寄生体相互作用におけるそれらの重要な活性を示している。これらの配列群（ＥＢＬ群）はクロロキン耐性遺伝子座の遺伝研究中に構築された染色体７サブセグメントライブラリーからクローン化された〔Wellems他、PNAS 88：3382-3 386(1991)〕。ＥＢＬ配列のアラインメントによりＰ.ファルシパルム１７５ｋＤ蛋白質で高度に保存された領域が同定され、これらの保存された領域は遺伝子（ｅｂｌ−ｅ１、ｅｂｌ−ｅ２）を同定するために使用されており、それらの残基の１個（ｅｂｌ−ｅ１）は染色体１３上に存在する。マラリア寄生体のヒトの赤血球中の侵襲に影響を与える染色体１３の領域内のこの遺伝子について遺伝連鎖研究がなされている〔Wellems他、Cell 49:633-642(1987)〕。これらのオープンリーディングフレームからのプローブを用いるサザンハイブリダイゼーション実験は、これらの保存された配列の追加コピーがゲノム中のどこかに置かれていることを示した。染色体７上のオープンリーディングフレームの最大のものは８キロベースであり、ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰのＮ−末端のシステインに富んだ単位と相同の４個のタンデム反復を含有する。図１はＤＡＢＰ結合領域とＳＡＢＰの２つの相同領域（Ｆ₁およびＦ₂）とを有するＥＢＬ群のアラインメントを表す。ＥＢＬ群は最も望ましいアラインメントを得るために２つの副群に分割される。保存されたシステイン残基は肉太活字で示し、保存された芳香族残基には下線を引いてある。本発明のポリペプチドを使用してＥＢＬ遺伝子群中のＳＡＢＰ、ＤＡＢＰまたは保存された領域の結合領域に特異的なモノクローン抗体を得ることができる。これらの抗体はマラリア感染の診断用にまたは赤血球にメロゾイトが結合するのを阻害する治療薬として使用できる。所望する抗原に対するモノクローン抗体の製造は当技術の専門家に公知であるのでここでは詳細には論じない。当技術の専門家が利用できる、種々の免疫グロブリン分子の製造および操作に関する多くの技術を、結合を阻害するために容易に応用することができる。ここで使用されている「免疫グロブリン」および「抗体」という用語は免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされた１種以上のポリペプチドからなる蛋白質をさす。免疫グロブリンは抗体の他に例えばＦｖ、Ｆａｂ、およびＦ(ａｂ)₂を含む種々の形態で存在していても、単一鎖で存在していてもよい。免疫グロブリンの構造および機能の一般的論評に関しては、Fundamental Immunology，2d Ed.， W.E．Paul 編集、Ravens Press，N.Y.，（1989）を参照のこと。本発明のポリペプチドを結合させる抗体は種々の手段で製造できる。非−ヒト、例えばネズミ、ウサギ、ウマ、などのモノクローン抗体の製造は公知で、例えば動物をポリペプチドを含有する調合物を用いて免疫感作させることにより行われる。免疫感作された動物から得られた抗体−生成細胞を不死化しそしてスクリーニングするか、または最初にメロキソイトと赤血球との間の結合を阻害する抗体の製造に関してスクリーニングし、次に不死化する。モノクローン抗体製造の一般的工程の議論に関しては、Harlow および Laneの Cold Spring Harbor Public ations，N.Y.，Antibodies，A Laboratory Manual（1988）を参照のこと。従って、本発明はＳＡＢＰ、ＤＡＢＰとコードされたＥＢＬ群領域の間で保存された結合領域中の配列に対する保護免疫応答またはモノクローン抗体の標的設定を可能にする。これらの蛋白質の結合領域の同定によって大きい分子の機能要素に研究の焦点を当てることができるため、ワクチン開発を促進させる結果となる。結合領域内の特異的な配列が、進化中に保存されている重要領域に対する標的を精密なものとするため、寄生体に対するワクチンとしての使用にとって好ましい。ＥＢＬ群（これまでに配列が決定されていない）の遺伝子を患者におけるＰ. ファルシパルム寄生体の存在を検出するためのマーカーとして使用することができる。これは、ＥＢＬ群の遺伝子の一部に相補的なオリゴヌクレオチドを用いるＰＣＲ反応によって、症状を示す患者の組織叉は血液を用いて当業者に公知の手段により行うことができる。さらに、ＥＢＬ群の配列を決定することによって、当業者に、種々の用途で遺伝マーカーとして使用される明瞭なプローブを生成する手段も与える。さらに、本発明は宿主寄生体相互作用に関与するアピコンプレキサ(Apicomple xa)亜門の他の構成員に存在するがそれらに限定されない、保存されたモチーフも規定する。このモチーフはプラスモジウム種および他の寄生性原生動物において、図３に示されている合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応により同定することができる。ＰＣＲ方法については以下に詳細に記載する。これらのプライマーはＤＡＢＰ、ＳＡＢＰおよびＥＢＬ群の中で最高の保存度を示す、保存されたモチーフ中の領域から考案される。図３はこれらの領域およびそれらから誘導される共通アミノ酸配列を示している。Ａ.一般的方法この出願で必要な命名および一般的研究室工程の多くは、Sambrook，他、Mole cular Cloning A Laboratory Manual(2nd Ed.)，Vol．1-3，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，New York，1989 に記載されている。このマニュアルは以下では「Sambrook，他」と称される。Ｂ.ＳＡＢＰ、ＤＡＢＰおよびＥＢＬ結合領域をコードするＤＮＡを単離する方法本発明の核酸組成物は、ＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、または種々の組み合わせのハイブリッド形成のいずれであれ、天然源から単離されたものでもよいし、試験管内で合成されたものでもよい。請求の範囲に記載する核酸は形質転換またはトランスフェクションされた完全細胞中に、形質転換またはトランスフェクションされた細胞の溶解物中に、または部分的に精製されたかもしくは実質的に純粋な形態で存在していてよい。本発明の結合領域をコードする遺伝子の核酸操作技術、例えばポリペプチドをコードする核酸配列の発現ベクターへのサブクローン化、標識付けプローブ、ＤＮＡハイブリッド形成などについては Sambrook 他に一般的には記載されており、それをここでは引用することにより本明細書の内容に含める。組み換えＤＮＡ技術を使用して結合領域ポリペプチドを製造することができる。一般的には、ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域をコードするＤＮＡをまず発現ベクター中への連結反応に適した形態でクローン化または単離する。連結反応後に、ＤＮＡ断片すなわち挿入部を含有するベクターを組み換え結合領域の発現用の適当な宿主細胞の中に加える。次にポリペプチドを宿主細胞から単離する。ＳＡＢＰ、ＤＡＢＰおよびＥＢＬ結合領域をコードするＤＮＡ配列を単離する種々の方法がある。典型的には、ＤＮＡはゲノムまたはｃＤＮＡライブラリーからＤＮＡ中の配列に特異的な標識の付いたオリゴヌクレオチドプローブを用いて単離される。ゲノムＤＮＡまたは適当な遺伝子を含有するｃＤＮＡの制限エンドヌクレアーゼ消化を使用してこれらの蛋白質の結合領域をコードするＤＮＡを単離できる。ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ遺伝子のＤＮＡ配列は既知であるため、制限エンドヌクレアーゼのパネルを構成して所望する領域中のＤＮＡを切断することができる。制限エンドヌクレアーゼ消化後に、ＳＡＢＰ結合領域またはＤＡＢＰ結合領域をコードするＤＮＡをそれが核酸プローブとハイブリダイズする能力により、例えばサザンブロット上で同定し、これらのＤＮＡ領域を当技術の専門家によく知られている標準的方法により単離する。Sambrook，他を参照のこと。ポリメラーゼ連鎖反応を使用してＤＡＢＰ、ＳＡＢＰ、ＥＢＬ結合領域ＤＮＡを製造することもできる。ポリメラーゼ連鎖反応技術（ＰＣＲ）を使用してＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域の核酸配列をｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、そしてゲノムライブラリーまたはｃＤＮＡライブラリーから直接増幅させることができる。この過程には図３に示したプライマーが特に好ましい。ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域ＤＮＡの増幅に適したプライマーおよびプローブはＤＮＡ配列の分析から分かる。簡単に述べると、増幅しようとするＤＮＡ領域の２つの３′境界に相補的なオリゴヌクレオチドプライマーが合成される。次に２つのプライマーを用いてポリメラーゼ連鎖反応を行う。PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications．(Innis，M，Gelfand，D.，Sninsky，J. および White，T.，編集)，Academic Press，San Diego（1990）を参照のこと。希望により、プライマーを選択して全ＤＡＢＰ領域を増幅させることまたはＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域の比較的小さいセグメントを増幅させることができる。プローブとして使用するオリゴヌクレオチドは、最初に Beaucage，S.L．および Caruthers，M.H.，1981，Tetrahedron Letts.，22(20):1859-1862 により記載された固相ホスホルアミジン酸トリエステル法に従い、Needham-VanDevanter ，D.R.，他、1984，Nucleic Acids Res.，12:6159-6168 に記載されているように自動合成機を用いて化学的に合成される。オリゴヌクレオチドの精製は、Pear son，J.D．および Regnier，F.E.，1983，J．Chrom.，255:137-149 に記載されているように、ネイティブアクリルアミドゲル電気泳動またはアニオン−交換ＨＰＬＣによって行う。合成オリゴヌクレオチドの配列は Maxam，A.M．および Gilbert，1980，W.，G rossman，L．および Moldave，D.，編集 Academic Press，New York，Methods i n Enzymology，65:499-560 の化学的分解方法を用いて確認することができる。当技術の専門家に既知である他の技術を使用してＳＡＢＰまたはＤＡＢＰ結合領域の全部または一部をコードするＤＮＡを単離してもよい。Sambrook，他を参照のこと。Ｃ.ＤＡＢＰ、ＳＡＢＰおよびＥＢＬ結合領域ポリペプチドの発現結合領域ＤＮＡが単離されそしてクローン化されると、例えば細菌、酵母、昆虫（特にバクロウイルスベクターの使用時）、および哺乳動物細胞の如き組み換え操作された細胞中で所望するポリペプチドを発現させることができる。当技術の専門家はＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域をコードするＤＮＡの発現のために利用できる多数の発現システムを熟知していると思われる。原核細胞または真核細胞中での蛋白質の発現用に知られている種々の方法について詳細に記載するつもりはない。簡単に述べると、ＤＮＡまたはＣＤＮＡをプロモーター（これは構成性または誘導性である）に調節可能に結合させ、その後に発現ベクター中に導入することにより、結合領域をコードする天然または合成核酸の発現が典型的に行われるであろう。ベクターは原核細胞中または真核細胞中での複製および組み込み用に適するはずである。典型的な発現ベクターは転写および翻訳ターミネーター、開始配列、並びに結合領域をコードするＤＮＡの発現の調節に有用なプロモーターを含有する。クローン化された遺伝子の高水準の発現を得るためには、最低でも、転写を指示する強いプロモーター、翻訳開始用のリボソーム結合部位、および転写／翻訳ターミネーターを含有する発現プラスミドを構成することが望ましい。１.原核細胞における発現大腸菌(E．coli)中でのこの目的に適する調節領域の例は、Yanofsky，C.，198 4，J．Bacteriol.，158:1018-1024 に記載されているような大腸菌トリプトファン生合成経路のプロモーターおよびオペレーター領域並びに Herskowitz，I．および Hagen，D.，1980，Ann．Rev．Genet.，14:399-445 により記載されているようなラムダファージ（Ｐ_L）の左方にあるプロモーターである。大腸菌を形質転換させるＤＮＡベクター中へ選択マーカーを含めるのも有用である。そのようなマーカーの例としては、アンピシリン、テトラサイクリン、またはクロラムフェニコールに対する耐性の遺伝子がある。大腸菌中で使用する選択マーカーについて詳しくはSambrook 他を参照のこと。適当な宿主細胞中への導入を可能にするようにベクターを選択する。細菌ベクターは典型的にはプラスミドまたはファージ由来のものである。適当な細菌細胞をファージベクター粒子で感染させるか、露出したファージベクターＤＮＡでトランスフェクションする。プラスミドベクターを使用する場合は、細菌細胞をプラスミドベクターＤＮＡでトランスフェクションする。大腸菌、バシラス種(Bacillus sp.)(Palva，I 他、1093，Gene 22:229-235；M osbach，K．他、Nature，302:543-545)およびサルモネラ(Salmonella)を用いるＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域を発現させるための発現システムを利用できる。大腸菌系が好ましい。原核細胞により製造された結合領域ポリペプチドは必ずしも適切に折りたたまれないかもしれない。大腸菌からの精製中に、発現されたポリペプチドを先ず変性させ、そして次に再生させることができる。これは細菌により製造された蛋白質を例えばグアニジンＨＣＩのようなカオトロピック剤の中に溶解させ、そしてベータ−メルカプトエタノールのような還元剤を用いて全てのシステイン残基を還元することにより行うことができる。ポリペプチドは次に緩慢な透析またはゲル濾過により再生される。米国特許第４，５１１，５０３号。発現された抗原の検出は放射免疫検定、ウエスタンブロット技術または免疫沈澱の如き当技術で既知の方法により行われる。大腸菌からの精製は米国特許第４ ,５１１,５０３号に記載されている方法に従い行うことができる。２.真核細胞におけるＳＡＢＰ、ＤＡＢＰおよびＥＢＬ結合領域の合成酵母、昆虫細胞系および哺乳動物細胞などの種々の真核発現システムが当技術の専門家に知られている。以下に簡単に説明するが、ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ領域もこれらの真核細胞システム中で発現させることができる。ａ.酵母における発現酵母中の異種蛋白質の合成は良く知られており、記載されている。Sherman，F .，他の、Methods in Yeast Genetics，Cold Spring Harbor Laboratory，(1982 )は酵母中での結合領域を製造するために利用できる種々の方法を記載した、高い評価を得ている研究である。酵母中で使用するためのプロモーターの例として、ＧＡＬＩ,１０(Johnson，M .，および Davies，R.W.，1984，Mol．and Cell．Blol.，4:1440-1448)、ＡＤＨ２（Russell，D.，他、1983，J．Biol．Chem.，258:2674-2682）、ＰＨ０５（EM BOJ．6:675-680，1982）、およびＭＦα１〔Herskowitz，I．および Oshinma，Y .，1982，The Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces、（eds．Strath er n，J.N．Jones，E.W.，および Broach，J.R.，Cold Spring Harbor Lab.，Cold Spring Harbor，N.Y.，pp.181-209〕がある。Ｌｅｕ−２、ＵＲＡ−３、Ｔｒｐ −１、およびＨｉｓ−３の如き選択的マーカーを有するマルチコピープラスミドも望ましい。ＹＥｐ６、ＹＥｐ１３、ＹＥｐ４のような多数の酵母発現プラスミドをベクターとして使用することができる。当該遺伝子を種々の酵母ベクター中でプロモーターのいずれかと融合させることができる。上記のプラスミドについては文献中（Botstein，他、1979，Gene，8:17-24；Broach，他、1979，Gene，8:121-133）に充分に記載されている。酵母細胞を形質転換させる際には２つの工程を用いる。１つ目の工程では、まず酵母細胞をジモリアーゼ、リチカーゼまたはグルスラーゼを用いて原形質に転化させ、その後にＤＮＡおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を加える。ＰＥＧ処理した原形質を次に選択的条件下で３％寒天培地の中で再生する。この工程の詳細は J.D．Beggs，1978，Nature(London)，275:104-109；および Hinnen ，A.，他、1978，Proc.，Natl．Acad．Sci．USA，75:1929-1933 に示されている。２つ目の工程は細胞壁の除去を含まない。その代わりに、細胞を塩化または酢酸リチウムおよびＰＥＧで処理し、選択プレートの上に置く（Ito，H.，他、198 3，J．Bact.，153:163-168）。細胞を溶解させ、その溶解物に標準的な蛋白質単離技術を適用することにより、結合領域を酵母から単離することができる。ウェスタンブロット技術または他の標準的な免疫検定技術の放射免疫検定を使用することにより、精製工程の監視を行うことができる。ｂ.哺乳動物および昆虫細胞培養物における発現結合領域の製造用に有用な細胞培養物の例は昆虫または哺乳動物由来の細胞である。哺乳動物細胞懸濁液も使用できるが哺乳動物細胞システムはしばしば単層形の細胞である。哺乳動物細胞系の説明例としてはＶＥＲＯおよびＨｅＬａ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、Ｗ１３８、ＢＨＫ、Ｃｏｓ− ７またはＭＤＣＫ細胞系が挙げられる。以上の通り、宿主細胞を形質転換させるために使用されるベクター、例えばプラスミドは好適には転写を開始させるためのＤＮΛ配列と抗原遺伝子配列の翻訳を調節するための配列を有する。これらの配列は発現調節配列と称される。宿主細胞が昆虫または哺乳動物由来の場合、発現調節配列の実例はＳＶ−４０プロモーター（Science，222:524-527，1983）、ＣＭＶＩ.Ｅ.プロモーター（Proc．N atl．Acad．Sci．81:659-663，1984）またはメタロチオネインプロモーター（Na ture 296:39-42，1982）から得られる。発現調節配列を含有するクローン化ベクターを制限酵素を用いて分割し、必要に応じてまたは所望により寸法調整し当技術で公知の手段によりＳＡＢＰまたはＤＡＢＰポリペプチドをコードするＤＮＡと連結反応させる。酵母と同じように、比較的高級な動物宿主細胞が使用されるときには、既知の哺乳動物遺伝子からのポリアデニル化すなわち転写ターミネーター配列をベクター中に加えることが必要である。ターミネーター配列の例はウシの成長ホルモン遺伝子のポリアデニル化配列である。転写の正確なスプライシングを含んでいてもよい。スプライシング配列の例としてはＳＶ４０からのＶＰＩイントロンがある（Spraque，J．他、1983，J．Virol．45：773-781）。さらに、例えばウシのパピローマウイルス型ベクター中に見られるような宿主細胞中の複製を調節するための遺伝子配列を宿主細胞中に加えてもよい。Saveri a-Campo，M.，1985，”Bovine Papilloma virus DNA a Eukaryotic Cloning Vec tor”in DNA Cloning Vol．II a Practical Approach Ed．D.M．Glover，IRL Pr ess，Arlington，Virginia pp．213-238。宿主細胞は種々の手段による形質転換に受容性であるかまたは受容性にさせられる。ＤＮＡを動物細胞の中に加えるための既知の方法がいくつかある。燐酸カルシウム沈澱、受容細胞とＤＮＡを含有する細菌プロトプラストとの融合、ＤＮＡを含有するリポソームによる受容細胞の処理、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーションおよび細胞中へのＤＮＡの直接マイクロインジェクションがそうである。形質転換細胞は当技術で公知の手段により培養される。Biochemical Methods in Cell Culture and Virology，Kuchler，R.J.，Dowden，Hutchinson and Ross ，Inc.，(1977)。発現したＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドは成長した細胞から懸濁液または単層として単離される。後者は公知の機械的、化学的または酵素的手段により回収される。ｃ.組み換えワクシニアウイルス-またはアデノウイルス-感染細胞における発現組み換え発現システムにおける使用の他に、単離された結合領域ＤＮＡ配列を使用して患者における宿主細胞をトランスフェクションさせるウイルスを形質転換させることもできる。ワクシニアまたはアデノウイルスの如き生存減衰ウイルスは製造価格が安く且つ輸送および投与が容易であるため、ワクチンの便利な代用品である。免疫感作方式で有用なワクシニアベクターおよび方法は、例えば、米国特許第４,７２２,８４８号に記載されており、それはここで引用することにより本明細書の内容として組み入れる。本発明における使用に適したウイルスにはカナリポックスおよびカウポックスウイルス、などのポックスウイルス、ワクシニアウイルス、アルファウイルス、アデノウイルス、並びに他の動物ウイルスが挙げられるが、それらに限定されるものではない。組み換えウイルスは当技術で公知の方法、例えば、相同組み換えを使用してまたは２種のプラスミドを連結反応させて製造することができる。例えば組み換えカナリポックスまたはカウポックスウイルスは、ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードするＤＮＡをプラスミドの中に挿入してそれらを両側でウイルス配列により挟むことによって製造できる。次に、結合領域をコードするＤＮＡを相同組み換えによりウイルスゲノムに挿入する。組み換えアデノウイルスは、例えば、それぞれが約５０％のウイルス配列と赤血球結合領域ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含有する２種のプラスミドを一緒に連結反応させることにより、製造することができる。アルファウイルスの如き組み換えＲＮＡウイルスは当技術で既知の方法を用いてＣＤＮＡ中間体を介して製造することができる。ワクシニアウイルス（例えば、菌株ＷＲ）の場合には、Kaslow，他、Science 252:1310-1313（1991）に記載されているように、結合領域をコードするＤＮＡ配列を伝達ベクターであるｐＴＫｇｐｔ−ＯＦＩＳを用いる相同組み換えを含む多数の方法によりゲノム中に挿入することができる。該文献はここに引用することにより本明細書の内容として組み入れる。あるいは、ＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域をコードするＤＮＡを組み換えワクシニア、例えばｐＧＳ６２、を製造するために設計された他のプラスミドに挿入することもできる（Langford，C.L.，他、1986，Mol．Cell．Biol．6:3191-31 99）。このプラスミドは異なる遺伝子の挿入のためのクローン化部位、挿入された遺伝子の直接的な合成に対するワクシニアのＰ７.５プロモーター、および異なる遺伝子の両端を挟むワクシニアＴＫ遺伝子からなっている。組み換えウイルスの製造の確認は、ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードするＣＤＮＡを使用するＤＮＡハイブリッド形成と発現した結合領域ポリペプチドに特異的な抗体を用いた免疫検出技術により行うことができる。ウイルス原料はＨＥＬＡＳ３スピナー細胞の如き細胞の感染およびウイルス前駆体の回収により製造できる。本発明の組み換えウイルスを使用して例えばハツカネズミまたはヒトなどの哺乳動物における抗−ＳＡＢＰおよび抗−ＤＡＢＰ結合領域抗体を誘発することができる。さらに、組み換えウイルスを使用して宿主細胞を試験管内で感染させることによりＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域を製造し、それらが次にポリペプチドを発現させることもできる（上記の真核細胞中のＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域の発現に関する節を参照のこと）。本発明はまた組み換えウイルスに感染した宿主細胞にも関する。本発明の宿主細胞としてはＢＳＣ−１細胞のような哺乳動物細胞が好ましい。組み換えウイルスに感染した宿主細胞は細胞表面上にＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域を発現させる。さらに、感染細胞の膜抽出物をそれまで未接種の哺乳動物に接種したり追加接種するために使用すると保護抗体が誘発される。Ｄ.ＳＡＢＰ、ＤＡＢＰおよびＥＢＬ結合領域ポリペプチドの精製組み換えＤＮＡ技術により製造される結合領域ポリペプチドを当技術の専門家に公知の標準的技術により精製することができる。組み換え技術により製造された結合領域ポリペプチドは直接的に発現させることもまたは融合蛋白質として発現させることもできる。次に蛋白質を細胞溶解（例えば、音波処理）および親和性クロマトグラフィーの組み合わせにより精製する。融合生成物では、適当な蛋白質分解酵素を用いる融合蛋白質のその後の消化により所望するＳＡＢＰおよびＤＡＢＰ結合領域を放出する。本発明のポリペプチドは、硫酸アンモニウムの如き物質を用いる選択的な沈澱、カラムクロマトグラフィー、免疫精製方法などを含む当技術で公知の標準的方法により実質的な純度まで精製することができる。例えば、ここで引用することにより本明細書の内容となる R．Scopes，Protein Purification：Principles a nd Practice，Springer-Verlag：New York（1982）を参照のこと。Ｅ.蛋白質化学技術による結合領域の製造本発明のポリペプチドは広範囲の方法で合成して製造することができる。例えば、比較的短い寸法のポリペプチドは慣用的技術を用いて溶液中または固体担体上で合成できる。種々の自動合成器が市販されており、既知の方式に従って使用できる。例えば、Stewart および Young，Solid Phase Peptide Synthesis，2d ．ed.，Pierce Chemical Co．（1984）を参照のこと。あるいは、結合領域ポリペプチドを製造するために、精製され単離されたＳＡＢＰ、ＤＡＢＰまたはＥＢＬ族蛋白質を蛋白質分解酵素で処理してもよい。例えば、組み換えＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ蛋白質をこの目的のために使用してよい。次にＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ蛋白質配列を分析してＤＡＢＰおよびＳＡＢＰ結合領域の所望する領域を含有するポリペプチドを製造するために用いる蛋白質分解酵素を選択してもよい。次に蛋白質およびペプチド精製用の標準的技術を用いて所望するポリペプチドを精製する。標準的技術に関しては、ここで引用することにより本明細書の内容となる Methods in Enzymology，"Guide to Protein Puri fication"，M．Deutscher，ed．Vol．182(1990)，619-626頁を参照のこと。Ｆ.核酸およびポリペプチド配列の修飾組み換え結合領域ポリペプチドの製造に使用される宿主細胞をトランスフェクションするために使用されるヌクレオチド配列を標準的技術に従い修飾して種々の所望する性質を有する結合領域ポリペプチドを生成することができる。本発明の結合領域ポリペプチドは当技術の専門家に公知の種々の組み換えＤＮＡ技術を使用して容易に設計および製造することができる。例えば、結合領域ポリペプチドは天然発生配列から主要構造水準におけるアミノ酸挿入、置換、削除などにより変更することができる。これらの修飾を多数組み合わせて使用して最終的な修飾された蛋白質鎖を製造することができる。アミノ酸配列変異体は組み換えポリペプチドの精製および製造の促進を含む種々の目標に留意しながら製造することができる。修飾されたポリペプチドは血漿半減期の修飾、治療効果の向上、および治療使用中の副作用の重さまたは発生の軽減にも有用である。アミノ酸配列変異体は天然では見られないが天然発生ポリペプチドと同じ免疫学的活性を示す、通常は予め決められた変異体である。例えば、一部だけ（一般的には少なくとも約６０〜８０％、典型的には９０〜９５％）の主要構造を含むポリペプチド断片を製造することができる。ワクチンとして使用するためには、遮断抗体の製造を誘発できる少なくとも１つの対掌体が残っている限り、一般的にポリペプチド断片が好ましい。一般的には、結合領域ポリペプチドをコードする配列の修飾は種々の公知の技術、例えば部位−配向された突然変異誘発、により容易に実施することができる〔Giliman および Smith，Gene 8:81-97（1979）並びに Roberts，S．他、Natur e 328:731-734（1987）を参照のこと〕。一般の専門家は多くの突然変異の効果を予測するのが難しいということを認識している。それ故、ほとんどの修飾は所望する特徴に関して適切な検定における日常的なスクリーニングにより決められる。例えば、ポリペプチドの免疫学的性質の変化は適当な競合結合検定により検出することができる。例えばレドックスまたは熱安定性、疎水性、蛋白質分解に対する感受性、または集塊化傾向の如き他の性質の変更も全て標準的技術に従い検定される。Ｇ.診断およびスクリーニング検定本発明のポリペプチドは生物学的サンプル中でのメロゾイトの検出に関する診断用途に使用できる。寄生体の存在は免疫学的結果に基づく数種の良く知られている特異的結合検定を使用して検出できる。（ここで引用することにより本明細書の内容となる、米国特許第４,３６６,２４１号、第４,３７６,１１０号、第４ ,５１７,２８８号、および第４,８３７,１６８号を参照のこと。）例えば、本発明のポリペプチドに対する標識が付けられたモノクローン性抗体を使用して生物学的サンプル中のメロゾイトを検出することができる。あるいは、本発明の標識が付けられたポリペプチドを使用して生物学的サンプル中のＳＡＢＰまたはＤＡＢＰに対する抗体の存在を検出することもできる。診断的免疫検定における一般的工程の論評に関しては、これもここで引用することにより本明細書の内容となる Basic and Clinical Immunology 7th Edition（D．Stites および A．Terr ed ．1991）を参照のこと。さらに、ＳＡＢＰまたはＤＡＢＰと赤血球との間の相互作用を抑制できる抗体または他の化合物を生物学的活性に関して検定することもできる。例えば、ポリペプチドを細胞の表面上で組み換え発現させ、細胞が赤血球と結合する能力を下記の通り測定することができる。あるいは、赤血球とメロゾイトまたはＳＡＢＰとＤＡＢＰとの間の結合を抑制する能力に関してペプチドまたは抗体を試験することができる。無細胞検定を使用して、単離されたダッフィ抗原またはグリコホリンポリペプチドに対するＤＡＢＰまたはＳＡＢＰポリペプチドの結合を測定することもできる。例えば、赤血球蛋白質を固体表面上で固定化させ、標識が付けられたＳＡＢＰまたはＤＡＢＰポリペプチドの結合を測定することができる。多くの検定方式は標識が付けられた検定成分を使用する。標識付けシステムは種々の形状であってよい。標識は当技術で公知の方法に従い検定の所望成分と直接的または間接的に結合される。広範囲の標識を使用することができる。成分は数種の方法のいずれかにより標識付けすることができる。検出の最も一般的な方法は³Ｈ、¹²⁶Ｉ、³⁵Ｓ、¹⁴Ｃ、または³²Ｐ標識付き化合物などを用いるオートラジオグラフィーの使用である。非−放射活性標識には、標識が付けられた抗体、蛍光、化学発光剤、酵素、および標識付けされたリガンドに関する特異的な結合対員として機能する抗体と結合するリガンドが含まれる。標識の選択は、要求される感度、化合物との共役の容易さ、安定性条件、および入手できる装置に依存する。さらに、本発明のポリペプチドを当技術の専門家に公知の、動物モデルを用いて検定することもできる。Ｐファルシパルムに関しては生体内モデルはアオタス種(Aotus sp.)サルまたはチンパンジーを含み、Ｐ.ビバックスに関しては生体内モデルはサイミリ(Saimiri)サルを含む。Ｈ.結合値域ポリペプチドからなる医薬組成物本発明のポリペプチドはマラリアの治療および予防用途において有用である。本発明の医薬組成物は種々の薬品投与システムにおける使用に適する。本発明の使用に適する調合物は Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishin g Company，Philadelphia，PA，17th ed．(1985)に見られ、それはここで引用することにより本明細書の内容となる。薬品投与方法について手短かに知るためには、ここに引用することにより本明細書の内容となる Langerの Science 249:15 27-1533（1990）を参照のこと。本発明のポリペプチドは哺乳動物、特にヒト、に対する投与に有用な製剤およびワクチン組成物において使用できる。ポリペプチドはある種の環境、例えばＰ .ファルシパルムおよびＰ.ビバックスの両者による感染があるような場合には、一緒に投与することができる。したがって、単一医薬組成物を両者の寄生体により引き起こされるマラリアの処置または予防のために使用することができる。組成物は単一投与または連続的投与に適する。連続的に投入する場合には、免疫応答を追加するために初期投与後に接種がなされ、これは一般にブースター接種と称される。本発明の医薬組成物は非経口的、局部的、経口的または局所的投与用に意図される。医薬組成物は非経口的に、例えば静脈内、皮下、皮内、または筋肉内に投与されるのが好ましい。それ故、本発明は許容可能な担体、好ましくは水性担体、中に溶解または懸濁された上記の試剤の溶液を含む非経口的投与用組成物を提供する。水、緩衝水、０.４％食塩水、０.３％グリシン、ヒアルロン酸などの種々の水性担体を使用することができる。これらの組成物は慣用の、公知の殺菌技術により殺菌することができ、または殺菌濾過することもできる。生じた水溶液をそのままで使用するために包装することもできるし、凍結乾燥し、凍結乾燥された調合物を投与前に殺菌性溶液と組み合わせることもできる。組成物は必要に応じて適当な生理学的条件となるまで医薬的に許容可能な例えばｐＨ調節剤や緩衝剤、等張性調節剤、湿潤剤などの助剤物質を含むことができる。例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどをが考えられる。固体組成物用には、慣用の無毒の固体担体を使用することができ、それらには製剤等級のマンニトール、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ナトリウムサッカリン、滑石、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが含まれる。経口的投与には、通常使用される賦形剤、例えば以上で挙げられた担体のいずれかおよび一般的に１０〜９５％のそしてより好ましくは２５％〜７５％の濃度の活性成分を加えることにより、医薬的に許容可能な無毒の組成物が製造される。アエロゾル投与用には、ポリペプチドは微細分割された形態で表面活性剤および噴射剤と一緒に供給されるのが好ましい。表面活性剤はもちろん無毒でなければならず、噴射剤中に可溶性であるのが好ましい。そのようなもものの代表例としては炭素数が６〜２２の脂肪酸、例えばカプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン酸およびオレイン酸と脂肪族多価アルコールまたはその環式無水物とのエステルまたは部分エステルである。混合エステル、例えば混合または天然グリセリドも使用できる。希望により例えば鼻内投与用のレシチンの如き担体を含むこともある。ある態様では、マラリア感染患者はＳＡＢＰまたはＤＡＢＰポリペプチドまたは赤血球表面へのプラスモジウムのメロゾイトおよびシゾントの結合を防止する他の特異的遮断剤（例えばモノクローン性抗体）で処置することができる。患者への投与量は投与するもの、患者の状態および投与方法により変わる。治療用途では、すでにマラリアに罹っている患者には、赤血球による寄生体の蔓延を阻止し、疾病およびその合併症の兆候を治療するか少なくとも部分的に緩和するのに十分な量の組成物が投与される。これを行うために適する量は「治療的に有効な薬用量」と定義される。この使用のために有効な量は疾病の重篤さ並びに患者の体重および一般的状態に依存するが、一般的には７０ｋｇの患者に対しては１日当たり約１ｍｇ〜約５ｇｍの範囲、好ましくは１日当たり約１００ｍｇである。あるいは、本発明のポリペプチドをワクチンとして予防的に使用することもできる。本発明のワクチンは活性成分として免疫学的に有効な量の結合領域ポリペプチドまたはここで記載されているような組み換えウイルスを含有する。免疫応答には、抗体の発生、本発明のＳＡＢＰ、ＤＡＢＰまたはＥＢＬ配列によりコードされたポリペプチドから誘導されたペプチドを表示する細胞に対する細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化、または当技術で公知の他の機構が含まれる。例えば、免疫応答に関しては、Raven press New York から発行された Paulの Fun damental Immunology Second Edition（ここで引用されることにより本明細書の内容となる）を参照のこと。有用な担体は当技術で公知であり、それらには例えば、チログロブリン、ヒト血清アルブミンのようなアルブミン類、破傷風毒素、ポリ(Ｄ−リシン：Ｄ−グルタミン酸)のようなポリアミノ酸、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルスコア蛋白質、Ｂ型肝炎ウイルス組み換えワクチンが含まれる。ワクチンはまた生理学的に耐性である（許容可能な）希釈剤、例えば水、燐酸塩緩衝食塩水、または食塩水を含有することもでき、そしてさらに典型的には助剤も含む。助剤、例えば不完全フロイントアジュバント、燐酸アルミニウム、水酸化アルミニウム、または明礬は当技術で公知の物質である。ＳＡＢＰまたはＤＡＢＰ結合領域およびＥＢＬ遺伝子群モチーフをコードするＤＮＡまたはＲＮＡを患者に加えて核酸がコードするポリペプチドに対する免疫応答を得ることもできる。核酸がコードする遺伝子の発現を生ずるための核酸の使用を記載しており、ここで引用することにより本明細書の内容となる Wolff 他、Science 247:1465-1468（1990）を参照されたい。本発明のポリペプチド、核酸またはウイルスを含有するワクチン組成物が患者に投与されるとポリペプチドに対する保護免疫応答を誘発する。「保護免疫応答」とは赤血球を介した寄生体の蔓延を防止または抑制しその結果として疾病およびその合併症を少なくとも部分的に予防するものである。これを行うのに十分な量は「免疫学的に有効な量」と定義される。この使用に有効な量は、組成物、投与方法、患者の体重および一般的な健康状態、並びに処方する医師の判断に依存する。ペプチド組成物に関しては、初期免疫感作用（すなわち治療または予防投与用）の一般的範囲は７０ｋｇの患者に対して約１００μｇ〜約１ｇｍのペプチドであり、その後に、例えば患者血液中の寄生体水準を測定することにより、患者の応答および状態に応じて数週間〜数カ月間にわたる追加療法に従う約１００ μｇ〜約１ｇｍのポリペプチドが続く。核酸に関しては、典型的には体重７０ｋｇの患者に３０〜１０００μｇの核酸が注入され、より典型的には約５０〜１５０ μｇの核酸が注入され、その後に適宜追加量が注入される。下記の実施例は説明のために示されたものであり、これに限定されるものではない。実施例赤血球用の結合値域としてのＳＡＢＰおよびＤＡＢＰのアミノ−末端のシステインに富んだ領域の同定１.Ｃｏｓ細胞の表面上のＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドの発現ＳＡＢＰ蛋白質のアミノ−末端のシステインに富んだ領域がシアル酸結合領域であることを示すために、蛋白質のこの領域を試験管内で哺乳動物のＣｏｓ細胞の表面上で発現させた。このＤＮＡ配列はＳＡＢＰＤＮＡ配列（ＳＥＱＩＤＮｏ３）の位置１から位置１８４８までである。ポリメラーゼ連鎖反応技術（ＰＣＲ）を使用してＳＡＢＰＤＮＡのこの領域をクローン化された遺伝子から直接的に増幅させた。ｐＲＥ４ベクター中へのＰＣＲで増幅された領域の挿入を促進させるためにＰｖｕｌｌまたはＡｐａｌに関する制限エンドヌクレアーゼ部位に相当する配列をＰＣＲ増幅において使用されたプローブのオリゴヌクレオチド配列の中に加えた（以下を参照のこと）。特異的なオリゴヌクレオチドであるが合成された。これらのオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用してＳＡＢＰ蛋白質のシステインに富んだアミノ末端領域をコードするＤＮＡ配列の領域をＰＣＲ増幅した。ＰＣＲ条件は Saiki，他、Science 239：487-491（1988）に記載されている標準に基づいた。単一オープンリーディングフレーム片としてスプライシングされそして再クローン化されたＳＡＢＰをコードする遺伝子のクローン化された断片から鋳型ＤＮＡが供給された。Ｃｏｓ細胞中での発現用に使用されるベクターであるｐＲＥ４は図１に示されている。このベクターはＳＶ４０複製源、アンピシリン耐性マーカーおよびラウス肉腫ウイルスの末端反復配列（ＲＳＶＬＴＲ）の下流でクローン化された単純ヘルペスウイルス糖蛋白質Ｄ遺伝子（ＨＳＶｇｌｙｄ）を有する。ＨＳＶｇｌｙｄ遺伝子の細胞外領域の一部はＨＳＶｇｌｙｄ中のＰｖｕｌｌおよびＡｐａｌ部位を使用して活性化された。上記の如く、ＰＣＲオリゴヌクレオチドプライマーはＰｖｕｌｌまたはＡｐａｌ制限部位を含有していた。以上で得られたＰＣＲで増幅されたＤＮＡ断片を制限酵素ＰｖｕｌｌおよびＡｐａｌを用いて消化しそしてベクターｐＲＥ４のＰｖｕｌｌおよびＡｐａｌ部位の中にクローン化させた。これらの構造体を、Ｎ−末端においてＨＳＶｇｌｙｄのシグナル配列を用いてそしてＣ−末端においてＨＳＶｇｌｙｄのトランスメンブランおよび細胞質領域を用いてＳＡＢＰ蛋白質の領域をキメラ蛋白質として発現させるために設計した。ＨＳＶｇｌｙｄのシグナル配列はこれらのキメラ蛋白質をＣｏｓ細胞の表面に標的設定しそしてＨＳＶｇｌｙｄのトランスメンブラン断片がこれらのキメラ蛋白質をＣｏｓ細胞表面に固定する。哺乳動物のＣｏｓ細胞をＰＣＲで増幅されたＳＡＢＰＤＮＡ領域を含有するｐＲＥ４構造体を用いて、標準的技術に従う燐酸カルシウム沈澱により、トランスフェクションさせた。２.Ｃｏｓ細胞の表面上のＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドの発現ＤＡＢＰ蛋白質のアミノ−末端のシステインに富んだ領域が結合領域であることを示すために、この領域をＣｏｓ細胞の表面上で発現させた。位置１−９７５からのＤＮＡ配列のこの領域を最初にＰＣＲで増幅させた（ＳＥＱＩＤＮｏ１）。上記の通り、増幅されたＤＮＡのｐＲＥ４ベクター中へのその後の挿入を促進させるためにＰｖｕｌｌまたはＡｐａｌ用の制限エンドヌクレアーゼ部位に相当する配列をＰＣＲ増幅用に使用されるオリゴヌクレオチドプローブの中に加えた。オリゴヌクレオチドであるが合成された。これらのオリゴヌクレオチドをプライマーとして使用して、上記と同じ条件を使用して、クローン化されたＤＡＢＰ遺伝子から直接ＤＡＢＰ蛋白質のシステインに富んだアミノ−末端領域をコードするＤＡＢＰＤＮＡ配列の領域を増幅させた。Ｃｏｓ細胞中のＳＡＢＰ領域の発現に関する節において以上で記載されている同一のｐＲＥ４ベクターもＤＡＢＰＤＮＡ領域用のベクターとして使用された。３.赤血球を用いる結合研究ヒトの赤血球を結合させるそれらの能力を示すために、ＤＡＢＰおよびＳＡＢＰからの結合領域を発現させるトランスフェクションされたＣｏｓ細胞を赤血球と共に２時間にわたり３７℃において培養培地（ＤＭＥＭ／１０％ＦＢＳ）の中で培養した。非−付着性の赤血球を燐酸塩−緩衝食塩水を用いる５回の洗浄で除去し、そして結合された赤血球が光顕微鏡により観察された。それらの表面上でアミノ末端のシステインに富んだＳＡＢＰポリペプチドを発現するＣｏｓ細胞は未処理のヒトの赤血球を結合したが、ノイラミニダーゼで処理した赤血球、すなわちそれらの表面上にシアル酸残基を欠いた赤血球を結合しなかった（データは示されていない）。それらの表面上でＳＡＢＰ蛋白質の他の領域を発現するＣｏｓ細胞はヒトの赤血球を結合しなかった（データは示されていない）。これらの結果はＳＡＢＰのアミノ−末端のシステインに富んだ領域を赤血球結合領域として同定し、そしてこれらの領域を発現させるＣｏｓ細胞とヒトの赤血球との結合が特異的であることを示していた。さらに、赤血球に対する発現領域の結合は赤血球に対する結合が確実なＳＡＢＰ−１７５分子に関して見られる結合パターンと同一である。同様に、それらの表面上でＤＡＢＰのアミノ−末端のシステインに富んだ領域を発現するＣｏｓ細胞はダッフィ−陽性のヒトの赤血球を結合したが、ダッフィ −陰性のヒトの赤血球、すなわちダッフィ血液型抗原を欠いた赤血球を結合しなかった（データは示されていない）。それらの表面上でＤＡＢＰ蛋白質の他の領域を発現するＣｏｓ細胞はヒトの赤血球を結合しなかった（データは示されていない）。これらの結果はＤＡＢＰのアミノ−末端のシステインに富んだ領域を赤血球結合領域であると同定しそしてＣｏｓ細胞の結合が特異的であることを示していた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ミラー，ルイス，エイチ. アメリカ合衆国，20814 メリーランド, ベセスダ，ナンバー 609，ホットリーパークテラス 5450番地 (72)発明者ピーターソン，デビッド，エス. アメリカ合衆国，20851 メリーランド, ロックビル，エドモンズトンドライブ 315番地 (72)発明者ス，シン−ジュアンアメリカ合衆国，20852 メリーランド, ロックビル，ロックビルパイク 1001番地，アパートメント 1122 (72)発明者ウィレムズ，トスマス，イー. アメリカ合衆国，20852 メリーランド, ロックビル，ウィルマートストリート 1715番地

Claims

【特許請求の範囲】１.単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む組成物。２.前記ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドが約２００〜約３００個の間のアミノ酸残基を含む、請求の範囲第１項の組成物。３.前記ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドがＳＥＱＩＤＮｏ.２のアミノ酸配列の残基１〜約３２５を有する、請求の範囲第１項の組成物。４.前記ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドが組み換えで製造される、請求の範囲第１項の組成物。５.医薬的に許容可能な担体および生物中でプラスモジウム・ビバックスのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含んでなる医薬組成物。６.さらに、生物中でプラスモジウム・ファルシパルムのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドも含む、請求の範囲第５項の組成物。７.単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む組成物。８.前記ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドが約２００〜約６００個のアミノ酸残基を含む、請求の範囲第７項の組成物。９.前記ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドがＳＥＱＩＤＮｏ.４のアミノ酸配列の残基１〜約６１６を有する、請求の範囲第７項の組成物。１０.前記ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドが組み換えで製造される、請求の範囲第７項の組成物。１１.医薬的に許容可能な担体および生物中でプラスモジウム・ファルシパルムのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドを含む医薬組成物。１２.さらに、生物中でプラスモジウム・ビバックスのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発するのに十分な量の単離されたＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドも含む、請求の範囲第１１項の組成物。１３.ＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む組成物。１４.前記ポリヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮｏ.２のアミノ酸配列の残基１〜約３２５を有するＤＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードする、請求の範囲第１３項の組成物。１５.請求の範囲第１３項に記載のポリヌクレオチドを含む組み換え細胞。１６.ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドを含む組成物。１７.前記ポリヌクレオチドがＳＥＱＩＤＮｏ.４のアミノ酸配列の残基１〜約６１６を有するＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドをコードする、請求の範囲第１６項の組成物。１８.請求の範囲第１６項に記載のポリヌクレオチドを含む組み換え細胞。１９.医薬的に許容可能な担体並びにＤＡＢＰ結合領域ポリペプチド、ＳＡＢＰ結合領域ポリペプチドおよびそれらの組み合わせよりなる群から選択される単離されたポリペプチドを含む免疫学的に有効な量の医薬組成物を患者に投与することを含む、患者においてプラスモジウムのメロゾイトに対する保護免疫応答を誘発する方法。２０.前記患者がヒトである、請求の範囲第１９項の方法。２１.ＥＢＬ遺伝子群のヌクレオチド配列を含む組成物。２２.ｅｂｌ−ｅ１遺伝子のヌクレオチド配列を含む組成物。２３.前記ｅｂｌ−ｅ１遺伝子がＳＥＱＩＤＮｏ.５のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２２項の組成物。２４.Ｅ３１ａ遺伝子のヌクレオチド配列を含む組成物。２５.前記Ｅ３１ａ遺伝子がＳＥＱＩＤＮｏ.７のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２４項の組成物。２６.Ｐｒｏｊ３遺伝子のヌクレオチド配列を含む組成物。２７.前記Ｐｒｏｊ３遺伝子がＳＥＱＩＤＮｏ.１１のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２６項の組成物。２８.ＥＢＬ−ｅ２遺伝子のヌクレオチド配列を含む組成物。２９.前記ＥＢＬ−ｅ２遺伝子がＳＥＱＩＤＮｏ.９のヌクレオチド配列を有する、請求の範囲第２８項の組成物。