JPH09318632A - ラテックス比濁免疫測定法 - Google Patents
ラテックス比濁免疫測定法Info
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- JPH09318632A JPH09318632A JP13526596A JP13526596A JPH09318632A JP H09318632 A JPH09318632 A JP H09318632A JP 13526596 A JP13526596 A JP 13526596A JP 13526596 A JP13526596 A JP 13526596A JP H09318632 A JPH09318632 A JP H09318632A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ラテックス免疫凝集反応に基づいて、測定す
べき抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合であ
っても、検体を希釈することなく原液のままで定量可能
なラテックス比濁免疫測定法を提供する。 【解決手段】 検体と検体中の測定すべき抗原又は抗体
に対する抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液とを
混合して混合液とし、この混合液中に二価アルコールの
群から選ばれる、少なくとも一種の有機溶媒を存在させ
た抗原抗体反応によるラテックス粒子の凝集によって生
じる、吸光度の変化量を測定することにより、検体中の
抗原又は抗体の濃度を測定する免疫測定法。
べき抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合であ
っても、検体を希釈することなく原液のままで定量可能
なラテックス比濁免疫測定法を提供する。 【解決手段】 検体と検体中の測定すべき抗原又は抗体
に対する抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液とを
混合して混合液とし、この混合液中に二価アルコールの
群から選ばれる、少なくとも一種の有機溶媒を存在させ
た抗原抗体反応によるラテックス粒子の凝集によって生
じる、吸光度の変化量を測定することにより、検体中の
抗原又は抗体の濃度を測定する免疫測定法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、検体中の抗原又は
抗体を定量するラテックス凝集法による免疫測定法及び
免疫測定用試薬に関する。
抗体を定量するラテックス凝集法による免疫測定法及び
免疫測定用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、臨床検査の分野において検体中の
抗原又は抗体を測定する免疫測定法として、検出感度が
高く、測定方法が簡単なラテックス比濁免疫測定法が盛
んに行われている。
抗原又は抗体を測定する免疫測定法として、検出感度が
高く、測定方法が簡単なラテックス比濁免疫測定法が盛
んに行われている。
【０００３】このラテックス比濁免疫測定法では、一般
的には検体中の測定すべき抗原又は抗体に対する抗原又
は抗体を感作したポリスチレンラテックス粒子の懸濁液
と検体が混合される。検体中の抗原又は抗体と抗体又は
抗原を感作したラテックス粒子との抗原抗体反応によっ
てラテックス粒子が凝集し濁りが発生する。この濁度
は、検体中の抗原又は抗体の濃度に比例するので、この
濁度を測定することによって検体中の抗原又は抗体を定
量することができ、濁度の測定は試料混合液の吸光度又
は透過率を分光光度計によって測定することで簡単に行
うことができる。この方法は、測定方法が簡単で、ラジ
オアイソトープ法や酵素免疫測定法のような特殊な設備
や専用分析装置を必要としないので広く検査室で採用さ
れている。
的には検体中の測定すべき抗原又は抗体に対する抗原又
は抗体を感作したポリスチレンラテックス粒子の懸濁液
と検体が混合される。検体中の抗原又は抗体と抗体又は
抗原を感作したラテックス粒子との抗原抗体反応によっ
てラテックス粒子が凝集し濁りが発生する。この濁度
は、検体中の抗原又は抗体の濃度に比例するので、この
濁度を測定することによって検体中の抗原又は抗体を定
量することができ、濁度の測定は試料混合液の吸光度又
は透過率を分光光度計によって測定することで簡単に行
うことができる。この方法は、測定方法が簡単で、ラジ
オアイソトープ法や酵素免疫測定法のような特殊な設備
や専用分析装置を必要としないので広く検査室で採用さ
れている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかし、検体中の高濃
度に含まれる抗原又は抗体を従来のラテックス比濁免疫
測定によって定量する場合には、予め検体を希釈し、こ
の希釈検体中の抗原又は抗体を定量する必要がある。検
体を希釈しないでそのまま測定に用いると、検体中の測
定すべき抗原又は抗体の過剰による地帯現象が起こり、
ラテックス粒子の凝集によって生じる濁度と検体中の抗
原又は抗体の濃度との比例関係がなくなり、逆に抗原又
は抗体の濃度に反比例してラテックス粒子の凝集によっ
て生じる濁度が減少する。そのため、既知濃度の標準物
質で作成した濃度と濁度が比例関係を示す検量線から地
帯現象領域の検体中の測定すべき抗原又は抗体の濃度を
算出すると、実際の濃度よりも低値となって診断におけ
る誤判定の原因となる。
度に含まれる抗原又は抗体を従来のラテックス比濁免疫
測定によって定量する場合には、予め検体を希釈し、こ
の希釈検体中の抗原又は抗体を定量する必要がある。検
体を希釈しないでそのまま測定に用いると、検体中の測
定すべき抗原又は抗体の過剰による地帯現象が起こり、
ラテックス粒子の凝集によって生じる濁度と検体中の抗
原又は抗体の濃度との比例関係がなくなり、逆に抗原又
は抗体の濃度に反比例してラテックス粒子の凝集によっ
て生じる濁度が減少する。そのため、既知濃度の標準物
質で作成した濃度と濁度が比例関係を示す検量線から地
帯現象領域の検体中の測定すべき抗原又は抗体の濃度を
算出すると、実際の濃度よりも低値となって診断におけ
る誤判定の原因となる。
【０００５】このように従来の方法では、測定すべき抗
原又は抗体が高濃度に含まれる場合には、検体原液のま
までは正確な定量が不可能なために、予め検体を希釈す
る必要がある。そのために、例えば、検体中に比較的高
濃度に含まれるＣ反応性タンパク質等を定量する場合に
は、検体を希釈して用いなければならず、大きな病院等
において、検体数が数百、数千にも上る場合があり、こ
れら全てを正確に希釈することは非常に時間と労力を要
する仕事である。
原又は抗体が高濃度に含まれる場合には、検体原液のま
までは正確な定量が不可能なために、予め検体を希釈す
る必要がある。そのために、例えば、検体中に比較的高
濃度に含まれるＣ反応性タンパク質等を定量する場合に
は、検体を希釈して用いなければならず、大きな病院等
において、検体数が数百、数千にも上る場合があり、こ
れら全てを正確に希釈することは非常に時間と労力を要
する仕事である。
【０００６】そこで、この問題点を解決する方法とし
て、検体と抗原又は抗体を結合したラテックス粒子との
混合液中に、該混合液の全量に対して９〜３０（ｖ／ｖ
％）のアミノ酸を存在せしめるラテックス凝集法による
免疫定量法「特公平６−１７９１２号」が開示されてい
る。しかし、この発明を実施するには、高価なアミノ酸
を高濃度で用いるため、試薬コストが高価となることか
ら、新たな問題点を付随することになる。
て、検体と抗原又は抗体を結合したラテックス粒子との
混合液中に、該混合液の全量に対して９〜３０（ｖ／ｖ
％）のアミノ酸を存在せしめるラテックス凝集法による
免疫定量法「特公平６−１７９１２号」が開示されてい
る。しかし、この発明を実施するには、高価なアミノ酸
を高濃度で用いるため、試薬コストが高価となることか
ら、新たな問題点を付随することになる。
【０００７】本発明の目的は、測定すべき抗原又は抗体
が、検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることが可能なラテ
ックス比濁免疫測定法を提供することである。本発明者
らは、上記問題を解決するため、鋭意研究を重ねた結
果、ラテックス懸濁液と検体との混合液中に二価アルコ
ールを存在させることによって、測定すべき抗原又は抗
体が検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることが可能である
事実を見いだし、本発明を完成するに至った。
が、検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることが可能なラテ
ックス比濁免疫測定法を提供することである。本発明者
らは、上記問題を解決するため、鋭意研究を重ねた結
果、ラテックス懸濁液と検体との混合液中に二価アルコ
ールを存在させることによって、測定すべき抗原又は抗
体が検体中に高濃度に含まれる場合であっても、検体を
希釈することなく原液のままで用いることが可能である
事実を見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】従って、本発明は、検体
中の測定すべき抗原又は抗体に対する抗体又は抗原を感
作したラテックス懸濁液と前記検体とを混合し、ラテッ
クス凝集反応によって発生した濁度を測定して検体中の
抗原又は抗体を定量するラテックス比濁免疫測定法にお
いて、前記検体と前記懸濁液との混合液中に二価アルコ
ールを存在せしめることを特徴とする免疫測定法、に関
する。
中の測定すべき抗原又は抗体に対する抗体又は抗原を感
作したラテックス懸濁液と前記検体とを混合し、ラテッ
クス凝集反応によって発生した濁度を測定して検体中の
抗原又は抗体を定量するラテックス比濁免疫測定法にお
いて、前記検体と前記懸濁液との混合液中に二価アルコ
ールを存在せしめることを特徴とする免疫測定法、に関
する。
【０００９】更に、本発明は、検体中の測定すべき抗原
又は抗体に対する抗体又は抗原を感作したラテックス懸
濁液と前記検体とを混合し、ラテックス凝集反応によっ
て発生した濁度を測定して検体中の抗原又は抗体を定量
するラテックス比濁免疫測定用試薬において、二価のア
ルコールを緩衝液あるいはラテックス懸濁液のどちらか
一方あるいは両方に含有することを特徴とするラテック
ス比濁免疫測定用試薬、にも関する。
又は抗体に対する抗体又は抗原を感作したラテックス懸
濁液と前記検体とを混合し、ラテックス凝集反応によっ
て発生した濁度を測定して検体中の抗原又は抗体を定量
するラテックス比濁免疫測定用試薬において、二価のア
ルコールを緩衝液あるいはラテックス懸濁液のどちらか
一方あるいは両方に含有することを特徴とするラテック
ス比濁免疫測定用試薬、にも関する。
【００１０】上述のように、本発明の方法は、測定すべ
き抗原又は抗体を含む検体と、該抗原又は抗体に対する
抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液とを混合した
混合液中において、二価アルコールを存在させることを
特徴とする。本発明の方法に用いられる二価アルコール
は、物性的にはナトリウムＤ線（λ＝５８９．３ｎｍ）
による屈折率が、１．４２以上の二価アルコールを使用
することができる。具体的には、エチレングリコール、
ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロ
ピレングリコール、トリメチレングリコール、ブタンジ
オール、１．５−ペンタンジオール及びヘキシレングリ
コールである。これらの単独あるいは２種類以上を組み
合わせて用いることができる。これらの二価アルコール
のうち、ジエチレングリコール、プロピレングリコール
及びトリメチレングリコールが好適に用いられる。
き抗原又は抗体を含む検体と、該抗原又は抗体に対する
抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液とを混合した
混合液中において、二価アルコールを存在させることを
特徴とする。本発明の方法に用いられる二価アルコール
は、物性的にはナトリウムＤ線（λ＝５８９．３ｎｍ）
による屈折率が、１．４２以上の二価アルコールを使用
することができる。具体的には、エチレングリコール、
ジエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロ
ピレングリコール、トリメチレングリコール、ブタンジ
オール、１．５−ペンタンジオール及びヘキシレングリ
コールである。これらの単独あるいは２種類以上を組み
合わせて用いることができる。これらの二価アルコール
のうち、ジエチレングリコール、プロピレングリコール
及びトリメチレングリコールが好適に用いられる。
【００１１】上記二価アルコールの単独あるいは２種類
以上組み合わせたものを、免疫反応の結果を光学的に測
定する際にその反応系に存在させればよい。ラテックス
懸濁液と検体との混合液中の二価アルコールの終濃度
は、１０〜８０ｖ／ｖ％である。好ましくは、１０〜６
０ｖ／ｖ％である。測定すべき抗原又は抗体の種類や含
有量、ラテックス粒径や濃度、更には使用する抗体の力
価等によって、前記濃度範囲内で適宜変更することがで
きる。例えば、Ｃ反応性タンパク質のように、検体中に
数ｍｇ／ｄＬから数十ｍｇ／ｄＬ含まれるものでは、二
価アルコールをその反応系に２０〜４０ｖ／ｖ％存在さ
せれば良い。
以上組み合わせたものを、免疫反応の結果を光学的に測
定する際にその反応系に存在させればよい。ラテックス
懸濁液と検体との混合液中の二価アルコールの終濃度
は、１０〜８０ｖ／ｖ％である。好ましくは、１０〜６
０ｖ／ｖ％である。測定すべき抗原又は抗体の種類や含
有量、ラテックス粒径や濃度、更には使用する抗体の力
価等によって、前記濃度範囲内で適宜変更することがで
きる。例えば、Ｃ反応性タンパク質のように、検体中に
数ｍｇ／ｄＬから数十ｍｇ／ｄＬ含まれるものでは、二
価アルコールをその反応系に２０〜４０ｖ／ｖ％存在さ
せれば良い。
【００１２】二価アルコールの濃度が１０ｖ／ｖ％未満
では、Ｍｉｅ理論に従って検体とラテックス懸濁液との
混合液中におけるラテックス粒子の相対屈折率の低下に
よる５分間の吸光度変化量の低下が見られるだけで地帯
現象の解消は見られず好ましくない。また、８０ｖ／ｖ
％を越えると検体とラテックス懸濁液との混合液の粘性
が大きくなることで、測定精度が悪くなり正確な定量が
不可能となるため好ましくない。
では、Ｍｉｅ理論に従って検体とラテックス懸濁液との
混合液中におけるラテックス粒子の相対屈折率の低下に
よる５分間の吸光度変化量の低下が見られるだけで地帯
現象の解消は見られず好ましくない。また、８０ｖ／ｖ
％を越えると検体とラテックス懸濁液との混合液の粘性
が大きくなることで、測定精度が悪くなり正確な定量が
不可能となるため好ましくない。
【００１３】本発明方法は、検体と抗原あるいは抗体を
感作したラテックスの懸濁液を接触させ、免疫反応によ
って生じる濁りの変化を光学的（例えば、波長３００ｎ
ｍ〜８００ｎｍにおける吸光度を測定する）に測定する
反応系に適用される。この時、必要に応じて検体を緩衝
液で希釈・処理（例えば、検体由来の濁りを予め消去す
る）する行程があっても構わない。一般的に、試薬キッ
トは緩衝液とラテックス懸濁液の２試薬から構成されて
おり、二価アルコールは緩衝液又はラテックス懸濁液の
どちらかに添加して用いても、緩衝液及びラテックス懸
濁液の両方に添加して用いてもよい。
感作したラテックスの懸濁液を接触させ、免疫反応によ
って生じる濁りの変化を光学的（例えば、波長３００ｎ
ｍ〜８００ｎｍにおける吸光度を測定する）に測定する
反応系に適用される。この時、必要に応じて検体を緩衝
液で希釈・処理（例えば、検体由来の濁りを予め消去す
る）する行程があっても構わない。一般的に、試薬キッ
トは緩衝液とラテックス懸濁液の２試薬から構成されて
おり、二価アルコールは緩衝液又はラテックス懸濁液の
どちらかに添加して用いても、緩衝液及びラテックス懸
濁液の両方に添加して用いてもよい。
【００１４】本発明の方法の特徴は、検体とラテックス
懸濁液との混合液中に所定濃度の二価アルコールを存在
させることであり、その他の事項、例えば用いられるラ
テックス粒子の粒径やその他の性質、ラテックス粒子の
濃度、ラテックス粒子への抗原又は抗体の結合方法、ラ
テックス粒子の凝集によって発生する濁度の測定方法等
は、本発明にとって何ら特徴的なものではなく、従来の
ラテックス比濁免疫測定法に用いられている全てのもの
を用いることが可能である。本発明における検体とは、
任意の方法により患者などから得られた生体液試料であ
り、具体的には、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、
糞便、細胞抽出液等である。
懸濁液との混合液中に所定濃度の二価アルコールを存在
させることであり、その他の事項、例えば用いられるラ
テックス粒子の粒径やその他の性質、ラテックス粒子の
濃度、ラテックス粒子への抗原又は抗体の結合方法、ラ
テックス粒子の凝集によって発生する濁度の測定方法等
は、本発明にとって何ら特徴的なものではなく、従来の
ラテックス比濁免疫測定法に用いられている全てのもの
を用いることが可能である。本発明における検体とは、
任意の方法により患者などから得られた生体液試料であ
り、具体的には、血液、血清、血漿、尿、髄液、唾液、
糞便、細胞抽出液等である。
【００１５】本発明における抗原または抗体とは、検体
中に一般に含まれている成分であれば特に制限されない
が、例えば、各種タンパク質、多糖類、脂質等が挙げら
れる。より詳細には、ＨＢｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＩＶ
−１抗体、ＨＩＶ−２抗体、ＨＴＬＶ−１抗体、トレポ
ネーマ抗体等の感染症関連マーカー、ＡＦＰ、ＣＲＰ、
ＣＥＡ等の腫瘍関連抗原、プラスミノーゲン、アンチト
ロンビン−III 、Ｄ−ダイマー、ＴＡＴ、ＰＰＩ等の凝
固線溶マーカー、ホルモン等の抗てんかん薬及びジゴキ
シン等の各種薬剤等を挙げることができる。抗体として
は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のど
ちらを用いても良い。
中に一般に含まれている成分であれば特に制限されない
が、例えば、各種タンパク質、多糖類、脂質等が挙げら
れる。より詳細には、ＨＢｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＩＶ
−１抗体、ＨＩＶ−２抗体、ＨＴＬＶ−１抗体、トレポ
ネーマ抗体等の感染症関連マーカー、ＡＦＰ、ＣＲＰ、
ＣＥＡ等の腫瘍関連抗原、プラスミノーゲン、アンチト
ロンビン−III 、Ｄ−ダイマー、ＴＡＴ、ＰＰＩ等の凝
固線溶マーカー、ホルモン等の抗てんかん薬及びジゴキ
シン等の各種薬剤等を挙げることができる。抗体として
は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のど
ちらを用いても良い。
【００１６】本発明におけるラテックスは、従来公知の
ポリスチレン等の合成高分子粒子であり、粒径は０．０
５〜１．０μｍ、好ましくは０．０５〜０．５μｍのも
のを用いることができる。本発明におけるラテックス懸
濁液は、公知の方法によって得た抗体（ポリクロナール
抗体またはモノクロナール抗体）を公知の手段によって
ラテックスに感作（物理吸着法または化学結合法）した
ラテックス粒子を０．０５〜１０％の濃度になるよう生
理食塩水や精製水、またはｐＨ６〜９の緩衝液に懸濁し
た液である。
ポリスチレン等の合成高分子粒子であり、粒径は０．０
５〜１．０μｍ、好ましくは０．０５〜０．５μｍのも
のを用いることができる。本発明におけるラテックス懸
濁液は、公知の方法によって得た抗体（ポリクロナール
抗体またはモノクロナール抗体）を公知の手段によって
ラテックスに感作（物理吸着法または化学結合法）した
ラテックス粒子を０．０５〜１０％の濃度になるよう生
理食塩水や精製水、またはｐＨ６〜９の緩衝液に懸濁し
た液である。
【００１７】また、ラテックス懸濁用の緩衝液とは別の
希釈・処理用の緩衝液については、ｐＨ６〜９の緩衝能
を有するものであれば特に限定されない。前記のラテッ
クス懸濁液用の緩衝液と合わせ、リン酸緩衝液、トリス
緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液やＰＩＰＥＳ緩衝液等のグッ
ド緩衝液等の従来公知の緩衝液を用いることができる。
必要に応じて、緩衝液には、安定化剤（糖類、キレート
剤、アジ化物等）、検体由来の濁りを消去するための各
種界面活性剤や脂質分解酵素、免疫反応による凝集を促
進するための添加剤（界面活性剤等）を含ませても良
い。
希釈・処理用の緩衝液については、ｐＨ６〜９の緩衝能
を有するものであれば特に限定されない。前記のラテッ
クス懸濁液用の緩衝液と合わせ、リン酸緩衝液、トリス
緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液やＰＩＰＥＳ緩衝液等のグッ
ド緩衝液等の従来公知の緩衝液を用いることができる。
必要に応じて、緩衝液には、安定化剤（糖類、キレート
剤、アジ化物等）、検体由来の濁りを消去するための各
種界面活性剤や脂質分解酵素、免疫反応による凝集を促
進するための添加剤（界面活性剤等）を含ませても良
い。
【００１８】
【実施例】以下に、実施例により本発明をより詳細に説
明するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。実施例１： 濃度０〜５４（ｍｇ／ｄｌ）のＣ反応性タン
パク質（ＣＲＰ）の標準液３μｌに４０ｖ／ｖ％ジエチ
レングリコールを含む０．１Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ
８．２）２５０μｌを加えた。対照として、上記ＣＲＰ
標準液にジエチレングリコールを含まない同緩衝液２５
０μｌを加えた。検体と緩衝液との混合液を３７℃で５
分間予加温をし、該混合液に抗ＣＲＰ（ウサギ）抗体を
感作した粒径０．１２μｍのポリスチレンラテックス懸
濁液（０．５ｗ／ｖ％）５０μｌを加え、３７℃で抗原
抗体反応させ、日立７０７０型自動分析装置を用いて５
分間の吸光度変化量を８００ｎｍで測定した。
明するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。実施例１： 濃度０〜５４（ｍｇ／ｄｌ）のＣ反応性タン
パク質（ＣＲＰ）の標準液３μｌに４０ｖ／ｖ％ジエチ
レングリコールを含む０．１Ｍのトリス緩衝液（ｐＨ
８．２）２５０μｌを加えた。対照として、上記ＣＲＰ
標準液にジエチレングリコールを含まない同緩衝液２５
０μｌを加えた。検体と緩衝液との混合液を３７℃で５
分間予加温をし、該混合液に抗ＣＲＰ（ウサギ）抗体を
感作した粒径０．１２μｍのポリスチレンラテックス懸
濁液（０．５ｗ／ｖ％）５０μｌを加え、３７℃で抗原
抗体反応させ、日立７０７０型自動分析装置を用いて５
分間の吸光度変化量を８００ｎｍで測定した。
【００１９】その結果は図１に示されているように、ジ
エチレングリコールを添加しない場合には、ＣＲＰ１０
ｍｇ／ｄｌを越えると抗原過剰による地帯現象が生じた
が、ジエチレングリコールを添加した場合には、５４ｍ
ｇ／ｄｌまで地帯現象が見られなかった。このように、
本発明の方法によると従来のラテックス比濁免疫測定法
では予め検体を希釈しなければ測定不可能な高濃度の抗
原又は抗体でも希釈しないで測定可能になる。
エチレングリコールを添加しない場合には、ＣＲＰ１０
ｍｇ／ｄｌを越えると抗原過剰による地帯現象が生じた
が、ジエチレングリコールを添加した場合には、５４ｍ
ｇ／ｄｌまで地帯現象が見られなかった。このように、
本発明の方法によると従来のラテックス比濁免疫測定法
では予め検体を希釈しなければ測定不可能な高濃度の抗
原又は抗体でも希釈しないで測定可能になる。
【００２０】実施例２：実施例１と同様の操作法で緩衝
液に添加するジエチレングリコールの濃度を０％、２５
％、３０％、３７％、５０％と変化させて、各々の濃度
におけるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度と吸光度変
化量との関係を検討した。その結果は、図２に示されて
いるように、ジエチレングリコールを３７％又は５０％
含むトリス緩衝液を用いた場合には、ＣＲＰ濃度と吸光
度変化量とに比例関係が得られたが、３０％以下のジエ
チレングリコール濃度では比例関係が得られなかった。
液に添加するジエチレングリコールの濃度を０％、２５
％、３０％、３７％、５０％と変化させて、各々の濃度
におけるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度と吸光度変
化量との関係を検討した。その結果は、図２に示されて
いるように、ジエチレングリコールを３７％又は５０％
含むトリス緩衝液を用いた場合には、ＣＲＰ濃度と吸光
度変化量とに比例関係が得られたが、３０％以下のジエ
チレングリコール濃度では比例関係が得られなかった。
【００２１】実施例３：本実施例は、二価アルコールの
存在により測定法の特異性、精度及び正確度が変化しな
いことを示すためのジエチレングリコールを添加した本
発明の方法と従来法（無添加系）との相関実験である。
種々の既知濃度のＣＲＰ標準液を用いて実施例１と同様
の操作を行って検量線を作成し、次に種々の未知濃度の
ＣＲＰを含む検体を原液のまま用いてＣＲＰ標準液と同
様の操作を行い、その測定結果と上記検量線から検体中
のＣＲＰ濃度を算出した。上記２法による測定値の相関
図の図３に示されているように、相関係数は０．９９５
９と高い相関性を示しており、上記２法の測定値がほぼ
完全に一致した。すなわち、本発明の方法において、二
価アルコールの存在により測定法の特異性、精度及び正
確度に悪影響が及ぼされないことが明らかになった。
存在により測定法の特異性、精度及び正確度が変化しな
いことを示すためのジエチレングリコールを添加した本
発明の方法と従来法（無添加系）との相関実験である。
種々の既知濃度のＣＲＰ標準液を用いて実施例１と同様
の操作を行って検量線を作成し、次に種々の未知濃度の
ＣＲＰを含む検体を原液のまま用いてＣＲＰ標準液と同
様の操作を行い、その測定結果と上記検量線から検体中
のＣＲＰ濃度を算出した。上記２法による測定値の相関
図の図３に示されているように、相関係数は０．９９５
９と高い相関性を示しており、上記２法の測定値がほぼ
完全に一致した。すなわち、本発明の方法において、二
価アルコールの存在により測定法の特異性、精度及び正
確度に悪影響が及ぼされないことが明らかになった。
【００２２】実施例４：濃度０〜５４（μｇ／ml）のプ
ラスミン・α2 −プラスミンインヒビター複合体（ＰＰ
Ｉ）の標準液３μｌに３０ｖ／ｖ％ジエチレングリコー
ルを含む０．１Ｍのトリス緩衝液（pH８．０）２７０μ
ｌを加えた。対照として、上記ＰＰＩ標準液にジエチレ
ングリコールを含まない同緩衝液２７０μｌを加えた。
検体と緩衝液との混合液を３７℃で５分間予加混をし、
該混合液に抗ヒトプラスミン・α 2 −プラスミンインヒ
ビター複合体モノクローナル（マウス）抗体を感作した
粒径０．２０μｍのポリスチレンラテックス懸濁液
（０．６ｗ／ｖ％）５０μｌを加え、３７℃で抗原抗体
反応させ、日立７０７０型自動分析装置を用いて５分間
の吸光度変化量を８００nmで測定した。
ラスミン・α2 −プラスミンインヒビター複合体（ＰＰ
Ｉ）の標準液３μｌに３０ｖ／ｖ％ジエチレングリコー
ルを含む０．１Ｍのトリス緩衝液（pH８．０）２７０μ
ｌを加えた。対照として、上記ＰＰＩ標準液にジエチレ
ングリコールを含まない同緩衝液２７０μｌを加えた。
検体と緩衝液との混合液を３７℃で５分間予加混をし、
該混合液に抗ヒトプラスミン・α 2 −プラスミンインヒ
ビター複合体モノクローナル（マウス）抗体を感作した
粒径０．２０μｍのポリスチレンラテックス懸濁液
（０．６ｗ／ｖ％）５０μｌを加え、３７℃で抗原抗体
反応させ、日立７０７０型自動分析装置を用いて５分間
の吸光度変化量を８００nmで測定した。
【００２３】その結果は図４に示されているように、ジ
エチレングリコールを添加しない場合には、ＰＰＩ濃度
が３５μｇ／mlを越えると抗原過剰による地帯現象が生
じたが、ジエチレングリコールを添加した場合には、５
４μｇ／mlまで地帯現象が見られなかった。
エチレングリコールを添加しない場合には、ＰＰＩ濃度
が３５μｇ／mlを越えると抗原過剰による地帯現象が生
じたが、ジエチレングリコールを添加した場合には、５
４μｇ／mlまで地帯現象が見られなかった。
【００２４】
【発明の効果】以上のように、本発明によれば、測定す
べき抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合であ
っても、検体を希釈することなく原液のままでラテック
ス凝集法による免疫定量が可能である。従って、検体を
正確に希釈するのに要する時間と労力を省略することが
でき、非常に有利である。
べき抗原又は抗体が検体中に高濃度に含まれる場合であ
っても、検体を希釈することなく原液のままでラテック
ス凝集法による免疫定量が可能である。従って、検体を
正確に希釈するのに要する時間と労力を省略することが
でき、非常に有利である。
【図１】図１は、実施例１で得られたＣＲＰ濃度と５分
間の吸光度変化量との関係を示すグラフである。
間の吸光度変化量との関係を示すグラフである。
【図２】図２は、種々のジエチレングリコール濃度にお
けるＣＲＰ濃度と５分間尾吸光度変化量との関係を示す
グラフである。
けるＣＲＰ濃度と５分間尾吸光度変化量との関係を示す
グラフである。
【図３】図３は、本発明の方法と従来法（無添加系）と
の相関図である。
の相関図である。
【図４】図４は、実施例４で得られたＰＰＩ濃度と５分
間の吸光度変化量との関係を示すグラフである。
間の吸光度変化量との関係を示すグラフである。
Claims (8)
- 【請求項１】 検体中の測定すべき抗原又は抗体に対す
る抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液と前記検体
とを混合し、ラテックス凝集反応によって発生した濁度
を測定して検体中の抗原又は抗体を定量するラテックス
比濁免疫測定法において、前記検体と前記懸濁液との混
合液中に該混合液に二価アルコールを存在せしめること
を特徴とするラテックス比濁免疫測定法。 - 【請求項２】 二価アルコールが検体と懸濁液との混合
液の全量に対し、１０〜８０ｖ／ｖ％存在せしめること
を特徴とする請求項１に記載のラテックス比濁免疫測定
法。 - 【請求項３】 二価アルコールの屈折率がナトリウムＤ
線（λ＝５８９．３ｎｍ）で測定したとき１．４２以上
である請求項１、２に記載のラテックス比濁免疫測定
法。 - 【請求項４】 前記二価アルコールがジエチレングリコ
ール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール
である請求項１〜３に記載のラテックス比濁免疫測定
法。 - 【請求項５】 検体中の測定すべき抗原又は抗体に対す
る抗体又は抗原を感作したラテックス懸濁液と前記検体
とを混合し、ラテックス凝集反応によって発生した濁度
を測定して検体中の抗原又は抗体を定量するラテックス
比濁免疫測定用試薬において、二価のアルコールを緩衝
液あるいはラテックス懸濁液のどちらか一方あるいは両
方に含有することを特徴とするラテックス比濁免疫測定
用試薬。 - 【請求項６】 二価アルコールが検体と懸濁液との混合
液の全量に対し、１０〜８０ｖ／ｖ％となるように含有
する請求項５に記載のラテックス比濁免疫測定用試薬。 - 【請求項７】 二価アルコールの屈折率がナトリウムＤ
線（λ＝５８９．３ｎｍ）で測定したとき１．４２以上
である請求項５、６に記載のラテックス比濁免疫測定用
試薬。 - 【請求項８】 前記二価アルコールがジエチレングリコ
ール、プロピレングリコール、トリメチレングリコール
である請求項５〜７に記載のラテックス比濁免疫測定用
試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13526596A JP3544787B2 (ja) | 1996-05-29 | 1996-05-29 | ラテックス比濁免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13526596A JP3544787B2 (ja) | 1996-05-29 | 1996-05-29 | ラテックス比濁免疫測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09318632A true JPH09318632A (ja) | 1997-12-12 |
| JP3544787B2 JP3544787B2 (ja) | 2004-07-21 |
Family
ID=15147667
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13526596A Expired - Fee Related JP3544787B2 (ja) | 1996-05-29 | 1996-05-29 | ラテックス比濁免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3544787B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112698034A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-04-23 | 北京安图生物工程有限公司 | 一种癌胚抗原cea的检测试剂盒 |
-
1996
- 1996-05-29 JP JP13526596A patent/JP3544787B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112698034A (zh) * | 2020-12-16 | 2021-04-23 | 北京安图生物工程有限公司 | 一种癌胚抗原cea的检测试剂盒 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3544787B2 (ja) | 2004-07-21 |
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