JPH09295946A

JPH09295946A - 医薬組成物

Info

Publication number: JPH09295946A
Application number: JP8145130A
Authority: JP
Inventors: Akira Awaya; 昭粟屋; Fumiaki Ito; 文昭伊藤; Koujiyun Torigoe; 甲順鳥越; Ikuo Tomino; 郁夫冨野
Original assignee: Mitsui Pharmaceuticals Inc; Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Current assignee: Mitsui Pharmaceuticals Inc; Mitsui Petrochemical Industries Ltd
Priority date: 1995-05-16
Filing date: 1996-05-15
Publication date: 1997-11-18

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】創傷治療剤をインビトロ系で簡便にスクリー
ニングする方法およびその方法により見出された創傷治
療剤の提供。【解決手段】増殖・分化因子、成長ホルモンまたはサ
イトカイン類の生物活性を増強または修飾することが創
傷治療剤として有効であると判定する創傷治療剤のスク
リーニング方法およびそれにより見いだされた式（１）
または式（２）の化合物。〔式（１）または式（２）において、Ｒ_１からＲ_８は独
立に水素または低級アルキル基、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ
_３、−ＣＨ_２ＣＯＲ_９（Ｒ_９＝ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、ＮＨ
_２）、−ＣＨ_２−ＯＣＯＣ_２Ｈ_５を；Ｘは−Ｎ
（Ｒ_１０）−（Ｒ_１０＝ＣＨ_３、Ｃ_２Ｈ_５、Ｐｈ、−Ｃ
Ｈ_２Ｐｈ、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、−ＣＯＣＨ_３、−ＣＯＯ
ＣＨ_３、−ＳＯ_２ＣＨ_３）、−ＣＨ_２−、−ＣＨ（ＣＨ
_３）−、−ＣＨ（Ｃ_２Ｈ_５）−、−Ｏ−、−Ｓ−を；示
す。但しＰｈはフェニル基である〕

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規な創傷治療剤お
よび創傷治療剤の新規なスクリーニング・作出方法の提
供に関する。更に詳しくは、本発明は単純なスリ傷、切
り傷などのケガによる創傷、各種の事故、災害による創
傷、火傷、熱傷、そして骨折、抜歯、手術中の患部およ
び周辺部の受傷による手術創たとえば角膜や血管や様々
な臓器の手術創及び各種臓器移植時の手術創、身体皮膚
上皮、内皮の潰瘍、ケロイドのような創傷、消化管粘膜
の組織傷害、たとえば胃粘膜障害、消化性潰瘍、炎症性
腸疾患における粘膜障害、肝細胞障害、また骨損傷、偽
関節、大腿骨骨頭壊死、靱帯損傷、歯周組織損傷、さら
には血管障害、心筋梗塞、動脈硬化、ＰＴＣＡ後の再灌
流障害、肺障害、腎障害など、薬物、放射線による傷
害、たとえば癌の化学療法や放射線療法にともなう口内
炎や粘膜炎など、長期間の寝たきり状態など何らかの要
因による褥瘡、痔疾などの創傷を治癒する新規な薬剤に
関する。また、本発明はこのような創傷治療剤を新たに
生み出す斬新なインビトロのスクリーニング系、スクリ
ーニング方法を提供する。

【０００２】

【従来の技術】前記のような各種創傷を治療する場合、
外傷については受傷部の消毒、ウエットドレッシング、
ドライドレッシングなどの創傷被覆材による処置、ある
いは手術糸による縫合などを行い、あとは生体の自然回
復力によって創傷が治癒するのを待つのみというのが実
態である。この創傷部の組織の修復・再生を積極的に促
す方策も最近ではとられるようになり、アビテン（登録
商標）が使用されたり、ヒアルロン酸スポンジのマトリ
ックス上に、コラーゲンや細胞接着分子であるラミニン
やフィブロネクチンのフラグメントなどを塗布したもの
が創傷部に貼付されてきている。

【０００３】創傷治癒の過程は炎症相、増殖相・肉芽形
成期、再形成相・瘢痕成熟期に区分され、進行すると言
われる。肉芽組織形成期には繊維芽細胞、筋繊維芽細
胞、新生血管の生成が見られ、瘢痕期には増生したコラ
ーゲンが皮面に平行に再配列するとともに新生血管の減
少と再構築が見られ、組織の再編が行われる。前２相で
は各種の増殖・分化因子やサイトカイン類が、繊維芽細
胞、筋繊維芽細胞、血管内皮細胞などを含め各組織や血
小板、白血球、マクロファージなどから産生・放出さ
れ、これらが創傷治癒に重要な作用を及ぼしていると考
えられている。そして、上皮増殖因子（ＥＧＦ）や塩基
性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）が、皮膚欠損創や消
化性潰瘍の治療に試験的に使用され始めている（例えば
Wolfe,M.M.ら :Gastroenterology, 106:A212,1994）。
またｂＦＧＦなどは、虚血等により障害された心筋を灌
流する新生血管を増生するべく、またＨＧＦなどは肺障
害、肝障害、腎障害などを治療するべく外的投与が動物
で試みられている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】このように、創傷治癒
過程を促進するためには、生体内で実際に演じられてい
る創傷治癒の場に登場する増殖・分化因子、成長ホルモ
ンやサイトカイン類、各種接着分子類を生体に投与する
ことが実際に、また試験的に行われており、上記の物質
はすべて生体由来の物質につきるのが現状である。

【０００５】これら物質、特にタンパク質類はヒトの創
傷の治療に適応しようとする場合、投与経路が限られ、
効果の持続に多くは望めないのが一般である。ＥＧＦ、
ｂＦＧＦも多くは局所投与を行うのが最上の方法である
かもしれない。注射投与などによる全身投与のトライア
ルはあるにしても、軟膏などによる局所投与がまず行わ
れるのが実状であろう。また増殖・分化因子、サイトカ
イン類は多機能を有し、創傷治癒のみならず、別の望ま
しくない作用を示すこともあり、投与には問題が生じる
こともある。また、前記のようなタンパク質を調製する
にはヒト型遺伝子を遺伝子工学的に処理してタンパク発
現を行わねばならず、高価なものとなり、また製薬上の
種々の問題も解決しなければならない。

【０００６】

【課題を解決するための手段】これまでに開発されてい
る創傷治療剤は数少なく、またこのような現状におい
て、本発明者らは新規な優れた創傷治療剤を、タンパク
質やペプチドのみならず、特に合成化合物の中に見出そ
うと努力を開始した。創傷治療剤の候補と考えられる化
合物を、創傷治癒効果を判定する様々のインビボの実験
系を用意して、いちいちスクリーニングしてゆくこと
は、これら実験系の作製に時間と手間を必要とし、アッ
セイ・評価するのにも時間と熟練度を要するため、おい
それとは実施できない。

【０００７】そこで本発明者らは創傷治癒活性を有する
物質を探索するためのインビトロ実験系を構築すること
を鋭意思案し、創傷治癒過程に関与する種々の物質のう
ち、増殖・分化因子、成長ホルモンやサイトカイン類に
着目し、これら因子にまつわる作用、手助けする作用を
有する物質をピックアップすることはどうかと着想し
た。また、手間のかかるインビボ実験系ではなく、簡便
で費用も高価でない、インビトロ系に近いインビボ実験
系を用いることも考えた。そして鋭意検討を重ねた結
果、インビトロの細胞実験系や、安価な、インビトロ系
に近いインビボ系で増殖・分化因子、成長ホルモンやサ
イトカイン類の生物活性を増強ないし修飾することが見
出された化合物が、実際に、ラット、マウス、家兎など
の皮膚欠損創モデル、皮膚切創・縫合モデル、血管柄付
皮弁生着率検定モデル、消化管潰瘍モデル、心障害モデ
ル、肺障害モデル、肝障害モデル、腎障害モデル、大動
脈のバルーン擦過モデル、角膜傷害モデル、骨折モデ
ル、熱傷モデル、褥瘡モデルなどにおいても、創傷治癒
促進による創傷治癒効果を発揮することが見出された。

【０００８】本発明は、かかる知見にもとづいて完成さ
れたものである。即ち、本発明は増殖・分化因子、成長
ホルモンまたはサイトカイン類のインビトロ等の生物活
性を増強または修飾する物質が創傷治療効果を有するこ
とを見出したという知見に基づくものであり、増殖・分
化因子、成長ホルモンまたはサイトカイン類の生物活性
を増強ないし修飾する活性を持つことを特徴とする物質
を有効成分とする創傷治療剤を提供する。さらにまた、
本発明は増殖・分化因子、成長ホルモンまたはサイトカ
イン類の生物活性を増強ないし修飾することが創傷治療
剤として有効であると判定する創傷治療剤の新たなスク
リーニング方法を提案、提供するものである。

【０００９】さらに本発明は、本発明者らが先に、神経
芽腫瘍細胞の神経突起伸展を促進する物質としてスクリ
ーニングし（Awaya,A.et al:Biol.Pharm.Bull.16(3)248
-253,1993）、神経障害を起こした動物において神経修
復を促進することを見出した合成ピリミジン系化合物
を、かかる創傷治療剤として新たに提供するものであ
る。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明により創傷治療剤として提
供できる合成ピリミジン系化合物としては、ＷＯ８７／
０４９２８、ＵＳＰ４９５９３６８、特開平１−１３９
５７２、ＵＳＰ５３０４５５５、特開平１−４０４８
３、特開平２−２２１２７５、特公平８−５８８７など
に記載のある２−置換−６−アルキル−５−オキソ−
５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミ
ジン類化合物および２−置換−７−アルキル−６−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピ
リミジン類化合物またはその塩である。より具体的には
式（１）あるいは式（２）に表わす化合物である。

【００１１】

【化２】（式（１）または式（２）において、Ｒ_１からＲ_８は独
立に水素または低級アルキル基、ＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_２
−、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＣＨ_３、−ＣＯＣ_２Ｈ
_５、−ＣＨ_２ＯＣＯＣ_２Ｈ_５を、Ｘは＞ＮＨ、＞Ｎ−Ｃ
Ｈ_３、＞Ｎ−Ｃ_２Ｈ_５、＞Ｎ−ｐｈ、＞Ｎ−ＣＨ_２−ｐ
ｈ、＞Ｎ−ＣＨ−ｐｈ_２、＞Ｎ−ＣＯＣＨ_３、＞Ｎ−Ｃ
ＯＯＣ_２Ｈ_５、＞Ｎ−ＳＯ_２ＣＨ_３、＞ＣＨ_２、＞ＣＨ
ＣＨ_３、＞ＣＨＣ_２Ｈ_５、−Ｏ−、−Ｓ−を示す。ただ
し、ｐｈはフェニル基を示す。）なお、低級アルキル基としては炭素数が１から７の低級
アルキル基が好ましい。

【００１２】式（１）の代表的化合物を以下に例挙す
る。２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、
２−（４−メチルピペラジノ）−６−メチル−５−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピ
リミジン、２−（４−エチルピペラジノ）−６−メチル
−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，
４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペリジノ−６−メチル−５
−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−
ｄ〕ピリミジン、２−（４−メチルピペリジノ）−６−
メチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ
〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−（４−エチルピペリジ
ノ）−６−メチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７
Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−モルホリノ
−６−メチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）
ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−チオモルホリノ
−６−メチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）
ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６
−エチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロ
ロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、

【００１３】２−ピペラジノ−６−イソプロピル−５−
オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−
ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６−ｎ−ブチル−５
−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−
ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６−ｓｅｃ−ブチル
−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，
４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６−ｔ−ブチル
−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，
４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−４，６−ジメチ
ル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ
〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６，７−
ジメチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロ
ロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−６，
７，７−トリメチル−５−オキソ−５，６−ジヒドロ
（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペリ
ジノ−４，６−ジメチル−５−オキソ−５，６−ジヒド
ロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、２−ピペ
リジノ−６，７，７−トリメチル−５−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、
２−ピペラジノ−７−メチル−６−エチル−５−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリ
ミジン、２−ピペラジノ−４−メチル−６−エチル−５
−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−
ｄ〕ピリミジン。

【００１４】式（２）の代表的化合物を以下に例挙す
る。２−ピペラジノ−７−メチル−６−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、
２−（４−メチルピペラジノ）−７−メチル−６−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピ
リミジン、２−（４−エチルピペラジノ）−７−メチル
−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，
３−ｄ〕ピリミジン、２−（４−Ｎ−アセチルピペラジ
ノ）−７−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７
Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−ピペリジノ
−７−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）
ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−（４−メチルピ
ペリジノ）−７−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒド
ロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−（４
−エチルピペリジノ）−７−メチル−６−オキソ−５，
６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジ
ン、２−モルホリノ−７−メチル−６−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、
２−チオモルホリノ−７−メチル−６−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、
２−ピペリジノ−７−エチル−６−オキソ−５，６−ジ
ヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−
ピペリジノ−７−ｎ−プロピル−６−オキソ−５，６−
ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２
−ピペリジノ−７−イソプロピル−６−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、

【００１５】２−ピペリジノ−７−ｎ−ブチル−６−オ
キソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕
ピリミジン、２−ピペリジノ−７−ｔ−ブチル−６−オ
キソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕
ピリミジン、２−ピペリジノ−５−メチル−６−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリ
ミジン、２−ピペラジノ−５−メチル−６−オキソ−
５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミ
ジン、２−ピペラジノ−４，７−ジメチル−６−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリ
ミジン、２−ピペリジノ−５，７−ジメチル−６−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピ
リミジン、２−ピペリジノ−５，５，７−トリメチル−
６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３
−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−５，７−ジメチル
−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，
３−ｄ〕ピリミジン、２−ピペラジノ−５，５，７−ト
リメチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロ
ロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−ピペリジノ−４メチ
ル−７−エチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７
Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、２−ピペリジノ
−５−メチル−７−エチル−６−オキソ−５，６−ジヒ
ドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン。

【００１６】創傷治癒は、細胞の増殖誘導、遊走、増殖
停止、分化等が協調的制御の下に起こる過程であり、前
記の様々な増殖・分化因子、成長ホルモンあるいはサイ
トカイン類が出現し、それぞれの役割を演じる。創傷治
療剤を見出すには、上記のようにラット、マウス、家兎
などの皮膚欠損創モデルなどに被検物質を投与してその
活性を測定することにより行われてきたが、より簡便で
費用のかからない、創傷治癒過程を模式化したインビト
ロモデルなども考案されてきた。例えばヒト表皮角化細
胞を線維芽細胞を含む収縮コラーゲンゲルで約１週間培
養し、皮膚組織を再構成させて、その中心部を径４ｍｍ
の円形に全層にわたって切除し、別に作製したコラーゲ
ンにのせて培養を継続して組織の再生過程を観察する方
法がある。

【００１７】このモデルでは再構築皮膚の欠損部自由縁
から中心部に向かって細胞が遊走し、欠損作製後１週間
で欠損部を覆いつくすとともに、細胞が増殖、多層化、
分化して正常皮膚に類似した組織構造が再生されるとい
い、培養系でありながらインビボに近い状態で創傷治癒
過程を把握することができるという（鈴木康俊ら：第53
回日本癌学会総会記事 1202 (353頁, 1994年) ）。本発
明においては、このような斬新なモデルをさらに単純化
して、創傷治癒に一定の役割を果たす増殖・分化因子、
成長ホルモン、サイトカイン類などのみをターゲットと
して、それにまつわって、それら生物活性物質の作用を
増強ないしは修飾するかどうかをアッセイすることによ
って、そのような活性を持つ物質を見出したのである。
そしてそれら物質が実際に創傷治癒モデルにおいて、治
癒を促進することが目視によってあるいは、皮膚の引っ
張り強度測定などにより分かったので、本発明の創傷治
療剤のスクリーニング方法は、要件を満たす妥当な新規
なアッセイ系として、有用で価値あるものである。

【００１８】例えばＥＧＦを用いるインビトロ系につい
ては、ボイデンチャンバーの上部ウエルに上皮系細胞を
置き、下部ウエルにＥＧＦおよび被検化合物を添加する
ことにより、遊走する細胞数を測定するだけで、創傷治
療剤としてポテンシャルある化合物を見出すことができ
る。上皮系細胞としては入手し得るどのような細胞でも
用いることができる。たとえばイヌＭＴＣＫ腎臓細胞、
ＴＭＫ細胞、各種の動物の食道、胃、小腸、十二指腸、
大腸、肺、気管支、肝臓、胆道、腎臓、膵臓、胸腺、脾
臓等の粘膜細胞などがあげられる。

【００１９】また、ｂＦＧＦを用いるインビトロ系につ
いても、同様にボイデンチャンバーの上部ウエルに線繊
芽細胞を置き、下部ウエルにｂＦＧＦおよび本発明の化
合物を添加することにより、遊走する細胞数を測定する
だけで、あるいは細胞増殖促進活性を測定するだけで、
創傷治療剤としてポテンシャルある化合物を見出すこと
ができる。線維芽細胞としては入手し得るどのような細
胞でも用いることができる。例えばＢａｌｂ／３Ｔ３細
胞、培養血管内皮細胞、筋線維芽細胞など各種動物の全
身の組織の線維芽細胞などがあげられる。

【００２０】ｂＦＧＦについては、ｂＦＧＦの血管新生
能をメルクマールにする種々のアッセイ系が用いられ
る。ニワトリ胚の気室部卵殻中央に卵殻窓を作り、chor
ioallantoic membrane（ＣＡＭ）を表出させ、そこにｂ
ＦＧＦおよび被検薬の各濃度の溶液を滴下し、さらにふ
化を継続させ、数日後、顕微鏡下に血管新生の程度を調
べるという方法が好んで使われている。この実験系でｂ
ＦＧＦの血管新生能を増強することが見出された被検薬
は、ラット背部全層皮膚欠損創の作成後、人工真皮を移
植する系で、人工真皮と移植床の間に培養血管内皮細胞
シートを移植する際に併用すると、真皮内の血管新生を
促進し、真皮様組織構築に要する時間の短縮に有用であ
ることがわかる。また、ＣＡＭ法によりｂＦＧＦの血管
新生能を増強ないし修飾する活性を有することが明らか
にされた化合物は、マウス、ラット、ウサギ等の皮膚切
創・縫合モデルで治癒を早めること、また血管柄付皮弁
の生着率検定モデルで血管柄付皮弁の生着率を高めるこ
と、またラット大動脈のバルーン擦過モデルで修復・再
生を促進することが示されている。ＶＥＧＦについても
同様の系で、血管新生能をアッセイすることができる。

【００２１】ＥＧＦ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦと同様にその
他のＦＧＦ類、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β、ＰＤＧＦ、Ｐ
Ｄ−ＥＣＧＦ、ＢＭＰ、ＨＧＦ、ミッドカイン、ＴＮ
Ｆ、インスリン、ＩＧＦ−I,II、ケラチノサイト成長因
子、ＥＣＧＦ、線維芽細胞由来上皮細胞増殖因子、Ｇ−
ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＰＯ、ＬＩＦ、
ＳＣＦ、ＥＰＯ、ＡＤＦ、ＭＩＰ−α、トランスフェリ
ン、トロンビン、トロンボモジュリン、ＩＬ−１、ＩＬ
−４、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＨＲＦ、単球走化性活性因
子、ＣＧＲＰ、ＳＯＤ、アンジオテンシン、プロスタグ
ランジン類、セロトニン、コラーゲン、フィブロネクチ
ン、ラミニンなどおよびその同族体についても同様に、
ボイデンチャンバーの如きアッセイ装置を用いて、それ
ぞれの増殖・分化因子、成長ホルモンあるいはサイトカ
イン類が作用することの知られているターゲット細胞を
培養して、細胞の増殖・分化あるいは生理活性物質の放
出、遊走等の運動性、形態変化などをアッセイしたりし
て、被検薬である創傷治療剤をスクリーニングすること
ができる。測定パラメーターは、形態学的観察や遺伝子
・核酸レベル、タンパク質合成レベル、酵素活性等々を
検討する。またそれぞれの増殖・分化因子、成長ホルモ
ン、サイトカイン類が持つ固有の生物活性をインビトロ
の系、あるいはインビトロ系に近いインビボ系でアッセ
イすることもできる。

【００２２】このようなアッセイ系で見出された物質
は、それ自身単独では、インビトロの、増殖・分化因子
やサイトカイン類様の生物活性がないか弱いが、創傷部
位を持つ生体においては、増殖・分化因子や成長ホルモ
ンやサイトカイン類が作動している部位において、これ
ら因子の生物活性を増強ないし修飾する。これら物質は
創傷治癒過程で、それら因子類が作動する時期のみ、そ
れら因子の活性を増強ないし修飾するのであり、のべつ
幕なし作用するのではなく、副作用を惹起せず、また変
異原性は低いと考えられる。そしてまた、それら因子・
サイトカイン類が作用し続けて瘢痕形成など行き過ぎ・
過剰の反応・現象が出てくる時期には、これら物質は投
薬をしなければよい。それら因子・サイトカイン類など
が活動している適切な時期に、これら物質を単独ない
し、これら因子・サイトカイン類の組換えタンパク質な
どと同時に生体に投与するとよい。創傷治癒過程で、生
体中の増殖・分化因子等の作用を短期、速効的に発現さ
せ、これら内在性増殖・分化因子等の長期的な創傷部位
での活動にもとづく、あるいは外来的な長期的なこれら
の因子タンパク質などの投与による、創傷治癒の遷延化
・難治化などの現象に至らしめないように、これら物質
を単独で、あるいはこれらタンパク質と同時にあるいは
合剤で投与することは適確なことと考えられる。

【００２３】消化性潰瘍の修復、治癒過程では、肉芽形
成から上皮化と順に治癒が進む。即ち、粘膜欠損直後よ
り生じた炎症の初期に、血小板よりＰＤＧＦやＴＧＦ−
βが放出される。これらはマクロファージを遊走させ
る。マクロファージ自身もＰＤＧＦやＴＧＦ−βなどの
増殖因子を放出させ、この過程は加速度的に進む。２〜
３日たつと、ＰＤＧＦやＦＧＦ、ＥＧＦなどにより線維
芽細胞が増殖する。同時にＴＧＦ−βによりＥＣＭが蓄
積され、さらにＦＧＦなどの働きにより血管新生が起こ
る。このようにして肉芽形成が完成する。次に肉芽中の
線維芽細胞により放出されたＨＧＦにより、またＴＧＦ
−α、ＥＧＦにより上皮細胞が遊走・増殖し肉芽を覆う
ようになる。そして殆ど同時に結合織の改築が起こる
（寺野彰ほか：細胞増殖因子と消化性潰瘍．Medical
Practice,10(4):753〜757,1993）。本発明のピリミジン
化合物類は、このような創傷治癒過程に効果的に作用
し、創傷治療活性を持つ。

【００２４】このようにして、本発明の式（１）および
式（２）の化合物は、創傷治療薬として有用であること
が明らかにされた。式(１）および式（２）の化合物
は、通常医薬組成物の形で用いられ、経口、皮下、筋肉
内、静脈内、鼻内、皮膚透過及び直腸経路といった種々
の経路により投薬される。

【００２５】本発明は製薬的に許容される担体と活性成
分としての式（１）および式（２）の化合物もしくはそ
の薬学的に許容される塩を含有する製薬調合物を包含す
る。本発明の式（１）および式（２）の化合物の薬学的
に許容しうる塩類としては、例えば、塩酸塩、臭化水素
酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、酢
酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、乳酸
塩、酒石酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、グルコン酸
塩、糖酸塩、メタンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホ
ン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩などの薬学的に許容し
うるアニオンを有する非毒性酸付加塩を形成する酸から
形成される塩類もしくはそれらの水和物、並びに第４級
アンモニウム（又はアミン）塩類もしくはそれらの水和
物があげられる。

【００２６】本発明の組成物は、例えば錠剤、カプセ
ル、散剤、顆粒、トローチ、カシエー、エリキシル、乳
濁液、乳液、シロップ、懸濁液、エアロゾル、軟膏、無
菌注射液、成形パップ、軟質及び硬質ゼラチンカプセ
ル、ａｌｚｅｔ（登録商標）ｐｕｍｐカプセル、ペレッ
ト、坐薬及び無菌包装粉末などの形にすることができ
る。

【００２７】製薬的に許容される担体（又は希釈剤）の
例は、乳糖、ブドウ糖、蔗糖、ソルビトール、マンニト
ール、とうもろこし澱粉、結晶セルロース、アラビアゴ
ム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、ケイ酸カルシウ
ム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、トラガ
カントゴム、ゼラチン、シロップ、メチルセルロース、
カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシ安息香
酸エステル、プロピルヒドロキシ安息香酸エステル、タ
ルク、ステアリン酸マグネシウム、不活性なポリマー
類、水又は鉱油などである。

【００２８】固体又は液体組成物のいずれも、上記のよ
うな担体のほか、充填剤、結合剤、滑沢剤、湿潤剤、崩
壊剤、乳濁及び懸濁剤、保存剤、甘味剤あるいは芳香剤
などを含有し得る。本組成物は、また患者に投薬の後、
活性成分が急速に、持続的に又は遅延的に放出されるよ
うに調製することができる。

【００２９】経口投与の場合、式（１）および式（２）
の化合物は、担体又は希釈剤と混合され、錠剤、カプセ
ル剤などの形にされる。非経口投与の場合、活性成分は
１０％ブドウ糖水溶液、等張食塩水、無菌水あるいは類
似の液体に溶解され、静脈内に点滴または注射により、
あるいは筋肉内注射により投与されるべくバイアル又は
アンプルに密閉される。有利には、溶解補助剤や局所麻
酔剤、保存剤及び緩衝剤も媒体中に含有させることもで
きる。安定性を増すために、本組成物をバイアル又はア
ンプルに注入した後に、凍結乾燥することも可能であ
る。非経口投与の他の製剤としては、例えば軟膏剤、パ
ップ剤などの経皮的に投与される製剤がある。この場合
成型パップやテープ剤が有利である。また障害局所、組
織、骨などの中に直接埋め込むペレット剤やａｌｚｅｔ
（登録商標）ｐｕｍｐカプセル剤などもある。ペレット
作製に用いる樹脂としては、ポリ（２−ハイドロキシエ
チルメタアクリレート）や、エチレンビニルアセテート
コポリマーなどが挙げられる。

【００３０】本組成物は、単位投薬量形状にあたり一般
に０．１ないし２０００ｍｇ、好ましくは０．５ないし
１０００ｍｇの活性成分を含有する。式（１）および式
（２）の化合物は広い投薬量範囲にわたって有効であ
る。例えば、１日あたりの投薬量は普通０．０３ｍｇ／
ｋｇないし１００ｍｇ／ｋｇの範囲である。実際に投与
される化合物の量は、投与される化合物により、また個
々の患者の年令、体重、反応、症状の程度、投与経路等
により、医者により決定される。従って、上記の投薬量
範囲は本発明の範囲を限定するものではない。１日あた
りの好適な投薬回数は通常１〜６回、好ましくは１〜４
回である。

【００３１】式（１）および（２）の化合物は、それ自
体で有効な創傷治療剤であるが、必要ならば１種又はそ
れ以上の他の同効薬と組合せて投薬することもできる。
そのような付加的な薬剤には上記のような各種増殖・分
化因子、成長ホルモンやサイトカイン類、亜鉛があげら
れる。

【００３２】本発明の治療薬に用いる式（１）および式
（２）の製造例は既に、本発明者らが特許出願および論
文発表をしているので、それらを参考としたい（ＷＯ８
７／０４９２８，ＵＳＰ４９５９３６８，特開平１−
１３９５７２，ＵＳＰ５３０４５５５，特開平１−４
０４８３，特開平２−２２１２７５、特公平８−５８８
７など、Biol.Pharm.Bull.16(3):248-253,1993 ）。

【００３３】

【実施例】以下に本発明を実施例および実験例をもって
より詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

【００３４】実施例１活性成分１０ｍｇを含有する錠剤は以下のようにして製
造される。錠剤当り活性成分１０ｍｇトウモロコシデンプン５５ｍｇ結晶セルロース３５ｍｇポリビニルピロリドン（１０％水溶液として）５ｍｇカルボキシメチルセルロース・カルシウム１０ｍｇステアリン酸マグネシウム４ｍｇタルク１ｍｇ ─────────────────────────────── 合計１２０ｍｇ活性成分、澱粉および結晶セルロースを８０メッシュふ
るいを通し、完全に混合する。得られた粉末にポリビニ
ルピロリドン溶液を混合し造粒した後、１８メッシュの
ふるいを通す。このように製造した顆粒を５０〜６０℃
で乾燥し、再度１８メッシュのふるいにより整粒する。
前もって８０メッシュのふるいにかけておいたカルボキ
シメチルセルロースカルシウムおよびステアリン酸マグ
ネシウムおよびタルクを顆粒に加え、混合した後、製錠
機により各々１２０ｍｇの重量の錠剤を製造する。

【００３５】実施例２活性成分２００ｍｇを含有する錠剤は以下のようにして
製造される。錠剤当り活性成分２００ｍｇトウモロコシデンプン５０ｍｇ結晶セルロース４２ｍｇ軽質無水ケイ酸７ｍｇステアリン酸マグネシウム１ｍｇ ─────────────────────────────── 合計３００ｍｇ上記成分を８０メッシュふるいを通し、完全に混合す
る。得られた粉末を圧縮成形し、重量３００ｍｇの錠剤
を製造する。

【００３６】実施例３活性成分１００ｍｇを含有するカプセル剤は以下のよう
にして製造される。カプセル当り活性成分１００ｍｇトウモロコシデンプン４０ｍｇ乳糖５ｍｇステアリン酸マグネシウム５ｍｇ ─────────────────────────────── 合計１５０ｍｇ上記成分を混ぜ合せ、８０メッシュふるいを通し、完全
に混合する。得られた粉末を１５０ｍｇずつカプセルに
充填する。

【００３７】実施例４活性成分５ｍｇを含有するバイアル入り用時溶解注射剤
は以下のようにして製造される。バイアル当り活性成分５ｍｇマンニトール５０ｍｇ用時、注射様蒸留水１ｍｌを用いて溶解し、使用する。

【００３８】実施例５活性成分５０ｍｇを含有するアンプル入り注射剤は以下
のようにして製造される。アンプル当り活性成分５０ｍｇ塩化ナトリウム１８ｍｇ注射用蒸留水適量 ─────────────────────────────── 合計２ｍｌ

【００３９】実施例６活性成分１７．５ｍｇを含有する粘着性貼付製剤は以下
のようにして製造される。ポリアクリル酸アンモニウム
１０部を水６０部に溶解する。一方グリセリンジグリシ
ジルエーテル２部を水１０部に加熱しつつ溶解する。更
にもう一方でポリエチレングリコール（グレード４０
０）１０部、水１０部、活性成分１部を撹拌溶解する。
ついでポリアクリル酸アンモニウムの水溶液を撹拌しつ
つグリセリンジグリシジルエーテルの水溶液及びポリエ
チレングリコールの活性成分含有水溶液を添加混合した
薬物含有含水ゲル用溶液を、柔軟性のあるプラスチック
フィルムに活性成分が平方センチメートル当り０．５ｍ
ｇとなるように塗布し、表面を剥離紙で覆い３５平方セ
ンチメートルに切断し、製剤とした。

【００４０】実施例７活性成分１０ｍｇを含有する粘着性貼付製剤は以下のよ
うにして製造される。ポリアクリル酸ナトリウム１００
部、グリセリン１００部、水１５０部、トリエポキシプ
ロピルイソシアヌレート０．２部、エタノール１００
部、ミリスチン酸イソプロピル２５部、プロピレングリ
コール２５部及び活性成分１５部の混合水溶ゾル液を調
製した。次にこのゾル液をレーヨン不織物とポリエチレ
ンフィルムとからなる複合フィルムの不織布面に１００
μｍ厚に塗布して薬剤含有の粘着剤層を形成した。この
層中に含まれる放出補助物質（ミリスチン酸イソプロピ
ルとプロピレングリコール）の含量は約２０重量％であ
った。その後２５℃で２４時間架橋し、上記粘着剤界面
に剥離フィルムを貼り合せ、更にこれを３５平方センチ
メートルに切断し製剤とした。

【００４１】実施例８実施例４の製剤のバイアル当りＥＧＦ１ｍｇを含有せ
しめた。実施例９実施例４の製剤のバイアル当りｂＦＧＦ１ｍｇを含有
せしめた。実施例１０実施例４の製剤のバイアル当たりミッドカイン１ｍｇを
含有せしめた。実施例１１実施例５の製剤のアンプル当りＥＧＦ１ｍｇを含有せ
しめた。実施例１２実施例５の製剤のアンプル当りｂＦＧＦ１ｍｇを含有
せしめた。実施例１３実施例５の製剤のアンプル当たりミッドカイン１ｍｇを
含有せしめた。実施例１４実施例６の単位製剤当りＥＧＦ０．２ｍｇを含有せし
めた。実施例１５実施例６の単位製剤当りｂＦＧＦ０．２ｍｇを含有せ
しめた。実施例１６実施例６の製剤の単位製剤当たりミッドカイン０．２ｍ
ｇを含有せしめた。実施例１７実施例７の単位製剤当りＥＧＦ０．２ｍｇを含有せし
めた。実施例１８実施例７の単位製剤当りｂＦＧＦ０．２ｍｇを含有せ
しめた。実施例１９実施例７の製剤の単位製剤当たりミッドカイン０．２ｍ
ｇを含有せしめた。

【００４２】実施例２０ポリ（２−ハイドロキシエチルメタアクリレート）（Po
lysciences, Inc.）の粗い砂状結晶を、すり鉢に入れ、
すりこぎを用いて、クリーンベンチ内で無菌的に粉末状
に細かく砕いた。滅菌シャーレーにこの粉末１０ｍｇを
とり、９９％エチルアルコールを１０μｌと活性成分
０．５ｍｇを含む水溶液１０μｌとを加え、よく攪拌し
て糊状の塊とした後、乾燥させた。

【００４３】実施例２１実施例２０の単位製剤当たりＥＧＦ０．５μｇを含有
せしめた。実施例２２実施例２０の単位製剤当たりｂＦＧＦ０．５μｇを含
有せしめた。実施例２３実施例２０の単位製剤当たりミッドカイン０．５μｇ
を含有せしめた。実施例２４実施例２０の単位製剤当たりＰＤＧＦ０．５μｇを含
有せしめた。実施例２５実施例２０の単位製剤当たりＴＧＦ０．５μｇを含有
せしめた。実施例２６実施例２０の単位製剤当たりＩＧＦ０．５μｇを含有
せしめた。実施例２７実施例２０の単位製剤当たりＩＬ−４０．５μｇを含
有せしめた。

【００４４】実施例２８低分化型上皮細胞ＴＭＫ１細胞をトリプシン処理し、
０．２５％ＢＳＡ含有ＲＰＭＩ１６４０培養液で洗浄
後、再浮遊させ、予めＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＨＧＦ、ＴＧ
Ｆ−β、ＰＤＧＦ、ＩＧＦ−１、トランスフェリン、Ｃ
ＧＲＰなどの増殖・分化因子、成長ホルモン、サイトカ
イン類の１種または２種以上、あるいは本発明のピリミ
ジン系化合物の溶液ないし混合溶液を含む培養液をボイ
デンチャンバーの下段ウエルに２００μｌ加えた上に、
タイプＩＶコラーゲンコートのフィルターをおいた後
に、１×１０⁶／ｍｌのＴＭＫ１細胞浮遊液２００μｌ
を上段ウエルに加え、４時間培養した。次いで下段ウエ
ルの培養液を固定、染色し、遊走してきた細胞数を測定
した。３つのチャンバーで同時に実験を行い、それぞれ
について顕微鏡下、５視野を観察、計数した。

【００４５】以下にその数値を例挙するが、数値は平均
値±Ｓ．Ｅ．で各化合物について、ａ）コントロール、ｂ）各ピリミジン化合物（濃度はそ
れぞれ異なる）、ｃ）ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌ、ｄ）各
ピリミジン化合物＋ＥＧＦ混合液の細胞数を順に示す。

【００４６】２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリ
ミジンマレイン酸塩については、ａ）５．７±０．５、ｂ）７．４±３．０（１ｍＭ）、
ｃ）８０±８．０、ｄ）１１１．２±８．０、であっ
た。

【００４７】２−ピペリジノ−７−メチル−６−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリ
ミジンマレイン酸塩については、ａ）１．６±０．７、ｂ）２．９±１．０（０．１ｍ
Ｍ）、ｃ）１７．５±１．６、ｄ）２０．９±４．９、
であった。

【００４８】２−（４−エチルピペリジノ）−７−メチ
ル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ
〔２，３−ｄ〕ピリミジンマレイン酸塩については、ａ）９．１±１．０、ｂ）２８．６±１８．４（０．１
ｍＭ）、ｃ）９３．２±２．０、ｄ）１４４±３．１、
であった。

【００４９】２−ピペリジノ−５，５，７−トリメチル
−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔２，
３−ｄ〕ピリミジンマレイン酸塩については、ａ）２４±１２．５、ｂ）３３±１２．６（０．１ｍ
Ｍ）、ｃ）１３０．９±１５．９、ｄ）１４７．２±１
３．２、であった。

【００５０】以上の数値でみるとおり、各ピリミジン化
合物はＥＧＦの作用を相乗的、相加的に増強することが
わかった。これらの化合物はまた、マウス、ラット、ウ
サギ等の皮膚切創・縫合部位の皮膚の傷のきれいな治癒
を早めるなどインビボの創傷治癒効果もあり、インビト
ロの知見と対応しており、本実験法は創傷治療剤スクリ
ーニング方法として優れていることが認識された。

【００５１】実施例２９低分化型上皮細胞ＴＭＫ１細胞を３５ｍｍディシュに５
〜１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０培養液で、
０．５×１０⁵／ｍｌになるように浮遊させ２日間培養
した。次いでＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌあるいは各ピリミジ
ン化合物を単独あるいは混合して、この細胞培養液に加
え、５時間ないし８時間後、細胞の形態を観察した。例
えば２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキソ−５，６
−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４−ｄ〕ピリミジンマ
レイン酸塩については、１ｍＭ単独では５時間後から１
日後にかけて、わずかな形態変化が観察されたに過ぎな
いのに対して、ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌでは１日後激し
く形態変化をしており、ｓｃａｔｔｅｒｉｎｇを呈し変
化が顕著であった。コントロールの細胞培養では、上皮
細胞特有の細胞間の強い結合とコロニー形成が見られた
ままであった。

【００５２】ＥＧＦと本化合物の同時添加の培養では、
ＥＧＦ単独に比べ、更に激しい形態変化を示し、８時間
後で既に神経突起様の突起を発芽し、伸長してゆき、１
日後には網目形成を密にしていた。これらの形態変化は
試剤を除去すると消失し、もとのコロニー形成の状態に
もどった。本化合物はＥＧＦの作用を極めて増強した生
物活性を惹起することが示された。

【００５３】実施例３０受精１０日目の鶏卵の気室部卵殻中央に卵殻窓を作りＣ
ＡＭ（chorioallantoic membrane ）を表出させ、一辺
３ｍｍの正方形のナイロン膜をＣＡＭ上に置き、そこに
ｂＦＧＦおよびまたは本発明のピリミジン化合物の各溶
液を８μｌ滴下した。即ち、組換えヒトｂＦＧＦ（Ｇｅ
ｎｚｙｍｅ社）の１、１０、１００ｎｇ／ｍｌの生食溶
液および各ピリミジン化合物０．０１〜１ｍＭの各濃度
の生食溶液を単独あるいは混合してＣＡＭナイロン膜上
にアプライした。３８℃でふ化を継続させ、７２時間目
に４℃の冷所に移し２〜３時間放置した後、顕微鏡下に
血管新生の程度を調べた。血管新生は０．１ｍｍ以上の
放射状血管の数で判定した。

【００５４】３日後の血管新生数（Ｍ±ＳＥ）は、ｂＦ
ＧＦ、１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍ
ｌそれぞれで４．１±０．４、４．３±０．７、６．１
±１．１であり、例えば２−ピペラジノ−６−メチル−
５−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ〔３，４
−ｄ〕ピリミジンマレイン酸塩については０．０１ｍ
Ｍ、０．１ｍＭ、１ｍＭそれぞれで、３．５±０．９、
３．４±０．５、４．４±０．７であった。コントロー
ルの生食のみの群では１．４±０．３であった。これに
対しｂＦＧＦと本化合物の同時添加群ではｂＦＧＦ＋本
化合物０．０１ｍＭの場合８．１±１．１、ｂＦＧＦ＋
本化合物０．１ｍＭの場合８．５±０．８、ｂＦＧＦ＋
本化合物１ｍＭの場合９．３±０．５であり、本化合物
によりｂＦＧＦの血管新生は相乗的に増強されることが
わかった。本化合物はまたインビボの創傷治癒効果もあ
り、インビトロの知見と対応しており、本実験法は創傷
治療剤スクリーニング方法として優れていることが認識
された。

【００５５】実施例３１血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）は繊維芽細胞や血管平
滑筋細胞（ＳＭＣ）の増殖を促進する因子として、血小
板、ＳＭＣ、血管内皮細胞、単球や形質転換細胞などか
ら見つかっている（Kondo et al.: J.Biol.Chem.; 268:
4458-,1993など）。ＰＤＧＦはＡ鎖とＢ鎖からなるホモ
またはへテロ二量体を形成し、細胞の増殖や遊走に関与
することで、障害の修復において重要な役割を担ってい
る（Rosset al.: J.Biol.Chem.; 267: 22806-, 1992な
ど）。

【００５６】バルーンカテーテルでラット動脈内皮細胞
を剥離すると、管壁の損傷部位に血小板が付着し、その
α顆粒よりトロンビン、セロトニン、ＰＤＧＦなどが放
出される（McNamara et al: J. Clin. Invest.; 91: 94
-, 1993）。また傷害付近のフェノタイプが収縮型から
合成型に変化したＳＭＣは、上記の因子により増殖と遊
走が誘導される（Fanger et al.: Circ. Res.; 77: 645
-, 1995）。このときトロンビンは、ＳＭＣ中のＰＤＧ
Ｆ−Ａ鎖ｍＲＮＡ転写を一過性に誘導し、ＰＤＧＦ受容
体ｍＲＮＡの発現量を一過性に減少させる（Okazaki et
al.: Circ. Res.; 71: 1285-, 1992）。培養フラスコ
中で培養したＳＭＣは合成型のフェノタイプを示し、ト
ロンビンを添加した場合バルーンカテーテルによる損傷
時と同様な変動がＰＤＧＦ−Ａ鎖ｍＲＮＡ及びＰＤＧＦ
受容体ｍＲＮＡの発現に認められる（Okazaki et al.;
上掲）。一方、ラット培養ＳＭＣ中では、長さの異なる
３種類のＰＤＧＦ−Ａ転写物（２．９ｋｂ、２．３ｋ
ｂ、１．７ｋｂ）が認められ、それぞれの転写物の誘導
の強さはトロンビンあるいはセロトニンを添加した場合
で異なる結果が得られている（Okazaki et al;上掲）。
以上の背景から、ラット培養ＳＭＣを用いて損傷回復中
の血管で働くＰＤＧＦ−Ａ分子種のトロンビンあるいは
セロトニンによる発現誘導への本発明化合物の併用効果
を検討した。

【００５７】血管平滑筋細胞（ＳＭＣ）培養ＳＭＣは Ross & Klebanoff（J. Cell. Biol.; 50: 159
-, 1971）の方法を部分的に変えて調製した。ラット胸
部大動脈を摘出し、外膜を剥がした後、中膜・内膜を２
〜３ｍｍ²に細切した。１０％ＦＢＳ、８０ｎｇ／ｍｌ
ゲンタマイシン（Schering-Plough）を含む Waymouth's
MB 752/1 medium を入れたフラスコ（２５ｃｍ²）に細
切した切片を静置し、３７℃、５％炭酸ガス存在下２〜
３週間培養した（初代培養）。フラスコからＳＭＣを、
トリプシン−ＥＤＴＡ solution （１×）を加え、３７
℃で５分間処理して細胞を剥がした後、１０％ＦＢＳ−
Waymouth's MB 752/1 medium で希釈し植え継いだ（２
代）。ＳＭＣがコンフルエントになる毎に同様に植え継
ぎ、以下の実験では５代から１２代までの細胞を用い
た。

【００５８】トロンビン、セロトニンの添加条件培養ＳＭＣは、コンフルエントになった後、血清の影響
を防ぐため、２日間無血清培地で培養し、トロンビン
（１．０Ｕ／ｍｌ）またはセロトニン（５μＭ）を加
え、ＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡの誘導が最大となる６時間
３７℃インキュベートした。リボソームとｍＲＮＡの解
離を防ぐ目的で、細胞を集める５分前にシクロヘキシミ
ド（１００μｇ／ｍｌ）を添加した。

【００５９】ポリソーム画分の調製ポリソーム画分の調製およびＲＮＡ抽出は、Kasper et.
al.（J, Biol.Chem.;267: 508-,1992）の方法に若干の
変更を加えて行った。トリプシン処理により集めた細胞
をシクロヘキシミド（１００μｇ／ｍｌ）を含むＰＢＳ
で洗った後、細胞の沈殿に５００μｌの high-salt lys
is buffer（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．
５、２５０ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、０．
１％ＮｏｎｉｄｅｔＰ−４０、０．２％ＤＯＣ）
を加え、ホモジナイズした。これを、１２，０００×ｇ
で１０分間、４℃で遠心分離し、得た上清に６７μｌの
Heparine mix（７．４ｍｇ／ｍｌ heparine、１．１Ｍ
ＮａＣｌ、１５ｍＭＤＴＴ、ＲＮａｓｉｎ）を加え
た。２００μｌを０．５Ｍから１．２５Ｍの蔗糖密度勾
配（２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．４、１０ｍ
ＭＮａＣｌ、３ｍＭＭｇＣｌ₂を含む）５ｍｌにの
せ、４５，０００ｒｐｍで９０分間（日立ＲＰ５５Ｓ
Ｔ）遠心分離した後、２６０ｎｍの吸光度でモニターし
て、１０本のフラクションに分取した。ＲＮＡ抽出用の
サンプルには各フラクションに、ＳＤＳとプロテインナ
ーゼＫを最終濃度が１％および０．２ｍｇ／ｍｌになる
ようにそれぞれ加えて３７℃で１時間インキュベートし
た後、１／２量のフェノール、続いて１／２量のクロロ
ホルムの抽出を２回、等量のクロロホルムの抽出を１回
行い、タンパク質を除いた。水層に共沈剤としてグリコ
ーゲンを２０μｇ／ｍｌ加え、酢酸ナトリウムを０．０
３Ｍ加え、２倍量のエタノールでＲＮＡを沈殿させた。

【００６０】ノーザンブロット分析ＲＮＡは６０％ホルムアミド、５．９％ホルムアルデヒ
ド、１×ＭＯＰＳ Buffer（１０ｍＭＭＯＰＳｐＨ
７．０、４ｍＭＮａＯＡｃ、０．５ｍＭＥＤＴＡ）
を含む溶液中で６５℃、５分間インキュベートを行った
後、１×ＭＯＰＳ Bufferを含む１．２％アガロースゲ
ルで電気泳動を行い分離した。ゲルを２０×ＳＳＣで洗
浄した後、キャピラリー法によりＲＮＡを Gene Screen
Plus メンブレンへ一晩ブロッティングした。ＲＮＡの
固定は１５Ｗ殺菌灯を１０ｃｍの距離で１分間照射して
行った。ハイブリダイゼーションは QuickHyb Hybridiz
ation Solution（Strategene）を用い添付インストラク
ションマニュアルに従い行った。オートラジオグラフィ
ーの結果は NIH Image により定量化した。

【００６１】ラットＳＭＣ中のＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡ
発現及び翻訳に対する２−ピペラジノ−６−メチル−５
−オキソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［３，４−
ｄ］ピリミジンマレイン酸塩の効果ＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡの発現に与える２−ピペラジノ
−６−メチル−５−オキソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）ピ
ロロ［３，４−ｄ］ピリミジンマレイン酸塩の影響を調
べるために、ラット培養ＳＭＣに、セロトニンまたはト
ロンビンの存在下、本化合物を終濃度０．１ｍＭになる
ように添加し、ノーザン分析を行った。トロンビン、セ
ロトニン、本化合物単独添加による１．７ｋｂのＰＤＧ
Ｆ−ＡｍＲＮＡの発現量は、それぞれ無血清培地の対照
と比べて１．５倍、１．７倍、１．４倍であった。本化
合物をトロンビンと併用すると、トロンビン単独処理に
比べて４．５倍量の、セロトニンとの併用ではセロトニ
ン単独処理に比べて１．６倍量のＰＤＧＦ−ＡｍＲＮ
Ａがそれぞれ認められた。また、トロンビンと本化合物
を併用することにより、２．３ｋｂ、２．９ｋｂｍＲＮ
Ａ量も増加した。

【００６２】以上の結果より、本化合物はトロンビンあ
るいはセロトニンによる情報伝達機構を促進する可能
性、あるいはＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡの分解を阻害する
可能性が示された。また本化合物を添加することによ
り、新たに１．３ｋｂのＰＤＧＦ−Ａ（−）ＲＮＡプ
ローブとハイブリダイズしたバンドが検出された。この
ことは、本化合物がＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡのスプライ
シングに影響を及ぼす可能性を示している。

【００６３】本化合物がＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡ翻訳へ
与える影響を調べるため、ＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡのポ
リソーム分布を調べた。無血清培地のときに発現してい
た１．７ｋｂのｍＲＮＡは、ほとんどが非翻訳状態であ
ったのに対して、本化合物を添加することにより翻訳状
態に移行した。本化合物の添加により発現が誘導された
１．３ｋｂのｍＲＮＡも翻訳状態にあった。トロンビン
単独添加の細胞では１．７ｋｂ、２．３ｋｂ、２．９ｋ
ｂのｍＲＮＡは全て、翻訳状態と非翻訳状態の両方であ
ったのに対し、トロンビンと本化合物を併用した細胞で
は、翻訳状態に移行した。セロトニン単独添加の細胞で
は、誘導された３種のｍＲＮＡは全て翻訳状態にあっ
た。前項の結果と考え合わせると本化合物が特異的にＰ
ＤＧＦ−ＡｍＲＮＡの翻訳を促進することで、ＰＤＧＦ
−ＡｍＲＮＡの安定性が増し、細胞内のＰＤＧＦ−Ａ
量が増加した可能性が示された。

【００６４】ＳＭＣのＰＤＧＦ−Ａ合成に対する本化合
物の影響ＳＭＣにおける本化合物のＰＤＧＦ−Ａ蛋白合成への影
響を［³⁵ Ｓ］メチオニンでラベルした細胞の細胞質画分
を抗ヒトＰＤＧＦ−ＡＡ抗体（コスモバイオ（株））を
用いた免疫沈殿で検討した。本化合物を添加した細胞で
は、セロトニン、トロンビンの存在下及び非存在下いず
れにも、８時間後から約１６ｋＤａ付近のバンドが見ら
れた。本化合物を添加していない細胞では１０時間後か
ら、１６ｋＤａのバンドが検出された。以上の結果か
ら、本化合物がＰＤＧＦ−ＡｍＲＮＡの翻訳を促進す
ることが示された。

【００６５】以上本実験より、本化合物はＰＤＧＦ−Ａ
の転写後の段階で働きＳＭＣ中のトロンビンあるいはセ
ロトニンを介した、血管修復に働くＰＤＧＦ−Ａの誘導
を早めることが示された。

【００６６】実施例３２胃十二指腸潰瘍を代表とする消化性潰瘍疾患において、
胃粘膜等の障害の発生、修復の過程は、攻撃因子、防御
因子などの面より主にラットなどを用いたインビボの実
験モデルにより検討されてきたが、インビボモデルにお
いては、その関与する要素が多様で実験系が複雑にな
り、個々の系に関わる要素の解析が困難である。培養細
胞を用いたインビトロの系では実験系を単純化し、各レ
ベルで単一の要素を検討することが可能である。そこで
Watanabeらの開発した初代培養胃粘膜細胞を用いた新し
い損傷修復モデル（Gastroenterology: 104; A222, 199
3）で本発明化合物の活性を検討した。

【００６７】初代培養胃粘膜細胞は体重２ｋｇの家兎胃
粘膜を機械的に剥離、細切し、０．０７％のコラゲナー
ゼ消化法により作製し、３．３×１０⁵個／ｍｌの細胞
濃度でＦ−１２培養液に１０％胎児牛血清を添加して培
養した。この際、培養皿（６０ｍｍ）にはＩ型コラーゲ
ンをコートしたものを用いた。培養後４８時間で完全に
コンフルエント・セル・シートになったのを確認後、一
定面積（約２ｍｍ²）の円形の人工的損傷をセル・シー
ト上に機械的に作製し、実験に供した。損傷の修復過程
は位相差顕微鏡に接続したtime-lapse ＶＴＲ装置で９
０秒ごとに１フレームの画像を取り込み、３７度、５％
ＣＯ₂の条件下で連続記録し、１２時間ごとの人工的損
傷領域の面積を画像解析装置を用いて計測した。細胞の
増殖能を検討するため損傷作製後、１２時間ごとにＢｒ
ｄＵを添加、培養し、抗ＢｒｄＵ抗体を用いてＳ期の細
胞を染色し増殖細胞を同定した。この過程はＰＮＣＡ染
色によってもほぼ同様の結果が期待できる。

【００６８】人工損傷を加えた直後に、ＥＧＦ（１〜１
０ｎｇ／ｍｌ）と０．０１〜０．１ｍＭの２−ピペリジ
ノ−７−メチル−６−オキソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）
ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンマレイン酸塩［化合物
Ａ］あるいは０．０１〜０．１ｍＭの２−ピペラジノ−
６−メチル−５−オキソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）ピロ
ロ［３，４−ｄ］ピリミジンマレイン酸塩［化合物Ｂ］
とをそれぞれ単独であるいは混合して、無血清にした胃
粘膜細胞培養液に加え、修復過程への効果を上記のパラ
メーターで測定した。ＥＧＦは細胞の遊走と増殖を濃度
依存的に促進し、修復の速度を加速した。化合物Ａおよ
びＢはともに、ＥＧＦが共存しないと修復効果を示さな
かったが、ＥＧＦ−誘導の細胞修復の加速を濃度依存性
に更に促進した。対照群と薬物群のそれぞれにつき０時
間、１２時間、２４時間、３６時間、４８時間の損傷領
域の面積をこの順で以下に示す。

【００６９】対照群、各濃度の薬物群いずれもｎ＝５
で、結果を（平均値±ＳＤ）ｍｍ²で示す。対照群に対
して有意差検定を行い、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜
０．０１、＊＊＊はｐ＜０．００１であった。またＥＧ
Ｆ１０ｎｇ／ｍｌに対して有意差検定を行い、＋はｐ＜
０．０５、＋＋はｐ＜０．０１であった。

【００７０】［対照群：2.07±0.06、1.06±0.04、0.49
±0.03、0.26±0.03、0］［ＥＧＦ10ng/ml群：2.06±0.06、0.91±0.03***、0.46
±0.15、0.08±0.04***、0］［ＥＧＦ+0.01mM化合物Ａ群：2.06±0.05、0.72±0.3
6、0.39±0.04**、0.05±0.04***、0］［ＥＧＦ+0.1mM化合物Ａ群：2.08±0.08、0.80±0.04**
*,++、0.24±0.05***,+、0***,+、0］［ＥＧＦ+0.01mM化合物Ｂ群：2.06±0.04、0.92±0.05*
*、0.38±0.05**、0.07±0.04***、0］［ＥＧＦ+0.1mM化合物Ｂ群：2.06±0.04、0.83±0.05**
*,+、0.29±0.07、0***,+、0］

【００７１】この知見より本発明化合物の添加・併用に
より、ＥＧＦの胃粘膜損傷修復作用が増強されることが
明らかになった。また、ＨＧＦ、ＴＧＦ−α、インスリ
ン、ミッドカインなど他の増殖因子と本発明化合物の併
用によっても、同様の修復促進増強効果が観察された。
本発明化合物はまたインビボの消化性潰瘍の修復効果も
あり、インビトロの知見と対応しており、本実験法は創
傷治療剤スクリーニング法として優れていることが認識
された。

【００７２】実施例３３ネンプタール麻酔下にウィスターラット（２６０〜３３
０ｇ）の脛骨を徒手的に骨折させ、２２Ｇの注射針を髄
内釘として用いて骨折部を内固定した。ラットを２群に
分け、１群には２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキ
ソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［３，４−ｄ］ピリ
ミジンマレイン酸を５ｍｇ／ｋｇ、骨折直後より毎日１
日１回、７日間腹腔内に投与し、対照群には生食を同様
に投与した。両群とも７日目に屠殺し、脱灰・パラフィ
ン包埋後ＨＥ染色を行い、骨折部組織を病理組織学的に
検討した。対照群では骨折後７日目には、骨折部を中心
に骨膜細胞由来と考えられる間葉系細胞の増殖と類骨組
織からなる仮骨形成を認め、その内部には軟骨基質の形
成を伴った少数の軟骨細胞の巣状の増殖が観察された。
一方、５ｍｇ／ｋｇの本発明化合物を連日投与した群の
骨折後７日目の組織学的所見では、骨折部には骨膜細胞
由来と考えられる間葉系細胞の著明な増殖が観察され、
その内部には対照群と比較して明らかに大量の硝子軟骨
基質の形成を伴った軟骨細胞の増殖が観察された。

【００７３】実施例３４ｂＦＧＦの誘導による硝子軟骨形成が観察できるラット
骨孔モデルを作製し、インビボにおける軟骨形成に対す
る２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキソ−５，６ジ
ヒドロ（７Ｈ）ピロロ［３，４−ｄ］ピリミジンマレイ
ン酸の作用について詳細に検討した。このモデルで骨孔
内にｂＦＧＦ含有ペレットを包埋することにより、骨孔
周囲の骨膜下に硝子軟骨の形成がよく観察できる。ラッ
トを３群に分け、作製した骨孔（直径２．６ｍｍ）内に
ｂＦＧＦ（０．５μｇ）あるいはｂＦＧＦ（０．５μ
ｇ）＋本発明化合物（０．５ｍｇ）含有ハイドロキシエ
チルメタアクリレートペレット（１０ｍｇ）を包埋し、
一方対照群には生理食塩水を含有したペレットを包埋
し、ともに７日後に屠殺後、骨孔周囲の軟骨形成過程に
及ぼすｂＦＧＦあるいは本発明化合物の作用を検討し
た。骨孔作製後７日目に脛骨骨孔周囲を組織学的に検索
したところ、対照群では骨孔内に類骨組織の形成のみが
認められただけであったが、ｂＦＧＦ含有ペレットを包
埋した骨孔周囲には対照群と比較して、周囲の骨膜下に
少量の硝子軟骨の形成が観察された。さらにｂＦＧＦ＋
本発明化合物含有ペレット包埋群では、骨孔周囲の硝子
軟骨の量がｂＦＧＦ含有ペレット包埋群と比較して明ら
かに増加していた。以上の結果から、本発明化合物が骨
折治癒過程において骨折部組織に対するｂＦＧＦの作用
を増強することにより内軟骨性骨化を促進・誘導してい
ることが示された。

【００７４】実施例３５皮膚・筋切断・縫合ラットモデルにおいて、コラーゲン
の形成が治癒過程において重要な意味を持つことが明ら
かになっている。このモデルに特異的なものとしてコラ
ーゲン繊維が筋繊維と直角に交差するように板状構造を
形成し、その板上にマクロファージがが集積する。この
板状コラーゲンは、筋繊維の両切断端の解離を防ぎ ana
stomosis の形成を助ける働きをするものと考えられて
いる。さらに、この板状コラーゲン形成とマクロフアー
ジ集積の促進に２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキ
ソ−５，６ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［３，４−ｄ］ピリ
ミジンマレイン酸が有効に作用する可能性を示唆する知
見が走査型電子顕微鏡観察で得られた。

【００７５】実施例３６劇症肝炎では血中ＨＧＦ濃度が高値であるにも拘わらず
肝再生不全が生じることから、増殖因子の効果を増強す
る薬物が望まれる。本化合物の肝疾患治療剤としての活
性を、ラット初代培養細胞及び伊東（星）細胞を用いて
検討した。ＳＤ系２００ｇ前後の雄性ラットをコラーゲ
ナーゼを含む生食による潅流法によりと殺し、直ちに肝
細胞を採取し、５．０×１０⁴／ｃｍ²となるようにプレ
ートにまき、培養を開始し、２時間後に培養液を変え、
２４時間後に２−ピペリジノ−７−メチル−６−オキソ
−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［２，３−ｄ］ピリ
ミジンマレイン酸塩を添加するかまたは添加せずにＥＧ
Ｆ５０ｎｇ／ｍｌと［³Ｈ］−ロイシン１μＣｉ／
ｍｌを加えた。一方別のプレートには２４時間後に本化
合物を添加するかまたは添加せずにＥＧＦ５０ｎｇ／
ｍｌを加え、さらに４６時間後に［³Ｈ］−チミジン
２μＣｉ／ｍｌを加えた。４８時間後に各培養液を吸
引濾過し、ハーベストし、トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）溶
液を加えて、ＴＣＡ沈殿を得てペレットにした。

【００７６】［³Ｈ］−チミジンを加えた方のペレット
は、０．１ＮＮａＯＨにて溶解し、液体シンチレータ
ーに入れ、シンチレーションカウンターにて、細胞のＤ
ＮＡ合成量を測定した。また同様に［³Ｈ］−ロイシン
を加えたペレットは、７０℃でボイルし、可溶成分を抽
出し、再度ＴＣＡを加え、ＴＣＡ沈殿を得て、０．１Ｎ
ＮａＯＨで溶解し、液体シンチレーターに入れ、シン
チレーションカウンターにて細胞のタンパク合成量を測
定した。

【００７７】一方、ＳＤ系３００ｇ前後の雄性ラットを
コラーゲナーゼおよびプロナーゼを含む生食による潅流
法によりと殺し、伊東（星）細胞を採取し、１．２５×
１０⁵／ｃｍ²となるようにプレートにまき、培養を開始
し、６日間培養して、上記と同様にして、ハーベストの
２４時間前に本化合物と［³Ｈ］−ロイシンを加え、別
のプレートにはハーベストの２４時間前に本化合物を、
また２時間前に［³Ｈ］−チミジンを加え、ＤＮＡ合成
量及びタンパク合成量を測定した。また、伊東細胞を６
日間培養後、本化合物とｂ−ＦＧＦ１０ｎｇ／ｍｌを
加え、３０分間培養した後、０．１ｍＭアスコルビン酸
と０．５ｍＭβ−アミノプロピオニトリルフマール酸塩
を添加してさらに１時間培養し、［２，３−³Ｈ］−プ
ロリン１０μＣｉ／ｍｌを加え、２４時間培養した。つ
いで培地と細胞とに分け、ＴＣＡ沈殿を作製した。０．
１ＮＮａＯＨにて溶解後、細菌性コラーゲナーゼにて
インキュベートし、ＴＣＡ−タンニン酸にて反応停止後
ペレットを作製し、上清成分を液体シンチレーターに入
れ、シンチレーションカウンターにて測定した。

【００７８】ＥＧＦ添加時おける肝細胞のＤＮＡ合成
は、１０μＭの本化合物共存下で有意に増加した。その
際、アルブミンのｍＲＮＡ発現及び培養上清中濃度には
変化が見られなかった。また、ＥＧＦ非添加では本化合
物によるＤＮＡ合成促進は認められなかった。星細胞に
おけるＤＮＡ及びコラゲン合成は、ｂ−ＦＧＦの有無に
拘わらず、１から１００μＭまでの本化合物添加では量
依存性に低下した。α２−平滑筋アクチン（αＳＭ）の
発現は、ｂ−ＦＧＦ非存在下では本化合物添加で低下し
た。ｂ−ＦＧＦ存在下ではαＳＭの発現が低下したが、
本化合物の添加により量依存性に回復した。

【００７９】このように本化合物は肝細胞に対してｃｏ
ｍｉｔｏｇｅｎとして作用するが、アルブミン合成は変
化させず、星細胞の増殖とコラゲン合成は抑制した。ｂ
−ＦＧＦは星細胞のαＳＭ発現を抑制することも判明し
た。本化合物は肝疾患での線維化を抑制し、肝細胞の増
殖を促進する治療薬となる可能性が示唆された。

【００８０】実験例１本発明の化合物を雄性ｄｄｙ系５週令マウスおよび雄性
ウィスター系８週令ラットに経口投与し、２４時間後に
毒性を判定したが、それぞれの化合物はマウスにおい
て、ＬＤ５０値が、＞１０００ｍｇ／ｋｇないし５５０
〜１０００ｍｇ／ｋｇであり、ラットにおいても＞１７
００ｍｇ／ｋｇないし５５０〜１０００ｍｇ／ｋｇであ
り、一般に毒性が弱い、安全性の高い薬剤と考えられ
た。個々の値については既に公開ないし登録された本発
明者らの特許出願した明細書に記載されている。

【００８１】

【発明の効果】以上のように本発明により見いだされた
創傷治療剤のスクリーニング方法は極めて簡便で優れた
ものであり、この方法により見いだされた化合物は創傷
治療剤としての用途に優れ、また特に増殖・分化因子、
成長ホルモン、サイトカイン類と併用する場合に治癒効
果が大きい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/557 Ａ６１Ｋ 31/557 38/00 Ｃ０７Ｄ 487/04 １４０ 38/22 Ａ６１Ｋ 37/02 38/28 37/24 38/27 37/26 38/46 37/36 Ｃ０７Ｄ 487/04 １４０ 37/54 //(Ｃ０７Ｄ 487/04 207:38 239:42） (72)発明者冨野郁夫山口県玖珂郡和木町和木六丁目１番２号三井石油化学工業株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】増殖・分化因子、成長ホルモンまたはサ
イトカイン類の生物活性を増強または修飾する活性を持
つことを特徴とする物質を有効成分とする創傷治療剤。
【請求項２】有効成分である物質がピリミジン類誘導
体またはその薬学的に許容される塩類である請求項１の
創傷治療剤。
【請求項３】式（１）または式（２）のピリミジン類
誘導体またはその薬学的に許容される塩類を有効成分と
する創傷治療剤。【化１】（式（１）または式（２）において、Ｒ_１からＲ_８は独
立に水素または低級アルキル基、ＣＨ_３ＯＣＨ_２ＣＨ_２
−、−ＣＨ_２ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＣＨ_３、−ＣＯＣ_２Ｈ
_５、−ＣＨ_２ＯＣＯＣ_２Ｈ_５を、Ｘは＞ＮＨ、＞Ｎ−Ｃ
Ｈ_３、＞Ｎ−Ｃ_２Ｈ_５、＞Ｎ−ｐｈ、＞Ｎ−ＣＨ_２−ｐ
ｈ、＞Ｎ−ＣＨ−ｐｈ_２、＞Ｎ−ＣＯＣＨ_３、＞Ｎ−Ｃ
ＯＯＣ_２Ｈ_５、＞Ｎ−ＳＯ_２ＣＨ_３、＞ＣＨ_２、＞ＣＨ
ＣＨ_３、＞ＣＨＣ_２Ｈ_５、−Ｏ−、−Ｓ−を示す。ただ
し、ｐｈはフェニル基を示す。）
【請求項４】ピリミジン類誘導体が式（１）または式
（２）で表される請求項２の創傷治療剤。
【請求項５】２−ピペラジノ−６−メチル−５−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［３，４−ｄ］ピ
リミジンマレイン酸塩または他の塩を有効成分として
含有することを特徴とする創傷治療剤。
【請求項６】２−ピペリジノ−７−メチル−６−オキ
ソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ［２，３−ｄ］ピ
リミジンマレイン酸塩または他の塩を有効成分として
含有することを特徴とする創傷治療剤。
【請求項７】２−（４−エチルピペリジノ）−７−メ
チル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジンマレイン酸塩または他の塩
を有効成分として含有することを特徴とする創傷治療
剤。
【請求項８】２−ピペリジノ−５，５，７−トリメチ
ル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ（７Ｈ）ピロロ
［２，３−ｄ］ピリミジンマレイン酸塩または他の塩
を有効成分として含有することを特徴とする創傷治療
剤。
【請求項９】有効成分としてさらに増殖・分化因子、
成長ホルモンまたはサイトカイン類を含有する請求項
１，２，３または４の創傷治療剤。
【請求項１０】増殖・分化因子、成長ホルモンまたは
サイトカイン類が上皮増殖因子（ＥＧＦ）、酸性線維芽
細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子
（ｂＦＧＦ）、その他のＦＧＦ類、トランスフォーミン
グ増殖因子（ＴＧＦ）α，β等各型、内皮細胞増殖因子
（ＶＥＧＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、血小
板由来血管内皮細胞増殖因子（ＰＤ−ＥＣＧＦ）、骨増
殖因子（ＢＭＰ）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ミッド
カイン（Ｍｉｄｋｉｎｅ）、ＴＮＦ（ｔｕｍｏｒｎｅ
ｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ）、インスリン、インスリ
ン様増殖因子（（ＩＧＦ−Ｉ，ＩＩ等）、ケラチノサイ
ト成長因子、内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）、線維芽細
胞由来上皮細胞増殖因子、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、Ｇ
Ｍ−ＣＳＦ、ＴＰＯ、ＬＩＦ、ＳＣＦ、ＥＰＯ、ＡＤ
Ｆ、ＭＩＰ−１α、トランスフェリン、トロンビン、ト
ロンボモジュリン、インターロイキン−１（ＩＬ−
１）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロ
イキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−８（ＩＬ
−８）、ヘパリン遊離因子（ＨＲＦ）、単球走化性活性
化因子、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲ
Ｐ）、ＳＯＤ、アンジオテンシン、プロスタグランジン
類、セロトニン、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミ
ニンまたはその同族体である請求項１または９の創傷治
療剤。
【請求項１１】有効成分としてさらにＥＧＦまたはそ
の同族体を含有する請求項５、６、７または８の創傷治
療剤。
【請求項１２】有効成分としてさらにｂＦＧＦまたは
その同族体を含有する請求項５、６、７または８の創傷
治療剤。
【請求項１３】有効成分としてさらにミッドカインま
たはその同族体を含有する請求項５、６、７または８の
創傷治療剤。
【請求項１４】増殖・分化因子、成長ホルモンまたは
サイトカイン類の生物活性を増強または修飾することが
創傷治療剤として有効であると判定する創傷治療剤のス
クリーニング方法。