JPH09293A - カロチノイド類縁体の製造方法 - Google Patents
カロチノイド類縁体の製造方法Info
- Publication number
- JPH09293A JPH09293A JP15503795A JP15503795A JPH09293A JP H09293 A JPH09293 A JP H09293A JP 15503795 A JP15503795 A JP 15503795A JP 15503795 A JP15503795 A JP 15503795A JP H09293 A JPH09293 A JP H09293A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carotenoid
- culture
- production
- carotene
- lycopene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 カロチノイド類縁体の効率的な生産。バシラ
ス アルベイ（Bacillus alvei）DC-1を、光照射しなが
ら培養し、培養した培養物からカロチノイド類縁体を抽
出する工程を含む、カロチノイド類縁体の製造方法。
ス アルベイ（Bacillus alvei）DC-1を、光照射しなが
ら培養し、培養した培養物からカロチノイド類縁体を抽
出する工程を含む、カロチノイド類縁体の製造方法。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、制ガン作用を有するカ
ロチノイド類縁体の製造方法に関する。
ロチノイド類縁体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】カロチノイドは、自然界に広く存在する
天然色素であり、その種類は500-600種類にも上ると言
われている。カロチノイドは、植物あるいは微生物で生
合成され、食品、飼料、化粧品、医薬品等の分野に広く
用いられている。
天然色素であり、その種類は500-600種類にも上ると言
われている。カロチノイドは、植物あるいは微生物で生
合成され、食品、飼料、化粧品、医薬品等の分野に広く
用いられている。
【０００３】近年、その生理機能あるいは生理作用が明
らかにされつつある。例えば、ビタミンＡに変換される
プロビタミンＡとしての機能、抗酸化作用（フリーラジ
カルの捕捉、スーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉
あるいは一重項酸素に対するクエンチャー効果等）、あ
るいは抗腫瘍活性等が注目されている（化学と生物28
巻、219-227 (1990））。カロチノイドの一種であるリ
コピンは優れた抗酸化作用を有する点で注目されてい
る。
らかにされつつある。例えば、ビタミンＡに変換される
プロビタミンＡとしての機能、抗酸化作用（フリーラジ
カルの捕捉、スーパーオキシドアニオンラジカルの捕捉
あるいは一重項酸素に対するクエンチャー効果等）、あ
るいは抗腫瘍活性等が注目されている（化学と生物28
巻、219-227 (1990））。カロチノイドの一種であるリ
コピンは優れた抗酸化作用を有する点で注目されてい
る。
【０００４】このような多岐にわたる機能を有するカロ
チノイドの製造法として、植物からの抽出が考えられ
る。しかし、この方法では、生産性および安定供給には
限界がある。そこで、微生物の培養により生産される研
究が行われている。例えば、食品と科学、第10巻 52-57
（1994年）には、Blakeslea trispora、およびRhodotor
ulla glutinis を使用して、β-カロチンを生産した例
が記載されており、J. Bac. 147巻 900-913頁(1981)に
は、Staphylococcus aureusによるカロチノイドの生産
が記載されている。上記リコピンの微生物生産に関して
は、BiotechnologyLetters 10巻 609頁(1988年)に記載
されている。
チノイドの製造法として、植物からの抽出が考えられ
る。しかし、この方法では、生産性および安定供給には
限界がある。そこで、微生物の培養により生産される研
究が行われている。例えば、食品と科学、第10巻 52-57
（1994年）には、Blakeslea trispora、およびRhodotor
ulla glutinis を使用して、β-カロチンを生産した例
が記載されており、J. Bac. 147巻 900-913頁(1981)に
は、Staphylococcus aureusによるカロチノイドの生産
が記載されている。上記リコピンの微生物生産に関して
は、BiotechnologyLetters 10巻 609頁(1988年)に記載
されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの培養
生産による生産量は非常に低く、効率の良い生産法が望
まれている。
生産による生産量は非常に低く、効率の良い生産法が望
まれている。
【０００６】本発明は、上記問題点を解決し、カロチノ
イド類縁体の生産を効率よく生産することを目的とす
る。
イド類縁体の生産を効率よく生産することを目的とす
る。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、バシラス ア
ルベイ（Bacillus alvei）DC-1を培養して、培養物を得
る工程、および該培養した培養物からカロチノイド類縁
体を抽出する工程を含む、カロチノイド類縁体の製造方
法に関する。
ルベイ（Bacillus alvei）DC-1を培養して、培養物を得
る工程、および該培養した培養物からカロチノイド類縁
体を抽出する工程を含む、カロチノイド類縁体の製造方
法に関する。
【０００８】好適な実施態様においては、培養中に光照
射をすることをさらに含む製造方法である。
射をすることをさらに含む製造方法である。
【０００９】好適な実施態様においては、6000-7000ル
クスの光を照射して培養する製造方法である。
クスの光を照射して培養する製造方法である。
【００１０】好適な実施態様においては、製造されるカ
ロチノイド類縁体がβ-カロチンである。
ロチノイド類縁体がβ-カロチンである。
【００１１】好適な実施態様においては、製造されるカ
ロチノイド類縁体がリコピン誘導体である。
ロチノイド類縁体がリコピン誘導体である。
【００１２】上記により、本願発明の目的が達成され
る。
る。
【００１３】以下、本発明を説明する。
【００１４】本明細書で、カロチノイド類縁体とは、一
般的にカロチノイドと総称される物質をいい、β-カロ
チン、リコピンおよびこれらの誘導体を含む概念であ
る。
般的にカロチノイドと総称される物質をいい、β-カロ
チン、リコピンおよびこれらの誘導体を含む概念であ
る。
【００１５】本発明に使用する微生物は、バシラス ア
ルベイ（Bacillus alvei）DC-1（以下、B.alvei DC1と
いう）である。この微生物は、大阪府の土壌から採取さ
れた微生物であり、工業技術院生命工学工業技術研究所
に受託番号（FERM P-14985)として、平成７年６月14日
に寄託されている。この微生物の菌学的性質は以下の通
りである。
ルベイ（Bacillus alvei）DC-1（以下、B.alvei DC1と
いう）である。この微生物は、大阪府の土壌から採取さ
れた微生物であり、工業技術院生命工学工業技術研究所
に受託番号（FERM P-14985)として、平成７年６月14日
に寄託されている。この微生物の菌学的性質は以下の通
りである。
【００１６】 B.subtilis B. alvei DC-1 グラム染色 ＋ ＋ ＋ 形態 桿菌 短桿菌 短桿菌 細胞のサイズ 0.6-0.65X1.1-1.2 運動性 − − − 胞子形成 − − − 胞子嚢 − ＋ ＋ 嫌気的増殖 − ＋ ＋ 酵素活性 カタラーセ゛ ＋ ＋ ＋ オキシダーゼ ＋ ＋ ＋ ウレアーゼ ＋ ＋ ＋ O-Fテスト − Ｆ Ｆ V-Pテスト ＋ ＋ ＋ 酸生産 D-グルコース ＋ ＋ ＋ L-アラビノース ＋ − − D-キシロース ＋ − − D-マンニトール ＋ − − 硝酸還元 ＋ − − インドール形成 − ＋ ＋ シ゛ヒト゛ロキシアセトン形成 − ＋ ＋ 加水分解 澱粉 − ＋ ＋ カゼイン ＋ ＋ ＋ ゼラチン ＋ ＋ ＋ 増殖 pH6.8 Nutirent Broth ＋ ＋ ＋ pH5.7 Nutirent Broth ＋ − − ＤＮＡのG+C含量（％） 42.9 44.6 45.0 上記微生物 B.alvei DC1を培養する培地としては資化可
能な炭素源、窒素源、および無機物を有する培地であれ
ば、いずれをも使用し得る。
能な炭素源、窒素源、および無機物を有する培地であれ
ば、いずれをも使用し得る。
【００１７】炭素源としては、グルコース、マルトー
ス、澱粉、デキストリン、マンノース、フルクトース、
シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノー
ス、マンニトールあるいは糖蜜などの糖類、酢酸、琥珀
酸等の有機酸、メタノール、エタノール、グリセロール
等のアルコール類、ヘプタン、n-ヘキサデカン、テトラ
デカン等の炭化水素などが挙げられる。これらの炭素源
は単独であるいは組み合わせて用いられ得る。
ス、澱粉、デキストリン、マンノース、フルクトース、
シュクロース、ラクトース、キシロース、アラビノー
ス、マンニトールあるいは糖蜜などの糖類、酢酸、琥珀
酸等の有機酸、メタノール、エタノール、グリセロール
等のアルコール類、ヘプタン、n-ヘキサデカン、テトラ
デカン等の炭化水素などが挙げられる。これらの炭素源
は単独であるいは組み合わせて用いられ得る。
【００１８】窒素源としては、アンモニア水、塩化アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無
機アンモニア類、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、麦芽エキス、バクトカシトーン、コーンスチープリ
カー、大豆粉、カザミノ酸などの有機窒素源が挙げら
れ、これらは単独あるいは組み合わせて用いられ得る。
特に、酵母エキス、ペプトン、バクトカシトーン、麦芽
エキスが好適に使用され得る。
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウムなどの無
機アンモニア類、尿素、ペプトン、肉エキス、酵母エキ
ス、麦芽エキス、バクトカシトーン、コーンスチープリ
カー、大豆粉、カザミノ酸などの有機窒素源が挙げら
れ、これらは単独あるいは組み合わせて用いられ得る。
特に、酵母エキス、ペプトン、バクトカシトーン、麦芽
エキスが好適に使用され得る。
【００１９】無機物としては、食塩、塩化カリウム、硫
酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウ
ム、リン酸水素ニカリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウ
ム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などが挙げられ、
これらは単独または組み合わせて用いられ得る。
酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸二水素カリウ
ム、リン酸水素ニカリウム、硫酸第一鉄、塩化カルシウ
ム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、硫酸銅などが挙げられ、
これらは単独または組み合わせて用いられ得る。
【００２０】B. alvei DC1の培養法としては、通常の培
養方法が用いられるが、液体培養が好適に用いられ得
る。培養温度は１５〜４０℃、好ましくは、２５〜３２
℃、より好ましくは、２８−３１℃である。培養中の培
地のｐＨは、６から１０、好ましくは６．５から７．
５、最も好ましくは、６．９−７．１である。培養中の
ｐＨの調製は、アンモニア水や炭酸アンモニウム溶液な
どを添加して行い得る。
養方法が用いられるが、液体培養が好適に用いられ得
る。培養温度は１５〜４０℃、好ましくは、２５〜３２
℃、より好ましくは、２８−３１℃である。培養中の培
地のｐＨは、６から１０、好ましくは６．５から７．
５、最も好ましくは、６．９−７．１である。培養中の
ｐＨの調製は、アンモニア水や炭酸アンモニウム溶液な
どを添加して行い得る。
【００２１】培養は、通常１〜４日行うが、カロチノイ
ド類縁体の生成量が最大に達したときに培養を停止すれ
ばよい。通常、カロチノイドの含有量は、微生物の増殖
速度にほぼ比例するので、微生物の増殖が対数増殖期の
終期あるいは定常状態になった時に培養を終了させるこ
とが好ましい。
ド類縁体の生成量が最大に達したときに培養を停止すれ
ばよい。通常、カロチノイドの含有量は、微生物の増殖
速度にほぼ比例するので、微生物の増殖が対数増殖期の
終期あるいは定常状態になった時に培養を終了させるこ
とが好ましい。
【００２２】本発明に使用する微生物、B. alvei DC1
に、培養中に光照射をすることにより、カロチノイドの
生産効率を向上させ得る。照射する光は、5、000ー8、000
ルクス、好ましくは、6、000-7、000ルクス、最も好まし
くは、6、500-6、800ルクスである。照射光が弱すぎる
と、効果がなく、強すぎると溶菌する。
に、培養中に光照射をすることにより、カロチノイドの
生産効率を向上させ得る。照射する光は、5、000ー8、000
ルクス、好ましくは、6、000-7、000ルクス、最も好まし
くは、6、500-6、800ルクスである。照射光が弱すぎる
と、効果がなく、強すぎると溶菌する。
【００２３】培養物からのカロチノイドの単離精製は、
当業者が通常使用する方法で行われ得る。培養物を濾
過、あるいは遠心分離して微生物菌体を得る。菌体を、
有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、プロパノ
ール、イソプロパノール等のアルコール、ヘキサン、ベ
ンゼン、クロロホルム、アセトン、工ーテル、酢酸工チ
ルなどの有機溶媒を単独であるいは組み合わせて、抽出
する。クロロホルム、クロロホルムとメタノールの混合
溶媒が、好適に用いられ得る。
当業者が通常使用する方法で行われ得る。培養物を濾
過、あるいは遠心分離して微生物菌体を得る。菌体を、
有機溶媒、例えば、メタノール、エタノール、プロパノ
ール、イソプロパノール等のアルコール、ヘキサン、ベ
ンゼン、クロロホルム、アセトン、工ーテル、酢酸工チ
ルなどの有機溶媒を単独であるいは組み合わせて、抽出
する。クロロホルム、クロロホルムとメタノールの混合
溶媒が、好適に用いられ得る。
【００２４】次いで、この抽出液から、カロチノイド類
縁体を分離、精製する。分離、精製は、まず、抽出液を
濃縮後、適当な有機溶媒（例えば上記の有機溶媒）に再
溶解して、例えば、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬ
Ｃを用いて、行い得る。カラムクロマトグラフィーの例
としては、例えば、活性アルミナ、シリカゲル、イオン
交換樹脂、ゲルろ過等のカラムクロマトグラフィーが挙
げられる。なお、培養、分離、精製中のカロチノイド類
縁体の存在は、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を
用いて確認され得る。
縁体を分離、精製する。分離、精製は、まず、抽出液を
濃縮後、適当な有機溶媒（例えば上記の有機溶媒）に再
溶解して、例えば、カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬ
Ｃを用いて、行い得る。カラムクロマトグラフィーの例
としては、例えば、活性アルミナ、シリカゲル、イオン
交換樹脂、ゲルろ過等のカラムクロマトグラフィーが挙
げられる。なお、培養、分離、精製中のカロチノイド類
縁体の存在は、薄層クロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等を
用いて確認され得る。
【００２５】
【実施例】以下、実施例によリ本発明を更に具体的に説
明するが、本発明の範囲はこれに限定されるものではな
いことはいうまでもない。
明するが、本発明の範囲はこれに限定されるものではな
いことはいうまでもない。
【００２６】（実施例１：培養条件の検討） 1.1 有機窒素源の検討 B. alvei DC1を0.3%ニュートリエントブロス(Nutrient
Broth）、0.5% バクトトリプトン(Bacto-tryptone）pH
7.0 の組成からなる前培養培地で、37℃、24時間培養し
た。この培養液を、OD660＝0.1となるように滅菌水で希
釈し、その200μlを、0.3％ニュートリエントブロスと
以下の表１に示す有機体窒素0.5％とを含む培地（20ml/
100mlフラスコ）に植菌した。このフラスコを、TAITEC
社のBIOPHOTOCHAMBER LX-2100培養槽で、6、666ルクスの
光を照射しながら、24時間、30℃、振とうして、B. alv
ei DC1の培養を行った。培養後、遠心分離（10,000g、
１０分）して集菌し、上清を捨てた。クロロホルム：メ
タノール（１：１ Ｖ／Ｖ）を入れて、よく攪拌し、菌
懸濁液の濃度がOD660＝1.0となるように調整する。これ
を、暗所で、室温、2時間攪拌して抽出する。遠心分離
（10,000g、10分）して上清の抽出液を回収し、無水硫
酸ナトリウムをいれ、しばらく放置し、ろ過して無水硫
酸ナトリウムを除き、エバポレーターで濃縮、乾固さ
せ、アセトン２mlに溶解する。このアセトン溶液を粗カ
ロチノイド類縁体溶液として、含量を測定した。結果を
表１に示す。
Broth）、0.5% バクトトリプトン(Bacto-tryptone）pH
7.0 の組成からなる前培養培地で、37℃、24時間培養し
た。この培養液を、OD660＝0.1となるように滅菌水で希
釈し、その200μlを、0.3％ニュートリエントブロスと
以下の表１に示す有機体窒素0.5％とを含む培地（20ml/
100mlフラスコ）に植菌した。このフラスコを、TAITEC
社のBIOPHOTOCHAMBER LX-2100培養槽で、6、666ルクスの
光を照射しながら、24時間、30℃、振とうして、B. alv
ei DC1の培養を行った。培養後、遠心分離（10,000g、
１０分）して集菌し、上清を捨てた。クロロホルム：メ
タノール（１：１ Ｖ／Ｖ）を入れて、よく攪拌し、菌
懸濁液の濃度がOD660＝1.0となるように調整する。これ
を、暗所で、室温、2時間攪拌して抽出する。遠心分離
（10,000g、10分）して上清の抽出液を回収し、無水硫
酸ナトリウムをいれ、しばらく放置し、ろ過して無水硫
酸ナトリウムを除き、エバポレーターで濃縮、乾固さ
せ、アセトン２mlに溶解する。このアセトン溶液を粗カ
ロチノイド類縁体溶液として、含量を測定した。結果を
表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】なお、カロチノイド類縁体の濃度は、以下
の式により算出した。
の式により算出した。
【００２９】
【数１】
【００３０】表１の結果からは、バクトトリプトンがカ
ロチノイド類縁体の蓄積および増殖に優れていることが
わかった。以降、バクトトリプトンを有機窒素源として
用いた。
ロチノイド類縁体の蓄積および増殖に優れていることが
わかった。以降、バクトトリプトンを有機窒素源として
用いた。
【００３１】1.2 最適培養ｐＨの検討 0.3％ニュートリエントブロスに、0.5％のバクトトリプ
トンを加え、ｐＨを6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5にそ
れぞれ調整した。１．と同様にして、B. alveiDC1を植
菌、培養した。結果を、図１に示す。ｐＨ７付近が、最
も効果があった。
トンを加え、ｐＨを6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5にそ
れぞれ調整した。１．と同様にして、B. alveiDC1を植
菌、培養した。結果を、図１に示す。ｐＨ７付近が、最
も効果があった。
【００３２】1.3 最適培養温度の検討 0.3％ニュートリエントブロスに、0.5％のバクトトリプ
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は、それぞれ、20℃、25℃、30℃、35
℃、40℃で行った。結果を、図２に示す。３０℃付近
が、最も効果があった。
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は、それぞれ、20℃、25℃、30℃、35
℃、40℃で行った。結果を、図２に示す。３０℃付近
が、最も効果があった。
【００３３】1.4 最適培養時間の検討 0.3％ニュートリエントブロスに、0.5％のバクトトリプ
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は30℃、ｐＨ7.0で行った。結果を図３
に示す。20から24時間が最適であることがわかった。ま
た、カロチノイド類縁体の菌体内濃度は、増殖にほぼ比
例することがわかった。
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は30℃、ｐＨ7.0で行った。結果を図３
に示す。20から24時間が最適であることがわかった。ま
た、カロチノイド類縁体の菌体内濃度は、増殖にほぼ比
例することがわかった。
【００３４】1.5 光照射の検討 0.3％ニュートリエントブロスに、0.5％のバクトトリプ
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は30℃、ｐＨ7.0で行った。光照射をし
ない点でのみ異なる方法で培養したものを、対照実験と
した。結果を図４に示す。光照射は、微生物の生育には
影響がないが、カロチノイド類縁体の生産に影響を与え
た。
トンを加え、１．と同様にして、B. alvei DC1を植菌、
培養した。培養は30℃、ｐＨ7.0で行った。光照射をし
ない点でのみ異なる方法で培養したものを、対照実験と
した。結果を図４に示す。光照射は、微生物の生育には
影響がないが、カロチノイド類縁体の生産に影響を与え
た。
【００３５】（実施例２：カロチノイド類縁体の分離、
精製）上記実施例１の５．の光照射した培養で得られた
粗カロチノイド類縁体溶液の薄層クロマトグラフィー
（TLC）を、図５に示す。 図５は、kieselgel 60 F
254(Merck社)を用い、クロロホルムを展開溶媒として、
粗カロチノイド類縁体をサンプルとして展開した結果で
ある。図５において、１はβ-カロチン、２はサンプル
である。TLCのスポットの上から順に、P-1、M-1、およ
びM-2と命名した。
精製）上記実施例１の５．の光照射した培養で得られた
粗カロチノイド類縁体溶液の薄層クロマトグラフィー
（TLC）を、図５に示す。 図５は、kieselgel 60 F
254(Merck社)を用い、クロロホルムを展開溶媒として、
粗カロチノイド類縁体をサンプルとして展開した結果で
ある。図５において、１はβ-カロチン、２はサンプル
である。TLCのスポットの上から順に、P-1、M-1、およ
びM-2と命名した。
【００３６】活性アルミナ（約300メッシュ：和光純薬
製）を、75X3.5mmのカラムにつめ、アセトンに溶解した
濃縮粗カロチノイド類縁体を吸着させた。ジエチルエー
テル：ヘキサン＝７：３（V/V）で溶出した画分は、P-1
であった。次に、溶出剤をアセトンに変えて溶出した。
溶出した画分は、クロロホルムを用いる上記のTLCで、M
-1およびM-2を含んでいることがわかった。このM-1およ
びM-2の画分をそれぞれTLCから分取し、単一の化合物と
して取得した。
製）を、75X3.5mmのカラムにつめ、アセトンに溶解した
濃縮粗カロチノイド類縁体を吸着させた。ジエチルエー
テル：ヘキサン＝７：３（V/V）で溶出した画分は、P-1
であった。次に、溶出剤をアセトンに変えて溶出した。
溶出した画分は、クロロホルムを用いる上記のTLCで、M
-1およびM-2を含んでいることがわかった。このM-1およ
びM-2の画分をそれぞれTLCから分取し、単一の化合物と
して取得した。
【００３７】（実施例３：P-1の同定）P-1およびβ-カ
ロチンの可視および紫外吸収スペクトルを図６に示す。
測定はサンプルをヘキサンに溶解し、Hitachi V-2000
分光光度計を用いて、190-600nmの範囲で、行った。
ロチンの可視および紫外吸収スペクトルを図６に示す。
測定はサンプルをヘキサンに溶解し、Hitachi V-2000
分光光度計を用いて、190-600nmの範囲で、行った。
【００３８】P-1およびβ-カロチンの赤外吸収スペクト
ルを図７に示す。赤外吸収スペクトルの測定は、KBr法
を用い、Perkin Elmer のFT-IR Spectrometer PARAGON
1000を使用した。
ルを図７に示す。赤外吸収スペクトルの測定は、KBr法
を用い、Perkin Elmer のFT-IR Spectrometer PARAGON
1000を使用した。
【００３９】P-1およびβ-カロチンの1H-NMRスペクトル
を、それぞれ、図８および図９に示す。測定は、日本電
子データムのJNM-EX 270 FT NMR System を用いて行っ
た。
を、それぞれ、図８および図９に示す。測定は、日本電
子データムのJNM-EX 270 FT NMR System を用いて行っ
た。
【００４０】P-1の可視および紫外吸収スペクトル、IR
スペクトル、マススペクトルが、β-カロチンと一致
し、P-1がβ-カロチンであることを示している。
スペクトル、マススペクトルが、β-カロチンと一致
し、P-1がβ-カロチンであることを示している。
【００４１】（実施例４：M-1およびM-2の同定）M-1お
よびM-2の可視および紫外吸収スペクトルを図10に示
す。測定はP-1と同様に行った。
よびM-2の可視および紫外吸収スペクトルを図10に示
す。測定はP-1と同様に行った。
【００４２】M-1およびM-2の赤外吸収スペクトルを図１
１に示す。測定はP-1と同様に行った。
１に示す。測定はP-1と同様に行った。
【００４３】カロチノイド類縁体であるリコピンの赤外
吸収スペクトルを図１２に示す。
吸収スペクトルを図１２に示す。
【００４４】M-2の赤外吸収スペクトルを図１３に示
す。測定はP-1と同様に行った。
す。測定はP-1と同様に行った。
【００４５】M-2の質量分析スペクトルを図１４に示
す。測定は、Perkin Elmer Q-Mass 910Mass spectromet
er Auto System Gas Chromatographを用いて行った。 D
etectorはEI 70eVであり、カラムはSUPEL のSPBTM-1、
インジェクション温度は150℃、オーブン温度は100℃で
６分維持してから2.0℃/分で昇温し、最終的に300℃ま
で、昇温させて、測定した。
す。測定は、Perkin Elmer Q-Mass 910Mass spectromet
er Auto System Gas Chromatographを用いて行った。 D
etectorはEI 70eVであり、カラムはSUPEL のSPBTM-1、
インジェクション温度は150℃、オーブン温度は100℃で
６分維持してから2.0℃/分で昇温し、最終的に300℃ま
で、昇温させて、測定した。
【００４６】M-1およびM-2の1H-NMRスペクトルを図１５
に、リコピンの1H-NMRスペクトルを図１６に示す。
に、リコピンの1H-NMRスペクトルを図１６に示す。
【００４７】以上の結果、IRスペクトルの結果から、M-
2には水酸基がないことがわかった。 これらの結果か
ら、M-2はリコピンの誘導体であると考えられる。
2には水酸基がないことがわかった。 これらの結果か
ら、M-2はリコピンの誘導体であると考えられる。
【００４８】（実施例５：各種培地によるβ-カロチン
とリコピンの生産）B. alvei DC1を種々の培地で培養し
たときのカロチノイド類縁体の生産を検討した。
とリコピンの生産）B. alvei DC1を種々の培地で培養し
たときのカロチノイド類縁体の生産を検討した。
【００４９】β-カロチン、およびリコピン誘導体の定
量は、HPLCで行った。HPLCは、Shimadzu LC-10AS、SPU-
6A、C-R6A CHROMATOPACを用い、カラムは、Shimadzu S
him-pack CLC-UDSを用いた。Flow rateは1ml/分であ
り、溶出液はアセトニトリル：エタノール＝１：１（V/
V）を用い、350nmの吸光度で測定した。リコピンは14〜
15分、β-カロチンは、24〜25分位に溶出する。リコピ
ン誘導体は、リコピンを基準に測定した。リコピンおよ
びβ-カロチンの検量線は内部標準にビタミンＫ1を用い
て作成した。菌体の検量線は、菌体を50mM Tris-Hcl
バッファーpH8.0に懸濁し、凍結乾燥した後、その菌体
の一定グラム数をとり、OD660で吸光度を測定して作成
した。
量は、HPLCで行った。HPLCは、Shimadzu LC-10AS、SPU-
6A、C-R6A CHROMATOPACを用い、カラムは、Shimadzu S
him-pack CLC-UDSを用いた。Flow rateは1ml/分であ
り、溶出液はアセトニトリル：エタノール＝１：１（V/
V）を用い、350nmの吸光度で測定した。リコピンは14〜
15分、β-カロチンは、24〜25分位に溶出する。リコピ
ン誘導体は、リコピンを基準に測定した。リコピンおよ
びβ-カロチンの検量線は内部標準にビタミンＫ1を用い
て作成した。菌体の検量線は、菌体を50mM Tris-Hcl
バッファーpH8.0に懸濁し、凍結乾燥した後、その菌体
の一定グラム数をとり、OD660で吸光度を測定して作成
した。
【００５０】培養は、30℃、ｐＨ7.0で、光照射（6666
ルクス）しながら、24時間行った。培地組成を、以下に
示す。なお、コーセー培地に添加するグリセロール、酵
母エキス、バクトカシトーンおよびバクトペプトンは、
それぞれ０．２％添加した。
ルクス）しながら、24時間行った。培地組成を、以下に
示す。なお、コーセー培地に添加するグリセロール、酵
母エキス、バクトカシトーンおよびバクトペプトンは、
それぞれ０．２％添加した。
【００５１】
【表２】
【００５２】結果を表３に示す。
【００５３】
【表３】
【００５４】（実施例６：カロチノイド類縁体の生産に
及ぼす炭素源の影響）種々の炭素源を用いて、リコピン
類縁体およびβ-カロチンの生産量を測定した。炭素源
の濃度は、それぞれ０．５％である。培養条件および、
測定条件は、実施例５と同じである。結果を表４に示
す。
及ぼす炭素源の影響）種々の炭素源を用いて、リコピン
類縁体およびβ-カロチンの生産量を測定した。炭素源
の濃度は、それぞれ０．５％である。培養条件および、
測定条件は、実施例５と同じである。結果を表４に示
す。
【００５５】
【表４】
【００５６】（実施例７：種々の微生物のカロチノイド
類縁体の生産）Bacillus alvei DC-1のカロチノイド類
縁体の生産量と、種々の文献に記載のカロチノイド生産
菌のカロチノイド類縁体の生産量とを比較した。その結
果を、表５に示す。Bacillus alvei DC-1の生産能力が
高いことがわかる。
類縁体の生産）Bacillus alvei DC-1のカロチノイド類
縁体の生産量と、種々の文献に記載のカロチノイド生産
菌のカロチノイド類縁体の生産量とを比較した。その結
果を、表５に示す。Bacillus alvei DC-1の生産能力が
高いことがわかる。
【００５７】
【表５】
【００５８】
【発明の効果】Bacillus alvei DC-1を、光照射をしな
がら培養することにより、カロチノイド類縁体が効率的
に生産される。
がら培養することにより、カロチノイド類縁体が効率的
に生産される。
【図１】カロチノイド類縁体の生産に対するｐＨの影響
を示す図である。
を示す図である。
【図２】カロチノイド類縁体の生産に対する温度の影響
を示す図である。
を示す図である。
【図３】カロチノイド類縁体の生産に対する培養時間の
影響を示す図である。
影響を示す図である。
【図４】カロチノイド類縁体の生産に対する光照射の影
響を示す図である。
響を示す図である。
【図５】粗カロチノイド類縁体溶液の薄層クロマトグラ
フィーを示す図である。
フィーを示す図である。
【図６】β-カロチンおよびP-1の可視および紫外吸収ス
ペクトルを示す図である。
ペクトルを示す図である。
【図７】P-1およびβ-カロチンの赤外吸収スペクトルを
示す図である。
示す図である。
【図８】P-1の1H-NMRスペクトルを示す図である。
【図９】β-カロチンの1H-NMRスペクトルを示す図であ
る。
る。
【図１０】M-1およびM-2の可視および紫外吸収スペクト
ルを示す図である。
ルを示す図である。
【図１１】M-1およびM-2の赤外吸収スペクトルを示す図
である。
である。
【図１２】リコピンの赤外吸収スペクトルを示す図であ
る。
る。
【図１３】M-2の赤外吸収スペクトルを示す図である。
【図１４】M-2の質量分析スペクトルを示す図である。
【図１５】M-1のおよびM-2の1H-NMRスペクトルを示す図
である。
である。
【図１６】リコピンの1H-NMRスペクトルを示す図であ
る。
る。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:07）
Claims (5)
- 【請求項１】 バシラス アルベイ（Bacillus alvei）
DC-1を培養して、培養物を得る工程、および該培養した
培養物からカロチノイド類縁体を抽出する工程を含む、
カロチノイド類縁体の製造方法。 - 【請求項２】 培養中に光照射をすることをさらに含
む、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 光照射が、6000-7000ルクスの光を照射
して行う、請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】 カロチノイド類縁体がβ-カロチンであ
る、請求項１ないし３に記載の方法。 - 【請求項５】 カロチノイド類縁体がリコピン誘導体で
ある、請求項１ないし３に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15503795A JPH09293A (ja) | 1995-06-21 | 1995-06-21 | カロチノイド類縁体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15503795A JPH09293A (ja) | 1995-06-21 | 1995-06-21 | カロチノイド類縁体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09293A true JPH09293A (ja) | 1997-01-07 |
Family
ID=15597298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15503795A Withdrawn JPH09293A (ja) | 1995-06-21 | 1995-06-21 | カロチノイド類縁体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09293A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7481904B2 (en) | 2002-03-18 | 2009-01-27 | Tokyo Electron Limited | Plasma device |
-
1995
- 1995-06-21 JP JP15503795A patent/JPH09293A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7481904B2 (en) | 2002-03-18 | 2009-01-27 | Tokyo Electron Limited | Plasma device |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3854866B2 (ja) | ミコフェノール酸およびその誘導体の製造方法 | |
| US5437996A (en) | Microtetraspora strain for preparation of indolopyrrolocarbazole derivatives | |
| JPH09293A (ja) | カロチノイド類縁体の製造方法 | |
| EP0187049A2 (en) | Micromonospora microorganisms and macrolide antibiotic production therewith | |
| JPH0586774B2 (ja) | ||
| JP2695225B2 (ja) | 新規物質ｕｃｔ−１００３ | |
| RU2249043C2 (ru) | Способ получения производных стероидных гликозидов ruscus aculeatus | |
| JPH01246288A (ja) | Ｔａｎ−１０３０ａおよびその誘導体，これらの製造法ならびに用途 | |
| JPH06234784A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ２７６８物質及びその製造法 | |
| EP0284358B1 (en) | Novel anti-tumor compounds, method for the preparation thereof, and pharmaceutical preparations containing them | |
| JPH0120153B2 (ja) | ||
| JPH0479355B2 (ja) | ||
| JPS5831992A (ja) | 新規生理活性物質ｋ−４およびその製造法 | |
| JPH0625277A (ja) | 新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６産生菌、新規テストステロン−５α−レダクターゼ阻害物質ＳＮＡ−４６０６及びその製造法 | |
| JP2594085B2 (ja) | 新規抗腫瘍抗生物質ｓｆ２５７５物質ならびにその製造法 | |
| AU620595B2 (en) | Process for the preparation of macrolide compounds | |
| JP2858939B2 (ja) | 抗生物質ａｂ３２１７ａ、ａｂ３２１７ｂ及びａｂ３２１７ｃとそれらの製造法 | |
| JPH07278188A (ja) | Ｇｅ３化合物 | |
| JPH0434555B2 (ja) | ||
| JPH11217382A (ja) | 抗生物質ツベラクトマイシンとその製造法 | |
| JPH05168485A (ja) | 新規物質ｋｓｂ−８２００ｗ及びその製造法 | |
| JPH0662632B2 (ja) | 新規抗生物質ａ１−ｒ２３９７物質及びその製造法 | |
| JPH1081692A (ja) | 新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途 | |
| JPS61285992A (ja) | 抗腫瘍性抗生物質ｍｆ７３０−ｎ６及びその製造方法 | |
| KR20050027440A (ko) | 베타-프럭토실-엘-아스코르브산 및 그의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20020903 |