JPH09255589A - ストレス抑制剤 - Google Patents
ストレス抑制剤Info
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- JPH09255589A JPH09255589A JP8097375A JP9737596A JPH09255589A JP H09255589 A JPH09255589 A JP H09255589A JP 8097375 A JP8097375 A JP 8097375A JP 9737596 A JP9737596 A JP 9737596A JP H09255589 A JPH09255589 A JP H09255589A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 一酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）阻害活性化合
物の新規用途の提供。 【解決手段】 ＮＯＳ阻害活性化合物を有効成分とする
ストレス抑制剤。
物の新規用途の提供。 【解決手段】 ＮＯＳ阻害活性化合物を有効成分とする
ストレス抑制剤。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、一酸化窒素シンタ
ーゼ（本明細書では「ＮＯＳ」と略記する）阻害活性化
合物のストレス抑制剤への用途に関する。
ーゼ（本明細書では「ＮＯＳ」と略記する）阻害活性化
合物のストレス抑制剤への用途に関する。
【０００２】
【発明の背景】現在では、一酸化窒素（以下「ＮＯ」と
略記する）は広範な生命現象に関与する重要な情報伝達
物質と考えられており、そしてＮＯＳがＮＯ生合成の中
心となる酵素であることも確認されている。例えば、神
経内分泌系では、ニューロンのＮＯＳが各種ホルモンの
膀分泌および自己分泌に関与していることが報告されて
いる。
略記する）は広範な生命現象に関与する重要な情報伝達
物質と考えられており、そしてＮＯＳがＮＯ生合成の中
心となる酵素であることも確認されている。例えば、神
経内分泌系では、ニューロンのＮＯＳが各種ホルモンの
膀分泌および自己分泌に関与していることが報告されて
いる。
【０００３】一方、本発明者らも、ＮＯまたはＮＯＳの
酵素活性と生命現象との関連性についての研究の一環と
して、生体がストレス状態に置かれた場合、ＮＯＳのタ
ンパク質、遺伝子発現および酵素活性のいずれも増加す
るとの知見を得ている。生体に対するストレスの観点か
ら従来技術をみてみると、生体がストレス状態に置かれ
ると副腎皮質機能が亢進し、血中の副腎皮質ホルモンレ
ベルが増加することが周知である。また、副腎皮質ホル
モンに着目すると、ＮＯＳに対して特異的なインヒビタ
ーを用いた実験において、ＮＯが高用量でコルチコステ
ロンの持続した増加をもたらすことが報告されている
（M. L. Adams ら、Life Sciences、 Vol.５０、pp. PL
−３５〜PL−４０，１９９２参照）。
酵素活性と生命現象との関連性についての研究の一環と
して、生体がストレス状態に置かれた場合、ＮＯＳのタ
ンパク質、遺伝子発現および酵素活性のいずれも増加す
るとの知見を得ている。生体に対するストレスの観点か
ら従来技術をみてみると、生体がストレス状態に置かれ
ると副腎皮質機能が亢進し、血中の副腎皮質ホルモンレ
ベルが増加することが周知である。また、副腎皮質ホル
モンに着目すると、ＮＯＳに対して特異的なインヒビタ
ーを用いた実験において、ＮＯが高用量でコルチコステ
ロンの持続した増加をもたらすことが報告されている
（M. L. Adams ら、Life Sciences、 Vol.５０、pp. PL
−３５〜PL−４０，１９９２参照）。
【０００４】しかしながら、ストレス時の副腎皮質にお
けるＮＯＳ（またはＮＯ）の増加がどのような生理学的
意義を持つかについて、これらの従来技術文献は何も示
唆しない。
けるＮＯＳ（またはＮＯ）の増加がどのような生理学的
意義を持つかについて、これらの従来技術文献は何も示
唆しない。
【０００５】このような背景の下、本発明者らは、スト
レスによって副腎皮質において現出するホルモン分泌増
加とＮＯＳ活性との間には密接な相関性があり、しかも
拘束ストレス直後に増加し、その後無処置レベルに復帰
する血漿コルチコステロンレベルの低下を、特定のＮＯ
Ｓ阻害活性（ＮＯＳの酵素活性を阻害する）化合物が生
体のホメオスタシスに悪影響を及ぼすことなく、有意に
抑制することを見い出した。
レスによって副腎皮質において現出するホルモン分泌増
加とＮＯＳ活性との間には密接な相関性があり、しかも
拘束ストレス直後に増加し、その後無処置レベルに復帰
する血漿コルチコステロンレベルの低下を、特定のＮＯ
Ｓ阻害活性（ＮＯＳの酵素活性を阻害する）化合物が生
体のホメオスタシスに悪影響を及ぼすことなく、有意に
抑制することを見い出した。
【０００６】
【発明の構成】以上の本発明者らが見い出した現象は、
特定のＮＯＳ阻害活性化合物は、それを生体に投与する
ことで、ストレスによる副腎皮質のＮＯＳ活性の増加を
ブロックしてストレスによる副腎皮質機能の亢進状態を
延長させる（換言すれば、ストレスによる副腎皮質のＮ
ＯＳ活性の増加は、ストレスにより亢進した副腎皮質機
能を安静時レベルに戻す役割を担っている）ことを意味
する。
特定のＮＯＳ阻害活性化合物は、それを生体に投与する
ことで、ストレスによる副腎皮質のＮＯＳ活性の増加を
ブロックしてストレスによる副腎皮質機能の亢進状態を
延長させる（換言すれば、ストレスによる副腎皮質のＮ
ＯＳ活性の増加は、ストレスにより亢進した副腎皮質機
能を安静時レベルに戻す役割を担っている）ことを意味
する。
【０００７】したがって、本発明によれば、ＮＯＳ阻害
活性化合物を有効成分として含んでなるストレス抑制剤
が提供される。
活性化合物を有効成分として含んでなるストレス抑制剤
が提供される。
【０００８】本発明で使用できるＮＯＳ阻害活性化合物
は、ＮＯＳの酵素活性を阻害する作用を有し、かつ本発
明の目的に沿うものであれば化合物の種類を問わず全て
包含する。より具体的には、後述する代表的な化合物を
はじめ、それらの類縁化合物（例えば、エステル化合物
である場合には、エステルを構成するアルコール由来残
基が他のアルコール由来残基をもつ化合物等）およびそ
れらの誘導体（ＮＯＳ阻害活性に悪影響を及ぼさない置
換基または保護基、例えばペプチド化学の分野で常用さ
れるアミノ保護基、カルボキシル保護基をもつ化合物
等）が挙げられる。
は、ＮＯＳの酵素活性を阻害する作用を有し、かつ本発
明の目的に沿うものであれば化合物の種類を問わず全て
包含する。より具体的には、後述する代表的な化合物を
はじめ、それらの類縁化合物（例えば、エステル化合物
である場合には、エステルを構成するアルコール由来残
基が他のアルコール由来残基をもつ化合物等）およびそ
れらの誘導体（ＮＯＳ阻害活性に悪影響を及ぼさない置
換基または保護基、例えばペプチド化学の分野で常用さ
れるアミノ保護基、カルボキシル保護基をもつ化合物
等）が挙げられる。
【０００９】本発明で使用できる代表的な化合物として
は、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−
アルギニンメチルエステル、ＮG−モノメチル−Ｌ−ア
ルギニン、ＮG,ＮG−ジメチル−Ｌ−アルギニン、ＮG−
アミノ−Ｌ−アルギニン、ＮG−アリル−Ｌ−アルギニ
ン、アルギノコハク酸、Ｎ5−（１−イミノエチル）−
Ｌ−オルニチン、Ｎ6−（１−イミノエチル）−Ｌ−リ
ジン、Ｓ−メチル−Ｌ−チオシトルリン、Ｌ−アラニル
−ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−ア
ルギニル−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｓ−ニトロ−Ｌ−グルタ
チオン、アミノグアニジン、Ｎ−エチル−Ｎ′−フェニ
ルグアニジン、７−ニトロインダゾール、３−ブロモ−
７−ニトロインダゾール、６,７−ジメチルテトラヒド
ロプテリン、１,３−ＰＢＩＴおよびジフェニレンヨー
ドニウム塩基、ならびにこれらの塩が挙げられる。な
お、上記１,３−ＰＢＩＴは、次式（Ａ）で表される化
合物の略称である。
は、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−
アルギニンメチルエステル、ＮG−モノメチル−Ｌ−ア
ルギニン、ＮG,ＮG−ジメチル−Ｌ−アルギニン、ＮG−
アミノ−Ｌ−アルギニン、ＮG−アリル−Ｌ−アルギニ
ン、アルギノコハク酸、Ｎ5−（１−イミノエチル）−
Ｌ−オルニチン、Ｎ6−（１−イミノエチル）−Ｌ−リ
ジン、Ｓ−メチル−Ｌ−チオシトルリン、Ｌ−アラニル
−ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−ア
ルギニル−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニル−Ｌ−フェニルアラニン、Ｓ−ニトロ−Ｌ−グルタ
チオン、アミノグアニジン、Ｎ−エチル−Ｎ′−フェニ
ルグアニジン、７−ニトロインダゾール、３−ブロモ−
７−ニトロインダゾール、６,７−ジメチルテトラヒド
ロプテリン、１,３−ＰＢＩＴおよびジフェニレンヨー
ドニウム塩基、ならびにこれらの塩が挙げられる。な
お、上記１,３−ＰＢＩＴは、次式（Ａ）で表される化
合物の略称である。
【００１０】式（Ａ）
【００１１】
【化１】
【００１２】上記化合物の塩は、ハロゲン化水素酸（例
えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸）、硫酸、硝酸、
リン酸、炭酸、亜硫酸、亜硝酸、亜リン酸等の無機酸、
ならびに酢酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸
等の有機酸の塩を挙げることができる。これらの塩は、
上記化合物が２個以上の塩基性基を有する場合には、そ
のモノ−、ジ−またはポリ−付加塩であってもよく、ま
た硫酸等の多塩基酸の場合には、上記化合物はヘミ（he
mi）塩であることができる。上記代表的な化合物は、い
ずれもそれ自体既知であり、殆どが市販されている。こ
れらの化合物以外の本発明で使用できるＮＯＳ阻害活性
化合物は、既知化合物として存在する場合は、それらを
入手し、また新規化合物の場合には、それらが類似する
既知化合物に準じて製造すればよい。
えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸）、硫酸、硝酸、
リン酸、炭酸、亜硫酸、亜硝酸、亜リン酸等の無機酸、
ならびに酢酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸
等の有機酸の塩を挙げることができる。これらの塩は、
上記化合物が２個以上の塩基性基を有する場合には、そ
のモノ−、ジ−またはポリ−付加塩であってもよく、ま
た硫酸等の多塩基酸の場合には、上記化合物はヘミ（he
mi）塩であることができる。上記代表的な化合物は、い
ずれもそれ自体既知であり、殆どが市販されている。こ
れらの化合物以外の本発明で使用できるＮＯＳ阻害活性
化合物は、既知化合物として存在する場合は、それらを
入手し、また新規化合物の場合には、それらが類似する
既知化合物に準じて製造すればよい。
【００１３】本発明のストレス抑制剤は、上記化合物
を、場合によって２種以上混合し、直接または適当な調
剤の形態で腸内、経口的、非経口的または経皮的に投与
することができる。
を、場合によって２種以上混合し、直接または適当な調
剤の形態で腸内、経口的、非経口的または経皮的に投与
することができる。
【００１４】経口剤としては、粉末剤、錠剤、糖衣剤、
カプセル剤、ペースト剤、顆粒剤、液剤、懸濁液および
乳化液剤が例示できる。非経口剤としては、注射（筋肉
内、皮下、静脈内、腹腔内）剤、や直腸投与剤が挙げら
れ、液状、懸濁状および乳化状調剤が使用でき、特に直
腸用としては上記カプセル剤、錠剤が使用できる。経皮
剤としては、浸漬剤、噴霧剤、クリーム剤が挙げられ
る。
カプセル剤、ペースト剤、顆粒剤、液剤、懸濁液および
乳化液剤が例示できる。非経口剤としては、注射（筋肉
内、皮下、静脈内、腹腔内）剤、や直腸投与剤が挙げら
れ、液状、懸濁状および乳化状調剤が使用でき、特に直
腸用としては上記カプセル剤、錠剤が使用できる。経皮
剤としては、浸漬剤、噴霧剤、クリーム剤が挙げられ
る。
【００１５】以上の調剤は、医薬の分野で常用されてい
る希釈剤または賦形剤、安定化剤、防腐剤等を適宜使用
してそれ自体既知の方法で調製することができる。
る希釈剤または賦形剤、安定化剤、防腐剤等を適宜使用
してそれ自体既知の方法で調製することができる。
【００１６】限定されるものでないが、液状、懸濁状、
乳化状またはペースト状の調剤には、水、アルコール、
例えばエタノール、イソプロパノール、ベンジルアルコ
ール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール、Ｎ−メチル−ピロリドンおよびこれら
の混合物等の生理学的に許容し得る溶剤；無機増粘剤、
例えばベントナイト、コロイドシリカ、モノステアリン
酸アルミニウム、有機増粘剤、例えばセルロース誘導
体、ポリビニルアルコール及びそれらのコポリマー、ア
クリル酸塩およびメタクリル酸塩等の増粘剤；ポリビニ
ルピロリドン、ポリオキシエチレンカスター油、ポリオ
キシエチレンソルビタンエステル、ソルビタンモノステ
アレート、グリセロールモノステアレート、ポリオキシ
エチレンモノステアレート、アルキルフェノールポリグ
リコールエーテル等の可溶化剤または乳化剤；パラフィ
ン油、シリコン油、天然植物油、例えばごま油、アーモ
ンド油、ひまし油、合成トリグリセリド、例えばカプリ
ル／カプリン酸ビグリセリド、鎖長がＣ8-12の植物脂肪
酸または他の天然脂肪酸とのトリグリセリド混合物、ヒ
ドロキシル基を含む飽和または不飽和脂肪酸の部分的グ
リセリド混合物、およびＣ8／Ｃ10−脂肪酸のモノ−お
よびジグリセリド等の油相形成物、等が使用できる。
乳化状またはペースト状の調剤には、水、アルコール、
例えばエタノール、イソプロパノール、ベンジルアルコ
ール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチ
レングリコール、Ｎ−メチル−ピロリドンおよびこれら
の混合物等の生理学的に許容し得る溶剤；無機増粘剤、
例えばベントナイト、コロイドシリカ、モノステアリン
酸アルミニウム、有機増粘剤、例えばセルロース誘導
体、ポリビニルアルコール及びそれらのコポリマー、ア
クリル酸塩およびメタクリル酸塩等の増粘剤；ポリビニ
ルピロリドン、ポリオキシエチレンカスター油、ポリオ
キシエチレンソルビタンエステル、ソルビタンモノステ
アレート、グリセロールモノステアレート、ポリオキシ
エチレンモノステアレート、アルキルフェノールポリグ
リコールエーテル等の可溶化剤または乳化剤；パラフィ
ン油、シリコン油、天然植物油、例えばごま油、アーモ
ンド油、ひまし油、合成トリグリセリド、例えばカプリ
ル／カプリン酸ビグリセリド、鎖長がＣ8-12の植物脂肪
酸または他の天然脂肪酸とのトリグリセリド混合物、ヒ
ドロキシル基を含む飽和または不飽和脂肪酸の部分的グ
リセリド混合物、およびＣ8／Ｃ10−脂肪酸のモノ−お
よびジグリセリド等の油相形成物、等が使用できる。
【００１７】また、限定されるものでないが、固形調製
には、生理学的に許容される固体不活性物質、例えば、
塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、酸化アルミニウム、
シリカ、クレー、二酸化ケイ素およびリン酸塩等の無機
物；糖類、セルロース、デンプン、カルボキシメチルセ
ルロース、アルギン酸塩、ゼラチンおよびポリビニルピ
ロリドン等が使用できる。
には、生理学的に許容される固体不活性物質、例えば、
塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、酸化アルミニウム、
シリカ、クレー、二酸化ケイ素およびリン酸塩等の無機
物；糖類、セルロース、デンプン、カルボキシメチルセ
ルロース、アルギン酸塩、ゼラチンおよびポリビニルピ
ロリドン等が使用できる。
【００１８】以上のようにして調製した本発明のストレ
ス抑制剤は、ＮＯＳ阻害活性化合物自体が医薬として使
用するのに不都合となる毒性を示さないので、剤形、使
用する患者の年齢、症状等に応じて、本発明の目的を達
成できる量で投与することができる。注射剤とした場合
の１日用量は、例えば、塩酸ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニンメチルエステル（以下「Ｌ−ＮＡＭＥ」と略記す
る）を使用する場合、約３ｍｇ／ｋｇ体重〜約３００ｍ
ｇ／ｋｇである。
ス抑制剤は、ＮＯＳ阻害活性化合物自体が医薬として使
用するのに不都合となる毒性を示さないので、剤形、使
用する患者の年齢、症状等に応じて、本発明の目的を達
成できる量で投与することができる。注射剤とした場合
の１日用量は、例えば、塩酸ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギ
ニンメチルエステル（以下「Ｌ−ＮＡＭＥ」と略記す
る）を使用する場合、約３ｍｇ／ｋｇ体重〜約３００ｍ
ｇ／ｋｇである。
【００１９】本発明のストレス抑制剤の効果は、例えば
実験動物を使用し、拘束ストレス法（Pare, W. P., Gla
vin, G. B.,（１９８６），Neurosci Biobehav-Rev. １
０，p. ３３９−３７０参照）により処理する動物に対
する薬剤の投与および無投与（対照）における、血中コ
ルチコステロンのレベルを追跡することにより確認でき
る。
実験動物を使用し、拘束ストレス法（Pare, W. P., Gla
vin, G. B.,（１９８６），Neurosci Biobehav-Rev. １
０，p. ３３９−３７０参照）により処理する動物に対
する薬剤の投与および無投与（対照）における、血中コ
ルチコステロンのレベルを追跡することにより確認でき
る。
【００２０】具体的には、被験動物の血漿コルチコステ
ロンレベルは、通常、２時間の拘束ストレス直後に有意
な増加が認められ、その後（拘束終了２時間目および４
時間目）には無処置のレベルに復帰する。しかし、被検
薬剤が有効な場合、薬剤を前投与した動物は、拘束スト
レス直後に血漿コルチコステロンレベルは薬剤の無投与
動物（対照）と同様に増加するが、その後（２時間目）
のコルチコステロンレベルの低下は対照に比べて有意に
抑制（または増加）される。４時間後には、薬剤無投与
動物（対照）と同様に薬剤投与動物でもコルチコステロ
ンが対照のレベルに復帰する（この対照と比較してゆる
やかな復帰は、生体のホメオスタシスを維持する上で有
利に働くであろう）。
ロンレベルは、通常、２時間の拘束ストレス直後に有意
な増加が認められ、その後（拘束終了２時間目および４
時間目）には無処置のレベルに復帰する。しかし、被検
薬剤が有効な場合、薬剤を前投与した動物は、拘束スト
レス直後に血漿コルチコステロンレベルは薬剤の無投与
動物（対照）と同様に増加するが、その後（２時間目）
のコルチコステロンレベルの低下は対照に比べて有意に
抑制（または増加）される。４時間後には、薬剤無投与
動物（対照）と同様に薬剤投与動物でもコルチコステロ
ンが対照のレベルに復帰する（この対照と比較してゆる
やかな復帰は、生体のホメオスタシスを維持する上で有
利に働くであろう）。
【００２１】すなわち、無処理または生理食塩水投与群
と薬剤投与群との間に上記の差異が認められる場合に
は、薬剤の拘束ストレス前の投与がストレスによる副腎
皮質のＮＯＳ活性の増加をブロックすることによって、
ストレスによる副腎皮質機能の亢進状態を、生体のホメ
オスタシスの維持に悪影響を及ぼすことなく、延長させ
ることが可能であり、こうしてストレスがより効率よく
抑制されうるからである。
と薬剤投与群との間に上記の差異が認められる場合に
は、薬剤の拘束ストレス前の投与がストレスによる副腎
皮質のＮＯＳ活性の増加をブロックすることによって、
ストレスによる副腎皮質機能の亢進状態を、生体のホメ
オスタシスの維持に悪影響を及ぼすことなく、延長させ
ることが可能であり、こうしてストレスがより効率よく
抑制されうるからである。
【００２２】本発明に従う、ＮＯＳ阻害活性化合物は、
上記生理食塩水投与群と薬剤投与群との間に、実験動物
の血漿コルチコステロンレベルの低下に有意な差異が認
められる。
上記生理食塩水投与群と薬剤投与群との間に、実験動物
の血漿コルチコステロンレベルの低下に有意な差異が認
められる。
【００２３】
【実施例】以下、説明を簡略化する目的で、ＮＯＳ阻害
活性物質として、Ｌ−ＮＡＭＥを使用した具体例を参照
しながら本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は
これらによって限定されるものでない。
活性物質として、Ｌ−ＮＡＭＥを使用した具体例を参照
しながら本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は
これらによって限定されるものでない。
【００２４】（ストレス状態の誘発）本例は、いわゆる
拘束ストレス法［Pare, W. P．Glavin，G．B.,（１９８
６），Neurosci. Biobehav-Rev. １０，p. ３３９〜３
７０参照］に従った。
拘束ストレス法［Pare, W. P．Glavin，G．B.,（１９８
６），Neurosci. Biobehav-Rev. １０，p. ３３９〜３
７０参照］に従った。
【００２５】１群６匹のラット（Wistar、 オス６〜１０
週齢）を、それぞれ金網（２０ｃｍ×２０ｃｍ）で全身
をくるみ、金網の端部をクリップを用いて固定した。固
定操作を２時間行って動物にストレスをかけた。対照動
物は、上記のような固定操作を施すことなく、通常のケ
ージ飼育を行った。
週齢）を、それぞれ金網（２０ｃｍ×２０ｃｍ）で全身
をくるみ、金網の端部をクリップを用いて固定した。固
定操作を２時間行って動物にストレスをかけた。対照動
物は、上記のような固定操作を施すことなく、通常のケ
ージ飼育を行った。
【００２６】（コルチコステロンのアッセイ）上記スト
レス状態を誘発する動物（１群６匹）に、それぞれ生理
食塩水（対照）またはＬ−ＮＡＭＥの生理食塩水溶液を
所定量皮下投与した。動物の拘束前、拘束解除直後（２
時間）、さらに２時間および４時間後に、動物から採血
し、分離した血漿中のコルチコステロンレベルを測定し
た。コルチコステロンレベルの測定は、市販のラジオイ
ムノアッセイ（ＲＩＡ）キット［ＴＫＲＣＩ（Diagnost
ic Products Corporation, USA）］を使用し、説明書の
記載に沿って行った。
レス状態を誘発する動物（１群６匹）に、それぞれ生理
食塩水（対照）またはＬ−ＮＡＭＥの生理食塩水溶液を
所定量皮下投与した。動物の拘束前、拘束解除直後（２
時間）、さらに２時間および４時間後に、動物から採血
し、分離した血漿中のコルチコステロンレベルを測定し
た。コルチコステロンレベルの測定は、市販のラジオイ
ムノアッセイ（ＲＩＡ）キット［ＴＫＲＣＩ（Diagnost
ic Products Corporation, USA）］を使用し、説明書の
記載に沿って行った。
【００２７】結果を、それぞれ図１、図２、図３および
図４に示す。これらの図は、それぞれ６匹の実験動物に
よるデータの平均値を中心に示し、それらの標準偏差を
縦線で示している。
図４に示す。これらの図は、それぞれ６匹の実験動物に
よるデータの平均値を中心に示し、それらの標準偏差を
縦線で示している。
【００２８】図１の（ａ）は、拘束前に生理食塩水を投
与したラットの群（対照）における血中コルチコステロ
ン量の変化を示し、（ｂ）は拘束前にＬ−ＮＡＭＥを各
１００ｍｇ／ｋｇ投与したラットの群における血中コル
チコステロン量の経時的変化を示す。
与したラットの群（対照）における血中コルチコステロ
ン量の変化を示し、（ｂ）は拘束前にＬ−ＮＡＭＥを各
１００ｍｇ／ｋｇ投与したラットの群における血中コル
チコステロン量の経時的変化を示す。
【００２９】図から、Ｌ−ＮＡＭＥ投与群は、対照に比
べて拘束解除２時間後のコルチコステロン量が、有意に
増大したことが示されている。
べて拘束解除２時間後のコルチコステロン量が、有意に
増大したことが示されている。
【００３０】図２は、実験動物にＬ−ＮＡＭＥを１００
ｍｇ／ｋｇ投与して、経時的な血中コルチコステロン量
を測定した結果を示す。これらの結果から、非拘束動物
に対するＬ−ＮＡＭＥの投与は、１００ｍｇ／ｋｇの用
量まで血中コルチコステロン量を実質的に増加させない
ことがわかる。なおＤｕｎｎｅｔｔ法による０時間の値
と各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１および*Ｐ＜
０.０５であった。
ｍｇ／ｋｇ投与して、経時的な血中コルチコステロン量
を測定した結果を示す。これらの結果から、非拘束動物
に対するＬ−ＮＡＭＥの投与は、１００ｍｇ／ｋｇの用
量まで血中コルチコステロン量を実質的に増加させない
ことがわかる。なおＤｕｎｎｅｔｔ法による０時間の値
と各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１および*Ｐ＜
０.０５であった。
【００３１】図３は、拘束前にＬ−ＮＡＭＥを、それぞ
れ０（対照）、３、１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ
ずつ投与し、拘束解除後２時間目に動物の血中コルチコ
ステロン量を測定した結果を示す。なお、０ｍｇ／ｋｇ
の値と各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１および*
Ｐ＜０.０５であった。
れ０（対照）、３、１０、３０および１００ｍｇ／ｋｇ
ずつ投与し、拘束解除後２時間目に動物の血中コルチコ
ステロン量を測定した結果を示す。なお、０ｍｇ／ｋｇ
の値と各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１および*
Ｐ＜０.０５であった。
【００３２】図２および図３より、Ｌ−ＮＡＭＡは非拘
束（無ストレス状態）動物に対しては実質的に作用しな
いが、拘束動物に対しては用量依存的に血中コルチコス
テロンの低下を有意に抑制することがわかる。
束（無ストレス状態）動物に対しては実質的に作用しな
いが、拘束動物に対しては用量依存的に血中コルチコス
テロンの低下を有意に抑制することがわかる。
【００３３】（ＮＯＳのアッセイ）拘束解除後、生体よ
り副腎皮質を個別に摘出した。摘出した組織を１０倍容
量の氷冷緩液［５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.
４）、１ｍＭ ＥＤＴＡ］中でホモジェネート化した。
４℃で３０秒間、ホモジェネートを遠心（１２０００
ｒ.ｐ.ｍ.）し、上清を得た。
り副腎皮質を個別に摘出した。摘出した組織を１０倍容
量の氷冷緩液［５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７.
４）、１ｍＭ ＥＤＴＡ］中でホモジェネート化した。
４℃で３０秒間、ホモジェネートを遠心（１２０００
ｒ.ｐ.ｍ.）し、上清を得た。
【００３４】ホモジェネートの上清を用い、反応混合物
を下記組成で調製した。
を下記組成で調製した。
【００３５】 アッセイ緩衝液（下記参照） １５０μｌ １０ｍＭ ＮＡＤＰＨ １５μｌ（４ｍｇ／５００μｌ） ［3Ｈ］−Ａｒｇ＊ １μｌ（１：４希釈）＊３７ＭＢｑ／ｍｌ ホモジェネートの上澄 ５０μｌ 蒸留済み脱イオン水 ６９μｌ 必要により、１ｍＭテトラハイドロビオプリテン１.５
μｌ、１ｍＭカルモジュリン１.５μｌを加える。
μｌ、１ｍＭカルモジュリン１.５μｌを加える。
【００３６】反応混合物を３７℃でインキュベーション
し、６分後に停止緩衝液［１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐ
Ｈ５.５）１０ｍＭ ＥＤＴＡ］９００μｌを加えて、氷
上の試験管中に保蔵した。
し、６分後に停止緩衝液［１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐ
Ｈ５.５）１０ｍＭ ＥＤＴＡ］９００μｌを加えて、氷
上の試験管中に保蔵した。
【００３７】上記停止緩衝液で１度洗浄した陽イオン交
換樹脂 Dowex（商標）ＡＧ５０ＷＸ８樹脂１ｍｌを充填
したポリプロピレン製カラム（バイオラッド）に保蔵試
料をのせ、蒸留済み脱イオン水１ｍｌを流がし、未吸着
溶出画分合計２ｍｌを集めた。未吸着溶出画分合計１ｍ
ｌをシンチレーターチューブに入れ、さらにシンチレー
ター［アクアゾール−２（Dupont／ＮＥＮ社）］４ｍｌ
を添加した後、液体シンチレーションカウンター（ベッ
クマン製ＬＳ６００ＳＣ）で3Ｈをカウントし、生成シ
トルリン（ｐモル／ｍｇタンパク質／分）を算出した
（ＮＯＳ活性）。 アッセイ緩衝液の組成 ５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４） １０ｍＭ ＥＤＴＡ １２.５ｍＭ ＣａＣｌ2 １０ｍＭ ＤＴＴ（ジチオトレイトール） １０μＭ Ｌ−アルギニン （ＮＯＳのアッセイ結果）上記ＮＯＳのアッセイに際
し、拘束前の各ラットに生理食塩水またはＬ−ＮＡＭＥ
を１００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した後に拘束し、拘束解除
後の動物におけるＮＯＳ活性を測定した。結果を図４の
（ａ）および（ｂ）に示す。
換樹脂 Dowex（商標）ＡＧ５０ＷＸ８樹脂１ｍｌを充填
したポリプロピレン製カラム（バイオラッド）に保蔵試
料をのせ、蒸留済み脱イオン水１ｍｌを流がし、未吸着
溶出画分合計２ｍｌを集めた。未吸着溶出画分合計１ｍ
ｌをシンチレーターチューブに入れ、さらにシンチレー
ター［アクアゾール−２（Dupont／ＮＥＮ社）］４ｍｌ
を添加した後、液体シンチレーションカウンター（ベッ
クマン製ＬＳ６００ＳＣ）で3Ｈをカウントし、生成シ
トルリン（ｐモル／ｍｇタンパク質／分）を算出した
（ＮＯＳ活性）。 アッセイ緩衝液の組成 ５００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７.４） １０ｍＭ ＥＤＴＡ １２.５ｍＭ ＣａＣｌ2 １０ｍＭ ＤＴＴ（ジチオトレイトール） １０μＭ Ｌ−アルギニン （ＮＯＳのアッセイ結果）上記ＮＯＳのアッセイに際
し、拘束前の各ラットに生理食塩水またはＬ−ＮＡＭＥ
を１００ｍｇ／ｋｇ皮下投与した後に拘束し、拘束解除
後の動物におけるＮＯＳ活性を測定した。結果を図４の
（ａ）および（ｂ）に示す。
【００３８】図より、Ｌ−ＮＡＭＥの投与は、拘束によ
って誘発されるＮＯＳ活性を有意に阻害することがわか
る。
って誘発されるＮＯＳ活性を有意に阻害することがわか
る。
【００３９】一方、Ｌ−ＮＡＭＥの１００ｍｇ／ｋｇ投
与後動物の拘束を行わなかった場合のＮＯＳ活性の測定
結果を図５に（Ｄｕｎｎｅｔｔ法による０時間の値と各
水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１である）、そし
てＬ−ＮＡＭＥの用量を、それぞれ０、３、１０、３０
および１００ｍｇ／ｋｇとし、動物の拘束解除後２時間
目における副腎皮質中のＮＯＳ活性を測定した結果を図
６に示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ法による０ｍｇ／ｋｇの値と
各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１である）。
与後動物の拘束を行わなかった場合のＮＯＳ活性の測定
結果を図５に（Ｄｕｎｎｅｔｔ法による０時間の値と各
水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１である）、そし
てＬ−ＮＡＭＥの用量を、それぞれ０、３、１０、３０
および１００ｍｇ／ｋｇとし、動物の拘束解除後２時間
目における副腎皮質中のＮＯＳ活性を測定した結果を図
６に示す（Ｄｕｎｎｅｔｔ法による０ｍｇ／ｋｇの値と
各水準との有意差検定は、**Ｐ＜０.０１である）。
【００４０】図５から、Ｌ−ＮＡＭＥの投与は、非拘束
動物のＮＯＳ活性も低下させるが、このとき血中コルチ
コステロン濃度には実質的に影響を及ぼさないことは前
述の図２より明らかである。図６から、拘束動物に対し
ては、用量依存的にＮＯＳ活性を阻害することがわか
る。
動物のＮＯＳ活性も低下させるが、このとき血中コルチ
コステロン濃度には実質的に影響を及ぼさないことは前
述の図２より明らかである。図６から、拘束動物に対し
ては、用量依存的にＮＯＳ活性を阻害することがわか
る。
【００４１】
【発明の効果】本発明によれば、生体のホメオスタシス
に悪影響を及ぼすことなく、ストレス状態を緩和（抑
制）することのできる薬剤が提供される。
に悪影響を及ぼすことなく、ストレス状態を緩和（抑
制）することのできる薬剤が提供される。
【図１】Ｌ−ＮＡＭＥ（ｂ）または生理食塩水（ａ）を
前皮下投与した拘束動物の血中コルチコステロン量の経
時的変化を示すグラフである。
前皮下投与した拘束動物の血中コルチコステロン量の経
時的変化を示すグラフである。
【図２】非拘束動物に対するＬ−ＮＡＭＥ皮下投与の血
中コルチコステロン量に及ぼす影響を示すグラフであ
る。
中コルチコステロン量に及ぼす影響を示すグラフであ
る。
【図３】Ｌ−ＮＡＭＥ前投与の拘束動物における血中コ
ルチコステロン量と用量の関係を示すグラフである。
ルチコステロン量と用量の関係を示すグラフである。
【図４】生理食塩水（ａ）またはＬ−ＮＡＭＥ（ｂ）の
前皮下投与動物の拘束によるＮＯＳ活性の経時的変化を
示すグラフである。
前皮下投与動物の拘束によるＮＯＳ活性の経時的変化を
示すグラフである。
【図５】非拘束動物に対するＬ−ＮＡＭＥ皮下投与の動
物における副腎皮質のＮＯＳ活性に及ぼす影響を示すグ
ラフである。
物における副腎皮質のＮＯＳ活性に及ぼす影響を示すグ
ラフである。
【図６】Ｌ−ＮＡＭＥ前投与の拘束動物の副腎皮質にお
けるＮＯＳ活性と用量の関係を示すグラフである。
けるＮＯＳ活性と用量の関係を示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/415 Ａ６１Ｋ 31/415 38/00 Ｃ０７Ｄ 231/56 Ｄ // Ｃ０７Ｄ 231/56 Ｚ Ａ６１Ｋ 37/02
Claims (2)
- 【請求項１】 一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）阻害活
性化合物を有効成分として含んでなるストレス抑制剤。 - 【請求項２】 ＮＯＳ阻害活性化合物が、ＮG−ニトロ
−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチ
ルエステル、ＮG−モノメチル−Ｌ−アルギニン、ＮG,
ＮG−ジメチル−Ｌ−アルギニン、ＮG−アミノ−Ｌ−ア
ルギニン、ＮG−アリル−Ｌ−アルギニン、アルギノコ
ハク酸、Ｎ5−（１−イミノエチル）−Ｌ−オルニチ
ン、Ｎ6−（１−イミノエチル）−Ｌ−リジン、Ｓ−メ
チル−Ｌ−チオシトルリン、Ｌ−アラニル−ＮG−ニト
ロ−Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニル−
Ｌ−アルギニン、ＮG−ニトロ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−
フェニルアラニン、Ｓ−ニトロ−Ｌ−グルタチオン、ア
ミノグアニジン、Ｎ−エチル−Ｎ′−フェニルグアニジ
ン、７−ニトロインダゾール、３−ブロモ−７−ニトロ
インダゾール、６,７−ジメチルテトラヒドロプテリ
ン、１,３−ＰＢＩＴおよびジフェニレンヨードニウム
塩基からなる群より選ばれる少なくとも１種の化合物、
或いはその塩である請求項１記載のストレス抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8097375A JPH09255589A (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | ストレス抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8097375A JPH09255589A (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | ストレス抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09255589A true JPH09255589A (ja) | 1997-09-30 |
Family
ID=14190774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8097375A Withdrawn JPH09255589A (ja) | 1996-03-28 | 1996-03-28 | ストレス抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09255589A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002061421A3 (de) * | 2001-02-01 | 2003-10-30 | Florian Lang | Screening-verfahren zur identifikation von arzneimitteln |
| JP2011063541A (ja) * | 2009-09-17 | 2011-03-31 | Tokyo Institute Of Technology | Ｌ−アルギニン結合因子の精製方法及びｌ−アルギニン様化合物のスクリーニング方法 |
| WO2016121862A1 (ja) * | 2015-01-28 | 2016-08-04 | 国立大学法人九州大学 | 抗炎症剤及びその使用 |
-
1996
- 1996-03-28 JP JP8097375A patent/JPH09255589A/ja not_active Withdrawn
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002061421A3 (de) * | 2001-02-01 | 2003-10-30 | Florian Lang | Screening-verfahren zur identifikation von arzneimitteln |
| JP2011063541A (ja) * | 2009-09-17 | 2011-03-31 | Tokyo Institute Of Technology | Ｌ−アルギニン結合因子の精製方法及びｌ−アルギニン様化合物のスクリーニング方法 |
| WO2016121862A1 (ja) * | 2015-01-28 | 2016-08-04 | 国立大学法人九州大学 | 抗炎症剤及びその使用 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20030603 |